BR112019024311A2 - derivados de indolina substituídos como inibidores da replicação viral do dengue - Google Patents

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Jean-François Bonfanti
Bart Rudolf Romanie Kesteleyn
Dorothée Alice Marie-Eve Bardiot
Arnaud Didier M. Marchand
Erwin Coesemans
Benoît Christian Albert Ghislain De Boeck
Pierre Jean-Marie Bernard Raboisson
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Janssen Pharmaceuticals, Inc.
Katholieke Universiteit Leuven
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Abstract

A presente invenção refere-se a derivados de indolina substituídos, métodos para prevenir ou tratar infecções virais do dengue ao usar os referidos compostos e também se refere aos referidos compostos para uso como um medicamento, mais preferencialmente para uso como um medicamento para tratar ou prevenir infecções virais do dengue. A presente invenção refere-se além do mais a composições farmacêuticas ou preparações de combinação dos compostos, às composições ou preparações para uso como um medicamento, mais preferencialmente para a prevenção ou tratamento de infecções virais do dengue. A invenção refere-se também a processos para preparação dos compostos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DERI- VADOS DE INDOLINA SUBSTITUÍDOS COMO INIBIDORES DA RE- PLICAÇÃO VIRAL DO DENGUE".
[001] A presente invenção se relaciona com derivados de indolina substituídos, com métodos para prevenir ou tratar infecções virais do dengue ao usar os referidos compostos e se relaciona também com os referidos compostos para uso como um medicamento, mais preferen- cialmente para uso como um medicamento para tratar ou prevenir in- fecções virais do dengue. A presente invenção se relaciona além do mais com composições farmacêuticas ou preparações de combinação dos compostos, com as composições ou preparações para uso como um medicamento, mais preferencialmente para a prevenção ou trata- mento de infecções virais do dengue. A invenção se relaciona também com processos para preparação dos compostos.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] Os flavivírus, que são transmitidos por mosquitos ou carra- patos, causam infecções com risco de vida no homem, tais como en- cefalite e febre hemorrágica. São conhecidos quatro sorotipos distintos, mas intimamente relacionados, do flavivírus dengue, assim chamados DENV-1, -2, -3 e -4. O dengue é endêmico na maioria das regiões tro- picais e subtropicais em todo o mundo, predominantemente em áreas urbanas e semiurbanas. De acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS), 2,5 bilhões de pessoas dos quais 1 bilhão de crianças estão em risco de infecção pelo DENV (OMS, 2002). 50 a 100 milhões de casos estimados de febre do dengue [DF], meio milhão de casos de doença do dengue grave (i.e., febre hemorrágica do dengue [DHF] e síndrome do choque do dengue [DSS]), e mais do que 20.000 mortes ocorrem globalmente a cada ano. A DHF se tem tornado uma causa principal de hospitalização e morte entre crianças em regiões endêmi- cas. Ao todo, o dengue representa a causa mais comum de doença arboviral. Devido a grandes surtos recentes em países situados na América Latina, Sudeste Asiático e no Pacífico Ocidental (incluindo Brasil, Porto Rico, Venezuela, Camboja, Indonésia, Vietnã, Tailândia), os números de casos de dengue têm aumentado dramaticamente ao longo dos últimos anos. Não só está o número de casos de dengue a aumentar à medida que a doença está se disseminando para novas áreas, mas também os surtos tendem a ser mais graves.
[003] Após infecção com outro sorotipo, os anticorpos heterólo- gos pré-existentes formam complexos com o sorotipo do vírus do den- gue recém-infectado mas não neutralizam o patógeno. Ao invés se acredita que a entrada do vírus nas células é facilitada, resultando em replicação não controlada do vírus e títulos virais no pico mais eleva- dos. Em infecções tanto primárias como secundárias, títulos virais mais elevados estão associados a doença do dengue mais grave. Uma vez que anticorpos maternos podem passar facilmente para cri- anças por amamentação, isto poderá ser uma das razões pelas quais as crianças são mais afetadas por doença do dengue grave do que os adultos.
[004] Em localizações com dois ou mais sorotipos circulando si- multaneamente, também referidas como regiões hiperendêmicas, o risco de doença do dengue grave é significativamente mais elevado devido a um risco aumentado de se experienciar uma infecção secun- dária, mais grave. Além do mais, em uma situação de hiperendemici- dade, a probabilidade da emergência de cepas mais virulentas é au- mentada, o que por seu turno aumenta a probabilidade de febre he- morrágica do dengue (DHF) ou síndrome do choque do dengue.
[005] Os mosquitos que transportam o dengue, incluindo Aedes aegypti e Aedes albopictus (mosquito-tigre), estão se movendo para norte no globo. De acordo com os Centers for Disease Control and Prevention (CDC) dos Estados Unidos (EUA), ambos os mosquitos são correntemente omnipresentes no sul do Texas. A disseminação para norte de mosquitos transportando o dengue não está confinada aos EUA, mas foi também observada na Europa.
[006] Dengvaxia®, a vacina contra o dengue produzida pela Sa- nofi Pasteur, foi em primeiro lugar aprovada no México e tem recebido entretanto aprovação em mais países. Não obstante, a vacina deixa bastante espaço para melhoria devido à sua eficácia limitada, especi- almente contra DENV-1 e -2, baixa eficácia em pacientes sem trata- mento prévio de flavivírus e o prolongado calendário de doseamento.
[007] Apesar destas insuficiências, a vacina é um grande avanço nas definições endêmicas, uma vez que irão oferecer proteção a uma grande parte da população, mas provavelmente não a crianças muito jovens, sobre as quais recai a maior incidência do dengue. Adicional- mente, o calendário de dosagem e a eficácia muito limitada em sujei- tos sem tratamento prévio de flavivírus fazem com que seja inadequa- da e provavelmente não compensatória/rentável para viajantes de áreas não endêmicas para áreas endêmicas do dengue. As insuficiên- cias acima mencionadas das vacinas do dengue são a razão pela qual existe uma necessidade de um antiviral do dengue profilático pré- exposição.
[008] Além do mais, hoje em dia, não estão disponíveis fármacos antivirais específicos para o tratamento ou prevenção da infecção pelo vírus da febre do dengue. Claramente existe ainda uma grande neces- sidade médica não atendida de terapêuticos para a prevenção ou tra- tamento de infecções virais em animais, mais em particular em huma- nos e especialmente para infecções virais causadas por flavivírus, mais em particular vírus do Dengue. Compostos com boa potência an- tiviral, nenhuns ou baixos níveis de efeitos secundários, uma atividade de amplo espectro contra múltiplos sorotipos do vírus do Dengue, uma baixa toxicidade e/ou boas propriedades farmacocinéticas ou -dinâ-
micas são altamente necessários.
[009] WO-2010/021878 divulga derivados de 2-fenilpirrolidina e indolina como antagonistas dos receptores de mentol do frio para tra- tamento de doenças inflamatórias e centrais. WO-2013/045516 divulga derivados de indol e indolina para uso no tratamento de infecções vi- rais do dengue.
[0010] A presente invenção proporciona agora compostos, deriva- dos de indolina substituídos, que mostram elevada atividade potente contra todos os quatro (4) sorotipos do vírus do Dengue.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0011] A presente invenção é baseada na descoberta inesperada de que pelo menos um dos problemas acima mencionados pode ser resolvido pelos compostos atuais da invenção.
[0012] A presente invenção proporciona compostos que se mos- trou possuírem atividade antiviral potente contra todos os quatro (4) sorotipos correntemente conhecidos. A presente invenção demonstra além do mais que estes compostos inibem eficientemente a prolifera- ção do vírus do Dengue (DENV). Portanto, estes compostos constitu- em uma classe útil de compostos potentes que podem ser usados no tratamento e/ou prevenção de infecções virais em animais, mamíferos e humanos, mais especificamente para o tratamento e/ou prevenção de infecções com vírus do Dengue.
[0013] A presente invenção se relaciona além do mais com o uso de tais compostos como medicamentos e com seu uso para a fabrica- ção de medicamentos para tratamento e/ou prevenção de infecções virais, em particular com vírus pertencendo à família dos vírus do Den- gue em animais ou mamíferos, mais em particular em humanos. A in- venção se relaciona também com métodos para a preparação de to- dos tais compostos e com composições farmacêuticas compreenden- do os mesmos em uma quantidade eficaz.
[0014] A presente invenção se relaciona também com um método de tratamento ou prevenção de infecções virais do dengue em huma- nos pela administração de uma quantidade eficaz de um ou mais tais compostos, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, opcionalmen- te em combinação com um ou mais outros medicamentos, como outro agente antiviral, a um paciente com sua necessidade.
[0015] A presente invenção diz respeito a compostos de fórmula (I), incluindo qualquer sua forma estereoquimicamente isomérica: R1 CH3
O R2 R3 O OH (I)
N O H
A O em que em que
[0016] R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é pentafluorossulfanila, R5 é hidrogênio, Z é carbono e R6 é hidrogênio, ou
[0017] R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é trifluorometila, R5 é hidrogênio, Z é carbono e R6 é metila, ou
[0018] R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é trifluorometila, R5 é flúor, Z é carbono e R6 é hidrogênio, ou
[0019] R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é trifluorometóxi, R5 é hidrogênio, Z é carbono e R6 é metila, ou
[0020] R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é trifluorometóxi, R5 é flúor, Z é carbono e R6 é hidrogênio, ou
[0021] R1 é flúor, R2 é metóxi, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é tri- fluorometóxi, R5 é hidrogênio, Z é carbono e R6 é hidrogênio, ou
[0022] R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é deutério, A é (a-1), R4 é trifluorometóxi, R5 é hidrogênio, Z é carbono e R6 é hidrogênio, ou
[0023] R1 é cloro, R2 é -OCH2CH2OH, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é trifluorometóxi, R5 é hidrogênio, Z é carbono e R6 é hidrogênio, ou
[0024] R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é trifluorometila, R5 é metóxi, Z é nitrogênio e R6 está ausente, ou
[0025] R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-2) e R4 é trifluorometila, ou
[0026] R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é trifluorometiltio, R5 é hidrogênio, Z é carbono e R6 é hidrogênio;
[0027] ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou polimor- fo do mesmo.
[0028] Um primeiro grupo de compostos de fórmula (I) consiste naqueles compostos de fórmula (I) em que o radical A é (a-1).
[0029] Um segundo grupo de compostos de fórmula (I) consiste naqueles compostos de fórmula (I) em que o radical A é (a-2).
[0030] Em uma representação alternativa, a presente invenção se refere a um composto com a fórmula (I) R1 CH3
O R2 R3 O OH (I)
N O H
A O em que em que o composto é selecionado do grupo consistindo em: Cl Cl OMe OMe
O O F F F F F N S N N N H H F O F O F O O
HO HO Cl OMe
O F N O N H O F OH F
O Cl F OMe OMe MeO
O O F N F N O N H O N H O O F O F O F F F
HO HO Cl Cl
HO OMe OMe
O O D O N F N F O N H O N H O O F OH F OH F F
O O Cl Cl OMe OMe
O O F F N N N H F N H F O O
O F O MeO N F S
HO HO Cl OMe
O F N S N H O F O F
HO ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou polimorfo do mes- mo.
[0031] Parte da corrente invenção é também uma composição farmacêutica compreendendo um composto mencionado acima ou uma forma estereoisomérica, sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou polimorfo do mesmo em conjunto com um ou mais excipientes, di- luentes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.
[0032] Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos referidos com- postos incluem os sais de adição de ácidos e bases dos mesmos. Sais de adição de ácidos adequados são formados a partir de ácidos que formam sais não tóxicos. Sais de bases adequados são formados a partir de bases que formam sais não tóxicos.
[0033] Os sais de ácidos farmaceuticamente aceitáveis como mencionados anteriormente se destinam a compreender as formas de sais de adição de ácidos não tóxicas terapeuticamente ativas que os compostos da fórmula (I) são capazes de formar. Estes sais de adição de ácidos farmaceuticamente aceitáveis podem ser convenientemente obtidos por tratamento da forma de base com tal ácido apropriado. Ácidos apropriados compreendem, por exemplo, ácidos inorgânicos tais como ácidos hidro-hálicos, p.ex., ácido clorídrico ou bromídrico, ácido sulfúrico, nítrico, fosfórico e similares; ou ácidos orgânicos tais como, por exemplo, ácido acético, propanoico, hidroxiacético, láctico, pirúvico, oxálico (i.e., etanodioico), malônico, succínico (i.e., ácido bu- tanodioico), maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, metanossulfô- nico, etanossulfônico, benzenossulfônico, p-toluenossulfônico, ciclâmi- co, salicílico, p-aminossalicílico, pamoico e os ácidos similares.
[0034] Os compostos da invenção podem também existir em for- mas não solvatadas e solvatadas. O termo "solvato" é usado aqui para descrever um complexo molecular compreendendo o composto da in- venção e uma ou mais moléculas de solvente farmaceuticamente acei- táveis, por exemplo, etanol.
[0035] O termo "polimorfo" refere-se à capacidade do composto da invenção de existir em mais do que uma forma ou estrutura de cristal.
[0036] Os compostos da presente invenção podem ser administra- dos como produtos cristalinos ou amorfos. Podem ser obtidos por exemplo como tampões sólidos, pós ou filmes por métodos tais como precipitação, cristalização, liofilização, secagem por pulverização ou secagem por evaporação. Podem ser administrados sozinhos ou em combinação com um ou mais outros compostos da invenção ou em combinação com um ou mais outros fármacos. Geralmente serão ad- ministrados como uma formulação em associação a um ou mais exci- pientes farmaceuticamente aceitáveis. O termo "excipiente" é usado aqui para descrever qualquer ingrediente sem ser o(s) composto(s) da invenção. A escolha de excipiente depende largamente de fatores tais como o modo de administração particular, o efeito do excipiente na solubilidade e estabilidade e a natureza da forma de dosagem.
[0037] Os compostos da presente invenção ou qualquer subgrupo dos mesmos podem ser formulados em várias formas farmacêuticas para propósitos de administração. Como composições apropriadas podem ser citadas todas as composições usualmente empregues para administração sistêmica de fármacos. Para preparar as composições farmacêuticas desta invenção, uma quantidade eficaz do composto particular, opcionalmente na forma de sal de adição, como o ingredien- te ativo é combinada em mistura com adição íntima com um veículo farmaceuticamente aceitável, veículo esse que pode tomar uma ampla variedade de formas dependendo da forma de preparação desejada para administração. Estas composições farmacêuticas estão deseja- velmente na forma de dosagem unitária adequada, por exemplo, para administração oral ou retal. Por exemplo, na preparação das composi- ções na forma de dosagem oral, pode ser empregue qualquer um dos meios farmacêuticos usuais tais como, por exemplo, água, glicóis, óleos, álcoois e similares no caso de preparações líquidas orais tais como suspensões, xaropes, elixires, emulsões, e soluções; ou veícu-
los sólidos tais como amidos, açúcares, caulim, diluentes, lubrificantes, aglutinantes, agentes de desintegração e similares no caso de pós, pílulas, cápsulas e comprimidos. Devido à sua facilidade de adminis- tração, os comprimidos e as cápsulas representam as formas unitárias de dosagem oral mais vantajosas, caso esse em que obviamente são empregues veículos farmacêuticos sólidos. São também incluídas pre- parações na forma sólida que podem ser convertidas, imediatamente antes do uso, em formas líquidas.
[0038] É especialmente vantajoso formular as composições farma- cêuticas mencionadas acima na forma de dosagem unitária para facili- dade de administração e uniformidade de dosagem. Forma de dosa- gem unitária como usada aqui se refere a unidades fisicamente discre- tas adequadas como dosagens unitárias, contendo cada unidade uma quantidade predeterminada de ingrediente ativo calculada para produ- zir o efeito terapêutico desejado em associação ao veículo farmacêuti- co requerido. Exemplos de tais formas de dosagem unitária são com- primidos (incluindo comprimidos sulcados ou revestidos), cápsulas, pílulas, pacotes de pó, hóstias, supositórios, soluções ou suspensões injetáveis e similares e seus múltiplos segregados.
[0039] Os peritos no tratamento de doenças infecciosas serão ca- pazes de determinar a quantidade eficaz a partir dos resultados de tes- te apresentados doravante. Em geral é contemplado que uma quanti- dade diária eficaz seria de 0,01 mg/kg a 50 mg/kg de peso corporal, mais preferencialmente de 0,1 mg/kg a 10 mg/kg de peso corporal. Pode ser apropriado administrar a dose requerida como duas, três, quatro ou mais subdoses em intervalos apropriados ao longo do dia. As referidas subdoses podem ser formuladas como formas de dosa- gem unitária, por exemplo, contendo 1 a 1000 mg e, em particular, 5 a 200 mg de ingrediente ativo por forma de dosagem unitária.
[0040] A dosagem e frequência de administração exatas depen-
dem do composto particular da invenção usado, da condição particular sendo tratada, da gravidade da condição sendo tratada, da idade, pe- so e condição física geral do paciente particular bem como outra medi- cação que o indivíduo possa estar tomando, tal como é bem conhecido dos peritos na técnica. Além do mais é evidente que a quantidade efi- caz pode ser diminuída ou aumentada dependendo da resposta do sujeito tratado e/ou dependendo da avaliação do médico prescrevendo os compostos da presente invenção. As gamas de quantidades efica- zes mencionadas acima são portanto apenas orientações e não se destinam a limitar o escopo ou uso da invenção em qualquer medida.
[0041] A presente divulgação se destina também a incluir quais- quer isótopos de átomos presentes nos compostos da invenção. Por exemplo, isótopos de hidrogênio incluem trítio e deutério e isótopos de carbono incluem C-13 e C-14.
[0042] Como usado aqui, qualquer fórmula química com ligações mostradas somente como linhas sólidas e não como ligações cunha- das sólidas ou cunhadas picotadas, ou de outro modo indicadas como tendo uma configuração particular (p.ex., R, S) em torno de um ou mais átomos, contempla cada estereoisômero possível, ou mistura de dois ou mais estereoisômeros.
[0043] Anteriormente e doravante, os termos "composto da fórmu- la (I)" e "intermediários da síntese da fórmula (I)" se destinam a incluir os estereoisômeros dos mesmos e formas tautoméricas dos mesmos.
[0044] Os termos "estereoisômeros", "formas estereoisoméricas" ou "formas estereoquimicamente isoméricas" anteriormente ou dora- vante são usados indistintamente.
[0045] A invenção inclui todos os estereoisômeros dos compostos da invenção como estereoisômeros puros ou como uma mistura de dois ou mais estereoisômeros. Enantiômeros são estereoisômeros que são imagens não sobreponíveis no espelho uma da outra. Uma mistu-
ra 1:1 de um par de enantiômeros é um racemato ou mistura racêmica. Os diastereômeros (ou diastereoisômeros) são estereoisômeros que não são enantiômeros, i.e., não estão relacionados como imagens no espelho.
[0046] O termo "estereoisômeros" inclui também quaisquer rotâ- meros, também denominados isômeros conformacionais, que os com- postos de fórmula (I) possam formar.
[0047] Por conseguinte, a invenção inclui enantiômeros, diastere- oisômeros, racematos, isômeros E, isômeros Z, isômeros cis, isôme- ros trans, rotâmeros, e suas misturas, sempre que quimicamente pos- sível.
[0048] O significado de todos estes termos, isto é, enantiômeros, diastereoisômeros, racematos, isômeros E, isômeros Z, isômeros cis, isômeros trans e suas misturas é conhecido do perito.
[0049] A configuração absoluta é especificada de acordo com o sistema de Cahn-Ingold-Prelog. A configuração em um átomo assimé- trico é especificada por R ou S. Os estereoisômeros resolvidos cuja configuração absoluta não é conhecida podem ser designados por (+) ou (-) dependendo da direção na qual rodam a luz polarizada plana. Por exemplo, enantiômeros resolvidos cuja configuração absoluta não seja conhecida podem ser designados por (+) ou (-) dependendo da direção na qual rodam o plano da luz polarizada.
[0050] Quando um estereoisômero específico é identificado, isto significa que o referido estereoisômero está substancialmente isento, isto é, associado a menos do que 50%, preferencialmente menos do que 20%, mais preferencialmente menos do que 10%, ainda mais pre- ferencialmente menos do que 5%, em particular menos do que 2% e o mais preferencialmente menos do que 1%, dos outros estereoisôme- ros. Assim, quando um composto da fórmula (I) é por exemplo especi- ficado como (R), isto significa que o composto está substancialmente isento do isômero (S).
[0051] Alguns dos compostos de acordo com a fórmula (I) podem também existir na sua forma tautomérica. Tais formas, na medida em que possam existir, embora não explicitamente indicadas na fórmula (I) acima, se destinam a estar incluídas no escopo da presente invenção.
[0052] Os compostos da fórmula (I) da presente invenção têm to- dos pelo menos um átomo de carbono assimétrico como indicado na figura abaixo pelo átomo de carbono marcado com *: R1 CH3
O R2 R3 * O OH (I)
N O H A O
[0053] Devido à presença do referido centro quiral, um "composto da fórmula (I)" pode ser o enantiômero (R), o enantiômero (S), a forma racêmica ou qualquer combinação possível dos dois enantiômeros in- dividuais em qualquer razão. Quando a configuração (R) ou (S) abso- luta de um enantiômero não é conhecida, este enantiômero pode ser também identificado por indicação de se o enantiômero é dextrorrota- tório (+)- ou levorrotatório (-)- após medição da rotação óptica específi- ca do referido enantiômero particular.
[0054] Em um aspecto, a presente invenção se refere a um primei- ro grupo de compostos de fórmula (I) em que os compostos de fórmula (I) têm a rotação específica (+).
[0055] Em um aspecto adicional, a presente invenção se refere a um segundo grupo de compostos de fórmula (I) em que os compostos de fórmula (I) têm a rotação específica (-). Exemplos Métodos de LC/MS
[0056] A medição por Cromatografia Líquida de Elevado Desem-
penho (HPLC) foi realizada usando uma bomba de LC, um arranjo de díodos (DAD) ou um detector de UV e uma coluna como especificada nos respectivos métodos. Se necessário foram incluídos detectores adicionais (ver tabela de métodos em baixo).
[0057] O fluxo a partir da coluna foi conduzido para o Espectrôme- tro de Massa (MS) que estava configurado com uma fonte de íons à pressão atmosférica. Está dentro do conhecimento do perito definir os parâmetros de ajuste (p.ex., gama de varredura, tempo de permanên- cia...) de modo a se obterem íons permitindo a identificação do peso molecular (PM) monoisotópico nominal do composto. A aquisição de dados foi realizada com software apropriado.
[0058] Os compostos são descritos pelos seus tempos de reten- ção (Tr) experimentais e íons. Se não especificado diferentemente na tabela de dados, o íon molecular relatado corresponde ao [M+H]+ (mo- lécula protonada) e/ou [M-H]- (molécula desprotonada). No caso de o composto não tiver sido diretamente ionizável é especificado o tipo de aducto (i.e., [M+NH4]+, [M+HCOO]-, etc…). No caso de moléculas com múltiplos padrões isotópicos (Br, Cl), o valor relatado é o obtido para a massa isotópica mais baixa. Todos os resultados foram obtidos com incertezas experimentais que estão comumente associadas ao método usado.
[0059] Doravante, "SQD" significa Detector de Quadropolo Único, "MSD" Detector Seletivo de Massa, "TA" temperatura ambiente, "BEH" híbrido em ponte de etilsiloxano/sílica, "DAD" Detector de Arranjo de Díodos, "HSS" sílica de Elevada Resistência.
[0060] Códigos de métodos de LC/MS (Fluxo expresso em mL/min; temperatura da coluna (T) em°C; Tempo de operação em minutos). Código do Instrumento Coluna Fase móvel método LC-A Waters: Acquity® UPLC® - Waters: BEH® C18 A: 95% de CH3COONH4 DAD-Quattro MicroTM (1,7 µm, 2,1 x 100 mm) 7 mM/5% de CH3CN, B: CH3CN LC-B Waters: Acquity® Classe H - Waters: BEH® C18 A: 95% de CH3COONH4 DAD e SQD2TM (1,7 µm, 2,1 x 100 mm) 7 mM/5% de CH3CN,
Código do Instrumento Coluna Fase móvel método B: CH3CN LC-C Waters: Acquity® UPLC® - DAD- Waters: BEH C18 A: 10 mM de CH3COONH4 em SQD (1,7 µm, 2,1 x 50 mm) 95% de H2O + 5% de CH3CN B: CH3CN LC-D Waters: Acquity® UPLC® - Waters: HSS T3 A: 10 mM de CH3COONH4 DAD-SQD (1,8 µm, 2,1x100 mm) em 95% de H2O + 5% de CH3CN B: CH3CN Continuação Gradiente Fluxo Tempo de opera- ------- ção (min) T da Col 84,2% de A durante 0,49 min, até 10,5% de A em 2,18 min, man- 0,343 mL/min 6,2 ter durante 1,94 min, de volta para 84,2% de A em 0,73 min, ------- manter durante 0,73 min. 40°C 84,2% de A/15,8% de B até 10,5% de A em 2,18 min, manter 0,343 mL/min 6,1 durante 1,96 min, de volta para 84,2% de A/15,8% de B em 0,73 ------- min, manter durante 0,49 min. 40°C De 95% de A até 5% de A em 1,3 min, manter durante 0,7 min. 0,8 mL/min 2 ------- 55°C De 100% de A até 0,7 mL/min 3,5 5% de A em 2,10 min, ------- até 0% de A em 0,90 min, até 5% de A em 0,5 min 55°C Métodos de SFC/MS
[0061] A medição por SFC foi realizada usando um sistema de cromatografia Analítica com fluido Supercrítico (SFC) composto por uma bomba binária para administração de dióxido de carbono (CO2) e modificador, um autoamostrador, um forno de coluna, um detector de arranjo de díodos equipado com uma célula de fluxo a elevada pres- são resistindo até 400 bar. Se configurado com um Espectrômetro de Massa (MS), o fluxo a partir da coluna foi conduzido para o (MS). Está dentro do conhecimento do perito definir os parâmetros de ajuste (p.ex., gama de varredura, tempo de permanência...) de modo a se obterem íons permitindo a identificação do peso molecular (PM) mo- noisotópico nominal do composto.
[0062] A aquisição de dados foi realizada com software apropriado. Métodos Analíticos de SFC/MS (Fluxo expresso em mL/min; tempera-
tura da coluna (T) em°C; Tempo de operação em minutos, Contra- pressão (BPR) em bars). Código do coluna fase móvel método SFC-A Coluna Daicel Chiralpak® AS3 (3,0 μm, 150 x 4,6 mm) A: CO2 B: EtOH (+ 0,2% de iPrNH2 + 3% de H2O) SFC-B Coluna Daicel Chiralpak® OD3 (3,0 μm, 150 x 4,6 mm) A: CO2 B: EtOH (+0,2% de iPrNH2) SFC-C Coluna Daicel Chiralpak® AS3 (3,0 μm, 150 x 4,6 mm) A: CO2 B: EtOH (+0,2% de iPrNH2) SFC-D Coluna Daicel Chiralcel® OD-3 (3 μm, 100 x 4,6 mm) A: CO2 B: iPrOH (+0,3% de iPrNH2) SFC-E Coluna Whelk®-O-(R,R) (5,0 μm, 250 x 4,6 mm) A: CO2 B: EtOH (+0,2% de iPrNH2) SFC-F Coluna Daicel Chiralpak® ID3 (3,0 μm, 150 x 4,6 mm) A: CO2 B: EtOH (+0,2% de iPrNH2) SFC-G Coluna Regis Whelk O1, S,S (3 μm, 100 x 4,6 mm) A: CO2 B: MeOH SFC-H Coluna Daicel Chiralcel® OD-3 (3 μm, 100 x 4,6 mm) A: CO2 B: MeOH SFC-I Coluna Daicel Chiralcel® OD-3 (3 μm, 100 x 4,6 mm) A: CO2 B: MeOH
Continuação gradiente Fluxo Tempo de operação --------- ------------ T da Col BPR 10%-50% de B em 6 min, manter 3,5 min 2,5 9,5 ------- ------- 40 110 10%-50% de B em 6 min, manter 3,5 min 2,5 9,5 ------- ------- 40 110 10%-50% de B em 6 min, manter 3,5 min 2,5 9,5 ------- ------- 40 110 40% de B manter 3 min 3,5 3 ------- ------- 35 105 10%-50% de B em 6 min, manter 3,5 min 2,5 9,5 ------- ------- 40 110 10%-50% de B em 6 min, manter 3,5 min 2,5 9,5 ------- ------- 40 110 40% de B manter 3 min, 3,5 3 ------- -------- 35 103 40% de B manter 3 min, 3,5 3 ------- -------- 35 103 30% de B manter 3 min, 3,5 3 ------- -------- 35 103
Pontos de Fusão
[0063] Os valores são valores de pico ou gamas de fusão e são obtidos com incertezas experimentais que estão comumente associa- das a este método analítico. DSC823e (indicado como DSC)
[0064] Para um número compostos, os pontos de fusão foram de- terminados com um DSC823e (Mettler-Toledo). Os pontos de fusão foram medidos com um gradiente de temperatura de 10°C/minuto. A temperatura máxima foi 300°C. Rotações Ópticas:
[0065] As rotações ópticas foram medidas em um polarímetro 341 da PerkinElmer com uma lâmpada de sódio e relatadas como se se- gue: [α]º (λ, c g/100 mL, solvente, T°C).
[0066] [α]λT = (100α) / (l x c): onde l é o comprimento do percurso em dm e c é a concentração em g/100 mL para uma amostra a uma temperatura T (°C) e um comprimento de onda λ (em nm). Se o com- primento de onda da luz usado for 589 nm (linha D do sódio), então o símbolo D poderia ser ao invés usado. O sinal da rotação (+ ou -) deve ser sempre dado. Quando se usa esta equação, a concentração e o solvente são sempre proporcionados entre parênteses após a rotação. A rotação é relatada usando graus e não são dadas quaisquer unida- des de concentração (se assume como sendo g/100 mL). Abreviaturas usadas na parte experimental (M+H)+MH+ íon molecular protonado iPrNH2 isopropilamina aq. aquoso iPrOH 2-propanol Boc terc-butiloxicarbonila K2CO3 carbonato de potássio Boc2O dicarbonato de di-terc-butila KNO3 nitrato de potássio br amplo LiAlH4 hidreto de alumínio e lítio CH3CN acetonitrila m/z razão entre massa e carga CHCl3 clorofórmio Me metila CH2CH2 diclorometano MeOH metanol CH3OH metanol MgSO4 sulfato de magnésio CO2 dióxido de carbono min minuto(s) CsCO3 carbonato de césio MTBE meti-terc-butiléter d dupleto N2 nitrogênio DCM diclorometano Na2CO3 carbonato de sódio DIEA di-isopropiletilamina Na2SO4 sulfato de sódio DIPE éter de di-isopropila NaBH4 boro-hidreto de sódio DMA dimetilacetamida NaCl cloreto de sódio DMAP 4-dimetilaminopiridina NaHCO3 bicarbonato de sódio
DME 1,2-dimetoxietano NaOH hidróxido de sódio DMF dimetilformamida NH4Cl cloreto de amônio DMSO sulfóxido de dimetila NH4HCO3 bicarbonato de amônio EDCl 1-etil-3-(3-dimetilamino-propil)carbodi-imida NMP N-metilpirrolidona eq. Equivalente q quarteto Et2O éter de dietila ta ou TA temperatura ambiente Et3N Trietilamina SEMCl cloreto de 2-(trimetilsilil) etoxi- metila EtOAc acetato de etila s singleto EtOH etanol t tripleto H2 hidrogênio tBuOK terc-butanolato de potássio HNO3 ácido nítrico TEA trietilamina H2O Água TFA ácido trifluoroacético H2SO4 ácido sulfúrico THF tetra-hidrofurano HATU hexafluorofosfato de O-(7-aza-1H-benzotria- 2-Me-THF 2-metiltetra-hidrofurano zol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametil-urônio – CAS [148893-10-1] HCl ácido clorídrico TMSCl cloreto de trimetilsilila HPLC cromatografia líquida de elevado desempenho TMSCF3 trifluorometiltrimetilsilano Exemplo 1: síntese de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (pentafluoro-λ6-sulfanil)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoico (Composto 1) e separação quiral nos Enantiômeros 1A e 1B.
Síntese do intermediário 1a:
[0067] A uma solução agitada mecanicamente de 4-bromo- butanoato de terc-butila [CAS 110661-91-1] (42,3 g, 0,19 mol) em DMF (600 mL) foi adicionada em porções uma mistura sólida de 3-amino-5- metoxifenol [CAS 162155-27-3] (26,4 g, 0,19 mol) e Cs2CO3 (123,6 g,
0,379 mol). A reação foi agitada a 60°C durante 65 h, e foi permitido que alcançasse a temperatura ambiente. A mistura foi vertida para dentro de H2O (2,5 L). O produto foi extraído com Et2O (2 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de cloreto de sódio, secas com MgSO4 e filtradas. O solvente foi eva- porado sob pressão reduzida e coevaporado com tolueno. O resíduo foi purificado por meio de HPLC de Fase Normal (fase estacionária: sílica-gel 60 A 25-40 µm (Merck), fase móvel: gradiente de 20% de EtOAc, 80% de heptano até 60% de EtOAc, 40% de heptano), dando origem ao 4-(3-amino-5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 1a (27 g). Síntese do intermediário 1b:
[0068] A 0°C, BH3-Piridina (1,46 mL, 14,5 mmol) foi adicionado lentamente a uma solução de 6-(pentafluoro-λ6-sulfanil)-1H-indol [CAS 1379811-84-3] (1,0 g, 4,11 mmol) em EtOH (8,5 mL). HCl 5 N (7 mL) foi lentamente adicionado. A mistura foi agitada a 0°C durante 2 h e deixada aquecer gradualmente para a temperatura ambiente com agi- tação durante a noite. Após esfriamento para 0°C (banho de gelo), NaOH 50% (2 mL) foi adicionado gota a gota e a agitação foi continu- ada durante 15 min. Água (50 mL) foi adicionada e o produto foi extra- ído com Et2O/EtOAc 2/1. A camada orgânica foi separada, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (25 g) usan- do um gradiente de heptano/CH2Cl2 100/0 até 0/100. As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. O re- síduo foi seco sob vácuo a 45°C, dando origem a 6-(pentafluoro-λ6- sulfanil)indolina 1b (328 mg). Síntese do intermediário 1c:
[0069] Uma mistura da determinada 6-(pentafluoro-l6-sulfanil) indo- lina 1b (328 mg, 1,34 mmol), ácido 2-(4-clorofenil)acético [CAS 1878- 66-6] (228 mg, 1,34 mmol), HATU (778 mg, 2,0 mmol) e di-
isopropiletilamina (663 µL, 4,0 mmol) em CH3CN (15 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 65 h. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em 2-Me-THF (50 mL) e la- vado com HCl 1 N (25 mL) e salmoura. A camada orgânica foi separa- da, seca sobre MgSO4, filtrada, e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (12 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc 100/0 a 0/100. As fra- ções desejadas foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzi- da. O produto foi cristalizado a partir de CH2Cl2/EtOAc, removido por filtração, lavado (3x) com EtOAc e seco sob vácuo a 45°C, dando ori- gem a 2-(4-clorofenil)-1-(6-(pentafluoro-λ6-sulfanil)indolin-1-il)-etanona 1c (209 mg). O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi agitado em Et2O (2 mL), removido por filtração, lavado (3x) com Et2O e seco sob vácuo a 45°C, dando origem a uma segunda colheita de intermediário 1c (155 mg). Síntese do intermediário 1d:
[0070] A -70°C, sob um fluxo de N2, LiHMDS 1 M em THF (1,78 mL, 1,78 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 2-(4- clorofenil)-1-(6-(pentafluoro-λ6-sulfanil)indolin-1-il)etanona 1c (354 mg, 0,89 mmol) em 2-Me-THF (35 mL) e a mistura foi mantida a -70°C du- rante 30 min. TMSCl (182 µL, 1,42 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura foi agitada durante 30 min a -70°C e uma solução de N- bromossuccinimida (198 mg, 1,11 mmol) em uma mistura de solventes de THF (1,5 mL) e 2-Me-THF (5 mL) foi adicionada gota a gota. Após agitação durante 1 h a -78°C, a reação foi extinta com uma solução aquosa saturada de NH4Cl (50 mL). O banho de esfriamento foi remo- vido e a mistura reacional foi agitada durante 50 min. Água (10 mL) foi adicionada e a camada orgânica foi separada, seca sobre MgSO4, fil- trada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, dando origem a 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(pentafluoro-λ6-sulfanil)indolin-1-il) eta-
nona 1d (424 mg), que foi usado como tal na etapa seguinte. Síntese do Composto 1 e separação quiral nos Enantiômeros 1A e 1B:
[0071] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(pentafluoro- λ6-sulfanil)indolin-1-il)etanona 1d (424 mg, 0,89 mmol), 4-(3-amino-5- metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 1a (260 mg, 0,92 mmol) e di- isopropiletilamina (306 µL, 1,78 mmol) em CH3CN (30 mL) foi agitada a 60°C durante 18 h. A mistura reacional foi deixada alcançar a tempe- ratura ambiente e vertida em água com agitação (150 mL). O produto foi extraído (2 x) com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas, e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por croma- tografia flash em sílica-gel (40 g) usando um gradiente de hepta- no/EtOAc/EtOH 100/0/0 até 40/45/15). As frações desejadas foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com dioxano.
[0072] O resíduo (602 mg, contendo 58% de intermediário 1e) foi misturado com HCl 4 M em dioxano (4 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h. Os sólidos foram removidos por filtração, lavados com dioxano (3x) e Et2O (2x) e secos sob vácuo a 45°C, dando origem a ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(pen- tafluoro-λ6-sulfanil)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoico bru- to (Composto 1, 309 mg). Uma amostra analítica (60 mg) de Composto 1 racêmico foi adicionalmente purificada via HPLC preparativa (Fase estacionária: RP XBridge® Prep C18 OBD - 10 µm, 30 x 150 mm, fase móvel: solução de NH4HCO3 a 0,25% em água, CH3CN). As frações puras foram combinadas e os voláteis orgânicos foram evaporados sob pressão reduzida. A solução aquosa remanescente foi coevapora- da sob pressão reduzida com o-xileno. O resíduo foi dissolvido em uma mistura de solventes de CH3CN e água, evaporado sob pressão reduzida e coevaporado com dioxano. O resíduo foi liofilizado a partir de uma mistura de solventes de CH3CN (2 mL) e água (0,8 mL), dando origem a ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(pentafluoro-λ6-sulfa- nil)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoico puro (Composto 1, 40 mg) como um pó.
[0073] Os enantiômeros do Composto 1 (249 mg) foram separa- dos através de SFC quiral preparativa (Fase estacionária: Chiralpak® Diacel AD 20 x 250 mm, fase móvel: CO2, EtOH + iPrNH2 a 0,4%). As frações de produto do primeiro enantiômero eluído foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com MeOH. O re- síduo foi agitado em água (3,5 mL) e MeOH (1 mL), os sólidos foram removidos por filtração, lavados (3x) com água/MeOH 4/1 e secos sob vácuo a 45°C, dando origem ao Enantiômero 1A (41 mg). As frações de produto do segundo enantiômero eluído foram combinadas, evapo- radas sob pressão reduzida e coevaporadas com MeOH. O resíduo foi agitado em água (3 mL) e MeOH (0,6 mL), os sólidos foram removidos por filtração, lavados (3x) com água/MeOH 4/1 e secos sob vácuo a 45°C, dando origem ao Enantiômero 1B (48 mg). Composto 1: 1
[0074] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,86 (quin, J=6,8 Hz, 2 H) 2,33 (t, J=7,3 Hz, 2 H) 3,12 - 3,25 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,84 (t, J=6,5 Hz, 2 H) 3,99 - 4,13 (m, 1 H) 4,47 - 4,59 (m, 1 H) 5,57 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=2,1 Hz, 1 H) 5,91 - 5,96 (m, 2 H) 6,45 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 7,39 - 7,50 (m, 3 H) 7,51 - 7,62 (m, 3 H) 8,58 (d, J=2,0 Hz, 1 H) 12,12 (s l, 1 H)
[0075] LC/MS (método LC-C): Tr 1,09 min, MH+ 621 Enantiômero 1A: 1
[0076] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,85 (quin, J=6,8 Hz, 2 H) 2,26 (t l, J=6,8 Hz, 2 H) 3,15 - 3,25 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,84 (t l, J=6,4 Hz, 2 H) 4,02 - 4,12 (m, 1 H) 4,48 - 4,60 (m, 1 H) 5,59 (d, J=8,8
Hz, 1 H) 5,76 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,93 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,96 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 6,47 (d, J=8,4 Hz, 1 H) 7,42 - 7,47 (m, 3 H) 7,53 - 7,59 (m, 3 H) 8,58 (d, J=2,2 Hz, 1 H)
[0077] LC/MS (método LC-D): Tr 1,99 min, MH+ 621
[0078] [α]D20: -44,6° (c 0,28, DMF)
[0079] SFC quiral (método SFC-A): Tr 3,54 min, MH+ 621 pureza quiral 97,9%. Enantiômero 1B: 1
[0080] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,86 (quin, J=6,8 Hz, 2 H) 2,33 (t, J=7,3 Hz, 2 H) 3,14 - 3,29 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,84 (t, J=6,4 Hz, 2 H) 4,01 - 4,11 (m, 1 H) 4,48 - 4,58 (m, 1 H) 5,58 (d, J=9,1 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,93 (t, J=1,8 Hz, 1 H) 5,94 - 5,96 (m, 1 H) 6,48 (d, J=9,1 Hz, 1 H) 7,41 - 7,48 (m, 3 H) 7,52 - 7,61 (m, 3 H) 8,58 (d, J=2,2 Hz, 1 H) 12,13 (s l, 1 H)
[0081] LC/MS (método LC-D): Tr 1,98 min, MH+ 621
[0082] [α]D20: +46,0° (c 0,265, DMF)
[0083] SFC quiral (método SFC-A): Tr 3,82 min, MH+ 621 pureza quiral 99,0%. Exemplo 2: síntese de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(4-metil-6- (trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoico (Composto 2) e separação quiral nos Enantiômeros 2A e 2B.
Síntese do intermediário 2a:
[0084] Pd/C (10%) (1,18 g) foi adicionado a uma solução de 1- benzil-4-metil-6-(trifluorometil)indolina [CAS 1156512-79-6] (11,8 g, 40,5 mmol) em AcOH (11,8 mL) e MeOH (118 mL). A reação foi agita- da à temperatura ambiente durante 12 h sob atmosfera de H2. A mistu- ra foi filtrada em uma almofada de Celite® e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi recolhido com CH2Cl2, lavado com água, sal- moura, seco em MgSO4, filtrado e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (hepta- no/EtOAc 9/1). As frações puras foram combinadas e o solvente foi evaporado até à secura, dando origem a 8,2 g de 4-metil-6-(trifluo- rometil)indolina 2a. Síntese do intermediário 2b:
[0085] 4-(3-Amino-5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 1a (2,94 g, 10,5 mmol) foi adicionado a solução de 2-bromo-2-(4-clorofenil) ace- tato de metila [CAS 24091-92-7] (2,51 g, 9,53 mmol) em CH3CN (200 mL). Di-isopropiletilamina (2,46 mL, 14,3 mmol) foi adicionada e a mis- tura reacional foi agitada a 80°C durante a noite. O solvente foi evapo-
rado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em CH2Cl2 e lava- do com HCl a 1 N. A camada orgânica foi lavada com água, seca so- bre MgSO4, filtrada e evaporada até à secura sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (100 g) usando um gradiente de EtOAc:EtOH (3:1)/heptano 0/100 até 50/50. As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida e o resíduo foi seco sob vácuo a 50°C, dando origem a 4-(3- ((1-(4-clorofenil)-2-metóxi-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 2b (3,74 g) como um óleo amarelo. Síntese do intermediário 2c:
[0086] Hidróxido de lítio (336 mg, 14,0 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-metóxi-2-oxoetil)amino)-5-metoxife- nóxi) butanoato de terc-butila 2b (3,74 g, 7,02 mmol) em uma mistura de solventes de água (25 mL), MeOH (25 mL) e THF (75 mL) e a mis- tura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h. NH4Cl aquoso saturado (50 mL) foi adicionado e os voláteis orgânicos foram evaporados sob pressão reduzida. A solução aquosa residual foi acidi- ficada com HCl 1 N para pH 2 e extraída duas vezes com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi seco sob vácuo a 50°C, dando origem a ácido 2-((3-(4-(terc-butóxi)-4-oxobutóxi)-5-me- toxifenil)amino)-2-(4-clorofenil)acético 2c (3,22 g) como um óleo mar- rom espesso. Síntese do intermediário 2d:
[0087] N,N-Di-isopropiletilamina (1,58 mL, 9,57 mmol) foi adicio- nada a uma solução de ácido 2-((3-(4-(terc-butóxi)-4-oxobutóxi)-5- metoxifenil)amino)-2-(4-clorofenil)acético 2c (1,44 g, 3,19) e 4-metil-6- (trifluorometil)indolina 2a (953 mg, 3,51 mmol) em DMF seco (30 mL). HATU (1,82 g, 4,78 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi agi- tada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura reacional foi verti-
da em água (400 mL) e a suspensão branca foi extraída com EtOAc. A camada aquosa foi saturada pela adição de NaCl e extraída de novo com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, água, secas sobre MgSO4 e evaporadas sob pressão redu- zida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica- gel (100 g) usando um gradiente de EtOAc:EtOH (3:1)/heptano 0/100 até 60/40). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo (1,41 g) foi purificado via HPLC preparati- va (Fase estacionária: RP XBridge® Prep C18 OBD - 10 µm, 50 x 150 mm, fase móvel: solução de NH4HCO3 a 0,25% em água, CH3CN). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão re- duzida, dando origem a 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(4-metil-6-(trifluoro- metil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoato de terc- butila 2d (808 mg) como um sólido branco. Síntese do Composto 2 e separação quiral nos Enantiômeros 2A e 2B:
[0088] 4-(3-((1-(4-Clorofenil)-2-(4-metil-6-(trifluorometil)indolin-1-il)- 2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 2d (808 mg, 1,28 mmol) foi misturado com HCl 4 M em dioxano (9,6 mL) e a mistu- ra foi agitada à temperatura ambiente durante 15 h. Nitrogênio gasoso foi borbulhado na mistura reacional durante 30 min. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, dando origem a ácido 4-(3-((1-(4- clorofenil)-2-(4-metil-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5- metoxifenóxi)butanoico (Composto 2, 735 mg) como um sólido marrom claro.
[0089] Os enantiômeros do Composto 2 (735 mg) foram separa- dos através de SFC quiral preparativa (Fase estacionária: Chiralcel® Diacel OD 20 x 250 mm, fase móvel: CO2, EtOH + iPrNH2 a 0,4%). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão re- duzida, dando origem ao Enantiômero 2A como o primeiro produto elu-
ído e Enantiômero 2B como o segundo produto eluído. Ambos os resí- duos foram misturados com EtOAc e água. A mistura foi acidificada para pH 1-2 com HCl 1 N. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída duas vezes com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi seco sob vácuo a 50°C, dando origem ao Enantiômero 2A (216 mg) e Enantiômero 2B (184 mg), respectivamente. Composto 2: 1
[0090] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,87 (quin l, J=6,9 Hz, 2 H) 2,25 (s, 3 H) 2,33 (t l, J=7,1 Hz, 2 H) 3,07 - 3,20 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,84 (t l, J=6,4 Hz, 2 H) 3,97 - 4,09 (m, 1 H) 4,48 - 4,60 (m, 1 H) 5,57 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=1,8 Hz, 1 H) 5,90 - 5,99 (m, 2 H) 6,43 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 7,25 (s, 1 H) 7,44 (d, J=8,4 Hz, 2 H) 7,56 (d l, J=8,4 Hz, 2 H) 8,22 (s, 1 H) 12,15 (s l, 1 H)
[0091] LC/MS (método LC-C): Tr 1,14 min, MH+ 577 Enantiômero 2A: 1
[0092] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,87 (quin, J=6,8 Hz, 2 H) 2,25 (s, 3 H) 2,34 (t, J=7,3 Hz, 2 H) 3,05 - 3,23 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,85 (t, J=6,4 Hz, 2 H) 4,03 (td, J=10,2, 7,3 Hz, 1 H) 4,54 (td, J=10,2, 6,2 Hz, 1 H) 5,57 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,91 - 5,99 (m, 2 H) 6,42 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,24 (s, 1 H) 7,44 (d, J=8,4 Hz, 2 H) 7,56 (d, J=8,8 Hz, 2 H) 8,22 (s, 1 H) 12,17 (s l, 1 H)
[0093] LC/MS (método LC-C): Tr 1,26 min, MH+ 577
[0094] [α]D20: -39,0° (c 0,438, DMF)
[0095] SFC quiral (método SFC-B): Tr 5,11 min, MH+ 577 pureza quiral 100%. Enantiômero 2B: 1
[0096] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,88 (quin, J=6,9 Hz, 2 H) 2,25 (s, 3 H) 2,34 (t, J=7,3 Hz, 2 H) 3,06 - 3,24 (m, 2 H) 3,62 (s, 3
H) 3,85 (t, J=6,4 Hz, 2 H) 3,97 - 4,11 (m, 1 H) 4,55 (td, J=10,3, 6,8 Hz, 1 H) 5,58 (d, J=8,4 Hz, 1 H) 5,77 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,92 - 5,99 (m, 2 H) 6,43 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,25 (s, 1 H) 7,41 - 7,50 (m, 2 H) 7,52 - 7,60 (m, 2 H) 8,23 (s, 1 H) 12,17 (s l, 1 H)
[0097] LC/MS (método LC-C): Tr 1,25 min, MH+ 577
[0098] [α]D20: +47,1° (c 0,384, DMF)
[0099] SFC quiral (método SFC-B): Tr 8,00 min, MH+ 577 pureza quiral 99,6%. Exemplo 3: síntese de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-fluoro-6- (trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoico (Composto 3) e separação quiral nos Enantiômeros 3A e 3B.
Síntese do intermediário 3a:
[00100] A 0°C, BH3-Piridina (10,45 mL, 103,4 mmol) foi adicionado lentamente a uma solução de 5-fluoro-6-(trifluorometil)-1H-indol [CAS 1493800-10-4] (7,0 g, 34,5 mmol) em EtOH (45 mL). HCl 6 N (105 mL) foi adicionado gota a gota mantendo a temperatura menor do que 10°C. A mistura foi agitada a 0°C durante 3 h. Água foi adicionada e a mistura foi basificada para pH 8,5 com uma solução concentrada de NaOH (temperatura menor do que 20°C). EtOAc foi adicionado. A ca- mada orgânica foi separada, lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada, e o solvente evaporado sob pressão reduzida. Tolueno foi adi-
cionado e removido sob pressão reduzida (para eliminar traços de piri- dina). O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (20- 45 µm, 120 g, CH2Cl2/MeOH 98,5/1,5). As frações puras foram combi- nadas e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida, dando ori- gem a 5-fluoro-6-(trifluorometil)indolina 3a (3,5 g). Síntese do intermediário 3b:
[00101] Uma mistura de 5-fluoro-6-(trifluorometil)indolina 3a (500 mg, 2,44 mmol), ácido 2-(4-clorofenil)acético [CAS 1878-66-6] (457 mg, 2,64 mmol), HATU (1,39 g, 3,66 mmol) e di-isopropiletilamina (1,2 mL, 7,31 mmol) em DMF (10 mL) foi agitada à temperatura ambiente du- rante 12 h. A mistura foi vertida em água gelada, o precipitado foi re- movido por filtração e recolhido com CH2Cl2. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4 e concentrada sob pressão reduzida. O composto foi cristalizado a partir de CH3CN e seco, dando origem a 2-(4- clorofenil)-1-(5-fluoro-6-(trifluorometil)indolin-1-il)etanona 3b (854 mg). Síntese do intermediário 3c:
[00102] A -78°C, sob um fluxo de N2, LiHMDS 1 M em THF (4,78 mL, 4,78 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 2-(4- clorofenil)-1-(5-fluoro-6-(trifluorometil)indolin-1-il)etanona 3b (854 mg, 2,39 mmol) em THF (7 mL). TMSCl (485 µL, 3,82 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura foi agitada durante 15 min a -78°C e uma solu- ção de N-bromossuccinimida (510 mg, 2,87 mmol) em THF (7 mL) foi adicionada gota a gota. Após agitação durante 2 h a -78°C, a reação foi extinta com uma solução aquosa saturada de NH4Cl. EtOAc foi adi- cionado e a camada orgânica foi separada, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 40 g, CH2Cl2/heptano 50/50). As frações puras foram combinadas e o sol- vente foi concentrado sob pressão reduzida, dando origem a 2-bromo- 2-(4-clorofenil)-1-(5-fluoro-6-(trifluorometil)indolin-1-il)etanona 3c (820 mg). Síntese do intermediário 3d:
[00103] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(5-fluoro-6- (trifluorometil)indolin-1-il)etanona 3c (820 mg, 1,88 mmol), 4-(3-amino- 5-metoxifenóxi)-butanoato de terc-butila 1a (528 mg, 1,88 mmol) e di- isopropiletilamina (388 µL, 2,25 mmol) em CH3CN (20 mL) foi agitada a 70°C durante 4 h. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi recolhido com EtOAc. A camada orgânica foi lavada duas vezes com uma solução 1 N de HCl, água, foi seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O re- síduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 40 g, CH2Cl2 100%). As frações puras foram combinadas e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida, dando origem a 4-(3-((1-(4- clorofenil)-2-(5-fluoro-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5- metoxifenóxi)-butanoato de terc-butila 3d (1,07 g). Síntese do Composto 3 e separação quiral nos Enantiômeros 3A e 3B:
[00104] Uma solução de 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-fluoro-6-(trifluo- rometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoato de terc- butila 3d (1,07 g, 1,68 mmol) em HCl (4 M em dioxano) (20 mL) foi agi- tada a 5°C durante 3 h e à temperatura ambiente durante 12 h. O pre- cipitado foi removido por filtração, lavado com éter de di-isopropila e seco. O resíduo foi purificado via cromatografia de fase reversa (Fase estacionária: YMC-actus Triart-C18 10 µm 30 x 150 mm, fase móvel: gradiente desde 65% de NH4HCO3 a 0,2%, 35% de CH3CN até 25% de NH4HCO3 a 0,2%, 75% de CH3CN), dando origem ao Composto 3 (540 mg). Uma amostra analítica (30 mg) foi adicionalmente purificada via cromatografia de fase reversa (Fase estacionária: YMC-actus Tri- art-C18 10 µm 30 x 150 mm, fase móvel: gradiente desde 65% de NH4HCO3 a 0,2, 35% de CH3CN até 25% de NH4HCO3 a 0,2%, 75%
de CH3CN), dando origem a ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-fluoro-6- (trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoico (Composto 3, 30 mg, 0,16 H2O). A quantidade restante do Composto 3 (510 mg) foi utilizada para separação quiral dos enantiômeros via SFC Preparativa Quiral (Fase estacionária: Whelk O1 S,S 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: 60% de CO2, 40% de MeOH). O enantiômero que eluiu em primeiro lugar (250 mg) foi purificado adicionalmente por cromatografia flash em gel de sílica (20-45 µm, 24 g, CH2Cl2/MeOH 98/2). As frações puras foram combinadas e o solvente foi concentra- do sob pressão reduzida, dando origem, após solidificação em hepta- no/éter de di-isopropila, ao Enantiômero 3A (170 mg). O enantiômero que eluiu em segundo lugar (249 mg) foi solidificado em heptano/éter di-isopropílico para dar o Enantiômero 3B (182 mg). Composto 3: 1
[00105] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,78 - 1,92 (m, 2 H) 2,26 (s l, 2 H) 3,15 - 3,31 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,84 (s l, 2 H) 4,02 (d l, J=7,88 Hz, 1 H) 4,54 (d l, J=5,99 Hz, 1 H) 5,58 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 5,76 (s l, 1 H) 5,90 - 5,99 (m, 2 H) 6,42 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 7,44 (d l, J=7,88 Hz, 3 H) 7,55 (d l, J=7,88 Hz, 2 H) 8,38 (d l, J=6,31 Hz, 1 H) 11,60 - 12,92 (m, 1 H)
[00106] LC/MS (método LC-A): Tr 2,94 min, MH+ 581
[00107] Ponto de fusão: 206°C Enantiômero 3A: 1
[00108] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,87 (quin, J=6,86 Hz, 2 H) 2,29 - 2,39 (m, 2 H) 3,18 - 3,30 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,85 (t, J=6,46 Hz, 2 H) 4,03 (td, J=10,25, 7,25 Hz, 1 H) 4,54 (td, J=10,17, 6,15 Hz, 1 H) 5,58 (d, J=8,51 Hz, 1 H) 5,76 (s, 1 H) 5,95 (d l, J=11,35 Hz, 2 H) 6,43 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 7,43 - 7,48 (m, 3 H) 7,55 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 8,39 (d, J=6,31 Hz, 1 H) 12,08 - 12,27 (m, 1 H)
[00109] LC/MS (método LC-A): Tr 2,95 min, MH+ 581
[00110] [α]D20: -48,9° (c 0,315, DMF)
[00111] SFC quiral (método SFC-G): Tr 1,65 min, MH+ 581 pureza quiral 100%. Enantiômero 3B: 1
[00112] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,87 (quin, J=6,54 Hz, 2 H) 2,25 - 2,46 (m, 2 H) 3,15 - 3,31 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,85 (t l, J=6,31 Hz, 2 H) 3,98 - 4,07 (m, 1 H) 4,50 - 4,59 (m, 1 H) 5,58 (d l, J=8,83 Hz, 1 H) 5,76 (s, 1 H) 5,95 (d l, J=12,30 Hz, 2 H) 6,43 (d l, J=8,83 Hz, 1 H) 7,42 - 7,48 (m, 3 H) 7,56 (d l, J=8,20 Hz, 2 H) 8,39 (d l, J=6,31 Hz, 1 H) 11,40 - 12,54 (m, 1 H)
[00113] LC/MS (método LC-A): Tr 2,94 min, MH+ 581
[00114] [α]D20: +47,8° (c 0,27, DMF)
[00115] SFC quiral (método SFC-G): Tr 2,14 min, MH+ 581 pureza quiral 99,43%. Exemplo 4: síntese de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(4-metil-6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoico (Composto 4) e separação quiral nos Enantiômeros 4A e 4B.
Síntese do intermediário 4a:
[00116] A uma solução de 2-metil-4-(trifluorometóxi)anilina [CAS 86256-59-9] (10,0 g, 52,3 mmol) em dioxano (20 mL) foi adicionado anidrido trifluoroacético (8 mL, 57,2 mmol). A mistura reacional foi agi- tada à temperatura ambiente por 1 h. A mistura reacional foi concen- trada sob pressão reduzida. O resíduo foi particionado entre EtOAc e HCl a 1 N. As fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada com uma solução saturada de NaHCO3 em água, H2O e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentra- da sob pressão reduzida para dar origem a 14,7 g de 2,2,2-trifluoro-N- (2-metil-4-(trifluorometóxi)fenil)acetamida 4a como um pó branco. O composto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. Síntese do intermediário 4c:
[00117] A anidrido acético (11,4 mL, 61,1 mmol), resfriado até 0°C foi adicionado gota a gota ácido nítrico a 70% (3,9 mL). 2,2,2-Trifluoro-
N-(2-metil-4-(trifluorometóxi)fenil)acetamida 4a (5 g, 17,4 mmol) foi adicionada em porções e a mistura reacional foi aquecida a 55°C por 12 h. Após resfriar até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi diluída com EtOAc e lavada com H2O. A fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca com Na2SO4, filtra- da e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (46 mL). K2CO3 a 2 M (23 mL, 46 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi aquecida a 70°C por 4 h. Mais K2CO3 a 2 M (10 mL, 20 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi aquecida a 70°C por 12 h. A mistura reacional foi parcialmente concentrada sob pres- são reduzida para remover metanol. O resíduo foi extraído com EtOAc. A fase orgânica foi lavada com H2O e solução aquosa saturada de clo- reto de sódio, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de sílica usando um gradiente de EtOAc (20% a 50%) em heptano para originar 3,6 g de 2-metil-6-nitro-4-(trifluorometóxi)anilina 4c como um sólido amarelo. Síntese do intermediário 4d:
[00118] A uma solução de 2-metil-6-nitro-4-(trifluorometóxi)anilina 4c (1,8 g, 7,69 mmol) em ácido acético (10,9 mL) foi adicionada gota a gota uma solução de nitrito de sódio (0,806 g, 11,7 mmol) em H2SO4/H2O (2 mL, 1/1). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 30 min. Adicionaram-se H2O (22 mL) e ureia (0,802 g, 13,4 mmol). Após 10 min à temperatura ambiente, foi adicionada gota a gota uma solução de iodeto de potássio (1,7 g, 10,2 mmol) em H2O (11 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 30 min. O sólido amarelo foi removido por filtração, lavado com H2O e se- co para dar 2,4 g de 2-iodo-1-metil-3-nitro-5-(trifluorometóxi)benzeno 4d. Síntese do intermediário 4e:
[00119] A uma solução de 2-iodo-1-metil-3-nitro-5-(trifluorometóxi) benzeno 4d (3,5 g, 10,0 mmol) em EtOH (30 mL) foi adicionada uma solução de NH4Cl (2,7 g, 49,9 mmol) em H2O (30 mL). A mistura reaci- onal foi aquecida a 50°C. Ferro (2,6 g, 46,9 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi aquecida sob refluxo durante 40 min. Após resfri- amento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi filtrada através de Celite®. Os sólidos foram lavados com EtOH. O filtrado foi concentrado parcialmente sob pressão reduzida para remover EtOH. O resíduo foi repartido entre EtOAc e uma solução saturada de NaHCO3 em água. As fases foram separadas. A fase orgânica foi lava- da com H2O e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca so- bre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de sílica usando um gradien- te de EtOAc (0% a 25%) em heptano para originar 2,9 g de 2-iodo-3- metil-5-(trifluorometóxi)anilina 4e como um óleo amarelo. Síntese do intermediário 4f:
[00120] Uma solução de 2-iodo-3-metil-5-(trifluorometóxi)anilina 4e (2,9 g, 9,1 mmol) em trietilamina (23 mL) foi desgaseificada com argô- nio durante 15 min. Adicionou-se diclorobis(trifenilfosfina)paládio(II) (0,327 g, 0,47 mmol), iodeto de cobre(I) (0,164 g, 0,86 mmol) e trime- tilsililacetileno (1,8 mL, 13,1 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 65°C, durante 12 h. Após resfriamento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi diluída com H2O e extraída com EtOAc (3x). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com H2O e solução aquo- sa saturada de cloreto de sódio, secas com Na2SO4, filtradas e con- centradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromato- grafia flash em gel de sílica usando um gradiente de EtOAc (0% a 20%) em heptano para originar 2,6 g de 3-metil-5-(trifluorometóxi)-2-((trime- tilsili)etinil)anilina 4f como um óleo laranja. Síntese do intermediário 4g:
[00121] A uma solução de 3-metil-5-(trifluorometóxi)-2-((trimetilsilil) etinil)anilina 4f (2,7 g, 9,3 mmol) em NMP (27 mL) foi adicionado tBu- OK (3,1 g, 27,8 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 80°C, duran- te 4 h. Após resfriamento até à temperatura ambiente, a mistura reaci- onal foi diluída com H2O e extraída com EtOAc (2x). As fases orgâni- cas foram combinadas, lavadas com H2O e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de sílica usando um gradiente de EtOAc (0% a 20%) em heptano para originar 1,7 g de 4-metil-6-(trifluorometóxi)-1H-indol 4g como um óleo laranja. Síntese do intermediário 4h:
[00122] A 0°C, BH3-Piridina (1,2 mL, 11,6 mmol) foi adicionada gota a gota a uma solução de 4-metil-6-(trifluorometóxi)-1H-indol 4g (0,5 g, 2,32 mmol) em EtOH (3 mL). HCl a 6 N (6 mL) foi lentamente adicio- nado gota a gota mantendo simultaneamente a temperatura da reação abaixo de 10°C. A mistura foi agitada a 0°C por 3 h. Foi adicionada água (12 mL) e a mistura foi basificada até pH 8-9 com uma solução concentrada de NaOH em água (a temperatura da reação foi mantida abaixo de 20°C). A mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgâni- ca foi lavada com água, seca em MgSO4, filtrada e o solvente foi eva- porado sob pressão reduzida. Adicionou-se tolueno e se concentrou a solução sob pressão reduzida para dar 450 mg de 4-metil-6-(trifluo- rometóxi)indolina 4h. Síntese do intermediário 4i:
[00123] N,N-Di-isopropiletilamina (1,58 mL, 9,57 mmol) foi adicio- nado a uma solução de ácido 2-((3-(4-(terc-butóxi)-4-oxobutóxi)-5- metoxifenil)amino)-2-(4-clorofenil)acético 2c (1,44 g, 3,19) e 4-metil-6- (trifluorometóxi)indolina 4h (846 mg, 3,51 mmol) em DMF seco (30 mL). HATU (1,82 g, 4,78 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi agi-
tada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura reacional foi verti- da em água (400 mL) e a suspensão branca foi extraída com EtOAc. A camada aquosa foi saturada pela adição de NaCl e extraída de novo com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, água, secas sobre MgSO4 e evaporadas sob pressão redu- zida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica- gel (100 g) usando um gradiente de EtOAc:EtOH (3:1)/heptano 0/100 até 60/40. As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo (1,47 g) foi purificado via HPLC preparati- va (Fase estacionária: RP XBridge® Prep C18 OBD - 10 µm, 50 x 150 mm, fase móvel: solução de NH4HCO3 a 0,25% em água, CH3CN). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão re- duzida, dando origem a 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(4-metil-6-(trifluorome- tóxi) indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoato de terc- butila 4i (821 mg) como um sólido branco. Síntese do Composto 4 e separação quiral nos Enantiômeros 4A e 4B:
[00124] 4-(3-((1-(4-Clorofenil)-2-(4-metil-6-(trifluorometóxi)indolin-1- il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 4i (821 mg, 1,27 mmol) foi misturado com HCl 4 M em dioxano (9,5 mL) e a mistu- ra foi agitada à temperatura ambiente durante 15 h. Nitrogênio gasoso foi borbulhado na mistura reacional durante 30 min. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, dando origem a ácido 4-(3-((1-(4- clorofenil)-2-(4-metil-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-me- toxifenóxi)butanoico (Composto 4, 750 mg) como um sólido quase branco.
[00125] Os enantiômeros do Composto 4 (750 mg) foram separa- dos através de SFC quiral preparativa (Fase estacionária: Chiralcel® Diacel OD 20 x 250 mm, fase móvel: CO2, EtOH + iPrNH2 a 0,4%). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão re-
duzida, dando origem ao Enantiômero 4A como o primeiro produto elu- ído e Enantiômero 4B como o segundo produto eluído. Ambos os resí- duos foram misturados com EtOAc e água. A mistura foi acidificada para pH 1-2 com HCl 1 N. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída duas vezes com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi seco sob vácuo a 50°C, dando origem ao Enantiômero 4A (213 mg) e Enantiômero 4B (194 mg), respectivamente. Composto 4: 1
[00126] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,87 (quin, J=7,0 Hz, 2 H) 2,20 (s, 3 H) 2,33 (t, J=7,1 Hz, 2 H) 2,98 - 3,16 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,84 (t, J=6,4 Hz, 2 H) 4,04 (td, J=10,4, 7,0 Hz, 1 H) 4,53 (td, J=10,3, 6,4 Hz, 1 H) 5,56 (d, J=9,1 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,91 - 5,98 (m, 2 H) 6,45 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 6,87 (s, 1 H) 7,38 - 7,47 (m, 2 H) 7,50 - 7,61 (m, 2 H) 7,89 (s, 1 H) 12,18 (s l, 1 H)
[00127] LC/MS (método LC-C): Tr 1,14 min, MH+ 593 Enantiômero 4A: 1
[00128] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,87 (quin, J=6,9 Hz, 2 H) 2,20 (s, 3 H) 2,34 (t, J=7,3 Hz, 2 H) 2,98 - 3,16 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,85 (t, J=6,4 Hz, 2 H) 4,05 (td, J=10,4, 7,0 Hz, 1 H) 4,53 (td, J=10,3, 6,4 Hz, 1 H) 5,56 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=1,8 Hz, 1 H) 5,91 - 5,99 (m, 2 H) 6,45 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 6,88 (s, 1 H) 7,38 - 7,49 (m, 2 H) 7,51 - 7,61 (m, 2 H) 7,89 (s, 1 H) 12,17 (s l, 1 H)
[00129] LC/MS (método LC-C): Tr 1,29 min, MH+ 593
[00130] [α]D20: -39,6° (c 0,455, DMF)
[00131] SFC quiral (método SFC-C): Tr 3,34 min, MH+ 593 pureza quiral 100%. Enantiômero 4B: 1
[00132] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,88 (quin, J=6,9 Hz,
2 H) 2,20 (s, 3 H) 2,34 (t, J=7,1 Hz, 2 H) 2,98 - 3,16 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,85 (t, J=6,4 Hz, 2 H) 4,05 (td, J=10,3, 7,1 Hz, 1 H) 4,53 (td, J=10,2, 6,6 Hz, 1 H) 5,56 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=1,8 Hz, 1 H) 5,92 - 5,99 (m, 2 H) 6,46 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 6,88 (s, 1 H) 7,38 - 7,49 (m, 2 H) 7,50 - 7,63 (m, 2 H) 7,89 (s, 1 H) 12,16 (s l, 1 H)
[00133] LC/MS (método LC-C): Tr 1,30 min, MH+ 593
[00134] [α]D20: +43,7° (c 0,38, DMF)
[00135] SFC quiral (método método SFC-C): Tr 3,16 min, MH+ 593 pureza quiral 100%. Exemplo 5: síntese de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-fluoro-6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoico (Composto 5) e separação quiral nos Enantiômeros 5A e 5B.
Síntese do intermediário 5a:
[00136] Uma solução de 4-bromo-2-fluoro-1-(trifluorometóxi) benze- no [CAS 105529-58-6] (98,7 g, 381,1 mmol) em H2SO4 concentrado (98%, 200 mL) foi resfriada até 0°C com um banho de gelo. KNO3 (43,0 g, 425,3 mmol) foi adicionado em porções. Após adição, o banho de gelo foi removido e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura reacional foi vertida em água gelada (2 L) en- quanto se agitava. A mistura foi extraída com CH2Cl2 (3 x 500 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (2x 500 mL), salmoura (500 mL), secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para ori- ginar 1-bromo-5-fluoro-2-nitro-4-(trifluorometóxi)benzeno 5a (117,2 g), que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. Síntese do intermediário 5b:
[00137] A uma suspensão agitada de 1-bromo-5-fluoro-2-nitro-4- (trifluorometóxi)benzeno 5a (70,0 g, 230 mmol) e NH4Cl (123,2 g, 2,30 mol) em iPrOH (1 L) e água (330 mL) foi adicionado ferro em pó redu- tor (64,3 g, 1,15 mol) sob atmosfera de N2. A mistura reacional foi agi- tada a 60°C durante 16 h. A mistura reacional foi diluída com EtOAc (1 L) e filtrada através de Celite®. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dividido entre EtOAc (1 L) e água (800 mL). As camadas foram separadas e a fase orgânica foi lavada com salmoura (1 L), seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por destilação sob pressão reduzida (bomba de óleo, p.e. 60~64°C). 2-Bromo-4-fluoro-5-(trifluorometóxi)anilina 5b (47,3 g) foi obtido como um óleo amarelo. Síntese do intermediário 5c:
[00138] A uma mistura de 2-bromo-4-fluoro-5-(trifluorometóxi)anilina 5b (18,4 g, 67,2 mmol), etinil(trimetil)silano (19,9 g, 202,4 mmol, 28,00 mL) em Et3N (300 mL) foram adicionados CuI (1,28 g, 6,72 mmol) e Pd(PPh3)2Cl2 (2,40 g, 3,42 mmol). A mistura reacional foi aquecida sob atmosfera de N2 a 90°C durante 16 h. Após resfriamento até à tempe- ratura ambiente, a mistura foi diluída com MTBE (300 mL) e filtrada através de Celite®. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (ISCO®, 220 g Coluna Flash de Sílica SepaFlash®, eluente: gradiente de EtO-
Ac de 0 a 5% em éter de petróleo @ 100 mL/min). 4-Fluoro-5-(trifluoro- metóxi)-2-((trimetilsilil)etinil)anilina 5c (16,1 g, pureza de 90%) foi obti- da como um óleo marrom. Síntese do intermediário 5d:
[00139] Uma mistura de 4-fluoro-5-(trifluorometóxi)-2-((trimetilsilil) etinil) anilina 5c (16,1 g, 55,3 mmol) e tBuOK (18,6 g, 165,8 mmol) em NMP (220,00 mL) foi aquecida a 90°C durante 16 h sob atmosfera de N2. Após resfriamento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água gelada (1 L) e extraída com MTBE (3 x 300 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (2 x 200 mL), salmoura (300 mL), secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (ISCO®, Coluna de 120 g SepaFlash® Silica Flash, eluente: gradiente de 0 até 5% de EtOAc em éter de petróleo @ 85 mL/min) para originar produto 5-fluoro-6-(trifluorometóxi)-1H-indol 5d (11 g) como um óleo verde escuro. O resíduo foi combinado com outra fração (quantidade total = 17,2 g) e adicionalmente purificado por destilação sob pressão reduzida (bomba de óleo, p.e. 60~64°C), dando origem a 5-fluoro-6-(trifluorometóxi)-1H-indol 5d (14,7 g, 95% de pureza) como um óleo incolor. Síntese do intermediário 5e:
[00140] A 0°C, BH3-piridina (13,8 mL, 136,9 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de 5-fluoro-6-(trifluorometóxi)-1H-indol 5d (6 g, 27,4 mmol) em EtOH (40 mL). HCl a 6 N (90 mL) foi adicionado gota a gota mantendo simultaneamente a temperatura abaixo de 10°C. A mistura foi agitada a 0°C por 2 h. Foi adicionada água (100 mL) e a mistura foi basificada para pH 8-9 com uma solução concentrada de NaOH em água (a temperatura da reação foi mantida abaixo de 20°C). A mistura foi extraída com CH2Cl2. A camada orgânica foi lavada com água, seca em MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. Adicionou-se tolueno e se concentrou a solução sob pressão reduzida para dar 5,52 g de 5-fluoro-6-(trifluorometóxi)indolina 5e. O composto foi usado na etapa reacional seguinte sem purificação adici- onal. Síntese do intermediário 5f:
[00141] A uma mistura de ácido 2-bromo-2-(4-clorofenil)acético [CAS 3381-73-5] (0,61 g, 2,4 mmol), 5-fluoro-6-(trifluorometóxi) indoli- na 5e (0,55 g, 2,2 mmol) e DMAP (0,027 g, 0,22 mmol) em CH2Cl2 (14 mL) foi adicionado EDCI (0,51 g, 2,7 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura foi diluída com uma so- lução de K2CO3 a 10% em água. As camadas foram decantadas. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar 2-bromo-2-(4- clorofenil)-1-(5-fluoro-6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 5f (1,1 g, óleo roxo). O composto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. Síntese do intermediário 5g:
[00142] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(5-fluoro-6-(tri- fluorometóxi)indolin-1-il)etanona 5f (1,1 g, 2,2 mmol), 4-(3-amino-5- metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 1a (1,0 g, 3,3 mmol) e di- isopropiletilamina (1,5 mL, 8,7 mmol) em CH3CN (29 mL) foi agitada a 80°C durante 18 h. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 40 g, heptano/EtOAc gradiente 85/15 até 75/25). As frações contendo o composto esperado foram combinadas e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida, dando origem a 4-(3-((1-(4- clorofenil)-2-(5-fluoro-6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5- metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 5g (480 mg, 57% de pureza por LC/MS). Síntese do Composto 5 e separação quiral nos Enantiômeros 5A e
5B:
[00143] Uma mistura de 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-fluoro-6-(trifluo- rometóxi)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 5g (0,48 g, 0,42 mmol, 57% de pureza) em HCl (4 M em dioxano) (4,6 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, recolhida em Et3N (5 mL) e concentrada novamente in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 24 g, CH2Cl2/ MeOH gradien- te 99/1 até 96/4). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura. O resíduo (150 mg) foi adicionalmente purificado via HPLC de Fase Reversa (Fase estacionária: YMC-actus Triart-C18 10 µm 30 x 150 mm, fase móvel: gradiente desde 65% de NH4HCO3 a 0,2%, 35% de CH3CN até 25% de NH4HCO3 a 0,2%, 75% de CH3CN), dando origem a ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-fluoro-6-(trifluorome- tóxi) indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoico (Composto 5, 71 mg). Os enantiômeros (55 mg) foram separados via SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 20 mm, fase móvel: 55% de CO2, 45% de MeOH), dando origem, após criodessecação a partir de uma mistura de solventes de CH3CN/água, ao primeiro Enan- tiômero eluído 5A (25 mg, sólido branco) e ao segundo Enantiômero eluído 5B (25 mg, sólido branco). Composto 5: 1
[00144] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,86 (quin, J=6,70 Hz, 2 H) 2,24 - 2,43 (m, 2 H) 3,06 - 3,25 (m, 2 H) 3,61 (s, 3H) 3,84 (t l, J=6,31 Hz, 2 H) 3,94 - 4,13 (m, 1 H) 4,46 - 4,57 (m, 1 H) 5,56 (d l, J=8,83 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,93 (s, 1 H) 5,95 (s, 1 H) 6,45 (d l, J=8,83 Hz, 1 H) 7,44 (d l, J=8,20 Hz, 3 H) 7,54 (d l, J=8,20 Hz, 2 H) 8,16 (d l, J=6,62 Hz, 1 H) 12,12 (s l, 1H)
[00145] LC/MS (método LC-A): Tr 3,00 min, MH+ 597 Enantiômero 5A:
[00146] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,86 (quin, J=6,94 Hz, 2 H) 2,25 - 2,44 (m, 2 H) 3,06 - 3,26 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,84 (t, J=6,46 Hz, 2 H) 4,05 (td, J=10,32, 7,09 Hz, 1 H) 4,48 - 4,55 (m, 1 H) 5,56 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=1,89 Hz, 1 H) 5,94 (d l, J=11,98 Hz, 2 H) 6,45 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 7,42 - 7,46 (m, 3 H) 7,54 (d, J=8,20 Hz, 2 H) 8,16 (d l, J=6,94 Hz, 1 H) 12,01 (s l, 1H)
[00147] LC/MS (método LC-A): Tr 3,00 min, MH+ 597
[00148] [α]D20: -35,8° (c 0,257, DMF)
[00149] SFC quiral (método SFC-H): Tr 1,34 min, MH+ 597 pureza quiral 100%. Enantiômero 5B: 1
[00150] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,85 (quin, J=6,86 Hz, 2 H) 2,27 (t, J=7,25 Hz, 2 H) 3,10 - 3,31 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,78 - 3,90 (m, 2 H) 4,05 (td, J=10,40, 7,25 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,32, 6,46 Hz, 1 H) 5,57 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 5,75 (t, J=1,89 Hz, 1 H) 5,94 (d l, J=16,39 Hz, 2 H) 6,45 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 7,41 - 7,46 (m, 3 H) 7,55 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 8,16 (d l, J=6,94 Hz, 1 H)
[00151] LC/MS (método LC-A): Tr 3,00 min, MH+ 597
[00152] [α]D20: +52,8° (c 0,231, DMF)
[00153] SFC quiral (método SFC-H): Tr 3,14 min, MH+ 597 pureza quiral 100%. Exemplo 6: síntese de ácido 4-(3-((1-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-oxo-2- (6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoico (Composto 6) e separação quiral nos Enantiômeros 6A e 6B.
Síntese do intermediário 6a:
[00154] Uma mistura de 6-(trifluorometóxi)indolina [CAS 959235-95- 1] (2 g, 9,84 mmol), ácido 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acético [CAS 886498-61-9] (2,17 g, 10,8 mmol), HATU (5,62 g, 14,8 mmol) e di- isopropiletilamina (4,9 mL, 29,5 mmol) em DMF (20 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Água e gelo foram adicionados e o precipitado foi removido por filtração e seco, dando origem a 2-(4- fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 6a (3,44 g). Síntese do intermediário 6b:
[00155] A -78°C sob um fluxo de N2, LiHMDS (18,7 mL, 18,7 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)- 1-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 6a (3,44 g, 9,32 mmol) em THF (45 mL). TMSCl (1,42 mL, 11,2 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura foi agitada durante 15 min a -78°C e N-bromossuccinimida (1,83 g, 10,2 mmol) em THF (35 mL) foi adicionado gota a gota. Após agitação durante 2 h a -78°C, a reação foi extinta com uma solução saturada de NH4Cl. A mistura foi extraída com EtOAc, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida, dando origem a 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-(trifluorometóxi) indolin-1-il)etanona 6b (4,48 g). O composto bruto foi usado sem puri- ficação adicional na etapa seguinte. Síntese do intermediário 6c:
[00156] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 6b (2,0 g, 4,46 mmol), 4-(3-amino- 5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 1a (1,26 g, 4,46 mmol) e di- isopropiletilamina (1,15 mL, 6,69 mmol) em CH3CN (45 mL) foi agitada a 80°C durante 5 h. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de sílica (15-40 µm, 40 g, heptano/EtOAc 85/15). As frações contendo composto esperado foram combinadas e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida, dando origem a 4-(3-((1-(4-fluoro-2-metoxifenil)- 2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 6c (1,6 g, 67% de pureza por LC/MS). Síntese do Composto 6 e separação quiral nos Enantiômeros 6A e 6B:
[00157] Uma solução de 4-(3-((1-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 6c (1,5 g, 2,31 mmol) em HCl (4 M em dioxano) (15 mL) foi agitada a 5°C durante 2 h e à temperatura ambiente durante 3 h. O solvente foi concentrado sob pressão reduzida e NaOH 3 N foi adicio- nado até ser obtido pH neutro. A solução foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de sílica (20-45 µm, 40 g, gradiente de CH2Cl2/MeOH de 99,5/0,5 a 95/5). As frações puras foram combinadas e o solvente foi concentra- do sob pressão reduzida, dando origem ao Composto 6 (646 mg). Uma pequena fração foi cristalizada a partir de CH3CN/éter de di- isopropila, dando origem a ácido 4-(3-((1-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2- oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)butanoico (Composto 6, 35 mg). A quantidade restante (600 mg) foi usada para separação quiral dos enantiômeros via SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 20 mm, fase móvel: 60% de CO2, 40% de MeOH). Para proporcionar o Enantiômero 6A como o primeiro produto eluído e Enantiômero 6B como o segundo produto eluído. Ambos os enantiômeros foram adicionalmente purifi- cados por cromatografia flash em sílica-gel (20-45 µm, 12 g, CH2Cl2/MeOH gradiente 100/0 até 95/5). As frações puras foram com- binadas e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida, dando ori- gem, após solidificação em éter de di-isopropila/pentano (+ algumas gotas de CH3CN), ao Enantiômero 6A (108 mg) e Enantiômero 6B (108 mg), respectivamente. Composto 6: 1
[00158] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,87 (quin, J=6,82 Hz, 2 H) 2,33 (t, J=7,33 Hz, 2 H) 3,08 - 3,27 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,78 - 3,91 (m, 5 H) 3,92 - 4,02 (m, 1 H) 4,33 - 4,42 (m, 1 H) 5,59 (d, J=8,59 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,87 (d l, J=7,07 Hz, 2 H) 6,39 (d l, J=8,59 Hz, 1 H) 6,78 (td, J=8,46, 2,27 Hz, 1 H) 6,94 - 7,02 (m, 2 H) 7,29 - 7,35 (m, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,14 (s l, 1 H)
[00159] LC/MS (método LC-B): Tr 2,76 min, MH+ 593
[00160] Ponto de fusão: 164°C Enantiômero 6A: 1
[00161] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,87 (quin, J=6,78 Hz, 2 H) 2,31 - 2,47 (m, 2 H) 3,10 - 3,28 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,80 - 3,93 (m, 5 H) 3,93 - 4,06 (m, 1 H) 4,33 - 4,44 (m, 1 H) 5,59 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 5,76 (s, 1 H) 5,88 (d l, J=8,83 Hz, 2 H) 6,39 (d l, J=8,83 Hz, 1 H) 6,79 (td, J=8,43, 2,05 Hz, 1 H) 6,95 - 7,04 (m, 2 H) 7,30 - 7,37 (m, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,16 (s l, 1 H)
[00162] LC/MS (método LC-A): Tr 2,86 min, MH+ 593
[00163] [α]D20: -37,3° (c 0,255, DMF)
[00164] SFC quiral (método SFC-I): Tr 1,03 min, MH+ 593 pureza quiral 100%.
Enantiômero 6B: 1
[00165] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,87 (quin, J=6,86 Hz, 2 H) 2,30 - 2,45 (m, 2 H) 3,09 - 3,26 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,80 - 3,93 (m, 5 H) 3,93 - 4,06 (m, 1 H) 4,33 - 4,44 (m, 1 H) 5,59 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 5,76 (s, 1 H) 5,88 (d l, J=8,83 Hz, 2 H) 6,39 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 6,79 (td, J=8,43, 2,05 Hz, 1 H) 6,95 - 7,04 (m, 2 H) 7,30 - 7,37 (m, 2 H) 8,03 (s l, 1 H), 12,18 (s l, 1H)
[00166] LC/MS (método LC-A): Tr 2,88 min, MH+ 593
[00167] [α]D20: +32,7° (c 0,294, DMF)
[00168] SFC quiral (método SFC-I): Tr 1,82 min, MH+ 593 pureza quiral 99,56%. Exemplo 7: síntese de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-1-deuterio-2-oxo-2- (6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoico (Composto 7-D) e separação quiral nos Enantiômeros 7A-D e 7B-D Síntese do intermediário 7a:
[00169] Uma mistura de 6-(trifluorometóxi)indolina [CAS 959235-95- 1] (2 g, 9,84 mmol), ácido 2-(4-clorofenil)acético [CAS 1878-66-6] (1,85 g, 10,8 mmol), HATU (5,6 g, 14,8 mmol) e di-isopropiletilamina (4,9 mL, 29,5 mmol) em DMF (40 mL) foi agitada à temperatura ambiente du- rante 12 h. Adicionou-se água e o precipitado foi separado por filtração. O resíduo foi recolhido com EtOAc. A solução orgânica foi lavada com uma solução aquosa 10% de K2CO3, salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica-gel (15-40 µm, 80 g, gradiente de heptano/EtOAc de 90/10 a 60/40). As frações puras foram combi- nadas e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar a 2- (4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 7a (3 g). Síntese do intermediário 7b:
[00170] A -78°C, sob fluxo de N2, foi adicionada gota-a-gota LiH- MDS 1,5 M em THF (11,2 mL, 16,9 mmol) a uma mistura de 2-(4- clorofenil)-1-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 7a (3 g, 8,43 mmol) em THF (50 mL). A mistura foi agitada durante 15 min a -78°C e uma solução de N-bromossuccinimida (1,65 g, 9,3 mmol) em THF (30 mL) foi adicionada gota a gota. Após agitação durante 2 h a -78°C, a rea- ção foi extinta com uma solução saturada de NH4Cl. A mistura foi ex- traída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, seca com MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para dar a 2- bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 7b (3,6 g). O composto foi usado como tal na etapa seguinte. Síntese do intermediário 7c:
[00171] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-(trifluorome- tóxi) indolin-1-il)etanona 7b (3,6 g, 8,3 mmol), 4-(3-amino-5-meto- xifenóxi)-butanoato de terc-butila 1a (2,3 g, 8,3 mmol) e di-isopro- piletilamina (1,7 mL, 9,94 mmol) em CH3CN (80 mL) foi agitada a 70°C durante 4 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, diluída com EtOAc e lavada com HCl 1 N e água. A fase orgânica foi separa- da, seca com MgSO4, filtrada, e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O composto foi purificado por cromatografia flash em sílica- gel (15-40 µm, 120 g, heptano/EtOAc 80/20). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura, dando origem, após cristaliza- ção a partir de éter de di-isopropila, a 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoato de terc- butila 7c (2,6 g). Síntese do Composto 7 e separação quiral nos Enantiômeros 7A e 7B:
[00172] Uma solução de 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluoro- metóxi)-indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 7c (2,4 g, 3,8 mmol) em HCl (4 M em dioxano) (24 mL) foi agitada a 5°C durante 3 h e à temperatura ambiente durante 3 h. O precipitado foi separado por filtração e seco para dar origem ao ácido 4-(3-((1-(4- clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)butanoico como sal de HCl (Composto 7, 2 g, 0,8 equiv. de HCl, 0,07 equiv. de H2O). O Composto 7 (2 g, sal de HCl) foi neu- tralizado antes da separação quiral por tratamento de uma solução de Composto 7 (sal de HCl) com NaOH 1 N e evaporação da camada or- gânica sob pressão reduzida. Os enantiômeros foram separados via SFC Preparativa Quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: 50% de CO2, 50% de iPrOH (+ iPrNH2 0,3%)) e ainda purificados por meio de SFC Preparativa aquiral (fase estacioná- ria: Cyano® 6 µm 150 x 21,2 mm, fase móvel: 80% de CO2, 20% de MeOH (+ iPrNH2 0,3%)). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. Os dois enantiômeros foram reco- lhidos com EtOAc e lavados com HCl 1 N. As camadas orgânicas fo- ram separadas, secas com MgSO4, filtradas e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O primeiro enantiômero eluído foi solidificado a partir de éter/éter di-isopropílico para dar o Enantiômero 7A (616 mg). O segundo enantiômero eluído foi solidificado a partir de éter/éter di- isopropílico para dar o Enantiômero 7B (715 mg). Composto 7: 1
[00173] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,87 (quin, J=6,9 Hz, 2 H) 2,34 (t, J=7,3 Hz, 2 H) 3,07 - 3,28 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,85 (t, J=6,5 Hz, 2 H) 4,04 (td, J=10,5, 7,1 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,3, 6,5 Hz, 1 H) 5,57 (s, 1 H) 5,76 (t, J=2,2 Hz, 1 H) 5,90 - 6,00 (m, 2 H) 7,01 (dd, J=8,2, 1,6 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,41 - 7,48 (m, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H)
[00174] LC/MS (método LC-B): Tr 2,70 min, MH+ 579
[00175] Ponto de fusão: 150°C Enantiômero 7A: 1
[00176] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,87 (quin, J=6,7 Hz, 2 H) 2,34 (t l, J=7,3 Hz, 2 H) 3,08 - 3,27 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,85 (t l, J=6,3 Hz, 2 H) 3,99 - 4,11 (m, 1 H) 4,47 - 4,57 (m, 1 H) 5,57 (s l, 1 H) 5,76 (s, 1 H) 5,95 (d l, J=10,1 Hz, 2 H) 6,45 (s l, 1 H) 7,01 (d l, J=7,6 Hz, 1 H) 7,34 (d l, J=7,9 Hz, 1 H) 7,44 (d l, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d l, J=8,2 Hz, 2 H) 8,04 (s l, 1 H) 12,12 (s l, 1 H)
[00177] LC/MS (método LC-A): Tr 2,95 min, MH+ 579
[00178] [α]D20: -48,5° (c 0,27, DMF)
[00179] SFC quiral (método SFC-D): Tr 1,13 min, MH+ 579, pureza quiral 100%. Enantiômero 7B: 1
[00180] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,87 (t l, J=6,8 Hz, 2 H) 2,34 (t l, J=7,3 Hz, 2 H) 3,09 - 3,27 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,85 (t l, J=6,1 Hz, 2 H) 3,99 - 4,10 (m, 1 H) 4,46 - 4,59 (m, 1 H) 5,57 (s, 1 H) 5,76 (s l, 1 H) 5,95 (d l, J=10,1 Hz, 2 H) 6,45 (s l, 1 H) 7,01 (d l, J=7,9 Hz, 1 H) 7,34 (d l, J=7,9 Hz, 1 H) 7,44 (d l, J=8,2 Hz, 2 H) 7,55 (d l, J=8,2 Hz, 2 H) 8,04 (s l, 1 H) 12,12 (s l, 1 H)
[00181] LC/MS (método LC-A): Tr 2,94 min, MH+ 579
[00182] [α]D20: +42,9° (c 0,28, DMF)
[00183] SFC quiral (método SFC-D): Tr 2,13 min, MH+ 579, pureza quiral 100%. Síntese do Composto 7-D deuterado e separação quiral nos Enan- tiômeros 7A-D e 7B-D:
[00184] Acetato de cobre(II) (241 mg, 1,33 mmol) foi adicionado em uma porção a uma solução de Enantiômero 7A (384 mg, 0,663 mmol) em CH3CN (15 mL) à temperatura ambiente. A mistura reacional foi aquecida em um tubo selado sob irradiação com micro-ondas a 130°C durante 2 h. A mistura reacional foi evaporada até à secura sob pres- são reduzida e o resíduo foi recolhido com CH2Cl2 e água. As cama- das foram separadas. A camada aquosa foi extraída de novo com CH2Cl2. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com sal- moura e água, secas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas sob pres- são reduzida. O resíduo, contendo intermediário 7d impuro, foi dissol- vido em MeOH (20 mL). Cianoborodeutereto de sódio (349 mg, 5,31 mmol) e duas gotas de acético ácido foram adicionados e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 55 h. Mais cia- noborodeutereto de sódio (48 mg, 0,663 mmol) e algumas gotas de acético ácido foram adicionados e a mistura reacional foi agitada du- rante 7 h à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado sob pres- são reduzida. O resíduo foi misturado com água e Et2O. O sistema bi- fásico foi acidificado para pH 1-2 pela adição de HCl 1 N. As camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída novamente com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4 e o sol- vente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi seco sob vá- cuo a 50°C, dando origem a ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-1-deuterio-2- oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi) buta- noico racêmico (Composto 7-D, 242 mg) como um sólido branco.
[00185] Os enantiômeros do Composto 7-D (242 mg) foram sepa- rados via SFC preparativa (Fase estacionária: Kromasil (R,R) Whelk- O1 10/100, fase móvel: CO2, EtOH + iPrNH2 a 0,4%). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida para proporcionar o Enantiômero 7A-D como o produto eluído em primeiro lugar e o Enantiômero 7B-D como o produto eluído em segundo lugar. Ambos os enantiômeros foram misturados com em Et2O e água. A mistura foi acidificada para pH 1-2 com HCl 1 N. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída duas vezes com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre MgSO4, filtradas, evaporadas sob pressão reduzida e secas sob vácuo a 50°C, dando origem ao Enantiômero 7A-D (85 mg, 92% deuterado de acordo com 1H RMH) e Enantiômero 7B-D (77 mg, 92% deuterado de acordo com 1H RMH) como sólidos quase brancos. Enantiômero 7A-D: 1
[00186] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,87 (quin, J=7,0 Hz, 2 H) 2,34 (t, J=7,1 Hz, 2 H) 3,07 - 3,25 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,84 (t, J=6,4 Hz, 2 H) 4,05 (td, J=10,3, 7,1 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,3, 6,4 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,92 - 5,98 (m, 2 H) 6,45 (s, 1 H) 7,01 (dd, J=8,1, 1,5 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,39 - 7,49 (m, 2 H) 7,51 - 7,60 (m, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,17 (s l, 1 H)
[00187] LC/MS (método LC-C): Tr 1,13 min, MH+ 580
[00188] [α]D20: +54,2° (c 0,41, DMF)
[00189] SFC quiral (método SFC-E): Tr 5,51 min, MH+ 580, pureza quiral 100%. Enantiômero 7B-D: 1
[00190] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,87 (quin, J=6,9 Hz, 2 H) 2,34 (t, J=7,3 Hz, 2 H) 3,07 - 3,25 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,84 (t, J=6,6 Hz, 2 H) 4,05 (td, J=10,4, 7,3 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,3, 6,4 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,92 - 5,98 (m, 2 H) 6,45 (s, 1 H) 7,01 (dd,
J=8,1, 1,5 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,40 - 7,49 (m, 2 H) 7,51 - 7,62 (m, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,16 (s l, 1 H)
[00191] LC/MS (método LC-C): Tr 1,10 min, MH+ 580
[00192] [α]D20: -50,1° (c 0,459, DMF)
[00193] SFC quiral (método SFC-E): Tr 6,10 min, MH+ 580, pureza quiral 100%. Exemplo 8: síntese de ácido 4-(3-((1-(4-cloro-2-(2-hidroxietóxi)fenil)-2- oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi) butanoico (Composto 8).
Síntese do intermediário 8a:
[00194] A uma mistura de 2-(4-cloro-2-hidroxifenil)acetato de etila [CAS 1261826-30-5] (5,2 g, 24,2 mmol) e carbonato de césio (15,8 g, 48,5 mmol) em DMF (90 mL) a 10 ºC foi adicionado (2-bromo-
etóxi)(terc-butil)dimetilsilano [CAS 86864-60-0] (6,26 mL, 29,1 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Água foi adicionada e a mistura foi extraída com EtOAc. A fase orgâni- ca foi seca com MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de sílica (15-40 µm, 80 g, heptano/EtOAc 80/20). As frações puras foram combinadas e o solvente foi removido sob pressão reduzida, dando origem a 2-(2- (2-((terc-butil-dimetilsilil)óxi)etóxi)-4-clorofenil)acetato de etila 8a (7,8 g). Síntese do intermediário 8b:
[00195] A uma solução esfriada (-70°C) de bis(trimetilsilil)amida de lítio 1 M em THF (41,8 mL, 41,8 mmol) foi adicionada uma solução de 2-(2-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi)-etóxi)-4-clorofenil)acetato de etila 8a (7,8 g, 20,9 mmol) em THF (45 mL). Após agitação durante 1 h a - 70°C, adicionou-se clorotrimetilsilano (4,24 mL, 33,5 mmol). A mistura reacional foi agitada a -70°C durante 15 min. N-Bromossuccinimida (4,46 g, 25,1 mmol) em THF (45 mL) foi adicionada e a agitação foi continuada a -55°C durante 2 h. A mistura reacional foi vertida em H2O e extraída duas vezes com EtOAc. As camadas orgânicas foram com- binadas, secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida, dando origem a 2-bromo-2-(2-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi)- etóxi)-4-clorofenil)acetato de etila 8b (10,1 g), que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. Síntese do intermediário 8c:
[00196] Uma mistura de 2-bromo-2-(2-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi) etóxi)-4-clorofenil)acetato de etila 8b (2,0 g, 4,429 mmol), 4-(3-amino- 5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 1a (1,62 g, 5,76 mmol) e di- isopropiletilamina (1,53 mL, 8,86 mmol) em CH3CN (40 mL) foi agitada a 50°C durante 12 h. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de sílica (15-40 µm, 80 g, gradiente de heptano/EtOAc 85/15 até 60/40). As frações puras foram combinadas e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida, dando origem a 4-(3-((1-(2-(2-((terc-butildimetilsilil)- óxi)etóxi)-4-clorofenil)-2-etóxi-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)- butanoato de terc-butila 8c (1,1 g). Síntese do intermediário 8d:
[00197] Hidróxido de lítio mono-hidratado (142 mg, 3,37 mmol) em água (7,5 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução de 4-(3-((1-(2- (2-terc-butildimetilsilil)óxi)-etóxi)-4-clorofenil)-2-etóxi-2-oxoetil)amino)- 5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 8c (1,1 g, 1,69 mmol) em THF/CH3OH (1/1) (15 mL) a 10°C. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h, diluída com água e esfriada para 0°C. A solução foi lentamente acidificada para pH 6-7 com HCl 0,5 N e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida, dando origem a ácido 2-((3-(4- (terc-butóxi)-4-oxobutóxi)-5-metoxifenil)amino)-2-(2-(2-((terc- butildimetilsilil)óxi)etóxi)-4-clorofenil)acético 8d (675 mg). O composto foi usado sem purificação adicional na etapa seguinte. Síntese do intermediário 8e:
[00198] A uma solução de ácido 2-((3-(4-(terc-butóxi)-4-oxobutóxi)- 5-metoxifenil)amino)-2-(2-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi)etóxi)-4- clorofenil)acético 8d (675 mg, 1,08 mmol) em DMF (6 mL) foram adici- onados HATU (617 mg, 1,62 mmol), di-isopropiletilamina (536 µL, 3,24 mmol) e 6-(trifluorometóxi)indolina [CAS 959235-95-1] (220 mg, 1,08 mmol). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 7 dias. A mistura reacional foi diluída com água. O precipitado foi re- movido por filtração, lavado com água e recolhido com EtOAc. A ca- mada orgânica foi lavada com uma solução 10% de K2CO3 e água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida, dando origem a 4-(3-((1-(2-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi)etóxi)-
4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-meto- xifenóxi)butanoato de terc-butila 8e (385 mg). O composto foi usado sem purificação adicional na etapa seguinte reacional. Síntese do intermediário 8f:
[00199] Sob fluxo de N2 a 5°C, HCl (4 M em dioxano) (1,19 mL, 4,76 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de 4-(3-((1-(2-(2- ((terc-butildimetilsilil)óxi)-etóxi)-4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi) indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 8e (385 mg, 0,476 mmol) em MeOH (5 mL). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura foi esfriada para 0°C, basificada com uma solução aquosa 10% de K2CO3 e extraída com EtOAc. A fase or- gânica foi separada, seca com MgSO4, filtrada, e o solvente foi con- centrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromato- grafia flash em sílica-gel (15-40 µm, 24 g, CH2Cl2/MeOH 99/1). As fra- ções puras foram combinadas e o solvente foi removido sob pressão reduzida, dando origem a 4-(3-((1-(4-cloro-2-(2-hidroxietóxi)fenil)-2- oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi) buta- noato de metila 8f (99 mg). Síntese do Composto 8:
[00200] Hidróxido de lítio mono-hidratado (32 mg, 0,76 mmol) em água (2,5 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução de 4-(3-((1-(4- cloro-2-(2-hidroxietóxi)fenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1- il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoato de metila 8f (99 mg, 0,152 mmol) em THF (2,5 mL) a 10°C. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em gel de sílica (20-45 µm, 12 g, gradiente de CH2Cl2/MeOH de 99/1 a 90/10). As frações contendo composto esperado foram combinadas e o solvente foi removido sob pressão reduzida. Uma segunda purificação foi realizada via HPLC de Fase reversa (Fase estacionária: YMC-actus Triart-C18 10 µm 30 x
150 mm, fase móvel: gradiente desde 65% de NH4HCO3 a 0,2%, 35% de CH3CN até 25% de NH4HCO3 a 0,2%, 75% de CH3CN), dando ori- gem, após criodessecação a partir de uma mistura de água/CH3CN (8/2), a ácido 4-(3-((1-(4-cloro-2-(2-hidroxietóxi)fenil)-2-oxo-2-(6-(trifluo- rometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoico (Composto 8, 16 mg). Composto 8: 1
[00201] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,86 (quin, J=6,86 Hz, 2 H) 2,28 - 2,47 (m, 2 H) 3,10 - 3,27 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,68 - 3,88 (m, 4 H) 4,06 - 4,23 (m, 3 H) 4,39 (td, J=10,09, 6,62 Hz, 1 H) 5,70 - 5,76 (m, 2 H) 5,91 (d l, J=9,14 Hz, 2 H) 6,44 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 6,99 - 7,03 (m, 2 H) 7,12 (d, J=1,89 Hz, 1 H) 7,34 (d, J=8,20 Hz, 2 H) 8,02 (s, 1 H)
[00202] LC/MS (método LC-B): Tr 2,65 min, MH+ 639 Exemplo 9: síntese de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-metóxi-6- (trifluorometil)-2,3-di-hidro-1H-pirrolo[3,2-b]piridin-1-il)-2-oxoetil)amino)- 5-metoxifenóxi)butanoico (Composto 9).
Síntese do intermediário 9a:
[00203] Uma suspensão de 2-cloro-6-metil-3-(trifluorometil)piridina [CAS 1099597-74-6] (4,8 g, 24,6 mmol em metóxido de sódio (25% em MeOH)) (24 mL, 105 mmol) foi agitada à temperatura ambiente duran- te 60 h. A mistura foi vertida em água gelada e extraída duas vezes com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida, dando origem a 2-metóxi-6-metil-3-(trifluorometil)piridina 9a (4,69 g). O produto foi usado como tal na etapa seguinte. Síntese do intermediário 9b:
[00204] HNO3 (2,32 mL, 49,1 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução esfriada (0°C) de 2-metóxi-6-metil-3-(trifluorometil)piridina 9a (4,69 g, 24,5 mmol) em H2SO4 (63,3 mL, 1,128 mol). A mistura rea- cional foi agitada a 50°C durante 60 h. A mistura reacional foi vertida cuidadosamente em água gelada e a mistura foi agitada a 0°C durante 30 min. O sólido foi removido por filtração e lavado com água, dando origem a 2-metóxi-6-metil-5-nitro-3-(trifluorometil)piridina 9b (4,38 g) como um sólido branco. Síntese do intermediário 9c:
[00205] 2-metóxi-6-metil-5-nitro-3-(trifluorometil)piridina 9b (4,38 g, 18,5 mmol) foi dissolvido em DMF seco (84 mL) sob atmosfera de N2. DMF-DMA (12,2 mL, 91,5 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi aquecida a 120°C durante 4 h. Após esfriamento para a temperatu- ra ambiente, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida e o resí- duo sólido foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (120 g) usando um gradiente de éter de petróleo/EtOAc desde 100/0 até 60/40). As frações puras foram combinadas e o solvente foi remo- vido sob pressão reduzida, dando origem a (E)-2-(6-metóxi-3-nitro-5- (trifluorometil)piridin-2-il)-N,N-dimetiletenamina 9c (4,5 g) como um só- lido vermelho. Síntese do intermediário 9d:
[00206] (E)-2-(6-metóxi-3-nitro-5-(trifluorometil)piridin-2-il)-N,N-di- metiletenamina 9c (4,5 g, 15,5 mmol) foi dissolvido em tolueno (87 mL) sob atmosfera de N2. Sílica gel (4,64 g), ferro em pó (8,63 g, 154,5 mmol) e ácido acético (35,4 mL) foram adicionados e a mistura reacio- nal foi agitada a 90°C durante 2 h. A mistura reacional foi filtrada em Celite® e o sólido foi enxaguado várias vezes com EtOAc. Os filtrados combinados foram evaporados e o resíduo foi purificado por cromato- grafia em coluna em sílica-gel (éter de petróleo/EtOAc gradiente 100/0 até 65/35), dando origem a 5-metóxi-6-(trifluorometil)-1H-pirrolo[3,2-b] piridina 9d (3,1 g) como um sólido amarelo. Síntese do intermediário 9e:
[00207] 5-Metóxi-6-(trifluorometil)-1H-pirrolo[3,2-b]piridina 9d (2,04 g, 9,44 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 seco (90 mL) sob atmosfera de N2. DMAP (123 mg, 1,01 mmol) e Boc2O (2,49 g, 11,4 mmol) foram adicionados. A mistura reacional foi agitada durante 30 min à tempera-
tura ambiente, concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purifi- cado por cromatografia em coluna flash em sílica-gel (éter de petró- leo/EtOAc gradiente 100/0 até 96/4), dando origem a 5-metóxi-6- (trifluorometil)-1H-pirrolo[3,2-b]piridino-1-carboxilato de terc-butila 9e (2,95 g) como um sólido branco. Síntese do intermediário 9f:
[00208] 5-Metóxi-6-(trifluorometil)-1H-pirrolo[3,2-b]piridino-1-carbo- xilato de terc-butila 9e (1,45 g, 4,59 mmol) foi dissolvido em EtOH (30 mL) e a reação foi purgada com nitrogênio. Pd/C (10%) (976 mg, 0,917 mmol) foi adicionado à mistura reacional, foi hidrogenada durante a noite a 50°C. A mistura reacional foi esfriada para a temperatura ambi- ente e filtrada em Celite®. O bolo de filtração foi lavado com EtOH e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (éter de petróleo/EtOAc gradiente 100/0 até 95/5), dando origem a 5-metóxi-6-(trifluorometil)-2,3-di-hidro- 1H-pirrolo[3,2-b]piridino-1-carboxilato de terc-butila 9f (1,2 g) como um sólido branco. Síntese do intermediário 9g:
[00209] Uma solução de 5-metóxi-6-(trifluorometil)-2,3-di-hidro-1H- pirrolo[3,2-b]piridino-1-carboxilato de terc-butila 9f (1,2 g, 3,77 mmol) em TFA/CH2Cl2 (1/1) (19 mL) foi agitada à temperatura ambiente du- rante 1 h. A mistura reacional foi diluída com CH2Cl2 (60 mL), lavada com uma solução aquosa saturada de Na2CO3 (60 mL) e salmoura (60 mL). A camada orgânica foi seca com Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash em sílica-gel (40 g, éter de petróleo/EtOAc gradiente 80/20 até 40/60), dando origem a 5-metóxi-6-(trifluorometil)-2,3-di- hidro-1H-pirrolo[3,2-b]piridina 9g (745 mg) como um sólido amarelo. Síntese do intermediário 9h:
[00210] 5-Metóxi-6-(trifluorometil)-2,3-di-hidro-1H-pirrolo[3,2-b]piridi-
na 9g (350 mg, 1,60 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 seco (6,5 mL) sob atmosfera de N2. DMAP (28 mg, 0,229 mmol) e ácido 2-bromo-2-(4- clorofenil)acético [CAS 3381-73-5] (460 mg, 1,84 mmol) foram adicio- nados. EDCI (383 mg, 1,998 mmol) foi adicionado e a mistura reacio- nal foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura reacional foi diluída com CH2Cl2, esfriada para 0°C e uma solução aquosa satu- rada de K2CO3 foi adicionada. As camadas foram separadas e a ca- mada orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4 e concen- trada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash em sílica-gel (40 g, éter de petróleo/EtOAc gradiente 100/0 até 60/40). Uma segunda purificação foi realizada em sílica-gel (40 g, tolueno/Et2O gradiente 100/0 até 90/10). Uma terceira purifica- ção foi realizada (12 g, tolueno/Et2O gradiente 98/2 até 97/3). As fra- ções puras foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida, dando origem a 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(5-metóxi-6-(trifluorometil)- 2,3-di-hidro-1H-pirrolo[3,2-b]piridin-1-il)etanona 9h (407 mg) como uma espuma verde pálido. Síntese do intermediário 9i:
[00211] 2-Bromo-2-(4-clorofenil)-1-(5-metóxi-6-(trifluorometil)-2,3-di- hidro-1H-pirrolo[3,2-b]piridin-1-il)etanona 9h (400 mg, 0,89 mmol) e 4- (3-amino-5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 1a (300 mg, 1,07 mmol) foram dissolvidos em CH3CN seco (40 mL) sob atmosfera de N2. Di-isopropiletilamina (232 µL, 1,33 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi aquecida para 70°C durante 36 h. A mistura reacional foi diluída com 20 mL de EtOAc e lavada com HCl 1 M e salmoura. A ca- mada orgânica foi seca com Na2SO4, filtrada e concentrada sob pres- são reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash em sílica-gel (40 g, tolueno/EtOAc gradiente 100/0 até 94/6). Uma segunda purificação foi realizada por cromatografia em coluna em sílica-gel (2x12 g, éter de petróleo/acetona gradiente 100/0 até
95/5). As frações puras foram combinadas e concentradas sob pres- são reduzida, dando origem a 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-metóxi-6- (trifluorometil)-2,3-di-hidro-1H-pirrolo[3,2-b]piridin-1-il)-2-oxoetil)amino)- 5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 9i (341 mg) como espuma branca. Síntese do Composto 9:
[00212] 4-(3-((1-(4-Clorofenil)-2-(5-metóxi-6-(trifluorometil)-2,3-di- hidro-1H-pirrolo[3,2-b]piridin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi) bu- tanoato de terc-butila 9i (341 mg, 0,525 mmol) foi dissolvido sob at- mosfera de N2 em HCl (4 M em dioxano) (6,62 mL). A reação foi agita- da à temperatura ambiente durante 3 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash em sílica-gel (40 g, tolueno/EtOAc/AcOH gradiente 99/0/1 até 50/49/1). Uma segunda purificação foi realizada em sílica-gel (2x12 g, CH2Cl2/MeOH/AcOH gradiente 99/0/1 até 96/3/1). Uma terceira purifi- cação foi realizada em sílica-gel (12 g, CH2Cl2/MeOH/AcOH gradiente 98/1/1 até 96,5/2,5/1). As frações puras foram combinadas e concen- tradas sob pressão reduzida, dando origem a ácido 4-(3-((1-(4- clorofenil)-2-(5-metóxi-6-(trifluorometil)-2,3-di-hidro-1H-pirrolo[3,2- b]piridin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoico (composto 9, 72 mg) como sólido branco. Composto 9: 1
[00213] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,84 - 1,91 (m, 2 H) 2,30 - 2,37 (m, 2 H) 3,21 - 3,30 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,80 - 3,89 (m, 2 H) 3,94 (s, 3 H) 3,98 - 4,12 (m, 1 H) 4,56 (td, J=10,64, 6,15 Hz, 1 H) 5,58 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=1,89 Hz, 1 H) 5,95 (d l, J=10,72 Hz, 2 H) 6,40 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 7,56 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 8,53 (s, 1 H) 12,06 - 12,26 (m, 1 H)
[00214] LC/MS (método LC-A): Tr 2,87 min, MH+ 594 Exemplo 10: síntese de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(2-(tri-
fluorometil)-5,6-di-hidro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-4-il)etil)amino)-5-metoxife- nóxi) butanoico (Composto 10) e separação quiral nos Enantiômeros 10A e 10B.
Síntese do intermediário 10a:
[00215] Uma solução de 2-(3-amino-5-(trifluorometil)tiofen-2-il) ace- tato de etila ([CAS 860398-39-6] (1,49 g, 5,88 mmol) em CH3CN (40 mL) foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera de N2. NaHCO3 (0,544 g, 6,47 mmol) e cloreto de 2-(4-clorofenil)acetila ([CAS 25026- 34-0] (861 µL, 5,88 mmol) foram adicionados e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 100 min. A mistura foi vertida em H2O com agitação (200 mL) e extraída com Et2O (2x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre MgSO4, filtradas e evapora- das sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (50 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc 100/0 a 80/20. As frações desejadas foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com tolueno, dando origem a 2- (3-(2-(4-clorofenil)acetamido)-5-(trifluorometil)tiofen-2-il)acetato de etila 10a (1,15 g).
Síntese do intermediário 10b:
[00216] Uma solução de LiBH4 2 M em THF (2,59 mL, 5,18 mmol) foi adicionada lentamente a uma solução com agitação de 2-(3-(2-(4- clorofenil)acetamido)-5-(trifluorometil)tiofen-2-il)acetato de etila 10a (1,05 g, 2,59 mmol) em 2-Me-THF (20 mL). A mistura reacional foi agi- tada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura foi vertida em uma mistura com agitação de H2O (100 mL) e Et2O (100 mL). HCl 1 N (10 mL) foi adicionado gota a gota (formação de espuma) e, após agi- tação durante 15 minutos, as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com solução saturada de cloreto de sódio, seca com MgSO4, filtrada, e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (25 g) usando um gra- diente de heptano/iPrOH 100/0 até 50/50. As frações desejadas foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com tolueno. O resíduo foi agitado em tolueno (6 mL) a 45°C durante 15 minutos, removido por filtração à temperatura ambiente, lavado com tolueno (3x) e seco sob vácuo a 50°C, dando origem a 2-(4-clorofenil)- N-(2-(2-hidroxietil)-5-(trifluorometil)tiofen-3-il)acetamida 10b (1,15 g). Síntese do intermediário 10c:
[00217] Trifenilfosfina (1,02 g, 3,85 mmol) foi adicionado a uma so- lução com agitação de 2-(4-clorofenil)-N-(2-(2-hidroxietil)-5-(trifluoro- metil) tiofen-3-il)acetamida 10b (1,0 g, 2,75 mmol) em THF (20 mL) sob atmosfera de N2. Azodicarboxilato de di-terc-butila (0,71 g, 3,02 mmol) foi adicionado e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 20 h. Os voláteis foram evaporados sob pressão re- duzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (25 g) usando um gradiente de CH2Cl2/heptano 0/100 até 100/0. As frações desejadas foram combinadas e concentradas sob pressão re- duzida até um volume residual de 15 mL. O produto foi deixado crista- lizar ao longo de um período de 4 dias. Os sólidos foram removidos por filtração, lavados com heptano (4x) e secos sob vácuo a 50°C, dando origem a 2-(4-clorofenil)-1-(2-(trifluorometil)-5,6-di-hidro-4H-tie- no [3,2-b]pirrol-4-il)etanona 10c (0,75 g). Síntese do intermediário 10d:
[00218] A -75°C, sob um fluxo de N2, LiHMDS 1 M em THF (4,34 mL, 4,34 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 2-(4- clorofenil)-1-(2-(trifluorometil)-5,6-di-hidro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-4-il)eta- nona 10c (750 mg, 2,17 mmol) em 2-Me-THF (30 mL) e a mistura foi mantida a -75°C durante 20 min. TMSCl (444 µL, 3,47 mmol) foi adici- onado gota a gota. A mistura foi agitada durante 20 min a -75°C e uma solução de N-bromossuccinimida (502 mg, 2,82 mmol) em THF (5 mL) foi adicionada gota a gota. Após agitação durante 20 min a -75°C, a reação foi extinta com uma solução aquosa saturada de NH4Cl (25 mL). O banho de esfriamento foi removido e a mistura reacional foi agitada até a temperatura reacional alcançar -15°C. Água (25 mL) e DIPE (25 mL) foram adicionados e a mistura foi agitada durante 10 min. A ca- mada orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, dando origem a 2- bromo-2-(4-clorofenil)-1-(2-(trifluorometil)-5,6-di-hidro-4H-tieno[3,2- b]pirrol-4-il)etanona 10d (921 mg), que foi usado como tal na etapa seguinte. Síntese do intermediário 10e:
[00219] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(2-(trifluorome- til)-5,6-di-hidro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-4-il)etanona 10d (921 mg, 2,17 mmol), 4-(3-amino-5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 1a (1,22 g, 4,34 mmol) e di-isopropiletilamina (747 µL, 4,34 mmol) em 2-butanol (15 mL) foi agitada a 45°C durante 2 h. A mistura reacional foi deixada alcançar a temperatura ambiente e vertida em água com agitação (50 mL). O produto foi extraído (2 x) com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e o solvente foi eva- porado sob pressão reduzida e coevaporado com dioxano (2x). O re- síduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (40 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc/EtOH 100/0/0 a 40/45/15. As frações desejadas foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e co- evaporadas com dioxano (2x), dando origem a 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2- oxo-2-(2-(trifluorometil)-5,6-di-hidro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-4-il)etil)ami- no)-5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 10e (1,36 g), que foi usado como tal na etapa seguinte. Síntese do Composto 10 e separação quiral nos Enantiômeros 10A e 10B:
[00220] 4-(3-((1-(4-Clorofenil)-2-oxo-2-(2-(trifluorometil)-5,6-di-hidro- 4H-tieno[3,2-b]pirrol-4-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoato de terc- butila 10e (1,36 g, 2,17 mmol) foi misturado com HCl 4 M em dioxano (15 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 h. Os sólidos foram removidos por filtração, lavados com dioxano (3x) e secos sob vácuo a 50°C. O resíduo (1,4 g) foi purificado via HPLC preparativa (Fase estacionária: RP XBridge® Prep C18 OBD - 10 µm, 50 x 150 mm, fase móvel: solução de NH4HCO3 a 0,25% em água, CH3CN). As frações desejadas foram combinadas e os orgânicos volá- teis foram evaporados sob pressão reduzida. A solução aquosa rema- nescente foi extraída (2x) com uma mistura de solventes de Et2O/2- Me-THF (2/1). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas sob pressão re- duzida, dando origem a ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(2-(tri- fluorometil)-5,6-di-hidro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-4-il)etil)amino)-5-metoxife- nóxi)butanoico bruto (Composto 10, 0,54 g). Uma amostra analítica (40 mg) foi dissolvida em Et2O com agitação (1 mL) e HCl 4 M em dioxano (250 µL) foi adicionado. Após agitação durante 2 min, o produto foi re- movido por filtração, lavado (3x) com Et2O/dioxano (4/1) e seco sob vácuo a 50°C, dando origem ao Composto 10 (20 mg).
[00221] Os enantiômeros do Composto 10 (500 mg) foram separa- dos através de SFC quiral preparativa (Fase estacionária: Chiralpak® Diacel IC 20 x 250 mm, fase móvel: CO2, EtOH). As frações de produto do primeiro enantiômero eluído foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e purificadas por cromatografia flash em sílica-gel (12 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc:EtOH:AcOH 100/0:0:0 até 60/30:9,8:0,2. As frações desejadas foram combinadas, evapora- das sob pressão reduzida e coevaporadas com DCM. O resíduo foi seco sob vácuo a 50°C, dando origem ao Enantiômero 10A (164 mg). As frações de produto do segundo enantiômero eluído foram combina- das, evaporadas sob pressão reduzida e purificadas por cromatografia flash em sílica-gel (12 g) usando um gradiente de heptano/ EtO- Ac:EtOH:AcOH 100/0:0:0 até 60/30:9,8:0,2. As frações desejadas fo- ram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com DCM. O resíduo foi seco sob vácuo a 50°C, dando origem ao Enantiômero 10B (167 mg). Composto 10: 1
[00222] H RMN (360 MHz, DMSO-d ) δ ppm 1,87 (t, J=6,8 Hz, 2 H), 2,31 - 2,37 (m, 2 H), 3,26 - 3,38 (m, 2 H), 3,62 (s, 3 H), 3,84 (t l, J=6,4 Hz, 2 H), 4,29 (td, J=10,5, 6,8 Hz, 1 H), 4,79 (td, J=10,2, 6,2 Hz, 1 H), 5,49 (s, 1 H), 5,76 (t, J=2,0 Hz, 1 H), 5,91 - 5,97 (m, 2 H), 7,44 (d, J=8,4 Hz, 2 H), 7,54 (d, J=8,8 Hz, 2 H), 7,76 (s, 1 H)
[00223] LC/MS (método LC-D): Tr 1,93 min, MH+ 569 Enantiômero 10A: 1
[00224] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,83 - 1,91 (m, 2 H), 2,30 - 2,36 (m, 2 H), 3,23 - 3,30 (m, 2 H), 3,62 (s l, 3 H), 3,85 (s l, 2 H), 4,30 (m, J=9,5 Hz, 1 H), 4,79 (m, J=6,8 Hz, 1 H), 5,48 (d l, J=8,8 Hz, 1 H), 5,76 (s l, 1 H), 5,94 (d l, J=9,0 Hz, 2 H), 6,35 (d l, J=8,1 Hz, 1 H), 7,43 (d l, J=7,3 Hz, 2 H), 7,54 (d l, J=8,1 Hz, 2 H), 7,76 (s l, 1 H), 12,10
(s l, 1 H)
[00225] LC/MS (método LC-C): Tr 1,03 min, MH+ 569
[00226] [α]D20: +36,9° (c 0,4445, DMF)
[00227] SFC quiral (método SFC-F): Tr 5,52 min, MH+ 569 pureza quiral 100%. Enantiômero 10B: 1
[00228] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,83 - 1,91 (m, 2 H), 2,34 (t l, J=6,8 Hz, 2 H), 3,23 - 3,30 (m, 2 H), 3,62 (s, 3 H), 3,85 (t l, J=5,9 Hz, 2 H), 4,25 - 4,35 (m, 1 H), 4,75 - 4,83 (m, 1 H), 5,48 (d l, J=8,4 Hz, 1 H), 5,76 (s l, 1 H), 5,94 (d l, J=8,8 Hz, 2 H), 6,35 (d l, J=8,4 Hz, 1 H), 7,43 (d l, J=7,7 Hz, 2 H), 7,54 (d l, J=7,9 Hz, 2 H), 7,76 (s, 1 H), 12,11 (s l, 1 H)
[00229] LC/MS (método LC-C): Tr 1,03 min, MH+ 569
[00230] [α]D20: -39,1° (c 0,437, DMF)
[00231] SFC quiral (método SFC-F): Tr 6,98 min, MH+ 569 pureza quiral 97%. Exemplo 11: síntese de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- ((trifluorometil)tio)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoico (Composto 11)
Síntese do intermediário 11a:
[00232] À suspensão de NaH (26,5 g, 663 mmol, 60% em óleo) em THF (100 mL) a 0°C foi adicionado 6-bromo-1H-indol [CAS 52415-29-9] (100 g, 510 mmol) em porções. A reação foi agitada durante 30 min a 15°C. Após esfriamento para 0°C, SEMCl (93,6 g, 561 mmol, 99,5 mL) foi adicionado. A mistura reacional foi agitada durante 16 h a 15°C e vertida em uma solução aquosa saturada de cloreto de amônio (200 mL). A mistura foi diluída com acetato de etila (300 mL). As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (2x 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (500 mL), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica- gel usando éter de petróleo. As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida para originar 6-bromo-1-((2- (trimetilsilil)etóxi)metil)-1H-indol 11a (134 g) como um óleo amarelo. Síntese do intermediário 11b:
[00233] Uma mistura de 6-bromo-1-((2-(trimetilsilil)etóxi)metil)-1H- indol 11a (134 g, 411 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-
dioxaborolano) (158,5 g, 624 mmol), Pd(dppf)Cl2 (15,02 g, 20,5 mmol) e KOAc (161,2 g, 1,64 mol) em 1,4-dioxano (1,5 L) foi agitada a 100°C durante 5 h sob atmosfera de N2. A reação foi esfriada para 25°C e filtrada em uma almofada de Celite®. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em colu- na em sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etila gradiente 100/0 até 50/1). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida para originar 6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan- 2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etóxi)metil)-1H-indol 11b (104 g) como um óleo amarelo claro. Síntese do intermediário 11c:
[00234] A uma solução de 6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan- 2-il)-1-((2-(trimetilsilil)etóxi)metil)-1H-indol 11b (52 g, 139 mmol) em acetona (2,4 L) e H2O (2,4 L) foram adicionados NaIO4 (119 g, 557 mmol) e NH4OAc (53,7 g, 696 mmol). A mistura reacional foi agitada a 25°C durante 16 horas. A reação foi duplicada à mesma escala (52 g de composto 11b) e as misturas reacionais de ambas as reações fo- ram combinadas para a manipulação. O precipitado foi removido por filtração e o solvente (acetona) foi removido sob pressão reduzida. Acetato de etila (5 L) foi adicionado e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3x 5 L). As cama- das orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e con- centradas in vacuo para originar ácido (1-((2-(trimetilsilil)etóxi)metil)- 1H-indol-6-il)borônico 11c (85 g) como um sólido marrom muito escuro que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. Síntese do intermediário 11d:
[00235] Uma mistura de TMSCF3 (207,5 g, 1,46 mol), CuSCN (10,7 g, 87,6 mmol), S8 (224,6 g, 875,6 mmol), ácido (1-((2-(trimetilsilil) etó- xi)metil)-1H-indol-6-il)borônico 11c (85 g, 292 mmol), Ag2CO3 (161 g, 584 mmol), K3PO4 (186 g, 876 mmol), 1,10-fenantrolina (31,6 g, 175 mmol) e crivos moleculares de 4 Å (85 g) em DMF (1 L) foi agitada a 25°C durante 16 horas sob atmosfera de N2. A mistura reacional foi filtrada em uma almofada Celite®. O filtrado foi diluído com MTBE (1 L), lavado com água (3x 500 mL), seco sobre Na2SO4, filtrado e concen- trado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (éter de petróleo/acetato de etila 100/1). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão re- duzida para originar 6-((trifluorometil)tio)-1-((2-(trimetilsilil)etóxi)metil)- 1H-indol 11d (38 g) como um óleo amarelo claro. Síntese do intermediário 11e:
[00236] À solução de 6-((trifluorometil)tio)-1-((2-(trimetilsilil)etóxi) metil)-1H-indol 11d (38 g, 109 mmol) em THF (1,5 L) foram adiciona- dos TBAF.3H2O (345 g, 1,09 mol) e etano-1,2-diamina (131,45 g, 2,19 mol). A mistura reacional foi agitada a 70°C durante 16 h. A mistura reacional foi esfriada para 25°C e vertida em NaHCO3 aquoso satura- do (3 L). A mistura aquosa foi extraída com acetato de etila (3x 1 L). As camadas orgânicas combinadas foram secas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (coluna: Phenomenex Gemini C18 250 x 50 mm 10 µm, fase móvel: água (hidróxido de amônio 0,05% v/v), CH3CN), dan- do origem a 6-((trifluorometil)tio)-1H-indol 11e (10,1 g) como um sólido quase branco. Síntese do intermediário 11f:
[00237] Uma mistura de 6-((trifluorometil)tio)-1H-indol 11e (1,0 g, 4,6 mmol) e complexo de borano sulfeto de dimetila (7 mL) foi aqueci- da em um tubo selado a 75°C durante 5 h. A mistura reacional foi dei- xada alcançar a temperatura ambiente e adicionada gota a gota a MeOH com agitação (30 mL) (exotermia). Após a adição, a solução resultante foi aquecida sob refluxo durante 3 h. O solvente foi evapo- rado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (25 g) usando um gradiente de heptano/CH2Cl2 100/0 até 40/60. As frações desejadas foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com dioxano. O produto foi se- co sob vácuo a 50°C, dando origem a 6-((trifluorometil)tio)indolina 11f (0,79 g). Síntese do intermediário 11g:
[00238] Uma solução de 6-((trifluorometil)tio)indolina 11f (0,79 g, 3,6 mmol) em CH3CN (30 mL) foi agitada sob atmosfera de N2. NaHCO3 (0,333 g, 3,96 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi esfriada em um banho de gelo. Uma solução de cloreto de 2-(4- clorofenil)acetila ([CAS 25026-34-0] (0,852 g, 4,51 mmol) em CH3CN (20 mL) foi adicionada e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi vertida em H2O com agitação (100 mL). O precipitado foi removido por filtração e lavado com água (4x 10 mL). Os sólidos foram agitados em Et2O/heptano (3/2) (20 mL), removidos por filtração, lavados com Et2O/heptano (3/2) (2x 10 mL) e secos sob vácuo a 50°C, dando origem a 2-(4-clorofenil)-1-(6-((tri- fluorometil)tio)indolin-1-il)etanona 11g (1,033 g). Síntese do intermediário 11h:
[00239] A -78°C, sob um fluxo de N2, LiHMDS 1 M em THF (5,56 mL, 5,56 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 2-(4- clorofenil)-1-(6-((trifluorometil)tio)indolin-1-il)etanona 11g (1,033 mg, 2,78 mmol) em 2-Me-THF (40 mL) e a mistura foi mantida a -78°C du- rante 20 min. TMSCl (568 µL, 4,45 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura foi agitada durante 35 min a -78°C e uma solução de N- bromossuccinimida (643 mg, 3,61 mmol) em THF (8 mL) foi adicionada gota a gota. Após agitação durante 35 min a -78°C, a reação foi extinta com uma solução aquosa saturada de NH4Cl (30 mL). O banho de es- friamento foi removido e a mistura reacional foi agitada até a reação alcançar a temperatura ambiente. Água (30 mL) e DIPE (30 mL) foram adicionados e a mistura foi agitada durante 20 min. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, dando origem a 2- bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-((trifluorometil)tio)indolin-1-il)etanona 11h (1,25 g), que foi usado como tal na etapa seguinte. Síntese do intermediário 11i:
[00240] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6-((trifluorometil) tio)indolin-1-il)etanona 11h (1,25 mg, 2,78 mmol), 4-(3-amino-5- metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 1a (1,56 g, 5,56 mmol) e di- isopropiletilamina (957 µL, 5,56 mmol) em 2-butanol (25 mL) foi agita- da a 45°C durante 16 h. A mistura reacional foi deixada alcançar a temperatura ambiente e vertida em água com agitação (100 mL). O produto foi extraído (2 x) com CH2Cl2. As camadas orgânicas combi- nadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas, e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (40 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc/EtOH 100/0/0 a 70/20/10. As frações desejadas foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida, dando origem a 4-(3- ((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-((trifluorometil)tio)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 11i (2,0 g), que foi usado como tal na etapa seguinte. Síntese do Composto 11:
[00241] 4-(3-((1-(4-Clorofenil)-2-oxo-2-(6-((trifluorometil)tio)indolin-1- il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)butanoato de terc-butila 11i (1,81 g, 2,78 mmol) foi misturado com HCl 4 M em dioxano (20 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3,5 h. Os sólidos foram remo- vidos por filtração, lavados com dioxano (3x) e Et2O (20 mL). O sólido foi dissolvido em CH2Cl2 (100 mL) e misturado com água (50 mL) e Na2CO3 aquoso saturado (30 mL). Após agitação durante 15 min, as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com salmou-
ra, seca sobre MgSO4, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado via HPLC preparativa (Fase estacionária: RP XBridge® Prep C18 OBD - 10 µm, 30 x 150 mm, fase móvel: solução de NH4HCO3 a 0,25% em água, CH3CN). CH3CN foi evaporado e a solução aquosa residual foi acidificada para pH 3 com HCl 1 N. O pro- duto foi extraído com EtOAc (100 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura (50 mL), seca sobre MgSO4, filtrada, evaporada sob pressão reduzida e coevaporada com CH2Cl2, dando origem a ácido 4- (3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-((trifluorometil)tio)indolin-1-il)etil)amino)- 5-metoxifenóxi)butanoico (Composto 11, 164 mg). Composto 11: 1
[00242] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,87 (quin, J=7,1 Hz, 2 H) 2,25 - 2,38 (m, 2 H) 3,16 - 3,27 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,81 - 3,87 (m, 2 H) 3,95 - 4,08 (m, 1 H) 4,44 - 4,56 (m, 1 H) 5,57 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 5,74 - 5,77 (m, 1 H) 5,90 - 5,98 (m, 2 H) 6,47 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 7,34 - 7,40 (m, 2 H) 7,41 - 7,48 (m, 2 H) 7,51 - 7,59 (m, 2 H) 8,39 (s, 1 H) 12,16 (s l, 1 H)
[00243] LC/MS (método LC-C): Tr 1,12 min, MH+ 595 Tabela: compostos preparados como descrito acima Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe
O 1 F racêmico
F F N S N H F O F O
HO Cl OMe
O 1A F (-) [α]D20 = -44,6°
F F N S N H F O F O HO
Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe
O 1B F (+) [α]D20 = +46,0°
F F N S N H F O F O
HO Cl OMe
O 2 F racêmico
F N N H F O O
HO Cl OMe O (-) 2A F [α]D20 = -39,0°
F N N H F O O
HO Cl OMe O (+) 2B F F [α]D20 = +47,1°
N N H F O O
HO 3 racêmico Cl OMe
O 3A F (-) [α]D20 = -48,9°
F N N H F O OH F O
Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe
O 3B F (+) [α]D20 = +47,8°
F N N H F O OH F
O Cl OMe
O 4 racêmico
F N O N H O F OH F
O Cl OMe O (-) 4A [α]D20 = -39,6°
F N O N H O F OH F
O Cl OMe O (+) 4B [α]D20 = +43,7°
F N O N H O F OH F
O Cl OMe
O 5 racêmico
F N O N H O F O F F
HO Cl OMe
O 5A (-) [α]D20 = -35,8°
F N O N H O F O F F HO
Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe
O 5B (+) [α]D20 = +52,8°
F N O N H O F O F F HO
F OMe MeO
O 6 racêmico
F N O N H O F O F HO
F OMe MeO
O 6A (-) [α]D20 = -37,3°
F N O N H O F O F HO
F OMe MeO
O 6B (+) [α]D20 = +32,7°
F N O N H O F O F
HO Cl OMe
O D 7A-D (+) [α]D20 = +54,2°
N F O N H O F OH F
O Cl OMe
O D 7B-D (-) [α]D20 = -50,1°
N F O N H O F OH F
O Cl
HO OMe
O
O 8 racêmico
F N O N H O F OH F O
Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe
O 9 F racêmico
F N N H F O
O MeO N
HO Cl OMe 10 O racêmico
N F N H O F O F S
HO Cl OMe 10A O (+) [α]D20 = +36,9°
N F N H O F O F S
HO Cl OMe 10B O (-) [α]D20 = -39,1°
N F N H O F O F S
HO Cl OMe
O 11 racêmico
F N S N H O F O F HO
ATIVIDADE ANTIVIRAL DOS COMPOSTOS DA INVENÇÃO Ensaio antiviral de DENV-2
[00244] A atividade antiviral de todos os compostos da invenção foi testada contra a cepa de DENV-2 16681 que foi marcada com proteína fluorescente verde intensificada (eGFP). O meio de cultura consiste em meio essencial mínimo suplementado com 2% de soro fetal de be- zerro inativado pelo calor, gentamicina a 0,04% (50 mg/mL) e 2 mM de L-glutamina. Células Vero, obtidas da ECACC, foram suspensas em meio de cultura e 25 µL foram adicionados a placas de 384 poços (2500 células/poço), que já contêm os compostos antivirais.
Tipica- mente, estas placas contêm uma diluição em série de 5 vezes de 9 etapas de diluição do composto de teste a 200 vezes a concentração final em DMSO a 100% (200 nL). Adicionalmente, a concentração de cada composto é testada em quadruplicado (gama de concentrações finais: 25 µM - 0,000064 µM ou 2,5 µM - 0,0000064 µM para os com- postos mais ativos). Finalmente, cada placa contém poços que são atribuídos como controles de vírus (contendo células e vírus na ausên- cia de composto), controles de células (contendo células na ausência de vírus e composto) e controles de meio (contendo meio na ausência de células, vírus e compostos). Aos poços atribuídos como controle de meio, 25 µL de meio de cultura foram adicionados ao invés de células Vero.
Assim que as células são adicionadas às placas, as placas fo- ram incubadas durante 30 minutos à temperatura ambiente para per- mitir que as células se distribuíssem uniformemente dentro dos poços.
Em seguida, as placas foram incubadas em um incubador totalmente umidificado (37°C, CO2 a 5%) até ao dia seguinte.
Depois, a cepa de DENV-2 16681, marcada com eGFP, foi adicionada a uma multiplici- dade de infecção (MOI) de 0,5. Portanto, 15 µL de suspensão de vírus foram adicionados a todos os poços contendo composto de teste e aos poços atribuídos como controle de vírus.
Em paralelo, 15 µL de meio de cultura foram adicionados aos controles de meio e células.
Em se- guida, as placas foram incubadas durante 3 dias em um incubador to- talmente umidificado (37°C, CO2 a 5%). No dia da leitura, a fluores- cência de eGFP foi medida usando um microscópio de fluorescência automatizado a 488 nm (laser azul). Usando um sistema LIMS interno, curvas de resposta à dose de inibição para cada composto foram cal- culadas e a concentração eficaz semimáxima (EC50) foi determinada.
Portanto, a percentagem de inibição (I) para cada concentração de teste é calculada usando a seguinte fórmula: I = 100*(ST-SCC)/(SVC- SCC); ST, SCC e SVC são a quantidade de sinal de eGFP nos poços com compostos de teste, controle de células e controle de vírus, respecti- vamente. A EC50 representa a concentração de um composto à qual a replicação do vírus é inibida em 50%, como medida por uma redução de 50% da intensidade fluorescente de eGFP em comparação com o controle de vírus. A EC50 é calculada usando interpolação linear (Tabe- la 1).
[00245] Em paralelo, a toxicidade dos compostos foi avaliada nas mesmas placas. Assim que a leitura do sinal de eGFP foi feita, 40 µL de ATPlite, um corante da viabilidade celular, foram adicionados a to- dos os poços das placas de 384 poços. O ATP está presente em todas as células metabolicamente ativas e a concentração diminui muito ra- pidamente quando as células sofrem necrose ou apoptose. O sistema de ensaio ATPLite é baseado na produção de luz causada pela reação de ATP com luciferase e D-luciferina adicionadas. As placas foram in- cubadas durante 10 minutos à temperatura ambiente. Em seguida, as placas foram medidas em um ViewLux. A concentração citotóxica se- mimáxima (CC50) foi também determinada, definida como a concentra- ção requerida para reduzir o sinal luminescente em 50% em compara- ção com aquela dos poços de controle de células. Finalmente, o índice de seletividade (SI) foi determinado para os compostos, que foi calcu- lado como se segue: SI = CC50/EC50.
Tabela 1: EC50, CC50 e SI para os compostos da invenção no ensaio antiviral de DENV-2 No. do composto EC50 (µM) N CC50 (µM) N SI N 1 0,00064 3 13 4 19800 3 1A 0,0013 3 12 3 9200 3 1B 0,00011 3 13 4 104092 3 2 0,00038 3 12 4 32100 3 2A 0,015 3 12 3 799 3 2B 0,000078 4 14 4 166670 4 3 0,00056 3 13 3 22700 3 3A 0,036 3 12 3 346 3 3B 0,00012 3 13 3 91000 3 4 0,00011 4 12 4 96000 4 4A 0,011 3 13 3 1180 3 4B 0,000057 4 13 4 186421 4 5 0,00011 3 10 3 90900 3 5A 0,0023 6 10 9 4440 6 5B 0,00012 4 12 4 >54214 4 6 0,00063 3 12 3 19500 3 6A 0,25 3 11 3 46 3 6B 0,00039 3 15 4 39700 3 7A-D 0,000100 3 12 3 118813 3 7B-D 0,016 3 9,6 3 584 3 8 0,00015 3 13 4 86800 3 9 0,00099 4 12 4 12600 4 10 0,00052 3 19 3 40900 3 10A 0,00030 3 14 3 58900 3 10B 0,037 3 12 3 330 3 11 0,00028 3 13 3 43300 3 N = o número de experiências independentes nas quais os compostos foram testados. Ensaio de PCR quantitativa com transcriptase reversa (RT-qPCR) te- travalente
[00246] A atividade antiviral dos compostos da invenção foi testada contra a cepa de DENV-1 TC974#666 (NCPV), cepa de DENV-2 16681, cepa de DENV-3 H87 (NCPV) e cepa de DENV-4 H241 (NCPV) em um ensaio de RT-qPCR. Portanto, células Vero foram infectadas com DENV-1 ou -2 ou -3 ou -4 na presença ou ausência de compostos de teste. Ao dia 3 pós-infecção, as células foram lisadas e os lisados celulares foram usados para preparar cDNA tanto de um alvo viral (a 3'UTR de DENV; Tabela 2) como de um gene de referência celular (β- actina, Tabela 2). Subsequentemente, uma PCR em tempo real em dúplex foi realizada em um instrumento Lightcycler480. O valor de Cp gerado é inversamente proporcional à quantidade de expressão de RNA destes alvos. A inibição da replicação de DENV por um composto de teste resulta em um desvio de Cps para o gene de 3´UTR. Por ou- tro lado, se um composto de teste for tóxico para as células, será ob- servado um efeito similar na expressão de β-actina. O método compa- rativo de ΔΔCp é usado para se calcular a EC50, que é baseada na ex- pressão genética relativa do gene alvo (3'UTR) normalizada com o ge- ne de manutenção celular (β-actina). Adicionalmente, os valores de CC50 são determinados com base nos valores de Cp adquiridos para o gene de manutenção de β-actina. Tabela 2: Iniciadores e sondas usados para a RT-PCR quantitativa, em tempo real. Iniciador/sonda Alvo Sequênciaa, b F3utr258 3'-UTR de DENV 5'-CGGTTAGAGGAGACCCCTC-3' R3utr425 3'-UTR de DENV 5'-GAGACAGCAGGATCTCTGGTC-3' P3utr343 3'-UTR de DENV FAM-5'-AAGGACTAG-ZEN- AGGTTAGAGGAGACCCCCC-3'-IABkFQ Factina743 β-actina 5'-GGCCAGGTCATCACCATT-3' Ractina876 β-actina 5'-ATGTCCACGTCACACTTCATG-3' Pactina773 β-actina HEX-5'-TTCCGCTGC-ZEN-CCTGAGGCTC TC-3'-IABkFQ a Os corantes repórter (FAM, HEX) e elementos extintores (ZEN e IABkFQ) estão indicados a negrito e itálico. b A sequência de nucleotídeos dos iniciadores e sondas foi selecionada da região conserva- da na região 3´UTR do genoma do vírus do dengue, com base no alinhamento de 300 se- quências de nucleotídeos dos quatro sorotipos do dengue depositados no Genbank (Gong et al., 2013, Methods Mol Biol, Capítulo 16).
[00247] O meio de cultura consistiu em meio essencial mínimo su- plementado com 2% de soro fetal de bezerro inativado pelo calor, gen- tamicina a 0,04% (50 mg/mL) e 2 mM de L-glutamina. Células Vero, obtidas da ECACC, foram suspensas em meio de cultura e 75 µL/poço foram adicionados a placas de 96 poços (10000 células/poço), que já contêm os compostos antivirais. Tipicamente, estas placas contêm uma diluição em série de 5 vezes de 9 etapas de diluição do composto de teste a 200 vezes a concentração final em DMSO a 100% (500 nL; gama de concentrações finais: 25 µM - 0,000064 µM ou 2,5 µM -
0,0000064 µM para os compostos mais ativos). Adicionalmente, cada placa contém poços que são atribuídos como controles de vírus (con- tendo células e vírus na ausência de composto) e controles de células (contendo células na ausência de vírus e composto). Assim que as cé- lulas foram adicionadas às placas, as placas foram incubadas em um incubador totalmente umidificado (37°C, CO2 a 5%) até ao dia seguinte. Vírus do dengue de sorotipo 1, 2, 3 e 4 foram diluídos de modo a se obter um Cp de ~22-24 no ensaio. Portanto, 25 µL de suspensão de vírus foram adicionados a todos os poços contendo composto de teste e aos poços atribuídos como controle de vírus. Em paralelo, 25 µL de meio de cultura foram adicionados aos controles de células. Em segui- da, as placas foram incubadas durante 3 dias em um incubador total- mente umidificado (37°C, CO2 a 5%). Após 3 dias, o sobrenadante foi removido dos poços e as células lavadas duas vezes com PBS gelado (~100 µL). Os péletes de células dentro das placas de 96 poços foram armazenados a -80°C durante pelo menos 1 dia. Em seguida, o RNA foi extraído usando o estojo de lise Cells-to-CTTM, de acordo com a orientação do fabricante (Life Technologies). Os lisados celulares po- dem ser armazenados a -80°C ou imediatamente usados na etapa de transcrição reversa.
[00248] Na preparação da etapa de transcrição reversa, a mistura A (tabela 3A) foi preparada e 7,57 µL/poço foram distribuídos em uma placa de 96 poços. Após adição de 5 µL dos lisatos de células foi reali- zada uma etapa de desnaturação de cinco minutos a 75°C (tabela 3B). Em seguida, 7,43 µL de mistura B foram adicionados (tabela 3C) e a etapa de transcrição reversa foi iniciada (tabela 3D) para gerar cDNA.
[00249] Finalmente, uma mistura de RT-qPCR foi preparada, mistu- ra C (tabela 4A), e 22,02 µL/poço foram distribuídos em placas de qPCR LightCycler de 96 poços às quais 3 µL de cDNA foram adiciona- dos e a qPCR foi realizada de acordo com as condições na tabela 4B em um LightCycler 480.
[00250] Usando o software LightCycler e um sistema LIMS interno, curvas de resposta à dose para cada composto foram calculadas e a concentração eficaz semimáxima (EC50) e a concentração citotóxica semimáxima (CC50) foram determinadas (Tabelas 5-8). Tabela 3: Síntese de cDNA usando Mistura A, desnaturação, Mistura B e transcrição reversa. Mistura A A Placas 8 Amostras 828 Vol. de Reação (µL) 20 Item de Mistura Concentração Volume para (µL) Unidade Estoque Final 1 amostra x amostras H2O Milli-Q 7,27 6019,56 R3utr425 µM 20 0,27 0,15 124,20 Ractina876 µM 20 0,27 0,15 124,20 Volume mistura/poço (µL) 7,57 Lisatos de células 5,00 B Etapa de desnaturação: Etapa Temp Tempo Desnaturação 75°C 5' Manutenção 4°C manutenção C Mistura B Amostras 864 Item de Mistura Concentração Volume para (µL) Unidade Estoque Final 1 amostra x amostras tampão Expand HIFI 2 X 10,00 1,00 2,00 1728,0 MgCl2 mM 25,00 3,50 2,80 2419,2 dNTPs mM 10,00 1,00 2,00 1728,0 Inibidor de Rnase U/µL 40,00 1,00 0,50 432,0 Expand RT U/µL 50,00 0,33 0,13 112,3 Volume Total Mistura (µL) 7,43 D Protocolo de síntese de cDNA Etapa Temp Tempo Transc rev 42°C 30' Desnaturação 99°C 5' Manutenção 4°C manutenção
Tabela 4: Mistura e protocolo de qPCR.
Vol. de Reação Amostras 833 25 (µL) Item de Mistura Concentração Volume para (µL) Unidade Estoque Final 1 amostra x amostras H2O grau PCR Roche 7,74 6447,42 Mistura 2xMM Roche X 2 1 12,50 10412,50 F3utr258 µM 20 0,3 0,38 316,54 R3utr425 µM 20 0,3 0,38 316,54 P3utr343 µM 20 0,1 0,13 108,29 Factina743 µM 20 0,3 0,38 316,54 Ractina876 µM 20 0,3 0,38 316,54 Pactina773 µM 20 0,1 0,13 108,29 Volume Mistura/Tubo (µL) 22,02 cDNA 3,00
B Protocolo qPCR3 Taxa da Etapa Temp Tempo rampa pré-incub/desnat 95°C 10 min 4,4 Desnaturação 95°C 10 seg 4,4 emparelhamento 58°C 1 min 2,2 40 ciclos Alongamento 72°C 1 seg 4,4 Resfriamento 40°C 10 seg 1,5
Tabela 5: EC50, CC50 e SI para os compostos contra o sorotipo 1 nos ensaios de RT-qPCR RT-qPCR sorotipo 1 TC974#666 No. do composto EC50 (µM) N CC50 (µM) N SI N 1B 0,000096 4 >2,5 4 >79500 4 2B 0,000091 5 >1,0 5 >33100 5 3B 0,00010 3 >2,5 3 >54200 3 4B 0,00011 4 >1,0 4 >45200 4 5B 0,00033 3 >1,0 3 >5910 3 6B 0,00064 4 13 4 20500 4 7A-D 0,00024 3 >1,0 3 >6180 3 10A 0,00022 5 13 5 56000 5 N = o número de experiências independentes nas quais os compostos foram testados.
Tabela 6: EC50, CC50 e SI para os compostos contra o sorotipo 2 nos ensaios de RT-qPCR RT-qPCR sorotipo 2 16681 No. do composto EC50 (µM) N CC50 (µM) N SI N 1B 0,00018 4 >2,5 4 >11700 4 2B 0,000061 4 >1,0 4 >36300 4 3B 0,000096 3 >2,5 3 >46900 3 4B 0,000067 4 >1,0 4 >39400 4 5B 0,00029 3 >1,0 3 >5770 3 6B 0,00041 3 15 4 28100 3 7A-D 0,00016 3 >1,0 3 >9330 3 10A 0,00011 6 15 5 131977 5 N = o número de experiências independentes nas quais os compostos foram testados.
Tabela 7: EC50, CC50 e SI para os compostos contra o sorotipo 3 nos ensaios de RT-qPCR RT-qPCR sorotipo 3 H87 No. do composto EC50 (µM) N CC50 (µM) N SI N 1B 0,0019 4 >2,5 4 >1590 4 2B 0,00085 4 >1,0 4 >2050 4 3B 0,0015 3 >2,5 3 >3870 3 4B 0,00092 4 >1,0 4 >2360 4 5B 0,0026 3 >1,0 3 >719 3 6B 0,0056 4 13 4 2520 4 7A-D 0,0024 3 >1,0 3 >574 3 10A 0,0042 5 15 5 6210 5 N = o número de experiências independentes nas quais os compostos foram testados.
Tabela 8: EC50, CC50 e SI para os compostos contra o sorotipo 4 nos ensaios de RT-qPCR RT-qPCR sorotipo 4 H241 No. do composto EC50 (µM) N CC50 (µM) N SI N 1B 0,0096 4 8,8 4 2980 4 2B 0,010 4 4,1 4 1020 4 3B 0,014 3 3,6 1 333 1 4B 0,012 3 6,8 2 563 2 5B 0,020 3 8,4 3 618 3 6B 0,029 4 9,7 3 317 3 7A-D 0,013 3 8,2 3 1000 3 10A 0,030 5 3,2 5 105 5 N = o número de experiências independentes nas quais os compostos foram testados.

Claims (11)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto da fórmula (I), caracterizado pelo fato de inclu- ir qualquer forma estereoquimicamente isomérica do mesmo, R1 CH3
O R2 R3 O OH (I)
N O
H
A O em que em que R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é pentafluorossulfanila, R5 é hidrogênio, Z é carbono e R6 é hidrogênio, ou R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é trifluorometila, R5 é hidrogênio, Z é carbono e R6 é metila, ou R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é trifluorometila, R5 é flúor, Z é carbono e R6 é hidrogênio, ou R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é trifluorometóxi, R5 é hidrogênio, Z é carbono e R6 é metila, ou R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é trifluorometóxi, R5 é flúor, Z é carbono e R6 é hidrogênio, ou R1 é flúor, R2 é metóxi, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é tri- fluorometóxi, R5 é hidrogênio, Z é carbono e R6 é hidrogênio, ou R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é deutério, A é (a-1), R4 é tri- fluorometóxi, R5 é hidrogênio, Z é carbono e R6 é hidrogênio, ou R1 é cloro, R2 é -OCH2CH2OH, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é trifluorometóxi, R5 é hidrogênio, Z é carbono e R6 é hidrogênio, ou
R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é trifluorometila, R5 é metóxi, Z é nitrogênio e R6 está ausente, ou R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-2) e R4 é trifluorometila, ou R1 é cloro, R2 é hidrogênio, R3 é hidrogênio, A é (a-1), R4 é trifluorometiltio, R5 é hidrogênio, Z é carbono e R6 é hidrogênio; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou polimor- fo do mesmo.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracteriza- do pelo fato de que A é (a-1).
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracteriza- do pelo fato de que A é (a-2).
4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o referido composto tem a rotação específica (+).
5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracteriza- do pelo fato de que o referido composto é selecionado de: Cl Cl OMe OMe O O (+) F (+) F
F F F N
S N N
N H H
F O F O
F O O
HO HO Cl Cl OMe OMe O O (+) (+)
F
F N F N
O N H
N H O
F O F
OH F OH
F O
O Cl F OMe OMe MeO O (+) O (+)
F N F N
O N H O N H
O O
F O F O
F F
F
HO HO
Cl Cl OMe OMe O D (+) O (+)
N N
F O N H F N H
O O
F OH F O
F S
F
O HO
6. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de compreender um composto, como definido em qualquer uma das rei- vindicações 1 a 5, em conjunto com um ou mais excipientes, diluentes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.
7. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindica- ção 6, caracterizada pelo fato de compreender um segundo ingredien- te ativo ou ingrediente ativo adicional.
8. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindica- ção 7, caracterizada pelo fato de que o segundo ingrediente ativo ou ingrediente ativo adicional é um agente antiviral.
9. Composto de fórmula (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de ser para uso como um medicamento.
10. Composto de fórmula (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de ser para uso no tratamento de infecção por Dengue e para a prevenção ou tratamento de doença associada à infecção por Dengue.
11. Composto de fórmula (I) para uso, de acordo com a rei- vindicação 10, caracterizado pelo fato de que a infecção por Dengue é infecção por vírus da cepa DENV-1, DENV-2, DENV-3 ou DENV-4.
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SI (1) SI3630724T1 (pt)
TW (1) TWI771420B (pt)
UA (1) UA125970C2 (pt)
UY (1) UY37741A (pt)
WO (1) WO2018215316A1 (pt)
ZA (1) ZA201907713B (pt)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201116559D0 (en) 2011-09-26 2011-11-09 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
JOP20160086B1 (ar) 2015-05-08 2021-08-17 2 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research And Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JO3633B1 (ar) 2015-09-16 2020-08-27 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research & Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20160198B1 (ar) 2015-09-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
WO2017167953A1 (en) 2016-03-31 2017-10-05 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Substituted indoline derivatives as dengue viral replication inhibitors
MX2018011784A (es) 2016-03-31 2019-02-13 Janssen Pharmaceuticals Inc Derivados de indol sustituidos como inhibidores de la replicacion virica del dengue.
BR112018068956A2 (pt) 2016-04-01 2019-01-22 Janssen Pharmaceuticals Inc derivados do composto indol substituídos como inibidores da replicação viral da dengue
JOP20170069B1 (ar) 2016-04-01 2021-08-17 1 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20180025B1 (ar) 2017-03-31 2021-08-17 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20180026A1 (ar) 2017-03-31 2019-01-30 Univ Leuven Kath مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
ES2929667T3 (es) 2017-05-22 2022-11-30 Janssen Pharmaceuticals Inc Derivados de indolina sustituidos como inhibidores de la replicación vírica de dengue
MA52976A (fr) * 2018-06-19 2021-04-28 Novartis Ag Dérivés de tétrahydrothiénopyridine n-substitués et leurs utilisations
WO2020139991A1 (en) 2018-12-27 2020-07-02 Agios Pharmaceuticals, Inc. Aza-heterobicyclic inhibitors of mat2a and methods of use for treating cancer
WO2023278564A1 (en) 2021-07-02 2023-01-05 Mirati Therapeutics, Inc. Aminopyridine-based mta-cooperative prmt5 inhibitors

Family Cites Families (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19651000A1 (de) 1996-12-01 1998-06-04 Schering Ag Oxyiminopregnancarbolactone
CA2308443A1 (en) 1997-10-27 1999-05-06 Michael Lyle Denney Morpholino-n-ethyl ester prodrugs of indole spla2 inhibitors
GB0110832D0 (en) 2001-05-03 2001-06-27 Virogen Ltd Antiviral compounds
US6861504B2 (en) 2001-05-03 2005-03-01 Cbr, Inc. Compounds and methods for the modulation of CD154
WO2003050295A2 (en) 2001-12-12 2003-06-19 Conforma Therapeutics Corporation Assays and implements for determining and modulating hsp90 binding activity
GB0215293D0 (en) 2002-07-03 2002-08-14 Rega Foundation Viral inhibitors
JP2008526980A (ja) 2005-01-14 2008-07-24 ジェネラブズ テクノロジーズ インコーポレーティッド ウイルス感染症を治療するためのインドール誘導体
US20060194835A1 (en) 2005-02-09 2006-08-31 Migenix Inc. Compositions and methods for treating or preventing flaviviridae infections
CA2726985A1 (en) 2008-06-03 2009-12-10 Siga Technologies, Inc. Small molecule inhibitors for the treatment or prevention of dengue virus infection
US8143259B2 (en) 2008-08-19 2012-03-27 Janssen Pharmaceutica, Nv Cold menthol receptor antagonists
CN102160233B (zh) 2008-08-22 2013-12-04 日本化药株式会社 染料敏化的光电转换器件
TWI453207B (zh) 2008-09-08 2014-09-21 Signal Pharm Llc 胺基三唑并吡啶，其組合物及使用其之治療方法
WO2010091413A1 (en) 2009-02-09 2010-08-12 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Linked dibenzimidazole derivatives
GB0910003D0 (en) 2009-06-11 2009-07-22 Univ Leuven Kath Novel compounds for the treatment of neurodegenerative diseases
US8993604B2 (en) 2009-06-30 2015-03-31 Siga Technologies, Inc. Treatment and prevention of dengue virus infections
US7948798B1 (en) 2009-07-22 2011-05-24 Marvell International Ltd. Mixed multi-level cell and single level cell storage device
PT2523951E (pt) 2010-01-15 2015-09-14 Gilead Sciences Inc Inibidores de vírus flaviviridae
EP2552211A4 (en) 2010-03-26 2013-10-23 Glaxo Group Ltd INDAZOLYL-PYRIMIDINE AS KINASEHEMMER
JP5716205B2 (ja) 2011-03-29 2015-05-13 学校法人日本大学 グルコシダーゼ活性阻害用組成物及びそのスクリーニング方法
GB201116559D0 (en) 2011-09-26 2011-11-09 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
GB201305376D0 (en) * 2013-03-25 2013-05-08 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
MX368158B (es) 2013-10-23 2019-09-20 Janssen Sciences Ireland Uc Derivados de carboxamida y su uso como medicamentos para el tratamiento de la hepatitis b.
JP6464176B2 (ja) 2014-01-31 2019-02-06 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 芳香族ｐ２’基を有する第ｘｉａ因子阻害剤としてのマクロ環
SG11201702463YA (en) 2014-10-01 2017-04-27 Janssen Pharmaceuticals Inc Mono- or di-substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors
NO2721243T3 (pt) 2014-10-01 2018-10-20
ME03344B (me) 2014-10-01 2019-10-20 Janssen Pharmaceuticals Inc Mono- ili di-supstituisani indoli kao inнibitori replikacije denga virusa
JOP20150335B1 (ar) * 2015-01-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
AR103680A1 (es) 2015-02-23 2017-05-24 Lilly Co Eli Inhibidores selectivos de bace1
JOP20160086B1 (ar) 2015-05-08 2021-08-17 2 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research And Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JO3633B1 (ar) 2015-09-16 2020-08-27 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research & Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20160198B1 (ar) 2015-09-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
EP3370698B1 (en) 2015-11-03 2022-01-26 Zoetis Services LLC Sol-gel polymer composites and uses thereof
BR112018068538B1 (pt) 2016-03-31 2023-12-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Composto, medicamento, e, uso de um composto
WO2017167953A1 (en) 2016-03-31 2017-10-05 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Substituted indoline derivatives as dengue viral replication inhibitors
MX2018011784A (es) 2016-03-31 2019-02-13 Janssen Pharmaceuticals Inc Derivados de indol sustituidos como inhibidores de la replicacion virica del dengue.
EA039392B1 (ru) 2016-04-01 2022-01-21 СИГНАЛ ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ЭлЭлСи Способ лечения рака с применением замещенного аминопуринового соединения
BR112018068956A2 (pt) 2016-04-01 2019-01-22 Janssen Pharmaceuticals Inc derivados do composto indol substituídos como inibidores da replicação viral da dengue
IL296966A (en) 2016-04-01 2022-12-01 Amgen Inc Chimeric flt-3 receptors and methods of using them
JOP20170069B1 (ar) * 2016-04-01 2021-08-17 1 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
CN113150170A (zh) 2016-04-01 2021-07-23 凯德药业股份有限公司 嵌合受体及其方法和用途
UA123912C2 (uk) 2016-04-01 2021-06-23 Басф Се Біциклічні сполуки
TW202313671A (zh) 2016-04-01 2023-04-01 美商凱特製藥公司 嵌合抗原和ｔ細胞受體及使用方法
JOP20180026A1 (ar) 2017-03-31 2019-01-30 Univ Leuven Kath مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20180025B1 (ar) 2017-03-31 2021-08-17 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
ES2929667T3 (es) 2017-05-22 2022-11-30 Janssen Pharmaceuticals Inc Derivados de indolina sustituidos como inhibidores de la replicación vírica de dengue

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JP7179773B2 (ja) 2022-11-29
IL270727B2 (en) 2023-03-01
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CO2019013042A2 (es) 2020-01-17
CL2019003309A1 (es) 2020-03-20
US11053196B2 (en) 2021-07-06
SI3630724T1 (sl) 2021-08-31
CA3061026C (en) 2024-01-30
AU2018274101C1 (en) 2022-09-15

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