CN110753682A - 作为登革热病毒复制抑制剂的经取代的吲哚啉衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及经取代的吲哚啉衍生物，通过使用所述化合物预防或治疗登革热病毒感染的方法，并且还涉及所述化合物用作药物、更优选地用作治疗或预防登革热病毒感染的药物。此外，本发明涉及这些化合物的药物组合物或组合配制品，涉及用作药物、更优选地用于预防或治疗登革热病毒感染的组合物或配制品。本发明还涉及用于制备这些化合物的方法。

Description

作为登革热病毒复制抑制剂的经取代的吲哚啉衍生物
本发明涉及经取代的吲哚啉衍生物，通过使用所述化合物预防或治疗登革热病毒感染的方法，并且还涉及所述化合物用作药物、更优选地用作治疗或预防登革热病毒感染的药物。此外，本发明涉及这些化合物的药物组合物或组合配制品，涉及用作药物、更优选地用于预防或治疗登革热病毒感染的组合物或配制品。本发明还涉及用于制备这些化合物的方法。
背景技术
通过蚊子或蜱传播的黄病毒在人中引起危及生命的感染，如脑炎和出血热。已知黄病毒登革热的四种不同的但密切相关的血清型，所谓的DENV-1、DENV-2、DENV-3和DENV-4。登革热是在全世界大多数热带和亚热带地区地方性的，主要在城市和半城市地区。根据世界卫生组织(WHO)，25亿人(其中10亿儿童)处于DENV感染的风险中(WHO，2002)。估计每年在世界范围内发生5000万至1亿登革热[DF]病例、50万严重登革热疾病(即登革出血热[DHF]和登革休克综合征[DSS])病例以及超过20,000例死亡。DHF已经成为流行地区中儿童之中住院和死亡的一个主要原因。总而言之，登革热代表虫媒病毒(arboviral)疾病的最常见原因。由于在位于拉丁美洲、东南亚和西太平洋的国家(包括巴西、波多黎各、委内瑞拉、柬埔寨、印度尼西亚、越南、泰国)中的最近大暴发，登革热病例的数量已经在过去几年急剧上升。随着疾病传播至新的区域，不仅登革热病例的数量在增加，而且暴发倾向于更严重。
在感染另一种血清型之后，预先存在的异源抗体与新感染的登革热病毒血清型形成复合物，但是不中和病原体。相反，据信促进病毒进入细胞，从而导致不受控制的病毒复制和更高的峰病毒滴度。在原发感染和继发感染两者中，更高的病毒滴度与更严重的登革热疾病相关。因为母体抗体能够容易地通过母乳喂养传递至婴儿，所以这可能是儿童比成年人更多受严重登革热疾病影响的原因之一。
在具有两种或更多种血清型同时流通的区域(还被称为超流行地区)，严重登革热疾病的风险显著更高，这是由于经历继发性、更严重感染的风险增加。此外，在超流行性的情况下，更强毒株出现的概率增加，这进而增加登革出血热(DHF)或登革休克综合征的概率。
携带登革热的蚊子，包括埃及伊蚊(Aedes aegypti)和白纹伊蚊(Aedesalbopictus)(虎斑蚊(tiger mosquito))在地球上向北方移动。根据美国(US)疾病控制与预防中心(CDC)，两种蚊子当前在得克萨斯州南部普遍存在。携带登革热的蚊子向北传播不限于美国，而且也已在欧洲观察到。
在墨西哥首次批准了由赛诺菲巴斯德公司(Sanofi Pasteur)生产的登革热疫苗
Figure BDA0002282864750000021
并在同时获得更多国家的批准。尽管如此，由于功效有限，尤其是针对DENV-1和DENV-2，在黄病毒初次感染受试者中的功效低和漫长的给药方案，该疫苗留下了相当大的改进余地。
尽管存在这些缺点，该疫苗是流行地区的规则改变者，因为它将为大部分人群提供保护，但是可能不能保护非常小的婴儿，这些婴儿承载着登革热的最大负担。此外，给药方案和在黄病毒初次感染受试者中的功效非常有限使它对于从非流行地区到登革热流行地区的游客而言是不合适的并且可能是不值得的/非成本有效的。登革热疫苗的上述缺点是为何需要预暴露预防性登革热抗病毒剂的原因。
此外，当前不可获得用于治疗或预防登革热病毒感染的特异性抗病毒药物。显然，对于用于预防或治疗动物中(更具体地人中)的病毒感染并且尤其是针对由黄病毒(更具体地登革热病毒)引起的病毒感染的治疗剂仍然存在巨大未满足的医学需求。高度需要具有良好抗病毒效力、无副作用或低水平的副作用、针对多种登革热病毒血清型的广谱活性、低毒性和/或良好药代动力学或药效动力学特性的化合物。
WO-2010/021878披露了2-苯基吡咯烷和吲哚啉衍生物作为冷薄荷醇受体拮抗剂用于治疗炎性疾病和中央疾病(central disease)。WO-2013/045516披露了吲哚和吲哚啉衍生物用于治疗登革热病毒感染。
本发明现在提供化合物、经取代的吲哚啉衍生物，这些化合物显示针对所有四种(4)登革热病毒血清型的高效活性。
发明内容
本发明是基于上文提到的问题中的至少一个可以通过本发明的当前化合物来解决的出人意料的发现。
本发明提供化合物，这些化合物已显示具有针对当前已知的所有四种(4)血清型的有效抗病毒活性。此外，本发明证明这些化合物有效地抑制登革热病毒(DENV)的增殖。因此，这些化合物构成可用于治疗和/或预防动物、哺乳动物和人中的病毒感染，更具体地用于治疗和/或预防登革热病毒感染的一类有用的有效化合物。
此外，本发明涉及这类化合物作为药物的用途，并且涉及其用于制造用以治疗和/或预防动物或哺乳动物(更具体地人)中的病毒感染，特别是属于登革热病毒家族的病毒感染的药剂的用途。本发明还涉及用于制备所有这类化合物的方法，并且涉及包含有效量的这些化合物的药物组合物。
本发明还涉及一种通过向有需要的患者施用有效量的一种或多种这类化合物或其药学上可接受的盐任选地与一种或多种其他药物(像另一种抗病毒剂)的组合来治疗或预防人中的登革热病毒感染的方法。
本发明涉及具有式(I)的化合物，其包括其任何立体化学异构体形式：
Figure BDA0002282864750000031
其中
Figure BDA0002282864750000032
其中
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-1)，R4是五氟硫烷基，R5是氢，Z是碳，并且R6是氢；或
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲基，R5是氢，Z是碳，并且R6是甲基；或
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲基，R5是氟，Z是碳，并且R6是氢；或
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲氧基，R5是氢，Z是碳，并且R6是甲基；或
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲氧基，R5是氟，Z是碳，并且R6是氢；或
R1是氟，R2是甲氧基，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲氧基，R5是氢，Z是碳，并且R6是氢；或
R1是氯，R2是氢，R3是氘，A是(a-1)，R4是三氟甲氧基，R5是氢，Z是碳，并且R6是氢；或
R1是氯，R2是-OCH2CH2OH，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲氧基，R5是氢，Z是碳，并且R6是氢；或
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲基，R5是甲氧基，Z是氮，并且R6缺失；或
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-2)，并且R4是三氟甲基；或
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲硫基，R5是氢，Z是碳，并且R6是氢；
或其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物。
第一组具有式(I)的化合物是以下那些具有式(I)的化合物，其中基团A是(a-1)。
第二组具有式(I)的化合物是以下那些具有式(I)的化合物，其中基团A是(a-2)。
在可替代地表示中，本发明涉及具有式(I)的化合物，
Figure BDA0002282864750000041
其中
Figure BDA0002282864750000042
其中该化合物选自下组，该组由以下组成：
Figure BDA0002282864750000051
或其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物。
本发明的一部分还是药物组合物，该药物组合物包含以上提及的化合物或其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，连同一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
所述化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐和碱盐。合适的酸加成盐是从形成无毒盐的酸形成的。合适的碱盐是从形成无毒盐的碱形成的。
如上文所提及的药学上可接受的酸加成盐意指包含具有式(I)的化合物所能形成的治疗活性的无毒酸加成盐形式。这些药学上可接受的酸加成盐可以方便地通过用这种适当的酸来处理碱形式来获得。适当的酸包括例如，无机酸，如氢卤酸(例如盐酸或氢溴酸)、硫酸、硝酸、磷酸以及类似酸；或有机酸，例如像乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸(即乙二酸)、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己氨基磺酸、水杨酸、对氨基水杨酸、双羟萘酸以及类似酸。
本发明的化合物还可以按非溶剂化的和溶剂化的形式存在。术语“溶剂化物”在此用以描述包含本发明的化合物以及一种或多种药学上可接受的溶剂分子(例如，乙醇)的分子复合物。
术语“多晶型物”是指本发明的化合物能够以一种以上的形式或晶体结构存在。
可以将本发明的化合物以晶态的或非晶态的产品施用。它们可以通过如沉淀、结晶、冷冻干燥、喷雾干燥或蒸发干燥等方法以例如固体填料、粉末或膜形式获得。它们可以单独施用或与一种或多种本发明的其他化合物组合施用或与一种或多种其他药物组合施用。通常，它们将作为与一种或多种药学上可接受的赋形剂相结合的配制品施用。术语“赋形剂”在此用以描述除本发明的一种或多种化合物之外的任何成分。赋形剂的选择主要取决于诸如以下等要素：具体施用模式、赋形剂对溶解度和稳定性的影响以及剂型的性质。
出于施用目的，本发明化合物或其任一亚组可配制成多种药物形式。可引用通常用于全身性施用药物的所有组合物作为适宜组合物。为制备本发明的药物组合物，将有效量的任选地呈加成盐形式的具体化合物作为活性成分与药学上可接受的载体组合于紧密混合物中，该载体可采用众多种形式，这取决于施用所希望的制剂形式。令人希望地，这些药物组合物处于适合于例如口服或经直肠施用的单位剂型。例如，在制备处于口服剂型的组合物中，可使用任何常见药物介质，在口服液体制剂(例如悬浮液、糖浆剂、酏剂、乳液以及溶液)的情况下，例如像水、二醇类、油类、醇类等；或者在粉剂、丸剂、胶囊剂和片剂的情况下，固体载体例如淀粉、糖、高岭土、稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。因为其容易施用，片剂和胶囊剂代表最有利的口服单位剂型，在该情形下显然采用固体药物载体。还包括在使用之前不久可以被转变为液体形式的固体形式制剂。
为了便于施用和剂量的均一性，将上述药物组合物配制成单位剂型是特别有利的。如在此使用的单位剂型指的是适合作为单位剂量的物理离散单位，各单位包含预定量的活性成分，该预定量的活性成分经计算与所需药物载体相结合而产生所希望的治疗效果。此类单位剂型的实例是片剂(包括刻痕或包衣的片剂)、胶囊剂、丸剂、粉末包(powderpacket)、糯米纸囊剂(wafer)、栓剂、可注射溶液或悬浮液等，及其分开的多种剂型。
在感染性疾病治疗领域中的普通技术人员将能够从下文所呈现的测试结果来确定有效量。通常，预期每日有效量将为从0.01mg/kg至50mg/kg体重，更优选从0.1mg/kg至10mg/kg体重。可以适当地将所需剂量在全天中以适当的时间间隔作为两个、三个、四个或更多个子剂量给予。所述子剂量可配制成单位剂型，例如每单位剂型包含1mg至1000mg，且具体来说5mg至200mg活性成分。
如本领域的普通技术人员所熟知的，施用的精确剂量和频率取决于本发明所使用的具体化合物、正在被治疗的具体病状、正在被治疗的病状的严重性、具体患者的年龄、体重和总体身体状况以及个体可能服用的其他药物。此外，显而易见的是可根据所治疗受试者的反应和/或根据用本发明的化合物开处方的医师的评估来降低或增加有效量。因此，上文所述的有效量范围仅为指导且并不打算在任何程度上限制本发明的范围或使用。
本披露还旨在包括存在于本发明的化合物中的原子的任何同位素。例如，氢的同位素包括氚和氘，并且碳的同位素包括C-13和C-14。
如在此使用的，任何具有仅仅显示为实线并且不显示为实楔形键或虚楔形键的键的化学式，或者另外表示为围绕一个或多个原子具有特殊构型(例如R，S)的化学式，考虑每个可能的立体异构体，或者两个或更多个立体异构体的混合物。
在上文和下文中，术语“具有式(I)的化合物”和“式(I)的合成的中间体”意指包括其立体异构体和其互变异构形式。
在上文或下文中，术语“立体异构体”、“立体异构形式”或“立体化学异构形式”可互换使用。
本发明包括本发明的化合物呈纯立体异构体形式或呈两种或更多种立体异构体的混合物形式的所有立体异构体。对映异构体是作为彼此的不可重叠镜像的立体异构体。一对对映异构体的1:1混合物是外消旋体或外消旋混合物。非对映体(或非对映异构体)是不为对映体的立体异构体，即它们不以镜像形式相关。
术语“立体异构体”还包括任何旋转异构体，也称作构象异构体，具有式(I)的化合物可以形成。
因此，只要化学上可能，本发明包括对映体、非对映体、外消旋体、E异构体、Z异构体、顺式异构体、反式异构体、旋转异构体及其混合物。
所有那些术语的含义，即，对映体、非对映体、消旋体、E异构体、Z异构体、顺式异构体、反式异构体及其混合物对于技术人员是已知的。
绝对构型是根据卡恩-英戈尔德-普雷洛格(Cahn-Ingold-Prelog)系统指定的。不对称原子处的构型由R或S规定。绝对构型未知的经过拆分的立体异构体可以根据它们旋转平面偏振光的方向而由(+)或(-)指定。例如，绝对构型未知的已拆分的对映异构体可以根据它们旋转平面偏振光的方向而由(+)或(-)指定。
当鉴定具体立体异构体时，这意指所述立体异构体基本上不含其他立体异构体，即与少于50％，优选地少于20％，更优选地少于10％，甚至更优选地少于5％，特别是少于2％并且最优选地少于1％的其他立体异构体相关。因此，当具有式(I)的化合物例如被指定为(R)时，这意指该化合物基本上不含(S)异构体。
一些根据式(I)的化合物还能以它们的互变异构形式存在。尽管在以上式(I)中未明确指示，但是这类形式在它们可能存在的情况下旨在包括在本发明的范围内。
本发明的具有式(I)的化合物均具有至少一个如下图所示的用*标记的碳原子表示的不对称碳原子：
Figure BDA0002282864750000091
由于所述手性中心的存在，“具有式(I)的化合物”可以是(R)-对映异构体、(S)-对映异构体、外消旋体形式、或两种单独的对映异构体以任何比例的任何可能的组合。当不知道对映异构体的绝对(R)-或(S)-构型时，可以在测量所述具体的对映异构体的比旋光度之后，通过指示该对映异构体是否是右旋的(+)-或左旋的(-)-来鉴别此对映异构体。
在本发明的一方面中涉及第一组具有式(I)的化合物，其中该具有式(I)的化合物具有(+)比旋光度。
在本发明的另一方面中涉及第二组具有式(I)的化合物，其中该具有式(I)的化合物具有(-)比旋光度。
实例
LC/MS方法
使用LC泵、二极管阵列(DAD)或UV检测器以及如在对应的方法中所指定的柱进行高效液相层析(HPLC)测量。如果必要的话，包括另外的检测器(参见下文的方法表格)。
将来自柱的流带至配置有大气压离子源的质谱仪(MS)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间)以便获得允许鉴别化合物的标称单一同位素分子量(MW)的离子是在技术人员的知识内。利用适宜软件进行数据采集。
通过其实验保留时间(Rt)和离子描述化合物。如果未在数据表中不同地指定，那么报道的分子离子对应于[M+H]+(质子化的分子)和/或[M-H]-(去质子的分子)。在该化合物不是直接可电离的情况下，指定加合物类型(即[M+NH4]+、[M+HCOO]-等)。对于具有多种同位素模式的分子(Br、Cl)来说，报道的值是针对最低同位素质量获得的值。获得的所有结果具有通常与所使用的方法相关的实验不确定性。
下文中，“SQD”意指单四极检测器，“MSD”质量选择性检测器，“RT”室温，“BEH”桥连乙基硅氧烷/二氧化硅杂化体，“DAD”二极管阵列检测器，“HSS”高强度二氧化硅。
LC/MS方法代码(以mL/min来表示流量；以℃表示柱温度(T)；以分钟表示运行时间)。
Figure BDA0002282864750000101
SFC/MS方法
使用分析型超临界流体层析(SFC)系统来进行SFC测量，该系统由以下构成：用于递送二氧化碳(CO2)和改性剂的二元泵、自动进样器、柱烘箱、配备有经得起400巴的高压流动池的二极管阵列检测器。如果配置有质谱仪(MS)，来自该柱的流被引至该(MS)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间)以便获得允许鉴别化合物的标称单一同位素分子量(MW)的离子是在技术人员的知识内。
利用适宜软件进行数据采集。分析型SFC/MS方法(以mL/min表示流量；以℃表示柱温度(T)；以分钟表示运行时间，以巴表示背压(BPR)。
Figure BDA0002282864750000111
Figure BDA0002282864750000121
熔点
值是峰值或熔融范围，并且所获得的值具有通常与这种分析方法相关的实验不确定性。
DSC823e(指示为DSC)
对于多种化合物，熔点是用DSC823e(梅特勒-托利多(Mettler-Toledo))来确定的。使用10℃/分钟的温度梯度来测量熔点。最高温度是300℃。
旋光度：
在具有钠灯的铂金-埃尔默(Perkin-Elmer)341旋光计上测量旋光度并且报道如下：[α]°(λ，cg/100ml，溶剂，T℃)。
[α]λ T＝(100α)/(lxc):其中l是以dm计的路径长度，并且c是针对在温度T(℃)和波长λ(以nm计)下的样品的以g/100ml计的浓度。如果使用的光波长是589nm(钠D线)，那么可以改为使用符号D。始终应给出旋转符号(+或-)。当使用这一等式时，常常在旋转后的括号中提供浓度和溶剂。使用度报道旋转并且浓度不带单位的给出(将其假定为g/100ml)。
实验部分中使用的缩写
Figure BDA0002282864750000122
Figure BDA0002282864750000131
实例1：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(五氟-λ6-硫烷基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物1)的合成以及手性分离为对映异构体1A和1B。
中间体1a的合成：
向叔丁基4-溴丁酸酯[CAS 110661-91-1](42.3g，0.19mol)在DMF(600mL)中的机械搅拌溶液中分批添加3-氨基-5-甲氧基苯酚[CAS 162155-27-3](26.4g，0.19mol)和Cs2CO3(123.6g，0.379mol)的固体混合物。将该反应在60℃搅拌65h并且允许其达到室温。将该混合物倾入H2O(2.5L)中。将该产物用Et2O(2次)提取。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥并过滤。将该溶剂在减压下蒸发，并与甲苯共蒸发。将残余物通过正相HPLC(固定相：硅胶60A 25-40μm(默克公司)，流动相：梯度从20％ EtOAc、80％庚烷至60％ EtOAc、40％庚烷)纯化，产生叔丁基4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯1a(27g)。
中间体1b的合成：
在0℃，将BH3-吡啶(1.46mL，14.5mmol)缓慢添加至6-(五氟-λ6-硫烷基)-1H-吲哚[CAS 1379811-84-3](1.0g，4.11mmol)在EtOH(8.5mL)中的溶液中。缓慢添加5N HCl(7mL)。将混合物在0℃搅拌2h，并且允许逐渐加热至室温同时搅拌过夜。在冷却至0℃(冰浴)之后，逐滴添加50％NaOH(2mL)并继续搅拌15min。添加水(50mL)，并用Et2O/EtOAc 2/1提取产物。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将残余物通过硅胶(25g)快速层析使用庚烷/CH2Cl2 100/0至0/100的梯度进行纯化。将产物级分合并且在减压下蒸发。将残余物在真空下在45℃干燥以给出6-(五氟-λ6-硫烷基)吲哚啉1b(328mg)。
中间体1c的合成：
将给出的6-(五氟-l6-硫烷基)吲哚啉1b(328mg，1.34mmol)、2-(4-氯苯基)乙酸[CAS 1878-66-6](228mg，1.34mmol)、HATU(778mg，2.0mmol)和二异丙基乙基胺(663μL，4.0mmol)在CH3CN(15mL)中的混合物在室温下搅拌65h。该溶剂在减压下蒸发。将残余物溶解于2-Me-THF(50mL)中并且用1N HCl(25mL)和盐水洗涤。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将残余物通过硅胶(12g)快速层析使用庚烷/EtOAc 100/0至0/100的梯度进行纯化。将所希望的级分合并且在减压下蒸发。将产物从CH2Cl2/EtOAc中结晶，滤出，用EtOAc洗涤(3x)，并且在真空下在45℃干燥以提供2-(4-氯苯基)-1-(6-(五氟-λ6-硫烷基)吲哚啉-1-基)-乙酮1c(209mg)。将滤液在减压下蒸发。将残余物在Et2O(2mL)中搅拌，滤出，用Et2O洗涤(3x)，并且在真空下在45℃干燥以提供第二批的中间体1c(155mg)。
中间体1d的合成：
在-70℃，在N2流下，将在THF中的LiHMDS 1M(1.78mL，1.78mmol)逐滴添加至2-(4-氯苯基)-1-(6-(五氟-λ6-硫烷基)吲哚啉-1-基)乙酮1c(354mg，0.89mmol)在2-Me-THF(35mL)中的混合物中，并将混合物保持在-70℃持续30min。逐滴添加TMSCl(182μL，1.42mmol)。将混合物在-70℃搅拌30min，并逐滴添加N-溴代琥珀酰亚胺(198mg，1.11mmol)于THF(1.5mL)和2-Me-THF(5mL)的溶剂混合物中的溶液。在-78℃搅拌1h后，该反应用NH4Cl的饱和水溶液(50mL)淬灭。去除冷却浴并且将该反应混合物搅拌50min。添加水(10mL)并将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并将溶剂在减压下蒸发以给出2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(6-(五氟-λ6-硫烷基)吲哚啉-1-基)乙酮1d(424mg)，将其按原样用于下一步骤中。
化合物1的合成以及手性分离为对映异构体1A和1B：
将2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(6-(五氟-λ6-硫烷基)吲哚啉-1-基)乙酮1d(424mg，0.89mmol)、叔丁基4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯1a(260g，0.92mmol)和二异丙基乙胺(306μL，1.78mmol)于CH3CN(30mL)中的混合物在60℃下搅拌18h。允许反应混合物达到室温，并且倒入搅拌的水(150mL)中。将产物用Et2O提取(2x)。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将残余物通过硅胶(40g)快速层析，使用庚烷/EtOAc/EtOH 100/0/0至40/45/15的梯度进行纯化。将所希望的级分合并，在减压下蒸发，并且与二噁烷共蒸发。
将该残余物(602mg，含有58％的中间体1e)与4M HCl的二噁烷(4mL)溶液混合并将混合物在室温下搅拌5h。将固体滤出，用二噁烷(3x)和Et2O(2x)洗涤，并在真空下在45℃干燥以提供粗4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(五氟-λ6-硫烷基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物1，309mg)。外消旋化合物1的分析样品(60mg)经由制备型HPLC(固定相：RP
Figure BDA0002282864750000162
制备型C18 OBD-10μm，30x 150mm，流动相：0.25％NH4HCO3水溶液，CH3CN)进一步纯化。将纯的级分合并，并将有机挥发物在减压下蒸发。将剩余水溶液在减压下与邻二甲苯共蒸发。将该残余物溶解于CH3CN和水的溶剂混合物中，在减压下蒸发并与二噁烷共蒸发。将残余物从CH3CN(2mL)和水(0.8mL)的溶剂混合物中冻干以提供纯的呈粉末状的4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(五氟-λ6-硫烷基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物1，40mg)。
将化合物1的对映异构体(249mg)经由制备型手性SFC分离(固定相：
Figure BDA0002282864750000161
Diacel AD 20x 250mm，流动相：CO2，EtOH+0.4％iPrNH2)。将第一洗脱对映异构体的产物级分合并，在减压下蒸发，并且与MeOH共蒸发。将残余物在水(3.5mL)和MeOH(1mL)中搅拌，将固体滤出，用水/MeOH 4/1洗涤(3x)，并在真空下在45℃干燥以提供对映异构体1A(41mg)。将第二洗脱对映异构体的产物级分合并，在减压下蒸发，并且与MeOH共蒸发。将残余物在水(3mL)和MeOH(0.6mL)中搅拌，将固体滤出，用水/MeOH 4/1洗涤(3x)，并在真空下在45℃干燥以提供对映异构体1B(48mg)。
化合物1：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.86(quin,J＝6.8Hz,2H)2.33(t,J＝7.3Hz,2H)3.12-3.25(m,2H)3.61(s,3H)3.84(t,J＝6.5Hz,2H)3.99-4.13(m,1H)4.47-4.59(m,1H)5.57(d,J＝8.6Hz,1H)5.76(t,J＝2.1Hz,1H)5.91-5.96(m,2H)6.45(d,J＝8.6Hz,1H)7.39-7.50(m,3H)7.51-7.62(m,3H)8.58(d,J＝2.0Hz,1H)12.12(br s,1H)
LC/MS(方法LC-C)：Rt 1.09min,MH+621
对映异构体1A：
1H NMR(360MHz,DMSO-d6)δppm1.85(quin,J＝6.8Hz,2H)2.26(br t,J＝6.8Hz,2H)3.15-3.25(m,2H)3.61(s,3H)3.84(br t,J＝6.4Hz,2H)4.02-4.12(m,1H)4.48-4.60(m,1H)5.59(d,J＝8.8Hz,1H)5.76(t,J＝2.0Hz,1H)5.93(t,J＝2.0Hz,1H)5.96(t,J＝2.0Hz,1H)6.47(d,J＝8.4Hz,1H)7.42-7.47(m,3H)7.53-7.59(m,3H)8.58(d,J＝2.2Hz,1H)
LC/MS(方法LC-D)：Rt 1.99min,MH+621
[α]D 20：-44.6°(c0.28，DMF)
手性SFC(方法SFC-A)：Rt3.54min,MH+621，手性纯度97.9％。
对映异构体1B：
1H NMR(360MHz,DMSO-d6)δppm 1.86(quin,J＝6.8Hz,2H)2.33(t,J＝7.3Hz,2H)3.14-3.29(m,2H)3.61(s,3H)3.84(t,J＝6.4Hz,2H)4.01-4.11(m,1H)4.48-4.58(m,1H)5.58(d,J＝9.1Hz,1H)5.76(t,J＝2.0Hz,1H)5.93(t,J＝1.8Hz,1H)5.94-5.96(m,1H)6.48(d,J＝9.1Hz,1H)7.41-7.48(m,3H)7.52-7.61(m,3H)8.58(d,J＝2.2Hz,1H)12.13(br s,1H)
LC/MS(方法LC-D)：Rt1.98min,MH+621
[α]D 20：+46.0°(c0.265，DMF)
手性SFC(方法SFC-A)：Rt3.82min,MH+621，手性纯度99.0％。
实例2：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(4-甲基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物2)的合成以及手性分离为对映异构体2A和2B。
Figure BDA0002282864750000181
中间体2a的合成：
添加Pd/C(10％)(1.18g)至1-苄基-4-甲基-6-(三氟甲基)吲哚啉[CAS 1156512-79-6](11.8g，40.5mmol)在AcOH(11.8mL)和MeOH(118mL)中的溶液中。在室温将该反应在H2气氛下搅拌12h。将混合物经垫过滤并在减压下浓缩。将残余物用CH2Cl2吸收，用水、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(庚烷/EtOAc 9/1)进行纯化。将纯的级分合并，并将溶剂蒸发至干燥以给出8.2g的4-甲基-6-(三氟甲基)吲哚啉2a。
中间体2b的合成：
添加叔丁基4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯1a(2.94g，10.5mmol)至甲基2-溴-2-(4-氯苯基)乙酸酯[CAS 24091-92-7](2.51g，9.53mmol)在CH3CN(200mL)中的溶液中。添加二异丙基乙胺(2.46mL，14.3mmol)并将反应混合物在80℃搅拌过夜。将溶剂在减压下蒸发。将残余物溶解于CH2Cl2中并且用1N HCl洗涤。将有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发至干燥。该残余物通过硅胶(100g)柱层析，使用EtOAc:EtOH(3:1)/庚烷0/100至50/50的梯度进行纯化。将产物级分合并且在减压下蒸发，并将残余物在真空下在50℃干燥以提供呈黄色油的叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-甲氧基-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯2b(3.74g)。
中间体2c的合成：
将氢氧化锂(336mg，14.0mmol)添加至叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-甲氧基-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯2b(3.74g，7.02mmol)在水(25mL)、MeOH(25mL)和THF(75mL)的溶剂混合物中的溶液中并且将反应混合物在室温下搅拌5h。添加饱和NH4Cl水溶液(50mL)并且将有机挥发物在减压下蒸发。将该残余水溶液用1N HCl酸化至pH2并且用EtOAc提取两次。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤，并在减压下蒸发。将残余物在真空下在50℃干燥以给出呈黏稠棕色油的2-((3-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)-5-甲氧基苯基)氨基)-2-(4-氯苯基)乙酸2c(3.22g)。
中间体2d的合成：
将N,N-二异丙基乙胺(1.58mL，9.57mmol)添加至2-((3-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)-5-甲氧基苯基)氨基)-2-(4-氯苯基)乙酸2c(1.44g，3.19)和4-甲基-6-(三氟甲基)吲哚啉2a(953mg，3.51mmol)在无水DMF(30mL)中的溶液中。添加HATU(1.82mg，4.78mmol)并且将反应混合物在室温搅拌2小时。将反应混合物倒入水(400mL)中，并用EtOAc提取白色悬浮液。将水层通过添加NaCl来饱和，并再用EtOAc提取。将合并的有机层用盐水、水洗涤，经MgSO4干燥并且在减压下蒸发。将残余物通过硅胶(100g)柱层析，使用EtOAc:EtOH(3:1)/庚烷0/100至60/40的梯度进行纯化。将产物级分合并且在减压下蒸发。将残余物(1.41g)经由制备型HPLC(固定相：RP制备型C18 OBD-10μm，50x 150mm，流动相：0.25％NH4HCO3水溶液，CH3CN)进行纯化。将产物级分合并且在减压下蒸发以提供呈白色固体的叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(4-甲基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯2d(808mg)。
化合物2的合成以及手性分离为对映异构体2A和2B：
将叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(4-甲基-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯2d(808mg，1.28mmol)与二噁烷(9.6mL)中的4MHCl混合并将混合物在室温下搅拌15h。向该反应混合物鼓入氮气持续30min。在减压下蒸发溶剂以给出呈浅棕色固体的4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(4-甲基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物2，735mg)。将化合物2(735mg)的对映异构体经由制备型手性SFC分离(固定相：
Figure BDA0002282864750000201
Diacel OD 20x 250mm，流动相：CO2，EtOH+0.4％iPrNH2)。合并产物级分且在减压下蒸发以给出作为第一洗脱产物的对映异构体2A和作为第二洗脱产物的对映异构体2B。将这两种残余物与EtOAc和水混合。用1N HCl将混合物酸化至pH 1-2。分离各层并且用EtOAc提取水层两次。将合并的有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发。将残余物在真空下在50℃干燥以分别给出对映异构体2A(216mg)和对映异构体2B(184mg)。
化合物2：
1H NMR(360MHz,DMSO-d6)δppm1.87(br quin,J＝6.9Hz,2H)2.25(s,3H)2.33(brt,J＝7.1Hz,2H)3.07-3.20(m,2H)3.62(s,3H)3.84(br t,J＝6.4Hz,2H)3.97-4.09(m,1H)4.48-4.60(m,1H)5.57(br d,J＝8.8Hz,1H)5.76(t,J＝1.8Hz,1H)5.90-5.99(m,2H)6.43(br d,J＝8.8Hz,1H)7.25(s,1H)7.44(d,J＝8.4Hz,2H)7.56(br d,J＝8.4Hz,2H)8.22(s,1H)12.15(br s,1H)
LC/MS(方法LC-C)：Rt1.14min，MH+577
对映异构体2A：
1H NMR(360MHz,DMSO-d6)δppm1.87(quin,J＝6.8Hz,2H)2.25(s,3H)2.34(t,J＝7.3Hz,2H)3.05-3.23(m,2H)3.62(s,3H)3.85(t,J＝6.4Hz,2H)4.03(td,J＝10.2,7.3Hz,1H)4.54(td,J＝10.2,6.2Hz,1H)5.57(d,J＝8.8Hz,1H)5.76(t,J＝2.0Hz,1H)5.91-5.99(m,2H)6.42(d,J＝8.8Hz,1H)7.24(s,1H)7.44(d,J＝8.4Hz,2H)7.56(d,J＝8.8Hz,2H)8.22(s,1H)12.17(br s,1H)
LC/MS(方法LC-C)：Rt1.26min，MH+577
[α]D 20：-39.0°(c0.438，DMF)
手性SFC(方法SFC-B)：Rt5.11min，MH+577，手性纯度100％。
对映异构体2B：
1H NMR(360MHz,DMSO-d6)δppm1.88(quin,J＝6.9Hz,2H)2.25(s,3H)2.34(t,J＝7.3Hz,2H)3.06-3.24(m,2H)3.62(s,3H)3.85(t,J＝6.4Hz,2H)3.97-4.11(m,1H)4.55(td,J＝10.3,6.8Hz,1H)5.58(d,J＝8.4Hz,1H)5.77(t,J＝2.0Hz,1H)5.92-5.99(m,2H)6.43(d,J＝8.8Hz,1H)7.25(s,1H)7.41-7.50(m,2H)7.52-7.60(m,2H)8.23(s,1H)12.17(br s,1H)
LC/MS(方法LC-C)：Rt1.25min，MH+577
[α]D 20：+47.1°(c0.384，DMF)
手性SFC(方法SFC-B)：Rt8.00min，MH+577，手性纯度99.6％。
实例3：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-氟-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物3)的合成以及手性分离为对映异构体3A和3B。
Figure BDA0002282864750000211
中间体3a的合成：
在0℃，将BH3-吡啶(10.45mL，103.4mmol)缓慢添加至5-氟-6-(三氟甲基)-1H-吲哚[CAS 1493800-10-4](7.0g，34.5mmol)于EtOH(45mL)中的溶液中。逐滴添加6N HCl(105mL)同时保持温度低于10℃。将混合物在0℃搅拌3h。添加水并将该混合物用浓NaOH溶液碱化至pH8.5(温度低于20℃)。添加EtOAc。将有机层分离，用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并将该溶剂在减压下蒸发。添加甲苯并在在减压下去除(以消除痕量吡啶)。将残余物通过硅胶快速层析(20-45μm，120g，CH2Cl2/MeOH 98.5/1.5)进行纯化。将纯的级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出5-氟-6-(三氟甲基)吲哚啉3a(3.5g)。
中间体3b的合成：
将5-氟-6-(三氟甲基)吲哚啉3a(500mg，2.44mmol)、2-(4-氯苯基)乙酸[CAS1878-66-6](457mg，2.64mmol)、HATU(1.39g，3.66mmol)和二异丙基乙胺(1.2mL，7.31mmol)于DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌12h。将混合物倾倒于冰水中，过滤出沉淀，用CH2Cl2吸收，将有机层经MgSO4干燥并在减压下浓缩。将化合物从CH3CN中结晶并干燥以给出2-(4-氯苯基)-1-(5-氟-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮3b(854mg)。
中间体3c的合成：
在-78℃，在N2流下，将在THF中的LiHMDS 1M(4.78mL，4.78mmol)逐滴添加至2-(4-氯苯基)-1-(5-氟-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮3b(854mg，2.39mmol)在THF(7mL)中的混合物中。逐滴添加TMSCl(485μL，3.82mmol)。将混合物在-78℃搅拌15min，并逐滴添加N-溴代琥珀酰亚胺(510mg,2.87mmol)在THF(7mL)中的溶液。在-78℃搅拌2h后，将该反应用NH4Cl饱和水溶液淬灭。添加EtOAc并将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并将溶剂在减压下蒸发。将残余物通过硅胶快速层析(15-40μm，40g，CH2Cl2/庚烷50/50)进行纯化。将纯的级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(5-氟-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮3c(820mg)。
中间体3d的合成：
将2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(5-氟-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙酮3c(820mg，1.88mmol)、叔丁基4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯1a(528mg，1.88mmol)和二异丙基乙胺(388μL，2.25mmol)于CH3CN(20mL)中的混合物在70℃下搅拌4h。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物用EtOAc吸收。将有机层用1N的HCl溶液、水洗涤两次，经MgSO4干燥，过滤并将溶剂在减压下去除。将残余物通过硅胶快速层析(15-40μm，40g，CH2Cl2 100％)进行纯化。将纯的级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-氟-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)-丁酸酯3d(1.07g)。
化合物3的合成以及手性分离为对映异构体3A和3B：
将叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-氟-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯3d(1.07g，1.68mmol)在HCl(4M于二噁烷中)中的溶液(20mL)在5℃下搅拌3h并且在室温下搅拌12h。将沉淀物滤出，用二异丙醚洗涤并且干燥。将残余物经由反相层析(固定相：YMC-actus Triart-C18 10μm 30x 150mm，流动相：梯度从65％NH4HCO3 0.2％、35％CH3CN至25％NH4HCO3 0.2％、75％CH3CN)纯化以提供化合物3(540mg)。分析样品(30mg)经由反相层析(固定相：YMC-actus Triart-C18 10μm 30x150mm，流动相：从65％NH4HCO30.2 35％CH3CN至25％NH4HCO3 0.2％、75％CH3CN的梯度)进一步纯化以给出4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-氟-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物3，30mg，0.16H2O)。化合物3的剩余量(510mg)用于对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：Whelk O1 S,S 5μm 250x 30mm，流动相：60％CO2,40％MeOH)的手性分离。将第一洗脱对映异构体(250mg)通过硅胶快速层析(20-45μm，24g，CH2Cl2/MeOH 98/2)进一步纯化。将纯的级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以在庚烷/二异丙醚中进行固化后给出对映异构体3A(170mg)。将第二洗脱对映异构体(249mg)在庚烷/二异丙醚中进行固化以给出对映异构体3B(182mg)。
化合物3：
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm1.78-1.92(m,2H)2.26(br s,2H)3.15-3.31(m,2H)3.61(s,3H)3.84(br s,2H)4.02(br d,J＝7.88Hz,1H)4.54(br d,J＝5.99Hz,1H)5.58(brd,J＝8.51Hz,1H)5.76(br s,1H)5.90-5.99(m,2H)6.42(br d,J＝8.51Hz,1H)7.44(br d,J＝7.88Hz,3H)7.55(br d,J＝7.88Hz,2H)8.38(br d,J＝6.31Hz,1H)11.60-12.92(m,1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.94min，MH+581
熔点：206℃
对映异构体3A：
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm1.87(quin,J＝6.86Hz,2H)2.29-2.39(m,2H)3.18-3.30(m,2H)3.62(s,3H)3.85(t,J＝6.46Hz,2H)4.03(td,J＝10.25,7.25Hz,1H)4.54(td,J＝10.17,6.15Hz,1H)5.58(d,J＝8.51Hz,1H)5.76(s,1H)5.95(br d,J＝11.35Hz,2H)6.43(d,J＝8.83Hz,1H)7.43-7.48(m,3H)7.55(d,J＝8.51Hz,2H)8.39(d,J＝6.31Hz,1H)12.08-12.27(m,1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.95min，MH+581
[α]D 20：-48.9°(c0.315，DMF)
手性SFC(方法SFC-G)：Rt1.65min，MH+581，手性纯度100％。
对映异构体3B：
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm1.87(quin,J＝6.54Hz,2H)2.25-2.46(m,2H)3.15-3.31(m,2H)3.62(s,3H)3.85(br t,J＝6.31Hz,2H)3.98-4.07(m,1H)4.50-4.59(m,1H)5.58(br d,J＝8.83Hz,1H)5.76(s,1H)5.95(br d,J＝12.30Hz,2H)6.43(br d,J＝8.83Hz,1H)7.42-7.48(m,3H)7.56(br d,J＝8.20Hz,2H)8.39(br d,J＝6.31Hz,1H)11.40-12.54(m,1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.94min，MH+581
[α]D 20：+47.8°(c0.27，DMF)
手性SFC(方法SFC-G)：Rt2.14min，MH+581，手性纯度99.43％。
实例4：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(4-甲基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物4)的合成以及手性分离为对映异构体4A和4B。
Figure BDA0002282864750000241
中间体4a的合成：
向2-甲基-4-(三氟甲氧基)苯胺[CAS 86256-59-9](10.0g，52.3mmol)于二噁烷(20mL)中的溶液中添加三氟乙酸酐(8mL，57.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1h。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物分配于EtOAc与1N HCl之间。分离各相。将有机相用在水中的NaHCO3的饱和溶液、H2O和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到呈白色粉末的14.7g的2,2,2-三氟-N-(2-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺4a。将该化合物用于下一步骤中而无需进一步纯化。
中间体4c的合成：
向在0℃冷却的乙酸酐(11.4mL，61.1mmol)中逐滴添加70％硝酸(3.9mL)。分部分添加2,2,2-三氟-N-(2-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺4a(5g，17.4mmol)，并将反应混合物在55℃加热12h。在冷却至室温之后，将该反应混合物用EtOAc稀释并用H2O洗涤。将有机相用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物溶解于甲醇(46mL)中。添加2M K2CO3(23mL，46mmol)，并将该反应混合物在70℃加热4h。添加另外2M K2CO3(10mL，20mmol)并将该反应混合物在70℃加热12h。将该反应混合物在减压下部分浓缩以去除甲醇。将残余物用EtOAc提取。将有机相用H2O和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。将残余物通过使用在庚烷中EtOAc(20％至50％)的梯度硅胶快速层析进行纯化以得到3.6g的呈黄色固体的2-甲基-6-硝基-4-(三氟甲氧基)苯胺4c。
中间体4d的合成：
向2-甲基-6-硝基-4-(三氟甲氧基)苯胺4c(1.8g，7.69mmol)于乙酸(10.9mL)中的溶液中逐滴添加亚硝酸钠(0.806g，11.7mmol)于H2SO4/H2O(2mL，1/1)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌30min。添加H2O(22mL)和尿素(0.802g,13.4mmol)。在室温10min之后，逐滴添加碘化钾(1.7g，10.2mmol)在H2O(11mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌30min。将黄色固体过滤出，用H2O洗涤并干燥以给出2.4g的2-碘-1-甲基-3-硝基-5-(三氟甲氧基)苯4d。
中间体4e的合成：
向2-碘-1-甲基-3-硝基-5-(三氟甲氧基)苯4d(3.5g，10.0mmol)于EtOH(30mL)中的溶液中添加NH4Cl(2.7g，49.9mmol)于H2O(30mL)中的溶液。将该反应混合物在50℃加热。添加铁(2.6g，46.9mmol)并将该反应混合物在回流下加热40min。在冷却至室温之后，将该反应混合物通过
Figure BDA0002282864750000251
过滤。将固体用EtOH洗涤。将滤液在减压下部分浓缩以去除EtOH。将残余物在EtOAc与在水中的NaHCO3的饱和溶液之间分配。分离各相。将有机相用H2O和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。将残余物通过使用在庚烷中EtOAc(0％至25％)的梯度硅胶快速层析进行纯化以得到2.9g的呈黄色油的2-碘-3-甲基-5-(三氟甲氧基)苯胺4e。
中间体4f的合成：
将2-碘-3-甲基-5-(三氟甲氧基)苯胺4e(2.9g，9.1mmol)在三乙胺(23mL)中的溶液用氩气脱气15min。添加二氯双(三苯基膦)钯(II)(0.327g，0.47mmol)、碘化亚铜(I)(0.164g，0.86mmol)和三甲基甲硅烷基乙炔(1.8mL，13.1mmol)。将反应混合物在65℃下加热12h。在冷却至室温之后，将该反应混合物用H2O稀释并用EtOAc(3x)提取。将有机相合并，用H2O和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过使用在庚烷中EtOAc(0％至20％)的梯度硅胶快速层析进行纯化以得到2.6g的呈橙色油的3-甲基-5-(三氟甲氧基)-2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺4f。
中间体4g的合成：
向3-甲基-5-(三氟甲氧基)-2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺4f(2.7g，9.3mmol)于NMP(27mL)中的溶液中添加tBuOK(3.1g，27.8mmol)。将反应混合物在80℃下加热4h。在冷却至室温之后，将该反应混合物用H2O稀释并用EtOAc提取(2x)。将有机相合并，用H2O和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过使用在庚烷中EtOAc(0％至20％)的梯度硅胶快速层析进行纯化以得到1.7g的呈橙色油的4-甲基-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚4g。
中间体4h的合成：
在0℃，将BH3-吡啶(1.2mL，11.6mmol)逐滴添加至4-甲基-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚4g(0.5g，2.32mmol)于EtOH(3mL)中的溶液中。缓慢地逐滴添加6N HCl(6mL)，同时保持反应温度低于10℃。将混合物在0℃搅拌3h。添加水(12mL)并将该混合物用在水中的NaOH浓溶液碱化直至pH8-9(维持反应温度低于20℃)。将混合物用EtOAc提取。将有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并将该溶剂在减压下蒸发。添加甲苯并将该溶液在减压下浓缩以给出450mg的4-甲基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉4h。
中间体4i的合成：
将N,N-二异丙基乙胺(1.58mL，9.57mmol)添加至2-((3-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)-5-甲氧基苯基)氨基)-2-(4-氯苯基)乙酸2c(1.44g，3.19)和4-甲基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉4h(846mg，3.51mmol)于无水DMF(30mL)中的溶液中。添加HATU(1.82mg，4.78mmol)并且将反应混合物在室温搅拌2小时。将反应混合物倒入水(400mL)中，并用EtOAc提取白色悬浮液。将水层通过添加NaCl来饱和，并再用EtOAc提取。将合并的有机层用盐水、水洗涤，经MgSO4干燥并且在减压下蒸发。将残余物通过硅胶(100g)柱层析，使用EtOAc:EtOH(3:1)/庚烷0/100至60/40的梯度进行纯化。将产物级分合并且在减压下蒸发。将残余物(1.47g)经由制备型HPLC(固定相：RP
Figure BDA0002282864750000271
制备型C18 OBD-10μm，50x 150mm，流动相：0.25％NH4HCO3水溶液，CH3CN)进行纯化。将产物级分合并且在减压下蒸发以提供呈白色固体的叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(4-甲基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯4i(821mg)。
化合物4的合成以及手性分离为对映异构体4A和4B：
将叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(4-甲基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯4i(821mg，1.27mmol)与二噁烷(9.5mL)中的4M HCl混合并将混合物在室温下搅拌15h。向该反应混合物鼓入氮气持续30min。在减压下蒸发溶剂以给出呈灰白色固体的4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(4-甲基-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物4，750mg)。将化合物4(750mg)的对映异构体经由制备型手性SFC分离(固定相：
Figure BDA0002282864750000272
Diacel OD 20x 250mm，流动相：CO2，EtOH+0.4％iPrNH2)。合并产物级分且在减压下蒸发以给出作为第一洗脱产物的对映异构体4A和作为第二洗脱产物的对映异构体4B。将这两种残余物与EtOAc和水混合。用1N HCl将混合物酸化至pH 1-2。分离各层并且用EtOAc提取水层两次。将合并的有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发。将该残余物在真空下在50℃干燥以分别给出对映异构体4A(213mg)和对映异构体4B(194mg)。
化合物4：
1H NMR(360MHz,DMSO-d6)δppm1.87(quin,J＝7.0Hz,2H)2.20(s,3H)2.33(t,J＝7.1Hz,2H)2.98-3.16(m,2H)3.61(s,3H)3.84(t,J＝6.4Hz,2H)4.04(td,J＝10.4,7.0Hz,1H)4.53(td,J＝10.3,6.4Hz,1H)5.56(d,J＝9.1Hz,1H)5.76(t,J＝2.0Hz,1H)5.91-5.98(m,2H)6.45(d,J＝8.8Hz,1H)6.87(s,1H)7.38-7.47(m,2H)7.50-7.61(m,2H)7.89(s,1H)12.18(br s,1H)
LC/MS(方法LC-C)：Rt 1.14min，MH+593
对映异构体4A：
1H NMR(360MHz,DMSO-d6)δppm1.87(quin,J＝6.9Hz,2H)2.20(s,3H)2.34(t,J＝7.3Hz,2H)2.98-3.16(m,2H)3.62(s,3H)3.85(t,J＝6.4Hz,2H)4.05(td,J＝10.4,7.0Hz,1H)4.53(td,J＝10.3,6.4Hz,1H)5.56(d,J＝8.8Hz,1H)5.76(t,J＝1.8Hz,1H)5.91-5.99(m,2H)6.45(d,J＝8.8Hz,1H)6.88(s,1H)7.38-7.49(m,2H)7.51-7.61(m,2H)7.89(s,1H)12.17(br s,1H)
LC/MS(方法LC-C)：Rt 1.29min，MH+593
[α]D 20：-39.6°(c0.455，DMF)
手性SFC(方法SFC-C)：Rt 3.34min，MH+593，手性纯度100％。
对映异构体4B：
1H NMR(360MHz,DMSO-d6)δppm1.88(quin,J＝6.9Hz,2H)2.20(s,3H)2.34(t,J＝7.1Hz,2H)2.98-3.16(m,2H)3.62(s,3H)3.85(t,J＝6.4Hz,2H)4.05(td,J＝10.3,7.1Hz,1H)4.53(td,J＝10.2,6.6Hz,1H)5.56(d,J＝8.8Hz,1H)5.76(t,J＝1.8Hz,1H)5.92-5.99(m,2H)6.46(d,J＝8.8Hz,1H)6.88(s,1H)7.38-7.49(m,2H)7.50-7.63(m,2H)7.89(s,1H)12.16(br s,1H)
LC/MS(方法LC-C)：Rt1.30min，MH+593
[α]D 20：+43.7°(c0.38，DMF)
手性SFC(方法方法SFC-C)：Rt3.16min，MH+593，手性纯度100％。
实例5：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-氟-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物5)的合成以及手性分离为对映异构体5A和5B。
Figure BDA0002282864750000291
中间体5a的合成：
用冰浴将4-溴-2-氟-1-(三氟甲氧基)苯[CAS 105529-58-6](98.7g，381.1mmol)于浓H2SO4(98％，200mL)中的溶液冷却至0℃。将KNO3(43.0g，425.3mmol)分部分添加。在添加之后，去除冰浴并将混合物在室温搅拌16h。将该反应混合物倾倒入冰水中(2mL)同时搅拌。将该混合物用CH2Cl2(3x 500mL)提取。将合并的有机层用饱和的水性NaHCO3溶液(2x500mL)、盐水(500mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到1-溴-5-氟-2-硝基-4-(三氟甲氧基)苯5a(117.2g)，将其用于下个步骤而无需进一步纯化。
中间体5b的合成：
在N2-气氛下，向1-溴-5-氟-2-硝基-4-(三氟甲氧基)苯5a(70.0g，230mmol)和NH4Cl(123.2g，2.30mol)于iPrOH(1L)和水(330mL)中的搅拌的悬浮液中添加还原铁粉末(64.3g，1.15mol)。将反应混合物在60℃搅拌16h。将该反应混合物用EtOAc(1L)稀释并经
Figure BDA0002282864750000292
过滤。将滤液在减压下浓缩。将残余物在EtOAc(1L)与水(800mL)之间分配。将各层分离并将有机相用盐水(1L)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过在减压下蒸馏进行纯化(油泵，b.p.60℃至64℃)。获得呈黄色油的2-溴-4-氟-5-(三氟甲氧基)苯胺5b(47.3g)。
中间体5c的合成：
向2-溴-4-氟-5-(三氟甲氧基)苯胺5b(18.4g，67.2mmol)和乙炔基(三甲基)硅烷(19.9g，202.4mmol，28.00mL)于Et3N(300mL)中的混合物中添加CuI(1.28g，6.72mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(2.40g，3.42mmol)。将该反应混合物在N2-气氛下在90℃加热16h。在冷却至室温之后，将混合物用MTBE(300mL)稀释并且通过过滤。将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶快速层析(220g二氧化硅快速柱，洗脱液：在石油醚中0％至5％EtOAc的梯度，100mL/min)进行纯化。获得呈棕色油的4-氟-5-(三氟甲氧基)-2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺5c(16.1g，90％纯度)。
中间体5d的合成：
在N2-气氛下，将4-氟-5-(三氟甲氧基)-2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺5c(16.1g，55.3mmol)和tBuOK(18.6g，165.8mmol)于NMP(220.00mL)中的混合物在90℃加热16h。在冷却至室温之后，将反应混合物倾倒进冰水(1L)中并用MTBE(3x 300mL)提取。将合并的有机相用水(2x 200mL)、盐水(300mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶快速层析(
Figure BDA0002282864750000304
120g
Figure BDA0002282864750000305
二氧化硅快速柱，洗脱液：在石油醚中0％至5％EtOAc的梯度，85mL/min)进行纯化以得到呈深绿色油的5-氟-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚5d(11g)产物。将残余物与另一个级分合并(总量＝17.2g)并通过在减压下蒸馏(油泵，b.p.60℃至64℃)进一步纯化以提供呈无色油的5-氟-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚5d(14.7g，95％纯度)。
中间体5e的合成：
在0℃，将BH3-吡啶(13.8mL，136.9mmol)逐滴添加至5-氟-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚5d(6g，27.4mmol)于EtOH(40mL)中的溶液中。逐滴添加6N HCl(90mL)同时保持温度低于10℃。将混合物在0℃搅拌2h。添加水(100mL)并将该混合物用在水中的NaOH浓溶液碱化至pH 8-9(维持反应温度低于20℃)。将该混合物用CH2Cl2提取。将有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并将该溶剂在减压下蒸发。添加甲苯并将溶液在减压下浓缩以给出5.52g的5-氟-6-(三氟甲氧基)吲哚啉5e。将该化合物不经进一步纯化即用于下一反应步骤中。
中间体5f的合成：
向2-溴-2-(4-氯苯基)乙酸[CAS 3381-73-5](0.61g，2.4mmol)、5-氟-6-(三氟甲氧基)吲哚啉5e(0.55g，2.2mmol)和DMAP(0.027g，0.22mmol)于CH2Cl2(14mL)中的混合物添加EDCI(0.51g，2.7mmol)。将混合物在室温搅拌18h。将该混合物用10％K2CO3水溶液稀释。倾析各层。将有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并将溶剂在减压下浓缩以给出2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(5-氟-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮5f(1.1g，紫色油)。将该化合物用于下一步骤中而无需进一步纯化。
中间体5g的合成：
将2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(5-氟-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮5f(1.1g，2.2mmol)、叔丁基4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯1a(1.0g，3.3mmol)和二异丙基乙胺(1.5mL，8.7mmol)于CH3CN(29mL)中的混合物在80℃下搅拌18h。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物通过硅胶快速层析(30μm，40g，庚烷/EtOAc梯度85/15至75/25)进行纯化。将含有预期的化合物的级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-氟-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯5g(480mg，57％的纯度，通过LC/MS)。
化合物5的合成以及手性分离为对映异构体5A和5B：
将叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-氟-6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯5g(0.48g，0.42mmol，57％纯度)在HCl(4M于二噁烷中)中的混合物(4.6mL)在室温下搅拌18h。将该混合物在减压下浓缩，吸收于Et3N(5mL)并在真空中再次浓缩。将残余物通过硅胶快速层析(30μm，24g，CH2Cl2/MeOH梯度99/1至96/4)进行纯化。将纯的级分合并并且蒸发至干。将残余物(150mg)经由反相HPLC(固定相：YMC-actusTriart-C18 10μm 30x 150mm，流动相：从65％NH4HCO3 0.2％、35％CH3CN至25％NH4HCO30.2％、75％CH3CN的梯度)进一步纯化以给出4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-氟-6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物5，71mg)。经由手性SFC(固定相：
Figure BDA0002282864750000321
OD-H 5μm250x 20mm，流动相：55％CO2、45％MeOH)分离对映异构体(55mg)以从CH3CN/水的溶剂混合物冷冻干燥后给出第一洗脱对映异构体5A(25mg，白色固体)和第二洗脱对映异构体5B(25mg，白色固体)。
化合物5：
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm1.86(quin,J＝6.70Hz,2H)2.24-2.43(m,2H)3.06-3.25(m,2H)3.61(s,3H)3.84(br t,J＝6.31Hz,2H)3.94-4.13(m,1H)4.46-4.57(m,1H)5.56(br d,J＝8.83Hz,1H)5.75(s,1H)5.93(s,1H)5.95(s,1H)6.45(br d,J＝8.83Hz,1H)7.44(br d,J＝8.20Hz,3H)7.54(br d,J＝8.20Hz,2H)8.16(br d,J＝6.62Hz,1H)12.12(br s,1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 3.00min，MH+597
对映异构体5A：
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm1.86(quin,J＝6.94Hz,2H)2.25-2.44(m,2H)3.06-3.26(m,2H)3.61(s,3H)3.84(t,J＝6.46Hz,2H)4.05(td,J＝10.32,7.09Hz,1H)4.48-4.55(m,1H)5.56(d,J＝8.83Hz,1H)5.76(t,J＝1.89Hz,1H)5.94(br d,J＝11.98Hz,2H)6.45(d,J＝8.83Hz,1H)7.42-7.46(m,3H)7.54(d,J＝8.20Hz,2H)8.16(br d,J＝6.94Hz,1H)12.01(br s,1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt3.00min，MH+597
[α]D 20：-35.8°(c0.257，DMF)
手性SFC(方法SFC-H)：Rt1.34min，MH+597，手性纯度100％。
对映异构体5B：
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm1.85(quin,J＝6.86Hz,2H)2.27(t,J＝7.25Hz,2H)3.10-3.31(m,2H)3.61(s,3H)3.78-3.90(m,2H)4.05(td,J＝10.40,7.25Hz,1H)4.52(td,J＝10.32,6.46Hz,1H)5.57(d,J＝8.83Hz,1H)5.75(t,J＝1.89Hz,1H)5.94(br d,J＝16.39Hz,2H)6.45(d,J＝8.83Hz,1H)7.41-7.46(m,3H)7.55(d,J＝8.51Hz,2H)8.16(br d,J＝6.94Hz,1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt3.00min，MH+597
[α]D 20：+52.8°(c0.231，DMF)
手性SFC(方法SFC-H)：Rt3.14min，MH+597，手性纯度100％。
实例6：4-(3-((1-(4-氟-2-甲氧基苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物6)的合成以及手性分离为对映异构体6A和6B。
Figure BDA0002282864750000331
中间体6a的合成：
将6-(三氟甲氧基)吲哚啉[CAS 959235-95-1](2g，9.84mmol)、2-(4-氟-2-甲氧基苯基)乙酸[CAS 886498-61-9](2.17g，10.8mmol)、HATU(5.62g，14.8mmol)和二异丙基乙胺(4.9mL，29.5mmol)于DMF(20mL)中的混合物在室温下搅拌3h。添加水和冰并将沉淀物过滤出并干燥以给出2-(4-氟-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮6a(3.44g)。
中间体6b的合成：
在-78℃，在N2流下，将LiHMDS(18.7mL，18.7mmol)逐滴添加至2-(4-氟-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮6a(3.44g，9.32mmol)于THF(45mL)中的混合物中。逐滴添加TMSCl(1.42mL，11.2mmol)。将混合物在-78℃搅拌15min，并逐滴添加在THF(35mL)中的N-溴代琥珀酰亚胺(1.83g，10.2mmol)。在-78℃搅拌2h后，将该反应用饱和NH4Cl溶液淬灭。将该混合物用EtOAc提取，经MgSO4干燥，过滤并将溶剂在减压下浓缩以给出2-溴-2-(4-氟-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮6b(4.48g)。将没有进一步纯化的该粗化合物用于下一个步骤中。
中间体6c的合成：
将2-溴-2-(4-氟-2-甲氧基苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮6b(2.0g，4.46mmol)、叔丁基4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯1a(1.26g，4.46mmol)和二异丙基乙胺(1.15mL，6.69mmol)于CH3CN(45mL)中的混合物在80℃下搅拌5h。将反应混合物在减压下浓缩。将残余物通过硅胶快速层析(15-40μm，40g，庚烷/EtOAc 85/15)进行纯化。将含有预期的化合物的级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出叔丁基4-(3-((1-(4-氟-2-甲氧基苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯6c(1.6g，67％的纯度，通过LC/MS)。
化合物6的合成以及手性分离为对映异构体6A和6B：
将叔丁基4-(3-((1-(4-氯-2-甲氧基苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯6c(1.5g，2.31mmol)在HCl(4M于二噁烷中)(15mL)中的溶液在5℃下搅拌2h并且在室温下搅拌3h。将该溶剂在减压下浓缩并添加3N NaOH直至获得中性pH。将溶液用EtOAc提取。将有机层经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶快速层析(20-45μm，40g，CH2Cl2/MeOH梯度99.5/0.5至95/5)进行纯化。将纯的级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以提供化合物6(646mg)。将小级分从CH3CN/二异丙醚中结晶以给出4-(3-((1-(4-氟-2-甲氧基苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物6，35mg)。将剩余量(600mg)用于经由手性SFC(固定相：
Figure BDA0002282864750000341
OD-H 5μm 250x 20mm，流动相：60％CO2、40％MeOH)的对映异构体的手性分离。以提供作为第一洗脱产物的对映异构体6A和作为第二洗脱产物的对映异构体6B。将两种对映异构体通过硅胶快速层析(20-45μm,12g、CH2Cl2/MeOH梯度100/0至95/5)进一步纯化。将纯的级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以在二异丙醚/戊烷(+几滴CH3CN)中固化后分别给出对映异构体6A(108mg)和对映异构体6B(108mg)。
化合物6：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.87(quin,J＝6.82Hz,2H)2.33(t,J＝7.33Hz,2H)3.08-3.27(m,2H)3.61(s,3H)3.78-3.91(m,5H)3.92-4.02(m,1H)4.33-4.42(m,1H)5.59(d,J＝8.59Hz,1H)5.75(s,1H)5.87(br d,J＝7.07Hz,2H)6.39(br d,J＝8.59Hz,1H)6.78(td,J＝8.46,2.27Hz,1H)6.94-7.02(m,2H)7.29-7.35(m,2H)8.03(s,1H)12.14(br s,1H)
LC/MS(方法LC-B)：Rt 2.76min，MH+593
熔点：164℃
对映异构体6A：
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm1.87(quin,J＝6.78Hz,2H)2.31-2.47(m,2H)3.10-3.28(m,2H)3.62(s,3H)3.80-3.93(m,5H)3.93-4.06(m,1H)4.33-4.44(m,1H)5.59(br d,J＝8.51Hz,1H)5.76(s,1H)5.88(br d,J＝8.83Hz,2H)6.39(br d,J＝8.83Hz,1H)6.79(td,J＝8.43,2.05Hz,1H)6.95-7.04(m,2H)7.30-7.37(m,2H)8.03(s,1H)12.16(br s,1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.86min，MH+593
[α]D 20：-37.3°(c0.255,DMF)
手性SFC(方法SFC-I)：Rt 1.03min，MH+593，手性纯度100％。
对映异构体6B：
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm1.87(quin,J＝6.86Hz,2H)2.30-2.45(m,2H)3.09-3.26(m,2H)3.62(s,3H)3.80-3.93(m,5H)3.93-4.06(m,1H)4.33-4.44(m,1H)5.59(br d,J＝8.51Hz,1H)5.76(s,1H)5.88(br d,J＝8.83Hz,2H)6.39(br d,J＝8.51Hz,1H)6.79(td,J＝8.43,2.05Hz,1H)6.95-7.04(m,2H)7.30-7.37(m,2H)8.03(br s,1H),12.18(br s,1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt 2.88min,MH+593
[α]D 20：+32.7°(c0.294,DMF)
手性SFC(方法SFC-I)：Rt 1.82min，MH+593，手性纯度99.56％。
实例7：4-(3-((1-(4-氯苯基)-1-氘-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物7-D)的合成以及手性分离为对映异构体7A-D和7B-D
Figure BDA0002282864750000361
(1)对映异构体7A的手性中心(*)的绝对立体化学尚未确定
中间体7a的合成：
将6-(三氟甲氧基)吲哚啉[CAS959235-95-1](2g，9.84mmol)、2-(4-氯苯基)乙酸[CAS1878-66-6](1.85g，10.8mmol)、HATU(5.6g，14.8mmol)和二异丙基乙胺(4.9mL，29.5mmol)于DMF(40mL)中的混合物在室温下搅拌12h。添加水并且将该沉淀过滤出。将残余物用EtOAc吸收。将有机溶液用10％的K2CO3水溶液、盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并将该溶剂在减压下蒸发。将残余物通过硅胶层析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc梯度90/10至60/40)进行纯化。将纯的级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮7a(3g)。
中间体7b的合成：
在-78℃，在N2流下，将在THF中的LiHMDS1.5M(11.2mL，16.9mmol)逐滴添加至2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮7a(3g，8.43mmol)于THF(50mL)的混合物中。将混合物在-78℃搅拌15min，并逐滴添加N-溴代琥珀酰亚胺(1.65g，9.3mmol)于THF(30mL)中的溶液。在-78℃搅拌2h后，将该反应用NH4Cl饱和溶液淬灭。将混合物用EtOAc提取。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并将溶剂在减压下蒸发以给出2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮7b(3.6g)。将该化合物原样用于下个步骤中。
中间体7c的合成：
将2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙酮7b(3.6g，8.3mmol)、叔丁基4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯1a(2.3g，8.3mmol)和二异丙基乙胺(1.7mL，9.94mmol)于CH3CN(80mL)中的混合物在70℃下搅拌4h。将该混合物在减压下浓缩，用EtOAc稀释，并且用1N HCl和水洗涤。将有机相分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将该化合物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，120g，庚烷/EtOAc 80/20)进行纯化。将纯的级分合并，并蒸发至干以在从二异丙醚结晶后给出叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟-甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯7c(2.6g)。
化合物7的合成以及手性分离为对映异构体7A和7B：
将叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)-吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯7c(2.4g，3.8mmol)在HCl(4M于二噁烷)(24mL)中的溶液在5℃搅拌3h并在室温下搅拌3h。将沉淀物过滤出并干燥以得到呈HCl盐的4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物7，2g,0.8当量HCl，0.07当量H2O)。在手性分离之前通过用1NNaOH处理化合物7(HCl盐)溶液来中和化合物7(2g，HCl盐)并将有机层在减压下蒸发。将对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：
Figure BDA0002282864750000371
OD-H 5μm 250x 30mm，流动相：50％CO2,50％iPrOH(+0.3％iPrNH2))进行分离，并经由制备型非手性SFC(固定相：
Figure BDA0002282864750000372
6μm 150x 21.2mm，流动相：80％CO2,20％MeOH(+0.3％iPrNH2))进一步纯化。将产物级分合并且在减压下蒸发。将两种对映异构体用EtOAc吸收并用1N HCl洗涤。将有机层分离，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将第一洗脱对映异构体从乙醚/二异丙醚进行固化以给出对映异构体7A(616mg)。将第二洗脱对映异构体从乙醚/二异丙醚进行固化以给出对映异构体7B(715mg)。
化合物7：
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm1.87(quin,J＝6.9Hz,2H)2.34(t,J＝7.3Hz,2H)3.07-3.28(m,2H)3.62(s,3H)3.85(t,J＝6.5Hz,2H)4.04(td,J＝10.5,7.1Hz,1H)4.52(td,J＝10.3,6.5Hz,1H)5.57(s,1H)5.76(t,J＝2.2Hz,1H)5.90-6.00(m,2H)7.01(dd,J＝8.2,1.6Hz,1H)7.33(d,J＝8.2Hz,1H)7.41-7.48(m,2H)7.55(d,J＝8.5Hz,2H)8.03(s,1H)
LC/MS(方法LC-B)：Rt2.70min，MH+579
熔点：150℃
对映异构体7A:
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm1.87(quin,J＝6.7Hz,2H)2.34(br t,J＝7.3Hz,2H)3.08-3.27(m,2H)3.62(s,3H)3.85(br t,J＝6.3Hz,2H)3.99-4.11(m,1H)4.47-4.57(m,1H)5.57(br s,1H)5.76(s,1H)5.95(br d,J＝10.1Hz,2H)6.45(br s,1H)7.01(br d,J＝7.6Hz,1H)7.34(br d,J＝7.9Hz,1H)7.44(br d,J＝8.5Hz,2H)7.55(br d,J＝8.2Hz,2H)8.04(br s,1H)12.12(br s,1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.95min，MH+579
[α]D 20：-48.5°(c0.27，DMF)
手性SFC(方法SFC-D)：Rt1.13min，MH+579，手性纯度100％。
对映异构体7B:
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm1.87(br t,J＝6.8Hz,2H)2.34(br t,J＝7.3Hz,2H)3.09-3.27(m,2H)3.62(s,3H)3.85(br t,J＝6.1Hz,2H)3.99-4.10(m,1H)4.46-4.59(m,1H)5.57(s,1H)5.76(br s,1H)5.95(br d,J＝10.1Hz,2H)6.45(br s,1H)7.01(br d,J＝7.9Hz,1H)7.34(br d,J＝7.9Hz,1H)7.44(br d,J＝8.2Hz,2H)7.55(br d,J＝8.2Hz,2H)8.04(br s,1H)12.12(br s,1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.94min，MH+579
[α]D 20：+42.9°(c0.28，DMF)
手性SFC(方法SFC-D)：Rt2.13min，MH+579，手性纯度100％。
氘化化合物7-D的合成以及手性分离为对映异构体7A-D和7B-D：
在室温下一次性添加乙酸铜(II)(241mg，1.33mmol)至对映异构体7A(384mg，0.663mmol)于CH3CN(15mL)中的溶液中。将该反应混合物在密封管中在微波辐射下在130℃加热2h。将该反应混合物在减压下蒸发置干燥并将该残余物用CH2Cl2和水吸收。分离各层。将水层再次用CH2Cl2提取。将合并的有机层用盐水和水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下蒸发。将含有粗中间体7d的残余物溶解于MeOH(20mL)中。添加氰基硼氘化钠(349mg，5.31mmol)和两滴乙酸并将该反应混合物在室温下搅拌55h。添加另外的氰基硼氘化钠(48mg，0.663mmol)和几滴乙酸并将该反应混合物在室温下搅拌7h。将溶剂在减压下蒸发。将该残余物与水和Et2O混合。将双相系统通过添加1N HCl酸化至pH 1-2。分离各层。将水层再次用Et2O提取。将合并的有机层经MgSO4干燥并将溶剂在减压下蒸发。将该残余物在50℃在真空下干燥以给出呈白色固体的外消旋4-(3-((1-(4-氯苯基)-1-氘-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物7-D，242mg)。
化合物7-D的对映异构体(242mg)经由制备型SFC(固定相：Kromasil(R,R)Whelk-O1 10/100，流动相：CO2、EtOH+0.4％iPrNH2)分离。合并产物级分且在减压下蒸发以提供作为第一洗脱产物的对映异构体7A-D和作为第二洗脱产物的对映异构体7B-D。将两种对映异构体在Et2O和水中混合。将混合物用1N HCl酸化至pH 1-2。将各层分离并将该水层用Et2O提取两次。将合并的有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，在减压下蒸发并在50℃在真空下干燥以给出呈灰白色固体的对映异构体7A-D(85mg，根据1H HMR，92％氘化)和对映异构体7B-D(77mg，根据1H HMR，92％氘化)。
对映异构体7A-D:
1H NMR(360MHz,DMSO-d6)δppm1.87(quin,J＝7.0Hz,2H)2.34(t,J＝7.1Hz,2H)3.07-3.25(m,2H)3.61(s,3H)3.84(t,J＝6.4Hz,2H)4.05(td,J＝10.3,7.1Hz,1H)4.52(td,J＝10.3,6.4Hz,1H)5.76(t,J＝2.0Hz,1H)5.92-5.98(m,2H)6.45(s,1H)7.01(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H)7.33(d,J＝8.1Hz,1H)7.39-7.49(m,2H)7.51-7.60(m,2H)8.03(s,1H)12.17(brs,1H)
LC/MS(方法LC-C)：Rt 1.13min，MH+580
[α]D 20：+54.2°(c0.41，DMF)
手性SFC(方法SFC-E)：Rt 5.51min，MH+580，手性纯度100％。
对映异构体7B-D:
1H NMR(360MHz,DMSO-d6)δppm1.87(quin,J＝6.9Hz,2H)2.34(t,J＝7.3Hz,2H)3.07-3.25(m,2H)3.61(s,3H)3.84(t,J＝6.6Hz,2H)4.05(td,J＝10.4,7.3Hz,1H)4.52(td,J＝10.3,6.4Hz,1H)5.76(t,J＝2.0Hz,1H)5.92-5.98(m,2H)6.45(s,1H)7.01(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H)7.33(d,J＝8.1Hz,1H)7.40-7.49(m,2H)7.51-7.62(m,2H)8.03(s,1H)12.16(brs,1H)
LC/MS(方法LC-C)：Rt 1.10min，MH+580
[α]D 20：-50.1°(c0.459，DMF)
手性SFC(方法SFC-E)：Rt 6.10min，MH+580，手性纯度100％。
实例8：4-(3-((1-(4-氯-2-(2-羟乙氧基)苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物8)的合成。
Figure BDA0002282864750000401
中间体8a的合成：
在10℃，向2-(4-氯-2-羟基苯基)乙酸乙基酯[CAS 1261826-30-5](5.2g，24.2mmol)和碳酸铯(15.8g，48.5mmol)于DMF(90mL)中的混合物中添加(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷[CAS 86864-60-0](6.26mL，29.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。添加水并且将该混合物用EtOAc提取。将有机相经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶快速层析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 80/20)进行纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下去除以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酸乙基酯8a(7.8g)。
中间体8b的合成：
向1M双(三甲基甲硅烷基)胺基锂于THF(41.8mL，41.8mmol)中的冷却的(-70℃)溶液中添加乙基2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酸酯8a(7.8g，20.9mmol)于THF(45mL)中的溶液。在-70℃搅拌之后1h之后，添加三甲基氯硅烷(4.24mL，33.5mmol)。将该反应混合物在-70℃下搅拌15min。添加在THF(45mL)中的N-溴代琥珀酰亚胺(4.46g，25.1mmol)并在-55℃继续搅拌2h。将该反应混合物倾倒进H2O中并用EtOAc提取两次。将有机层合并，经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩以给出乙基2-溴-2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酸酯8b(10.1g)，将其用于下个步骤而无需进一步纯化。
中间体8c的合成：
将乙基2-溴-2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酸酯8b(2.0g，4.429mmol)、叔丁基4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯1a(1.62g，5.76mmol)和二异丙基乙胺(1.53mL，8.86mmol)于CH3CN(40mL)中的混合物在50℃搅拌12h。将该反应混合物在减压下浓缩。将残余物通过硅胶快速层析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc梯度85/15至60/40)进行纯化。将纯的级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出叔丁基4-(3-((1-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)-氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)-丁酸酯8c(1.1g)。
中间体8d的合成：
在10℃，将在水(7.5mL)中的氢氧化锂一水合物(142mg，3.37mmol)逐滴添加至叔丁基4-(3-((1-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-乙氧基)-4-氯苯基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯8c(1.1g，1.69mmol)于THF/CH3OH(1/1)(15mL)中的溶液中。将该反应在室温搅拌5h，用水稀释并冷却至0℃。将溶液用0.5N HCl缓慢酸化至pH6-7，并用EtOAc提取。将有机层经MgSO4干燥，过滤并将溶剂在减压下浓缩以给出2-((3-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)-5-甲氧基苯基)氨基)-2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酸8d(675mg)。将该化合物无需进一步纯化用于下一步骤。
中间体8e的合成：
向2-((3-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)-5-甲氧基苯基)氨基)-2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酸8d(675mg，1.08mmol)于DMF(6mL)中的溶液添加HATU(617mg，1.62mmol)、二异丙基乙胺(536μL，3.24mmol)和6-(三氟甲氧基)吲哚啉[CAS 959235-95-1](220mg，1.08mmol)。将反应混合物在室温下搅拌7天。将该反应混合物用水稀释。将沉淀物过滤出，用水洗涤并用EtOAc吸收。将有机层用10％K2CO3溶液和水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并将溶剂在减压下浓缩以给出叔丁基4-(3-((1-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯8e(385mg)。将该化合物无需进一步纯化用于下个反应步骤。
中间体8f的合成：
在N2流下，在5℃，将HCl(4M于二噁烷中)(1.19mL，4.76mmol)逐滴添加至叔丁基4-(3-((1-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-乙氧基)-4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯8e(385mg，0.476mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中。将反应在室温下搅拌1h。将混合物冷却至0℃，用10％的K2CO3水性溶液碱化并用EtOAc提取。将有机相分离，经MgSO4干燥，过滤并将溶剂在减压下浓缩。将残余物通过硅胶快速层析(15μm-40μm，24g，CH2Cl2/MeOH 99/1)进行纯化。将纯的级分合并，并将溶剂在减压下去除以给出甲基4-(3-((1-(4-氯-2-(2-羟乙氧基)苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯8f(99mg)。
化合物8的合成：
在10℃，将在水(2.5mL)中的氢氧化锂一水合物(32mg，0.76mmol)逐滴添加至甲基4-(3-((1-(4-氯-2-(2-羟乙氧基)苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯8f(99mg，0.152mmol)于THF(2.5mL)中的溶液中。该反应物在室温下搅拌18h，并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶快速层析(20-45μm，12g，CH2Cl2/MeOH梯度99/1至90/10)进行纯化。将含有预期的化合物的级分合并，并将溶剂在减压下去除。经由反相HPLC(固定相：YMC-actus Triart-C18 10μm 30x 150mm，流动相：梯度从65％NH4HCO3 0.2％、35％CH3CN至25％NH4HCO3 0.2％、75％CH3CN)进行第二纯化以在从水/CH3CN(8/2)的混合物冷冻干燥后给出4-(3-((1-(4-氯-2-(2-羟乙氧基)苯基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物8，16mg)。
化合物8：
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm1.86(quin,J＝6.86Hz,2H)2.28-2.47(m,2H)3.10-3.27(m,2H)3.61(s,3H)3.68-3.88(m,4H)4.06-4.23(m,3H)4.39(td,J＝10.09,6.62Hz,1H)5.70-5.76(m,2H)5.91(br d,J＝9.14Hz,2H)6.44(d,J＝8.83Hz,1H)6.99-7.03(m,2H)7.12(d,J＝1.89Hz,1H)7.34(d,J＝8.20Hz,2H)8.02(s,1H)
LC/MS(方法LC-B)：Rt 2.65min，MH+639
实例9：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物9)的合成。
Figure BDA0002282864750000441
中间体9a的合成：
将2-氯-6-甲基-3-(三氟甲基)吡啶[CAS 1099597-74-6](4.8g，24.6mmol)于甲醇钠中(25％于MeOH中)(24mL，105mmol)的悬浮液在室温下搅拌60h。将混合物倾倒于冰水中并用Et2O提取两次。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以给出2-甲氧基-6-甲基-3-(三氟甲基)吡啶9a(4.69g)。产物以原样用于下一步骤中。
中间体9b的合成：
逐滴添加HNO3(2.32mL，49.1mmol)至冷却的(0℃)2-甲氧基-6-甲基-3-(三氟甲基)吡啶9a(4.69g，24.5mmol)于H2SO4(63.3mL，1.128mol)中的溶液。将反应混合物在50℃搅拌60h，将反应混合物小心地倾倒入冰水中并将混合物在0℃下搅拌30min。将所得固体过滤并用水洗涤以给出呈白色固体的2-甲氧基-6-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶9b(4.38g)。
中间体9c的合成：
在N2气氛下，将2-甲氧基-6-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)吡啶9b(4.38g，18.5mmol)溶解于无水DMF(84mL)中。添加DMF-DMA(12.2mL，91.5mmol)，并将反应混合物在120℃加热4h。在冷却到室温后，将混合物在减压下浓缩并将固体残余物通过硅胶(120g)柱层析使用石油醚/EtOAc的梯度从100/0至60/40)进行纯化。将纯的级分合并，并将溶剂在减压下去除以给出呈红色固体的(E)-2-(6-甲氧基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-N,N-二甲基氨基9c(4.5g)。
中间体9d的合成：
在N2气氛下，将(E)-2-(6-甲氧基-3-硝基-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)-N,N-二甲基氨基9c(4.5g，15.5mmol)溶解于甲苯(87mL)中。添加硅胶(4.64g)、铁粉末(8.63g，154.5mmol)和乙酸(35.4mL)并将该反应混合物在90℃下搅拌2h。将反应混合物经
Figure BDA0002282864750000451
过滤并且将固体用EtOAc冲洗几次。将合并的滤液蒸发并该残余物通过硅胶柱层析(石油醚/EtOAc梯度100/0至65/35)进行纯化以给出呈黄色固体的5-甲氧基-6-(三氟甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶9d(3.1g)。
中间体9e的合成：
在N2气氛下，将5-甲氧基-6-(三氟甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶9d(2.04g，9.44mmol)溶解于无水CH2Cl2(90mL)中。添加DMAP(123mg，1.01mmol)和Boc2O(2.49g，11.4mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌30min，在减压下浓缩并将该残余物通过硅胶柱快速层析(石油醚/EtOAc梯度100/0至96/4)进行纯化以给出呈白色固体的叔丁基5-甲氧基-6-(三氟甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-甲酸酯9e(2.95g)。
中间体9f的合成：
将叔丁基5-甲氧基-6-(三氟甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-甲酸酯9e(1.45g，4.59mmol)溶解于EtOH(30mL)并将该反应物用氮气吹扫。将Pd/C(10％)(976mg，0.917mmol)添加至该反应混合物在50℃氢化过夜。将反应混合物冷却至室温并经过滤。将滤饼用EtOH进行洗涤并且将滤液在减压下浓缩。该残余物通过在硅胶柱快速层析(石油醚/EtOAc梯度100/0至95/5)进行纯化以给出呈白色固体的叔丁基5-甲氧基-6-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-甲酸酯9f(1.2g)。
中间体9g的合成：
将叔丁基5-甲氧基-6-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-甲酸酯9f(1.2g,3.77mmol)于TFA/CH2Cl2(1/1)(19mL)中的溶液在室温下搅拌1h。将该反应混合物用CH2Cl2(60mL)稀释，用饱和Na2CO3水溶液(60mL)和盐水(60mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩。该残余物通过硅胶柱快速层析(40g，石油醚/EtOAc梯度80/20至40/60)进行纯化以给出呈黄色固体的5-甲氧基-6-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶9g(745mg)。
中间体9h的合成：
在N2气氛下，将5-甲氧基-6-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶9g(350mg，1.60mmol)溶解于无水CH2Cl2(6.5mL)中。添加DMAP(28mg，0.229mmol)和2-溴-2-(4-氯苯基)乙酸[CAS 3381-73-5](460mg，1.84mmol)。添加EDCI(383mg，1.998mmol)并且将反应混合物在室温搅拌1h。将反应混合物用CH2Cl2稀释，冷却至0℃并添加K2CO3的饱和水溶液。将各层分离并将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。该残余物通过硅胶柱快速层析(40g，石油醚/EtOAc梯度100/0至60/40)进行纯化。在硅胶(40g，甲苯/Et2O梯度100/0至90/10)上进行第二纯化。进行第三纯化(12g，甲苯/Et2O梯度98/2至97/3)。将纯的级分合并，并在减压下浓缩以给出呈淡绿色泡沫的2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)乙酮9h(407mg)。
中间体9i的合成：
在N2气氛下，将2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)乙酮9h(400mg，0.89mmol)和叔丁基4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯1a(300mg，1.07mmol)溶解于无水CH3CN(40mL)中。添加二异丙基乙胺(232μL，1.33mmol)并且将反应混合物在70℃下加热36h。将该反应混合物用20mL的EtOAc稀释，并用1M HCl和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩。该残余物通过硅胶柱快速层析(40g，甲苯/EtOAc梯度100/0至94/6)进行纯化。通过硅胶柱层析(2x12g，石油醚/丙酮梯度100/0至95/5)进行第二纯化。将纯的级分合并，并在减压下浓缩以给出呈白色泡沫的叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯9i(341mg)。
化合物9的合成：
在N2气氛下，将叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯9i(341mg，0.525mmol)溶解于HCl(4M于二噁烷中)(6.62mL)中。将反应物在室温下搅拌3h。将混合物在减压下浓缩。该残余物通过硅胶柱快速层析(40g，甲苯/EtOAc/AcOH梯度99/0/1至50/49/1)进行纯化。在硅胶(2x 12g，CH2Cl2/MeOH/AcOH梯度99/0/1至96/3/1)上进行第二纯化。在硅胶(12g，CH2Cl2/MeOH/AcOH梯度98/1/1至96.5/2.5/1)上进行第三纯化。将纯的级分合并，并在减压下浓缩以给出呈白色固体的4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-1-基)-2-氧代乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物9，72mg)。
化合物9：
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 1.84-1.91(m,2H)2.30-2.37(m,2H)3.21-3.30(m,2H)3.62(s,3H)3.80-3.89(m,2H)3.94(s,3H)3.98-4.12(m,1H)4.56(td,J＝10.64,6.15Hz,1H)5.58(d,J＝8.83Hz,1H)5.76(t,J＝1.89Hz,1H)5.95(br d,J＝10.72Hz,2H)6.40(d,J＝8.83Hz,1H)7.44(d,J＝8.51Hz,2H)7.56(d,J＝8.51Hz,2H)8.53(s,1H)12.06-12.26(m,1H)
LC/MS(方法LC-A)：Rt2.87min，MH+594
实例10：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(2-(三氟甲基)-5,6-二氢-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯-4-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物10)的合成以及手性分离为对映异构体10A和10B。
Figure BDA0002282864750000471
中间体10a的合成：
在N2气氛下，将乙基2-(3-氨基-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)乙酸酯[CAS 860398-39-6](1.49g，5.88mmol)于CH3CN(40mL)中的溶液在室温下搅拌。添加NaHCO3(0.544g,6.47mmol)和2-(4-氯苯基)乙酰氯[CAS 25026-34-0](861μL，5.88mmol)，并将该反应混合物在室温下搅拌100min。将该混合物倾倒于搅拌的H2O(200mL)中并用Et2O(2x 100mL)提取。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发。将残余物通过使用庚烷/EtOAc 100/0至80/20的梯度硅胶快速层析(50g)进行纯化。将所希望的级分合并，在减压下蒸发并与甲苯共蒸发以提供乙基2-(3-(2-(4-氯苯基)乙酰胺基)-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)乙酸酯10a(1.15g)。
中间体10b的合成：
将LiBH4 2M于THF中的溶液(2.59mL，5.18mmol)缓慢添加至乙基2-(3-(2-(4-氯苯基)乙酰胺基)-5-(三氟甲基)噻吩-2-基)乙酸酯10a(1.05g，2.59mmol)于2-Me-THF(20mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在室温下搅拌18h。将混合物倾倒于H2O(100mL)和Et2O(100mL)的搅拌混合物中。逐滴添加1N HCl(10mL)(发泡)，并在搅拌15分钟后分离各层。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并在减压下蒸发。将残余物通过使用庚烷/iPrOH100/0至50/50的梯度硅胶快速层析(25g)进行纯化。将所希望的级分合并，在减压下蒸发，并与甲苯共蒸发。将该残余物在甲苯(6mL)中在45℃搅拌15分钟，在室温下滤出，用甲苯洗涤(3x)，并在50℃在真空下干燥以提供2-(4-氯苯基)-N-(2-(2-羟乙基)-5-(三氟甲基)噻吩-3-基)乙酰胺10b(1.15g)。
中间体10c的合成：
在N2气氛下，将三苯基膦(1.02g，3.85mmol)添加到2-(4-氯苯基)-N-(2-(2-羟乙基)-5-(三氟甲基)噻吩-3-基)乙酰胺10b(1.0g，2.75mmol)于THF(20mL)中的搅拌溶液中。添加偶氮二甲酸二叔丁酯(0.71g，3.02mmol)并且将反应混合物在室温搅拌20小时。将挥发物在减压下蒸发并将该残余物通过硅胶(25g)快速层析使用庚烷/CH2Cl2/庚烷0/100至100/0的梯度进行纯化。将所希望的级分合并，并在减压下浓缩至约15mL的残余体积。允许产物在4天的时间内结晶。将固体滤出，用庚烷洗涤(4x)并在50℃在真空下干燥以提供2-(4-氯苯基)-1-(2-(三氟甲基)-5,6-二氢-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯-4-基)乙酮10c(0.75g)。
中间体10d的合成：
在-75℃，在N2流下，将在THF中LiHMDS 1M(4.34mL，4.34mmol)逐滴添加至2-(4-氯苯基)-1-(2-(三氟甲基)-5,6-二氢-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯-4-基)乙酮10c(750mg，2.17mmol)于2-Me-THF(30mL)中的混合物中并将混合物置于-75℃持续20min。逐滴添加TMSCl(444μL，3.47mmol)。将混合物在-75℃搅拌20min，并逐滴添加N-溴代琥珀酰亚胺(502mg，2.82mmol)于THF(5mL)中的溶液。在-75℃搅拌20min后，将该反应用NH4Cl饱和水溶液(25mL)淬灭。去除冷却浴，并将该反应混合物搅拌直至该反应温度达到-15℃。添加水(25mL)和DIPE(25mL)并将混合物搅拌10min。将有机层分离，并用Et2O提取水相。将有机层合并，经MgSO4干燥，过滤并将溶剂在减压下蒸发以给出2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(2-(三氟甲基)-5,6-二氢-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯-4-基)乙酮10d(921mg)，将其按原样用于下一步骤中。
中间体10e的合成：
将2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(2-(三氟甲基)-5,6-二氢-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯-4-基)乙酮10d(921mg，2.17mmol)、叔丁基4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯1a(1.22g，4.34mmol)和二异丙基乙胺(747μL，4.34mmol)于2-丁醇(15mL)中的混合物在45℃搅拌2h。允许该反应混合物达到室温，并且倒入搅拌的水(50mL)中。将产物用Et2O提取(2x)。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤，并将溶剂在减压下蒸发并与二噁烷共蒸发(2x)。将残余物通过硅胶(40g)快速层析，使用庚烷/EtOAc/EtOH 100/0/0至40/45/15的梯度进行纯化。将所希望的级分合并，在减压下蒸发，并且与二噁烷(2x)共蒸发以提供叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(2-(三氟甲基)-5,6-二氢-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯-4-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯10e(1.36g)，将其按原样用于下一步骤中。
化合物10的合成以及手性分离成对映异构体10A和10B：
将叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(2-(三氟甲基)-5,6-二氢-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯-4-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯10e(1.36g，2.17mmol)于二噁烷中的4M HCl(15mL)混合并将混合物在室温下搅拌20h。将固体滤出，用二噁烷洗涤(3x)，并在真空下在50℃干燥。将残余物(1.4g)经由制备型HPLC(固定相：RP
Figure BDA0002282864750000491
制备型C18OBD-10μm，50x 150mm，流动相：0.25％NH4HCO3水溶液，CH3CN)进行纯化。将所希望的级分合并，并将有机挥发物在减压下蒸发。将剩余水溶液用Et2O/2-Me-THF(2/1)的溶剂混合物提取(2x)。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并在减压下蒸发以提供粗4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(2-(三氟甲基)-5,6-二氢-4H-噻吩并[3,2-b]吡咯-4-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物10，0.54g)。将分析样品(40mg)溶解于搅拌的Et2O(1mL)中并添加在二噁烷中的4M HCl(250μL)。搅拌2min后，将产物滤出，用Et2O/二噁烷(4/1)洗涤(3x)，并在真空下在50℃干燥以提供化合物10(20mg)。
将化合物10(500mg)的对映异构体经由制备型手性SFC分离(固定相：
Figure BDA0002282864750000501
Diacel IC 20x 250mm，流动相：CO2，EtOH)。将第一洗脱对映异构体的产物级分合并且在减压下蒸发并通过硅胶(12g)快速层析使用庚烷/EtOAc:EtOH:AcOH 100/0:0:0至60/30:9.8:0.2的梯度进行纯化。将所希望的级分合并，在减压下蒸发并与DCM共蒸发。将该残余物在真空下在50℃干燥以提供对映异构体10A(164mg)。将第二洗脱对映异构体的产物级分合并且在减压下蒸发并通过硅胶(12g)快速层析使用庚烷/EtOAc:EtOH:AcOH 100/0:0:0至60/30:9.8:0.2的梯度进行纯化。将所希望的级分合并，在减压下蒸发并与DCM共蒸发。将该残余物在真空下在50℃干燥以提供对映异构体10B(167mg)。
化合物10：
1H NMR(360MHz,DMSO-d)δppm1.87(t,J＝6.8Hz,2H),2.31-2.37(m,2H),3.26-3.38(m,2H),3.62(s,3H),3.84(br t,J＝6.4Hz,2H),4.29(td,J＝10.5,6.8Hz,1H),4.79(td,J＝10.2,6.2Hz,1H),5.49(s,1H),5.76(t,J＝2.0Hz,1H),5.91-5.97(m,2H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),7.54(d,J＝8.8Hz,2H),7.76(s,1H)
LC/MS(方法LC-D)：Rt 1.93min，MH+569
对映异构体10A：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.83-1.91(m,2H),2.30-2.36(m,2H),3.23-3.30(m,2H),3.62(br s,3H),3.85(br s,2H),4.30(m,J＝9.5Hz,1H),4.79(m,J＝6.8Hz,1H),5.48(br d,J＝8.8Hz,1H),5.76(br s,1H),5.94(br d,J＝9.0Hz,2H),6.35(br d,J＝8.1Hz,1H),7.43(br d,J＝7.3Hz,2H),7.54(br d,J＝8.1Hz,2H),7.76(br s,1H),12.10(br s,1H)
LC/MS(方法LC-C)：Rt1.03min，MH+569
[α]D 20：+36.9°(c0.4445，DMF)
手性SFC(方法SFC-F)：Rt5.52min，MH+569，手性纯度100％。
对映异构体10B：
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.83-1.91(m,2H),2.34(br t,J＝6.8Hz,2H),3.23-3.30(m,2H),3.62(s,3H),3.85(br t,J＝5.9Hz,2H),4.25-4.35(m,1H),4.75-4.83(m,1H),5.48(br d,J＝8.4Hz,1H),5.76(br s,1H),5.94(br d,J＝8.8Hz,2H),6.35(br d,J＝8.4Hz,1H),7.43(br d,J＝7.7Hz,2H),7.54(br d,J＝7.9Hz,2H),7.76(s,1H),12.11(br s,1H)
LC/MS(方法LC-C)：Rt1.03min，MH+569
[α]D 20：-39.1°(c0.437，DMF)
手性SFC(方法SFC-F)：Rt6.98min，MH+569，手性纯度97％。
实例11：4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-((三氟甲基)硫代)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物11)的合成
Figure BDA0002282864750000511
中间体11a的合成：
在0℃，向NaH(26.5g，663mmol，60％在油中)于THF(100mL)中的悬浮液中分批添加6-溴-1H-吲哚[CAS 52415-29-9](100g，510mmol)。将该反应物在15℃搅拌30min。冷却至0℃后，添加SEMCl(93.6g，561mmol，99.5mL)。将该反应混合物在15℃搅拌16h并倾倒于饱和氯化铵水溶液(200mL)中。将混合物用乙酸乙酯(300mL)稀释。分离各层，并将水层用乙酸乙酯(2x 200mL)提取。将合并的有机层用盐水(500mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。将该残余物通过硅胶柱层析使用石油醚进行纯化。将产物级分合并且在减压下蒸发以得到呈黄色油的6-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚11a(134g)。
中间体11b的合成：
在N2气氛下，将6-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚11a(134g，411mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-二(1,3,2-二氧杂戊硼烷)(158.5g，624mmol)、Pd(dppf)Cl2(15.02g，20.5mmol)和KOAc(161.2g，1.64mol)于1,4-二噁烷(1.5L)中的混合物在100℃搅拌5h。将该反应物冷却至25℃并通过垫过滤。将溶剂在减压下蒸发并将该残余物通过硅胶柱快速层析(石油醚/乙酸乙酯梯度100/0至50/1)进行纯化。将产物级分合并且在减压下蒸发以得到呈淡黄色油的6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚11b(104g)。
中间体11c的合成：
向6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚11b(52g，139mmol)于丙酮(2.4L)和H2O(2.4L)中的溶液中添加NaIO4(119g，557mmol)和NH4OAc(53.7g,696mmol)。将该反应混合物在25℃搅拌16小时。在相同的规模重复该反应(52g的化合物11b)并将两种反应的反应混合物合并用于处理。将沉淀物滤出并将溶剂(丙酮)在减压下去除。添加乙酸乙酯(5L)并将有机层分离。将水层用乙酸乙酯(3x 5L)进行提取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩以得到呈黑棕色固体的(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-6-基)硼酸11c(85g)，将其无需进一步纯化用于下一步骤中。
中间体11d的合成：
在N2气氛下，将TMSCF3(207.5g，1.46mol)、CuSCN(10.7g，87.6mmol)、S8(224.6g，875.6mmol)、(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚-6-基)硼酸11c(85g，292mmol)、Ag2CO3(161g，584mmol)、K3PO4(186g，876mmol)、1,10-菲咯啉(31.6g，175mmol)和
Figure BDA0002282864750000521
分子筛(85g)于DMF(1L)中的混合物在25℃搅拌16小时。将该反应混合物通过
Figure BDA0002282864750000522
垫过滤。将滤液用MTBE(1L)稀释，用水(3x 500mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。该残余物通过硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯100/1)进行纯化。将产物级分合并且在减压下蒸发以得到呈淡黄色油的6-((三氟甲基)硫代)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚11d(38g)。
中间体11e的合成：
向6-((三氟甲基)硫代)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲哚11d(38g，109mmol)于THF(1.5L)中的溶液中添加TBAF.3H2O(345g，1.09mol)和乙烷-1,2-二胺(131.45g，2.19mol)。将反应混合物在70℃搅拌16h。将反应混合物冷却至25℃并倾倒于饱和NaHCO3水溶液(3L)中。将水性混合物用乙酸乙酯(3x 1L)提取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Phenomenex Gemini C18250x 50mm 10μm，流动：水(0.05％氢氧化铵v/v)，CH3CN)进行纯化以给出呈灰白色固体的6-((三氟甲基)硫代)-1H-吲哚11e(10.1g)。
中间体11f的合成：
将6-((三氟甲基)硫代)-1H-吲哚11e(1.0g，4.6mmol)和硼烷二甲硫醚络合物(7mL)的混合物在密封管中在75℃加热5h。允许该反应混合物达到室温并逐滴添加至搅拌的MeOH(30mL)(放热)。在添加之后，将所得溶液在回流下加热3h。将溶剂在减压下蒸发并将该残余物通过硅胶(25g)快速层析使用庚烷/CH2Cl2 100/0至40/60的梯度进行纯化。将所希望的级分合并，在减压下蒸发，并且与二噁烷共蒸发。将产物在真空下在50℃干燥以提供6-((三氟甲基)硫代)吲哚啉11f(0.79g)。
中间体11g的合成：
在N2气氛下，搅拌6-((三氟甲基)硫代)吲哚啉11f(0.79g，3.6mmol)于CH3CN(30mL)的溶液。添加NaHCO3(0.333g，3.96mmol)并将该反应混合物在冰浴上冷却。添加2-(4-氯苯基)乙酰氯[CAS 25026-34-0](0.852g，4.51mmol)于CH3CN(20mL)中的溶液并将该反应混合物在室温下搅拌16h。将混合物倾倒于搅拌的H2O(100mL)中。将沉淀物滤出并用水(4x10mL)洗涤。将固体在Et2O/庚烷(3/2)(20mL)中搅拌，滤出，用Et2O/庚烷(3/2)(2x 10mL)洗涤并在真空下在50℃干燥以提供2-(4-氯苯基)-1-(6-((三氟甲基)硫代)吲哚啉-1-基)乙酮11g(1.033g)。
中间体11h的合成：
在-78℃，在N2流下，将在THF中的LiHMDS 1M(5.56mL，5.56mmol)逐滴添加至2-(4-氯苯基)-1-(6-((三氟甲基)硫代)吲哚啉-1-基)乙酮11g(1.033mg，2.78mmol)于2-Me-THF(40mL)中的混合物中并将混合物置于-78℃持续20min。逐滴添加TMSCl(568μL，4.45mmol)。将混合物在-78℃搅拌35min，并逐滴添加N-溴代琥珀酰亚胺(643mg，3.61mmol)在THF(8mL)中的溶液。在-78℃搅拌35min后，将该反应用NH4Cl饱和水溶液(30mL)淬灭。去除冷却浴，并将该反应混合物搅拌直至该反应物达到室温。添加水(30mL)和DIPE(30mL)并将混合物搅拌20min。将有机层分离，用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并将溶剂在减压下蒸发以给出2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(6-((三氟甲基)硫代)吲哚啉-1-基)乙酮11h(1.25g)，将其按原样用于下一步骤中。
中间体11i的合成：
将2-溴-2-(4-氯苯基)-1-(6-((三氟甲基)硫代)吲哚啉-1-基)乙酮11h(1.25mg，2.78mmol)、叔丁基4-(3-氨基-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯1a(1.56g，5.56mmol)和二异丙基乙胺(957μL，5.56mmol)于2-丁醇(25mL)中的混合物在45℃搅拌16h。允许该反应混合物达到室温，并且倒入搅拌的水(100mL)中。将产物用CH2Cl2提取(2x)。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在减压下蒸发溶剂。将残余物通过硅胶(40g)快速层析，使用庚烷/EtOAc/EtOH 100/0/0至70/20/10的梯度进行纯化。将所希望的级分合并且在减压下蒸发以提供叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-((三氟甲基)硫代)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯11i(2.0g)，将其按原样用于下一步骤中。
化合物11的合成：
将叔丁基4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-((三氟甲基)硫代)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸酯11i(1.81g，2.78mmol)与二噁烷中的4M HCl(20mL)混合并将混合物在室温下搅拌3.5h。将固体滤出，用二噁烷(3x)和Et2O(20mL)洗涤。将固体溶解于CH2Cl2(100mL)并与水(50mL)和饱和Na2CO3水溶液(30mL)混合。在搅拌15min之后，分离各层。将有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下蒸发。将残余物经由制备型HPLC(固定相：RP
Figure BDA0002282864750000541
制备型C18 OBD-10μm，30x 150mm，流动相：0.25％NH4HCO3水溶液，CH3CN)进行纯化。蒸发CH3CN并将残余水溶液用1NHCl酸化至pH3。将产物用EtOAc(100mL)提取。将有机层用盐水(50mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，在减压下蒸发并与CH2Cl2共蒸发以给出4-(3-((1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(6-((三氟甲基)硫代)吲哚啉-1-基)乙基)氨基)-5-甲氧基苯氧基)丁酸(化合物11，164mg)。
化合物11：
1H NMR(360MHz,DMSO-d6)δppm1.87(quin,J＝7.1Hz,2H)2.25-2.38(m,2H)3.16-3.27(m,2H)3.62(s,3H)3.81-3.87(m,2H)3.95-4.08(m,1H)4.44-4.56(m,1H)5.57(br d,J＝8.8Hz,1H)5.74-5.77(m,1H)5.90-5.98(m,2H)6.47(br d,J＝8.8Hz,1H)7.34-7.40(m,2H)7.41-7.48(m,2H)7.51-7.59(m,2H)8.39(s,1H)12.16(br s,1H)
LC/MS(方法LC-C)：Rt 1.12min，MH+595
表：如上文描述的制备化合物
Figure BDA0002282864750000551
Figure BDA0002282864750000571
Figure BDA0002282864750000591
本发明的化合物的抗病毒活性
DENV-2抗病毒测定
本发明的所有化合物的抗病毒活性针对DENV-2 16681株进行测试，该毒株用增强型绿色荧光蛋白标记(eGPF)。培养基由补充有2％热灭活的胎牛血清、0.04％庆大霉素(50mg/mL)以及2mML-谷氨酰胺的最低必需培养基组成。将获自ECACC的Vero细胞悬浮于培养基中，并且将25μL添加至384孔板(2500个细胞/孔)，这些板已经含有抗病毒化合物。通常，这些板包含测试化合物的9个稀释步骤的5倍连续稀释液，在于100％DMSO(200nL)中的最终浓度的200倍下。此外，一式四份地测试每一化合物浓度(对于多数活性化合物而言，最终浓度范围：25μM-0.000064μM或2.5μM-0.0000064μM)。最后，每个板包含被指定为病毒对照(在不存在化合物的情况下包含细胞和病毒)、细胞对照(在不存在病毒和化合物的情况下包含细胞)和培养基对照(在不存在细胞、病毒和化合物的情况下包含培养基)的孔。向被指定为培养基对照的这些孔添加25μL的培养基而不是Vero细胞。一旦细胞被添加到这些板，就将这些板在室温下孵育30分钟以便允许这些细胞在这些孔内均匀地分布。接着，将这些板在一个完全润湿的孵育箱(37℃，5％CO2)中孵育直到第二天。然后，以0.5的感染复数(MOI)添加用eGFP标记的DENV-2株16681。因此，将15μL的病毒悬浮液添加至所有含有测试化合物的孔中并且添加至被指定为病毒对照的孔中。并行地，将15μL的培养基添加至培养基对照和细胞对照。接着，将这些板在一个完全润湿的孵育箱(37℃，5％CO2)中孵育3天。在读出当天，使用自动化荧光显微镜在488nm(蓝色激光)下测量eGFP荧光。使用内部LIMS系统，计算每种化合物的抑制剂量反应曲线并且测定半最大有效浓度(EC50)。因此，使用以下公式来计算每一测试浓度的抑制百分比(I)：I＝100*(ST-SCC)/(SVC-SCC)；ST、SCC和SVC分别是测试化合物孔、细胞对照孔和病毒对照孔中的eGFP信号的量。EC50表示如通过相较于病毒对照的eGFP荧光强度的50％降低所测量，病毒复制被抑制50％的化合物的浓度。使用线性内插法计算EC50(表1)。
并行地，在相同板上评定这些化合物的毒性。一旦进行eGFP信号的读出，就将40μL的ATPlite(一种细胞存活力染色剂)添加至384孔板的所有孔。ATP存在于所有代谢活性细胞中，并且当细胞经历坏死或凋亡时，浓度下降非常迅速。ATPLite测定系统是基于通过ATP与添加的荧光素酶和萤虫素反应引起的光的产生。将这些板在室温下孵育10分钟。接着，在ViewLux上测量这些板。还测定了半最大细胞毒性浓度(CC50)，其被定义为使发光信号相较于细胞对照孔的发光信号降低50％所需的浓度。最后，测定这些化合物的选择性指数(SI)，该指数如下计算：SI＝CC50/EC50。
表1：在DENV-2抗病毒测定中本发明的化合物的EC50、CC50和SI
Figure BDA0002282864750000611
N＝对这些化合物进行测试的独立实验的数目。
四价逆转录酶定量-PCR(RT-qPCR)测定
在RT-qPCR测定中测试本发明的化合物针对DENV-1毒株TC974#666(NCPV)、DENV-2毒株16681、DENV-3毒株H87(NCPV)和DENV-4毒株H241(NCPV)的抗病毒活性。因此，在存在或不存在测试化合物的情况下用DENV-1或DENV-2或DENV-3或DENV-4感染Vero细胞。在感染后第3天，将细胞溶解并且细胞溶解产物用于制备病毒靶标(DENV的3’UTR；表2)和细胞参考基因(β-肌动蛋白，表2)两者的cDNA。随后，在Lightcycler480仪上进行双重实时PCR。所生成的Cp值与这些靶标的RNA表达的量成反比。通过一种测试化合物抑制DENV复制导致3’UTR基因的Cp的移位。另一方面，如果测试化合物对这些细胞来说是具有毒性的，那么将观察到对β-肌动蛋白表达的类似作用。对比ΔΔCp方法用于计算EC50，该方法是基于用细胞管家基因(β-肌动蛋白)标准化的靶基因(3’UTR)的相对基因表达。此外，CC50值是基于针对管家基因β-肌动蛋白获取的Cp值。
表2：用于实时定量RT-PCR的引物和探针。
Figure BDA0002282864750000621
a报道染料(FAM，HEX)和淬灭剂(ZEN和IABkFQ)元素以粗体和斜体指示。
b这些引物和探针的核苷酸序列选自登革热病毒基因组的3’UTR区中的保守区，其是基于保藏在Genbank的四种登革热血清型的300个核苷酸序列的比对(Gong等人,2013,Methods Mol Biol[分子生物学方法],第16章)。
培养基由补充有2％热灭活的胎牛血清、0.04％庆大霉素(50mg/mL)以及2mML-谷氨酰胺的最低必需培养基组成。将获自ECACC的Vero细胞悬浮于培养基中，并且将75μL/孔添加在96孔板(10000个细胞/孔)中，这些板已经含有抗病毒化合物。通常，这些板含有测试化合物的9个稀释步骤的5倍连续稀释液，在于100％DMSO(500nL；对于大多数活性化合物而言，最终浓度范围：25μM-0.000064μM或2.5μM-0.0000064μM)中的最终浓度的200倍下。此外，每个板含有被指定为病毒对照(在不存在化合物的情况下含有细胞和病毒)和细胞对照(在不存在病毒和化合物的情况下含有细胞)的孔。一旦将这些细胞添加在这些板中，就将这些板在一个完全润湿的孵育箱(37℃，5％CO2)中孵育直到第二天。稀释登革热病毒血清型1、2、3和4，以便在测定中获得约22-24的Cp。因此，将25μL的病毒悬浮液添加至所有含有测试化合物的孔中并且添加至被指定为病毒对照的孔中。并行地，将25μL的培养基添加至细胞对照。接着，将这些板在一个完全润湿的孵育箱(37℃，5％CO2)中孵育3天。在3天之后，将上清液从这些孔中去除并且将这些孔用冰冷PBS(约100μL)洗涤两次。将这些96孔板内的细胞沉淀储存在-80℃持续至少1天。接着，根据制造商的指导(生命技术公司(LifeTechnologies))使用Cells-to-CTTM溶解试剂盒提取RNA。这些细胞溶解产物可以储存在-80℃或立即用于逆转录步骤中。
在逆转录步骤的准备中，制备混合物A(表3A)并且将7.57μL/孔分配在一个96孔板中。在添加5μL的细胞溶解产物之后，进行在75℃下的五分钟变性步骤(表3B)。之后，添加7.43μL的混合物B(表3C)并且起始逆转录步骤(表3D)以产生cDNA。
最后，制备RT-qPCR混合物，混合物C(表4A)，并且将该混合物(22.02μL/孔)分配在96孔LightCycler qPCR板中，向这些板添加3μL的cDNA，并且根据表4B中的条件在LightCycler 480上进行qPCR。
使用LightCycler软件和一种内部LIMS系统，计算每种化合物的剂量反应曲线，并且测定半最大有效浓度(EC50)和半最大细胞毒性浓度(CC50)(表5-8)。
表3：使用混合物A、变性、混合物B和逆转录进行cDNA合成。
混合物A
Figure BDA0002282864750000631
Figure BDA0002282864750000641
B 变性步骤：
Figure DA00022828647560948
C 混合物B
Figure BDA0002282864750000642
D cDNA合成方案
表4：qPCR混合物和方案。
A 混合物C
Figure BDA0002282864750000643
Figure BDA0002282864750000651
B qPCR3方案
Figure BDA0002282864750000652
表5：在RT-qPCR测定中化合物针对血清型1的EC50、CC50和SI
Figure BDA0002282864750000653
N＝对这些化合物进行测试的独立实验的数目。
表6：在RT-qPCR测定中化合物针对血清型2的EC50、CC50和SI
N＝对这些化合物进行测试的独立实验的数目。
表7：在RT-qPCR测定中化合物针对血清型3的EC 50 、CC 50 和SI
Figure BDA0002282864750000662
N＝对这些化合物进行测试的独立实验的数目。
表8：在RT-qPCR测定中化合物针对血清型4的EC50、CC50和SI
Figure BDA0002282864750000663
N＝对这些化合物进行测试的独立实验的数目。
Figure IDA0002282864790000011
Figure IDA0002282864790000021

Claims (11)

1.一种具有式(I)的化合物，包括其任何立体化学异构形式，
Figure FDA0002282864740000011
其中
A是
Figure FDA0002282864740000012
其中
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-1)，R4是五氟硫烷基，R5是氢，Z是碳，并且R6是氢；或
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲基，R5是氢，Z是碳，并且R6是甲基；或
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲基，R5是氟，Z是碳，并且R6是氢；或
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲氧基，R5是氢，Z是碳，并且R6是甲基；或
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲氧基，R5是氟，Z是碳，并且R6是氢；或
R1是氟，R2是甲氧基，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲氧基，R5是氢，Z是碳，并且R6是氢；或
R1是氯，R2是氢，R3是氘，A是(a-1)，R4是三氟甲氧基，R5是氢，Z是碳，并且R6是氢；或
R1是氯，R2是-OCH2CH2OH，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲氧基，R5是氢，Z是碳，并且R6是氢；或
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲基，R5是甲氧基，Z是氮，并且R6缺失；或
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-2)，并且R4是三氟甲基；或
R1是氯，R2是氢，R3是氢，A是(a-1)，R4是三氟甲硫基，R5是氢，Z是碳，并且R6是氢；
或其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物。
2.如权利要求1所述的化合物，其中A是(a-1)。
3.如权利要求1所述的化合物，其中A是(a-2)。
4.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有(+)比旋光度。
5.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA0002282864740000021
6.一种药物组合物，该药物组合物包含如权利要求1至5中任一项所述的化合物连同一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
7.如权利要求6所述的药物组合物，该药物组合物包含第二或另外的活性成分。
8.如权利要求7所述的药物组合物，其中该第二或另外的活性成分是抗病毒剂。
9.如权利要求1至5中任一项所述的具有式(I)的化合物，用作药物。
10.如权利要求1至5中任一项所述的具有式(I)的化合物，用于治疗登革热感染并用于预防或治疗与登革热感染有关的疾病。
11.如权利要求10所述使用的具有式(I)的化合物，其中该登革热感染是通过DENV-1、DENV-2、DENV-3或DENV-4毒株的病毒感染的。
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