ES2882488T3 - Derivados de indol sustituidos como inhibidores de la replicación vírica del dengue - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula (Ia) o (Ib) **(Ver fórmula)** una forma estereoisomérica o una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo; seleccionándose dicho compuesto entre el grupo en donde: R1 es CF3 u OCF3, R2 es H u OCH3 o F, R3 es H; y cuando R2 es H entonces R3 también puede ser CH3.

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de indol sustituidos como inhibidores de la replicación vírica del dengue

La presente invención se refiere a derivados o compuestos de indol sustituidos, a métodos para prevenir o tratar infecciones víricas por dengue usando dichos compuestos y también se refiere a dichos compuestos para su uso como medicina, más preferentemente, para su uso como medicina para tratar o prevenir infecciones víricas por dengue. La presente invención se refiere además a composiciones farmacéuticas o preparados combinados de los compuestos, a las composiciones o preparados para su uso como un medicamento, más preferiblemente para la prevención o el tratamiento de infecciones víricas por dengue. La invención también se refiere a procesos para la preparación de los compuestos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Los flavivirus, los cuales son transmitidos por mosquitos o garrapatas, provocan infecciones potencialmente letales para el hombre, tales como la encefalitis y la fiebre hemorrágica. Se conocen cuatro serotipos distintos, pero estrechamente relacionados, del flavivirus dengue, denominados DENV-1, -2, -3 y -4. El dengue es endémico en la mayoría de las regiones tropicales y subtropicales en todo el mundo, predominantemente en áreas urbanas y semiurbanas. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), 2500 millones de personas, de las cuales mil millones son niños, corren el riesgo de sufrir una infección por VDEN (OMS, 2002). Se estima que en todo el mundo se producen cada año de 50 a 100 millones de casos de fiebre por dengue [FD], medio millón de casos de enfermedad por dengue grave (es decir, fiebre hemorrágica por dengue [FHD] y síndrome de choque por dengue [SCD]) y más de 20,000 muertes. La FHD se ha convertido en una de las principales causas de hospitalización y fallecimiento entre los niños en regiones endémicas. Por todo ello, el dengue representa la causa más común de enfermedad arbovírica. Debido a grandes brotes recientes en países situados en América Latina, sudeste asiático y Pacífico Occidental (incluyendo Brasil, Puerto Rico, Venezuela, Camboya, Indonesia, Vietnam, Tailandia), el número de casos de dengue ha aumentado drásticamente en los últimos años. No es solo el hecho de que el número de casos de dengue aumente a medida que la enfermedad se propaga a nuevas áreas, sino que los brotes tienden a ser más graves.

Aunque se han hecho progresos en el desarrollo de vacunas contra el dengue con la disponibilidad de la vacuna Dengvaxia®, se han encontrado muchas dificultades. Estas incluyen la existencia de un fenómeno denominado potenciación dependiente de anticuerpos (PDA). La recuperación de una infección provocada por un serotipo proporciona inmunidad de por vida frente a ese serotipo pero únicamente confiere una protección parcial y transitoria frente a una infección posterior provocada por uno de los otros tres serotipos. Después de la infección con otro serotipo, los anticuerpos heterólogos preexistentes forman complejos con el serotipo de virus del dengue que provoca la nueva infección pero no neutralizan el patógeno. En su lugar, se cree que se facilita la entrada del virus en las células, lo cual da como resultado una replicación incontrolada del virus y títulos virales máximos mayores. Tanto en infecciones primarias como secundarias, unos títulos virales mayores están asociados con una enfermedad del dengue más grave. Puesto que los anticuerpos maternos pueden transmitirse fácilmente a los niños por la lactancia materna, esta podría ser una de las razones por las que los niños se ven más afectados que los adultos por la enfermedad grave por dengue. En lugares en los que circulan simultáneamente dos o más serotipos, que también se denominan regiones hiperendémicas, el riesgo de enfermedad severa por dengue es significativamente superior debido a que existe un riesgo mayor de experimentar una infección secundaria más grave. Además, en una situación de hiperendemia, la probabilidad de que emerjan cepas más virulentas aumenta, lo cual a su vez aumenta la probabilidad de fiebre hemorrágica por dengue (FHD) o síndrome de choque por dengue.

Los mosquitos portadores del dengue, incluyendo Aedes aegypti y Aedes albopictus (mosquito tigre), se están desplazando hacia el norte del globo. Según los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (CCPE) de los Estados Unidos (EE. UU.), en la actualidad ambos mosquitos son omnipresentes en el sur de Texas. La propagación hacia el norte de los mosquitos portadores del dengue no está confinada a los EE. UU., sino que también se ha observado en Europa. En la actualidad, se están efectuando esfuerzos sustanciales para el desarrollo y reclutamiento de vacunas para proteger a los seres humanos contra el dengue. Sin embargo, el principal problema es desarrollar una vacuna que ofrezca el mismo grado de protección contra los cuatro serotipos (una vacuna tetravalente).

Dengvaxia®, la vacuna para el dengue producida por Sanofi Pasteur se aprobó en primer lugar en México y mientras tanto, ha sido aprobada en más países. Sin embargo, la vacuna se puede mejorar considerablemente debido a que presenta una eficacia limitada, especialmente contra VDEN-1 y -2, una eficacia baja en sujetos no expuestos previamente al flavivirus y una pauta posológica prolongada.

Pese a estas limitaciones, la vacuna supone un punto de inflexión en las zonas endémicas puesto que ofrecerá protección a gran parte de la población, aunque probablemente no a bebés muy pequeños, quienes se ven muy afectados por el dengue. Además, la pauta posológica y la eficacia muy limitada en sujetos no expuestos previamente al flavivirus hacen que sea inadecuada y que probablemente no merezca la pena/no sea rentable para personas que viajen de zonas no endémicas a zonas endémicas de dengue. Las limitaciones mencionadas anteriormente de las vacunas contra el dengue son la razón por la que se necesita un agente antiviral contra el dengue que sea profiláctico y se pueda aplicar previamente a la exposición.

Además, hasta la fecha, no se dispone de fármacos antivirales específicos para el tratamiento o la prevención de una infección por el virus de la fiebre del dengue. Claramente, sigue existiendo una gran necesidad médica no cubierta en lo que se refiere a productos terapéuticos para la prevención o el tratamiento de infecciones virales en animales, más en particular en seres humanos y especialmente de infecciones virales provocadas por Flavivirus, más en particular el virus del Dengue. Es indispensable disponer de compuestos con una potencia antiviral satisfactoria, niveles bajos o nulos de efectos secundarios, una actividad de amplio espectro contra múltiples serotipos del virus del Dengue, una baja toxicidad y/o unas propiedades farmacocinéticas o farmacodinámicas satisfactorias.

A continuación, la presente invención proporciona compuestos, derivados de indol sustituidos, que muestran una elevada y potente actividad contra los cuatro (4) serotipos del virus del dengue.

El documento WO-2010/021878 divulga derivados de 2-fenilpi rrolidina e indolina como antagonistas del receptor de mentol frío para el tratamiento de enfermedades inflamatorias y centrales. El documento WO-2013/045516 divulga derivados de indol e indolina para su uso en el tratamiento de infecciones virales por dengue.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se basa en el descubrimiento inesperado de que al menos uno de los problemas mencionados anteriormente se puede resolver mediante los compuestos actuales de la invención.

La presente invención proporciona compuestos que se ha observado que poseen una potente actividad antiviral contra los cuatro (4) serotipos conocidos actualmente. La presente invención demuestra además que estos compuestos inhiben eficazmente la proliferación del virus del Dengue (VDEN). Por lo tanto, estos compuestos constituyen una clase útil de compuestos potentes que se pueden utilizar en el tratamiento y/o la prevención de infecciones virales en animales, mamíferos y seres humanos, más específicamente para el tratamiento y/o la prevención de infecciones con virus del Dengue.

La presente invención se refiere además al uso de tales compuestos como medicamentos y a su uso para la elaboración de medicamentos para tratar y/o prevenir infecciones virales, en particular con virus que pertenecen a la familia de los virus del Dengue en animales o mamíferos, más en particular en seres humanos. La invención también se refiere a métodos para preparar todos estos compuestos y a composiciones farmacéuticas que los comprenden en una cantidad eficaz.

La presente invención también se refiere a un método para el tratamiento o la prevención de infecciones virales por dengue en seres humanos mediante la administración de una cantidad eficaz de uno o más de tales compuestos, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, opcionalmente combinado con uno o más medicamentos diferentes, como otro agente antivírico, a un paciente que lo necesite.

Un aspecto de la invención es proporcionar compuestos de fórmula (Ia) o (Ib)

una forma estereoisomérica o una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo que comprende un grupo indol mono o di-sustituido; seleccionándose dicho compuesto entre el grupo en donde:

R¹ es CF³ u OCF³, R² es H u OCH³ o F, R³ es H;

y cuando R² es H entonces R³ también puede ser CH³.

En particular, los compuestos de la invención o su forma estereoisomérica o una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de los mismos se seleccionan entre el grupo:

Una parte de la presente invención es también una composición farmacéutica que comprende un compuesto de formula (la) o (Ib) o una forma estereoisomérica o una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo junto con uno o más excipientes, diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (Ia) o (Ib) las sales de adición de ácido y básicas de los mismos. Las sales de adición de ácido adecuadas se forman a partir de ácidos que forman sales atóxicas. Las sales de adición de base adecuadas se forman a partir de bases que forman sales atóxicas.

Los compuestos de la invención también pueden existir en formas sin solvatar y solvatadas. El término "solvato" se utiliza en la presente para describir un complejo molecular que comprende el compuesto de la invención y una o más moléculas de un disolvente farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, etanol.

El término "polimorfo" se refiere a la capacidad del compuesto de la invención de existir en más de una forma o estructura cristalina.

Los compuestos de la presente invención se pueden administrar como productos amorfos o cristalinos. Se pueden obtener, por ejemplo, como masas compactas sólidas, polvos o películas mediante métodos tales como la precipitación, cristalización, liofilización, secado por pulverización o secado por evaporación. Se pueden administrar solos o combinados con uno o más compuestos de la invención diferentes o combinados con uno o más fármacos diferentes. En general, se administrarán como una formulación asociados con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. El término "excipiente" se utiliza en la presente para describir cualquier ingrediente que no sea el o los compuestos de la invención. La selección del excipiente depende en gran medida de factores tales como el modo particular de administración, el efecto del excipiente sobre la solubilidad y estabilidad y la naturaleza de la forma farmacéutica.

Los compuestos de la presente invención o cualquiera de sus subgrupos se pueden formular en varias formas farmacéuticas con el fin de poderlos administrar. Como composiciones adecuadas, se pueden citar todas las composiciones empleadas normalmente para administrar fármacos por vía sistémica. Para preparar las composiciones farmacéuticas de esta invención, se combina una cantidad eficaz del compuesto particular, opcionalmente en forma de sal de adición, como principio activo, en mezcla íntima con un vehículo farmacéuticamente aceptable, pudiendo adoptar dicho vehículo una gran variedad de formas dependiendo de la forma del preparado que se desee para la administración. Estas composiciones farmacéuticas se encuentran deseablemente en una forma farmacéutica unitaria adecuada, por ejemplo, para administración oral o rectal. Por ejemplo, en la preparación de las composiciones en una forma farmacéutica oral, se puede emplear cualquiera de los medios farmacéuticos habituales tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparados líquidos orales tales como suspensiones, jarabes, elixires, emulsiones y soluciones; o vehículos sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, diluyentes, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares en el caso de polvos, pastillas, cápsulas y comprimidos. Debido a su fácil administración, los comprimidos y las cápsulas representan las formas farmacéuticas unitarias orales más convenientes, en cuyo caso se emplean obviamente vehículos farmacéuticos sólidos. También se incluyen los preparados en forma sólida que se pueden convertir, poco antes de su uso, en formas líquidas.

Es especialmente ventajoso formular las composiciones farmacéuticas mencionadas anteriormente en forma farmacéutica unitaria por su facilidad de administración y uniformidad de dosificación. La expresión "forma farmacéutica unitaria", tal como se utiliza en la presente, se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias, donde cada unidad contiene una cantidad predeterminada de principio activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado asociado con el portador farmacéutico requerido. Ejemplos de formas de dosificación unitaria de este tipo son comprimidos (incluyendo comprimidos con muesca o revestidos), cápsulas, píldoras, paquetes de polvos, obleas, supositorios, disoluciones o suspensiones inyectables y similares y múltiples segregados de las mismas.

Los expertos en el tratamiento de enfermedades infecciosas serán capaces de determinar la cantidad eficaz a partir de los resultados de las pruebas que se presentan posteriormente en la presente. En general, se considera que una cantidad diaria eficaz sería de 0.01 mg/kg a 50 mg/kg de peso corporal, más preferiblemente de 0.1 mg/kg a 10 mg/kg de peso corporal. Puede resultar apropiado administrar la dosis requerida como dos, tres, cuatro o más subdosis en intervalos adecuados a lo largo del día. Dichas subdosis se pueden formular como formas farmacéuticas unitarias, por ejemplo, que contengan de 1 a 1000 mg y, en particular, de 5 a 200 mg de principio activo por forma farmacéutica unitaria.

La dosis exacta y la frecuencia de administración dependen del compuesto particular de fórmula (Ia o Ib) utilizado, la afección particular que se esté tratando, la gravedad de la afección que se esté tratando, la edad, el peso y el estado físico general del paciente particular, así como también de otra medicación que el individuo pueda estar tomando, como bien sabrán los expertos en la técnica. Además, es obvio que la cantidad eficaz se puede reducir o incrementar dependiendo de la respuesta del sujeto tratado y/o dependiendo de la evaluación del médico que prescriba los compuestos de la presente invención. Por consiguiente, los intervalos de la cantidad eficaz que se han mencionado anteriormente son solamente orientativos y no se pretende que limiten el alcance ni el uso de la invención de ningún modo.

También se pretende que la presente exposición incluya cualquiera de los isótopos de los átomos presentes en los compuestos de la invención. Por ejemplo, los isótopos de hidrógeno incluyen tritio y deuterio y los isótopos de carbono incluyen C-13 y C-14.

Los presentes compuestos utilizados en la presente invención también pueden existir en su forma estereoquímicamente isomérica, que define todos los posibles compuestos constituidos por los mismos átomos enlazados mediante la misma secuencia de enlaces pero que tienen estructuras tridimensionales diferentes, que no son intercambiables. A menos que se mencione o indique lo contrario, la designación química de los compuestos engloba la mezcla de todas las formas estereoquímicamente isoméricas posibles que dichos compuestos puedan poseer.

Dicha mezcla puede contener todos los diastereómeros y/o enantiómeros de la estructura molecular básica de dicho compuesto. Se pretende que todas las formas estereoquímicamente isoméricas de los compuestos utilizados en la presente invención, tanto en forma pura como mezcladas con las otras, queden englobadas dentro del alcance de la presente invención, incluyendo cualquiera de las mezclas racémicas o racematos.

Las formas estereoisoméricas puras de los compuestos y los intermedios que se mencionan en la presente se definen como isómeros sustancialmente exentos de otras formas enantioméricas o diastereoméricas de la misma estructura molecular básica de dichos compuestos o intermedios. En particular, la expresión "estereoisoméricamente puro" se refiere a compuestos o intermedios que tienen un exceso estereoisomérico de al menos un 80% (es decir, un mínimo de un 90% de un isómero y un máximo de un 10% de los otros isómeros posibles) y hasta un exceso estereoisomérico de un 100% (es decir, un 100% de un isómero y nada de los demás), más concretamente, compuestos o intermedios que tienen un exceso estereoisomérico desde un 90% hasta un 100%, aún más concretamente que tienen un exceso estereoisomérico desde un 94% hasta un 100% y, aún más concretamente, que tienen un exceso estereoisomérico desde un 97% hasta un 100%. Las expresiones "enantioméricamente puro" y "diastereoméricamente puro" se deben interpretar de un modo similar, pero entonces haciendo referencia al exceso enantiomérico y el exceso diastereomérico de la mezcla en cuestión, respectivamente.

Pueden obtenerse formas estereoisoméricas puras de compuestos e intermedios utilizados en esta invención mediante la aplicación de procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los enantiómeros se pueden separar unos de otros mediante la cristalización selectiva de sus sales diastereoméricas con ácidos o bases ópticamente activos. Algunos ejemplos de estos son el ácido tartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido ditoluoiltartárico y ácido alcanforsulfónico. Como alternativa, los enantiómeros se pueden separar mediante técnicas cromatográficas utilizando fases estacionarias quirales. Dichas formas estereoquímicamente isoméricas puras también pueden derivarse de las formas estereoquímicamente isoméricas puras correspondientes de los materiales de partida apropiados, siempre que la reacción se produzca de manera estereoespecífica. Preferentemente, si se desea obtener un estereoisómero específico, dicho compuesto se sintetizará mediante métodos de preparación estereoespecíficos. Estos métodos emplearán ventajosamente materiales de partida enantioméricamente puros.

Los compuestos de fórmula (Ia) o (Ib) de la presente invención tienen todos al menos un átomo de carbono quiral como se indica en la figura siguiente mediante el átomo de carbono marcado con *:

Debido a la presencia de dicho átomo de carbono quiral, un "compuesto de fórmula (Ia) o (Ib)" puede ser el enantiómero (R), el enantiómero (S), la forma racémica o cualquier combinación posible de los dos enantiómeros individuales en cualquier proporción. Cuando la configuración absoluta (R) o (S) de un enantiómero no es conocida, este enantiómero también pude identificarse indicando si el enantiómero es dextrógiro (+) o levógiro(-) después de medir la rotación óptica específica de dicho enantiómero particular.

En un aspecto, la presente invención se refiere a un primer grupo de un compuesto de fórmula (I) donde los compuestos de fórmula (I) tienen la rotación específica (+).

En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un segundo grupo de compuestos de fórmula (I) donde los compuestos de fórmula (I) tienen la rotación específica (-).

Ejemplos

Métodos de LC/MS

La medición por cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) se realizó utilizando una bomba de LC, un haz de diodos (DAD) o un detector de UV y una columna, según se especifique en los métodos respectivos. Cuando fue necesario, se incluyeron detectores adicionales (véase la tabla de métodos más adelante).

El flujo procedente de la columna se introdujo en un espectrómetro de masas (MS), el cual se configuró con una fuente de iones a presión atmosférica. Es parte del conocimiento de un experto en la materia ajustar los parámetros ajustables (por ejemplo, intervalo de barrido, tiempo de permanencia, etc.) con el fin de obtener iones que permitan la identificación del peso molecular (PM) monoisotópico nominal del compuesto. La adquisición de datos se realizó con el software adecuado.

Los compuestos se describen según sus tiempos de retención (Tr) experimentales e iones. Si no se especifica de otro modo en la tabla de datos, el ion molecular descrito corresponde a [M+H]+ (molécula protonada) y/o [M-H]- (molécula desprotonada). En caso de que el compuesto no se pueda ionizar directamente, se especifica el tipo de aducto (es decir, [M+NH4]+, [M+HCOO]-, etc.). Para moléculas con patrones isotópicos múltiples (Br, Cl), el valor indicado es el obtenido para la masa isotópica más baja. Todos los resultados se obtuvieron con las incertidumbres experimentales que se asocian habitualmente con el método utilizado.

En lo sucesivo en la presente, "SQD" significa detector de cuadrupolo único, "MSD" detector selectivo de masas, "TA" temperatura ambiente, "BEH" híbrido con puente de etilsiloxano/sílice, "DAD" detector de haz de diodos, "HSS" sílice de alta resistencia.

Códigos del método de LC/MS (el flujo se expresa en mL/min; la temperatura de la columna (T) en °C; el tiempo de análisis en minutos)

Métodos de SFC/MS

La medición de SFC se realizó usando un sistema de cromatografía analítica de fluidos supercríticos (SFC) compuesto de una bomba binaria para suministrar dióxido de carbono (CO²) y un modificador, un automuestreador, un horno de columna, un detector de haz de diodos equipado con una celda de flujo de alta presión que resiste una presión de hasta 400 bar. Si se configura con un espectrómetro de masas (MS) el flujo desde la columna se lleva al (MS). Es parte del conocimiento de un experto en la materia ajustar los parámetros ajustables (por ejemplo, intervalo de barrido, tiempo de permanencia, etc.) con el fin de obtener iones que permitan la identificación del peso molecular (PM) monoisotópico nominal del compuesto. La adquisición de datos se realizó con el software adecuado.

Métodos analíticos de SFC/MS (flujo expresado en ml/min; temperatura de la columna (T) en °C; tiempo de análisis en minutos, contrapresión (BPR) en bar).

Puntos de fusión

Los valores son valores pico o intervalos de fusión y se obtienen con incertidumbres experimentales que están comúnmente asociadas con este método analítico.

DSC823e (indicado como DSC)

Para varios compuestos, los puntos de fusión se determinaron con un DSC823e (Mettler-Toledo). Se midieron los puntos de fusión con un gradiente de temperatura de 10 °C/minuto. La temperatura máxima fue 300 °C.

Rotaciones ópticas

Las rotaciones ópticas se midieron en un polarímetro Perkin-Elmer 341 con una lámpara de sodio y se expresaron tal como se indica a continuación: [a]° (A, c g/100 ml, disolvente, T°C).

[a]iT = (100a) / (l x c): donde l es la longitud del recorrido en dm y c es la concentración en g/100 ml para una muestra a una temperatura T (°C) y una longitud de onda A (en nm). Si la longitud de onda de la luz utilizada es de 589 nm (la línea D del sodio), entonces podría utilizarse el símbolo D en su lugar. El signo de la rotación (+ o -) debería proporcionarse siempre. Cuando se utiliza esta ecuación, la concentración y el disolvente siempre se proporcionan entre paréntesis después de la rotación. La rotación se indica utilizando grados y no se proporcionan unidades de concentración (se asume que son g/100 ml). Cuando se indica, la rotación óptica se ha medido en DMF a 20°C.

Ejemplo 1: síntesis de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 1) y separación quiral en los enantiómeros 1A y 1B.

Síntesis del intermedio 1a':

Se añadió ácido 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acético [CAS 886498-61-9] (28.9 g, 157 mmol) en pequeñas porciones a cloruro de tionilo (150 mL) y la solución resultante se agitó durante una noche a temperatura ambiente. El disolvente se concentró a presión reducida y se coevaporó con tolueno para dar cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a' (31.8 g) en forma de un residuo oleoso que se usó sin purificación adicional en la etapa siguiente.

Síntesis del intermedio 1a:

A 0°C, bajo una corriente de N² , se añadió en porciones hidruro de sodio (2.48 g, 64.8 mmol) a una mezcla de 5-(trifluorometil)-1 H-indol [CAS 100846-24-0] (10 g, 54.0 mmol) en DMF (150 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 30 min. Se añadió gota a gota una solución de cloruro de tosilo (11.3 g, 59.4 mmol) en DMF (50 mL) y la mezcla resultantes se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Después de enfriar hasta 0°C, la mezcla se inactivó con agua y el precipitado se retiró por filtración y se secó a 70°C a presión reducida durante una noche para dar 1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol 1a (18.4 g).

Síntesis del intermedio 1b:

Se añadió gota a gota cloruro de titanio(IV) (2.32 mL, 21.2 mmol) a temperatura ambiente a una solución en agitación de 1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol 1a (3.6 g, 10.6 mmol) y cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a' (3.85 g, 19 mmol) en 1,2-dicloroetano (70 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se añadió agua-hielo y la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se secó con MgSO⁴ , se filtró y se concentró el disolvente a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (15-40 ^m, 80 g, CH²Cl²/MeOH 99.5/0.5). Las fracciones que contenían el Compuesto 1b se combinaron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El compuesto se recogió con CH3CN/éter de diisopropilo. El precipitado se retiró por filtración y se secó para dar 2-(4-fluoro 2-metoxifenil)-1-(1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 1b (3 g).

Síntesis del intermedio 1c:

Se añadió hidróxido de litio (0.66 g, 15.8 mmol) a una solución de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 1b (3.2 g, 6.33 mmol) en THF (18 mL) y agua (6 mL). La mezcla se agitó a 30 °C durante 1 h. Se añadieron agua y EtOAc. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo sólido se recogió con éter de diisopropilo. El precipitado se retiró por filtración y se secó para dar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometil)-1H-indol-3-il)etanona 1c (2.1 g).

Síntesis del intermedio 1d:

A 0 °C, se añadió gota a gota una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (1.6 g, 4.27 mmol) en THF (50 mL) a una mezcla de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 1c (1.5 g, 4.27 mmol) en THF (50 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 4 h. El precipitado se retiró por filtración y se lavó con EtOAc. Los filtrados combinados se concentraron a presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se recogió por completo con diisopropil éter. El precipitado se retiró por filtración y se secó para dar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 1d (1.8 g).

Síntesis del Compuesto 1 y separación quiral en los Enantiómeros 1A y 1B:

Se agitó una mezcla de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 1d (1.8 g, 4.18 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [Ca s 725237-16-1] (0.77 g, 4.18 mmol) y diisopropiletilamina (1.08 mL, 6.27 mmol) en CH³CN (100 mL) a 70°C durante 24 h. El residuo se diluyó con CH²Cl² y HCl 1N. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (15-40 gm, 80 g, CH²Cl²/MeOH 99/1). Las fracciones que contenían el Compuesto 1 se combinaron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo (660 mg) se cristalizó a partir de éter de diisopropilo/CH3CN para dar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1 -(5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 1, 580 mg) en forma de una mezcla racémica. Los enantiómeros se separaron mediante SFC quiral preparativa (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 gm 250 x 20 mm, Fase móvil: CO² al 70%, EtOH al 30%) para dar, tras solidificar a partir de éter de petróleo/éter de diisopropilo, 239 mg del primer enantiómero eluido 1A y 248 mg del segundo enantiómero eluido 1B.

Compuesto 1:

1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 3.56 - 3.68 (m, 5 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.79 (t, J=5.4 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.18 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.39 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.38 (dd, J=8.5, 6.9 Hz, 1 H) 7.53 (dd, J=8.5, 1.6 Hz, 1 H) 7.68 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 8.49 (s a, 1 H) 8.60 (s, 1 H) 12.41 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-C): TR 3.03 min, MH+ 533

Punto de fusión: 132°C

Enantiómero 1A:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 3.58 - 3.68 (m, 5 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=1.8 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=1.5 Hz, 2 H) 6.18 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.3, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.3 Hz, 1 H) 7.38 (dd, J=8.1,7.1 Hz, 1 H) 7.53 (dd, J=8.6, 1.5 Hz, 1 H) 7.68 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 8.49 (s, 1 H) 8.59 (s, 1 H) 12.34 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-C): TR 3.02 min, MH+ 533

[a]D20: -93.7° (c 0.2455, DMF)

SFC quiral (método SFC-A): TR 2.03 min, MH+ 533, pureza quiral 100%.

Enantiómero 1B:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 3.56 - 3.70 (m, 5 H) 3.76 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.72 (s, 1 H) 5.94 (d, J=1.5 Hz, 2 H) 6.18 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.3 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.3 Hz, 1 H) 7.38 (t, J=7.6 Hz, 1 H) 7.53 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.68 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 8.48 (s, 1 H) 8.59 (s, 1 H) 12.35 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-C): TR 3.02 min, MH+ 533

[a]D20: 89.5° (c 0.2636, DMF)

SFC quiral (método SFC-A): TR 3.28 min, MH+ 533, pureza quiral 100%.

Ejemplo 2 : 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometil)-1H-indol-3-il)etanona (Compuesto 2) y separación quiral en los enantiómeros 2A and 2B .

Síntesis del intermedio 2a:

Se hidrogenó una mezcla de 3-metoxi-4-(trifluorometil)anilina [CAS 106877-20-7] (25 g, 130.7 mmol), glioxal-dimetilacetal [CAS 51673-84-8] (39.3 mL, 261.571 mmol) y Pd/C (10%) (2.8 g, 2.62 mmol) en EtOH (250 mL) a presión atmosférica de H² a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla se filtró a través de un lecho de celite®. La torta de filtro se lavó con EtOH y los filtrados combinados se concentraron a presión reducida. El residuo se recogió por completo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó para dar W-(2,2-dimetoxietil)-3-metoxi-4-(trifluorometil)anilina 2a (39.9 g).

Síntesis del intermedio 2b:

A 0°C, se añadió gota a gota anhídrido trifluoroacético (TFAA) (18.2 mL, 130.7 mmol) a una solución de W-(2,2-dimetoxietil)-3-metoxi-4-(trifluoro-metil)anilina 2a (36.5 g, 130.7 mmol), trietilamina (21.8 mL, 156.8 mmol) and 4-dimetilaminopiridina (DMAP) (800 mg, 6.54 mmol) en CH²Cl² (400 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La reacción se inactivó con una solución de K²CO³ al 10% en agua y se extrajo con CH²Cl². La fase orgánica se secó con MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (15-40 gm, 330 g, heptano/EtOAc 85/15). Las fracciones puras se combinaron y evaporaron a sequedad a presión reducida para dar W-(2,2-dimetoxietil)-2,2,2-trifluoro-W-(3-metoxi-4-(trifluorometil)fenil)acetamida 2b (33.5 g).

Síntesis del intermedio 2c:

Se calentó una mezcla de N-(2,2-dimetoxietil)-2,2,2-trifluoro-A/-(3-metoxi-4-(trifluoro-metil)fenil)acetamida 2b (15.8 g, 42.1 mmol) en anhídrido trifluoroacético (TFAA) (58 mL) y ácido trifluoroacético (TFA) (100 mL) a reflujo durante 24 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se inactivó con hielo/agua. El precipitado se separó por filtración y se lavó con agua. El precipitado se recogió con KOH al 10% en agua (200 mL) y CH³OH (200 mL) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. El CH³OH se evaporó a presión reducida. La mezcla acuosa resultante se diluyó adicionalmente con agua y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSÜ4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. La purificación se llevó a cabo mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 gm, 220 g, heptano/EtOAc 85/15). Las fracciones puras se combinaron y evaporaron a sequedad a presión reducida para dar 6-metoxi-5-(trifluorometil)-1 H-indol 2c (5.4 g).

Síntesis del intermedio 2d:

La reacción se llevó a cabo en dos lotes separados, a escala de 6.51 mmol y 12.8 mmol de 6-metoxi-5-(trifluorometil)-1 H-indol 2c, respectivamente.

Bajo una corriente de N² , se añadió gota a gota cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (19.17 mL, 19.17 mmol) a -70°C a una solución de 6-metoxi-5-(trifluorometil)-1 H-indol 2c (1.40 g, 6.51 mmol) en CH²Cl² (15 mL). Después de 5 min de agitación a -70°C, se añadió gota a gota cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a' (3.88 g, 19.17 mmol) en CH²CL (15 mL) y la mezcla de reacción se mantuvo a -70°C durante 1 h. Se añadió agua-hielo. La mezcla se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se secó con MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se cristalizó en CH²Cl². El precipitado se retiró por filtración y se secó para dar un primer lote de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 2d (¹.0 g). El filtrado se concentró a presión reducida (fracción 1).

Usando el mismo procedimiento, partiendo de 12.8 mmol de 6-metoxi-5-(trifluorometil)-1 H-indol 2c, se obtuvo un segundo lote del intermedio 2d (840 mg) tras su cristalización a partir de CH²CL. El filtrado se concentró a presión reducida (fracción 2).

Los filtrados de las fracciones 1 y 2 combinados se evaporaron y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 gm, 120 g, heptano/EtOAc 80/20). Las fracciones puras se combinaron y evaporaron a sequedad para dar un tercer lote del intermedio 2d (730 mg).

Síntesis del Compuesto 2 y separación quiral en los Enantiómeros 2A y 2B:

A 0 °C, se añadió gota a gota una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (3 g, 7.97 mmol) en THF (30 mL) a una mezcla de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 2d (3.04 g, 7.97 mmol) en THF (30 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 4 h. Se añadió gota a gota una solución de 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (4.38 g, 23.9 mmol) en CH³CN (30 mL) y se continuó agitando a temperatura ambiente durante 24 h. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc y se lavó con HCl 1N y agua. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo (5.1 g) se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 gm, 120 g, CH²Cl²/CH³OH 99.5/0.5). Las fracciones puras se combinaron y evaporaron a sequedad a presión reducida para dar una primera fracción de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 2 , 2.1 g) en forma de un racemato. Las fracciones impuras se combinaron, concentraron a presión reducida y cristalizaron a partir de Et²O para dar 520 mg de una segunda fracción del Compuesto 2 racémico.

Los enantiómeros del Compuesto 2 (2.62 g) se separaron mediante SFC quiral (fase estacionaria: Chiralpak® IC 5 gm 250 x 30 mm, fase móvil: CO² al 65%, iPrOH al 35% iPrNH² al 0.3%) para dar 1.0 g del primer enantiómero eluido y 1.1 g del segundo enantiómero eluido. El primer enantiómero eluido se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 gm, 24 g, CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 99/1/0.1). Las fracciones puras se combinaron y evaporaron a sequedad para dar, tras su solidificación en Et²O/heptano, 750 mg del Enantiómero 2A . El segundo enantiómero eluido se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 gm, 24 g, CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 99/1/0.1). Las fracciones puras se combinaron y evaporaron a sequedad para dar, tras su solidificación en Et²O/heptano, 755 mg del Enantiómero 2B .

Compuesto 2:

1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=4.9 Hz, 2 H) 3.77 - 3.87 (m, 2 H) 3.89 (s, 3 H) 3.95 (s, 3 H) 4.79 (t a, J=5.4 Hz, 1 H) 5.72 (s, 1 H) 5.93 (d, J=1.6 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.2 Hz, 1 H) 7.20 (s, 1 H) 7.37 (dd, J=8.5, 7.3 Hz, 1 H) 8.37 (s, 1 H) 8.43 (s, 1 H) 12.14 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-C): TR 2.99 min, MH+ 563

Punto de fusión: 174°C

Enantiómero 2A:

1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.77 - 3.87 (m, 2 H) 3.89 (s, 3 H) 3.95 (s, 3 H) 4.79 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.2 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.94 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.37 (dd, J=8.5, 6.9 Hz, 1 H) 8.37 (s, 1 H) 8.43 (s, 1 H) 12.14 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-C): TR 2.97 min, MH+ 563

[a]D20: 92.3° (c 0.26, DMF)

SFC quiral (método SFC-B): TR 2.34 min, MH+ 563, pureza quiral 100%.

Enantiómero 2B:

1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.77 - 3.87 (m, 2 H) 3.89 (s, 3 H) 3.95 (s, 3 H) 4.79 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.37 (dd, J=8.5, 6.9 Hz, 1 H) 8.37 (s, 1 H) 8.43 (s, 1 H) 12.14 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-C): TR 2.97 min, MH+ 563

[a]D20: -88.4° (c 0.25, DMF)

SFC quiral (método SFC-B): TR 3.25 min, MH+ 563, pureza quiral 99.6%.

Ejemplo 3 : síntesis de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(6-fluoro-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 3) y separación quiral en los enantiómeros 3A y 3B.

Síntesis del intermedio 3a:

Se enfrió una solución de 6-fluoro-5-(trifluorometil)-1 H-indol [CAS 875306-79-9] (4.8 g, 24.6 mmol) en DMF (100 mL) a 0°C. Bajo una corriente de N², se añadió en porciones hidruro de sodio (1.09 g, 28.4 mmol). La mezcla se agitó a 0°C durante 20 min. Se añadió gota a gota una solución de cloruro de tosilo (4.96 g, 26 mmol) en DMF (20 mL) y la mezcla resultante se agitó a 0°C durante 30 min y a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se vertió sobre agua-hielo (600 mL) y se agitó vigorosamente durante 40 min. El precipitado se retiró por filtración, se lavó con agua (6x) y se secó a 50°C a presión reducida para dar 6-fluoro-1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol 3a (7.2 g).

Síntesis del intermedio 3b:

Se añadió gota a gota cloruro de titanio(IV) (1.23 mL, 11.2 mmol) a temperatura ambiente a una solución en agitación de 6-fluoro-1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol 3a (2 g, 5.6 mmol) y cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a' (2.27 g, 11.2 mmol) en diclorometano (50 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3.5 h. La reacción se inactivó mediante la adición de hielo picado (40 g). Tras agitar durante 1 h, se separaron la capas. La fase orgánica se secó con MgSO4, se filtró y se concentró el disolvente a presión reducida. El residuo se agitó en CH²Cl² en ebullición (15 mL). Los sólidos se retiraron por filtración, se lavaron con CH²Cl² (3x) y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 1-(6-fluoro-1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 3b (315 mg). El filtrado se dejó reposar durante una noche, permitiendo que se precipitase de la solución una segunda recogida. El producto se retiró por filtración, se lavó con CH²Cl² (3x) y se secó al vacío a 50°C para proporcionar una segunda recogida del intermedio 3b (505 mg). El filtrado se evaporó. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: Sílice Biotage® Snap Ultra 50 g, Fase móvil: gradiente de heptano/CH²Cl² de 100/0 a 0/100). Las fracciones deseadas se combinaron y se concentraron a presión reducida a un volumen residual de 25 ml. Se formó un precipitado, se retiró por filtración, se lavó con heptano (3x) y se secó al vacío a 50°C para proporcionar una tercera recogida del intermedio 3b (922 mg).

Síntesis del intermedio 3c:

Se añadió hidróxido de potasio (0.65 g, 11.6 mmol) a una solución de 1-(6-fluoro-1-tosil-5-(trifluorometil)-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 3b (1.74 g, 3.33 mmol) en dioxano (30 mL) y agua (10 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3.5 h. La mezcla de reacción se vertió lentamente en una mezcla en agitación de agua fría (100 mL) y] HCl 1N (15 mL). Tras agitar durante 30 minutos, se extrajo el producto con 2-MeTHF (2x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO⁴, se eliminaron por filtración y se evaporaron a presión reducida. El residuo se agitó en CH²Cl² (15 mL), se retiró por filtración, se lavó con CH²Cl² (3x) y se secó al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 3c (1.13 g).

Síntesis del intermedio 3d:

Se enfrió una solución de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 3c (1.13 g, 3.06 mmol) en THF (40 mL) a 0°C, bajo una atmósfera de N². Se añadió tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (1.21 g, 3.22 mmol). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 2 h. El precipitado se retiró por filtración y se lavó con THF (2x). Los filtrados combinados se concentraron a presión reducida para dar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 3d (1.37 g), que se usó tal cual en la etapa siguiente sin purificación adicional.

Síntesis del Compuesto 3 y separación quiral en los Enantiómeros 3A y 3B:

Se agitó una mezcla de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 3d (1.37 g, 3.06 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (1.22 g, 6.13 mmol) y diisopropiletilamina (1.06 mL, 6.13 mmol) en CH³CN (60 mL) a temperatura ambiente durante 85 h. La mezcla de reacción se vertió en agua (250 mL) y se extrajo el producto con Et²O (2x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 40 g, fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones que contenían el Compuesto 3 se combinaron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó posteriormente mediante HPLC preparativa (fase estacionaria: RP XBridge C18 o Bd - 10 gm, 50 x 150 mm, Fase móvil: solución de NH⁴HCO³ al 0.25% en agua, MeOH). Las fracciones deseadas se combinaron y concentraron muy lentamente a presión reducida usando un evaporador rotatorio con un baño de temperatura de 45°C, hasta un volumen residual de 10 mL. La solución resultante se dejó reposar durante 18 h para permitir la precipitación del producto. El producto se retiró por filtración, se lavó con H²O (5x) y se secó al vacío a 45°C para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometil)-1H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 3, 501 mg) en forma de una mezcla racémica.

Se separaron los enantiómeros del Compuesto 3 (473 mg) por medio de separación Quiral en Fase Normal (Fase estacionaria: AS 20 gm, fase móvil: 50% de etanol, 50% de heptano) para dar el enantiómero 3A como el primer producto eluido y el enantiómero 3B como el segundo enantiómero eluido. Ambos enantiómeros se agitaron en una mezcla de MeOH/agua 4/1 (5 mL). Los sólidos resultantes se retiraron por filtración, se lavaron con agua y se secaron al vacío a 45°C para proporcionar 152 mg del Enantiómero 3A y 163 mg del Enantiómero 3B .

Compuesto 3:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.2 Hz, 2 H) 3.77 - 3.90 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.76 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.73 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.38 (dd, J=8.6, 6.8 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=11.4 Hz, 1 H) 8.47 (d, J=7.0 Hz, 1 H) 8.57 (s, 1 H) 12.42 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.11 min, MH+ 551

Enantiómero 3A:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.3 Hz, 2 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.73 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.38 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.2, 2.4 Hz, 1 H) 7.37 (dd, J=8.6, 6.8 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=11.3 Hz, 1 H) 8.46 (d, J=6.9 Hz, 1 H) 8.57 (s, 1 H) 12.42 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.10 min, MH+ 551

[a]D20: 91.0° (c 0.435, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 2.93 min, MH+ 551, pureza quiral 100%.

Enantiómero 3B:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.76 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.76 (t a, J=5.3 Hz, 1 H) 5.73 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.4 Hz, 1 H) 7.38 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=11.4 Hz, 1 H) 8.47 (d, J=7.3 Hz, 1 H) 8.57 (s, 1 H) 12.43 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.10 min, MH+ 551

[a]D20: -82.7° (c 0.475, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 3.15 min, MH+ 551, pureza quiral 99.4%.

Ejemplo 4 : síntesis de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(7-metil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 4) y separación quiral en los enantiómeros 4A y 4B .

Síntesis del intermedio 4a:

Se agitó una solución de 2-metil-4-(trifluorometil)anilina [CAS 67169-22-6] (9.85 g, 56.2 mmol) en MeOH (60 mL) en un baño de hielo. Se añadió gota a gota una solución de cloruro de yodo [CAS 7790-99-0] 1M en CH²Cl² (61.9 mL, 61.9 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 2 h. Los disolventes se evaporaron a presión reducida. El residuo se agitó en DIPE (10 mL), el precipitado se retiró por filtración, se lavó con DIPE (5x) y se secó al vacío a 45°C para dar 2-yodo-6-metil-4-(trifluorometil)anilina 4a (2.47 g). El filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: Sílice Biotage® Snap Ultra 100 g, Fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc de 100/0 a 20/80). Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron a presión reducida y se coevaporaron con tolueno (3x) para proporcionar un segundo lote de 4a (6.8 g).

Síntesis del intermedio 4b:

Se desgasificó una solución en agitación de 2-yodo-6-metil-4-(trifluorometil)anilina 4a (6.7 g, 22.3 mmol) en DMF (75 mL) usando una corriente de N² burbujeando a través de la solución durante 15 min. Se añadieron yoduro de cobre(I) (848 mg, 4.45 mmol), trietilamina (9.28 mL, 66.8 mmol), diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II) (1.56 g, 2.23 mmol) y trimetilsililacetileno (9.24 mL, 66.8 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente en atmósfera de N² durante 65 h. La mezcla de reacción se vertió en agua-hielo (300 mL) y se extrajo el producto con Et²O (2x). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: Sílice Biotage® Snap Ultra 100 g, Fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc de 100/0 a 90/10). Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron a presión reducida y se coevaporaron con heptano para dar 2-metil-4-(trifluorometil)-6-((trimetilsilil)etinil)anilina 4b (5.5 g).

Síntesis del intermedio 4c:

Se disolvió 2-metil-4-(trifluorometil)-6-((trimetilsilil)etinil)anilina 4b (5.5 g, 20.3 mmol) en NMP (80 mL). Se añadió terc-butóxido de potasio (6.82 g, 60.8 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 75°C durante 18 h en atmósfera de N². La reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en agua-hielo (400 mL). El producto se extrajo con 2-MeTHF (2x). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: Sílice Biotage® Snap Ultra 100 g, Fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc de 100/0 a 80/20). Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron a presión reducida y se co-evaporaron con tolueno. El residuo se secó al vacío a 50°C para dar 7-metil-5-(trifluorometil)-1 H-indol 4c (0.95 g).

Síntesis del intermedio 4d:

Se enfrió una solución de 7-metil-5-(trifluorometil)-1 H-indol 4c (0.95 g, 4.77 mmol) en DMF (15 mL) a 0°C. Bajo una corriente de N² , se añadió en porciones hidruro de sodio (1.09 g, 28.4 mmol). La mezcla se agitó a 0°C durante 20 min. Se añadió gota a gota una solución de cloruro de tosilo (1.0 g, 5.25 mmol) en DMF (10 mL) y la mezcla resultante se agitó a 0°C durante 20 min y a temperatura ambiente durante 40 min. La mezcla se vertió sobre agua-hielo (100 mL) y se agitó vigorosamente durante 1 h. El precipitado se retiró por filtración, se lavó con agua (4x) y se secó a 50°C al vacío para dar 7-metil-1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol 4d (1.64 g).

Síntesis del intermedio 4e:

Se añadió gota a gota cloruro de titanio(IV) (1.02 mL, 9.28 mmol) a temperatura ambiente a una solución en agitación de 7-metil-1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol 4d (1.64 g, 4.64 mmol) y cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a' (1.88 g, 9.28 mmol) en diclorometano (50 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La reacción se inactivó mediante la adición de hielo picado (40 g). Tras agitar durante 1 h, se separaron la capas. La fase orgánica se secó con MgSO4, se filtró y se concentró el disolvente a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: Sílice Biotage® Snap Ultra 50 g, Fase móvil: gradiente de heptano/CH²Cl² de 100/0 a 0/100). Las fracciones deseadas se combinaron, se concentraron a presión reducida y se co-evaporaron con dioxano. El residuo se secó al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 4e (1.57 g).

Síntesis del intermedio 4f:

Se añadió hidróxido de potasio (0.52 g, 9.27 mmol) a una solución de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 4e (1.38 g, 2.66 mmol) en dioxano (30 mL) y agua (10 mL). La mezcla se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió lentamente en una mezcla en agitación de hielo-agua (50 mL) y HCl 1N (11 mL). Tras agitar durante 5 minutos, se extrajo el producto con 2-MeTHF (2x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO⁴, se eliminaron por filtración y se evaporaron a presión reducida. El residuo se agitó en CH²Cl² (4 mL), se retiró por filtración, se lavó con CH²Cl² (4x 1 mL) y se secó al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 4f (0.51 g).

Síntesis del intermedio 4g:

Se enfrió una solución de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(7-metil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 4f (0.51 g, 1.4 mmol) en THF (20 mL) a 0°C, bajo una atmósfera de N². Se añadió tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (0.55 g, 1.47 mmol). La mezcla se agitó a 0 °C durante 40 min y a temperatura ambiente durante 90 min. El precipitado se separó por filtración y se lavó con THF(2x). Los filtrados combinados se concentraron a presión reducida para dar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(7-metil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 4g (0.62 g), que se usó tal cual en la etapa siguiente sin purificación adicional.

Síntesis del Compuesto 4 y separación quiral en los Enantiómeros 4A y 4B:

Se agitó una mezcla de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 4g (0.62 g, 1.4 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (0.511 g, 2.8 mmol) y diisopropiletilamina (481 pL, 2.8 mmol) en CH³CN (30 mL) a temperatura ambiente durante 21 h y a 40°C durante 6 h. La mezcla de reacción se vertió en agua (125 mL) y se extrajo el producto con Et²O (2x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 12 g, fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones que contenían el Compuesto 4 se combinaron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó posteriormente mediante HPLC preparativa (fase estacionaria: RP XBridge® C18 OBD - 10 pm, 50 x 150 mm, Fase móvil: solución de NH⁴HCO³ al 0.25% en agua, CH³CN). Las fracciones deseadas se combinaron y se concentraron a presión reducida a un volumen residual de ~5 mL. La solución resultante se dejó reposar durante 70 h para permitir la precipitación del producto. El producto se retiró por filtración, se lavó con H²O (4x) y se secó al vacío a 45°C para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(7-metil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 4 , 340 mg) en forma de una mezcla racémica.

Se separaron los enantiómeros del Compuesto 4 (297 mg) por medio de separación Quiral en Fase Normal (Fase estacionaria: Whelk-O1 (R,R), fase móvil: 80% de heptano, 20% de etanol) para dar el enantiómero 4A como el primer producto eluido y el enantiómero 4B como el segundo producto eluido. Ambos enantiómeros se purificaron adicionalmente mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 12 g, fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones deseadas se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se agitó en H²O (5 mL) MeOH (1.25 mL), se retiró por filtración, se lavó 4x con H²O/MeOH 4/1 y se secó al vacío a 45°C para proporcionar el enantiómero 4A (79 mg) y el enantiómero 4B (60 mg).

Compuesto 4:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 2.55 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.2 Hz, 2 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.76 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.19 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.35 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.4 Hz, 1 H) 7.35 (s a, 1 H) 7.38 (dd, J=8.7, 6.9 Hz, 1 H) 8.32 (s a, 1 H) 8.56 (d, J=3.3 Hz, 1 H) 12.46 (br d, J=2.6 Hz, 1 H)

LC/MS (método LC-B): TR 2.11 min, MH+ 547

Enantiómero 4A:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 2.55 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.3 Hz, 2 H) 3.76 - 3.90 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.20 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.35 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.35 (s a, 1 H) 7.38 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 8.33 (s a, 1 H) 8.56 (s, 1 H) 12.46 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-B): TR 2.09 min, MH+ 547

[a]D20: -80.4° (c 0.495, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 3.20 min, MH+ 547, pureza quiral 99.6%.

Enantiómero 4B:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 2.55 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.3 Hz, 2 H) 3.77 - 3.90 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.76 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.20 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.35 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.4 Hz, 1 H) 7.35 (s a, 1 H) 7.38 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 8.32 (s a, 1 H) 8.56 (s, 1 H) 12.46 (s, 1 H)

LC/MS (método LC-B): TR 2.09 min, MH+ 547

[a]D20: 74.1° (c 0.425, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 2.91 min, MH+ 547, pureza quiral 96.9%.

Ejemplo 5 : síntesis de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 5) y separación quiral en los enantiómeros 5A y 5B .

Síntesis del intermedio 5a:

Una solución de 5-(trifluorometoxi)-1 H-indol [CAS 262593-63-5] (5 g, 24.9 mmol) en CH²Cl² (150 mL) se enfrió a 0 °C en una atmósfera de N². Se añadió gota a gota una solución de cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (37.3 mL, 37.3 mmol) y la mezcla resultante se mantuvo a 0°C durante 15 min. Se añadió gota a gota una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a' (7.05 g, 34.8 mmol) en CH²Cl² (50 mL). Se continuó agitando a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 1.5 h. La mezcla de reacción se vertió en una solución en agitación de hielo/sal de Rochelle. Después de haberse fundido el hielo, la mezcla se filtró sobre dicalite® y la torta de filtro se lavó varias veces con THF. Los filtrados se combinaron. Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se trituró con CH²Cl² (50 mL) y el precipitado se retiró por filtración para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometoxi)-1H-indol-3-il)etanona 5a (7.36 g). El filtrado se concentró al vacío y el residuo sólido se agitó en CH²Cl² (10 mL). La concentración de los sólidos proporcionó una segunda recogida de 5a (431 mg).

Síntesis del intermedio 5b:

Una solución en agitación de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometoxi)-1H-indol-3-il)etanona 5a (7.35 g, 20.0 mmol) en THF (200 mL) se enfrió a 0°C. Se añadió gota a gota una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56­ 1] (8.28 g, 22.0 mmol) en THF (100 mL). La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Los sólidos se retiraron por filtración y se lavaron con THF. Los filtrados combinados se evaporaron a presión reducida. El residuo se mezcló con EtOAc (30 mL). Los sólidos se aislaron por filtración, se lavaron con una pequeña cantidad de EtOAc y se secaron al vacío a 50 °C para proporcionar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometoxi)-1H-indol-3-il)etanona 5b (7.8 g) que se usó sin purificación adicional en la siguiente etapa.

Síntesis del Compuesto 5 y separación quiral de los Enantiómeros 5A y 5B:

Se agitó una mezcla de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 5b (3 g, 6.72 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (1.85 g, 10.1 mmol) y diisopropiletilamina (1.16 mL, 6.72 mmol) en THF (150 mL) y CH³CN (150 mL) a temperatura ambiente durante una noche. La temperatura de la reacción se aumentó hasta 60°C durante 6 h y posteriormente a 80°C durante una noche. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en CH²Cl², se lavó con HCl 1N (100 mL) y agua (100 mL), se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 120 g, fase móvil: gradiente de 0/100 a 50/50 de EtOAc:EtOH(3:1)/heptano). Las fracciones deseadas se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó posteriormente mediante HPLC preparativa (fase estacionaria: RP XBridge® Prep C18 OBD - 10 ^m, 50 x 150 mm, fase móvil: solución de NH⁴HCO³ al 0.25% en agua, CH³CN). Las fracciones deseadas se combinaron y evaporaron a presión reducida para dar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 5, 1.18 g) en forma de una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros del Compuesto 5 (1.18 g) se llevó a cabo mediante SFC preparativa (Fase estacionaria: Chiralcel® Diacel OD 20 x 250 mm, Fase móvil: CO², EtOH 0.4% de /PrNH²). Las fracciones de producto se combinaron y evaporaron para proporcionar el enantiómero 5A como el primer producto eluido y el enantiómero 5B como el segundo producto eluido.

El enantiómero 5A (0.46 g) se purificó por cromatografía ultrarrápida (Fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 12 g, Fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones deseadas se combinaron y evaporaron a presión reducida y se coevaporaron con una mezcla de Et²O y heptano. La espuma residual se trituró con H²O (7.5 mL) y MeOH (2.5 mL). Los sólidos se retiraron por filtración, se lavaron (4x) con una mezcla de H²O/MeOH 3/1 y se secaron al vacío a 45°C para proporcionar el enantiómero 5A (291 mg).

El enantiómero 5B (0.46 g) se purificó por cromatografía ultrarrápida (Fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 12 g, Fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron a presión reducida y se co-evaporaron dos veces con MeOH. El residuo se trituró con H²O (7.5 mL) y MeOH (2.5 mL). Los sólidos se retiraron por filtración, se lavaron (4x) con una mezcla de H²O/MeOH 3/1 y se secaron al vacío a 45°C para proporcionar el enantiómero 5B (351 mg).

Compuesto 5:

1H RMN (360 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.60 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.0 Hz, 2 H) 3.75 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=1.8 Hz, 2 H) 6.15 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.6 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.8, 2.2 Hz, 1 H) 7.38 (dd, J=8.4, 7.0 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.06 (s a, 1 H) 8.55 (s, 1 H) 12.23 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.20 min, MH+ 549

Enantiómero 5A:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.3 Hz, 2 H) 3.76 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.15 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.2, 2.4 Hz, 1 H) 7.20 (dd, J=8.8, 1.8 Hz, 1 H) 7.38 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.06 (d, J=0.9 Hz, 1 H) 8.53 (s, 1 H) 12.26 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.12 min, MH+ 549

[a]D20: -93.5° (c 0.445, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 3.16 min, MH+ 549, pureza quiral 100%.

Enantiómero 5B:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.2 Hz, 2 H) 3.77 - 3.90 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.15 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.4 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.7, 1.9 Hz, 1 H) 7.38 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.07 (d, J=0.9 Hz, 1 H) 8.53 (s, 1 H) 12.26 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.12 min, MH+ 549

[a]D20: 95.1° (c 0.465, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 2.86 min, MH+ 549, pureza quiral 100%.

Ejemplo 6 : 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1H-indol-3-il)etanona (Compuesto 6) y separación quiral en los enantiómeros 6A and 6B .

Síntesis del intermedio 6a:

A una solución enfriada (-15 °C) de 3-metoxi-4-(trifluorometoxi)benzaldehído [CAS 853771-90-1] (50 g, 230 mmol) y azidoacetato de etilo (89 g, 690 mmol) en EtOH (400 mL) se añadió gota a gota, durante un periodo de 2 h, una solución de NaOEt (0.69 mol, preparada a partir de 15.9 g de Na y 700 mL de EtOH). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. Después de enfriarla en un baño de hielo, la reacción se desactivó con una solución saturada de NH4Cl (1.2 L) y se agitó durante 10 min. El precipitado se separó por filtración, se lavó con agua y se secó para obtener 2-azido-3-(3-metoxi-4-(trifluorometoxi)fenil)acrilato de (Z)-etilo 6a (32 g) como un sólido amarillento.

Síntesis del intermedio 6b:

Una solución de 2-azido-3-(3-metoxi-4-(trifluorometoxi)fenil)acrilato de (Z)-etilo 6a (3 g, 10 mmol) en xileno (40 mL) se calentó a reflujo durante una noche. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, se evaporó el disolvente a sequedad. El residuo se purificó con hexano (50 mL) y el precipitado se separó por filtración para obtener 6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-2-carboxilato de metilo 6b (rendimiento: 1.4-1.6 g) como un sólido amarillo.

Síntesis del intermedio 6c:

A una mezcla de 6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-2-carboxilato de metilo 6b (25 g, 87 mmol) en MeOH/H²O (2/1,300 mL) se le añadió NaOH (7 g, 175 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo hasta que se obtuvo una solución transparente. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, se eliminó la mayor parte del metanol a presión reducida y la solución acuosa restante se acidificó con HCl conc. hasta un pH de 3-4. El producto se extrajo con EtOAc (2x 250 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron y se evaporaron a presión reducida para dar ácido 6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-2-carboxílico 6c (22.7 g) en forma de un sólido de color gris.

Síntesis del intermedio 6d:

Una suspensión del ácido 6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-2-carboxílico 6c (7.5 g, 27 mmol) y Cu (1.22 g, 0.7 eq) en quinolina (150 mL) se calentó hasta 220-230 °C en una atmósfera inerte durante 12 h. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con éter ferc-butil metílico (MTBE, 400 mL) y se lavó con una solución acuosa saturada de NaHSO4 (2x 500 mL). La fase orgánica se secó con MgSO4, se filtró a través de un lecho corto de gel de sílice y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna para obtener 6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol 6d (3.75 g) como un sólido amarillo.

Síntesis del intermedio 6e:

Bajo una corriente de N², se añadió gota a gota cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (8.45 mL, 8.45 mmol) a una solución enfriada (0°C) de 6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol 6d (1.3 g, 5.62 mmol) en CH²Cl² (25 mL). Después de 30 min de agitación a 0°C, se añadió gota a gota una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a' (1.71 g, 8.45 mmol) en CH²Cl² (15 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 3 h. Se añadió agua-hielo. El precipitado se retiró por filtración y se secó al vacío para dar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 6e (2 g).

Síntesis del intermedio 6f:

A 0 °C, se añadió gota a gota una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (1.7 g, 4.28 mmol) en THF (60 mL) a una mezcla de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 6e (1.6 g, 4.28 mmol) en THF (60 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 4 h. El precipitado se retiró por filtración y se lavó con EtOAc. Los filtrados combinados se concentraron a presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se recogió por completo con diisopropil éter. El precipitado se retiró por filtración y se secó para dar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 6f (1.9 g).

Síntesis del Compuesto 6 y separación quiral en los Enantiómeros 6A y 6B:

Se agitó una mezcla de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 6f (2.08 g, 4.37 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1 ] (0.96 g, 5.24 mmol) y diisopropiletilamina (1.13 mL, 6.55 mmol) en CH³CN (100 mL) a 70°C durante 6 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con CH²Cl² se lavó con HCl 1N. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (15-40 pm, 80 g, CH²Cl²/MeOH 99/1). Las fracciones que contenían el Compuesto 6 se combinaron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo (1 g) se purificó nuevamente mediante SFC aquiral (Fase estacionaria: dietilaminopropilo 5 pm 150 x 21.2 mm, Fase móvil: 60% CO² , 40% MeOH 0.3% iPrNH²) para dar, tras su cristalización a partir de éter de diisopropilo/éter de petróleo, 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 6, 650 mg) en forma de una mezcla racémica.

Los enantiómeros del Compuesto 6 se separaron mediante SFC quiral preparativa (Fase estacionaria: Chiralpack® IC 5 pm 250 x 2 0mm, Fase móvil: CO² al 70%, iPrOH al 30% iPrNH² al 0.3%) para dar, tras su solidificación a partir de heptano/éter de diisopropilo, 244 mg del primer enantiómero eluido 6A y 254 mg del segundo enantiómero eluido 6B .

Compuesto 6:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 3.54 - 3.69 (m, 5 H) 3.76 - 3.90 (m, 5 H) 3.95 (s, 3 H) 4.75 (t a, J=5.3 Hz, 1 H) 5.72 (s, 1 H) 5.92 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.12 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.3 Hz, 1 H) 6.92 (dd, J=11.4, 2.3 Hz, 1 H) 7.20 (s, 1 H) 7.37 (dd, J=8.1,7.1 Hz, 1 H) 8.02 (s, 1 H) 8.38 (s, 1 H) 12.03 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-C): TR 3.02 min, MH+ 579

Punto de fusión: 178°C

Enantiómero 6A:

1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 3.57 - 3.68 (m, 5 H) 3.77 - 3.89 (m, 5 H) 3.95 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.12 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.36 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.4, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.5 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.37 (dd, J=8.5, 6.9 Hz, 1 H) 8.02 (d, J=1.3 Hz, 1 H) 8.39 (s, 1 H) 11.97 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-C): TR 3.00 min, MH+ 579

[a]D20: 73.9° (c 0.2367, DMF)

SFC quiral (método SFC-B): TR 2.09 min, MH+ 579, pureza quiral 100%.

Enantiómero 6B:

1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 3.56 - 3.68 (m, 5 H) 3.78 - 3.87 (m, 5 H) 3.95 (s, 3 H) 4.78 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.12 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.36 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.2, 2.4 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.37 (dd, J=8.5, 6.9 Hz, 1 H) 8.02 (d, J=1.3 Hz, 1 H) 8.39 (s, 1 H) 11.98 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-C): TR 3.00 min, MH+ 579

[a]D20: -73.7° (c 0.2658, DMF)

SFC quiral (método SFC-B): TR 4.41 min, MH+ 579, pureza quiral 100%.

Ejemplo 7 : síntesis de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 7) y separación quiral en los enantiómeros 7A y 7B .

Síntesis del intermedio 7a:

Se agitó una solución de 3-fluoro-4-(trifluorometoxi)anilina [CAS 1017779-69-9] (32.0 g, 164 mmol) en CH³CN (600 mL) en un baño de hielo. Se añadió W-yodo-succinimida (40.59 g, 180.4 mmol) y se dejó que la mezcla de reacción alcanzase lentamente la temperatura ambiente con agitación durante una noche. Se concentró el disolvente a presión reducida. Se añadió agua y se extrajo el producto con EtOAc (2x 300 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa de Na2S2O3 (500 mL), salmuera (500 mL), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente: gradiente de éter de petróleo/EtOAc de 50/1 a 30/1). Las fracciones deseadas se combinaron y evaporaron a presión reducida para proporcionar 5-fluoro-2-yodo-4-(trifluorometoxi)anilina 7a (45 g).

Síntesis del intermedio 7b:

A una solución de 5-fluoro-2-yodo-4-(trifluorometoxi)anilina 7a (43.0 g, 134 mmol) y trimetilsililacetileno (39.5 g, 401.9 mmol) en trietilamina (650 mL) se le añadió diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II) (3.76 g, 5.36 mmol) y yoduro de cobre(I) (2.55 g, 13.4 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 80°C durante 1 h. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente: gradiente de éter de petróleo/EtOAc de 50/1 a 30/1). Las fracciones deseadas se combinaron y evaporaron a presión reducida para dar 5-fluoro-4-(trifluorometoxi)-2-((trimetilsilil)etinil)anilina 7b (36.5 g).

Síntesis del intermedio 7c:

Se disolvió 5-fluoro-4-(trifluorometoxi)-2-((trimetilsilil)etinil)anilina 7b (36.0 g, 123.6 mmol) en NMP (500 mL). Se añadió ferc-butóxido de potasio (41.6 g, 370.7 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 80°C durante 15 h. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se inactivó con agua. El producto se extrajo con MTBE (3x 500 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2x 1 L), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: sílice SepaFlash® 330 g, Fase móvil: gradiente del 0 al 2% de EtOAc en éter de petróleo). Las fracciones deseadas se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó adicionalmente por destilación a presión reducida para dar 6-fluoro-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol 7c (18.2 g) en forma de un aceite de color amarillo pálido.

Síntesis del intermedio 7d:

Se enfrió una solución de 6-fluoro-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol 7c (1.59 g, 7.26 mmol) n CH²CI² (150 mL) hasta 0°C en atmósfera de N². Se añadió gota a gota una solución de cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (10.9 mL, 10.9 mmol) y la mezcla resultante se mantuvo a 0°C durante 30 min. Se añadió gota a gota una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a' (2.2 g, 10.9 mmol) en CH²Cl² (75 mL). Se continuó agitando a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C y se añadió gota a gota una solución de tetrahidrato de tartrato de sodio y potasio (sal de Rochelle, 4.1 g, 14.5 mmol) en agua (6 mL) y se agitó la mezcla durante 30 min a 0°C. La mezcla de reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se añadió THF (200 mL) y Na2SO4 (25 g). Después de agitar durante una noche, la mezcla se filtró sobre dicalite® y la torta de filtro se lavó varias veces con THF (4x 150 mL). Los filtrados se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El residuo sólido se agitó en una mezcla de disolventes de DIPE (25 mL) y EtOAc (2 mL). Los sólidos se retiraron por filtración, se lavaron con DIPE (3x) y se secaron 50°C al vacío para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometoxi)-1H-indol-3-il)etanona 7d (2.6 g).

Síntesis del intermedio 7e:

Se enfrió una solución de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 7d (2.60 g, 6.75 mmol) en THF (130 mL) a 0°C, bajo una atmósfera de N². Se añadió tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (2.66 g, 7.09 mmol). La mezcla se agitó a 0°C durante 45 min y a temperatura ambiente durante 90 min. El precipitado se retiró por filtración y se lavó con THF (2x). Los filtrados combinados se concentraron a presión reducida para dar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 7e (3.6 g), que se usó tal cual en la etapa siguiente sin purificación adicional.

Síntesis del Compuesto 7 y separación quiral en los Enantiómeros 7A y 7B:

Se agitó una mezcla de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometoxi)-1H-indol-3-il)etanona 7e (3.59 g, 7.73 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (2.83 g, 15.5 mmol) y diisopropiletilamina (2.67 mL, 15.5 mmol) en CH³CN a temperatura ambiente durante 48 h. La mezcla de reacción se vertió en agua (250 mL) y se extrajo el producto con Et²O (2x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 100 g, fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones de producto se combinaron y se evaporó el disolvente a presión reducida. El residuo se purificó posteriormente mediante HPLC preparativa (fase estacionaria: Uptisphere® C18 ODB - 10 gm, 200 g, 5 cm, Fase móvil: solución de NH⁴HCO³ al 0.25% en agua, CH³CN). Las fracciones deseadas se combinaron y concentraron a presión reducida. El residuo, que contenía 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona racémica (Compuesto 7 , 1.29 g) se sometió a separación quiral usando SFC preparativa (Fase estacionaria: Chiralcel® Diacel OD 20 x 250 mm, Fase móvil: CO² , EtOH iPrNH² al 0.4%) para dar el enantiómero 7A como el primer producto eluido y el enantiómero 7B como el segundo producto eluido. Ambos enantiómeros se purificaron adicionalmente mediante cromatografía en columna (Fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 12 g, Fase móvil: gradiente de EtOAc:EtOH(3:1)/heptano de 0/100 a 40/60) y posteriormente mediante HPLC preparativa (Fase estacionaria: RP XBridge® Prep C18 OBD - 10 gm, 30 x 150 mm, fase móvil: solución de NH⁴HCO³ al 0.25% en agua, MeOH). Las fracciones deseadas se combinaron y se evaporaron a presión reducida. Ambos enantiómeros se precipitaron de una solución en MeOH mediante adición lenta de agua. Los sólidos se retiraron por filtración y se secaron a 50°C al vacío para proporcionar el enantiómero 7A (42 mg) y el enantiómero 7B (278 mg).

Enantiómero 7A:

1H RMN (360 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.60 (s, 3 H) 3.63 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.76 - 3.88 (m, 2 H) 3.93 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.5, 2.4 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.4, 7.0 Hz, 1 H) 7.60 (d, J=10.6 Hz, 1 H) 8.16 (dd, J=8.1, 1.1 Hz, 1 H) 8.54 (s, 1 H) 12.32 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.16 min, MH+ 567

[a]D20: -77.1° (c 0.305, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 3.00 min, MH+ 567, pureza quiral 100%.

Enantiómero 7B:

1H RMN (360 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.60 (s, 3 H) 3.63 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.76 - 3.88 (m, 2 H) 3.93 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.41 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.74 (td, J=8.4, 2.6 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.6 Hz, 1 H) 7.37 (dd, J=8.4, 7.0 Hz, 1 H) 7.60 (d, J=10.4 Hz, 1 H) 8.16 (dd, J=7.7, 1.1 Hz, 1 H) 8.54 (s, 1 H) 12.33 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.16 min, MH+ 567

[a]D20: 84.0° (c 0.455, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 2.73 min, MH+ 567, pureza quiral 100%.

Ejemplo 8 : síntesis de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1 -(7-metil-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 8) y separación quiral en los enantiómeros 8A y 8B .

Síntesis del intermedio 8a:

Una mezcla de cloruro de boro(III) 1M en CH²Cl² (25.5 mL, 25.5 mmol) y cloruro de aluminio(III) (3.40 g, 25.5 mmol) se diluyó con CH²Cl² (20 mL) y se enfrió en un baño de hielo en atmósfera de N². Se añadió gota a gota una solución de 2-metil-4-(trifluorometoxi)anilina [CAS 86256-59-9] (4.88 g, 25.5 mmol) y cloroacetonitrilo (3.24 mL, 51.0 mmol) en CH²Cl² (7.5 mL). Después de la adición, se retiró el baño de hielo y la mezcla se calentó a reflujo durante 8 h. La mezcla se enfrió de nuevo hasta 0 °C utilizando un baño de hielo. Se añadió gota a gota HCl 2N (75 mL), lo cual provocó una precipitación muy abundante. La suspensión resultante se calentó a reflujo durante 90 min y se enfrió hasta temperatura ambiente. Los sólidos se retiraron por filtración. La masa retenida sobre el filtro se lavó con CH²Cl² (4x). Los filtrados se combinaron y las fases se separaron. La fase orgánica se aisló, se lavó con una solución acuosa de NaHCO3, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: Sílice Biotage® SNAP Ultra 100 g, fase móvil: gradiente de heptano/CH²Cl² de 100/0 a 0/100). Las fracciones deseadas se combinaron y se concentraron hasta obtener un volumen residual de 30 mL. El precipitado se separó por filtración, se lavó con heptano y CH²Cl² y se secó al vacío a 50 °C para proporcionar 1-(2-amino-3-metil-5-(trifluorometoxi)fenil)-2-cloroetanona 8a (1.37 g). El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo sólido se agitó en una mezcla de heptano (20 mL) y diisopropil éter (3 mL), se retiró por filtración, se lavó con heptano (3x) y se secó al vacío a 50°C para proporcionar una segunda fracción de 8a (0.24 g).

Síntesis del intermedio 8b:

Se añadió borohidruro sódico (326 mg, 8.61 mmol) a una solución en agitación de 1-(2-amino-3-metil-5-(trifluorometoxi)fenil)-2-cloroetanona 8a (1.92 g, 7.17 mmol) en ferc-butanol (50 mL) y agua (5 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min y a 90°C durante 2.5 h. Se añadió agua (50 mL) y el producto se extrajo con éter dietílico (2x). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: Sílice Biotage® SNAP Ultra 25 g, Fase móvil: gradiente de 100/0 a 20/80 de heptano/EtOAc). Las fracciones deseadas se combinaron, se concentraron a presión reducida, se co-evaporaron con heptano y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 7-metil-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol 8b (1.2 g).

Síntesis del intermedio 8c:

Se enfrió una solución de 7-metil-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol 8b (1.2 g, 5.58 mmol) n CH²Cl² (75 mL) hasta 0°C en atmósfera de N². Se añadió gota a gota una solución de cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (8.36 mL, 8.36 mmol) durante 1 min a la solución en agitación y la mezcla resultante se mantuvo a 0°C durante 10 min. Se añadió gota a gota una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a' (1.69 g, 8.36 mmol) en CH²CL (25 mL) mientras se mantenía la temperatura interna de la reacción a menos de 5°C. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 2 h y a 10°C durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió nuevamente a 0°C y la reacción se inactivó mediante la adición lenta de una solución de tetrahidrato de tartrato de sodio y potasio (sal de Rochelle) [CAS 6100-16-9] (3.15 g, 11.2 mmol) en agua (3.5 mL). Tras agitar durante 10 min adicionales a 0°C, se retiró el baño de hielo y la mezcla resultante se diluyó con THF (75 mL). Se añadió Na2SO4 (10 g) y tras agitar durante una noche, la mezcla se filtró sobre dicalite®. La torta de filtro se lavó con THF. Los filtrados combinados se evaporaron a presión reducida. El residuo sólido se agitó en una pequeña cantidad de CH³CN, se filtró, se lavó con CH³CN (2x) y se secó al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 8c (1.82 g).

Síntesis del intermedio 8d:

Una solución en agitación de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 8c (1.82 g, 4.77 mmol) en THF (40 mL) se enfrió hasta 0°C en atmósfera de N². Se añadió tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56­ 1] (1.88 g, 5.01 mmol). La suspensión resultante se agitó a 0°C durante 2 h y a temperatura ambiente durante 1 h. Los sólidos se retiraron por filtración y se lavaron con THF (3x). Los filtrados combinados se evaporaron a presión reducida para proporcionar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 8d (2.20 g), que se usó sin purificación adicional en la etapa siguiente.

Síntesis del Compuesto 8 y separación quiral de los Enantiómeros 8A y 8B:

Se agitó un mezcla de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 8d (2.20 g, 4.77 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1 ] (1.75 g, 9.55 mmol) y diisopropiletilamina (1.65 mL, 9.55 mmol) en THF (40 mL) y CH³CN (60 mL) a temperatura ambiente durante 5 días. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 120 g, fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones deseadas se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó posteriormente mediante HPLC preparativa (fase estacionaria: Uptisphere® C18 ODB - 10 pm, 200 g, 5 cm, Fase móvil: solución de NH⁴HCO³ al 0.25% en agua, CH³CN). Las fracciones deseadas se combinaron y evaporaron a presión reducida hasta un volumen residual de 300 mL. El precipitado formado durante la evaporación se retiró por filtrad, se lavó con H²O (5x) y se secó al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(7-metil-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 8, 1.28 g) en forma de una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros del Compuesto 8 (1.2 g) se llevó a cabo mediante separación quiral en fase normal (Fase estacionaria: AS 20 pm, fase móvil: 100% de metanol). Las fracciones de producto se combinaron y evaporaron para proporcionar el enantiómero 8A como el primer producto eluido y el enantiómero 8B como el segundo producto eluido. El enantiómero 8A (0.54 g) se purificó adicionalmente por cromatografía ultrarrápida (Fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 12 g, Fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones deseadas se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se agitó en H²O (2.5 mL) y MeOH (0.75 mL). Tras agitar durante 15 minutos, el producto se retiró por filtración, se lavó (3x) con una mezcla de H²O/MeOH 3/1 y se secó al vacío a 50°C para proporcionar el enantiómero 8A (425 mg). El enantiómero 8B (0.45 g) se purificó adicionalmente por cromatografía ultrarrápida (Fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 12 g, Fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones deseadas se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se agitó en H²O (2.5 mL) y MeOH (0.75 mL). Tras agitar durante 15 minutos, el producto se retiró por filtración, se lavó (3x) con una mezcla de H²O/MeOH 3/1 y se secó al vacío a 50°C para proporcionar el enantiómero 8B (275 mg).

Compuesto 8:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 6 ppm 2.50 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.83 (qt, J=10.1,5.1 Hz, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.76 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.35 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.04 (s a, 1 H) 7.37 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 7.90 (s a, 1 H) 8.51 (d, J=2.9 Hz, 1 H) 12.33 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-B): TR 2.13 min, MH+ 563

Enantiómero 8A:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 2.50 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.2 Hz, 2 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.78 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.04 (s a, 1 H) 7.37 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 7.90 (s a, 1 H) 8.51 (d, J=3.3 Hz, 1 H) 12.35 (d, J=2.6 Hz, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.16 min, MH+ 563

[a]D20: 77.8° (c 0.445, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 2.82 min, MH+ 563, pureza quiral 100%.

Enantiómero 8B:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 2.50 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.83 (qt, J=10.2, 5.1 Hz, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.76 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.35 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.4 Hz, 1 H) 7.04 (s a, 1 H) 7.37 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 7.90 (s a, 1 H) 8.51 (d, J=3.1 Hz, 1 H) 12.33 (br d, J=2.2 Hz, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.16 min, MH+ 563

[a]D20: -77.9° (c 0.465, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 3.19 min, MH+ 563, pureza quiral 100%.

Ejemplo 9 : síntesis de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 9) y separación quiral en los enantiómeros 9A y 9B .

Síntesis del intermedio 9a':

Se añadió ácido 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acético [CAS 170737-95-8] (5.8 g, 28.9 mmol) en pequeñas porciones a cloruro de tionilo (50 mL) y la solución resultante se agitó durante una noche a 60°C. El disolvente se concentró a presión reducida y se co-evaporó con tolueno para dar cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 9a' (6.5 g) en forma de un residuo oleoso que se usó sin purificación adicional en la siguiente etapa.

Síntesis del intermedio 9a:

Se añadió gota a gota cloruro de titanio(IV) (2.32 mL, 21.2 mmol) a temperatura ambiente a una solución de 1 -tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol 1a (3.7 g, 10.95 mmol) y cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 9a' (4.8 g, 21.9 mmol) en 1,2-dicloroetano (120 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se añadió agua enfriada con hielo. Se extrajo la mezcla de reacción con EtOAc. La fase orgánica se secó con MgSO⁴ , se filtró y se concentró el disolvente a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (15-40 80 g, CH²Cl²/MeOH 99.5/0.5). Las fracciones que contenían el Compuesto 9a se combinaron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El compuesto se recogió con CH3CN/éter de diisopropilo. El precipitado se retiró por filtración y se secó para dar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 9a (2.8 g).

Síntesis del intermedio 9b:

Se añadió hidróxido de litio (0.64 g, 15.3 mmol) a una solución de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(1 -tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 9a (3.2 g, 6.13 mmol) en THF (18 mL) y agua (6 mL). La mezcla se agitó a 30 °C durante 1 h. Se añadieron agua y EtOAc. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. El sólido se recogió con éter de diisopropilo. El precipitado se retiró por filtración y se secó para dar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 9b (2.1 g).

Síntesis del intermedio 9c:

A 0 °C, se añadió gota a gota una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (2.1 g, 5.7 mmol) en THF (60 mL) a una mezcla de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 9b (2.15 g, 5.7 mmol) en THF (50 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 4 h. El precipitado se retiró por filtración y se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se recogió con DIPE. El precipitado se retiró por filtración y se secó para dar 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 9c (2.5 g).

Síntesis del Compuesto 9 y separación quiral en los Enantiómeros 9A y 9B:

Se agitó una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 9c (1.5 g, 3.36 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (0.61 g, 3.36 mmol) y diisopropiletilamina (0.87 mL, 5.04 mmol) en CH³CN (100 mL) a 70°C durante 24 h. El residuo se diluyó con CH²Cl² y HCl 1N. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (15-40 gm, 80 g, CH²Cl²/MeOH 99/1). Las fracciones que contenían el Compuesto 9 se combinaron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo (680 mg) se solidificó a partir de éter de diisopropilo/CH3CN para dar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 9, 610 mg) en forma de una mezcla racémica. Los enantiómeros se separaron mediante SFC quiral preparativa (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 gm 250 x 20 mm, Fase móvil: CO² al 70%, EtOH al 30%) para dar, tras solidificar en éter de petróleo/éter de diisopropilo, 255 mg del primer enantiómero eluido 9A y 237 mg del segundo enantiómero eluido 9B .

Compuesto 9:

1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.3 Hz, 2 H) 3.78 - 3.88 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.78 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.73 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.19 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.42 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.37 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.53 (dd, J=8.7, 1.7 Hz, 1 H) 7.69 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 8.48 (s, 1 H) 8.60 (s, 1 H) 12.42 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-C): TR 3.10 min, MH+ 549

Enantiómero 9A:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.58 - 3.68 (m, 5 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.73 (s, 1 H) 5.94 (d, J=1.5 Hz, 2 H) 6.19 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.41 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.53 (dd, J=8.3, 1.3 Hz, 1 H) 7.68 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 8.48 (s, 1 H) 8.59 (s, 1 H) 12.40 (s a, 1 H) LC/MS (método LC-C): TR 3.15 min, MH+ 549

[a]D20: -102.7° (c 0.2727, DMF)

SFC quiral (método SFC-A): TR 2.35 min, MH+ 549, pureza quiral 100%.

Enantiómero 9B:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.59 - 3.68 (m, 5 H) 3.78 - 3.89 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.3 Hz, 1 H) 5.73 (s, 1 H) 5.94 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.19 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.41 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.53 (dd, J=8.6, 1.0 Hz, 1 H) 7.68 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 8.48 (s, 1 H) 8.59 (s, 1 H) 12.33 (s a, 1 H) LC/MS (método LC-C): TR 3.15 min, MH+ 549

[a]D20: 124.7° (c 0.2727, DMF)

SFC quiral (método SFC-A): TR 3.88 min, MH+ 549, pureza quiral 100%.

Ejemplo 10 : 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 10).

Síntesis del intermedio 10a:

Bajo una corriente de N² , se añadió gota a gota cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (19.17 mL, 19.17 mmol) a -70°C a una solución de 6-metoxi-5-(trifluorometil)-1 H-indol 2c (2.75 g, 12.8 mmol) en CH²Cl² (30 mL). Después de 5 min de agitación a -70°C, se añadió gota a gota cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 9a' (4.2 g, 19.17 mmol) en CH²Cl² (30 mL). La mezcla se agitó a -70°C durante 1 h. Se añadió agua-hielo. La mezcla se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se secó con MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se cristalizó a partir de CH²Cl² y el precipitado se retiró por filtración. El producto crudo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en gel de sílice (15-40 qm, 120 g, heptano/EtOAc 50/50). Las fracciones puras se combinaron y evaporaron a sequedad para dar, tras su solidificación a partir de éter de diisopropilo/CH3CN, 250 mg de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometil)-1H-indol-3-il)etanona 10a.

Síntesis del Compuesto 10:

A 0 °C, se añadió gota a gota una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (236 mg, 0.628 mmol) en THF (5 mL) a una mezcla de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometil)-1H-indol-3-il)etanona 10a (250 mg, 0.628 mmol) en THF (5 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 4 h. Se añadió gota a gota una solución de 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (345 mg, 1.88 mmol) en CH³CN (5 mL) y se continuó agitando a temperatura ambiente durante 24 h. La mezcla se concentró a presión reducida. Se introdujo el residuo en EtOAc y se lavó con HCl 1N y agua. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. La purificación se llevó a cabo mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 qm, 24 g, CH2Cl2/CH3OH 99.5/0.5). Las fracciones puras se combinaron y evaporaron a sequedad para dar, tras su cristalización en CH²Cl²/MeOH, 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 10) en forma de un racemato.

Compuesto 10:

1H RMN (500 Mhz, DMSO-cfe) 6 ppm 3.58 - 3.69 (m, 5 H) 3.76 - 3.91 (m, 5 H) 3.96 (s, 3 H) 4.80 (t a, J=5.4 Hz, 1 H) 5.73 (s, 1 H) 5.93 (s, 2 H) 6.16 (br d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.41 (br d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.98 (br d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.11 (s, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.37 (s, 1 H) 8.45 (s, 1 H) 12.16 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-C): TR 3.11 min, MH+ 579

Punto de fusión: 133°C

Ejemplo 11: síntesis de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 11) y separación quiral en los enantiómeros 11A y 11B.

Síntesis del intermedio 11a:

Se añadió gota a gota cloruro de titanio(IV) (1.23 mL, 11.2 mmol) a temperatura ambiente a una solución en agitación de 6-cloro-1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol 3a (2 g, 5.6 mmol) y cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 9a' (2.45 g, 11.2 mmol) en diclorometano (50 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2.5 h. La reacción se inactivó mediante la adición de hielo picado (40 g). Después de la agitación durante 20 min, las capas se separaron. La fase orgánica se secó con MgSO⁴ , se filtró y se concentró el disolvente a presión reducida. El residuo se agitó en éter de diisopropilo (25 mL). Los sólidos se retiraron por filtración, se lavaron con éter de diisopropilo (3x) y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 11a (1.82 g).

Síntesis del intermedio 11b:

Se añadió hidróxido de potasio (0.66 g, 11.7 mmol) a una solución de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 11a (1.81 g, 3.35 mmol) en dioxano (30 mL) y agua (10 mL). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3.5 h. La mezcla de reacción se vertió lentamente en una mezcla en agitación de agua fría (100 mL) y] HCl 1N (15 mL). Tras agitar durante 30 minutos, los sólidos se retiraron por filtración, se lavaron con agua (3x) y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 11b (1.14 g).

Síntesis del intermedio 11c:

Se enfrió una solución de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 11b (1.14 g, 2.95 mmol) en THF (40 mL) a 0°C, bajo una atmósfera de N². Se añadió tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1 ] (1.16 g, 3.1 mmol). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 2 h. El precipitado se retiró por filtración y se lavó con THF (2x). Los filtrados combinados se concentraron a presión reducida para dar 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 11c (1.37 g), que se usó tal cual en la etapa siguiente sin purificación adicional.

Síntesis del Compuesto 11 y separación quiral en los Enantiómeros 11A y 11B:

Se agitó una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 11c (1.37 g, 2.95 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (1.08 g, 5.9 mmol) y diisopropiletilamina (1.02 mL, 5.9 mmol) en CH³CN (60 mL) a temperatura ambiente durante 85 h. La mezcla de reacción se vertió en agua (250 mL) y se extrajo el producto con Et²O (2x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 12 g, fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones que contenían el Compuesto 11 se combinaron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó posteriormente mediante HPLC preparativa (fase estacionaria: RP XBridge® C18 OBD - 10 pm, 50 x 150 mm, Fase móvil: solución de NH⁴HCO³ al 0.25% en agua, CH³CN). Las fracciones deseadas se combinaron y concentraron a presión reducida. El residuo se secó al vacío a 45°C para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 11, 151 mg) en forma de una mezcla racémica.

La separación quiral del Compuesto 11 (151 mg) se llevó a cabo mediante SFC preparativa (Fase estacionaria: Chiralcel® Diacel OD 20 x 250 mm, Fase móvil: CO², EtoH iPrNH² al 0.4%) para dar el enantiómero 11A como el primer producto eluido y el enantiómero 11B como el segundo producto eluido. Ambos enantiómeros se solidificaron por precipitación a partir de una mezcla de disolvente de MeOH y agua. Los sólidos se retiraron por filtración y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 22 mg del Enantiómero 11A y 16 mg del Enantiómero 11B.

Enantiómero 11A:

1H RMN (360 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.76 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=1.8 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=1.8 Hz, 2 H) 6.18 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.43 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.98 (dd, J=8.2, 2.0 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=11.7 Hz, 1 H) 8.45 (d, J=7.0 Hz, 1 H) 8.58 (s, 1 H) 12.35 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.19 min, MH+ 567

[a]D20: 87.4° (c 0.2735, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 3.12 min, MH+ 567, pureza quiral 100%.

Enantiómero 11B:

1H RMN (360 Mhz, DMSO-afe) ó ppm 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.73 - 3.88 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.73 (t a, J=2.2 Hz, 1 H) 5.93 (br d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.18 (br d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.44 (br d, J=8.4 Hz, 1 H) 6.98 (br dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.10 (br d, J=1.1 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.59 (br d, J=11.0 Hz, 1 H) 8.45 (br d, J=7.3 Hz, 1 H) 8.59 (s, 1 H) 12.47 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.19 min, MH+ 567

[a]D20: -86.6° (c 0.276, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 3.43 min, MH+ 567, pureza quiral 99.7%.

Ejemplo 12: síntesis de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1 -(7-metil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 12) y separación quiral en los enantiómeros 12A y 12B .

Síntesis del intermedio 12a:

Se añadió gota a gota cloruro de titanio(IV) (2.15 mL, 19.6 mmol) a temperatura ambiente a una solución en agitación de 7-metil-1-tosil-5-(trifluorometil)-1H-indol 4d (3.47 g, 9.81 mmol) y cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 9a' (4.30 g, 19.6 mmol) en diclorometano (50 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La reacción se inactivó mediante la adición de hielo picado (40 g). Después de la agitación durante 45 min, las capas se separaron. La fase orgánica se secó con MgSO⁴ , se filtró y se concentró el disolvente a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (Fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 120 g, Fase móvil: gradiente de heptano/CH²Cl² de 100/0 a 0/100). Las fracciones deseadas se combinaron y se concentraron a presión reducida. El residuo se secó al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-1-tosil-5-(trifluorometil)-1H-indol-3-il)etanona 12a (2.46 g).

Síntesis del intermedio 12b:

Se añadió hidróxido de potasio (0.90 g, 16.0 mmol) a una solución de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-1-tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 12a (2.46 g, 4.60 mmol) en dioxano (18 mL) y agua (6 mL). La mezcla se agitó durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se vertió lentamente en una mezcla en agitación de hielo-agua (50 mL) y HCl 1N (11 mL). Tras agitar durante 5 minutos, se extrajo el producto con 2-MeTHF (2x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se eliminaron por filtración y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: Sílice Biotage® Snap Ultra 25 g, Fase móvil: gradiente de heptano/CH²Cl² de 100/0 a 0/100). Las fracciones que contenían producto se concentraron a presión reducida y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-5-(trifluorometil)-1H-indol-3-il)etanona 12b (0.791 mg).

Síntesis del intermedio 12c:

Se enfrió una solución de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 12b (0.539 g, 1.4 mmol) en THF (20 mL) a 0°C, bajo una atmósfera de N². Se añadió tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (0.55 g, 1.47 mmol). La mezcla se agitó a 0°C durante 40 min y a temperatura ambiente durante 90 min. El precipitado se retiró por filtración y se lavó con THF (2x). Los filtrados combinados se concentraron a presión reducida para dar 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-5-(trifluorometil)-1H-indol-3-il)etanona 12c (650 mg), que se usó tal cual en la etapa siguiente sin purificación adicional.

Síntesis del Compuesto 12 y separación quiral en los Enantiómeros 12A y 12B:

Se agitó una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-5-(trifluorometil)-1H-indol-3-il)etanona 12c (0.791 g, 1.58 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1 ] (0.579 g, 3.16 mmol) y diisopropiletilamina (544 gL, 3.16 mmol) en CH³CN (30 mL) a temperatura ambiente durante 9 h. La mezcla de reacción se vertió en agua (125 mL) y se extrajo el producto con Et²Ü (2x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSÜ4, se filtraron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: sílice Biotage® SNAP Ultra 25 g, fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones que contenían el Compuesto 12 se combinaron y el disolvente se evaporó a presión reducida para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1 -(7-metil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 12, 604 mg) en forma de una mezcla racémica.

Los enantiómeros del Compuesto 12 (604 mg) se separaron mediante SFC preparativa (Fase estacionaria: Chiralcel® Diacel OD 20 x 250 mm, Fase móvil: CO², EtOH iPrNH² al 0.4%) para dar el enantiómero 12A como el primer producto eluido y el enantiómero 12B como el segundo producto eluido. Ambos enantiómeros se solidificaron por precipitación a partir de una mezcla de disolvente de MeOH y agua. Los sólidos se retiraron por filtración y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 199 mg del Enantiómero 12A y 185 mg del Enantiómero 12 B .

Enantiómero 12A:

1H RMN (360 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 2.53 - 2.57 (m, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.76 - 3.90 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.2 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=1.8 Hz, 2 H) 6.21 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.42 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.2, 2.0 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=2.2 Hz, 1 H) 7.33 - 7.38 (m, 2 H) 8.31 (s a, 1 H) 8.58 (s, 1 H) 12.50 (s a, 1 H) LC/MS (método LC-A): TR 1.21 min, MH+ 563

[a]D20: 58.5° (c 0.4135, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 3.19 min, MH+ 563, pureza quiral 100%.

Enantiómero 12B:

1H RMN (360 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 2.55 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.2 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.21 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.41 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.2, 2.0 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.33 - 7.38 (m, 2 H) 8.31 (s a, 1 H) 8.58 (s, 1 H) 12.48 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.21 min, MH+ 563

[a]D20: -55.7° (c 0.469, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 3.49 min, MH+ 563, pureza quiral 100%.

Ejemplo 13 : síntesis de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 13) y separación quiral en los enantiómeros 13A y 13B .

Síntesis del intermedio 13a:

Una solución de 5-(trifluorometoxi)-1 H-indol [CAS 262593-63-5] (3 g, 14.9 mmol) en CH²Cl² (150 mL) se enfrió a 0 °C en una atmósfera de N². Se añadió gota a gota una solución de cloruro de dietilaluminio 1 M en hexano (22.4 mL, 22.4 mmol) y la mezcla resultante se mantuvo a 0°C durante 15 min. Se añadió gota a gota una solución de cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 9a' (4.57 g, 20.9 mmol) en CH²Cl² (100 mL). Se continuó agitando a 0 °C durante 1 h y posteriormente la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla de reacción se vertió en una solución en agitación de hielo/sal de Rochelle. Después de haberse fundido el hielo, la mezcla se filtró sobre dicalite® y la torta de filtro se lavó varias veces con THF. Los filtrados se combinaron. Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se trituró con CH²Cl² (50 mL) y el precipitado resultante se retiró por filtración y se secó al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 13a (4.39 g).

Síntesis del intermedio 13b:

Una solución en agitación de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 13a (4.39 g, 11.4 mmol) en THF (200 mL) se enfrió a 0°C. Se añadió gota a gota una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56­ 1] (4.73 g, 12.6 mmol) en THF (100 mL). La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Los sólidos se retiraron por filtración y se lavaron con THF. Los filtrados combinados se evaporaron a presión reducida. El residuo se mezcló con EtOAc (30 mL). Los sólidos se aislaron por filtración, se lavaron con una pequeña cantidad de EtOAc y se secaron al vacío a 50 °C para proporcionar 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometoxi)-1H-indol-3-il)etanona 13b (5.0 g) en forma de un sólido de color blanco, que se usó si purificación adicional en la siguiente etapa.

Síntesis del Compuesto 13 y separación quiral de los Enantiómeros 13A y 13B:

Se agitó una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometoxi)-1H-indol-3-il)etanona 13b (2.3 g, 4.97 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (1.37 g, 7.46 mmol) y diisopropiletilamina (857 |jL, 4.97 mmol) en CH³CN (550 mL) a 90°C durante una noche. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en CH²Cl² (100 mL), se lavó con HCl 1 N (100 mL) y agua (100 mL), se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna (fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 120 g, fase móvil: gradiente de 0/100 a 50/50 de EtOAc:EtOH(3:1)/heptano). Las fracciones deseadas se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó posteriormente mediante HPLC preparativa (fase estacionaria: Uptisphere® C18 ODB - 10 ^m, 200 g, 5 cm, fase móvil: solución de NH⁴HCO³ al 0.25% en agua, CH³CN). Las fracciones deseadas se combinaron y evaporaron a presión reducida para dar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(5-(trifluorometoxi)-1H-indol-3-il)etanona (Compuesto 13, 1.46 g) en forma de una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros del Compuesto 13 (1.46 g) se llevó a cabo mediante separación quiral de fase normal (fase estacionaria: AS 20 ^m, fase móvil: 100% de metanol). Las fracciones de producto se combinaron y evaporaron para proporcionar el enantiómero 13A como el primer producto eluido y el enantiómero 13B como el segundo producto eluido.

El enantiómero 13A (0.43 g) se purificó por cromatografía ultrarrápida (Fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 12 g, fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron a presión reducida y se coevaporaron con MeOH y después con MeOH/H²O 3/1. El residuo se agitó en H²O (4 mL) a 45°C, se añadió gota a gota MeOH (125 pL) y después de agitar durante 5 min, los sólidos se retiraron por filtración, se lavaron (4x) con una mezcla de H²O/MeOH (4/1) y se secaron al vacío a 45°C para proporcionar el enantiómero 13A (389 mg).

El enantiómero 13B (0.45 g) se purificó por cromatografía ultrarrápida (Fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 12 g, Fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron a presión reducida y se coevaporaron con MeOH y después con MeOH/H²O (1/4). El residuo se agitó en H²O (4 mL) a 45°C, se añadió gota a gota MeOH (125 pL) y después de agitar durante 5 min, los sólidos se retiraron por filtración, se lavaron (4x) con una mezcla de H²O/MeOH 4/1 y se secaron al vacío a 45°C para proporcionar el enantiómero 13B (423 mg).

Compuesto 13:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.65 (t, J=5.1 Hz, 2 H) 3.75 - 3.90 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.77 (s a, 1 H) 5.73 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.41 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.1,2.0 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.8, 2.2 Hz, 1 H) 7.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.59 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.06 (s a, 1 H) 8.54 (s, 1 H) 12.26 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-B): TR 2.14 min, MH+ 565

Enantiómero 13A:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.3 Hz, 2 H) 3.75 - 3.89 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.16 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.1,2.0 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.7, 2.1 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=9.0 Hz, 1 H) 8.05 (s a, 1 H) 8.54 (s, 1 H) 12.27 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.17 min, MH+ 565

[a]D20: 108.5° (c 0.52, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 3.11 min, MH+ 565, pureza quiral 100%.

Enantiómero 13B:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.2 Hz, 2 H) 3.76 - 3.90 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.73 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.41 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.98 (dd, J=8.1,2.0 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=2.2 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.8, 1.8 Hz, 1 H) 7.37 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.59 (d, J=9.0 Hz, 1 H) 8.06 (s a, 1 H) 8.54 (s, 1 H) 12.28 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.17 min, MH+ 565

[a]D20: -107.4° (c 0.485, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 3.50 min, MH+ 565, pureza quiral 100%.

Ejemplo 14: 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 14) y separación quiral en los enantiómeros 14A y 14B.

Síntesis del intermedio 14a:

Bajo una corriente de N², se añadió gota a gota cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (9.73 mL, 9.73 mmol) a 0°C a una solución de 6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol 6d (1.5 g, 6.49 mmol) en CH²Cl² (35 mL). Tras agitar durante 30 min a 0°C, se añadió gota a gota cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 9a' (2.1 g, 9.73 mmol) en CH²Cl² (15 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 3 h. Se añadió agua-hielo. El precipitado se retiró por filtración, se lavó con agua y se secó al vacío para dar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 14a (1.9 g).

Síntesis del intermedio 14b:

A 0 °C, se añadió gota a gota una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (1.9 g, 4.59 mmol) en THF (60 mL) a una mezcla de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 14a (1.73 g, 4.59 mmol) en THF (60 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 4 h. El precipitado se retiró por filtración y se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se recogió por completo con diisopropil éter. El precipitado se retiró por filtración y se secó para dar 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1H-indol-3-il)etanona 14b (2.1 g).

Síntesis del Compuesto 14 y separación quiral en los Enantiómeros 14A y 14B:

Se agitó una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1H-indol-3-il)etanona 14b (2.1 g, 4.26 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (0.937 g, 5.11 mmol) y diisopropiletilamina (1.1 mL, 6.4 mmol) en CH³CN (100 mL) a 70°C durante 24 h y después se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con CH²G ² se lavó con HCl 1N. La fase orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (15-40 ^m, 80 g, CH²Cl²/MeOH 99/1). Las fracciones que contenían el Compuesto 14 se combinaron y el disolvente se evaporó a presión reducida. El producto (1.9 g) se purificó adicionalmente mediante SFC aquiral (Fase estacionaria: 2-etilpiridina 5 ^m 150 x 30 mm, Fase móvil: CO² al 70%, MeOH al 30% iPrNH² al 0.3%) para dar, después de su solidificación en éter de diisopropilo/éter de petróleo, 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 14, 1.18 g) en forma de una mezcla racémica. Los enantiómeros del Compuesto 14 se separaron mediante SFC quiral preparativa (Fase estacionaria: Chiralpack® IC 5 ^m 250 x 20 mm, Fase móvil: CO² al 70%, iPrOH al 30% iPrNH² al 0.3%) para dar, tras su solidificación en heptano/éter de diisopropilo, 420 mg del primer enantiómero eluido 14A y 408 mg del segundo enantiómero eluido 14B.

Compuesto 14:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-dfe) 6 ppm 3.59 - 3.68 (m, 5 H) 3.77 - 3.89 (m, 5 H) 3.95 (s, 3 H) 4.75 (t a, J=5.1 Hz, 1 H) 5.72 (s a, 1 H) 5.92 (d, J=1.5 Hz, 2 H) 6.13 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.36 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 8.01 (s, 1 H) 8.39 (s, 1 H) 11.99 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-C): TR 3.14 min, MH+ 595

Enantiómero 14A:

1H RMN (500 Mhz, DMSO-ds) 8 ppm 3.56 - 3.68 (m, 5 H) 3.76 - 3.90 (m, 5 H) 3.96 (s, 3 H) 4.78 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.02 (d, J=1.3 Hz, 1 H) 8.40 (s, 1 H) 12.05 (s a, 1 H) LC/MS (método LC-C): TR 3.13 min, MH+ 595

[a]D20: 81.7° (c 0.235, DMF)

SFC quiral (método SFC-C): TR 1.58 min, MH+ 595, pureza quiral 100%.

Enantiómero 14B:

1H RMN (500 Mhz, DMSO-afe) 8 ppm 3.58 - 3.69 (m, 5 H) 3.77 - 3.91 (m, 5 H) 3.96 (s, 3 H) 4.78 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.02 (d, J=1.3 Hz, 1 H) 8.40 (s, 1 H) 12.04 (s a, 1 H) LC/MS (método LC-C): TR 3.13 min, MH+ 595

[a]D20: -82.5° (c 0.2267, DMF)

SFC quiral (método SFC-C): TR 2.23 min, MH+ 595, pureza quiral 99.29%.

Ejemplo 15: síntesis de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 15) y separación quiral en los enantiómeros 15A y 15B.

Síntesis del intermedio 15a:

Una solución agitada mecánicamente de 6-fluoro-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol 7c (2.92 g, 13.3 mmol) en CH²Cl² (150 mL) se enfrió a 0 °C en una atmósfera de N². Se añadió gota a gota una solución de cloruro de dietilaluminio 1 M en hexano (20.0 mL, 20.0 mmol) y la mezcla resultante se mantuvo a 0 °C durante 5 min. Se añadió gota a gota una solución de cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 9a' (4.37 g, 19.9 mmol) en CH²Cl² (75 mL) mientras se mantenía la temperatura de reacción por debajo de 5 °C. Se continuó agitando a 0 °C durante 1 h y posteriormente la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota una solución de sal de la Rochelle [CAS 6100-16-9] (7.53 g, 26.7 mmol) en agua (8 mL). La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 30 min y después se dejó que alcanzara la temperatura ambiente. Se añadió THF (200 mL) y Na2SO4 (25 g). Después de agitar durante una noche, la mezcla de reacción se filtró sobre dicalite® y la torta de filtro se lavó con THF (4x 100 mL). Los filtrados combinados se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: sílice Biotage® SNAP Ultra 100 g, fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones que contenían producto se combinaron y evaporaron a presión reducida para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 15a (2.7 g).

Síntesis del intermedio 15b:

Una solución en agitación de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 15a (1.37 g, 3.24 mmol) en THF (20 mL) se enfrió a 0 °C, en una atmósfera de N². Se añadió tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (1.28 g, 3.4 mmol) en una porción. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 40 min y después a temperatura ambiente durante 1.5 h. Los sólidos se retiraron por filtración y se lavaron con THF (2x). Los filtrados combinados se evaporaron a presión reducida para proporcionar 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 15b (1.77 g), que se usó sin purificación adicional en la etapa siguiente.

Síntesis del Compuesto 15 y separación quiral de los Enantiómeros 15A y 15B:

Se agitó una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 15b (1.77 g, 3.43 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1 ] (1.26 g, 6.86 mmol) y diisopropiletilamina (1.18 mL, 6.86 mmol) en CH³CN (30 mL) a temperatura ambiente durante 17 h. Se añadió agua (125 mL) y se extrajo el producto con Et²O (2x). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: sílice Biotage® SNAP Ultra 25 g, fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones deseadas se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó posteriormente mediante HPLC preparativa (fase estacionaria: RP XBridge® Prep C18 OBD - 10 gm, 30 x 150 mm, fase móvil: solución de NH⁴HCO³ al 0.25% en agua, CH³CN). Las fracciones de producto se combinaron y evaporaron a presión reducida para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona racémica (Compuesto 15, 589 mg).

La separación quiral de los enantiómeros del Compuesto 15 (589 mg) se llevó a cabo mediante SFC preparativa (Fase estacionaria: Chiralcel® Diacel OD 20 x 250 mm, Fase móvil: CO², EtOH iPrNH² al 0.4%) para proporcionar el enantiómero 15A como el primer enantiómero eluido y el enantiómero 15B como el segundo enantiómero eluido. Ambos enantiómeros se solidificaron por precipitación a partir de una mezcla de disolvente de MeOH y agua. Se filtraron los sólidos y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar el enantiómero 15A (101 mg) y el enantiómero 15B (73 mg).

Enantiómero 15A:

1H RMN (360 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.75 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.16 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.44 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.98 (dd, J=8.2, 2.0 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.61 (d, J=10.6 Hz, 1 H) 8.16 (dd, J=7.7, 1.1 Hz, 1 H) 8.55 (s, 1 H) 12.33 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.20 min, MH+ 583

[a]D20: -69.9° (c 0.261, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 3.30 min, MH+ 583, pureza quiral 98.7%.

Punto de fusión: 106°C

Enantiómero 15B:

1H RMN (360 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.74 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=1.8 Hz, 2 H) 6.16 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 6.44 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.98 (dd, J=8.4, 1.8 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.60 (d, J=10.6 Hz, 1 H) 8.16 (dd, J=7.5, 0.9 Hz, 1 H) 8.54 (s, 1 H) 12.33 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.20 min, MH+ 583

[a]D20: 91.8° (c 0.282, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 2.93 min, MH+ 583, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 107°C

Ejemplo 16 : síntesis de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1 -(7-metil-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 16) y separación quiral en los enantiómeros 16A y 16B .

Síntesis del intermedio 16a:

Una solución agitada mecánicamente de 7-metil-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol 8b (1.5 g, 6.97 mmol) en CH²Cl² (100 mL) se enfrió a 0 °C en una atmósfera de N². Se añadió gota a gota una solución de cloruro de dietilaluminio 1 M en hexano (10.5 mL, 10.5 mmol) y la mezcla resultante se mantuvo a 0 °C durante 25 min. Se añadió gota a gota una solución de cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 9a' (2.29 g, 10.5 mmol) en CH²Cl² (40 mL) mientras se mantenía la temperatura de reacción por debajo de 6°C. Se continuó agitando a 0 °C durante 1 h y posteriormente la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se añadió gota a gota una solución de sal de la Rochelle [CAS 6100-16-9] (3.94 g, 13.9 mmol) en agua (4 mL). Tras la adición, la mezcla se agitó a 0°C durante 20 min y a temperatura ambiente durante 1 h. Se añadió THF (125 mL) y Na2SO4 (15 g). Tras agitar durante 1 hora, la mezcla de reacción se filtró sobre dicalite® y la torta de filtro se lavó con THF (5x 100 mL). Los filtrados combinados se evaporaron a presión reducida. El residuo se solidificó después de reposar durante una noche. Los sólidos se agitaron en CH³CN (5 mL), se retiraron por filtración, se lavaron con CH³CN (3x 1.5 mL) y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(7-metil-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 16a (1.9 g).

Síntesis del intermedio 16b:

Una solución en agitación de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 16a (1.90 g, 4.78 mmol) en THF (100 mL) se enfrió hasta 0°C en atmósfera de N². Se añadió tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207­ 56-1] (1.89 g, 5.02 mmol) en una porción. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 1.5 h y después a temperatura ambiente durante 1 h. Los sólidos se retiraron por filtración y se lavaron con THF (2x). Los filtrados combinados se evaporaron a presión reducida para proporcionar 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(7-metil-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 16b (2.28 g), que se usó si purificación adicional en la siguiente etapa.

Síntesis del Compuesto 16 y separación quiral de los Enantiómeros 16A y 16B:

Se agitó una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(7-metil-5-(trifluorometoxi)-1H-indol-3-il)etanona 16b (2.28 g, 4.78 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (1.75 g, 9.55 mmol) y diisopropiletilamina (1.65 mL, 9.55 mmol) en CH³CN (100 mL) a temperatura ambiente durante 20 h y posteriormente a 55°C durante 8 h. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vertió en agua en agitación (500 mL). El producto se extrajo con Et²O (2x). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con MgSO4, se filtraron y se evaporaron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (fase estacionaria: sílice Grace Reveleris® 80 g, fase móvil: gradiente de heptano/EtOAc/EtOH de 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones deseadas se combinaron y evaporaron a presión reducida para proporcionar

2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(7-metil-5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 16, 2.1 g) en forma de una mezcla racémica. Una pequeña fracción del compuesto 16 (100 mg) se purificó mediante HPLC preparativa (Fase estacionaria: RP XBridge® Prep C18 OBD - 10 ^m, 30 x 150 mm, fase móvil: solución de NH⁴HCO³ al 0.25% en agua, CH³CN). Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron a presión reducida y se coevaporaron a partir de una mezcla de CH³CN y MeOH. El residuo se solidificó por liofilización a partir de una solución en CH³CN (1.5 mL) y agua (1 mL) para proporcionar una mezcla analítica del Compuesto 16 racémico (51 mg).

La separación quiral de los enantiómeros del Compuesto 16 (2.00 g) se llevó a cabo mediante separación quiral de fase normal (fase estacionaria: AS 20 pm, fase móvil: metanol al 100%) para proporcionar el enantiómero 16A como el primer enantiómero eluido y el enantiómero 16B como el segundo enantiómero eluido. Se volvió a purificar ambos enantiómeros mediante HPLC en fase reversa (Fase estacionaria: Kromasil® C18 100A 5 pm (Eka Nobel), fase móvil: gradiente de NH⁴HCO³ al 0.25% en agua/CH³CN de 50/50 a 0/100). Las fracciones deseadas se combinaron y se evaporaron a presión reducida. El enantiómero 16A se precipitó a partir de una mezcla de MeOH (7 mL) y H²O (1.8 mL). Los sólidos se retiraron por filtración, se lavaron con una mezcla de MeOH/agua (1/1) (3x 1 mL) y se secaron al vacío a 45°C para proporcionar el enantiómero 16A (517 mg). El enantiómero 16B se precipitó a partir de una mezcla de MeOH (7 mL) y H²O (3 mL). Los sólidos se retiraron por filtración, se lavaron con una mezcla de MeOH/agua (1/1) (3x 1 mL) y se secaron al vacío a 45°C para proporcionar el enantiómero 16B (441 mg).

Compuesto 16:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 2.50 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.76 - 3.90 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.78 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.18 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1 H) 7.02 - 7.06 (m, 1 H) 7.10 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.89 (s a, 1 H) 8.52 (s, 1 H) 12.36 (s a, 1 H)

LC/MS (método LC-B): TR 2.20 min, MH+ 579

Enantiómero 16A:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 2.51 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.78 - 3.89 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.18 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.38 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1 H) 7.04 (s a, 1 H) 7.10 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.89 (s a, 1 H) 8.51 (d, J=3.5 Hz, 1 H) 12.35 (d, J=2.9 Hz, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.21 min, MH+ 579

[a]D20: 82.4° (c 0.495, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 2.97 min, MH+ 579, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 106°C

Enantiómero 16B:

1H RMN (400 Mhz, DMSO-afe) 5 ppm 2.51 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.75 - 3.90 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.18 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.39 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1 H) 7.05 (s a, 1 H) 7.10 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.89 (s a, 1 H) 8.52 (d, J=3.3 Hz, 1 H) 12.36 (d, J=3.1 Hz, 1 H)

LC/MS (método LC-A): TR 1.21 min, MH+ 579

[a]D20: -82.0° (c 0.45, DMF)

SFC quiral (método SFC-D): TR 3.36 min, MH+ 579, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 105°C

Tabla: compuestos preparados como se ha descrito anteriormente

ACTIVIDAD ANTIVIRAL DE LOS COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN

Ensayo antiviral del VDEN-2

Se evaluó la actividad antiviral de todos los compuestos de la invención frente a la cepa 16681 del VDEN-2, la cual se marcó con la proteína fluorescente verde potenciada (eGPF). El medio de cultivo consiste en un medio esencial mínimo complementado con un 2% de suero bovino fetal inactivado térmicamente, un 0.04% de gentamicina (50 mg/ml) y L-glutamina 2 mM. Se suspendieron células Vero, obtenidas de ECACC, en el medio de cultivo y se añadieron 25 pl a placas de 384 pocillos (2500 células/pocillo), que ya contenían los compuestos antivirales. Habitualmente, estas placas contienen diluciones en serie con un factor de 5, de 9 etapas de dilución del compuesto de prueba con 200 veces la concentración final en DMSO al 100% (200 nL). Además, cada concentración del compuesto se evalúa por cuadruplicado (intervalo de concentración final: 25 pM - 0.000064 pM o 2.5 pM - 0.0000064 pM para los compuestos más activos). Finalmente, cada placa contiene pocillos que se han asignado como controles del virus (que contienen células y virus en ausencia del compuesto), controles de las células (que contienen células en ausencia de virus y compuesto) y controles del medio (que contiene medio en ausencia de células, virus y compuestos). A los pocillos asignados como control del medio, se añadieron 25 pL de medio de cultivo en lugar de células Vero. Una vez que se añadieron las células a las placas, las placas se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente para permitir que las células se distribuyeran de manera homogénea dentro de los pocillos. A continuación, las placas se incubaron en una incubadora totalmente humidificada (37 °C, 5% de CO²) hasta el día siguiente. Después, se añadió la cepa 16681 del VDEN-2, marcada con eGFP, con una multiplicidad de infección (MDI) de 0.5. Por lo tanto, se añadieron 15 pL de suspensión de virus a todos los pocillos que contenían compuesto de prueba y a los pocillos asignados como control del virus. En paralelo, se añadieron 15 pL de medio de cultivo a los controles del medio y de las células. A continuación, las placas se incubaron durante 3 días en una incubadora totalmente humidificada (37 °C, 5% de CO²). El día de la lectura, se midió la fluorescencia de eGFP utilizando un microscopio de fluorescencia automático a 488 nm (láser azul). Utilizando un sistema de LIMS propio, se calcularon las curvas de respuesta a la dosis de inhibición para cada compuesto y se determinó la concentración eficaz que produce la mitad del efecto máximo (CE⁵⁰). Por lo tanto, la inhibición porcentual (I) para cada concentración de prueba se calcula utilizando la siguiente fórmula: I = 100*(St-Scc)/(Svc-Scc); St, Scc y Svc son las cantidades de señal de eGFP en los pocillos del compuesto de prueba, control de las células y control del virus, respectivamente. La CE⁵⁰ representa la concentración de un compuesto con la que se inhibe la replicación del virus en un 50%, que se mide como una reducción del 50% de la intensidad de fluorescencia de eGFP en comparación con el control del virus. La CE⁵⁰ se calcula utilizando una interpolación lineal (Tabla 1).

En paralelo, se evaluó la toxicidad de los compuestos en las mismas placas. Una vez que se realizó la lectura de la señal de eGFP, se añadieron 40 pl de ATPlite, un tinte de viabilidad celular, a todos los pocillos de las placas de 384 pocillos. El ATP está presente en todas las células metabólicamente activas y su concentración se reduce muy rápidamente cuando las células experimentan necrosis o apoptosis. El sistema de ensayo ATPLite se basa en la producción de luz provocada por la reacción de ATP con luciferasa y D-luciferina añadidas. Las placas se incubaron durante 10 minutos a temperatura ambiente. A continuación, las placas se midieron en un ViewLux. También se determinó la concentración que produce la mitad del efecto citotóxico máximo (CC⁵⁰), definida como la concentración requerida para reducir la señal de luminiscencia en un 50% en comparación con la de los pocillos de control de las células. Finalmente, se determinó el índice de selectividad (IS) para los compuestos, que se calculó de la siguiente manera: IS = CC⁵⁰/CE⁵⁰.

Tabla 1: CEsn. CCsn e IS para los compuestos de la invención en el ensayo antiviral del VDEN-2

N = el número de experimentos independientes en los que se evaluaron los compuestos.

E nsa yo de P C R cuan tita tiva con re tro transcrip tasa te trava len te (R T -qP C R )

Se evaluó la actividad antiviral de los compuestos de la invención frente a la cepa TC974#666 del VDEN-1 (NCPV), la cepa 16681 del VDEN-2, la cepa H87 del v De N-3 (NCPV) y la cepa H241 (NCPV) del VDEN-4 en un ensayo de RT-qPCR. Por lo tanto, se infectaron células Vero con el VDEN-1 o -2 o -3 o -4 en presencia o ausencia de compuestos de prueba. El día 3 después de la infección, las células se sometieron a lisis y los lisados celulares se utilizaron para preparar ADNc de tanto una diana viral (la 3’UTR del VDEN; Tabla 2) como un gen de referencia celular (P-actina, Tabla 2). Posteriormente, se realizó una PCR doble a tiempo real en un instrumento Lightcycler480. El valor de Cp generado es inversamente proporcional a la cantidad de expresión de ARN de estas dianas. La inhibición de la replicación del VDEN por un compuesto de prueba da como resultado un desplazamiento de Cp para el gen 3’UTR. Por otra parte, si un compuesto de prueba es tóxico para las células, se observará un efecto similar en la expresión de P-actina. El método de AACp comparativo se utiliza para calcular CE⁵⁰, que se basa en la expresión génica relativa del gel diana (3’UTR) normalizada con el gen constitutivo celular (P-actina). Además, los valores de CC⁵⁰ se determinan basándose en los valores de Cp adquiridos para el gen constitutivo de P-actina.

Tabla 2 : Cebadores y sondas utilizados para la RT-PCR cuantitativa a tiempo real.

El medio de cultivo consistió en un medio esencial mínimo complementado con un 2% de suero bovino fetal inactivado térmicamente, un 0.04% de gentamicina (50 mg/mL) y L-glutamina 2 mM. Se suspendieron células Vero, obtenidas de ECACC, en el medio de cultivo y se añadieron 75 pL/pocillo en placas de 96 pocillos (10000 células/pocillo), que ya contenían los compuestos antivirales. Habitualmente, estas placas contienen una dilución en serie con un factor de 5, de 9 etapas de dilución del compuesto de prueba con 200 veces la concentración final en DMSO al 100% (500 nL; intervalo de concentración final: 25 pM - 0.000064 pM o 2.5 pM - 0.0000064 pM para los compuestos más activos). Además, cada placa contiene pocillos que se han asignado como controles del virus (que contienen células y virus en ausencia de compuesto) y controles de las células (que contienen células en ausencia de virus y compuesto). Una vez se añadieron las células a las placas, las placas se incubaron en una incubadora totalmente humidificada (37 °C, 5% de CO²) hasta el día siguiente. Se diluyeron los serotipos 1,2, 3 y 4 de los virus del dengue con el fin de obtener un Cp de ~22-24 en el ensayo. Por lo tanto, se añadieron 25 pL de suspensión de virus a todos los pocillos que contenían compuesto de prueba y a los pocillos asignados como control del virus. En paralelo, se añadieron 25 pl de medio de cultivo a los controles de las células. A continuación, las placas se incubaron durante 3 días en una incubadora totalmente humidificada (37 °C, 5% de CO²). Después de 3 días, se retiró el sobrenadante de los pocillos y las células se lavaron dos veces con PBS enfriado con hielo (~100 pL). Los sedimentos de células dentro de las placas de 96 pocillos se almacenaron a -80 °C durante al menos 1 día. A continuación, se extrajo el ARN utilizando el kit de lisis Cells-to-CTTM, de acuerdo con las directrices del fabricante (Life Technologies). Los lisados celulares pueden almacenarse a -80 °C o utilizarse inmediatamente en la etapa de retrotranscripción.

En la preparación de la etapa de retrotranscripción, se preparó la mezcla A (tabla 3A) y se dispensaron 7.57 pL/pocillo en una placa de 96 pocillos. Después de la adición de 5 pL de los lisados celulares, se realizó una etapa de desnaturalización de cinco minutos a 75 °C (tabla 3B). Posteriormente, se añadieron 7.43 pl de mezcla B (tabla 3C) y se inició la etapa de retrotranscripción (tabla 3D) para generar ADNc.

Finalmente, se preparó una mezcla de RT-qPCR, mezcla C (tabla 4A) y se dispensaron 22.02 pl/pocillo en placas LightCycler qPCR de 96 pocillos en las que se añadieron 3 pl de ADNc y la qpCR se realizó de acuerdo con las condiciones de la tabla 4B en un LightCycler 480.

Utilizando el software LightCycler y un sistema LIMS propio, se calcularon las curvas de respuesta a la dosis para cada compuesto y se determinaron la concentración eficaz que produce la mitad del efecto máximo (CE⁵⁰) y la concentración que produce la mitad del efecto citotóxico máximo (CC⁵⁰) (Tablas 5-8).

Tabla 3: Síntesis de ADNc usando la Mezcla A, desnaturalización, la Mezcla B y retrotranscripción.

Mezcla A

Volumen

mezcla/pocillo (pL)

Lisados celulares

Etapa de

desnaturalización

B

C Mezcla B

Volumen total de la

mezcla (pl)

Protocolo de síntesis de

D ADNc

Tabla 4: Protocolo y mezcla de qPCR.

A Mezcla C

Protocolo PCR3

Tabla 5: CE⁵⁰. CC⁵⁰ e IS para los compuestos frente al serotipo 1 en los ensayos de RT-qPCR

Tabla 6: CEsn. CCsn e IS para los compuestos frente al serotipo 2 en los ensayos de RT-qPCR

ss

Tabla 7: CEsn. CCsn e IS para los compuestos frente al serotipo 3 en los ensayos de RT-qPCR

Tabla 8: CE50, CC⁵⁰ e IS para los compuestos frente al serotipo 4 en los ensayos de RT-qPCR

Ejemplo de la técnica anterior

Se ha ensayado el compuesto (350) divulgado en el documento WO-2013/045516 en un ensayo antiviral del VDEN-2 análogo a los compuestos de la presente invención y su actividad obtenida se enuncia a continuación.

Tabla 9: CE⁵⁰, CC⁵⁰, e IS para el compuesto (350) divulgado en el ensayo antiviral del VDEN-2

LISTADO DE SECUENCIAS

<110> Janssen Pharmaceuticals, Inc

Katholieke Universiteit Leuven

<120> Derivados de indol sustituidos como inhibidores de la replicación vírica del dengue <130> TIP 339 PCT

<150> EP16163312.8

<151> 2016-03-31

<160> 6

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 19

<212> ADN

<213> Virus del dengue

<400> 1

cggttagagg agacccctc 19

<210> 2

<211> 21

<212> ADN

<213> Virus del dengue

<400> 2

gagacagcag gatctctggt c 21 <210> 3

<211> 28

<212> ADN

<213> Virus del dengue

<400> 3

aaggactaga ggttagagga gacccccc 28 <210> 4

<211> 18

<212> ADN

<213> Virus del dengue

<400> 4

ggccaggtca tcaccatt 18

<210> 5

<211> 21

<212> ADN

<213> Virus del dengue

<400> 5

a tg tccacgt cacacttca t g 21

<210> 6

<211> 21

<212> ADN

<213> Virus del dengue

<400> 6

ttc c g c tg c c c tg a g g c tc t c 21

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula (la) o (Ib)

una forma estereoisomérica o una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo; seleccionándose dicho compuesto entre el grupo en donde:

R¹ es CF³ u OCF³, R² es H u OCH³ o F, R³ es H;

y cuando R² es H entonces R³ también puede ser CH³.

2. Un compuesto o su forma estereoisomérica, una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho compuesto se selecciona entre el grupo:

3. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (la) o (Ib) o una forma estereoisomérica, una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, junto con uno o más excipientes, diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables.

4. Un compuesto de formula (Ia) o (Ib) o una forma estereoisomérica, una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 3 para su uso como medicamento.

5. Un compuesto de formula (Ia) o (Ib) o una forma estereoisomérica, una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 3 para su uso en el tratamiento del dengue.

6. Un compuesto de fórmula (Ia) o (Ib) o una forma estereoisomérica o una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 para su uso en la inhibición de la replicación del o de los virus del dengue en una muestra biológica o paciente.

7. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 6 que comprende además coadministrar un agente terapéutico adicional.

8. El compuesto para su uso de la reivindicación 7, en donde dicho agente terapéutico adicional se selecciona entre un agente antivírico o vacuna para el dengue o ambos.

9. El compuesto según la reivindicación 1, en donde el compuesto se selecciona entre

o una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de los mismos.

10. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 9, una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con uno o más excipientes, diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables.

11. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 9, una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 10 para su uso como medicamento.

12. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 9, una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 10 para su uso en el tratamiento del dengue.

13. Un compuesto representado por cualquiera de las fórmulas estructurales de la reivindicación 9, una sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en la inhibición de la replicación del o los virus del dengue en una muestra biológica o en un paciente.

14. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 13, que comprende además coadministrar un agente terapéutico adicional.

15. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 14, donde dicho agente terapéutico adicional se selecciona entre un agente antivírico o una vacuna contra el dengue, o ambos.