KR20180130498A - 뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 치환 인돌 유도체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 치환 인돌 유도체, 이 화합물을 사용하는 것에 의해 뎅기 바이러스 감염을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이고, 또한 약으로서 사용하기 위한, 더 바람직하게는 뎅기 바이러스 감염을 치료 또는 예방하기 위한 약으로서 사용하기 위한 이 화합물에 관한 것이다. 더욱이, 본 발명은 이 화합물의 제약 조성물 또는 복합 제제(combination preparation), 약으로서 사용하기 위한, 더 바람직하게는 뎅기 바이러스 감염의 예방 또는 치료를 위한 조성물 또는 제제에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 치환 인돌 유도체

본 발명은 치환 인돌 유도체 또는 화합물, 이 화합물을 사용하는 것에 의해 뎅기 바이러스 감염을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이고, 또한 약으로서 사용하기 위한, 더 바람직하게는 뎅기 바이러스 감염을 치료 또는 예방하기 위한 약으로서 사용하기 위한 이 화합물에 관한 것이다. 더욱이, 본 발명은 이 화합물의 제약 조성물 또는 복합 제제(combination preparation), 약으로서 사용하기 위한, 더 바람직하게는 뎅기 바이러스 감염의 예방 또는 치료를 위한 조성물 또는 제제에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.

모기 또는 진드기에 의해 전염되는 플라비바이러스(flavivirus)는 인간에서 생명을 위협하는 감염, 예컨대 뇌염 및 출혈열을 야기한다. 플라비바이러스 뎅기의 4가지 특유한, 그러나 밀접하게 관련된 혈청형, 소위 DENV-1, -2, -3, 및 -4가 공지되어 있다. 뎅기는 전 세계적으로 대부분의 열대 및 아열대 지방에서, 주로 도시 및 준도시 지역에서 풍토성이다. 세계 보건 기구(World Health Organization; WHO)에 따르면, 25억명의 사람들 (이중 10억명은 아동임)이 DENV 감염의 위험이 있다(WHO, 2002). 뎅기열[dengue fever; DF]의 추정된 5000만 내지 1억의 사례, 중증 뎅기 질환(즉, 뎅기 출혈열[dengue hemorrhagic fever; DHF] 및 뎅기 쇽 증후군[dengue shock syndrome; DSS])의 50만의 사례, 및 20,000명 초과의 사망이 매해 전 세계적으로 일어난다. DHF는 풍토성 지역에서 아동 사이에서의 입원 및 사망의 주된 원인이 되었다. 대체로, 뎅기는 아르보바이러스 질환의 가장 일반적인 원인을 대표한다. 최근 라틴 아메리카, 동남아시아 및 서태평양에 위치하는 국가(브라질, 푸에르토리코, 베네수엘라, 캄보디아, 인도네시아, 베트남, 타일랜드를 포함함)에서의 대규모 발생 때문에 뎅기 사례의 수는 지난 몇 년간 극적으로 상승하였다. 상기 질환이 새로운 지역으로 확산되고 있음에 따라 뎅기 사례의 수가 증가하고 있을 뿐만 아니라, 그 발생도 더 심각해지는 경향이 있다.

뎅그박시아(Dengvaxia)^® 백신의 이용가능성과 함께 뎅기에 대한 백신의 개발에 있어서 진전이 이루어지고 있지만, 많은 어려움에 부딪히고 있다. 이들은 항체-의존성 강화(antibody-dependent enhancement; ADE)로 언급되는 현상의 존재를 포함한다. 하나의 혈청형에 의한 감염으로부터의 회복은 그 혈청형에 대한 평생 면역을 제공하지만 다른 3가지 혈청형 중 하나에 의한 후속 감염에 대해서는 단지 부분적이고 일시적인 보호를 부여한다. 또 다른 혈청형에 의한 감염 후, 기존의 이종 항체는 신규 감염 뎅기 바이러스 혈청형과 복합체를 형성하지만 그 병원체를 중화시키지 못한다. 대신, 세포 내로의 바이러스 침입이 촉진되어, 제어되지 않은 바이러스 복제 및 더 높은 피크 바이러스 역가를 야기하는 것으로 생각된다. 1차 및 2차 감염 둘 다에서, 더 높은 바이러스 역가는 더 중증의 뎅기 질환과 연관된다. 모체 항체는 모유 수유에 의해 유아에게 용이하게 전달될 수 있기 때문에, 이것은 아동이 성인보다 더 많이 중증 뎅기 질환에 걸리는 이유 중 하나일 수 있다. 고토착병성(hyper endemic) 지역으로도 칭해지는, 2가지 이상의 혈청형이 동시에 돌고 있는 장소에서는, 더 중증의 2차 감염을 경험할 위험의 증가로 인해 심각한 뎅기 질환의 위험이 유의하게 더 높다. 게다가, 고풍토성(hyper-endemicity)의 상황에서, 전염성이 더 강한 주(strain)의 출현 확률이 증가되며, 이는 다시 뎅기 출혈열(DHF) 또는 뎅기 쇽 증후군의 확률을 증대시킨다.

아에데스 아에깁티(Aedes aegypti) 및 아에데스 알보픽투스(Aedes albopictus) (외줄모기(tiger mosquito))를 포함하는 뎅기 매개 모기는 지구 상에서 북쪽으로 이동하고 있다. 미국 질병 통제 예방 센터(United States (US) Centers for Disease Control and Prevention; CDC)에 따르면, 상기 둘 다의 모기는 현재 미국 남부 텍사스에 편재한다. 뎅기-매개 모기의 북쪽으로의 확산은 미국에 국한되지 않으며, 유럽에서도 관찰되었다.

현재, 뎅기로부터 인간을 보호하기 위한 백신의 개발 및 등록을 위하여 상당히 노력 중이다. 그러나 주요 문제점은 모든 4가지 혈청형에 대하여 동일한 정도로 보호를 제공하는 백신(4가(tetravalent) 백신)을 개발하는 것이다.

사노피 파스퇴르(Sanofi Pasteur)에 의해 생산된 뎅기 백신인 뎅그박시아^®는 먼저 멕시코에서 승인되었으며, 그 사이에 더 많은 국가에서 승인을 받았다. 그럼에도 불구하고, 상기 백신은, 특히 DENV-1 및 -2에 대한 제한된 효능, 플라비바이러스-나이브(

) 대상체에서의 낮은 효능 및 너무 긴 투약 일정으로 인하여 상당한 개선의 여지가 남아있다.

이러한 결점에도 불구하고, 상기 백신은 풍토성 환경(endemic setting)에서 게임 체인저(game changer)이며, 그 이유는 이것이 대부분의 인구에게 보호를 제공하지만 가장 큰 뎅기 부담을 갖고 있는 매우 어린 유아에게는 보호를 제공하지 않을 가능성이 있기 때문이다. 게다가, 플라비바이러스-나이브 대상체에서의 매우 제한된 효능 및 투약 일정은 비-풍토성 지역으로부터 뎅기-풍토성 지역으로 여행하는 자에게 있어서 이것이 부적당해지게 하고 가치 있는 것이 아니게/비용 효율적이지 않게 만들 가능성이 있다. 뎅기 백신의 상기 결점은 노출 전 예방적 뎅기 항바이러스제가 필요한 이유이다.

더욱이, 현재까지, 뎅기열 바이러스 감염의 치료 또는 예방을 위한 특정한 항바이러스약은 이용가능하지 않다. 명백하게, 동물에서, 더욱 특히는 인간에서 바이러스 감염의 예방 또는 치료를 위한, 그리고 특히 플라비바이러스, 더욱 특히는 뎅기 바이러스에 의해 야기되는 바이러스 감염의 예방 또는 치료를 위한 치료제에 대한 충족되지 않은 큰 의학적 필요성이 여전히 있다. 우수한 항바이러스 효력을 가지며, 부작용이 전혀 없거나 부작용 수준이 낮고, 다수의 뎅기 바이러스 혈청형에 대한 광범위한 스펙트럼의 활성을 가지며, 저 독성 및/또는 우수한 약동학적 또는 약력학적 특성을 갖는 화합물이 고도로 필요하다.

이제 본 발명은 뎅기 바이러스의 모든 네 가지(4가지) 혈청형에 대하여 높고 효력 있는 활성을 나타내는 화합물인 치환 인돌 유도체를 제공한다.

국제 공개 제2010/021878호에는 염증성 및 중추성 질환의 치료를 위한 냉 멘톨 수용체 길항제로서의 2-페닐피롤리딘 및 인돌린 유도체가 개시되어 있다. 국제 공개 제2013/045516호에는 뎅기 바이러스 감염의 치료에서 사용하기 위한 인돌 및 인돌린 유도체가 개시되어 있다. -

본 발명은 상기 문제들 중 적어도 하나가 본 발명의 현재의 화합물에 의해 해결될 수 있다는 예기치 않은 발견을 기반으로 한다.

본 발명은 현재 공지된 모든 네 가지(4가지) 혈청형에 대하여 효력 있는 항바이러스 활성을 보유하는 것으로 밝혀진 화합물을 제공한다. 더욱이 본 발명은 이러한 화합물이 뎅기 바이러스(DENV)의 증식을 효율적으로 억제함을 입증한다. 따라서, 이러한 화합물은 동물, 포유류 및 인간에서 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방에서, 더 구체적으로, 뎅기 바이러스에 의한 감염의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있는 유용한 부류의 효력 있는 화합물을 구성한다.

더욱이, 본 발명은 그러한 화합물의 약으로서의 용도 및 동물 또는 포유류에서, 더욱 특히는 인간에서 바이러스 감염, 특히 뎅기 바이러스 패밀리(family)에 속하는 바이러스에 의한 바이러스 감염을 치료 및/또는 예방하기 위한 약의 제조에 있어서의 그의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이러한 모든 화합물의 제조 방법 및 이를 유효량으로 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

또한 본 발명은 인간에서의 뎅기 바이러스 감염의 치료 또는 예방 방법에 관한 것으로서, 본 방법은 이를 필요로 하는 환자에게 1가지 이상의 다른 약, 예컨대 또 다른 항바이러스제와 선택적으로 조합된 유효량의 1가지 이상의 그러한 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 투여함에 의한 것이다.

본 발명의 일 태양은 1치환 또는 2치환 인돌 기를 포함하는 하기 화학식 Ia 또는 화학식 Ib:

[화학식 Ia]

[화학식 Ib]

의 화합물, 이의 입체 이성질체 형태, 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체의 제공으로; 상기 화합물은

R₁이 CF₃ 또는 OCF₃이며, R₂가 H 또는 OCH₃ 또는 F이고, R₃이 H이며;

R₂가 H이면 R₃이 또한 CH₃일 수 있는 군으로부터 선택된다.

특히, 본 발명의 화합물 또는 이의 입체 이성질체 형태, 이들의 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체는 하기 군으로부터 선택된다:

본 발명의 일부는 또한 화학식 Ia 또는 화학식 Ib의 화합물 또는 이의 입체 이성질체 형태, 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체를 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물이다.

화학식 Ia 또는 화학식 Ib의 화합물의 제약상 허용가능한 염은 이의 산 부가염 및 염기 염을 포함한다. 적합한 산 부가염은 비독성 염을 형성하는 산으로부터 형성된다. 적합한 염기 염은 비독성 염을 형성하는 염기로부터 형성된다.

본 발명의 화합물은 또한 비용매화된 형태 및 용매화된 형태로 존재할 수 있다. 본원에서 "용매화물"이라는 용어는, 본 발명의 화합물과 하나 이상의 제약상 허용가능한 용매 분자, 예를 들어, 에탄올을 포함하는 분자 복합체를 기술하는 데 사용된다.

"다형체"라는 용어는, 하나 초과의 형태 또는 결정 구조로 존재하는 본 발명의 화합물의 능력을 나타낸다.

본 발명의 화합물은 결정질 생성물 또는 비결정질 생성물로서 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 침전, 결정화, 동결 건조, 분무 건조 또는 증발 건조와 같은 방법에 의해, 예를 들어 고체 플러그, 분말 또는 필름으로서 얻어질 수 있다. 본 발명의 화합물은 단독으로 투여될 수 있거나, 본 발명의 하나 이상의 다른 화합물과 조합되어 또는 하나 이상의 다른 약물과 조합되어 투여될 수 있다. 일반적으로 본 발명의 화합물은 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제와 결부되어 제형으로서 투여될 것이다. 본원에서 "부형제"라는 용어는 본 발명의 화합물(들) 이외의 임의의 성분을 기술하는 데 사용된다. 부형제의 선택은 주로 특정 투여 방식, 용해도 및 안정성에 대한 부형제의 영향, 및 투여 형태의 성질과 같은 요인에 의존한다.

본 발명의 화합물 또는 이의 임의의 하위군(subgroup)은 투여 목적에 따라 다양한 약학적 형태로 제형화될 수 있다. 적절한 조성물로는, 전신 투여 약물용으로 통상적으로 사용되는 모든 조성물이 언급될 수 있다. 본 발명의 제약 조성물을 제조하기 위하여, 활성 성분으로서의 특정 화합물(선택적으로 부가염 형태)의 유효량이 제약상 허용가능한 담체와의 친밀한 혼합물로 조합되며, 이러한 담체는 투여에 요망되는 제제의 형태에 따라 매우 다양한 형태를 취할 수 있다. 이러한 제약 조성물은 바람직하게는 예를 들어 경구 또는 직장 투여에 적합한 일원화된 투여 형태(unitary dosage form)로 존재한다. 예를 들어, 경구 투여 형태로 조성물을 제조하는데 있어서, 현탁액, 시럽, 엘릭시르, 에멀젼 및 용액과 같은 경구 액체 제제의 경우 예컨대 물, 글리콜, 오일, 알코올 등; 또는 산제, 환제, 캡슐, 및 정제의 경우 전분, 당, 카올린, 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제 등과 같은 고체 담체와 같은 임의의 통상적인 약학적 매질이 이용될 수 있다. 투여가 용이하기 때문에, 정제 및 캡슐이 가장 유리한 경구 단위 투여 형태를 대표하는데, 이 경우에는 약학적 고체 담체가 명백히 이용된다. 사용 직전에 액체 형태로 전환될 수 있는 고체 형태 제제가 또한 포함된다.

투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 전술한 제약 조성물을 단위 투여 형태로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용되는 바와 같이 단위 투여 형태는 일원화된 투여형으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭하며, 각 단위는 필요한 약학적 담체와 결부된, 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 소정량의 활성 성분을 함유한다. 그러한 단위 투여 형태의 예로는 정제(분할정(scored tablet) 또는 코팅정을 포함함), 캡슐, 환제, 분말 패킷(powder packet), 웨이퍼(wafer), 좌제(suppository), 주사 가능한 용액 또는 현탁액 등, 그리고 이의 분리된 멀티플(segregated multiple)이 있다.

감염성 질환의 치료에서의 숙련자는 이하에 제시되는 테스트 결과로부터 유효량을 결정할 수 있을 것이다. 일반적으로 일일 유효량은 체중 1 ㎏당 0.01 ㎎ 내지 50 ㎎, 더 바람직하게는 체중 1 ㎏당 0.1 ㎎ 내지 10 ㎎일 것으로 생각된다. 요구되는 용량을 하루에 걸쳐 적절한 간격으로 2, 3, 4회 또는 이보다 더 많은 하위용량(sub-dose)으로 투여하는 것이 적절할 수 있다. 상기 하위용량은 예컨대 단위 투여 형태당 1 내지 1000 mg, 및 특히 5 내지 200 mg의 활성 성분을 포함하는 단위 투여 형태로서 제형화될 수 있다.

당업자에게 잘 알려진 바와 같이, 정확한 투여량 및 투여 빈도는 사용되는 화학식 Ia 또는 화학식 Ib의 특정 화합물, 치료되는 특정 병태, 치료되는 병태의 중증도, 특정 환자의 연령, 체중 및 종합적인 건강 상태뿐만 아니라 개체가 복약 중일 수 있는 다른 약에도 의존한다. 더욱이, 유효량은 치료받는 대상체의 반응에 따라, 및/또는 본 발명의 화합물을 처방하는 의사의 평가에 따라 감소 또는 증가될 수 있음이 명백하다. 따라서, 위에 언급된 유효량 범위는 단지 지침일 뿐이고, 본 발명의 범주 또는 용도를 임의의 정도로 제한하는 것으로 의도되지 않는다.

본 발명은 또한 본 발명의 화합물에 존재하는 원자의 임의의 동위원소를 포함하도록 의도된다. 예를 들어, 수소의 동위원소는 삼중수소 및 중수소를 포함하고 탄소의 동위원소는 C-13 및 C-14를 포함한다.

본 발명에서 사용되는 본 발명의 화합물은 또한 동일한 시퀀스(sequence)의 결합으로 결합된 동일 원자들로 구성되지만 호환가능하지 않은 상이한 3차원 구조를 갖는 모든 가능한 화합물을 규정하는 그의 입체화학적 이성질체 형태로 존재할 수 있다. 달리 언급되지 않거나 표시되지 않으면, 화합물의 화학적 표기는 상기 화합물이 가질 수 있는 모든 가능한 입체화학적 이성질체 형태들의 혼합물을 포함한다.

상기 혼합물은 상기 화합물의 기본적인 분자 구조의 모든 부분입체 이성질체 및/또는 거울상 이성질체를 포함할 수 있다. 임의의 라세미 혼합물 또는 라세미체를 비롯하여 순수한 형태의 또는 서로와의 혼합물 형태의 본 발명에서 사용되는 화합물의 모든 입체화학적 이성질체 형태는 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다.

본 명세서에 언급된 화합물 및 중간체의 순수한 입체 이성질체 형태는 상기 화합물 또는 중간체와 동일한 기본 분자 구조의 다른 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체 형태가 실질적으로 없는 이성질체로서 정의된다. 특히, '입체이성질체로서 순수한'이라는 용어는 80% 이상의 입체이성질체 과잉률(즉, 최소 90%의 하나의 이성질체 및 최대 10%의 다른 가능한 이성질체) 내지 100% 이하의 입체이성질체 과잉률(즉, 다른 이성질체가 전혀 없고, 100%의 하나의 이성질체)을 갖는 화합물 또는 중간체, 더욱 특히는 90% 내지 100%의 입체이성질체 과잉률을 갖는, 더욱 더 특히는 94% 내지 100%의 입체이성질체 과잉률을 갖는, 가장 특히는 97% 내지 100%의 입체이성질체 과잉률을 갖는 화합물 또는 중간체와 관련된다. '거울상 이성질체로서 순수한' 및 '부분입체이성질체로서 순수한'이라는 용어는 유사한 방식이지만 각각 당해 혼합물의 거울상 이성질체 과잉률, 부분입체 이성질체 과잉률과 관련된 것으로 이해되어야 한다.

본 발명에서 사용되는 화합물 및 중간체의 순수 입체이성질체 형태는 본 기술 분야에 공지된 절차의 적용에 의해 수득될 수 있다. 예를 들어, 거울상 이성질체는 광학 활성 산 또는 염기로 이들의 부분입체 이성질체 염을 선택적으로 결정화하는 것에 의해 서로 분리될 수 있다. 이의 예로는 타르타르산, 디벤조일타르타르산, 디톨루오일타르타르산 및 캄포술폰산이 있다. 대안적으로, 거울상 이성질체는 키랄 고정상을 사용한 크로마토그래피 기술에 의해 분리될 수 있다. 상기 순수한 입체화학적 이성질체 형태는 또한, 반응이 입체특이적으로 일어난다면, 적절한 출발 물질의 상응하는 순수한 입체화학적 이성질체 형태로부터 유도될 수 있다. 바람직하게는, 특정 입체이성질체가 요망될 경우, 상기 화합물은 입체특이적 제조 방법에 의해 합성될 것이다. 이들 방법은 유리하게는 거울상 이성질체로서 순수한 출발 물질을 사용할 것이다.

본 발명의 화학식 Ia 또는 화학식 Ib의 화합물 전부는 하기 화학식에서 *로 라벨링된 탄소 원자로 나타낸 바와 같이 적어도 하나의 키랄 탄소 원자를 갖는다:

[화학식 Ia]

[화학식 Ib]

상기 키랄 탄소 원자의 존재로 인하여, "화학식 Ia 또는 화학식 Ib의 화합물"은 (R)-거울상 이성질체, (S)-거울상 이성질체, 라세미 형태, 또는 임의의 비의 상기 두 개별 거울상 이성질체의 임의의 가능한 조합일 수 있다. 거울상 이성질체의 절대 (R)- 또는 (S)-배열이 공지되어 있지 않은 경우, 이 거울상 이성질체는 또한, 상기 특정 거울상 이성질체의 비선광도의 측정 후 거울상 이성질체가 우선성 (+)-거울상 이성질체인지 좌선성 (-)-거울상 이성질체인지를 표시함으로써 확인될 수 있다.

일 태양에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물이 (+) 비선광도를 갖는 화학식 I의 화합물의 제1 군에 관한 것이다.

추가의 태양에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물이 (-) 비선광도를 갖는 화학식 I의 화합물의 제2 그라운드에 관한 것이다.

실시예

LC/MS법

고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 측정을 LC 펌프, 다이오드-어레이(DAD) 또는 UV 검출기, 및 각각의 방법에 명시된 바와 같은 컬럼을 사용하여 수행하였다. 필요할 경우, 추가의 검출기를 포함시켰다(하기의 방법에 대한 표를 참조).

컬럼으로부터의 유동물을 대기압 이온 공급원으로 구성된 질량 분석계(MS)로 가져왔다. 화합물의 명목상 단일 동위 원소 분자량(MW)의 확인을 허용하는 이온을 얻기 위하여 조정 파라미터(예를 들어, 스캐닝 범위, 드웰(dwell) 시간...)를 설정하는 것은 당업자의 지식 이내이다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 데이터 획득을 수행하였다.

화합물을 그의 실험적 체류 시간(R_t) 및 이온에 의해 설명한다. 데이터의 표에서 다르게 특정되지 않으면, 보고된 분자 이온은 [M+H]⁺(양성자화된 분자) 및/또는 [M+H]^-(탈양성자화된 분자)에 상응한다. 화합물이 직접 이온화될 수 없었을 경우, 부가물의 유형이 특정되어 있다(즉, [M+NH₄]⁺, [M+HCOO]^- 등). 다수의 동위 원소 패턴을 갖는 분자(Br, Cl)에 있어서, 보고된 값은 최저 동위 원소 질량에 대하여 얻어진 것이다. 모든 결과는 사용된 방법과 일반적으로 연관되어 있는 실험적 불확실성을 가지고서 얻어졌다.

이하, "SQD"는 단일 사중극자 검출기(Single Quadrupole Detector)를 의미하며, "MSD"는 질량 선택 검출기(Mass Selective Detector)를 의미하며, "RT"는 실온을 의미하며, "BEH"는 가교된 에틸실록산/실리카 하이브리드(hybrid)를 의미하며, "DAD"는 다이오드 어레이 검출기(Diode Array Detector)를 의미하며, "HSS"는 고강도 실리카(High Strength silica)를 의미한다.

LC/MS법 코드(유량은 mL/분 단위로 표현되며; 컬럼 온도(T)는 ℃ 단위로 표현되고; 실행 시간은 분 단위로 표현됨)

SFC/MS법

이산화탄소(CO₂) 전달용의 이원 펌프 및 모디파이어(modifier), 오토샘플러(autosampler), 컬럼 오븐, 400 bar까지 견디는 고압 유동 셀을 갖춘 다이오드 어레이 검출기로 구성된 분석용 초임계 유체 크로마토그래피(Supercritical fluid chromatography; SFC)를 사용하여 SFC 측정을 수행하였다. 질량 분광계(MS)와 함께 구성되어 있다면, 컬럼으로부터의 유동물은 (MS)로 갔다. 화합물의 명목상 단일 동위 원소 분자량(MW)의 확인을 허용하는 이온을 얻기 위하여 조정 파라미터(예를 들어, 스캐닝 범위, 드웰 시간...)를 설정하는 것은 당업자의 지식 이내이다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 데이터 획득을 수행하였다.

분석적 SFC/MS법(유량은 mL/분 단위로 표현되며; 컬럼 온도(T)는 ℃ 단위로 표현되고; 실행 시간은 분 단위로 표현되며; 배압(backpressure; BPR)은 bar 단위로 표현됨).

융점

값들은 최고 값이거나 용융 범위이며, 이 분석 방법과 일반적으로 연관되어 있는 실험적 불확실성을 가지고서 얻어진다.

DSC823e ( DSC로 표시됨)

다수의 화합물에 대하여, 융점을 DSC823e(메틀러-톨레도(Mettler-Toledo))로 측정하였다. 융점을 10℃/분의 온도 구배를 이용하여 측정하였다. 최대 온도는 300℃였다.

선광도

선광도를 나트륨 램프를 갖춘 퍼킨 엘머(Perkin-Elmer) 341 편광계에서 측정하고 하기와 같이 보고하였다: [α]°(λ, c g/100 ml, 용매, T℃).

[α]_λ ^T = (100α) / (l x c) : 여기서, ℓ은 dm 단위의 경로 길이이며, c는 온도 T(℃) 및 파장 λ(nm 단위)에서 샘플에 있어서의 g/100 ml 단위의 농도이다. 사용되는 광의 파장이 589 nm(나트륨 D 라인)라면, 부호 D가 대신 사용될 수 있다. 선광도 부호(+ 또는 -)를 항상 제공하여야 한다. 이러한 등식을 사용할 때, 농도 및 용매는 항상 선광도 뒤의 괄호 안에 제공된다. 선광도를 °를 이용하여 보고하며, 농도의 단위는 제공되어 있지 않다(이것은 g/100 ml인 것으로 추정된다).

실시예 1 : 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 1)의 합성 및 거울상 이성질체 1A 및 1B로의 키랄 분리.

중간체 1a'의 합성:

2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)아세트산 [CAS 886498-61-9] (28.9 g, 157 mmol)을 티오닐 클로라이드 (150 mL)에 조금씩 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 용매를 감압 하에 농축시키고, 톨루엔과 함께 공동 증발시켜 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 1a' (31.8 g)를 유성 잔사로서 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 1a의 합성:

N₂ 유동 하에, 0℃에서, 수소화나트륨 (2.48 g, 64.8 mmol)을 DMF (150 mL) 중 5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 [CAS 100846-24-0] (10 g, 54.0 mmol)의 혼합물에 일부씩 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반시켰다. DMF (50 mL) 중 토실 클로라이드 (11.3 g, 59.4 mmol)의 용액을 적가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 0℃까지 냉각시킨 후, 혼합물을 물로 켄칭하고, 침전물을 여과 제거하고, 감압 하에 70℃에서 하룻밤 건조시켜 1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 1a (18.4 g)를 제공하였다.

중간체 1b의 합성:

염화티타늄(IV) (2.32 mL, 21.2 mmol)을 실온에서 1,2-디클로로에탄 (70 mL) 중 1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 1a (3.6 g, 10.6 mmol) 및 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 1a' (3.85 g, 19 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 상기 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 얼음물을 첨가하고, 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (15 내지 40 ㎛, 80 g, CH₂Cl₂/MeOH (99.5/0.5))에 의해 정제하였다. 화합물 1b를 함유하는 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 상기 화합물을 CH₃CN/디이소프로필 에테르로 녹였다. 침전물을 여과 제거하고, 건조시켜 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 1b (3 g)를 제공하였다.

중간체 1c의 합성:

수산화리튬 (0.66 g, 15.8 mmol)을 THF (18 mL) 및 물 (6 mL) 중 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 1b (3.2 g, 6.33 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 물 및 EtOAc를 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 고체 잔사를 디이소프로필 에테르로 녹였다. 침전물을 여과 제거하고, 건조시켜 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 1c (2.1 g)를 제공하였다.

중간체 1d의 합성:

0℃에서, THF (50 mL) 중 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (1.6 g, 4.27 mmol)의 용액을 THF (50 mL) 중 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 1c (1.5 g, 4.27 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 및 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, EtOAc로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc에 용해시켰다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 디이소프로필 에테르로 녹였다. 침전물을 여과 제거하고, 건조시켜 2-브로모-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 1d (1.8 g)를 제공하였다.

화합물 1의 합성 및 거울상 이성질체 1A 및 1B로의 키랄 분리:

CH₃CN (100 mL) 중 2-브로모-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 1d (1.8 g, 4.18 mmol), 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (0.77 g, 4.18 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (1.08 mL, 6.27 mmol)의 혼합물을 70℃에서 24시간 동안 교반시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂ 및 1 N HCl로 희석시켰다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (15 내지 40 ㎛, 80 g, CH₂Cl₂/MeOH (99/1))에 의해 정제하였다. 화합물 1을 함유하는 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사 (660 mg)를 디이소프로필 에테르/CH₃CN으로부터 결정화하여 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 1, 580 mg)을 라세미 혼합물로서 제공하였다. 거울상 이성질체들을 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄셀^® OD-H 5 ㎛ 250 x 20 mm, 이동상: 70% CO₂, 30% EtOH)를 통하여 분리하여, 석유 에테르/디이소프로필 에테르로부터의 고체화 후, 239 mg의 첫 번째로 용출되는 거울상 이성질체 1A 및 248 mg의 두 번째로 용출되는 거울상 이성질체 1B를 제공하였다.

화합물 1:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.56 - 3.68 (m, 5 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.79 (t, J=5.4 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.18 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.39 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.38 (dd, J=8.5, 6.9 Hz, 1 H) 7.53 (dd, J=8.5, 1.6 Hz, 1 H) 7.68 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 8.49 (br s, 1 H) 8.60 (s, 1 H) 12.41 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 3.03분, MH⁺ 533

융점: 132℃

거울상 이성질체 1A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.58 - 3.68 (m, 5 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=1.8 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=1.5 Hz, 2 H) 6.18 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.3, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.3 Hz, 1 H) 7.38 (dd, J=8.1, 7.1 Hz, 1 H) 7.53 (dd, J=8.6, 1.5 Hz, 1 H) 7.68 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 8.49 (s, 1 H) 8.59 (s, 1 H) 12.34 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 3.02분, MH⁺ 533

[α]_D ²⁰: -93.7° (c 0.2455, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-A): R_t 2.03분, MH⁺ 533, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 1B:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.56 - 3.70 (m, 5 H) 3.76 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.72 (s, 1 H) 5.94 (d, J=1.5 Hz, 2 H) 6.18 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.3 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.3 Hz, 1 H) 7.38 (t, J=7.6 Hz, 1 H) 7.53 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 7.68 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 8.48 (s, 1 H) 8.59 (s, 1 H) 12.35 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 3.02분, MH⁺ 533

[α]_D ²⁰: +89.5° (c 0.2636, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-A): R_t 3.28분, MH⁺ 533, 키랄 순도 100%.

실시예 2 : 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 2) 및 거울상 이성질체 2A 및 2B로의 키랄 분리.

중간체 2a의 합성:

EtOH (250 mL) 중 3-메톡시-4-(트리플루오로메틸)아닐린 [CAS 106877-20-7] (25 g, 130.7 mmol), 글리옥살-디메틸아세탈 [CAS 51673-84-8] (39.3 mL, 261.571 mmol) 및 Pd/C (10%) (2.8 g, 2.62 mmol)의 혼합물을 대기압의 H₂ 하에 실온에서 16시간 동안 수소화하였다. 상기 혼합물을 셀라이트(celite)^® 패드를 통하여 여과시켰다. 필터 케이크를 EtOH로 세척하고, 합한 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc로 녹였다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 증발시켜 N-(2,2-디메톡시에틸)-3-메톡시-4-(트리플루오로메틸)아닐린 2a (39.9 g)를 제공하였다.

중간체 2b의 합성:

0℃에서, 트리플루오로아세트산 무수물 (TFAA) (18.2 mL, 130.7 mmol)을 CH₂Cl₂ (400 mL) 중 N-(2,2-디메톡시에틸)-3-메톡시-4-(트리플루오로-메틸)아닐린 2a (36.5 g, 130.7 mmol), 트리에틸아민 (21.8 mL, 156.8 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 (DMAP) (800 mg, 6.54 mmol)의 용액에 적가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응물을 물 중 10% K₂CO₃ 용액으로 켄칭하고, CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 ㎛, 330 g, 헵탄/EtOAc (85/15))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 감압 하에 건조 상태까지 증발시켜 N-(2,2-디메톡시에틸)-2,2,2-트리플루오로-N-(3-메톡시-4-(트리플루오로메틸)페닐)아세트아미드 2b (33.5 g)를 제공하였다.

중간체 2c의 합성:

트리플루오로아세트산 (TFA) (100 mL) 및 트리플루오로아세트산 무수물 (TFAA) (58 mL) 중 N-(2,2-디메톡시에틸)-2,2,2-트리플루오로-N-(3-메톡시-4-(트리플루오로-메틸)페닐)아세트아미드 2b (15.8 g, 42.1 mmol)의 혼합물을 환류 하에 24시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 얼음/물로 켄칭하였다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하였다. 침전물을 물 중 10% KOH (200 mL) 및 CH₃OH (200 mL)로 녹이고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. CH₃OH를 감압 하에 증발시켰다. 생성된 수성 혼합물을 추가로 물로 희석시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 정제를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 ㎛, 220 g, 헵탄/EtOAc (85/15))에 의해 행하였다. 순수 분획을 합하고, 감압 하에 건조 상태까지 증발시켜 6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 2c (5.4 g)를 제공하였다.

중간체 2d의 합성:

반응을 각각 6.51 mmol 및 12.8 mmol 규모의 6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 2c에서 2개의 별개의 배치에서 수행하였다.

N₂ 유동 하에, 헥산 중 1 M 디에틸알루미늄 클로라이드 (19.17 mL, 19.17 mmol)를 -70℃에서 CH₂Cl₂ (15 mL) 중 6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 2c (1.40 g, 6.51 mmol)의 용액에 적가하였다. -70℃에서의 5분의 교반 후, CH₂Cl₂ (15 mL) 중 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 1a' (3.88 g, 19.17 mmol)를 적가하고, 반응 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 유지하였다. 얼음물을 첨가하였다. 상기 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂로부터 결정화하였다. 침전물을 여과 제거하고, 건조시켜 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 2d의 제1 배치 (1.0 g)를 제공하였다. 여과액을 감압 하에 농축시켰다 (분획 1).

동일한 절차를 이용하여, 12.8 mmol의 6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 2c로부터 출발하여, CH₂Cl₂로부터의 결정화 후 중간체 2d의 제2 배치 (840 mg)를 수득하였다. 여과액을 감압 하에 농축시켰다 (분획 2).

분획 1 및 분획 2의 합한 여과액을 증발시키고, 잔사를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 ㎛, 120 g, 헵탄/EtOAc (80/20))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 건조 상태까지 증발시켜 중간체 2d의 제3 배치 (730 mg)를 제공하였다.

화합물 2의 합성 및 거울상 이성질체 2A 및 2B로의 키랄 분리:

0℃에서, THF (30 mL) 중 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (3 g, 7.97 mmol)의 용액을 THF (30 mL) 중 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 2d (3.04　g, 7.97 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 및 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. CH₃CN (30 mL) 중 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (4.38 g, 23.9 mmol)의 용액을 적가하고, 교반을 실온에서 24시간 동안 계속하였다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc에 용해시키고, 1 N HCl 및 물로 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사 (5.1 g)를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 ㎛, 120 g, CH₂Cl₂/CH₃OH (99.5/0.5))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 감압 하에 건조 상태까지 증발시켜 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논의 제1 분획 (화합물 2, 2.1 g)을 라세미체로서 제공하였다. 불순한 분획을 합하고, 감압 하에 농축시키고, Et₂O로부터 결정화하여 라세미 화합물 2의 제2 분획 520 mg을 제공하였다.

화합물 2의 거울상 이성질체들 (2.62 g)을 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® IC 5 ㎛ 250 x 30 mm, 이동상: 65% CO₂, 35% iPrOH + 0.3% iPrNH₂)를 통하여 분리하여 1.0 g의 첫 번째로 용출되는 거울상 이성질체 및 1.1 g의 두 번째로 용출되는 거울상 이성질체를 제공하였다. 첫 번째로 용출되는 거울상 이성질체를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 ㎛, 24 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH (99/1/0.1))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 건조 상태까지 증발시켜, Et₂O/헵탄에서의 고체화 후, 750 mg의 거울상 이성질체 2A를 제공하였다. 두 번째로 용출되는 거울상 이성질체를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 ㎛, 24 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH (99/1/0.1))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 건조 상태까지 증발시켜, Et₂O/헵탄에서의 고체화 후, 755 mg의 거울상 이성질체 2B를 제공하였다.

화합물 2:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=4.9 Hz, 2 H) 3.77 - 3.87 (m, 2 H) 3.89 (s, 3 H) 3.95 (s, 3 H) 4.79 (br t, J=5.4 Hz, 1 H) 5.72 (s, 1 H) 5.93 (d, J=1.6 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.2 Hz, 1 H) 7.20 (s, 1 H) 7.37 (dd, J=8.5, 7.3 Hz, 1 H) 8.37 (s, 1 H) 8.43 (s, 1 H) 12.14 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 2.99분, MH⁺ 563

융점: 174℃

거울상 이성질체 2A:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.77 - 3.87 (m, 2 H) 3.89 (s, 3 H) 3.95 (s, 3 H) 4.79 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.2 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.94 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.37 (dd, J=8.5, 6.9 Hz, 1 H) 8.37 (s, 1 H) 8.43 (s, 1 H) 12.14 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 2.97분, MH⁺ 563

[α]_D ²⁰: +92.3° (c 0.26, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-B): R_t 2.34분, MH⁺ 563, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 2B:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.77 - 3.87 (m, 2 H) 3.89 (s, 3 H) 3.95 (s, 3 H) 4.79 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.37 (dd, J=8.5, 6.9 Hz, 1 H) 8.37 (s, 1 H) 8.43 (s, 1 H) 12.14 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 2.97분, MH⁺ 563

[α]_D ²⁰: -88.4° (c 0.25, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-B): R_t 3.25분, MH⁺ 563, 키랄 순도 99.6%.

실시예 3 : 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)에타논 (화합물 3)의 합성 및 거울상 이성질체 3A 및 3B로의 키랄 분리.

중간체 3a의 합성:

DMF (100 mL) 중 6-플루오로-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 [CAS 875306-79-9] (4.8 g, 24.6 mmol)의 용액을 0℃까지 냉각시켰다. N₂ 유동 하에, 수소화나트륨 (1.09 g, 28.4 mmol)을 일부씩 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반시켰다. DMF (20 mL) 중 토실 클로라이드 (4.96 g, 26 mmol)의 용액을 적가하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 및 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 얼음물 (600 mL)에 붓고, 40분 동안 격렬하게 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 물 (6x)로 세척하고, 감압 하에 50℃에서 건조시켜 6-플루오로-1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 3a (7.2 g)를 제공하였다.

중간체 3b의 합성:

염화티타늄(IV) (1.23 mL, 11.2 mmol)을 실온에서 디클로로메탄 (50 mL) 중 6-플루오로-1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 3a (2 g, 5.6 mmol) 및 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 1a' (2.27 g, 11.2 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 반응물을 실온에서 3.5시간 동안 교반시켰다. 반응물을 쇄빙 (40 g)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 1시간 동안 교반시킨 후, 층들을 분리하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 비등 CH₂Cl₂ (15 mL)에서 교반시켰다. 고형물을 여과 제거하고, CH₂Cl₂ (3x)로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 1-(6-플루오로-1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에타논 3b (315 mg)를 제공하였다. 여과액을 하룻밤 정치시켜, 제2 크롭(crop)이 상기 용액으로부터 침전되게 하였다. 생성물을 여과 제거하고, CH₂Cl₂ (3x)로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 중간체 3b의 제2 크롭 (505 mg)을 제공하였다. 여과액을 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 바이오테이지(Biotage)^® 스냅 울트라(Snap Ultra) 실리카 50 g, 이동상: 헵탄/CH₂Cl₂ 구배: 100/0에서 0/100까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 25 mL의 잔존 부피까지 농축시켰다. 침전물이 형성되었으며, 이를 여과 제거하고, 헵탄 (3x)으로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 중간체 3b의 제3 크롭 (922 mg)을 제공하였다.

중간체 3c의 합성:

수산화칼륨 (0.65 g, 11.6 mmol)을 디옥산 (30 mL) 및 물 (10 mL) 중 1-(6-플루오로-1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에타논 3b (1.74 g, 3.33 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 3.5시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉수 (100 mL)와 1 N HCl (15 mL)의 교반 혼합물에 서서히 부었다. 30분 동안 교반시킨 후, 생성물을 2-MeTHF (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과 제거하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂ (15 mL)에서 교반시키고, 여과 제거하고, CH₂Cl₂ (3x)로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 3c (1.13 g)를 제공하였다.

중간체 3d의 합성:

THF (40 mL) 중 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 3c (1.13 g, 3.06 mmol)의 용액을 N₂ 분위기 하에 0℃까지 냉각시켰다. 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (1.21 g, 3.22 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 및 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, THF (2x)로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 농축시켜 2-브로모-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 3d (1.37 g)를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

화합물 3의 합성 및 거울상 이성질체 3A 및 3B로의 키랄 분리:

CH₃CN (60 mL) 중 2-브로모-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 3d (1.37 g, 3.06 mmol), 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (1.22 g, 6.13 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (1.06 mL, 6.13 mmol)의 혼합물을 실온에서 85시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (250 mL)에 붓고, 생성물을 Et₂O (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스(Grace Reveleris)^® 실리카 40 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 정제하였다. 화합물 3을 함유하는 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 분취용 HPLC (고정상: RP 엑스브리지(XBridge) C18 OBD - 10 ㎛, 50 x 150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, MeOH)를 통하여 추가로 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 조(bath) 온도를 45℃로 하여 회전 증발기를 이용하여 감압 하에 10 mL의 잔존 부피까지 매우 서서히 농축시켰다. 생성된 용액을 18시간 동안 계속 정치시켜 생성물을 침전시킨다. 생성물을 여과 제거하고, H₂O (5x)로 세척하고, 진공 하에 45℃에서 건조시켜 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)에타논 (화합물 3, 501 mg)을 라세미 혼합물로서 제공하였다.

화합물 3의 거울상 이성질체들 (473 mg)을 순상 키랄 분리 (고정상: AS 20 ㎛, 이동상: 50% 에탄올, 50% 헵탄)를 통하여 분리하여 거울상 이성질체 3A를 첫 번째로 용출되는 생성물로서, 그리고 거울상 이성질체 3B를 두 번째로 용출되는 거울상 이성질체로서 제공하였다. 상기 둘 다의 거울상 이성질체를 4/1의 MeOH/물의 혼합물 (5 mL)에서 교반시켰다. 생성된 고형물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, 진공 하에 45℃에서 건조시켜 152 mg의 거울상 이성질체 3A 및 163 mg의 거울상 이성질체 3B를 제공하였다.

화합물 3:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.2 Hz, 2 H) 3.77 - 3.90 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.76 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.73 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.38 (dd, J=8.6, 6.8 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=11.4 Hz, 1 H) 8.47 (d, J=7.0 Hz, 1 H) 8.57 (s, 1 H) 12.42 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.11분, MH⁺ 551

거울상 이성질체 3A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.3 Hz, 2 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.73 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.38 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.2, 2.4 Hz, 1 H) 7.37 (dd, J=8.6, 6.8 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=11.3 Hz, 1 H) 8.46 (d, J=6.9 Hz, 1 H) 8.57 (s, 1 H) 12.42 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.10분, MH⁺ 551

[α]_D ²⁰: +91.0° (c 0.435, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 2.93분, MH⁺ 551, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 3B:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.76 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.76 (br t, J=5.3 Hz, 1 H) 5.73 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.4 Hz, 1 H) 7.38 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=11.4 Hz, 1 H) 8.47 (d, J=7.3 Hz, 1 H) 8.57 (s, 1 H) 12.43 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.10분, MH⁺ 551

[α]_D ²⁰: -82.7° (c 0.475, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 3.15분, MH⁺ 551, 키랄 순도 99.4%.

실시예 4 : 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 4)의 합성 및 거울상 이성질체 4A 및 4B로의 키랄 분리.

중간체 4a의 합성:

MeOH (60 mL) 중 2-메틸-4-(트리플루오로메틸)아닐린 [CAS 67169-22-6] (9.85 g, 56.2 mmol)의 용액을 빙조에서 교반시켰다. CH₂Cl₂ 중 1 M 염화요오드 [CAS 7790-99-0]의 용액 (61.9 mL, 61.9 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 및 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 DIPE (10 mL)에서 교반시키고, 침전물을 여과 제거하고, DIPE (5x)로 세척하고, 진공 하에 45℃에서 건조시켜 2-요오도-6-메틸-4-(트리플루오로메틸)아닐린 4a (2.47 g)를 제공하였다. 여과액을 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 바이오테이지^® 스냅 울트라 실리카 100 g, 이동상: 헵탄/EtOAc 구배: 100/0에서 20/80까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시키고, 톨루엔 (3x)과 함께 공동 증발시켜 4a의 제2 배치 (6.8 g)를 제공하였다.

중간체 4b의 합성:

DMF (75 mL) 중 2-요오도-6-메틸-4-(트리플루오로메틸)아닐린 4a (6.7 g, 22.3 mmol)의 교반 용액을 15분 동안 N₂-유동 버블링을 이용하여 탈기시켰다. 요오드화구리(I) (848 mg, 4.45 mmol), 트리에틸아민 (9.28 mL, 66.8 mmol), 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) (1.56 g, 2.23 mmol) 및 트리메틸실릴아세틸렌 (9.24 mL, 66.8 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 N₂-분위기 하에 실온에서 65시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 얼음물 (300 mL)에 붓고, 생성물을 Et₂O (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 바이오테이지^® 스냅 울트라 실리카 100 g, 이동상: 헵탄/EtOAc 구배: 100/0에서 90/10까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시키고, 헵탄과 함께 공동 증발시켜 2-메틸-4-(트리플루오로메틸)-6-((트리메틸실릴)에티닐)아닐린 4b (5.5 g)를 제공하였다.

중간체 4c의 합성:

2-메틸-4-(트리플루오로메틸)-6-((트리메틸실릴)에티닐)아닐린 4b (5.5 g, 20.3 mmol)를 NMP (80 mL)에 용해시켰다. 포타슘 tert -부톡시드 (6.82 g, 60.8 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 N₂-분위기 하에 75℃에서 18시간 동안 교반시켰다. 상기 반응물을 실온까지 냉각시키고, 얼음물 (400 mL)에 부었다. 생성물을 2-MeTHF (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 바이오테이지^® 스냅 울트라 실리카 100 g, 이동상: 헵탄/EtOAc 구배: 100/0에서 80/20까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시키고, 톨루엔과 함께 공동 증발시켰다. 잔사를 진공 하에 50℃에서 건조시켜 7-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 4c (0.95 g)를 제공하였다.

중간체 4d의 합성:

DMF (15 mL) 중 7-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 4c (0.95 g, 4.77 mmol)의 용액을 0℃까지 냉각시켰다. N₂ 유동 하에, 수소화나트륨 (1.09 g, 28.4 mmol)을 일부씩 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반시켰다. DMF (10 mL) 중 토실 클로라이드 (1.0 g, 5.25 mmol)의 용액을 적가하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 20분 동안 및 실온에서 40분 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 얼음물 (100 mL)에 붓고, 1시간 동안 격렬하게 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 물 (4x)로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 7-메틸-1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 4d (1.64 g)를 제공하였다.

중간체 4e의 합성:

염화티타늄(IV) (1.02 mL, 9.28 mmol)을 실온에서 디클로로메탄 (50 mL) 중 7-메틸-1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 4d (1.64 g, 4.64 mmol) 및 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 1a' (1.88 g, 9.28 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응물을 쇄빙 (40 g)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 1시간 동안 교반시킨 후, 층들을 분리하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 바이오테이지^® 스냅 울트라 실리카 50 g, 이동상: 헵탄/CH₂Cl₂ 구배: 100/0에서 0/100까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 농축시키고, 디옥산과 함께 공동 증발시켰다. 잔사를 진공 하에 50℃에서 건조시켜 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 4e (1.57 g)를 제공하였다.

중간체 4f의 합성:

수산화칼륨 (0.52 g, 9.27 mmol)을 디옥산 (30 mL) 및 물 (10 mL) 중 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 4e (1.38 g, 2.66 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 얼음물 (50 mL)과 1 N HCl (11 mL)의 교반 혼합물에 서서히 부었다. 5분 동안 교반시킨 후, 생성물을 2-MeTHF (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과 제거하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂ (4 mL)에서 교반시키고, 여과 제거하고, CH₂Cl₂ (4x 1 mL)로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 4f (0.51 g)를 제공하였다.

중간체 4g의 합성:

THF (20 mL) 중 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 4f (0.51 g, 1.4 mmol)의 용액을 N₂ 분위기 하에 0℃까지 냉각시켰다. 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (0.55 g, 1.47 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 40분 동안 및 실온에서 90분 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, THF(2x)로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 농축시켜 2-브로모-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 4g (0.62 g)를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

화합물 4의 합성 및 거울상 이성질체 4A 및 4B로의 키랄 분리:

CH₃CN (30 mL) 중 2-브로모-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 4g (0.62 g, 1.4 mmol), 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (0.511 g, 2.8 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (481 μL, 2.8 mmol)의 혼합물을 실온에서 21시간 및 40℃에서 6시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (125 mL)에 붓고, 생성물을 Et₂O (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 12 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 정제하였다. 화합물 4를 함유하는 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 분취용 HPLC (고정상: RP 엑스브리지^® C18 OBD - 10 ㎛, 50 x 150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)를 통하여 추가로 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 대략 5 mL의 잔존 부피까지 농축시켰다. 생성된 용액을 70시간 동안 계속 정치시켜 생성물을 침전시킨다. 생성물을 여과 제거하고, H₂O (4x)로 세척하고, 진공 하에 45℃에서 건조시켜 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 4, 340 mg)을 라세미 혼합물로서 제공하였다.

화합물 4의 거울상 이성질체들 (297 mg)을 순상 키랄 분리 (고정상: 휄크(Whelk)-O1 (R,R), 이동상: 80% 헵탄, 20% 에탄올)를 통하여 분리하여 거울상 이성질체 4A를 첫 번째로 용출되는 생성물로서, 그리고 거울상 이성질체 4B를 두 번째로 용출되는 생성물로서 제공하였다. 상기 둘 다의 거울상 이성질체를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 12 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 추가로 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 H₂O (5 mL) + MeOH (1.25 mL)에서 교반시키고, 여과 제거하고, 4/1의 H₂O/MeOH로 4회 세척하고, 진공 하에 45℃에서 건조시켜 거울상 이성질체 4A (79 mg) 및 거울상 이성질체 4B (60 mg)를 제공하였다.

화합물 4:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.55 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.2 Hz, 2 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.76 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.19 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.35 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.4 Hz, 1 H) 7.35 (br s, 1 H) 7.38 (dd, J=8.7, 6.9 Hz, 1 H) 8.32 (br s, 1 H) 8.56 (d, J=3.3 Hz, 1 H) 12.46 (br d, J=2.6 Hz, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 2.11분, MH⁺ 547

거울상 이성질체 4A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.55 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.3 Hz, 2 H) 3.76 - 3.90 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.20 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.35 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.35 (br s, 1 H) 7.38 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 8.33 (br s, 1 H) 8.56 (s, 1 H) 12.46 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 2.09분, MH⁺ 547

[α]_D ²⁰: -80.4° (c 0.495, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 3.20분, MH⁺ 547, 키랄 순도 99.6%.

거울상 이성질체 4B:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.55 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.3 Hz, 2 H) 3.77 - 3.90 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.76 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.20 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.35 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.4 Hz, 1 H) 7.35 (br s, 1 H) 7.38 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 8.32 (br s, 1 H) 8.56 (s, 1 H) 12.46 (s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 2.09분, MH⁺ 547

[α]_D ²⁰: +74.1° (c 0.425, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 2.91분, MH⁺ 547, 키랄 순도 96.9%.

실시예 5 : 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 5)의 합성 및 거울상 이성질체 5A 및 5B로의 키랄 분리.

중간체 5a의 합성:

CH₂Cl₂ (150 mL) 중 5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 [CAS 262593-63-5] (5 g, 24.9 mmol)의 용액을 N₂-분위기 하에 0℃까지 냉각시켰다. 헥산 중 1 M 디에틸알루미늄 클로라이드의 용액 (37.3 mL, 37.3 mmol)을 적가하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 15분 동안 유지하였다. CH₂Cl₂ (50 mL) 중 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 1a' (7.05 g, 34.8 mmol)의 용액을 적가하였다. 교반을 0℃에서 1시간 동안 및 실온에서 1.5시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 교반 얼음/로셸(Rochelle) 염 용액에 부었다. 얼음이 녹은 후, 상기 혼합물을 디칼라이트(dicalite)^®에서 여과시키고, 필터 케이크를 THF로 수 회 세척하였다. 여과액을 합하였다. 층들을 분리하고, 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂ (50 mL)로 미분화하고, 침전물을 여과 제거하여 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 5a (7.36 g)를 제공하였다. 여과액을 진공 하에 농축시키고, 고체 잔사를 CH₂Cl₂ (10 mL)에서 교반시켰다. 고형물의 여과에 의해 5a의 제2 크롭 (431 mg)을 제공하였다.

중간체 5b의 합성:

THF (200 mL) 중 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 5a (7.35 g, 20.0 mmol)의 교반 용액을 0℃까지 냉각시켰다. THF (100 mL) 중 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (8.28 g, 22.0 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성된 현탁물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 고형물을 여과에 의해 제거하고, THF로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 EtOAc (30 mL)와 혼합하였다. 고형물을 여과에 의해 단리하고, 소량의 EtOAc로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 2-브로모-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 5b (7.8 g)를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

화합물 5의 합성 및 거울상 이성질체 5A 및 5B의 키랄 분리:

THF (150 mL) 및 CH₃CN (150 mL) 중 2-브로모-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 5b (3 g, 6.72 mmol), 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (1.85 g, 10.1 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (1.16 mL, 6.72 mmol)의 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 반응 온도를 6시간 동안 60℃까지 증가시키고, 후속적으로, 하룻밤 동안 80℃까지 증가시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂에 용해시키고, 1 N HCl (100 mL) 및 물 (100 mL)로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 120 g, 이동상: EtOAc:EtOH(3:1)/헵탄 구배: 0/100에서 50/50까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 분취용 HPLC (고정상: RP 엑스브리지^® 프렙(Prep) C18 OBD - 10 ㎛, 50 x 150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)를 통하여 추가로 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켜 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 5, 1.18 g)을 라세미 혼합물로서 제공하였다.

화합물 5의 거울상 이성질체들 (1.18 g)의 키랄 분리를 분취용 SFC (고정상: 키랄셀^® 디아셀(Diacel) OD 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, EtOH + 0.4% iPrNH₂)를 통하여 수행하였다. 생성물 분획을 합하고, 증발시켜 거울상 이성질체 5A를 첫 번째로 용출되는 생성물로서, 그리고 거울상 이성질체 5B를 두 번째로 용출되는 생성물로서 제공하였다.

거울상 이성질체 5A (0.46 g)를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 12 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시키고, Et₂O와 헵탄의 혼합물과 함께 공동 증발시켰다. 잔존 폼을 H₂O (7.5 mL) 및 MeOH (2.5 mL)로 미분화하였다. 고형물을 여과 제거하고, 3/1의 H₂O/MeOH 혼합물로 세척하고 (4x), 진공 하에 45℃에서 건조시켜 거울상 이성질체 5A (291 mg)를 제공하였다.

거울상 이성질체 5B (0.46 g)를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 12 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시키고, MeOH와 함께 2회 공동 증발시켰다. 잔사를 H₂O (7.5 mL) 및 MeOH (2.5 mL)로 미분화하였다. 고형물을 여과 제거하고, 3/1의 H₂O/MeOH 혼합물로 세척하고 (4x), 진공 하에 45℃에서 건조시켜 거울상 이성질체 5B (351 mg)를 제공하였다.

화합물 5:

¹H NMR (360 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.60 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.0 Hz, 2 H) 3.75 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=1.8 Hz, 2 H) 6.15 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.6 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.8, 2.2 Hz, 1 H) 7.38 (dd, J=8.4, 7.0 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.06 (br s, 1 H) 8.55 (s, 1 H) 12.23 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.20분, MH⁺ 549

거울상 이성질체 5A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.3 Hz, 2 H) 3.76 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.15 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.2, 2.4 Hz, 1 H) 7.20 (dd, J=8.8, 1.8 Hz, 1 H) 7.38 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.06 (d, J=0.9 Hz, 1 H) 8.53 (s, 1 H) 12.26 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.12분, MH⁺ 549

[α]_D ²⁰: -93.5° (c 0.445, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 3.16분, MH⁺ 549, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 5B:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.2 Hz, 2 H) 3.77 - 3.90 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.15 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.4 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.7, 1.9 Hz, 1 H) 7.38 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.07 (d, J=0.9 Hz, 1 H) 8.53 (s, 1 H) 12.26 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.12분, MH⁺ 549

[α]_D ²⁰: +95.1° (c 0.465, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 2.86분, MH⁺ 549, 키랄 순도 100%.

실시예 6 : 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 6) 및 거울상 이성질체 6A 및 6B로의 키랄 분리.

중간체 6a의 합성:

EtOH (400 mL) 중 3-메톡시-4-(트리플루오로메톡시)벤즈알데히드 [CAS 853771-90-1] (50 g, 230 mmol) 및 에틸 아지도아세테이트 (89 g, 690 mmol)의 냉각 (-15℃) 용액에 NaOEt 용액 (0.69 mol, 15.9 g의 Na 및 700 mL의 EtOH로부터 제조함)을 2시간의 기간에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 빙조에서의 냉각 후, 반응물을 포화 NH₄Cl 용액 (1.2 L)으로 켄칭하고, 10분 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, 건조시켜 (Z)-에틸 2-아지도-3-(3-메톡시-4-(트리플루오로메톡시)페닐)아크릴레이트 6a (32 g)를 누르스름한 고형물로서 제공하였다.

중간체 6b의 합성:

자일렌 (40 mL) 중 (Z)-에틸 2-아지도-3-(3-메톡시-4-(트리플루오로메톡시)페닐)아크릴레이트 6a (3 g, 10 mmol)의 용액을 환류 하에 하룻밤 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 용매를 건조 상태까지 증발시켰다. 잔사를 헥산 (50 mL)으로 미분화하고, 침전물을 여과 제거하여 메틸 6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-2-카르복실레이트 6b (수율: 1.4 내지 1.6 g)를 황색 고형물로서 생성하였다.

중간체 6c의 합성:

MeOH/H₂O (2/1, 300 mL) 중 메틸 6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-2-카르복실레이트 6b (25 g, 87 mmol)의 혼합물에 NaOH (7 g, 175 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 투명 용액이 수득될 때까지 환류 하에 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 대부분의 메탄올을 감압 하에 제거하고, 잔존 수성 용액을 진한 HCl을 이용하여 pH 3 내지 4까지 산성화하였다. 생성물을 EtOAc (2x 250 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고, 감압 하에 증발시켜 6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-2-카르복실산 6c (22.7 g)를 회색 고형물로서 제공하였다.

중간체 6d의 합성:

퀴놀린 (150 mL) 중 6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-2-카르복실산 6c (7.5 g, 27 mmol) 및 Cu (1.22 g, 0.7 당량)의 현탁물을 불활성 분위기 하에 12시간 동안 220 내지 230℃까지 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 상기 혼합물을 메틸 tert -부틸 에테르 (MTBE, 400 mL)로 희석시키고, 포화 NaHSO₄ 수용액 (2x 500 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 짧은 실리카 겔 패드를 통하여 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 6d (3.75 g)를 황색 고형물로서 생성하였다.

중간체 6e의 합성:

N₂ 유동 하에, 헥산 중 1 M 디에틸알루미늄 클로라이드 (8.45 mL, 8.45 mmol)를 CH₂Cl₂ (25 mL) 중 6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 6d (1.3 g, 5.62 mmol)의 냉각 (0℃) 용액에 적가하였다. 0℃에서의 30분의 교반 후, CH₂Cl₂ (15 mL) 중 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 1a' (1.71 g, 8.45 mmol)의 용액을 적가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 얼음물을 첨가하였다. 침전물을 여과 제거하고, 진공 하에 건조시켜 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 6e (2 g)를 제공하였다.

중간체 6f의 합성:

0℃에서, THF (60 mL) 중 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (1.7 g, 4.28 mmol)의 용액을 THF (60 mL) 중 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 6e (1.6 g, 4.28 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 및 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, EtOAc로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc에 용해시켰다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 디이소프로필 에테르로 녹였다. 침전물을 여과 제거하고, 건조시켜 2-브로모-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 6f (1.9 g)를 제공하였다.

화합물 6의 합성 및 거울상 이성질체 6A 및 6B로의 키랄 분리:

CH₃CN (100 mL) 중 2-브로모-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 6f (2.08 g, 4.37 mmol), 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (0.96 g, 5.24 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (1.13 mL, 6.55 mmol)의 혼합물을 70℃에서 6시간 동안 교반시키고, 그 후 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂로 희석시키고, 1 N HCl로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (15 내지 40 ㎛, 80 g, CH₂Cl₂/MeOH (99/1))에 의해 정제하였다. 화합물 6을 함유하는 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사 (1 g)를 다시 비키랄 SFC (고정상: 디에틸아미노프로필 5 ㎛ 150 x 21.2 mm, 이동상: 60% CO₂, 40% MeOH + 0.3% iPrNH₂)를 통하여 정제하여, 디이소프로필 에테르/석유 에테르로부터의 결정화 후, 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 6, 650 mg)을 라세미 혼합물로서 제공하였다.

화합물 6의 거울상 이성질체들을 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® IC 5 ㎛ 250 x 20 mm, 이동상: 70% CO₂, 30% iPrOH + 0.3% iPrNH₂)를 통하여 분리하여, 헵탄/디이소프로필 에테르로부터의 고체화 후, 244 mg의 첫 번째로 용출되는 거울상 이성질체 6A 및 254 mg의 두 번째로 용출되는 거울상 이성질체 6B를 제공하였다.

화합물 6:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.54 - 3.69 (m, 5 H) 3.76 - 3.90 (m, 5 H) 3.95 (s, 3 H) 4.75 (br t, J=5.3 Hz, 1 H) 5.72 (s, 1 H) 5.92 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.12 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.33 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.3 Hz, 1 H) 6.92 (dd, J=11.4, 2.3 Hz, 1 H) 7.20 (s, 1 H) 7.37 (dd, J=8.1, 7.1 Hz, 1 H) 8.02 (s, 1 H) 8.38 (s, 1 H) 12.03 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 3.02분, MH⁺ 579

융점: 178℃

거울상 이성질체 6A:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.57 - 3.68 (m, 5 H) 3.77 - 3.89 (m, 5 H) 3.95 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.12 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.36 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.4, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.5 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.37 (dd, J=8.5, 6.9 Hz, 1 H) 8.02 (d, J=1.3 Hz, 1 H) 8.39 (s, 1 H) 11.97 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 3.00분, MH⁺ 579

[α]_D ²⁰: +73.9° (c 0.2367, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-B): R_t 2.09분, MH⁺ 579, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 6B:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.56 - 3.68 (m, 5 H) 3.78 - 3.87 (m, 5 H) 3.95 (s, 3 H) 4.78 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.12 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.36 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.2, 2.4 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.37 (dd, J=8.5, 6.9 Hz, 1 H) 8.02 (d, J=1.3 Hz, 1 H) 8.39 (s, 1 H) 11.98 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 3.00분, MH⁺ 579

[α]_D ²⁰: -73.7° (c 0.2658, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-B): R_t 4.41분, MH⁺ 579, 키랄 순도 100%.

실시예 7 : 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)에타논 (화합물 7)의 합성 및 거울상 이성질체 7A 및 7B로의 키랄 분리.

중간체 7a의 합성:

CH₃CN (600 mL) 중 3-플루오로-4-(트리플루오로메톡시)아닐린 [CAS 1017779-69-9] (32.0 g, 164 mmol)의 용액을 빙조에서 교반시켰다. N-요오도-숙신이미드 (40.59 g, 180.4 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 하룻밤 교반하면서 서서히 실온에 도달하게 하였다. 용매를 감압 하에 농축시켰다. 물을 첨가하고, 생성물을 EtOAc (2x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂S₂O₃ 수용액 (500 mL), 염수 (500 mL)로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (용출제: 석유 에테르/EtOAc 구배: 50/1에서 30/1까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켜 5-플루오로-2-요오도-4-(트리플루오로메톡시)아닐린 7a (45 g)를 제공하였다.

중간체 7b의 합성:

트리에틸아민 (650 mL) 중 5-플루오로-2-요오도-4-(트리플루오로메톡시)아닐린 7a (43.0 g, 134 mmol) 및 트리메틸실릴아세틸렌 (39.5 g, 401.9 mmol)의 용액에 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) (3.76 g, 5.36 mmol) 및 요오드화구리(I) (2.55 g, 13.4 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (용출제: 석유 에테르/EtOAc 구배: 50/1에서 30/1까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켜 5-플루오로-4-(트리플루오로메톡시)-2-((트리메틸실릴)에티닐)아닐린 7b (36.5 g)를 제공하였다.

중간체 7c의 합성:

5-플루오로-4-(트리플루오로메톡시)-2-((트리메틸실릴)에티닐)아닐린 7b (36.0 g, 123.6 mmol)를 NMP (500 mL)에 용해시켰다. 포타슘 tert -부톡시드 (41.6 g, 370.7 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 15시간 동안 교반시켰다. 상기 반응물을 실온까지 냉각시키고, 물로 켄칭하였다. 생성물을 MTBE (3x 500 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (2x 1 L)로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 세파플래시(SepaFlash)^® 실리카 330 g, 이동상: 구배: 석유 에테르 중 0%에서 2%까지의 EtOAc)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 감압 하에 증류에 의해 추가로 정제하여 6-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 7c (18.2 g)를 담황색 오일로서 제공하였다.

중간체 7d의 합성:

CH₂Cl₂ (150 mL) 중 6-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 7c (1.59 g, 7.26 mmol)의 용액을 N₂-분위기 하에 0℃까지 냉각시켰다. 헥산 중 1 M 디에틸알루미늄 클로라이드의 용액 (10.9 mL, 10.9 mmol)을 적가하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 유지하였다. CH₂Cl₂ (75 mL) 중 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 1a' (2.2 g, 10.9 mmol)의 용액을 적가하였다. 교반을 0℃에서 1시간 동안 및 실온에서 1시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 물 (6 mL) 중 포타슘 소듐 타르트레이트 4수화물 (로셸 염, 4.1 g, 14.5 mmol)의 용액을 적가하고, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 실온까지 가온하고, THF (200 mL) 및 Na₂SO₄ (25 g)를 첨가하였다. 하룻밤 교반시킨 후, 상기 혼합물을 디칼라이트^®에서 여과시키고, 필터 케이크를 THF (4x 150 mL)로 수 회 세척하였다. 여과액을 합하고, 감압 하에 증발시켰다. 고체 잔사를 DIPE (25 mL)와 EtOAc (2 mL)의 용매 혼합물에서 교반시켰다. 고형물을 여과 제거하고, DIPE (3x)로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 7d (2.6 g)를 제공하였다.

중간체 7e의 합성:

THF (130 mL) 중 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 7d (2.60 g, 6.75 mmol)의 용액을 N₂ 분위기 하에 0℃까지 냉각시켰다. 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (2.66 g, 7.09 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 45분 동안 및 실온에서 90분 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, THF (2x)로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 농축시켜 2-브로모-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 7e (3.6 g)를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

화합물 7의 합성 및 거울상 이성질체 7A 및 7B로의 키랄 분리:

CH₃CN 중 2-브로모-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 7e (3.59 g, 7.73 mmol), 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (2.83 g, 15.5 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (2.67 mL, 15.5 mmol)의 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (250 mL)에 붓고, 생성물을 Et₂O (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 100 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 분취용 HPLC (고정상: 업티스피어(Uptisphere)^® C18 ODB - 10 ㎛, 200 g, 5 cm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)를 통하여 추가로 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켰다. 라세미 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)에타논 (화합물 7, 1.29 g)을 함유하는 잔사를 분취용 SFC (고정상: 키랄셀^® 디아셀 OD 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, EtOH + 0.4% iPrNH₂)를 이용하여 키랄 분리하여 거울상 이성질체 7A를 첫 번째로 용출되는 생성물로서, 그리고 거울상 이성질체 7B를 두 번째로 용출되는 생성물로서 제공하였다. 상기 둘 다의 거울상 이성질체를 컬럼 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 12 g, 이동상: EtOAc:EtOH(3:1)/헵탄 구배: 0/100에서 40/60까지)에 의해, 그리고 후속적으로 분취용 HPLC (고정상: RP 엑스브리지^® 프렙 C18 OBD - 10 ㎛, 30 x 150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, MeOH)에 의해 추가로 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켰다. 상기 둘 다의 거울상 이성질체를 물의 느린 첨가에 의해 MeOH 중 용액으로부터 침전시켰다. 고형물을 여과 제거하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 거울상 이성질체 7A (42 mg) 및 거울상 이성질체 7B (278 mg)를 제공하였다.

거울상 이성질체 7A:

¹H NMR (360 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.60 (s, 3 H) 3.63 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.76 - 3.88 (m, 2 H) 3.93 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.5, 2.4 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.4, 7.0 Hz, 1 H) 7.60 (d, J=10.6 Hz, 1 H) 8.16 (dd, J=8.1, 1.1 Hz, 1 H) 8.54 (s, 1 H) 12.32 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.16분, MH⁺ 567

[α]_D ²⁰: -77.1° (c 0.305, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 3.00분, MH⁺ 567, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 7B:

¹H NMR (360 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.60 (s, 3 H) 3.63 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.76 - 3.88 (m, 2 H) 3.93 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.41 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.74 (td, J=8.4, 2.6 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.6 Hz, 1 H) 7.37 (dd, J=8.4, 7.0 Hz, 1 H) 7.60 (d, J=10.4 Hz, 1 H) 8.16 (dd, J=7.7, 1.1 Hz, 1 H) 8.54 (s, 1 H) 12.33 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.16분, MH⁺ 567

[α]_D ²⁰: +84.0° (c 0.455, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 2.73분, MH⁺ 567, 키랄 순도 100%.

실시예 8 : 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 8)의 합성 및 거울상 이성질체 8A 및 8B로의 키랄 분리.

중간체 8a의 합성:

CH₂Cl₂ 중 1 M 염화붕소(III) (25.5 mL, 25.5 mmol)와 염화알루미늄(III) (3.40 g, 25.5 mmol)의 혼합물을 CH₂Cl₂ (20 mL)로 희석시키고, N₂-분위기 하에 빙조에서 냉각시켰다. CH₂Cl₂ (7.5 mL) 중 클로로아세토니트릴 (3.24 mL, 51.0 mmol) 및 2-메틸-4-(트리플루오로메톡시)아닐린 [CAS 86256-59-9] (4.88 g, 25.5 mmol)의 용액을 적가하였다. 첨가 후, 빙조를 제거하고, 혼합물을 환류 하에 8시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 빙조를 이용하여 다시 0℃까지 냉각시켰다. 2 N HCl (75 mL)을 적가하여 많은 침전을 야기하였다. 생성된 현탁물을 환류 하에 90분 동안 가열하고, 실온까지 냉각시켰다. 고형물을 여과에 의해 제거하였다. 필터 케이크를 CH₂Cl₂ (4x)로 세척하였다. 여과액을 합하고, 상들을 분리하였다. 유기 층을 단리하고, NaHCO₃ 수용액으로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 바이오테이지^® 스냅 울트라 실리카 100 g, 이동상: 헵탄/CH₂Cl₂ 구배: 100/0에서 0/100까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 30 mL의 잔존 부피까지 농축시켰다. 침전물을 여과 제거하고, 헵탄 및 CH₂Cl₂로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 1-(2-아미노-3-메틸-5-(트리플루오로메톡시)페닐)-2-클로로에타논 8a (1.37 g)를 제공하였다. 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 고체 잔사를 헵탄 (20 mL)과 디이소프로필 에테르 (3 mL)의 혼합물에서 교반시키고, 여과 제거하고, 헵탄 (3x)으로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 8a의 제2 분획 (0.24 g)을 제공하였다.

중간체 8b의 합성:

수소화붕소나트륨 (326 mg, 8.61 mmol)을 tert-부탄올 (50 mL) 및 물 (5 mL) 중 1-(2-아미노-3-메틸-5-(트리플루오로메톡시)페닐)-2-클로로에타논 8a (1.92 g, 7.17 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 및 90℃에서 2.5시간 동안 교반시켰다. 물 (50 mL)을 첨가하고, 생성물을 디에틸 에테르 (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 바이오테이지^® 스냅 울트라 실리카 25 g, 이동상: 헵탄/EtOAc 구배: 100/0에서 20/80까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 농축시키고, 헵탄과 함께 공동 증발시키고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 8b (1.2 g)를 제공하였다.

중간체 8c의 합성:

CH₂Cl₂ (75 mL) 중 7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 8b (1.2 g, 5.58 mmol)의 용액을 N₂-분위기 하에 0℃까지 냉각시켰다. 헥산 중 1 M 디에틸알루미늄 클로라이드 (8.36 mL, 8.36 mmol)의 용액을 상기 교반 용액에 1분에 걸쳐 적가하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 10분 동안 유지하였다. 상기 반응 혼합물의 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지하면서 CH₂Cl₂ (25 mL) 중 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 1a' (1.69 g, 8.36 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 및 10℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 다시 0℃까지 냉각시키고, 반응물을 물 (3.5 mL) 중 포타슘 소듐 타르트레이트 4수화물 (로셸 염) [CAS 6100-16-9] (3.15 g, 11.2 mmol)의 용액의 느린 첨가에 의해 켄칭하였다. 0℃에서 추가 10분 동안 교반시킨 후, 빙조를 제거하고, 생성된 혼합물을 THF (75 mL)로 희석시켰다. Na₂SO₄ (10 g)를 첨가하고, 하룻밤 교반 후 혼합물을 디칼라이트^®에서 여과시켰다. 필터 케이크를 THF로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 증발시켰다. 고체 잔사를 소량의 CH₃CN에서 교반시키고, 여과 제거하고, CH₃CN (2x)으로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 8c (1.82 g)를 제공하였다.

중간체 8d의 합성:

THF (40 mL) 중 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 8c (1.82 g, 4.77 mmol)의 교반 용액을 N₂-분위기 하에 0℃까지 냉각시켰다. 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (1.88 g, 5.01 mmol)를 첨가하였다. 생성된 현탁물을 0℃에서 2시간 동안 및 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 고형물을 여과에 의해 제거하고, THF (3x)로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 증발시켜 2-브로모-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 8d (2.20 g)를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

화합물 8의 합성 및 거울상 이성질체 8A 및 8B의 키랄 분리:

THF (40 mL) 및 CH₃CN (60 mL) 중 2-브로모-2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 8d (2.20 g, 4.77 mmol), 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (1.75 g, 9.55 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (1.65 mL, 9.55 mmol)의 혼합물을 실온에서 5일 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 120 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 분취용 HPLC (고정상: 업티스피어^® C18 ODB - 10 ㎛, 200 g, 5 cm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)를 통하여 추가로 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 300 mL의 잔존 부피까지 증발시켰다. 상기 증발 동안 형성된 침전물을 여과 제거하고, H₂O (5x)로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 2-(4-플루오로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 8, 1.28 g)을 라세미 혼합물로서 제공하였다.

화합물 8의 거울상 이성질체들 (1.2 g)의 키랄 분리를 순상 키랄 분리 (고정상: AS 20 ㎛, 이동상: 100% 메탄올)를 통하여 수행하였다. 생성물 분획을 합하고, 증발시켜 거울상 이성질체 8A를 첫 번째로 용출되는 생성물로서, 그리고 거울상 이성질체 8B를 두 번째로 용출되는 생성물로서 제공하였다. 거울상 이성질체 8A (0.54 g)를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 12 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 추가로 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 H₂O (2.5 mL) 및 MeOH (0.75 mL)에서 교반시켰다. 15분 동안 교반시킨 후, 생성물을 여과 제거하고, 3/1의 H₂O/MeOH 혼합물로 세척하고 (3x), 진공 하에 50℃에서 건조시켜 거울상 이성질체 8A (425 mg)를 제공하였다. 거울상 이성질체 8B (0.45 g)를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 12 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 추가로 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 H₂O (2.5 mL) 및 MeOH (0.75 mL)에서 교반시켰다. 15분 동안 교반시킨 후, 생성물을 여과 제거하고, 3/1의 H₂O/MeOH 혼합물로 세척하고 (3x), 진공 하에 50℃에서 건조시켜 거울상 이성질체 8B (275 mg)를 제공하였다.

화합물 8:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.50 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.83 (qt, J=10.1, 5.1 Hz, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.76 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.35 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.04 (br s, 1 H) 7.37 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 7.90 (br s, 1 H) 8.51 (d, J=2.9 Hz, 1 H) 12.33 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 2.13분, MH⁺ 563

거울상 이성질체 8A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.50 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.2 Hz, 2 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.78 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.04 (br s, 1 H) 7.37 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 7.90 (br s, 1 H) 8.51 (d, J=3.3 Hz, 1 H) 12.35 (d, J=2.6 Hz, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.16분, MH⁺ 563

[α]_D ²⁰: +77.8° (c 0.445, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 2.82분, MH⁺ 563, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 8B:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.50 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.83 (qt, J=10.2, 5.1 Hz, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.76 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.35 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.93 (dd, J=11.4, 2.4 Hz, 1 H) 7.04 (br s, 1 H) 7.37 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 7.90 (br s, 1 H) 8.51 (d, J=3.1 Hz, 1 H) 12.33 (br d, J=2.2 Hz, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.16분, MH⁺ 563

[α]_D ²⁰: -77.9° (c 0.465, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 3.19분, MH⁺ 563, 키랄 순도 100%.

실시예 9 : 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 9)의 합성 및 거울상 이성질체 9A 및 9B로의 키랄 분리.

중간체 9a'의 합성:

2-(4-클로로-2-메톡시페닐)아세트산 [CAS 170737-95-8] (5.8 g, 28.9 mmol)을 티오닐 클로라이드 (50 mL)에 조금씩 첨가하고, 생성된 용액을 60℃에서 하룻밤 교반시켰다. 용매를 감압 하에 농축시키고, 톨루엔과 함께 공동 증발시켜 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 9a' (6.5 g)를 유성 잔사로서 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 9a의 합성:

염화티타늄(IV) (2.32 mL, 21.2 mmol)을 실온에서 1,2-디클로로에탄 (120 mL) 중 1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 1a (3.7 g, 10.95 mmol) 및 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 9a' (4.8 g, 21.9 mmol)의 용액에 적가하였다. 상기 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 얼음물을 첨가하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (15 내지 40 ㎛, 80 g, CH₂Cl₂/MeOH (99.5/0.5))에 의해 정제하였다. 화합물 9a를 함유하는 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 상기 화합물을 CH₃CN/디이소프로필 에테르로 녹였다. 침전물을 여과 제거하고, 건조시켜 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 9a (2.8 g)를 제공하였다.

중간체 9b의 합성:

수산화리튬 (0.64 g, 15.3 mmol)을 THF (18 mL) 및 물 (6 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 9a (3.2 g, 6.13 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 물 및 EtOAc를 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 고형물을 디이소프로필 에테르로 녹였다. 침전물을 여과 제거하고, 건조시켜 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 9b (2.1 g)를 제공하였다.

중간체 9c의 합성:

0℃에서, THF (60 mL) 중 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (2.1 g, 5.7 mmol)의 용액을 THF (50 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 9b (2.15 g, 5.7 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 및 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, EtOAc로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc에 용해시켰다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 DIPE로 녹였다. 침전물을 여과 제거하고, 건조시켜 2-브로모-2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 9c (2.5 g)를 제공하였다.

화합물 9의 합성 및 거울상 이성질체 9A 및 9B로의 키랄 분리:

CH₃CN (100 mL) 중 2-브로모-2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 9c (1.5 g, 3.36 mmol), 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (0.61 g, 3.36 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (0.87 mL, 5.04 mmol)의 혼합물을 70℃에서 24시간 동안 교반시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂ 및 1 N HCl로 희석시켰다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (15 내지 40 ㎛, 80 g, CH₂Cl₂/MeOH (99/1))에 의해 정제하였다. 화합물 9를 함유하는 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사 (680 mg)를 디이소프로필 에테르/CH₃CN으로부터 고체화하여 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 9, 610 mg)을 라세미 혼합물로서 제공하였다. 거울상 이성질체들을 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄셀^® OD-H 5 ㎛ 250 x 20 mm, 이동상: 70% CO₂, 30% EtOH)를 통하여 분리하여, 석유 에테르/디이소프로필 에테르에서의 고체화 후, 255 mg의 첫 번째로 용출되는 거울상 이성질체 9A 및 237 mg의 두 번째로 용출되는 거울상 이성질체 9B를 제공하였다.

화합물 9:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.3 Hz, 2 H) 3.78 - 3.88 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.78 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.73 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.19 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.42 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.37 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.53 (dd, J=8.7, 1.7 Hz, 1 H) 7.69 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 8.48 (s, 1 H) 8.60 (s, 1 H) 12.42 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 3.10분, MH⁺ 549

거울상 이성질체 9A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.58 - 3.68 (m, 5 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.73 (s, 1 H) 5.94 (d, J=1.5 Hz, 2 H) 6.19 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.41 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.53 (dd, J=8.3, 1.3 Hz, 1 H) 7.68 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 8.48 (s, 1 H) 8.59 (s, 1 H) 12.40 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 3.15분, MH⁺ 549

[α]_D ²⁰: -102.7° (c 0.2727, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-A): R_t 2.35분, MH⁺ 549, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 9B:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.59 - 3.68 (m, 5 H) 3.78 - 3.89 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.3 Hz, 1 H) 5.73 (s, 1 H) 5.94 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.19 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.41 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.53 (dd, J=8.6, 1.0 Hz, 1 H) 7.68 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 8.48 (s, 1 H) 8.59 (s, 1 H) 12.33 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 3.15분, MH⁺ 549

[α]_D ²⁰: +124.7° (c 0.2727, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-A): R_t 3.88분, MH⁺ 549, 키랄 순도 100%.

실시예 10 : 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 10).

중간체 10a의 합성:

N₂-유동 하에, 헥산 중 1 M 디에틸알루미늄 클로라이드 (19.17 mL, 19.17 mmol)를 -70℃에서 CH₂Cl₂ (30 mL) 중 6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 2c (2.75 g, 12.8 mmol)의 용액에 적가하였다. -70℃에서의 5분의 교반 후, CH₂Cl₂ (30 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 9a' (4.2 g, 19.17 mmol)를 적가하였다. 상기 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 얼음물을 첨가하였다. 상기 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂로부터 결정화하고, 침전물을 여과 제거하였다. 조 생성물을 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 ㎛, 120 g, 헵탄/EtOAc (50/50))에 의해 정제하였다. 순수 분획을 합하고, 건조 상태까지 증발시켜, 디이소프로필 에테르/CH₃CN으로부터의 고체화 후, 250 mg의 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 10a를 생성하였다.

화합물 10의 합성:

0℃에서, THF (5 mL) 중 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (236 mg, 0.628 mmol)의 용액을 THF (5 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 10a (250 mg, 0.628 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 및 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. CH₃CN (5 mL) 중 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (345 mg, 1.88 mmol)의 용액을 적가하고, 교반을 실온에서 24시간 동안 계속하였다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc로 녹이고, 1 N HCl 및 물로 세척하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 정제를 실리카 겔에서 플래시 크로마토그래피 (15 내지 40 ㎛, 24 g, CH₂Cl₂/CH₃OH (99.5/0.5))에 의해 행하였다. 순수 분획을 합하고, 건조 상태까지 증발시켜, CH₂Cl₂/MeOH에서의 결정화 후, 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 10)을 라세미체로서 제공하였다.

화합물 10:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.58 - 3.69 (m, 5 H) 3.76 - 3.91 (m, 5 H) 3.96 (s, 3 H) 4.80 (br t, J=5.4 Hz, 1 H) 5.73 (s, 1 H) 5.93 (s, 2 H) 6.16 (br d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.41 (br d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.98 (br d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.11 (s, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.37 (s, 1 H) 8.45 (s, 1 H) 12.16 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 3.11분, MH⁺ 579

융점: 133℃

실시예 11 : 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)에타논 (화합물 11)의 합성 및 거울상 이성질체 11A 및 11B로의 키랄 분리.

중간체 11a의 합성:

염화티타늄(IV) (1.23 mL, 11.2 mmol)을 실온에서 디클로로메탄 (50 mL) 중 6-플루오로-1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 3a (2 g, 5.6 mmol) 및 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 9a' (2.45 g, 11.2 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 반응물을 실온에서 2.5시간 동안 교반시켰다. 반응물을 쇄빙 (40 g)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 20분 동안 교반시킨 후, 층들을 분리하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 디이소프로필 에테르 (25 mL)에서 교반시켰다. 고형물을 여과 제거하고, 디이소프로필 에테르 (3x)로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 11a (1.82 g)를 제공하였다.

중간체 11b의 합성:

수산화칼륨 (0.66 g, 11.7 mmol)을 디옥산 (30 mL) 및 물 (10 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 11a (1.81 g, 3.35 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 3.5시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉수 (100 mL)와 1 N HCl (15 mL)의 교반 혼합물에 서서히 부었다. 30분 동안 교반시킨 후, 고형물을 여과 제거하고, 물 (3x)로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 11b (1.14 g)를 제공하였다.

중간체 11c의 합성:

THF (40 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 11b (1.14 g, 2.95 mmol)의 용액을 N₂ 분위기 하에 0℃까지 냉각시켰다. 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (1.16 g, 3.1 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 및 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, THF (2x)로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 농축시켜 2-브로모-2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 11c (1.37 g)를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

화합물 11의 합성 및 거울상 이성질체 11A 및 11B로의 키랄 분리:

CH₃CN (60 mL) 중 2-브로모-2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 11c (1.37 g, 2.95 mmol), 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (1.08 g, 5.9 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (1.02 mL, 5.9 mmol)의 혼합물을 실온에서 85시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (250 mL)에 붓고, 생성물을 Et₂O (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 12 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 정제하였다. 화합물 11을 함유하는 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 분취용 HPLC (고정상: RP 엑스브리지^® C18 OBD - 10 ㎛, 50 x 150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)를 통하여 추가로 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 진공 하에 45℃에서 건조시켜 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)에타논 (화합물 11, 151 mg)을 라세미 혼합물로서 제공하였다.

화합물 11 (151 mg)의 키랄 분리를 분취용 SFC (고정상: 키랄셀^® 디아셀 OD 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, EtOH + 0.4% iPrNH₂)에 의해 수행하여 거울상 이성질체 11A를 첫 번째로 용출되는 생성물로서, 그리고 거울상 이성질체 11B를 두 번째로 용출되는 생성물로서 제공하였다. 상기 둘 다의 거울상 이성질체를 MeOH와 물의 용매 혼합물로부터의 침전에 의해 고체화하였다. 고형물을 여과 제거하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 22 mg의 거울상 이성질체 11A 및 16 mg의 거울상 이성질체 11B를 제공하였다.

거울상 이성질체 11A:

¹H NMR (360 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.76 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=1.8 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=1.8 Hz, 2 H) 6.18 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.43 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.98 (dd, J=8.2, 2.0 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=11.7 Hz, 1 H) 8.45 (d, J=7.0 Hz, 1 H) 8.58 (s, 1 H) 12.35 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.19분, MH⁺ 567

[α]_D ²⁰: +87.4° (c 0.2735, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 3.12분, MH⁺ 567, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 11B:

¹H NMR (360 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.73 - 3.88 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.73 (br t, J=2.2 Hz, 1 H) 5.93 (br d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.18 (br d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.44 (br d, J=8.4 Hz, 1 H) 6.98 (br dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1 H) 7.10 (br d, J=1.1 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.59 (br d, J=11.0 Hz, 1 H) 8.45 (br d, J=7.3 Hz, 1 H) 8.59 (s, 1 H) 12.47 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.19분, MH⁺ 567

[α]_D ²⁰: -86.6° (c 0.276, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 3.43분, MH⁺ 567, 키랄 순도 99.7%.

실시예 12 : 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 12)의 합성 및 거울상 이성질체 12A 및 12B로의 키랄 분리.

중간체 12a의 합성:

염화티타늄(IV) (2.15 mL, 19.6 mmol)을 실온에서 디클로로메탄 (50 mL) 중 7-메틸-1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌 4d (3.47 g, 9.81 mmol) 및 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 9a' (4.30 g, 19.6 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응물을 쇄빙 (40 g)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 45분 동안 교반시킨 후, 층들을 분리하였다. 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 120 g, 이동상: 헵탄/CH₂Cl₂ 구배: 100/0에서 0/100까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 진공 하에 50℃에서 건조시켜 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 12a (2.46 g)를 제공하였다.

중간체 12b의 합성:

수산화칼륨 (0.90 g, 16.0 mmol)을 디옥산 (18 mL) 및 물 (6 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-1-토실-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 12a (2.46 g, 4.60 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 얼음물 (50 mL)과 1 N HCl (11 mL)의 교반 혼합물에 서서히 부었다. 5분 동안 교반시킨 후, 생성물을 2-MeTHF (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과 제거하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 바이오테이지^® 스냅 울트라 실리카 25 g, 이동상: 헵탄/CH₂Cl₂ 구배: 100/0에서 0/100까지)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에 농축시키고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 12b (0.791 mg)를 제공하였다.

중간체 12c의 합성:

THF (20 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 12b (0.539 g, 1.4 mmol)의 용액을 N₂ 분위기 하에 0℃까지 냉각시켰다. 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (0.55 g, 1.47 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 40분 동안 및 실온에서 90분 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, THF (2x)로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 농축시켜 2-브로모-2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 12c (650 mg)를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다.

화합물 12의 합성 및 거울상 이성질체 12A 및 12B로의 키랄 분리:

CH₃CN (30 mL) 중 2-브로모-2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 12c (0.791 g, 1.58 mmol), 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (0.579 g, 3.16 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (544 μL, 3.16 mmol)의 혼합물을 실온에서 9시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (125 mL)에 붓고, 생성물을 Et₂O (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 바이오테이지^® 스냅 울트라 실리카 25 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 정제하였다. 화합물 12를 함유하는 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 증발시켜 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 12, 604 mg)을 라세미 혼합물로서 제공하였다.

화합물 12의 거울상 이성질체들 (604 mg)을 분취용 SFC (고정상: 키랄셀^® 디아셀 OD 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, EtOH + 0.4% iPrNH₂)를 통하여 분리하여 거울상 이성질체 12A를 첫 번째로 용출되는 생성물로서, 그리고 거울상 이성질체 12B를 두 번째로 용출되는 생성물로서 제공하였다. 상기 둘 다의 거울상 이성질체를 MeOH와 물의 용매 혼합물로부터의 침전에 의해 고체화하였다. 고형물을 여과 제거하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 199 mg의 거울상 이성질체 12A 및 185 mg의 거울상 이성질체 12B를 제공하였다.

거울상 이성질체 12A:

¹H NMR (360 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.53 - 2.57 (m, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.76 - 3.90 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.2 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=1.8 Hz, 2 H) 6.21 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.42 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.2, 2.0 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=2.2 Hz, 1 H) 7.33 - 7.38 (m, 2 H) 8.31 (br s, 1 H) 8.58 (s, 1 H) 12.50 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.21분, MH⁺ 563

[α]_D ²⁰: +58.5° (c 0.4135, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 3.19분, MH⁺ 563, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 12B:

¹H NMR (360 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.55 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.2 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.21 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.41 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.2, 2.0 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.33 - 7.38 (m, 2 H) 8.31 (br s, 1 H) 8.58 (s, 1 H) 12.48 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.21분, MH⁺ 563

[α]_D ²⁰: -55.7° (c 0.469, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 3.49분, MH⁺ 563, 키랄 순도 100%.

실시예 13 : 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 13)의 합성 및 거울상 이성질체 13A 및 13B로의 키랄 분리.

중간체 13a의 합성:

CH₂Cl₂ (150 mL) 중 5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 [CAS 262593-63-5] (3 g, 14.9 mmol)의 용액을 N₂-분위기 하에 0℃까지 냉각시켰다. 헥산 중 1 M 디에틸알루미늄 클로라이드의 용액 (22.4 mL, 22.4 mmol)을 적가하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 15분 동안 유지하였다. CH₂Cl₂ (100 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 9a' (4.57 g, 20.9 mmol)의 용액을 적가하였다. 교반을 0℃에서 1시간 동안 계속하고, 반응 혼합물을 후속적으로 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 교반 얼음/로셸 염 용액에 부었다. 얼음이 녹은 후, 상기 혼합물을 디칼라이트^®에서 여과시키고, 필터 케이크를 THF로 수 회 세척하였다. 여과액을 합하였다. 층들을 분리하고, 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂ (50 mL)로 미분화하고, 생성된 침전물을 여과 제거하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 13a (4.39 g)를 제공하였다.

중간체 13b의 합성:

THF (200 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 13a (4.39 g, 11.4 mmol)의 교반 용액을 0℃까지 냉각시켰다. THF (100 mL) 중 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (4.73 g, 12.6 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성된 현탁물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 고형물을 여과에 의해 제거하고, THF로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 EtOAc (30 mL)와 혼합하였다. 고형물을 여과에 의해 단리하고, 소량의 EtOAc로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 2-브로모-2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 13b (5.0 g)를 백색 고형물로서 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

화합물 13의 합성 및 거울상 이성질체 13A 및 13B의 키랄 분리:

CH₃CN (550 mL) 중 2-브로모-2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 13b (2.3 g, 4.97 mmol), 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (1.37 g, 7.46 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (857 μL, 4.97 mmol)의 혼합물을 90℃에서 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂ (100 mL)에 용해시키고, 1 N HCl (100 mL) 및 물 (100 mL)로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 120 g, 이동상: EtOAc:EtOH(3:1)/헵탄 구배: 0/100에서 50/50까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 분취용 HPLC (고정상: 업티스피어^® C18 ODB - 10 ㎛, 200 g, 5 cm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)를 통하여 추가로 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켜 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 13, 1.46 g)을 라세미 혼합물로서 제공하였다.

화합물 13의 거울상 이성질체들 (1.46 g)의 키랄 분리를 순상 키랄 분리 (고정상: AS 20 ㎛, 이동상: 100% 메탄올)를 통하여 수행하였다. 생성물 분획을 합하고, 증발시켜 거울상 이성질체 13A를 첫 번째로 용출되는 생성물로서, 그리고 거울상 이성질체 13B를 두 번째로 용출되는 생성물로서 제공하였다.

거울상 이성질체 13A (0.43 g)를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 12 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시키고, MeOH와 함께, 그리고 그 후 3/1의 MeOH/H₂O와 함께 공동 증발시켰다. 잔사를 45℃에서 H₂O (4 mL)에서 교반시키고, MeOH (125 μL)를 적가하고, 5분 동안 교반시킨 후, 고형물을 여과 제거하고, H₂O/MeOH (4/1)의 혼합물로 세척하고 (4x), 진공 하에 45℃에서 건조시켜 거울상 이성질체 13A (389 mg)를 제공하였다.

거울상 이성질체 13B (0.45 g)를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 12 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시키고, MeOH와 함께, 그리고 그 후 MeOH/H₂O (1/4)와 함께 공동 증발시켰다. 잔사를 45℃에서 H₂O (4 mL)에서 교반시켰다. MeOH (125 μL)를 적가하고, 5분 동안 교반시킨 후, 고형물을 여과 제거하고, 4/1의 H₂O/MeOH 혼합물로 세척하고 (4x), 진공 하에 45℃에서 건조시켜 거울상 이성질체 13B (423 mg)를 제공하였다.

화합물 13:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.65 (t, J=5.1 Hz, 2 H) 3.75 - 3.90 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.77 (br s, 1 H) 5.73 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.41 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.8, 2.2 Hz, 1 H) 7.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.59 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.06 (br s, 1 H) 8.54 (s, 1 H) 12.26 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 2.14분, MH⁺ 565

거울상 이성질체 13A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.3 Hz, 2 H) 3.75 - 3.89 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.16 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.7, 2.1 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=9.0 Hz, 1 H) 8.05 (br s, 1 H) 8.54 (s, 1 H) 12.27 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.17분, MH⁺ 565

[α]_D ²⁰: +108.5° (c 0.52, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 3.11분, MH⁺ 565, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 13B:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.2 Hz, 2 H) 3.76 - 3.90 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.73 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.41 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.98 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=2.2 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.8, 1.8 Hz, 1 H) 7.37 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.59 (d, J=9.0 Hz, 1 H) 8.06 (br s, 1 H) 8.54 (s, 1 H) 12.28 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.17분, MH⁺ 565

[α]_D ²⁰: -107.4° (c 0.485, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 3.50분, MH⁺ 565, 키랄 순도 100%.

실시예 14 : 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 14) 및 거울상 이성질체 14A 및 14B로의 키랄 분리.

중간체 14a의 합성:

N_2-유동 하에, 헥산 중 1 M 디에틸알루미늄 클로라이드(9.73 mL, 9.73 mmol)를 0℃에서 CH₂Cl₂ (35 mL) 중 6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 6d (1.5 g, 6.49 mmol)의 용액에 적가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반시킨 후, CH₂Cl₂ (15 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 9a' (2.1 g, 9.73 mmol)를 적가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 얼음물을 첨가하였다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 14a (1.9 g)를 제공하였다.

중간체 14b의 합성:

0℃에서, THF (60 mL) 중 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (1.9 g, 4.59 mmol)의 용액을 THF (60 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 14a (1.73 g, 4.59 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 및 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과 제거하고, EtOAc로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc에 용해시켰다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 디이소프로필 에테르로 녹였다. 침전물을 여과 제거하고, 건조시켜 2-브로모-2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 14b (2.1 g)를 제공하였다.

화합물 14의 합성 및 거울상 이성질체 14A 및 14B로의 키랄 분리:

CH₃CN (100 mL) 중 2-브로모-2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 14b (2.1 g, 4.26 mmol), 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (0.937 g, 5.11 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (1.1 mL, 6.4 mmol)의 혼합물을 70℃에서 24시간 동안 교반시키고, 그 후 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 CH₂Cl₂로 희석시키고, 1 N HCl로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 컬럼 크로마토그래피 (15 내지 40 ㎛, 80 g, CH₂Cl₂/MeOH (99/1))에 의해 정제하였다. 화합물 14를 함유하는 분획을 합하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 생성물 (1.9 g)을 비키랄 SFC (고정상: 2-에틸피리딘 5 ㎛ 150 x 30 mm, 이동상: 70% CO₂, 30% MeOH +0.3% iPrNH₂)를 통하여 추가로 정제하여, 디이소프로필 에테르/석유 에테르에서의 고체화 후, 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(6-메톡시-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 14, 1.18 g)을 라세미 혼합물로서 제공하였다. 화합물 14의 거울상 이성질체들을 분취용 키랄 SFC (고정상: 키랄팩^® IC 5 ㎛ 250 x 20 mm, 이동상: 70% CO₂, 30% iPrOH + 0.3% iPrNH₂)를 통하여 분리하여, 헵탄/디이소프로필 에테르/에테르에서의 고체화 후, 420 mg의 첫 번째로 용출되는 거울상 이성질체 14A 및 408 mg의 두 번째로 용출되는 거울상 이성질체 14B를 제공하였다.

화합물 14:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.59 - 3.68 (m, 5 H) 3.77 - 3.89 (m, 5 H) 3.95 (s, 3 H) 4.75 (br t, J=5.1 Hz, 1 H) 5.72 (br s, 1 H) 5.92 (d, J=1.5 Hz, 2 H) 6.13 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.36 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 8.01 (s, 1 H) 8.39 (s, 1 H) 11.99 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 3.14분, MH⁺ 595

거울상 이성질체 14A:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.56 - 3.68 (m, 5 H) 3.76 - 3.90 (m, 5 H) 3.96 (s, 3 H) 4.78 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.02 (d, J=1.3 Hz, 1 H) 8.40 (s, 1 H) 12.05 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 3.13분, MH⁺ 595

[α]_D ²⁰: +81.7° (c 0.235, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-C): R_t 1.58분, MH⁺ 595, 키랄 순도 100%.

거울상 이성질체 14B:

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.58 - 3.69 (m, 5 H) 3.77 - 3.91 (m, 5 H) 3.96 (s, 3 H) 4.78 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.21 (s, 1 H) 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.02 (d, J=1.3 Hz, 1 H) 8.40 (s, 1 H) 12.04 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-C): R_t 3.13분, MH⁺ 595

[α]_D ²⁰: -82.5° (c 0.2267, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-C): R_t 2.23분, MH⁺ 595, 키랄 순도 99.29%.

실시예 15 : 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)에타논 (화합물 15)의 합성 및 거울상 이성질체 15A 및 15B로의 키랄 분리.

중간체 15a의 합성:

CH₂Cl₂ (150 mL) 중 6-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 7c (2.92 g, 13.3 mmol)의 기계적 교반 용액을 N₂-분위기 하에 0℃까지 냉각시켰다. 헥산 중 1 M 디에틸알루미늄 클로라이드의 용액 (20.0 mL, 20.0 mmol)을 적가하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 5분 동안 유지하였다. 반응 온도를 5℃ 미만으로 유지하면서 CH₂Cl₂ (75 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 9a' (4.37 g, 19.9 mmol)의 용액을 적가하였다. 교반을 0℃에서 1시간 동안 계속하고, 후속적으로 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 물 (8 mL) 중 로셸 염 [CAS 6100-16-9] (7.53 g, 26.7 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반시키고, 그 후 실온에 도달하게 하였다. THF (200 mL) 및 Na₂SO₄ (25 g)를 첨가하였다. 하룻밤 교반시킨 후, 반응 혼합물을 디칼라이트^®에서 여과시키고, 필터 케이크를 THF (4x 100 mL)로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 바이오테이지^® 스냅 울트라 실리카 100 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켜 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 15a (2.7 g)를 제공하였다.

중간체 15b의 합성:

THF (20 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 15a (1.37 g, 3.24 mmol)의 교반 용액을 N₂-분위기 하에 0℃까지 냉각시켰다. 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (1.28 g, 3.4 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 40분 동안, 그리고 후속적으로 실온에서 1.5시간 동안 교반시켰다. 고형물을 여과에 의해 제거하고, THF (2x)로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 증발시켜 2-브로모-2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 15b (1.77 g)를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

화합물 15의 합성 및 거울상 이성질체 15A 및 15B의 키랄 분리:

CH₃CN (30 mL) 중 2-브로모-2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 15b (1.77 g, 3.43 mmol), 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (1.26 g, 6.86 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (1.18 mL, 6.86 mmol)의 혼합물을 실온에서 17시간 동안 교반시켰다. 물 (125 mL)을 첨가하고, 생성물을 Et₂O (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 바이오테이지^® 스냅 울트라 실리카 25 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 분취용 HPLC (고정상: RP 엑스브리지^® 프렙 C18 OBD - 10 ㎛, 30 x 150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)를 통하여 추가로 정제하였다. 생성물 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켜 라세미 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(6-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)에타논 (화합물 15, 589 mg)을 제공하였다.

화합물 15의 거울상 이성질체들 (589 mg)의 키랄 분리를 분취용 SFC (고정상: 키랄셀^® 디아셀 OD 20 x 250 mm, 이동상: CO₂, EtOH + 0.4% iPrNH₂)를 통하여 수행하여 거울상 이성질체 15A를 첫 번째로 용출되는 거울상 이성질체로서, 그리고 거울상 이성질체 15B를 두 번째로 용출되는 거울상 이성질체로서 제공하였다. 상기 둘 다의 거울상 이성질체를 MeOH와 물의 용매 혼합물로부터의 침전에 의해 고체화하였다. 고형물을 여과 제거하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 거울상 이성질체 15A (101 mg) 및 거울상 이성질체 15B (73 mg)를 제공하였다.

거울상 이성질체 15A:

¹H NMR (360 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.75 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.16 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.44 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.98 (dd, J=8.2, 2.0 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.61 (d, J=10.6 Hz, 1 H) 8.16 (dd, J=7.7, 1.1 Hz, 1 H) 8.55 (s, 1 H) 12.33 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.20분, MH⁺ 583

[α]_D ²⁰: -69.9° (c 0.261, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 3.30분, MH⁺ 583, 키랄 순도 98.7%.

융점: 106℃

거울상 이성질체 15B:

¹H NMR (360 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.74 - 3.89 (m, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=1.8 Hz, 2 H) 6.16 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 6.44 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.98 (dd, J=8.4, 1.8 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.60 (d, J=10.6 Hz, 1 H) 8.16 (dd, J=7.5, 0.9 Hz, 1 H) 8.54 (s, 1 H) 12.33 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.20분, MH⁺ 583

[α]_D ²⁰: +91.8° (c 0.282, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 2.93분, MH⁺ 583, 키랄 순도 100%.

융점: 107℃

실시예 16 : 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 16)의 합성 및 거울상 이성질체 16A 및 16B로의 키랄 분리.

중간체 16a의 합성:

CH₂Cl₂ (100 mL) 중 7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌 8b (1.5 g, 6.97 mmol)의 기계적 교반 용액을 N₂-분위기 하에 0℃까지 냉각시켰다. 헥산 중 1 M 디에틸알루미늄 클로라이드의 용액 (10.5 mL, 10.5 mmol)을 적가하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 25분 동안 유지하였다. 반응 온도를 6℃ 미만으로 유지하면서 CH₂Cl₂ (40 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)아세틸 클로라이드 9a' (2.29 g, 10.5 mmol)의 용액을 적가하였다. 교반을 0℃에서 1시간 동안 계속하고, 후속적으로 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 물 (4 mL) 중 로셸 염 [CAS 6100-16-9] (3.94 g, 13.9 mmol)의 용액을 적가하였다. 첨가 후, 상기 혼합물을 0℃에서 20분 동안 및 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. THF (125 mL) 및 Na₂SO₄ (15 g)를 첨가하였다. 1시간 동안 교반시킨 후, 반응 혼합물을 디칼라이트^®에서 여과시키고, 필터 케이크를 THF (5x 100 mL)로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 증발시켰다. 잔사는 하룻밤 정치시에 고체화되었다. 고형물을 CH₃CN (5 mL)에서 교반시키고, 여과 제거하고, CH₃CN (3x 1.5 mL)으로 세척하고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 16a (1.9 g)를 제공하였다.

중간체 16b의 합성:

THF (100 mL) 중 2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 16a (1.90 g, 4.78 mmol)의 교반 용액을 N₂-분위기 하에 0℃까지 냉각시켰다. 페닐트리메틸암모늄 트리브로마이드 [CAS 4207-56-1] (1.89 g, 5.02 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1.5시간 동안, 그리고 후속적으로 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 고형물을 여과에 의해 제거하고, THF (2x)로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 증발시켜 2-브로모-2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 16b (2.28 g)를 제공하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

화합물 16의 합성 및 거울상 이성질체 16A 및 16B의 키랄 분리:

CH₃CN (100 mL) 중 2-브로모-2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 16b (2.28 g, 4.78 mmol), 2-(3-아미노-5-메톡시페녹시)에탄올 [CAS 725237-16-1] (1.75 g, 9.55 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (1.65 mL, 9.55 mmol)의 혼합물을 실온에서 20시간 동안, 그리고 후속적으로 55℃에서 8시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 교반 물 (500 mL)에 부었다. 생성물을 Et₂O (2x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (고정상: 그레이스 레벨레리스^® 실리카 80 g, 이동상: 헵탄/EtOAc/EtOH 구배: 100/0/0에서 40/45/15까지)에 의해 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켜

2-(4-클로로-2-메톡시페닐)-2-((3-(2-히드록시에톡시)-5-메톡시페닐)아미노)-1-(7-메틸-5-(트리플루오로메톡시)-1H-인돌-3-일)에타논 (화합물 16, 2.1 g)을 라세미 혼합물로서 제공하였다. 적은 분획의 화합물 16 (100 mg)을 분취용 HPLC (고정상: RP 엑스브리지^® 프렙 C18 OBD - 10 ㎛, 30 x 150 mm, 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃ 용액, CH₃CN)를 통하여 추가로 정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시키고, CH₃CN과 MeOH의 혼합물로부터 공동 증발시켰다. 잔사를 CH₃CN (1.5 mL) 및 물 (1 mL) 중 용액으로부터의 동결건조에 의해 고체화하여 라세미 화합물 16 (51 mg)의 분석용 샘플을 제공하였다.

화합물 16의 거울상 이성질체들 (2.00 g)의 키랄 분리를 순상 키랄 분리 (고정상: AS 20 ㎛, 이동상: 100% 메탄올)를 통하여 수행하여 거울상 이성질체 16A를 첫 번째로 용출되는 거울상 이성질체로서, 그리고 거울상 이성질체 16B를 두 번째로 용출되는 거울상 이성질체로서 제공하였다. 상기 둘 다의 거울상 이성질체를 역상 HPLC (고정상: 크로마실(Kromasil)^® C18 100A 5 ㎛ (에카 노벨(Eka Nobel)), 이동상: 물 중 0.25% NH₄HCO₃/CH₃CN 구배: 50/50에서 0/100까지)에 의해 재정제하였다. 요망되는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켰다. 거울상 이성질체 16A를 MeOH (7 mL)와 H₂O (1.8 mL)의 혼합물로부터 침전시켰다. 고형물을 여과 제거하고, MeOH/물 (1/1)의 혼합물 (3x 1 mL)로 세척하고, 진공 하에 45℃에서 건조시켜 거울상 이성질체 16A (517 mg)를 제공하였다. 거울상 이성질체 16B를 MeOH (7 mL)와 H₂O (3 mL)의 혼합물로부터 침전시켰다. 고형물을 여과 제거하고, MeOH/물 (1/1)의 혼합물 (3x 1 mL)로 세척하고, 진공 하에 45℃에서 건조시켜 거울상 이성질체 16B (441 mg)를 제공하였다.

화합물 16:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.50 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.76 - 3.90 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.78 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.18 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1 H) 7.02 - 7.06 (m, 1 H) 7.10 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.89 (br s, 1 H) 8.52 (s, 1 H) 12.36 (br s, 1 H)

LC/MS (방법 LC-B): R_t 2.20분, MH⁺ 579

거울상 이성질체 16A:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.51 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.78 - 3.89 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.18 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.38 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1 H) 7.04 (br s, 1 H) 7.10 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.89 (br s, 1 H) 8.51 (d, J=3.5 Hz, 1 H) 12.35 (d, J=2.9 Hz, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.21분, MH⁺ 579

[α]_D ²⁰: +82.4° (c 0.495, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 2.97분, MH⁺ 579, 키랄 순도 100%.

융점: 106℃

거울상 이성질체 16B:

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆) δ ppm 2.51 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.64 (q, J=5.4 Hz, 2 H) 3.75 - 3.90 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.18 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.39 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1 H) 7.05 (br s, 1 H) 7.10 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.89 (br s, 1 H) 8.52 (d, J=3.3 Hz, 1 H) 12.36 (d, J=3.1 Hz, 1 H)

LC/MS (방법 LC-A): R_t 1.21분, MH⁺ 579

[α]_D ²⁰: -82.0° (c 0.45, DMF)

키랄 SFC (방법 SFC-D): R_t 3.36분, MH⁺ 579, 키랄 순도 100%.

융점: 105℃

표 : 상기에 설명한 바와 같이 제조한 화합물

본 발명의 화합물의 항바이러스 활성

DENV-2 항바이러스 분석

본 발명의 모든 화합물의 항바이러스 활성을 강화 녹색 형광 단백질(enhanced green fluorescent protein; eGPF)로 표지된 DENV-2 16681 주에 대하여 테스트하였다. 배양 배지는 2%의 열-불활성화 송아지 태아 혈청, 0.04%의 겐타마이신(50 mg/mL) 및 2 mM의 L-글루타민이 보충된 최소 필수 배지로 이루어져 있다. ECACC로부터 획득한 베로(Vero) 세포를 배양 배지에 현탁시키고, 25 μL를 384웰 플레이트에 첨가하였는데(2500개의 세포/웰), 상기 플레이트는 항바이러스 화합물을 이미 포함하고 있다. 전형적으로, 이러한 플레이트는 100% DMSO (200 nL) 중 최종 농도의 200배의 테스트 화합물의 9개의 희석 단계의 5배 연속 희석물을 포함한다. 게다가, 각각의 화합물 농도를 사중으로 테스트한다 (최종 농도 범위: 25　μM 내지 0.000064　μM 또는 2.5 μM 내지 0.0000064 μM(가장 활성이 큰 화합물의 경우)). 마지막으로, 각각의 플레이트는 바이러스 대조구 (화합물의 부재 하에 세포 및 바이러스를 포함함), 세포 대조구 (바이러스 및 화합물의 부재 하에 세포를 포함함) 및 배지 대조구 (세포, 바이러스 및 화합물의 부재 하에 배지를 포함함)로서 할당되는 웰을 포함한다. 배지 대조구로 할당된 웰에 25 μL의 배양 배지를 베로 세포 대신 첨가하였다. 일단 세포를 플레이트에 첨가하였으면, 플레이트를 실온에서 30분 동안 인큐베이션하여 세포가 웰 내에 고르게 분포되도록 하였다. 다음, 플레이트를 충분히 가습된 인큐베이터(37℃, 5% CO₂)에서 다음날까지 인큐베이션하였다. 그 후, eGFP로 표지한 DENV-2 주 16681을 0.5의 감염 다중도(multiplicity of infection; MOI)로 첨가하였다. 따라서, 15 μL의 바이러스 현탁물을 테스트 화합물을 포함하는 모든 웰 및 바이러스 대조구로 할당된 웰에 첨가하였다. 이와 병행하여, 15 μL의 배양 배지를 배지 대조구 및 세포 대조구에 첨가하였다. 다음, 플레이트를 충분히 가습된 인큐베이터(37℃, 5% CO₂)에서 3일 동안 인큐베이션하였다. 판독일에, eGFP 형광을 488 nm에서 (청색 레이저) 자동 형광 현미경을 이용하여 측정하였다. 내부 LIMS 시스템을 이용하여, 각각의 화합물에 있어서의 억제 용량 반응 곡선을 계산하고, 반치 최대 유효 농도(EC₅₀)를 결정하였다. 따라서, 모든 테스트 농도에 있어서의 억제 퍼센트 (I)는 하기 식을 이용하여 계산한다: I = 100*(S_T-S_CC)/(S_VC-S_CC); S_T, S_CC 및 S_VC는 각각 테스트 화합물 웰, 세포 대조 웰 및 바이러스 대조 웰에서의 eGFP 시그널(signal)의 양이다. EC₅₀은 바이러스 대조구와 비교하여 eGFP 형광 강도가 50% 감소되는 것에 의해 측정되는 바와 같이, 바이러스 복제가 50% 억제되는 화합물의 농도를 나타낸다. EC₅₀을 선형 내삽을 이용하여 계산한다 (표 1).

이와 병행하여, 화합물의 독성을 동일 플레이트에서 평가하였다. 일단 eGFP 시그널의 판독이 행해졌으면, 40 μL의 ATPlite(세포 생존성에 대한 염색제(cell viability stain))를 384웰 플레이트의 모든 웰에 첨가하였다. ATP는 모든 대사적 활성 세포에 존재하며, 그 농도는 세포가 괴사 또는 아폽토시스(apoptosis)를 겪을 때 매우 빠르게 감소한다. ATPLite 분석 시스템은 ATP와 첨가된 루시퍼라아제 및 D-루시페린의 반응에 의해 야기되는 광의 생성을 기반으로 한다. 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 다음, 플레이트를 뷰룩스(ViewLux)에서 측정하였다. 발광 시그널을 세포 대조 웰의 것과 비교하여 50%만큼 감소시키는 데 요구되는 농도로서 정의되는 반치 최대 세포독성 농도(CC₅₀)를 또한 결정하였다. 마지막으로, 선택도 지수(selectivity index; SI)를 화합물에 대하여 결정하였으며, 이를 하기와 같이 계산하였다: SI = CC₅₀/EC₅₀.

[표 1]

정량적 4가 역전사효소 - PCR (reverse transcriptase quantitative- PCR ; RT- qPCR ) 분석

본 발명의 화합물의 항바이러스 활성을 RT-qPCR 분석에서 DENV-1 주 TC974#666 (NCPV), DENV-2 주 16681, DENV-3 주 H87 (NCPV) 및 DENV-4 주 H241 (NCPV)에 대하여 테스트하였다. 따라서, 베로 세포를 테스트 화합물의 존재 또는 부재 하에 DENV-1, 또는 -2, 또는 -3, 또는 -4 중 어느 하나로 감염시켰다. 감염 후 제3일에, 상기 세포를 용해시키고, 세포 용해물을 이용하여 바이러스 표적 (DENV의 3'UTR; 표 2) 및 세포 기준 유전자 (β-액틴, 표 2) 둘 다의 cDNA를 제조하였다. 후속적으로, 듀플렉스(duplex) 실시간 PCR을 라이트사이클러480 (Lightcycler480) 기기에서 수행하였다. 생성된 Cp 값은 이러한 표적의 RNA 발현의 양에 역비례한다. 시험 화합물에 의한 DENV 복제의 억제는 3'UTR 유전자에서 Cp의 이동(shift)을 야기한다. 반면에, 테스트 화합물이 세포에 유독한 경우, β-액틴 발현에 대한 유사한 영향이 관찰된다. 비교 ΔΔCp 방법을 사용하여 EC50을 계산하는데, 이는 세포 항존 유전자(housekeeping gene)(β-액틴)를이용하여 정규화한 표적 유전자(3'UTR)의 상대적 유전자 발현을 기반으로 한다. 게다가, 항존 유전자 β-액틴에 대하여 얻어진 C_p 값을 기반으로 하여 CC₅₀ 값을 결정한다.

[표 2]

^a 리포터 염색제 (FAM, HEX) 및 켄처(quencher) (ZEN 및 IABkFQ) 요소를 볼드체, 이탤릭체로 표시함.

^b 프라이머 및 프로브의 뉴클레오티드 서열을 젠뱅크(Genbank)에 기탁된 4가지 뎅기 혈청형의 300개 뉴클레오티드 서열들의 정렬을 기반으로 하여 뎅기 바이러스 게놈의 3'UTR 영역에서의 보존된 영역으로부터 선택함(문헌[Gong et al., 2013, Methods Mol Biol, Chapter 16]).

배양 배지는 2%의 열-불활성화 송아지 태아 혈청, 0.04%의 겐타마이신(50　mg/mL) 및 2 mM의 L-글루타민이 보충된 최소 필수 배지로 이루어졌다. ECACC로부터 획득한 베로 세포를 배양 배지에 현탁시키고, 웰당 75 μL를 96웰 플레이트에 첨가하였는데(10000개의 세포/웰), 상기 플레이트는 항바이러스 화합물을 이미 포함하고 있다. 전형적으로, 이러한 플레이트는 100% DMSO 중 최종 농도의 200배의 테스트 화합물의 9개의 희석 단계의 5배 연속 희석물을 포함한다 (500 nL; 최종 농도 범위: 25 μM 내지 0.000064 μM 또는 2.5 μM 내지 0.0000064(가장 활성이 큰 화합물의 경우)). 게다가, 각각의 플레이트는 바이러스 대조구 (화합물의 부재 하에 세포 및 바이러스를 포함함) 및 세포 대조구 (바이러스 및 화합물의 부재 하에 세포를 포함함)로서 할당되는 웰을 포함한다. 일단 세포를 플레이트에 첨가하였으면, 플레이트를 충분히 가습된 인큐베이터(37℃, 5% CO₂)에서 다음날까지 인큐베이션하였다. 상기 분석에서 대략 22 내지 24의 Cp를 얻기 위하여 뎅기 바이러스 혈청형-1, 2, 3 및 4를 희석시켰다. 따라서, 25 μL의 바이러스 현탁물을 테스트 화합물을 포함하는 모든 웰 및 바이러스 대조구로 할당된 웰에 첨가하였다. 이와 병행하여, 25 μL의 배양 배지를 세포 대조구에 첨가하였다. 다음, 플레이트를 충분히 가습된 인큐베이터(37℃, 5% CO₂)에서 3일 동안 인큐베이션하였다. 3일 후, 상청액을 웰로부터 제거하고, 세포를 빙냉 PBS(대략 100 μL)로 2회 세척하였다. 96웰 플레이트 내의 세포 펠렛을 1일 이상 동안 -80℃에서 보관하였다. 다음, RNA를 제조업자의 지침(라이프 테크놀로지즈(Life Technologies))에 따라 셀즈-투-씨티(Cells-to-CT)^TM 용해 키트를 이용하여 추출하였다. 세포 용해물을 -80℃에서 보관하거나 역전사 단계에서 즉시 사용할 수 있다.

역전사 단계의 준비에서, 믹스(mix) A(표 3A)를 제조하고, 웰당 7.57 μL를 96웰 플레이트 내에 분배하였다. 5 μL의 세포 용해물의 첨가 후, 75℃에서의 5분 변성 단계를 수행하였다(표 3B). 그 후 7.43 μL의 믹스 B를 첨가하고(표 3C), 역전사 단계를 개시하여(표 3D) cDNA를 생성하였다.

마지막으로, RT-qPCR 믹스를 제조하고, 믹스 C(표 4A), 및 22.02 μL/웰을 96웰 라이트사이클러 qPCR용 플레이트 내에 분배하고, 여기에 3 μL의 cDNA를 첨가하고, qPCR을 표 4B의 조건에 따라 라이트사이클러 480에서 수행하였다.

라이트사이클러 소프트웨어 및 내부 LIMS 시스템을 이용하여, 각각의 화합물의 용량 반응 곡선을 계산하고, 반치 최대 유효 농도(EC₅₀) 및 반치 최대 세포독성 농도(CC₅₀)를 결정하였다(표 5 내지 표 8).

[표 3]

[표 4]

[표 5]

[표 6]

[표 7]

[표 8]

종래 기술의 실시예

국제 공개 제2013/045516호에 개시된 화합물 (350)이 본 발명의 화합물과 유사한 DENV-2 항바이러스 분석에서 테스트되었으며, 이들의 보고된 활성은 하기에 열거되어 있다.

[표 9]

SEQUENCE LISTING <110> Janssen Pharmaceuticals, Inc Katholieke Universiteit Leuven <120> Substituted indole-derivatives as dengue viral replication inhibitors <130> TIP 339 PCT <150> EP16163312.8 <151> 2016-03-31 <160> 6 <170> BiSSAP 1.3.6 <210> 1 <211> 19 <212> DNA <213> Dengue virus <400> 1 cggttagagg agacccctc 19 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Dengue virus <400> 2 gagacagcag gatctctggt c 21 <210> 3 <211> 28 <212> DNA <213> Dengue virus <400> 3 aaggactaga ggttagagga gacccccc 28 <210> 4 <211> 18 <212> DNA <213> Dengue virus <400> 4 ggccaggtca tcaccatt 18 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> Dengue virus <400> 5 atgtccacgt cacacttcat g 21 <210> 6 <211> 21 <212> DNA <213> Dengue virus <400> 6 ttccgctgcc ctgaggctct c 21

Claims (15)

1치환 또는 2치환 인돌 기를 포함하는 하기 화학식 Ia 또는 화학식 Ib:
[화학식 Ia]

[화학식 Ib]

의 화합물, 이의 입체 이성질체 형태, 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체 (상기 화합물은
R₁이 CF₃ 또는 OCF₃이며, R₂가 H 또는 OCH₃ 또는 F이고, R₃이 H이며;
R₂가 H이면 R₃이 또한 CH₃일 수 있는 군으로부터 선택됨).

제1항에 있어서, 하기 군으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 입체 이성질체 형태, 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체:

.

제1항 또는 제2항에 따른 화학식 Ia 또는 화학식 Ib의 화합물 또는 이의 입체 이성질체 형태, 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체를 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물.

의약으로 사용하기 위한, 제1항에 따른 화학식 Ia 또는 화학식 Ib의 화합물 또는 이의 입체 이성질체 형태, 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체 또는 제3항에 따른 제약 조성물.

뎅기열의 치료에서 사용하기 위한, 제1항에 따른 화학식 Ia 또는 화학식 Ib의 화합물 또는 이의 입체 이성질체 형태, 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체 또는 제3항에 따른 제약 조성물.

생물학적 샘플 또는 환자에서 뎅기 바이러스(들)의 복제를 억제하는 데 있어서의, 1치환 또는 2치환 인돌 기를 포함하는 하기 화학식 Ia 또는 화학식 Ib:
[화학식 Ia]

[화학식 Ib]

로 표시되는 화합물, 이의 입체 이성질체 형태, 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체의 용도 (상기 화합물은
R₁이 CF₃ 또는 OCF₃이며, R₂가 H 또는 OCH₃ 또는 F이고, R₃이 H이며;
R₂가 H이면 R₃이 또한 CH₃일 수 있는 군으로부터 선택됨).

제6항에 있어서, 추가 치료제의 공동 투여를 더 포함하는 용도.

제7항에 있어서, 상기 추가 치료제는 항바이러스제 또는 뎅기 백신, 또는 이들 둘 다로부터 선택되는 용도.

제1항에 있어서,

또는 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체로부터 선택되는 화합물.

제9항에 따른 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체를 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물.

의약으로 사용하기 위한, 제9항에 따른 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체 또는 제10항에 따른 제약 조성물.

뎅기열의 치료에서 사용하기 위한, 제9항에 따른 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체 또는 제10항에 따른 제약 조성물.

생물학적 샘플 또는 환자에서 뎅기 바이러스(들)의 복제를 억제하는 데 있어서의, 제9항의 임의의 구조 화학식으로 표시되는 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 용매화물 또는 다형체의 용도.

제13항에 있어서, 추가 치료제의 공동 투여를 더 포함하는 용도.

제14항에 있어서, 상기 추가 치료제는 항바이러스제 또는 뎅기 백신, 또는 이들 둘 다로부터 선택되는 용도.