ES2714074T3 - Derivados de indol mono- o disustituidos como inhibidores de la replicación del virus del dengue - Google Patents

Derivados de indol mono- o disustituidos como inhibidores de la replicación del virus del dengue Download PDF

Info

Publication number
ES2714074T3
ES2714074T3 ES15771136T ES15771136T ES2714074T3 ES 2714074 T3 ES2714074 T3 ES 2714074T3 ES 15771136 T ES15771136 T ES 15771136T ES 15771136 T ES15771136 T ES 15771136T ES 2714074 T3 ES2714074 T3 ES 2714074T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
compound
methoxyphenyl
chloro
mmol
enantiomer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES15771136T
Other languages
English (en)
Inventor
Bart Kesteleyn
Jean-François Bonfanti
Tim Jonckers
Pierre Raboisson
Dorothée Bardiot
Arnaud Marchand
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Katholieke Universiteit Leuven
Janssen Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Katholieke Universiteit Leuven
Janssen Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=54199687&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ES2714074(T3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Katholieke Universiteit Leuven, Janssen Pharmaceuticals Inc filed Critical Katholieke Universiteit Leuven
Application granted granted Critical
Publication of ES2714074T3 publication Critical patent/ES2714074T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/14—Radicals substituted by nitrogen atoms, not forming part of a nitro radical
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/30—Indoles; Hydrogenated indoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/42—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

Un compuesto de fórmula (I)**Fórmula** una forma estereoisomérica, una sal, un solvato o un polimorfo farmacéuticamente aceptables de estos, que comprende un grupo indol mono- o disustituido; dicho compuesto se selecciona de un grupo donde: R1 es H, R2 es F y R3 es H, F o CH3; R1 es F o CH3, R2 es OCH3 y R3 es H; R1 es F, R2 es H y R3 es CH3; R1 es H, R2 es OCH3 y R3 es H; R1 es H, R2 es Cl y R3 es H o CH3; R1 es F, R2 es F y R3 es H o R1 es CH3, R2 es H y R3 es F.

Description

DESCRIPCION
Derivados de indol mono- o disustituidos como inhibidores de la replicacion del virus del dengue
La presente invencion se refiere a compuestos de indol mono- o disustituidos, y se refiere tambien al uso de dichos compuestos como medicamento, mas preferiblemente a su uso como un medicamento para tratar o prevenir infecciones por el virus del dengue. La presente invencion se refiere ademas a composiciones farmaceuticas o preparaciones de combinacion de compuestos y a composiciones o preparados para uso como medicamento, mas preferiblemente para la prevencion o tratamiento de infecciones por el virus del dengue. Tambien se divulgan procesos de preparacion de los compuestos.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION
Los flavivirus, que son transmitidos por los mosquitos o las garrapatas, causan infecciones que ponen en riesgo la vida de los seres humanos, como la encefalitis y la fiebre hemorragica. Se conocen cuatro serotipos distintos, aunque estrechamente vinculados, del dengue flavivirus, denominados DENV-1, -2, -3 y -4. El dengue es endemico en la mayoria de las regiones tropicales y subtropicales de todo el mundo, principalmente en zonas urbanas y semiurbanas. Segun la Organizacion Mundial de la Salud (OMS), 2.500 millones de personas, de las cuales mil millones son ninos, presentan riesgo de infeccion por DENV (OMS, 2002). Se estima que cada ano, se producen en el mundo entre 50 y 100 millones de casos de fiebre del dengue [FD], medio millon de casos de enfermedad del dengue grave (es decir, fiebre hemorragica por dengue [DHF] y sindrome de shock por dengue [DSS]), y mas de 20.000 muertes. La DHF se ha convertido en la principal causa de hospitalizacion y muerte entre los ninos en regiones endemicas. En conjunto el dengue representa la causa mas comun de enfermedad por arbovirus. Debido a los grandes brotes, que han tenido lugar recientemente en paises situados en Latinoamerica, el Sudeste Asiatico y el Pacifico Occidental (incluso Brasil, Puerto Rico, Venezuela, Camboya, Indonesia, Vietnam, Tailandia), la cantidad de casos de dengue ha aumentado drasticamente en los ultimos anos. No solo la cantidad de casos de dengue esta en aumento, a medida que la enfermedad se propaga a nuevas areas, sino que ademas, los brotes tienden a ser mas graves.
Para prevenir y/o controlar la enfermedad asociada con la infeccion del virus del dengue, los unicos metodos disponibles en la actualidad son las estrategias de erradicacion de mosquitos para controlar el vector. Aunque se esta avanzando en el desarrollo de vacunas contra el dengue, han surgido muchas dificultades. Estas dificultades incluyen la existencia de un fenomeno, que se conoce como mejora dependiente de anticuerpos (ADE). La recuperacion de una infeccion causada por un serotipo proporciona inmunidad de por vida contra ese serotipo, pero solo confiere una proteccion parcial y transitoria contra una infeccion subsiguiente provocada por uno de los otros tres serotipos. Despues de la infeccion con otro serotipo, los anticuerpos heterologos preexistentes forman complejos con el serotipo del virus del dengue de la nueva infeccion, pero no neutralizan el patogeno. Por el contrario, se cree que se facilita el ingreso del virus a las celulas, lo que resulta en la replicacion no controlada del virus y titulos virales con picos mayores. Tanto en las infecciones primarias como en las secundarias, los titulos virales mas altos se asocian con la enfermedad del dengue mas grave. Dado que los anticuerpos maternos pueden pasar facilmente a los ninos mediante la lactancia, esta podria ser una de las razones por la que los ninos se ven mas afectados por la enfermedad del dengue grave que los adultos.
En sitios donde dos o mas serotipos que circulan simultaneamente, tambien conocidos como regiones hiperendemicas, el riesgo de la enfermedad del dengue grave es significativamente mayor debido a un mayor riesgo de sufrir una infeccion secundaria, mas grave. Por otra parte, en una situacion de hiperendemicidad, la probabilidad de aparicion de cepas mas virulentas se incrementa, lo que a su vez aumenta la probabilidad de fiebre hemorragica por dengue (DHF) o sindrome de shock por dengue.
Los mosquitos que transmiten el dengue, incluso los mosquitos de los generos Aedes aegypti y Aedes albopictus (mosquito tigre) se estan dirigiendo hacia el Norte. Segun los Centros para el Control y la Prevencion de Enfermedades (CDC) de los Estados Unidos, actualmente, ambos generos de mosquitos se encuentran omnipresentes en el sur de Texas. La propagacion de mosquitos portadores del dengue hacia el Norte no se limita a los Estados Unidos, si no que se ha observado tambien en Europa.
A pesar de los grandes esfuerzos de las ultimas tres decadas, actualmente, no existe una vacuna disponible para proteger a los seres humanos contra la enfermedad del virus del dengue. El problema principal radica en desarrollar una vacuna, que ofrezca proteccion contra los cuatro serotipos en la misma medida (una vacuna tetravalente). Ademas, hoy en dia, no existen farmacos antivirales especificos para el tratamiento o la prevencion de la infeccion por el virus de la fiebre del dengue. Claramente, aun existe una gran necesidad medica no satisfecha de contar con agentes terapeuticos para la prevencion o el tratamiento de infecciones virales en animales, mas especificamente, en seres humanos y, particularmente, para las infecciones virales causadas por Flavivirus, mas especificamente, el virus del dengue. Los compuestos con buena potencia antiviral, niveles reducidos de efectos secundarios, de existir, un amplio espectro de actividad contra multiples serotipos del virus del dengue, una toxicidad baja y/o buenas propiedades farmacocineticas o dinamicas resultan muy necesarios.
WO 2013/045516 divulga compuestos de indol como inhibidores de la replicacion del virus.
La presente invencion proporciona compuestos, derivados de indol mono- o disustituidos, que muestran una actividad potente y elevada contra los cuatro (4) serotipos del virus del dengue. Por otra parte, los compuestos de conformidad con la invencion poseen un buen perfil farmacocinetico y, sorprendentemente, estos compuestos especificos muestran una mejor estabilidad quiral.
SUMARIO DE LA INVENCION
La presente invencion se basa en el hallazgo inesperado, que indica que al menos uno de los problemas mencionados anteriormente se puede resolver mediante los compuestos actuales de la invencion.
La presente invencion proporciona compuestos, que han probado poseer una actividad antiviral potente contra los cuatro (4) serotipos conocidos actualmente. La presente invencion demuestra, ademas, que estos compuestos inhiben de manera eficiente la proliferacion de virus del dengue (DENV). Por lo tanto, estos compuestos constituyen una clase util de compuestos potentes, que se puede utilizar en el tratamiento y/o la prevencion de infecciones virales en animales, mamiferos y seres humanos, mas especificamente para el tratamiento y/o la prevencion de infecciones por el virus del dengue.
La presente invencion se refiere ademas a dichos compuestos para uso como medicamentos y a su uso para la fabricacion de medicamentos para el tratamiento y/o la prevencion de las infecciones virales, en particular, las infecciones causadas por los virus pertenecientes a la familia de los virus del dengue en animales o mamiferos, mas especificamente, en seres humanos. Tambien se divulgan en la presente metodos para la preparacion de todos estos compuestos y a composiciones farmaceuticas que los comprenden en una cantidad efectiva.
La presente invencion tambien se refiere a dischos compuestos para uso en un metodo de tratamiento o prevencion de infecciones causadas por el virus del dengue en seres humanos, mediante la administracion de una cantidad efectiva de uno o mas de dichos compuestos, o una sal farmaceuticamente aceptable de estos, opcionalmente en combinacion con uno o mas medicamentos, como otro agente antiviral, a un paciente en necesidad de tratamiento. Un aspecto de la invencion consiste en proporcionar compuestos de formula (I)
Figure imgf000003_0001
una forma estereoisomerica, una sal, un solvato o un polimorfo farmaceuticamente aceptables de estos, que comprende un grupo indol mono- o disustituido; dicho compuesto se selecciona de un grupo donde:
Ri es H, R2 es F y R3 es H, F o CH3;
Ri es F o CH3, R2 es OCH3 y R3 es H;
Ri es F, R2 es H y R3 es CH3;
Ri es H, R2 es OCH3 y R3 es H;
R1 es H, R2 es Cl y R3 es H o CH3;
R1 es F, R2 es F y R3 es H o
R1 es CH3, R2 es H y R3 es F.
En particular, los compuestos de la invencion o su forma estereoisomerica, una sal, un solvato o un polimorfo farmaceuticamente aceptables de estos, se seleccionan del grupo:
Figure imgf000004_0001
Figure imgf000005_0001
Parte de la presente invencion es tambien una composicion farmaceutica, que comprende un compuesto de formula (I) o una forma estereoisomerica, una sal, un solvato o un polimorfo farmaceuticamente aceptables de este, junto con uno o mas excipientes, diluyentes o vehiculos farmaceuticamente aceptables.
Las sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos de formula (I) incluyen las sales de adicion de acido y las sales basicas de dichos compuestos. Las sales de adicion de acido adecuadas se forman a partir de acidos, que forman sales no toxicas. Las sales basicas adecuadas se forman a partir de bases, que forman sales no toxicas. Lo compuestos de la invencion tambien pueden existir en formas no solvatadas y solvatadas. El termino "solvato" se usa en la presente para describir un complejo molecular, que comprende el compuesto de la invencion y una o mas moleculas de disolvente farmaceuticamente aceptables, por ejemplo, etanol.
El termino "polimorfo" se refiere a la capacidad del compuesto de la invencion de existir en mas de una forma o estructura cristalina.
Los compuestos de la presente invencion pueden administrarse como productos cristalinos o amorfos. Pueden obtenerse, por ejemplo, como tapones, polvos o peliculas solidas por metodos como precipitacion, cristalizacion, secado por congelacion, secado por pulverizacion o secado por evaporacion. Se pueden administrar solos o en combinacion con uno o mas otros compuestos adicionales de la invencion o en combinacion con uno o mas farmacos adicionales. Generalmente, se administraran como una formulacion en asociacion con uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables. El termino "excipiente" se usa en la presente para describir cualquier ingrediente distinto del o los compuestos de la invencion. La eleccion del excipiente depende en gran medida de factores como el modo particular de administracion, el efecto del excipiente sobre la solubilidad y estabilidad y la naturaleza de la forma de dosificacion.
Los compuestos de la presente invencion o cualquier subgrupo de estos pueden formularse en diversas formas farmaceuticas para propositos de administracion. Como composiciones apropiadas se pueden citar todas las composiciones empleadas usualmente para administrar farmacos sistemicamente. Para preparar las composiciones farmaceuticas de la presente invencion, se combina una cantidad efectiva del compuesto particular, opcionalmente en forma de sal de adicion, como el ingrediente activo en mezcla con un vehiculo farmaceuticamente aceptable; el vehiculo puede tomar una amplia variedad de formas en funcion de la forma de preparacion deseada para la administracion. Estas composiciones farmaceuticas se encuentran deseablemente en forma de dosificacion unitaria adecuada, por ejemplo, para administracion oral o rectal. Por ejemplo, para preparar las composiciones en forma de dosificacion oral, se puede emplear cualquiera de los medios farmaceuticos habituales, como agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparaciones liquidas orales, como suspensiones, jarabes, elixires, emulsiones y soluciones o vehiculos solidos, como almidones, azucares, caolin, diluyentes, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares en el caso de polvos, pildoras, capsulas y tabletas. Debido a su facilidad de administracion, las tabletas y capsulas representan las formas unitarias de dosificacion oral mas ventajosa, en cuyo caso se emplean obviamente vehiculos farmaceuticos solidos. Tambien se incluyen preparaciones en forma solida, que se pueden convertir, poco antes de su uso, en formas liquidas.
Resulta especialmente ventajoso formular las composiciones farmaceuticas mencionadas anteriormente en forma de dosificacion unitaria para facilitar la administracion y uniformidad de la dosis. Forma de dosificacion unitaria, como se utiliza en la presente, se refiere a unidades fisicamente diferenciadas, adecuadas como dosificaciones unitarias. Cada unidad contiene una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapeutico deseado en asociacion con el vehiculo farmaceutico requerido. Los ejemplos de dichas formas de dosificacion unitaria incluyen tabletas (incluso tabletas ranuradas o recubiertas), capsulas, pildoras, paquetes de polvos, obleas, supositorios, soluciones o suspensiones inyectables y similares asi como multiplos segregados de estas.
Los entendidos en el tratamiento de enfermedades infecciosas podran determinar la cantidad efectiva a partir de los resultados de las pruebas, que se presentan a continuacion. En general, se considera que una cantidad diaria efectiva oscilaria entre 0,01 mg/kg a 50 mg/kg de peso corporal, mas preferiblemente entre 0,1 mg/kg y 10 mg/kg de peso corporal. Puede ser apropiado administrar la dosis requerida como dos, tres, cuatro o mas subdosis a intervalos apropiados a lo largo del dia. Dichas subdosis se pueden formular como formas de dosificacion unitarias, por ejemplo, pueden incluir una cantidad de ingrediente activo por forma de dosificacion unitaria de 1 a 1000 mg y, en particular, de 5 a 200 mg.
La dosificacion y frecuencia de administracion exactas dependen del compuesto particular de formula (I) utilizado, la afeccion particular que se esta tratando, la gravedad de la afeccion que se esta tratando, la edad, el peso y la condicion fisica general del paciente particular asi como de otra medicacion que el sujeto pueda estar tomando, como es bien sabido por los entendidos en la tecnica. Ademas, es evidente que la cantidad efectiva puede reducirse o aumentarse en funcion de la respuesta del sujeto tratado y/o de la evaluacion del medico, que prescribe los compuestos de la presente invencion. Por lo tanto, las escalas de cantidad efectiva mencionadas anteriormente son meramente orientativas y no estan destinadas a limitar el alcance o uso de la invencion en ninguna medida.
La presente divulgacion tambien pretende incluir todos los isotopos de atomos, que se encuentran en los compuestos de la invencion. Por ejemplo, los isotopos de hidrogeno incluyen tritio y deuterio y los isotopos de carbono incluyen C-13 y C-14.
Los presentes compuestos utilizados en la presente invencion tambien pueden existir en su forma estereoquimicamente isomera, donde se definen todos los compuestos posibles constituidos por los mismos atomos unidos por la misma secuencia de enlaces, pero con diferentes estructuras tridimensionales, que no son intercambiables. Salvo que se mencione o indique lo contrario, la designacion quimica de los compuestos abarca la mezcla de todas las formas estereoquimicamente isomeras posibles, que pueden poseer dichos compuesto.
Dicha mezcla puede contener todos los diastereomeros y/o enantiomeros de la estructura molecular basica de dicho compuesto. Todas las formas estereoquimicamente isomeras de los compuestos utilizados la presente invencion, tanto en forma pura o mezcladas unas con otras, estan incluidas dentro del alcance de la presente invencion, incluso cualquier mezcla racemica o racemato.
Las formas estereoisomeras puras de los compuestos e intermedios como se menciona en la presente se definen como isomeros sustancialmente libres de otras formas enantiomericas o diastereomericas de la misma estructura molecular basica de dichos compuestos o intermedios. En particular, el termino 'estereoisomericamente puros' se refiere a compuestos o intermedios, que tienen un exceso estereoisomerico de al menos el 80% (es decir, minimo el 90% de un isomero y maximo el 10% de los otros isomeros posibles) hasta un exceso estereoisomerico del 100% (es decir, el 100% de un isomero y nada del otro), mas especificamente, compuestos o intermedios, que tienen un exceso estereoisomerico del 90% hasta el 100%, incluso mas especificamente, que tienen un exceso estereoisomerico del 94% hasta el 100% y, mas en particular, que tienen un exceso estereoisomerico del 97% hasta el 100%. Los terminos "enantiomericamente puro" y "diastereomericamente puro" deben entenderse de una manera similar, pero teniendo en cuenta el exceso enantiomerico, respectivamente el exceso diastereomerico de la mezcla en cuestion.
Las formas estereoisomeras puras de los compuestos e intermedios utilizados en esta invencion se pueden obtener mediante la aplicacion de procedimientos conocidos en la tecnica. Por ejemplo, los enantiomeros pueden separarse entre si por medio de la cristalizacion selectiva de sus sales diastereomericas con acidos o bases opticamente activas. Los ejemplos incluyen acido tartarico, acido dibenzoiltartarico, acido ditoluoiltartarico y acido canfosulfonico. Alternativamente, los enantiomeros pueden separarse por tecnicas cromatograficas, mediante el uso de fases estacionarias quirales. Dichas formas estereoquimicamente isomericas puras tambien se pueden derivar de las correspondientes formas estereoquimicamente isomericas puras de los materiales de partida apropiados, siempre que la reaccion ocurra estereoespecificamente. Preferiblemente, si se desea un estereoisomero especifico, dicho compuesto se sintetizara por metodos de preparacion estereoespecificos. Estos metodos emplearan ventajosamente materiales de partida enantiomericamente puros.
Enfoques sinteticos generales
La sintesis de compuestos de formula general I puede llevarse a cabo como se describe en el Esquema 1: acido 2-(4-cloro-2-metoxifenil) acetico (II) se puede convertir en el correspondiente cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil) acetilo (III) con un reactivo de cloracion, como cloruro de tionilo. La reaccion de Friedel-Crafts del cloruro de acido III con un indol sustituido de formula general IV se puede realizar mediante un reactivo acido de Lewis, como Et2AlCl en un disolvente adecuado, como CH2Cl2, y en condiciones de reaccion adecuadas, que implican tipicamente refrigeracion, para proporcionar el indol 3-acilado de formula general V. La introduccion de una porcion anilina en la posicion alfa con respecto a la porcion carbonilo de los compuestos de formula general V se puede lograr mediante una secuencia de reaccion, que implica, por ejemplo, bromacion de V con un reactivo, como tribromuro de feniltrimetilamonio, en un disolvente adecuado, como THF, para proporcionar los compuestos de formula general VI y la posterior reaccion de los compuestos de formula general VI con 2(3-amino-5-metoxifenoxi) etanol (VII) en un disolvente adecuado, como CH3CN, y tipicamente mediante una base, como TEA o DIPEA, para proporcionar los compuestos de formula general I como mezclas racemicas. La separation quiral de los compuestos de formula general I se puede realizar, por ejemplo, mediante cromatografia quiral para proporcionar los enantiomeros A y B de la formula general I.
Figure imgf000007_0001
Esquema 1
Como un enfoque alternativo, el intermediario de formula general V se pueden preparar tambien como se describe en el Esquema 2: El indol-3-carbaldehido sustituido N-Boc protegido de formula general VIII se puede convertir en el correspondiente tipo Strecker del intermediario de formula general IX mediante la reaccion con morfolina en presencia de reactivos como por ejemplo cianuro de sodio y bisulfito de sodio y en un solvente adecuado como por ejemplo una mezcla de agua y un solvente organico miscible agua como por ejemplo dioxano. La alquilacion del compuesto de formula general IX con cloruro de 4-cloro-2-metoxi-bencilo se puede realizar en presencia de una base como por ejemplo hexametildisilazano de potasio y en un solvente adecuado como por ejemplo DMF para proporcionar el compuesto de formula general X . La presentation del compuesto de formula general X a una condition hidrolitica adecuado acuosa acida como por ejemplo el tratamiento con una solution acuosa de acido clorhidrico a temperatura elevada, proporciona el intermedio de formula general V.
Figure imgf000008_0001
Esquema 2
Ejemplos
Metodos LC/MS
La medicion por Cromatografia Liquida de Alta Resolucion (HPLC) se realizo mediante el uso de una bomba LC, una red de diodos (DAD) o un detector de rayos UV y una columna, como se especifica en los metodos correspondientes. De ser necesario, se incluyen detectores adicionales (vease la tabla de metodos, que se incluye a continuacion). El flujo de la columna se lleva al espectrometro de masas (MS), que se configura con una fuente de iones de presion atmosferica. Esta dentro del conocimiento del entendido establecer los parametros de ajuste (por ejemplo, rango de barrido, tiempo de permanencia...) con el fin de obtener los iones, que permiten la identificacion del peso molecular (MW) monoisotopico nominal del compuesto. La adquisicion de datos se realizo con el software adecuado.
Los compuestos se describen por sus tiempos de retencion experimentales (Rt) y iones Si no se especifica de forma diferente en la tabla de datos, el ion molecular reportado corresponde a [M+H]+ (molecula protonada) y/o [M-H]-(molecula desprotonada). En caso de que el compuesto no fuera directamente ionizable, se especifica el tipo de aducto (es decir, [M+NH4]+, [M+HCOO]-, etc...). Para moleculas con multiples patrones isotopicos (Br, Cl), el valor reportado es el obtenido para la masa de isotopos mas baja. Todos los resultados se obtuvieron con incertidumbres experimentales, que se asocian comunmente con el metodo utilizado.
En adelante, "SQD" significa Detector Cuadruplo Simple; "MSD", Detector Selectivo de Masas; "RT", temperatura ambiente; "BEH", hibrido enlazado de etilsiloxano/silice; "DAD", Detector de Rayos de Diodo; "HSS", Silice de Alta Resistencia.
Codigos del metodo LC/MS (flujo expresado en mL/min., temperatura en columna (T) en °C, tiempo de ejecucion en minutos)
Figure imgf000008_0002
Figure imgf000009_0001
Metodos SFC-MS
La medicion SFC se realizo por medio de un sistema de cromatografia de fluidos supercriticos (SFC), compuesto por una bomba binaria para la liberacion de dioxido de carbono (CO2) y un modificador, un muestreador automatico, un horno de columna, un detector de red de diodos equipado con una celda de flujo de alta presion de hasta 400 bares. Si se configura con un Espectrometro de Masas (MS), el flujo de la columna se lleva al (MS). Esta dentro del conocimiento del entendido establecer los parametros de ajuste (por ejemplo, rango de barrido, tiempo de permanencia...) con el fin de obtener los iones, que permiten la identificacion del peso molecular (MW) monoisotopico nominal del compuesto. La adquisicion de datos se realizo con el software adecuado.
Metodos analiticos SFC-MS (flujo expresado en mL/min., temperatura de columna (T) en °C, tiempo de ejecucion en minutos, contrapresion en bares).
Figure imgf000009_0002
Figure imgf000010_0001
Puntos de fusion
Los valores son o bien los valores maximos o los rangos de fusion y se obtienen con las incertidumbres experimentales, que se asocian comunmente con este metodo analitico.
DSC823e (indicado como DSC)
Para una serie de compuestos, los puntos de fusion se determinaron con un DSC823e (Mettler-Toledo). Los puntos de fusion se midieron con un gradiente de temperatura de 10°C/minuto. La temperatura maxima fue de 300°C. Rotaciones opticas:
Las rotaciones opticas se midieron en un polarimetro Perkin-Elmer 341 con una lampara de sodio y se reportaron como se indica a continuacion: [a]° (A, c g/100ml, disolvente, T°C).
[a]j.T = (100a) / (l x c) : donde l es la longitud de ruta en dm y c es la concentracion en g/100 ml para una muestra a una temperatura T (°C) y una longitud de onda A (en nm). Si la longitud de onda de la luz usada es 589 nm (linea D de sodio), entonces el simbolo D podria utilizarse en su lugar. Siempre se debe dar el signo de la rotacion (+ o -). Cuando se utiliza esta ecuacion, la concentracion y el disolvente siempre se proporcionan entre parentesis despues de la rotacion. La rotacion se representa mediante el uso de grados y no se proporcionan unidades de concentracion (se supone que es g/100 ml).
Ejemplo_____1 Sintesis de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-1H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 1) y separacion quiral en enantiomeros 1A y 1B.
Figure imgf000011_0001
Sintesis del intermediario 1a:
Se agrego acido 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetico [CAS 170737-95-8] (5.8 g, 28.9 mmol) en porciones pequenas a cloruro de tionilo (50 mL) y la solucion resultante se agito durante la noche a 60°C. El disolvente se concentro bajo presion reducida y se co-evaporo con tolueno para proporcionar cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 1a (6.5 g) como un residuo aceitoso que se uso sin purificacion adicional en la siguiente etapa.
Sintesis del intermediario 1b:
Se agrego por goteo cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (37.1 mL, 37.14 mmol) a 0°C a una solucion de 6-fluoro-1H-indol [CAS 399-51-9] (3.34 g, 24.76 mmol) en CH2Cl2 (100 mL). Despues de 30 min a 0°C, una solucion de cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 1a (6.3 g, 28.76 mmol) en CH2Cl2 (100 mL) se agrego lentamente a 0°C. La reaccion se agito a 0°C durante 3 h. Se agrego hielo-agua y el precipitado se filtro, se lavo con agua y una pequena cantidad de CH2Cl2. Los solidos se secaron al vacio a 70°C durante la noche para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)etanona 1b (4.9 g).
Sintesis del intermediario 1c:
A 0°C, una solucion de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (5.8 g, 15.4 mmol) en THF (65 mL) se agrego por goteo a una mezcla de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)etanona 1b (4.9 g, 15.4 mmol) en THF (60 mL). La mezcla se agito a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 2.5 h. El precipitado se filtro y se lavo con EtOAc. El filtrado se concentro bajo presion reducida. El residuo se recogio con EtOAc y se lavo con agua. Se formo un precipitado en la capa organica y se filtro y se seco para proporcionar una primera partida de 2­ bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)etanona 1c (4.6 g). La capa organica se separo, se seco sobre MgSO4, se filtro y el disolvente se evaporo bajo presion reducida. El residuo se cristalizo a partir de EtOAc, el precipitado se filtro, se lavo con Et2O y se seco al vacio para proporcionar una segunda fraccion de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)etanona 1c (1.6 g).
Sintesis de compuesto 1 y separacion quiral en enantiomeros 1A y 1B:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)etanona 1c (2.1 g, 5.3 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (924 mg, 5.05 mmol) y trietilamina (1.47 mL, 10.6 mmol) en CH3CN (16 mL) en un tubo sellado se calento a 100°C durante 30 min utilizando un microondas Biotage® Initiator EXP 60 con un una salida de energia que varia entre 0 a 400 W (tiempo de retencion fijo). La reaccion se diluyo con CH2Cl2 y la capa organica se lavo con agua, se seco sobre MgSO4, se filtro y el disolvente se concentro bajo presion reducida. El residuo se purifico mediante cromatografia ultrarrapida sobre gel de silice (15-40 pm, 80 g) utilizando a heptano/EtOAc gradiente of 50/50 a 0/100. Las fracciones puras se recogieron y se concentro para proporcionar 1.1 g de Compuesto 1. Esta fraccion se combino con otra partida of 0.93 g de Compuesto 1 y posteriormente se purifico mediante SFC aquiral (fase estacionaria: CIANO 6 pm 150 x 21.2 mm, fase movil: 75% CO2, 25% MeOH) para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 1, 1.36 g) como una mezcla racemica.
Los enantiomeros de Compuesto 1 (1.36 g) se separaron mediante SFC quiral (fase estacionaria: Chiracel® OJ 20 x 250 mm, fase movil: 60% CO2, 40% MeOH) Para producir 611 mg del primer enantiomero eluido y 586 mg del segundo enantiomero eluido. El primer enantiomero eluido se recogio con CH3CN/diisopropileter/heptano. El precipitado se filtro y se seco para proporcionar el enantiomero 1A (496 mg) como un polvo amorfo. El segundo enantiomero eluido se recogio con CH3CN/diisopropileter/heptano. El precipitado se filtro y se seco para proporcionar el enantiomero 1B (458 mg) como un polvo amorfo.
Compuesto 1:
1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (c, J=5.3 Hz, 2 H) 3.77 - 3.88 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.78 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.15 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 7.02 - 7.08 (m, 1 H) 7.09 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.27 (dd, J=9.6, 2.4 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 8.13 (dd, J=8.8, 5.7 Hz, 1 H) 8.43 (s, 1 H) 11.96 - 12.17 (m, 1 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 2.95 min, MH+ 499
Enantiomero 1A:
1H RMN (500 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 3.57 - 3.68 (m, 5 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.73 - 4.87 (m, 1 H) 5.71 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 5.91 - 5.96 (m, 2 H) 6.15 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.39 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 7.01 - 7.11 (m, 2 H) 7.27 (dd, J=9.6, 2.4 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.13 (dd, J=9.6, 5.7 Hz, 1 H) 8.43 (s, 1 H) 11.45 - 12.31 (m, 1 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 2.95, MH+ 499
[a]D20: 112.1° (c 0.281, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-C): Rt 3.17 min, MH+ 499, pureza quiral 100%.
Enantiomero 1B:
1H RMN (500 MHz, DMSO-ofe) 5 ppm 3.57 - 3.67 (m, 5 H) 3.74 - 3.90 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.78 (s a, 1 H) 5.70 - 5.74 (m, 1 H) 5.93 (s, 2 H) 6.15 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 7.02 - 7.08 (m, 1 H) 7.09 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.27 (dd, J=9.6, 2.4 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 8.13 (dd, J=9.6, 5.5 Hz, 1 H) 8.43 (s, 1 H) 11.63 - 12.47 (m, 1 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 2.95, MH+ 499
[a]D20: -113.9° (c 0.28, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-C): Rt 4.12 min, MH+ 499, pureza quiral 100%.
Ejemplo 1.1: Estabilidad quiral del enantiomero 1A a pH 7.4
La estabilidad quiral del enantiomero 1A (R = OMe) se evaluo mediante determinacion del exceso enantiomeroico (ee%) despues de la incubacion durante 24 h y 48 h en una solucion tamponada a pH 7.4 a 40°C y 60°C. Para evaluar la influencia del sustituyente-metoxi del enantiomero 1A (R = OMe) en la estabilidad contra racemizacion, la estabilidad quiral del enantiomero 1’A (R = H) se evaluo bajo las mismas condiciones.
A esta altura, soluciones 5 pM tamponadas (pH = 7.4) de 1A y 1’A se prepararon mediante la mezcla de 25 pL de una solucion 100 pM de 1A o 1’A en DMSO con tampon 475 pL acuoso pH 7.4. Se tomaron muestras 24 h y 48 h despues de la incubacion a 40°C y 60°C. Las muestras analiticas se analizaron mediante SFC quiral (deteccion MS) y la pureza quiral se expreso como el exceso enantiomerico (ee% = % enantiomero A - % enantiomero B). Ambos enantiomeros 1A y 1’A tuvieron una pureza quiral de 100% antes de su incubacion.
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000013_0002
Ejemplo 2: Smtesis de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(6-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 2) y separacion quiral en enantiomeros 2A y 2B.
Figure imgf000013_0001
Smtesis del intermediario 2a:
Una solucion de 6-fluoro-7-metil-1 H-indol [CAS 57817-10-4] (1.10 g, 7.37 mmol) en CH2Cl2 (40 mL) se enfrio en un bano de hielo bajo corriente-N2. Se agrego cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (10 mL, 10 mmol) por goteo durante 15 min. Despues de agitacion adicional durante 15 min a 0°C, una solucion de cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 1a (2.06 g, 9.42 mmol, para smtesis: vease Ejemplo 1) en CH2Cl2 (35 mL) se agrego durante 75 min a 0°C. La reaccion se agito a 0°C durante 1 h y posteriormente se desactivo mediante la adicion lenta de una solucion de tetrahidrato tartrato de potasio y sodio (sal de Rochelle) [CAS 6100-16-9] (4.24 g, 15 mmol) en agua (10 mL), mientras se mantema la temperatura interna de la mezcla por debajo de 10°C. El bano de hielo se elimino, se agregaron 2-metil-THF (160 mL) y Na2SO4 (60 g) y la mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se filtro sobre dicalite® y la torta de filtrado se lavo con varias porciones de THF. Los filtrados combinados se evaporaron bajo presion reducida y el residuo se trituro con una pequena cantidad de CH2Cl2. Los solidos se aislaron por filtracion y se secaron al vacfo para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 2a (1.9 g) como un polvo blanco.
Smtesis de compuesto 2 y separacion quiral en enantiomeros 2A y 2B:
Una solucion de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 2a (1.9 g, 5.73 mmol) en THF seco (60 mL) se enfrio en un bano de hielo bajo corriente-N2. a 0°C, una solucion de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (2.3 g, 5.91 mmol) en THF (50 mL) se agrego por goteo durante un periodo de 1 h y la mezcla se agito a 0°C durante 1.5 h adionales. La mezcla de reaccion se concentro bajo presion reducida y el residuo, que contema el Intermediario en bruto bromado 2b, se disolvio en CH3CN (100 mL). Se agregaron 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (2.11 g, 11.5 mmol) y diisopropiletilamina (2 mL, 11.6 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 3 dfas. agua (350 mL) se agrego y la reaccion productos se extrajeron con 2-metil-THF (3x 100 mL). Las capas organicas combinadas se lavaron con HCl 0.5 M (200 mL) y agua (3x 300 mL), se secaron sobre MgSO4 y se evaporaron bajo presion reducida. El residuo (2.48 g) se purifico mediante cromatograffa en columna (fase estacionaria: Sflice 40 g, HP-Spher® 40 pm; Fase movil: gradiente heptano/EtOAce 100/0 a 0/100). Las fracciones que contenfan producto de reaccion se combinaron y se evaporaron bajo presion reducida. El residuo se trituro con una pequena cantidad de una mezcla de EtOAc/heptano (1/1), los solidos se filtraron y se secaron al vacfo para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 2, 1.38 g) como una mezcla racemica.
Los enantiomeros de Compuesto 2 (1.38 g) se separaron mediante SFC preparativa (fase estacionaria: Quiralpak® Diacel AS 20 x 250 mm, fase movil: CO2, EtOH con 0.4% /PrNH2). El primer enantiomero eluido se disolvio en una mezcla de MeOH (50 mL) y agua (20 mL) y la mezcla se evaporo bajo presion reducida (200 mbar, bano de agua 40°C) a un volumen residual de 20 ml. La suspension resultante se diluyo con 20 mL de agua y se agito a temperatura ambiente durante 3 h. Un solido blanco se filtro, se lavo con agua y se seco al vacfo a temperatura ambiente para proporcionar el enantiomero 2A (631 mg) como un polvo amorfo blanco. El segundo enantiomero eluido se disolvio en una mezcla de MeOH (50 mL) y agua (20 mL) y la mezcla se evaporo bajo presion reducida (200 mbar, bano de agua 40°C) a un volumen residual de 20 ml. La suspension resultante se diluyo con 20 mL de agua y se agito a temperatura ambiente durante 3 h. Un solido blanco se filtro, se lavo con agua y se seco al vacfo a temperatura ambiente para proporcionar el enantiomero 2B (625 mg) como un polvo amorfo blanco.
Compuesto 2:
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 2.37 (s a, 3 H) 3.60 (s, 3 H) 3.63 (c, J=5.2 Hz, 2 H) 3.76 - 3.89 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.76 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.16 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.36 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.95 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1 H) 7.00 (dd, J=10.1, 8.8 Hz, 1 H) 7.08 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.95 (dd, J=8.7, 5.2 Hz, 1 H) 8.41 (s, 1 H) 12.17 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-A): Rt 1.19 min, MH+ 513
Enantiomero 2A:
1H RMN (360 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 2.38 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.82 (ddt, J=15.4, 10.2, 5.1, 5.1 Hz, 2 H) 3.97 (s, 3 H) 4.81 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.71 (t a, J=1.8 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=1.5 Hz, 2 H) 6.17 (d a, J=8.4 Hz, 1 H) 6.40 (d a, J=8.1 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=8.4, 1.8 Hz, 1 H) 7.02 (dd a, J=10.1,9.0 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.96 (dd, J=8.6, 5.3 Hz, 1 H) 8.44 (s, 1 H) 12.22 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-A): Rt 1.20, MH+ 513
[a]D20: 83.3° (c 0.36, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-F): Rt 2.05 min, MH+ 513, pureza quiral 100%
Enantiomero 2B:
1H RMN (360 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 2.38 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.83 (ct, J=10.2, 5.1 Hz, 2 H) 3.97 (s, 3 H) 4.80 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.71 (t a, J=2.2 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=1.8 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=8.4, 1.8 Hz, 1 H) 7.02 (dd, J=10.2, 8.8 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.96 (dd, J=8.6, 5.3 Hz, 1 H) 8.44 (s, 1 H) 12.21 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-A): Rt 1.20, MH+ 513
[a]D20: -81.9° (c 0.515, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-F): Rt 3.28 min, MH+ 513, pureza quiral 100%
Ejemplo 3: Sfntesis de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(6-cloro-7-metil-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 3) y separacion quiral en enantiomeros 3A y 3B.
Figure imgf000015_0001
Síntesis del intermediario 3a:
Se agrego cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (18.1 mL, 18.1 mmol) por goteo a 0°C a una solucion de 6-cloro-7-metil-1H-indol [CAS 57817-09-1] (2 g, 12.08 mmol) en CH2Cl2 (60 mL). Despues de 30 min a 0°C, se agrego lentamente una solucion de cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 1a (3.21 g, 14.66 mmol, para sintesis: vease Ejemplo 1) en CH2Cl2 (60 mL) a 0°C. La reaccion se agito a 0°C durante 3 h. Se agrego hielo-agua y el precipitado se filtro y se lavo con agua. El solido se seco al vacio para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-cloro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 3a (3.2 g).
Sintesis del intermediario 3b:
A 0°C, una solucion de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (3.63 g, 9.65 mmol) en THF (85 mL) se agrego por goteo a una solucion de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-cloro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 3a (3.2 g, 9.2 mmol) en THF (85 mL). La mezcla se agito a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 2.5 h. El precipitado se filtro y se lavo con EtOAc. El filtrado se concentro bajo presion reducida. El residuo se recogio con una cantidad minima de CH3CN/diisopropileter. El precipitado se filtro y se seco al vacio para proporcionar 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(6-cloro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 3b (4.1 g).
Sintesis de compuesto 3 y separacion quiral en enantiomeros 3A y 3B:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-cloro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 3b (3.1 g, 7.26 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (1.33 g, 7.26 mmol) y diisopropiletilamina (1.9 mL, 10.9 mmol) en CH3CN/THF (1/1) (120 mL) se agito a 70°C durante 24 h. La mezcla se concentro bajo presion reducida. El residuo se diluyo con CH2Cl2 y se lavo con HCl 1N. La capa organica se separo, se seco sobre MgSO4, se filtro y el disolvente se evaporo bajo presion reducida. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna sobre gel de silice (15-40 pm, 80 g en CH2Cl2/MeOH (99.5/0.5)). Las fracciones puras se recogieron y se evaporaron bajo presion reducida (2.3 g). Una pequena cantidad se cristalizo a partir de Et2O/CH3CN para proporcionar una muestra analitica de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-cloro-7-metil-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 3) como un racemato.
Los enantiomeros de Compuesto 3 (2.2 g) se separaron mediante SFC preparativa quiral (fase estacionaria: (S,S) Whelk-O 15 pm 250 x 21.1 mm, fase movil: 45% CO2, 55% EtOH (+ 2% CH2Cb)) para proporcionar 1.11 g del primer enantiomero eluido y 1.07 g del segundo enantiomero eluido. El primer enantiomero eluido se solidifico a partir de CH3CN/Et2O/heptano para proporcionar el enantiomero 3A (461 mg) como un polvo amorfo blanco. El segundo enantiomero eluido se solidifico a partir de CH3CN/Et2O/ heptano para proporcionar el enantiomero 3B (872 mg) como un polvo amorfo blanco.
Compuesto 3:
1H RMN (500 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 12.26 (d, J=2.8 Hz, 1 H) 8.46 (d, J=3.2 Hz, 1 H) 7.97 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.22 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.18 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 5.71 (t, J=2.2 Hz, 1 H) 4.79 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 3.96 (s, 3 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.58 - 3.67 (m, 5 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 3.28 min, MH+ 529
Punto de fusion: 220°C
Enantiomero 3A:
1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 12.26 (s a, 1 H) 8.46 (s, 1 H) 7.97 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1 H)
7.21 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.18 (d, J=8.2 1 H) 5.95 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 5.71 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 4.79 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 3.97 (s, 3 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.59 -3.67 (m, 5 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 3.27 min, MH+ 529
[a]D20: 88.8° (c 0.2691, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-E): Rt 3.40 min, MH+ 529, pureza quiral 100%.
Enantiomero 3B:
1H RMN (500 MHz, DMSO-ofe) 5 ppm 12.26 (s a, 1 H) 8.45 (s, 1 H) 7.97 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.5 Hz, 1 H)
7.21 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.18 (d, J=8.2 1 H) 5.95 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 5.71 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 4.79 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 3.97 (s, 3 H) 3.76 - 3.90 (m, 2 H) 3.60-3.66
(m, 5 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 3.27 min, MH+ 529
[a]D20: -87.4° (c 0.2564, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-E): Rt 4.19 min, MH+ 529, pureza quiral 100%.
Ejemplo_____4: Sintesis de 1 -(6-cloro-1 H-indol-3-il)-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 4) y separacion quiral en enantiomeros 4A y 4B.
Figure imgf000016_0001
Sintesis del intermediario 4a:
Se agrego cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (19.8 mL, 19.8 mmol) por goteo a 0°C a una solucion de 6-cloro-1H-indol [CAS 17422-33-2] (2 g, 13.2 mmol) en CH2Cl2 (45 mL). Despues de 30 min a 0°C, se agrego lentamente una solucion de cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 1a (3.36 g, 15.3 mmol, para sintesis: vease Ejemplo 1) en CH2Cl2 (45 mL) a 0°C. La reaccion se agito a 0°C durante 3 h. Se agrego hielo-agua y el precipitado se filtro, se lavo con agua y una cantidad minima de CH2Cl2. El solido se seco al vacio para proporcionar 1-(6-cloro-1 H-indol-3-il)-2-(4-cloro-2-metoxifenil)etanona 4a (2.68 g).
Sintesis del intermediario 4b:
A 0°C, una solucion de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (3.165 g, 8.4 mmol) en THF (50 mL) se agrego por goteo a una solucion de 1-(6-cloro-1 H-indol-3-il)-2-(4-cloro-2-metoxifenil)etanona 4a (2.68 g, 8 mmol) en
THF (50 mL). La mezcla se agito a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 2.5 h. El precipitado se filtro y se lavo con EtOAc. El filtrado se concentro bajo presion reducida. El residuo se disolvio en EtOAc y se lavo con agua.
Se formo un precipitado y los solidos se filtraron y se secaron al vacio para proporcionar 2-bromo-1-(6-cloro-1 H-indol-3-il)-2-(4-cloro-2-metoxifenil)etanona 4b (2.75 g).
Sintesis de compuesto 4 y separacion quiral en enantiomeros 4A y 4B:
Una mezcla de 2-bromo-1 -(6-cloro-1 H-indol-3-il)-2-(4-cloro-2-metoxifenil)etanona 4b (2.3 g, 5.6 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (1.53 g, 8.4 mmol) y diisopropiletilamina (2.4 mL, 13.9 mmol) en CH3CN/THF (1/1) (140 mL) se agito a 50°C durante 12 h. La mezcla se concentro bajo presion reducida. El residuo se diluyo con EtOAc, se lavo con HCl 1N, y posteriormente con agua. La capa organica se seco sobre MgSO4, se filtro y el disolvente se evaporo bajo presion reducida. El compuesto bruto se purifico mediante cromatografia en columna sobre gel de silice (15-40 gm, 80 g en CH2Cl2/MeOH (99.5/0.5)). Las fracciones puras se recogieron y se evaporaron bajo presion reducida. Una pequena cantidad se cristalizo a partir de Et2O/CH3CN para proporcionar una muestra analitica de 1 -(6-cloro-1 H-indol-3-il)-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 4) como una mezcla racemica. La cantidad restante de Compuesto 4 (2.1 g) se purifico adicionalmente mediante LC preparativa (fase estacionaria: silice irregular en columna 150 g, fase movil: tolueno/iPrOH 95/5).
Los enantiomeros de Compuesto 4 (1.9 g) se separaron mediante SFC preparativa quiral (fase estacionaria: Quiralpak® IC 5 gm 250 x 30 mm, fase movil: 60% CO2, 40% MeOH) para proporcionar 870 mg del primer enantiomero eluido y 870 mg del segundo enantiomero eluido. Los dos enatiomeros se purificaron nuevamente mediante cromatografia ultrarrapida sobre gel de silice (15-40 gm, 24 g en CH2Cl2/MeOH (99.5/0.5)). El primer enantiomero eluido (800 mg) se solidifico a partir de CHaCN/Et2O para proporcionar el enantiomero 4A (693 mg) como un polvo amorfo blanco. El segundo enantiomero eluido se solidifico a partir de CHaCN/Et2O para proporcionar el enantiomero 4B (619 mg) como un polvo amorfo blanco.
Compuesto 4:
1H RMN (500 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 3.60 (s, 3 H) 3.64 (t, J=5.0 Hz, 2 H) 3.75 - 3.88 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.38 -5.09 (m, 1 H) 5.71 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.13 - 6.18 (m, 1 H) 6.35 - 6.46 (m, 1 H) 6.97 (dd, J=8.4, 1.9 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=2.2 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.5, 1.9 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.53 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 8.13 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 8.46 (d, J=2.8 Hz, 1 H) 12.13 (d, J=2.8 Hz, 1 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 3.11 min, MH+ 515
Punto de fusion: 154°C
Enantiomero 4A:
1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 3.60 (s, 3 H) 3.64 (c, J=5.0 Hz, 2 H) 3.74 - 3.88 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.79 (t, J=5.0 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.15 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.41 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.5, 1.9 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.53 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 8.13 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 8.46 (s, 1 H) 12.12 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 3.13 min, MH+ 515
[a]D20: 111.6° (c 0.284, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-A): Rt 3.68 min, MH+ 515, pureza quiral 100%.
Enantiomero 4B:
1H RMN (500 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.68 (m, 2 H) 3.76 - 3.89 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.74 - 4.83 (m, 1 H) 5.72 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.15 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.42 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.5, 1.9 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.53 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 8.13 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 8.46 (s, 1 H) 12.13 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 3.14 min, MH+ 515
[a]D20: -113.9° (c 0.288, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-A): Rt 5.04 min, MH+ 515, pureza quiral 100%.
Ejemplo 5: Sintesis 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1 -(6-metoxi-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 5) y separacion quiral en enantiomeros 5A y 5B.
Figure imgf000018_0001
Sintesis del intermediario 5a:
Una solucion de NaHSO3 (5.7 g, 54.5 mmol) en agua (45 mL) se agrego una solucion agitada de 3-formil-6-metoxi-1 H-indol-1-carboxilato de terc-butilo [CAS 847448-73-1] (10 g, 36.3 mmol) en dioxano (45 mL). Despues de 15 min, se agrego morfolina (4.8 mL, 54.5 mmol) y 35 min despues, se agrego sodio cianuro (NaCN) (1.96 g, 40 mmol). La suspension resultante se agito a temperatura ambiente durante 3 dias, hasta que se completo de la reaccion. El producto se filtro y se lavo con una mezcla 1/1 de dioxano/agua (3x 35 mL) y posteriormente con agua (3x 45 mL) y se seco al vacio a 60°C. Los solidos se agitaron en Et2O (125 mL), se filtraron, se lavaron con Et2O (3x) y se secaron al vacio a 50°C para proporcionar 3-(ciano(morfolino)metil)-6-metoxi-1 H-indol-1 -carboxilato de terc-butilo 5a (12.3 g).
Sintesis del intermediario 5b:
Una mezcla de 3-(ciano(morfolino)metil)-6-metoxi-1 H-indol-1-carboxilato de terc-butilo 5a (6.0 g, 16.2 mmol) en DMF seco (80 mL) se agito bajo atmosfera-N mientras se enfriaba en un bano de hielo. Una solucion de KHMDS 0.5 M en tolueno (35.5 mL, 17.8 mmol) se agrego por goteo durante 10 min. Despues de agitar durante 10 min adicionales, se agrego 4-cloro-1-(clorometil)-2-metoxibenceno [CAS 101079-84-9] (3.09 g, 16.2 mmol) y la mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 20 h. La mezcla de reaccion se vertio en agua fria (400 mL) y el producto se extrajo con Et2O (2x). Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron, se evaporaron bajo presion reducida y se co-evaporaron con xileno. El residuo se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (fase estacionaria: Biotage® Grace Reveleris Silice 120 g, fase movil: gradiente heptano/EtOAce 100/0 a 20/80). Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron bajo presion reducida y se co-evaporaron con dioxano para proporcionar 3-(2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-ciano-1-morfolinoetil)-6-metoxi-1 H-indol-1-carboxilato de terc-butilo 5b (7.75 g).
Sintesis del intermediario 5c:
A una suspension agitada de 3-(2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-ciano-1-morfolinoetil)-6-metoxi-1 H-indol-1-carboxilato de terc-butilo 5b (7.75 g, 14.7 mmol) en dioxano (40 mL) y agua (20 mL) se agrego una solucion de HCl 6M en isopropanol (36.8 mL, 220 mmol). La mezcla resultante se agito a 60°C durante 4 h y posteriormente a 80°C durante 1 hora. Despues de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se dejo reposar durante 20 h para permitir la cristalizacion del producto de reaccion. El producto se filtro, se lavo con una mezcla 1/1/1 de /PrOH/H2O/dioxano (2x 15 mL) y se seco al vacio a 50°C para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-1 H-indol-3-il)etanona 5c (3.67 g).
Sintesis de compuesto 5 y separacion quiral en enantiomeros 5A y 5B:
Una mezcla agitada de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-1H-indol-3-il)etanona 5c (2.35 g, 7.13 mmol) en THF (100mL) se enfrio en un bano de hielo bajo atmosfera-N2. Se agrego tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56­ 1] (2.81 g, 7.48 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a 0°C durante 1 h y posteriormente a temperatura ambiente durante 1.5 h. Se agregaron 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (2.61 g, 14.3 mmol), diisopropiletilamina (2.46 mL, 14.3 mmol) y CH3CN (100 mL) y la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 18 h y at 55°C durante 2 h. La mezcla de reaccion se concentro bajo presion reducida a 50% del volumen original. Se agregaron 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1 ] (1 g) y diisopropiletilamina (1.5 mL) y la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 65 h. La mezcla de reaccion se vertio en agua (400 mL) y el producto se extrajo con 2-MeTHF (2x). Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se evaporaron bajo presion reducida. El residuo (7 g) se purifico mediante cromatografia ultrarrapida (fase estacionaria: Biotage® Grace Reveleris Silice 120 g, fase movil: heptano/EtOAc/EtOH gradiente 100/0/0 a 50/37/13). Las fracciones deseadas se combinaron y se evaporaron bajo presion reducida. El residuo (5.8 g) se purifico adicionalmente mediante HPLC preparativa (fase estacionaria: Uptisphere® C18 ODB - 10 pm, 200 g, 5 cm, fase movil: 0.25% NH4HCO3 solucion en agua, CH3CN). Las fracciones del producto se combinaron y se evaporaron bajo presion reducida. El residuo se disolvio en MeOH (20 mL) y se dejo reposar para cristalizar durante 4 h. Los solidos se filtraron, se lavaron con MeOH (3x 5 mL) y se secaron al vacio a 50°C para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(6-metoxi-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 5, 2.06 g) como una mezcla racemica.
La separacion quiral de Compuesto 5 (2 g) se realizo mediante separacion quiral de fase normal (fase estacionaria: AD-H, fase movil: 50% metanol, 50% etanol). Las fracciones del producto se combinaron y se evaporaron bajo presion reducida. El primer enantiomero eluido se cristalizo a partir de una solucion agitada de MeOH (13 mL) mediante la adicion de agua (3 mL). Despues de agitacion durante la noche, los solidos se filtraron, se lavaron con una mezcla 3/1 de MeOH/H2O (4x 3mL) y se secaron al vacio a 50°C para proporcionar el enantiomero 5A (476 mg). El segundo enantiomero eluido se cristalizo a partir de una solucion agitada de MeOH (13 mL) mediante la adicion de agua (3 mL). Despues de agitacion durante la noche, los solidos se filtraron, se lavaron con una mezcla 3/1 de MeOH/H2O (4x 3mL) y se secaron al vacio a 50°C para proporcionar el enantiomero 5B (362 mg).
Compuesto 5:
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.65 (c, J=5.3 Hz, 2 H) 3.77 (s, 3 H) 3.78 - 3.90 (m, 2 H) 3.97 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.13 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.36 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.83 (dd, J=8.7, 2.3 Hz, 1 H) 6.92 - 7.00 (m, 2 H) 7.09 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 8.01 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 8.29 (d, J=2.9 Hz, 1 H) 11.81 (d a, J=2.2 Hz, 1 H)
LC/MS (metodo LC-B): Rt 1.93, MH+ 511
Enantiomero 5A:
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (c, J=5.4 Hz, 2 H) 3.77 (s, 3 H) 3.78 - 3.90 (m, 2 H) 3.97 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.13 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.36 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.83 (dd, J=8.7, 2.3 Hz, 1 H) 6.92 - 6.99 (m, 2 H) 7.09 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 8.01 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.29 (d, J=3.1 Hz, 1 H) 11.81 (d a, J=2.4 Hz, 1 H)
LC/MS (metodo LC-A): Rt 1.08, MH+ 511
[a]D20: 109.3° (c 0.61, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-G): Rt 1.78 min, MH+ 511, pureza quiral 100%
Enantiomero 5B:
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (c, J=5.2 Hz, 2 H) 3.77 (s, 3 H) 3.78 - 3.89 (m, 2 H) 3.97 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.12 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.35 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.82 (dd, J=8.7, 2.3 Hz, 1 H) 6.91 - 7.01 (m, 2 H) 7.09 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 8.01 (d, J=8.6 Hz, 1 H)
LC/MS (metodo LC-A): Rt 1.08, MH+ 511
[a]D20: -108.9° (c 0.52, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-G): Rt 2.19 min, MH+ 511, pureza quiral 100%
Ejemplo 6: Sintesis de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1 -(6-metoxi-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 6) y separacion quiral en enantiomeros 6A y 6B.
Figure imgf000020_0001
Sintesis del intermediario 6a:
Se agrego cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (13.5 mL, 13.5 mmol) por goteo a 0°C a una solucion de 6-metoxi-5-metil-1 H-indol [CAS 1071973-95-9] (1.45 g, 9 mmol) en CH2Cl2 (45 mL). Despues de 30 min a 0°C, una solucion de cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 1a (2.4 g, 10.9 mmol, para sintesis: vease Ejemplo 1) en CH2Cl2 (45 mL) se agrego lentamente a 0°C. La reaccion se agito a 0°C durante 3 h. Se agrego hielo-agua y el precipitado se filtro y se lavo con agua. El solido se seco al vacio para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 6a (2.1 g).
Sintesis del intermediario 6b:
A 0°C, se agrego por goteo una solucion de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (2.4 g, 6.4 mmol) en THF (65 mL) a una mezcla de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 6a (2.1 g, 6.1 mmol) en THF (60 mL). La mezcla se agito a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 2.5 h. El precipitado se filtro y se lavo con EtOAc. El filtrado se concentro bajo presion reducida. El residuo se recogio con una cantidad minima de diisopropileter. El precipitado se filtro y se seco al vacio para proporcionar 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 6b (2.36 g).
Sintesis de compuesto 6 y separacion quiral en enantiomeros 6A y 6B:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 6b (1.35 g, 3.2 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (0.585 g, 3.2 mmol) y diisopropiletilamina (0.83 mL, 4.8 mmol) en CH3CN/THF (1/1) (80 mL) se agito a 70°C durante 24 h. La mezcla se concentro bajo presion reducida. El residuo se diluyo con CH2Cl2, se lavo con HCl 1N y agua. La capa organica se separo, se seco sobre MgSO4, se filtro y el disolvente se evaporo bajo presion reducida. El compuesto bruto se purifico mediante cromatografia en columna sobre gel de silice (15-40 pm, 80 g en CH2Cb/MeOH (99.5/0.5)). Una pequena cantidad se cristalizo a partir de Et2O/CH3CN para proporcionar una muestra analitica de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)-1-(6-metoxi-5-metil-1H-indol-3-il)etanona (Compuesto 6) como una mezcla racemica. La cantidad restante de Compuesto en bruto 6 se mezclo con otra partida (cantidad total 1.19 g) y se purifico adicionalmente dos veces mediante LC preparativa (fase estacionaria: silice irregular en columna 150 g, fase movil: CH2Cb/MeOH (98/2), y posteriormente tolueno/iPrOH (95/5).
Los enantiomeros de Compuesto 6 (950 mg) se separaron mediante SFC preparativa quiral (fase estacionaria: Quiralpak® IC 5 pm 250 x 30 mm, fase movil: 50% CO2, 50% MeOH) para proporcionar 485 mg del primer enantiomero eluido y 480 mg del segundo enantiomero eluido. El primer enantiomero eluido se solidifico a partir de CH3CN/Et2O para proporcionar el enantiomero 6A (406 mg) como un polvo amorfo blanco. El segundo enantiomero eluido se solidifico a partir de CH3CN/Et2O para proporcionar el enantiomero 6B (436 mg) como un polvo amorfo blanco.
Compuesto 6:
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 2.21 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.68 (m, 2 H) 3.74 - 3.90 (m, 5 H) 3.97 (s, 3 H) 4.76 (t, J=4.8 Hz, 1 H) 5.68 - 5.74 (m, 1 H) 5.93 (d, J=1.5 Hz, 2 H) 6.11 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 6.31 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 6.92 (s, 1 H) 6.95 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.3 Hz, 1 H) 7.89 (s, 1 H) 8.22 (s, 1 H) 11.73 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 3.02 min, MH+ 525
Enantiomero 6A:
1H RMN (500 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 2.20 (s, 3 H) 3.60 (s, 3 H) 3.64 (c, J=5.3 Hz, 2 H) 3.75 - 3.88 (m, 5 H) 3.97 (s, 3 H) 4.78 (t, J=5.3 Hz, 1 H) 5.70 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.11 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.33 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.92 (s, 1 H) 6.95 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.88 (s, 1 H) 8.23 (s, 1 H) 11.75 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 3.04 min, MH+ 525
[a]D20: 116.8° (c 0.4536, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-B): Rt 2.40 min, MH+ 525, pureza quiral 100%.
Enantiomero 6B:
1H RMN (500 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 2.20 (s, 3 H) 3.60 (s, 3 H) 3.64 (c, J=5.4 Hz, 2 H) 3.77 - 3.88 (m, 5 H) 3.97 (s, 3 H) 4.78 (t, J=5.4 Hz, 1 H) 5.70 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.11 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.33 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.92 (s, 1 H) 6.95 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.88 (s, 1 H) 8.23 (s, 1 H) 11.75 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 3.04 min, MH+ 525
[a]D20: -121.9° (c 0.3855, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-B): Rt 3.75 min, MH+ 525, pureza quiral 99.86%.
Ejemplo 7: Sintesis de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(5-fluoro-6-metoxi-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 7) y separacion quiral en enantiomeros 7A y 7B.
Figure imgf000021_0001
Sintesis del intermediario 7a:
Se agrego cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (15.7 mL, 15.7 mmol) por goteo a 0°C a una solucion de 5-fluoro-6-metoxi-1 H-indol [CAS 1211595-72-0] (2 g, 12.1 mmol) en CH2Cl2 (50 mL). Despues de 30 min a 0°C, una solucion de cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 1a (3.2 g, 14.6 mmol, para sintesis: vease Ejemplo 1) en CH2Cl2 (50 mL) se agrego lentamente a 0°C. La reaccion se agito a 0°C durante 3 h. Se agrego hielo-agua y el precipitado se filtro, se lavo con agua y una cantidad minima de CH2Cl2. El solido se seco al vacio para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(5-fluoro-6-metoxi-1 H-indol-3-il)etanona 7a (2.82 g).
Sintesis del intermediario 7b:
A 0°C, una solucion de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (3.5 g, 8.1 mmol) en THF (20 mL) se agrego por goteo a una solucion de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-6-metoxi-1 H-indol-3-il)etanona 7a (2.82 g, 8.1 mmol) en THF (46 mL). La mezcla se agito a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 4 h. El precipitado se filtro y se lavo con EtOAc. El filtrado se concentro bajo presion reducida. El residuo se disolvio en EtOAc, se lavo con agua. La fase organica se seco sobre MgSO4, se filtro y el disolvente se evaporo bajo presion reducida. El residuo se recogio con una cantidad minima de EtOAc. El precipitado se filtro y se seco al vacio para proporcionar 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-6-metoxi-1 H-indol-3-il)etanona 7b (2.5 g).
Sintesis de compuesto 7 y separacion quiral en enantiomeros 7A y 7B:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-6-metoxi-1H-indol-3-il)etanona 7b (2.4 g, 5.6 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (1.5 g, 8.2 mmol) y diisopropiletilamina (1.45 mL, 8.4 mmol) en CH3CN/THF (1/1) (48 mL) se agito a 50°C durante 12 h. La mezcla se concentro bajo presion reducida. El residuo se diluyo con EtOAc, se lavo con HCl 1N y agua. La capa organica se separo, se seco sobre MgSO4, se filtro y el disolvente se evaporo bajo presion reducida. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna sobre gel de silice (15-40 pm, 80 g en CH2Cl2/MeOH (99.5/0.5)). Las fracciones puras se recogieron y se evaporaron bajo presion reducida. Una pequena cantidad se solidifico a partir de Et2O/CHaCN para proporcionar una muestra analitica de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-6-metoxi-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 7) como una mezcla racemica.
Los enantiomeros de Compuesto 7 (1.6 g) se separaron mediante SFC preparativa quiral (fase estacionaria: Quiralpak® IC 5 pm 250 x 30 mm, fase movil: 55% CO2, 45% MeOH) para proporcionar 680 mg del primer enantiomero eluido y 720 mg del segundo enantiomero eluido. El primer enantiomero eluido se solidifico a partir de CHaCN/Et2O para proporcionar el enantiomero 7A (603 mg) como un polvo amorfo blanco. El segundo enantiomero eluido se solidifico a partir de CHaCN/Et2O para proporcionar el enantiomero 7B (505 mg) como un polvo amorfo blanco.
Compuesto 7:
1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 3.60 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.74 - 3.88 (m, 5 H) 3.96 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.3 Hz, 1 H) 5.66 - 5.75 (m, 1 H) 5.92 (d, J=1.8 Hz, 2 H) 6.12 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=8.1, 1.8 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.14 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.81 (d, J=11.6 Hz, 1 H) 8.33 (s, 1 H) 11.94 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 2.90 min, MH+ 529
Enantiomero 7A:
1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 3.60 (s, 3 H) 3.64 (c, J=5.5 Hz, 2 H) 3.76 - 3.88 (m, 5 H) 3.96 (s, 3 H) 4.79 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=1 .9 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.12 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.39 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=8.2, 2.0 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.14 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.81 (d, J=11.7 Hz, 1 H) 8.34 (s, 1 H) 11.95 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 2.90 min, MH+ 529
[a]D20: 86.2° (c 0.232, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-B): Rt 2.28 min, MH+ 529, pureza quiral 100%.
Enantiomero 7B:
1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 3.60 (s, 3 H) 3.64 (c, J=5.5 Hz, 2 H) 3.76 - 3.88 (m, 5 H) 3.96 (s, 3 H) 4.79 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.12 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.39 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.14 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.81 (d, J=12.0 Hz, 1 H) 8.34 (s, 1 H) 11.95 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 2.90 min, MH+ 529
[a]D20: -88.7° (c 0.3, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-B): Rt 4.04 min, MH+ 529, pureza quiral 100%.
Ejemplo 8: Sintesis de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(5-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 8) y separacion quiral en enantiomeros 8A y 8B.
Figure imgf000023_0001
Sintesis del intermediario 8a:
Se agrego cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (15.0 mL, 15.0 mmol) por goteo a 0°C a una solucion de 5-fluoro-7-metil-1 H-indol [CAS 1082041-52-8] (1.49 g, 10.0 mmol) en CH2Cl2 (20 mL). Despues de 30 min a 0°C, una solucion de cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 1a (3.28 g, 15.0 mmol, para sintesis: vease Ejemplo 1) en CH2Cl2 (10 mL) se agrego lentamente a 0°C. La reaccion se agito a 0°C durante 3 h. Se agrego solucion 1M de sal de Rochelle y la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 30 min. Los solidos que se formaron se filtraron y se repartieron entre EtOAc y HCl 1N. Las fases se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 8a (2.03 g).
Sintesis del intermediario 8b:
Una solucion de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (2.53 g, 6.72 mmol) en THF (10 mL) se agrego por goteo a 0°C a una solucion de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 8a (2.03 g, 6.11 mmol) en THF (50 mL). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante la noche. El precipitado se filtro y se lavo con EtOAc. El filtrado se concentro bajo presion reducida. El residuo se recogio con una cantidad minima de acetonitrilo. El precipitado se filtro, se lavo con acetonitrilo y se seco al vacio para proporcionar 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 8b (2.00 g).
Sintesis de compuesto 8 y separacion quiral en enantiomeros 8A y 8B:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 8b (1.70 g, 4.14 mmol) y 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (2.28 g, 12.4 mmol) en THF (10 mL) y CH3CN (10 mL) se agito a temperatura ambiente durante 3 dias. La mezcla de reaccion se concentro bajo presion reducida. El residuo se repartio entre EtOAc y HCl 1N. Las fases se separaron. La fase organica se lavo dos veces con HCl 1N, con una solucion de NaHCO3 acuoso saturado y salmuera, se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro bajo presion reducida. El residuo se recogio con una cantidad minima de acetonitrilo. El precipitado se filtro y se seco al vacio para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(5-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)ethan-ona (Compuesto 8, 1.23 g) como una mezcla racemica.
Los enantiomeros del Compuesto 8 (1.17 g) se separaron mediante separacion quiral de fase normal (fase estacionaria: Daicel Quiralpak® OD-H, fase movil: 80% heptano, 20% etanol). El primer producto eluido se purifico adicionalmente mediante cromatografia ultrarrapida (fase estacionaria: Biotage® Grace Reveleris Silice 12 g, fase movil: heptano/EtOAc/EtOH gradiente 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron. El producto se cristalizo durante la noche a partir de una mezcla de MeOH (4 mL) y agua (1 mL), se filtro, se lavo con MeOH (3x) y se seco al vacio a 50°C para proporcionar el enantiomero 8A (37 mg). El segundo producto eluido se purifico adicionalmente mediante cromatografia ultrarrapida (fase estacionaria: Biotage® Grace Reveleris Silice 12 g, fase movil: heptano/EtOAc/EtOH gradiente 100/0/0 a 40/45/15). Las fracciones puras se combinaron y se evaporaron. El producto se cristalizo a partir de una mezcla de MeOH y H2O, se filtro, se lavo con MeOH y se seco al vacio a 50°C para proporcionar el enantiomero 8B (177 mg).
Compuesto 8:
1H RMN (300 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 2.48 (s, 3 H) 3.56 - 3.71 (m, 5 H) 3.74 - 3.92 (m, 2 H) 3.97 (s, 3 H) 4.79 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (s, 1 H) 5.95 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.17 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.40 (d, J=8.3 Hz, 1 H) 6.87 - 7.01 (m, 2 H) 7.10 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.3 Hz, 1 H) 7.65 (dd, J=9.8, 2.3 Hz, 1 H) 8.46 (s, 1 H) 12.22 (s a, 1 H) LC/MS (metodo LC-D): Rt 1.52 min, MH+ 513
Enantiomero 8A:
1H RMN (400 MHz, DMSO-^) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (c, J=5.2 Hz, 2 H) 3.77 (s, 3 H) 3.78 - 3.89 (m, 2 H) 3.97 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.71 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.12 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.35 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.82 (dd, J=8.7, 2.3 Hz, 1 H) 6.91 - 7.01 (m, 2 H) 7.09 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 8.01 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 8.29 (d, J=2.9 Hz, 1 H) 11.81 (d a, J=2.4 Hz, 1 H)
LC/MS (metodo LC-A): Rt 1.12 min, MH+ 513
[a]D20: -83.8° (c 0.4725, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-G): Rt 2.32 min, MH+ 513, pureza quiral 100%
Enantiomero 8B:
1H RMN (400 MHz, DMSO-ofe) 5 ppm 2.47 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.65 (c, J=5.2 Hz, 2 H) 3.77 - 3.90 (m, 2 H) 3.97 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.16 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.37 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.92 (dd, J=10.1,2.0 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=8.3, 1.9 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.8 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.65 (dd, J=9.7, 2.4 Hz, 1 H) 8.45 (d, J=3.5 Hz, 1 H) 12.20 (d a, J=2.9 Hz, 1 H)
LC/MS (metodo LC-A): Rt 1.14 min, MH+ 513
[a]D20: 86.6° (c 0.4805, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-G): Rt 1.44 min, MH+ 513, pureza quiral 100%
Ejemplo 9: Sintesis de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(5,6-difluoro-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 9) y separacion quiral en enantiomeros 9A y 9B.
Figure imgf000024_0001
Sintesis del intermediario 9a:
Se agrego por goteo cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (14.9 mL, 14.9 mmol) a 0°C a una solucion de 5,6-difluoro-1H-indol [CAS 169674-01-5] (1.50 g, 9.8 mmol) en CH2Cl2 (20 mL). Despues de 30 min a 0°C, se agrego lentamente una solucion de cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 1a (3.22 g, 14.7 mmol, para sintesis: vease Ejemplo 1) en CH2Cl2 (20 mL) a 0°C. La reaccion se agito a 0°C durante 2 h. Se agrego solucion 1M de sal de Rochelle y la mezcla de reaccion se agito vigorosamente a temperatura ambiente durante 2 h. El precipitado se filtro y se repartio entre EtOAc y HCl 1N. Las fases se separaron. La capa acuosa se extrajo dos veces con EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida. El residuo se recogio con una cantidad minima de acetonitrilo. El precipitado se filtro y se seco al vacio para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(5,6-difluoro-1 H-indol-3-il)etanona 9a (2.73 g).
Sintesis del intermediario 9b:
Una solucion de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (3.36 g, 8.94 mmol) en THF (50 mL) se agrego por goteo a 0°C a una solucion de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5,6-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-cloro-2-metoxifenil)etanona 9a (2.73 g, 8.13 mmol) en THF (80 mL). La mezcla de reaccion se agito a 0°C durante 15 min y a temperatura ambiente durante 2 h. El precipitado se filtro y se lavo con EtOAc. El filtrado se concentro bajo presion reducida. El residuo se recogio con una cantidad minima de acetonitrilo. El precipitado se filtro y se seco al vacio para proporcionar 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(5,6-difluoro-1 H-indol-3-il)etanona 9b (3.00 g).
Sintesis de compuesto 9 y separacion quiral en enantiomeros 9A y 9B:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5,6-difluoro-1H-indol-3-il)etanona 9b (1.80 g, 4.34 mmol) y 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (2.39 g, 13.0 mmol) en t Hf (9 mL) y CH3CN (9 mL) se agito a temperatura ambiente durante 65 h. Se agrego HCl 1N y la mezcla de reaccion se extrajo con EtOAc. Las fases se separaron. La fase organica se lavo con HCl 1N, se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro bajo presion reducida. El residuo se purifico mediante cromatografia ultrarrapida sobre gel de silice utilizando un gradiente de EtOAc (15% a 70%) en diclorometano. Las fracciones puras se combinaron y se concentraron bajo presion reducida para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(5,6-difluoro-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 9, 1.20 g) como una mezcla racemica. Las fracciones impuras se combinaron y se purificaron mediante cromatografia ultrarrapida sobre gel de silice utilizando un gradiente de acetato de etilo (15% a 70%) en diclorometano para proporcionar una segunda partida de Compuesto 9 (0.290 g) como una mezcla racemica.
Los enantiomeros de Compuesto 9 (1.4 g) se separaron mediante separacion quiral de fase normal (fase estacionaria: Daicel Quiralpak® OD-H, fase movil: 80% heptano, 20% etanol). El primer producto eluido se purifico adicionalmente mediante cromatografia ultrarrapida (fase estacionaria: Biotage® Grace Reveleris Silice 12 g, fase movil: CH2Cl2/MeOH gradiente de 100/0 a 90/10). Las fracciones puras se combinaron, se evaporaron y se coevaporaron con MeOH. El residuo se liofilizo desde una mezcla disolvente de CH3CN (4.5 mL) y agua (2.5 mL) y se seco al vacio a 45°C para proporcionar el enantiomero 9A (409 mg). El segundo producto eluido se purifico adicionalmente mediante cromatografia ultrarrapida (fase estacionaria: Biotage® Grace Reveleris Silice 12 g, fase movil: CH2Cl2/MeOH gradiente de 100/0 a 90/10). Las fracciones puras se combinaron, se evaporaron y se coevaporaron con MeOH. El residuo se liofilizo desde una mezcla disolvente de CH3CN (5 mL) y agua (3 mL) y se seco al vacio a 45°C para proporcionar el enantiomero 9B (388 mg).
Compuesto 9:
1H RMN (300 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.70 (m, 2 H) 3.75 - 3.90 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.79 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.72 (t, J= 2.1 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.0 Hz,1 H) 6.15 (d, J=8.1 Hz,1 H) 6.42 (d, J=8.1 Hz,1 H) 6.97 (dd, J=8.2, 2.2 Hz,1 H) 7.10 (d, J=2.0 Hz,1 H) 7.35 (d, J=8.3 Hz,1 H) 7.54 (dd, J=10.8, 7.0 Hz,1 H) 7.99 (dd, J=11.2, 8.2 Hz,1 H) 8.48 (s, 1 H) 12.19 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-D): Rt 1.44 min, MH+ 517
Enantiomero 9A:
1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (c, J=5.2 Hz, 2 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.39 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.53 (dd, J=10.8, 7.0 Hz, 1 H) 7.99 (dd, J=11.2, 8.1 Hz, 1 H) 8.47 (s, 1 H) 12.16 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-A): Rt 1.15 min, MH+ 517
[a]D20: -98.9° (c 0.445, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-G): Rt 1.92 min, MH+ 517, pureza quiral 100%
Enantiomero 9B:
1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 3.61 (s, 3 H) 3.64 (c, J=5.2 Hz, 2 H) 3.75 - 3.91 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.6 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.1 Hz, 1 H) 5.93 (d, J=2.2 Hz, 2 H) 6.14 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.39 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 7.53 (dd, J=10.8, 7.0 Hz, 1 H) 7.99 (dd, J=11.1, 8.3 Hz, 1 H) 8.47 (s, 1 H) 12.16 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-A): Rt 1.15 min, MH+ 517
[a]D20: 98.9° (c 0.555, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-G): Rt 1.36 min, MH+ 517, pureza quiral 100%
Ejemplo 10: Sintesis de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(7-fluoro-5-metil-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 10) y separation quiral en enantiomeros 10A y 10B.
Figure imgf000026_0001
Sintesis del intermediario 10a:
Se agrego por goteo cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (16 mL, 16 mmol) a -15°C a una solution de 7-fluoro-5-metil-1 H-indol [CAS 442910-91 -0] (1.59 g, 10.7 mmol) en CH2Cl2 (150 mL) bajo N2 flow. Despues de 15 min a -15°C, se agrego lentamente una solucion de cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 1a (3.27 g, 14.9 mmol, para sintesis: vease Ejemplo 1) en CH2Cl2 (50 mL) a -15°C. La reaction se agito a -15°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reaccion se vertio en una mezcla agitada de hielo/sal de Rochelle. Los solidos se eliminaron a partir de la mezcla de reaccion por filtration sobre una almohadilla corta de dicalite® y la torta de filtrado se lavo varias veces con THF. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con THF. Las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, agua, se secaron sobre MgSO4, se filtraron, y se evaporaron bajo presion reducida. El residuo solido se suspendio en CH2Cl2 (10 mL). Los solidos se filtraron, se lavaron con una pequena cantidad de CH2Cl2 y se secaron al vacio a 50°C para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(7-fluoro-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 10a (2.22 g).
Sintesis del intermediario 10b:
Una solucion de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (2.77 g, 7.36 mmol) en THF (50 mL) se agrego por goteo a 0°C a una solucion de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(7-fluoro-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 10a (2.22 g, 6.7 mmol) en THF (150 mL). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 h. El precipitado se filtro y se lavo con THF. El filtrado se concentro bajo presion reducida. El residuo se recogio con una cantidad minima de CH2Cl2. El precipitado se filtro, se lavo con CH2Cl2 (2x) y se seco al vacio a 50°C para proporcionar 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(7-fluoro-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 10b (2.55 g).
Sintesis de compuesto 10 y separacion quiral en enantiomeros 10A y 10B:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(7-fluoro-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 10b (2 g, 4.87 mmol), 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (1.6 g, 7.3 mmol) y diisopropiletilamina (1.26 mL, 7.3 mmol) en CH3CN (100 mL) se agito a temperatura ambiente durante 20 h, a 60°C durante 8 h y nuevamente a temperatura ambiente durante 16 h. El disolvente se evaporo bajo presion reducida. El residuo se disolvio en CH2Cl2 (50 mL), se lavo con HCl 0.5 M (50 mL) y agua (50 mL), se seco sobre MgSO4, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico mediante cromatografia en columna (fase estacionaria: Biotage® Grace Reveleris Silice 120 g, fase movil: EtOAc/heptano gradiente de 0/100 a 60/40). Las fracciones que contenian producto se combinaron, se evaporaron y se secaron a 50°C al vacio para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(7-fluoro-5-metil-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 10, 1.3 g) como un solido blanco.
Los enantiomeros de Compuesto 10 (1.3 g) se separaron mediante separacion quiral de fase normal (fase estacionaria: AD-H, fase movil: 70% etanol, 30% metanol) para proporcionar 637 mg del primer enantiomero eluido y 628 mg del segundo enantiomero eluido. El primer producto eluido se cristalizo a partir de una mezcla de MeOH/agua. Los solidos se filtraron y se lavaron con una mezcla de MeOH/agua (1/1) para proporcionar el enantiomero 10A (302 mg) como un polvo amorfo blanco. El segundo producto eluido se purifico adicionalmente mediante cromatografia ultrarrapida (fase estacionaria: Biotage® Grace Reveleris Silice 40 g, fase movil: MeOH/CH2Cl2 gradiente de 0/100 a 2/98). Las fracciones que contenian producto se combinaron y se evaporaron para proporcionar el enantiomero 10B (335 mg) como un polvo amorfo blanco.
Compuesto 10:
1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 2.38 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.62 - 3.67 (m, 2 H) 3.77 - 3.89 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.77 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.15 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.34 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.90 (d, J= 12.1 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.35 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.77 (s, 1 H) 8.38 (s, 1 H) 12.46 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-A): Rt 1.16 min, MH+ 513
Enantiomero 10A:
1H RMN (400 MHz, DMSO-^) 5 ppm 2.38 (s, 3 H) 3.62 (s, 3 H) 3.66 (t a, J=4.8 Hz, 2 H) 3.77 - 3.92 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.78 (s a, 1 H) 5.73 (s, 1 H) 5.96 (s, 2 H) 6.17 (d a, J=7.9 Hz, 1 H) 6.35 (d a, J=8.1 Hz, 1 H) 6.91 (d, J=12.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.3, 1.4 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.5 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.79 (s, 1 H) 8.39 (s, 1 H) 12.47 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-A): Rt 1.15 min, MH+ 513
[a]D20: 132.3° (c 0.505, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-F): Rt 2.13 min, MH+ 513, pureza quiral 100%
Enantiomero 10B:
1H RMN (400 MHz, DMSO-ofe) 5 ppm 2.38 (s, 3 H) 3.61 (s, 3 H) 3.63 - 3.68 (m, 2 H) 3.77 - 3.92 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.77 (t a, J=5.7 Hz, 1 H) 5.72 (t, J=2.0 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=2.0 Hz, 2 H) 6.16 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.35 (d, J=8.1 Hz, 1 H) 6.91 (d, J= 12.1 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1 H) 7.09 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 7.78 (s, 1 H) 8.39 (s, 1 H) 12.46 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-A): Rt 1.15 min, MH+ 513
[a]D20: -144.1° (c 0.4975, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-F): Rt 3.13 min, MH+ 513, pureza quiral 100%
Ejemplo 11: Sintesis de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(6,7-difluoro-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 11) y separacion quiral en enantiomeros 11A y 11B.
Figure imgf000027_0001
Sintesis del intermediario 11a:
Se agrego por goteo cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (15.0 mL, 15.0 mmol) a 0°C a una solucion de 6,7-difluoro-1H-indol [CAS 271780-84-8] (1.53 g, 10.0 mmol) en CH2Cl2 (20 mL). Despues de 30 min a 0°C, se agrego lentamente una solucion de cloruro de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acetilo 1a (3.28 g, 15.0 mmol, para sintesis: vease Ejemplo 1) en CH2CI2 (10 mL) a 0°C. La reaccion se agito a 0°C durante 3 h. Se agrego solucion 1M de sal de Rochelle y la mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 30 min. Los solidos se filtraron y se repartieron entre EtOAc y HCl 1N. Las fases se separaron. La capa acuosa se extrajo con EtOAc. Las fases organicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron bajo presion reducida para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6,7-difluoro-1 H-indol-3-il)etanona 11a (2.36 g).
Sintesis del intermediario 11b:
Una solucion de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (2.90 g, 7.02 mmol) en THF (10 mL) se agrego por goteo a 0°C a una solucion de 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6,7-difluoro-1H-indol-3-il)etanona 11a (2.36 g, 7.02 mmol) en THF (50 mL). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante la noche. El precipitado se filtro y se lavo con EtOAc. El filtrado se concentro bajo presion reducida. El residuo se recogio con una cantidad minima de acetonitrilo. El precipitado se filtro, se lavo con acetonitrilo y se seco al vacio para proporcionar 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6,7-difluoro-1H-indol-3-il)etanona 11b (2.34 g).
Sintesis de compuesto 11 y separacion quiral en enantiomeros 11A y 11B:
Una mezcla de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6,7-difluoro-1 H-indol-3-il)etanona 11b (1.70 g, 4.14 mmol) y 2-(3-amino-5-metoxifenoxi)etanol [CAS 725237-16-1] (2.25 g, 12.3 mmol) en THF (10 mL) y CH3CN (10 mL) se agito a temperatura ambiente durante 3 dias. La mezcla de reaccion se concentro bajo presion reducida. El residuo se repartio entre EtOAc y HCl 1N. Las fases se separaron. La fase organica se lavo dos veces con HCl 1N, con una solucion de NaHCO3 acuoso saturado y salmuera, se seco sobre MgSO4, se filtro y se concentro bajo presion reducida. El residuo se purifico mediante cromatografia ultrarrapida sobre gel de silice utilizando un gradiente de EtOAc (20% a 100%) en heptano. Las fracciones que contenian el compuesto deseado se combinaron y se concentraron bajo presion reducida. El residuo se cristalizo a partir de una mezcla de Et2O, acetonitrilo y heptano para proporcionar 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1 -(6,7-difluoro-1 H-indol-3-il)-2-((3-(2-hidroxietoxi)-5-metoxifenil)amino)etanona (Compuesto 11, 1.54 g) como una mezcla racemica.
Los enantiomeros de Compuesto 11 (1.22 g) se separaron mediante SFC preparativa quiral (fase estacionaria: Quiralcel® OD-H 5 pm 250 x 30 mm, fase movil: 55% CO2, 45% MeOH) para proporcionar 550 mg del primer enantiomero eluido y 570 mg del segundo enantiomero eluido. El primer enantiomero eluido se solidifico a partir de CHsCN/diisopropileter para proporcionar el enantiomero 11A (487 mg). El segundo enantiomero eluido se solidifico a partir de CH3CN/diisopropileter para proporcionar el enantiomero 11B (460 mg). Los enantiomeros se produjeron como polvos amorfos.
Compuesto 11:
1H RMN (300 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 3.56 - 3.69 (m, 5 H) 3.75 - 3.90 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 4.79 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 5.73 (s, 1 H) 5.95 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 6.18 (d, J=8.3 Hz, 1 H) 6.41 (d, J=8.3 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.1, 1.7 Hz, 1 H) 7.10 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 7.16 - 7.30 (m, 1 H) 7.36 (d, J=8.3 Hz, 1 H) 7.92 (dd, J=8.7, 4.5 Hz, 1 H) 8.50 (s, 1 H) 12.78 (s a, 1 H)
LC/MS (metodo LC-D): Rt 1.52 min, MH+ 517
Enantiomero 11A:
1H RMN (500 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 12.79 (s a, 1 H) 8.50 (s, 1 H) 7.92 (dd, J=8.7, 4.3 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 7.20 - 7.27 (m, 1 H) 7.10 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.4, 1.7 Hz, 1 H) 6.42 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.18 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=1.6 Hz, 2 H) 5.72 (s, 1 H) 4.79 (t, J=5.4 Hz, 1 H) 3.94 (s, 3 H) 3.78 - 3.89 (m, 2 H) 3.59 - 3.68 (m, 5 H) LC/MS (metodo LC-C): Rt 3.07 min, MH+ 517
[a]D20: -99.6° (c 0.2218, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-D): Rt 1.80 min, MH+ 517, pureza quiral 100%.
Enantiomero 11B:
1H RMN (500 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 12.79 (s a, 1 H) 8.50 (s, 1 H) 7.91 (dd, J=8.7, 4.3 Hz, 1 H) 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 7.17 - 7.28 (m, 1 H) 7.10 (d, J=1.9 Hz, 1 H) 6.97 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1 H) 6.41 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.18 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 5.95 (d, J=1.9 Hz, 2 H) 5.72 (t, J=1.9 Hz, 1 H) 4.79 (t, J=5.5 Hz, 1 H) 3.94 (s, 3 H) 3.77 - 3.88 (m, 2 H) 3.55 -3.70 (m, 5 H)
LC/MS (metodo LC-C): Rt 3.07 min, MH+ 517
[a]D20: 99.2° (c 0.2127, DMF)
SFC quiral (metodo SFC-D): Rt 3.38 min, MH+ 517, pureza quiral 100%.
ACTIVIDAD ANTIVIRAL DE LOS COMPUESTOS DE LA INVENCION
Ensayo antiviral de DENV-2
La actividad antiviral de todos los compuestos de la invencion se ensayo contra la cepa 16681 de DENV-2 que se marco con la proteina verde fluorescente mejorada (eGPF). El medio de cultivo consiste en un medio esencial minimo suplementado con 2% de suero de ternera fetal inactivado por calor, 0,04% de gentamicina (50 mg/ml) y 2 mM de L-glutamina. Las celulas Vero, obtenidas de ECACC, se suspendieron en un medio de cultivo y se anadieron 25pL a placas de 384 pocillos (2.500 celulas/pocillo), que ya contienen los compuestos antivirales. Tipicamente, estas placas contienen una dilucion cuadruple en serie de 9 etapas de dilucion del compuesto del ensayo a 200 veces la concentracion final en DMSO al 100% (200nL). Ademas, la concentracion de cada compuesto se prueba por cuadruplicado (rango de concentracion final: 25pM - 0.00038pM). Por ultimo, cada placa contiene pocillos que estan asignados como controles de virus (que contienen las celulas y los virus en ausencia del compuesto), controles de celulas (que contienen las celulas en ausencia del virus y el compuesto) y controles de medios (que contienen medios en ausencia de celulas, virus y compuestos). A los pocillos asignados como controles de medios se anadieron 25pL del medio de cultivo en lugar de celulas Vero. Una vez que se anadieron las celulas a las placas, las placas se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente para permitir que las celulas se distribuyan uniformemente dentro de los pocillos. Luego, las placas se incubaron en un incubador completamente humidificado (37°C, 5% CO2) hasta el dia siguiente. Posteriormente, la cepa 16681 de DENV-2, marcada con eGFP, se anadio a una multiplicidad de infeccion (MOI) de 0,5. Por lo tanto, se anadieron 15pL de suspension de virus a todos los pocillos que contienen el compuesto de prueba y a los pocillos asignados como control de virus. Paralelamente, se anadieron 15pL de medio de cultivo a los controles de medios y celulas. Seguidamente, las placas se incubaron durante 3 dias en un incubador completamente humidificado (37°C, 5% CO2). El dia de la lectura, la fluorescencia eGFP se midio con un microscopio de fluorescencia automatizado a 488 nm (laser azul). Con el uso de un sistema LIMS interno se calcularon las curvas de respuesta a la dosis de inhibicion para cada compuesto y se determino la concentracion efectiva maxima media (EC50). Por lo tanto, el porcentaje de inhibicion (I) para cada concentracion de ensayo se calcula mediante la siguiente formula: I = 100*(ST-SCC)/(SVC-SCC); ST, SCC y SVC son la cantidad de senal eGFP en los pocillos del compuesto de prueba, control de celulas y control de virus, respectivamente. La EC50 representa la concentracion de un compuesto en la que la replicacion del virus se inhibe al 50%, que se mide por una reduccion del 50% de la intensidad fluorescente eGFP comparada con el control de virus. La EC50 se calcula con la interpolacion lineal (Tabla 1).
Paralelamente se evaluo la toxicidad de los compuestos en las mismas placas. Una vez realizada la lectura de la senal eGFP se agregaron 10pL de resazurina, una tintura de viabilidad celular, a todos los pocillos de las placas de 384 pocillos. El ensayo de resazurina se basa en la reduccion de la resazurina azul por NADH, producida por las celulas, en el producto altamente fluorescente, resorufina. La formacion de resorufina fluorescente de color rosa esta directamente relacionada con la cantidad de celulas viables en el pocillo. Las placas se incubaron durante 5 horas adicionales en un incubador completamente humidificado (37°C, 5% CO2). Luego se midieron las placas en un lector de Infinito (Tecan) mediante el uso de una longitud de onda de excitacion de 530 nm. Tambien se determino la concentracion citotoxica maxima media (CC50), definida como la concentracion requerida para reducir la conversion de resazurina al 50%, en comparacion con la de los pocillos de control de celulas (Tabla 1). Por ultimo, se determina el indice de selectividad (SI) para los compuestos, que se calcula de la siguiente manera: SI = CC50/EC50.
Tabla 1: ECsn. CCsn. y SI para los compuestos de la invencion en el ensayo antiviral de DENV-2
Figure imgf000029_0001
Figure imgf000030_0001
N = cantidad de experimentos independientes en los que se ensayaron los compuestos.
Ensayo de tetravalente con transcriptasa inversa cuantitativa-PCR (RT-qPCR): Protocolo A.
La actividad antiviral de los compuestos de la invencion se ensayo contra la cepa TC974#666 (NCPV) de DENV-1, la cepa 16681 de DENV-2, la cepa H87 (NCPV) de DENV-3 y las cepas H241 (NCPV) y EDEN (SG/06K2270DK1/2005; numero de acceso GenBank QG398256) de DENV-4 en un ensayo de RT-qPCR. Por lo tanto, se infectaron celulas Vero, ya sea con DENV-1, -2, -3 o -4 en presencia o ausencia de compuestos de ensayo. Al dia 3 de infectadas, las celulas se lisaron y los lisadoscelulares se utilizaron para preparar ADNc de objetivo viral (3'UTR de DENV; tabla 2) y un gen de referencia celular (p-actina, tabla 2). Posteriormente, se realizo un PCR en tiempo real duplex en un instrumento Lightcycler480. El valor Cp generado es inversamente proporcional a la cantidad de expresion de ARN de estos objetivos. La inhibicion de la replicacion de DENV produce un cambio de Cp en el compuesto de ensayo para el gen 3'UTR. Por otro lado, si un compuesto de ensayo es toxico para las celulas se observara un efecto similar sobre la expresion de p-actina. El metodo comparativo AACp se utiliza para calcular EC50, que se basa en la expresion genica relativa del gen objetivo (3'UTR) normalizado con el gen de limpieza celular (p-actina). Ademas, los valores CC50 se determinaron en base a los valores de Cp adquiridos para la limpieza de genes -actina.
Tabla 2: Cebadores y sondas utilizados para RT-PCR cuantitativa, en tiempo real
Figure imgf000030_0002
a Los elementos de tintes reportero (FAM, HEX) y tinte inhibidor de fluorescencia (BHQ1) se indican en negrita y cursiva.
b La secuencia de nucleotidos de los cebadores y sondas se selecciono de la region conservada en la region 3'UTR del genoma del virus del dengue, basada en el alineamiento de 300 secuencias de nucleotidos de los cuatro serotipos del dengue depositados en GenBank (Gong et al., 2.013 , Methods Mol Biol, Capitulo 16).
El medio de cultivo consiste en un medio esencial minimo suplementado con 2% de suero de ternera fetal inactivado por calor, 0,04% de gentamicina (50 mg/ml) y 2 mM de L-glutamina. Las celulas Vero, obtenidas de ECACC, se suspendieron en un medio de cultivo y se anadieron 75pL/pocillo a placas de 96 pocillos (10.000 celulas/pocillo), que ya contienen los compuestos antivirales. Tipicamente, estas placas contienen una dilucion cuadruple en serie de 9 etapas de dilucion del compuesto del ensayo a 200 veces la concentracion final en DMSO al 100% (500nL; rango de concentracion final: 25gM - 0.00038gM). Asimismo, cada placa contiene pocillos que estan asignados como controles de virus (que contienen las celulas y los virus en ausencia del compuesto) y controles de celulas (que contienen las celulas en ausencia del virus y el compuesto). Una vez que las celulas se agregaron a las placas, las placas se incubaron en un incubador completamente humidificado (37°C, 5% CO2) hasta el dia siguiente. Luego se agrego la cepa TC974 # 666 de DENV-1, cepa 16681 de DENV-2, cepa H87 de DENV-3 o las cepas H241 o EDEN de DENV-4. Por lo tanto, se anadieron 25pL de suspension de virus, donde se logro un Cp de ~ 22 en RTqPCR, y se agrego a todos los pocillos que contienen el compuesto de prueba y a los pocillos asignados como control de virus. Paralelamente, se anadieron 25pL de medio de cultivo a los controles de celulas. Seguidamente, las placas se incubaron durante 3 dias en un incubador completamente humidificado (37°C, 5% CO2). Despues de 3 dias, se elimino el sobrenadante de los pocillos y las celulas se lavaron dos veces con PBS enfriado con hielo (~ 100 pl). El granulado celular dentro de las placas de 96 pocillos se almaceno a -80°C durante al menos 1 dia. A continuacion, se extrajo el ARN con el kit para lisis Cells-to-CTTM, de conformidad con las instrucciones del fabricante (Applied Biosystems). Los lisados de celulas se pueden almacenar a -80°C o utilizarse inmediatamente en la etapa de transcripcion inversa.
Como preparacion para la etapa de transcripcion inversa se preparo la mezcla A (tabla 3A) y se distribuyeron 7,57pL/pocillo en una placa de 96 pocillos. Despues de la adicion de 5pL del lisado celular, se siguio con una etapa de desnaturalizacion durante 5 minutos a 75°C (tabla 3B). Posteriormente, se anadieron 7,43pL de la mezcla B (tabla 3C) y se inicio el paso de transcripcion reversa (tabla 3D) para generar ADNc.
Por ultimo, se preparo una mezcla de RT-qPCR, la mezcla C (tabla 4A), que se distribuyo en placas de 96 pocillos LightCycler qPCR a los que se agregaron 3pL de ADNc y la qPCR se realizo de conformidad con las condiciones de la tabla 4B en un LightCycler 480.
Mediante el uso del software LightCycler y un sistema LIMS interno, se calcularon las curvas dosis-respuesta para cada compuesto y se determinaron la concentracion media maxima eficaz (EC50) y la concentracion citotoxica media maxima (CC50) (Tablas 6-9).
Tabla 3: Sintesis de ADNc mediante el uso de la Mezcla A, desnaturalizacion, Mezcla B y transcripcion inversa.
Mezcla A
Figure imgf000031_0001
Etapa de
B desnaturalizacion:
Figure imgf000031_0003
C Mezcla B
Figure imgf000031_0002
(p)
D Protocolo de sintesis de ADNc
Figure imgf000032_0001
Tabla 4: Protocolo y mezcla para qPCR
A Mezcla C
Figure imgf000032_0002
B Protocolo qPCR3
Figure imgf000032_0003
Ensayo de tetravalente con transcriptasa inversa cualitativa-PCR (RT-qPCR): Protocolo B.
Se insertaron celulas Vero (4 x 104) en placas de 96 pocillos. Despues de un dia, se reemplazo el medio de cultivo celular con 100 gL de medio de ensayo que contiene una dilucion doble, triple o quintuple en serie del compuesto (rango de concentracion: 50 mg/ml - 0.00038 g/ml, 50 mg/ml - 0.0076 g/ml, y 50 ug/mL - 0.00013 g/ml, respectivamente) y 100 gL de dilucion de virus del dengue, donde se logra un Ct de ~ 20 en RTqPCR. Tras un periodo de incubacion de 2 horas, la monocapa de celulas se lavo 3 veces con medio de ensayo para eliminar el virus residual, no adsorbido y los cultivos se incubaron adicionalmente durante 4 dias (DENV-2 NGC-Tongalike) o 7 dias (cepa D1/H/IMTSSA/98/606 de DENV-1 Djibouti, cepa prototipo H87 de DENV-3, cepa H241' de DENV-4) en presencia del inhibidor. El sobrenadante se recogio y la carga viral de ARN se determino por RT-PCR cuantitativa en tiempo real. La concentracion efectiva 50% (EC50), que se define como la concentracion del compuesto que se requiere para inhibir la replicacion del ARN viral en un 50%, se determino mediante la interpolacion logaritmica (Tablas 7 y 8).
Se aislo el ARN de 100 gL de sobrenadante con el kit para virus NucleoSpin 96 (Servicio Filter, Duren, Alemania) de conformidad con las instrucciones del fabricante. Las secuencias de los cebadores TaqMan (DENV-For, DENV-Rev; Tabla 5) y sondas TaqMan (DENV-Sonda Tabla 5) se seleccionaron de genes no estructurales 3 (NS3) o NS5, de los respectivos flavivirus mediante el uso del software Cebador Express (version 2.0; Applied Biosystems, Lennik, Belgica). La sonda TaqMan fue marcada con fluorescencia mediante 6-carboxifluoresceina (FAM) en el extremo 5' como tinte reportero y con union al surco menor (MGB) en el extremo 3' como tinte inhibidor de la fluorescencia (Tabla 5). De un solo paso, se realizo RT-PCR cuantitativa en un volumen total de 25 gL, que contiene 13,9375 gL de H2O, 6,25 gL de mezcla maestra (Eurogentec, Seraing, Belgica), 0,375 gL de cebador directo, 0,375 gL de cebador inverso, 1 gL de sonda, 0,0625 gL de transcriptasa inversa (Eurogentec) y 3 gL de muestra. Se realizo RT-PCR a traves del sistema rapido de analisis por PCR en tiempo real ABI 7500 PCR (Applied Biosystems, Branchburg, Nueva Jersey, EE.UU.) bajo las siguientes condiciones: 30 min a 48 °C y 10 min a 95 °C, seguido por 40 ciclos de 15 seg a 95 °C y 1 min a 60 °C. Los datos fueron analizados con el software ABI PRISM 7500 SDS (version 1.3.1; Applied Biosystems). Para la cuantificacion absoluta, las curvas de calibracion se generaron mediante el uso de diluciones de 10 veces los preparados modelo de concentraciones conocidas.
Tabla 5: Cebadores y sondas utilizados para RT-PCR cuantitativa, en tiempo real
Figure imgf000033_0001
a Los elementos de tintes reportero (FAM) y tinte inhibidor de fluorescencia (MGB/TAMRA) se indican en negrita y cursiva.
b La secuencia de nucleotidos y la posicion de los cebadores y sondas en el genoma se dedujeron de la secuencia de nucleotidos de DENV 2 NGC (numero de acceso GenBank M29095; Irie et al, 1989), serotipo 1 del virus del dengue Djibouti cepa D1/H/IMTSSA/98/606 (numero de acceso GenBank AF298808), serotipo 3 del dengue prototipo cepa H87 (c93130), serotipo 4 del virus del dengue cepa H241 (no hay secuencias disponibles).
Ensayo citotoxico (Protocolo B)
Se evaluaron posibles efectos citotoxicos de los compuestos en celulas Vero no infectadas. Las celulas se insertaron en 4 x 104 celulas/pocillo en una placa de 96 pocillos en presencia de soluciones dobles, triples o quintuples en serie (que van desde 50 pg/mL - 0.0038 pg/mL, 50 pg/mL - 0.0076 pg/mL y 50 pg/mL - 0.00013 pg/mL, respectivamente) del compuesto y se incubaron durante 4 a 7 dias. Se descarto el medio de cultivo y se anadieron 100 pg/mL 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolio/fenazina metosulfato (MTS/PMS; Promega, Leiden, Paises Bajos) en PBS en cada pocillo. Tras un periodo de incubacion de 2 horas a 37 °C, la densidad optica se determino a 498 nm. La actividad citotoxica se calculo con la siguiente formula: % viabilidad celular = 100 x (ODCompuesto/ODCC), donde ODCompuesto y ODcc corresponden a la densidad optica a 498 nm de los cultivos celulares no infectados tratados con el compuesto y la de cultivos de celulas no infectadas, no tratadas, respectivamente. La concentracion citotoxica en 50% (es decir, la concentracion que reduce la cantidad total de celulas en 50%; CC50) se calculo mediante la interpolacion lineal (tablas 7 y 8).
Tabla 6: Ensayos sobre ECsn. CCsn. v SI para los compuestos contra el serotipo 1 en RT-qPCR
Figure imgf000033_0002
Figure imgf000033_0003
Figure imgf000034_0001
N = cantidad de experimentos independientes en los que se ensayaron los compuestos. Tabla 7: Ensayos sobre ECsn. CCsn. y SI para los compuestos contra el serotipo 2 en RT-qPCR
Figure imgf000034_0002
Figure imgf000034_0003
N = cantidad de experimentos independientes en los que se ensayaron los compuestos. Tabla 8: Ensavos sobre ECsn. CCsn. v SI para los compuestos contra el serotipo 3 en RT-qPCR
Figure imgf000035_0001
Figure imgf000035_0002
N = cantidad de experimentos independientes en los que se ensayaron los compuestos.
Tabla 9: Ensayos sobre ECsn. CCsn. y SI para los compuestos contra cadenas serotipo 4 H241 (A) y SG/06K2270DK1/2005 (B) en RT-qPCR
Figure imgf000035_0003
N = cantidad de experimentos independientes en los que se ensayaron los compuestos.
Figure imgf000036_0001
N = cantidad de experimentos independientes en los que se ensayaron los compuestos.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de formula (I)
    Figure imgf000041_0001
    una forma estereoisomerica, una sal, un solvato o un polimorfo farmaceuticamente aceptables de estos, que comprende un grupo indol mono- o disustituido; dicho compuesto se selecciona de un grupo donde:
    Ri es H, R2 es F y R3 es H, F o CH3;
    R1 es F o CH3, R2 es OCH3 y R3 es H;
    R1 es F, R2 es H y R3 es CH3;
    R1 es H, R2 es OCH3 y R3 es H;
    R1 es H, R2 es Cl y R3 es H o CH3;
    R1 es F, R2 es F y R3 es H o
    R1 es CH3, R2 es H y R3 es F.
    2. Un compuesto o su forma estereoisomerica, una sal, un solvato o un polimorfo farmaceuticamente aceptables de este de conformidad con la reivindicacion 1, donde el compuesto se selecciona entre el grupo:
    Figure imgf000041_0002
    Figure imgf000042_0001
    Figure imgf000043_0001
    sal, un solvato o un polimorfo farmaceuticamente aceptables de este de conformidad con la reivindicacion 1 o 2, junto con uno o mas excipientes, diluyentes o vehiculos farmaceuticamente aceptables.
    4. Un compuesto de formula (I) o una forma estereoisomerica, una sal, un solvato o un polimorfo farmaceuticamente aceptables de este de conformidad con la reivindicacion 1 o una composicion farmaceutica de conformidad con la reivindicacion 3 para su uso como medicamento.
    5. Un compuesto de formula (I) o una forma estereoisomerica, una sal, un solvato o un polimorfo farmaceuticamente aceptables de este de conformidad con la reivindicacion 1 o una composicion farmaceutica de conformidad con la reivindicacion 3 para su uso en el tratamiento del dengue.
    6. Un compuesto representado por la siguiente formula estructural (I)
    Figure imgf000044_0001
    una forma estereoisomerica, una sal, un solvato o un polimorfo farmaceuticamente aceptables de estos, que comprende un grupo indol mono- o disustituido; dicho compuesto se selecciona de un grupo donde:
    Ri es H, R2 es F y R3 es H, F o CH3;
    R1 es F o CH3, R2 es OCH3 y R3 es H;
    Ri es F, R2 es H y R3 es CH3;
    R1 es H, R2 es OCH3 y R3 es H;
    R1 es H, R2 es Cl y R3 es H o CH3;
    R1 es F, R2 es F y R3 es H; o
    R1 es CH3, R2 es H y R3 es F.
    para el uso en la inhibicion de la replicacion del virus del dengue en una muestra biologica o un paciente.
    7. Un compuesto para uso de conformidad con la reivindicacion 6 que comprende ademas la coadministracion de un agente terapeutico adicional.
    8. Un compuesto para uso de conformidad con la reivindicacion 7 donde dicho agente terapeutico adicional es seleccionado de un agente antiviral o vacuna contra el dengue, o ambos.
ES15771136T 2014-10-01 2015-09-30 Derivados de indol mono- o disustituidos como inhibidores de la replicación del virus del dengue Active ES2714074T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14187374 2014-10-01
EP15159164 2015-03-16
PCT/EP2015/072551 WO2016050841A1 (en) 2014-10-01 2015-09-30 Mono- or di-substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2714074T3 true ES2714074T3 (es) 2019-05-27

Family

ID=54199687

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES15771136T Active ES2714074T3 (es) 2014-10-01 2015-09-30 Derivados de indol mono- o disustituidos como inhibidores de la replicación del virus del dengue

Country Status (31)

Country Link
US (1) US9944598B2 (es)
EP (1) EP3201176B1 (es)
JP (1) JP6732736B2 (es)
KR (1) KR102478311B1 (es)
CN (1) CN107001264B (es)
AU (1) AU2015326930B2 (es)
BR (1) BR112017006299A2 (es)
CA (1) CA2959573A1 (es)
CL (1) CL2017000782A1 (es)
CY (1) CY1121874T1 (es)
DK (1) DK3201176T3 (es)
EA (1) EA032546B1 (es)
ES (1) ES2714074T3 (es)
HR (1) HRP20190199T1 (es)
HU (1) HUE041888T2 (es)
IL (1) IL251396A0 (es)
LT (1) LT3201176T (es)
MA (1) MA40768B1 (es)
ME (1) ME03360B (es)
MX (1) MX2017004299A (es)
PH (1) PH12017500571A1 (es)
PL (1) PL3201176T3 (es)
PT (1) PT3201176T (es)
RS (1) RS58461B1 (es)
SG (1) SG11201702463YA (es)
SI (1) SI3201176T1 (es)
TW (1) TWI681951B (es)
UA (1) UA121119C2 (es)
UY (1) UY36340A (es)
WO (1) WO2016050841A1 (es)
ZA (1) ZA201702301B (es)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201116559D0 (en) 2011-09-26 2011-11-09 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
GB201305376D0 (en) 2013-03-25 2013-05-08 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
ME03344B (me) * 2014-10-01 2019-10-20 Janssen Pharmaceuticals Inc Mono- ili di-supstituisani indoli kao inнibitori replikacije denga virusa
US9453018B2 (en) 2014-10-01 2016-09-27 Bristol-Myers Squibb Company Pyrimidinones as factor XIa inhibitors
KR102457840B1 (ko) 2014-10-01 2022-10-21 메르크 파텐트 게엠베하 보론산 유도체
JOP20160086B1 (ar) 2015-05-08 2021-08-17 2 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research And Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20160198B1 (ar) 2015-09-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JO3633B1 (ar) 2015-09-16 2020-08-27 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research & Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
MX2018011784A (es) 2016-03-31 2019-02-13 Janssen Pharmaceuticals Inc Derivados de indol sustituidos como inhibidores de la replicacion virica del dengue.
WO2017167953A1 (en) * 2016-03-31 2017-10-05 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Substituted indoline derivatives as dengue viral replication inhibitors
JOP20170069B1 (ar) 2016-04-01 2021-08-17 1 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
BR112018068956A2 (pt) * 2016-04-01 2019-01-22 Janssen Pharmaceuticals Inc derivados do composto indol substituídos como inibidores da replicação viral da dengue
JOP20180025B1 (ar) 2017-03-31 2021-08-17 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20180026A1 (ar) 2017-03-31 2019-01-30 Univ Leuven Kath مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
PE20200342A1 (es) * 2017-05-22 2020-02-14 Janssen Pharmaceuticals Inc Derivados de indolina sustituidos como inhibidores de la replicacion virica de dengue
ES2929667T3 (es) 2017-05-22 2022-11-30 Janssen Pharmaceuticals Inc Derivados de indolina sustituidos como inhibidores de la replicación vírica de dengue

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201116559D0 (en) * 2011-09-26 2011-11-09 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
EP3201176B1 (en) 2018-12-12
CN107001264A (zh) 2017-08-01
UY36340A (es) 2016-04-01
DK3201176T3 (en) 2019-03-25
SI3201176T1 (sl) 2019-05-31
MA40768A (fr) 2017-09-08
UA121119C2 (uk) 2020-04-10
CY1121874T1 (el) 2020-10-14
SG11201702463YA (en) 2017-04-27
MA40768B1 (fr) 2019-03-29
IL251396A0 (en) 2017-05-29
EP3201176A1 (en) 2017-08-09
TWI681951B (zh) 2020-01-11
EA201790758A1 (ru) 2017-07-31
AU2015326930B2 (en) 2020-03-26
ME03360B (me) 2019-10-20
PT3201176T (pt) 2019-03-04
US9944598B2 (en) 2018-04-17
HUE041888T2 (hu) 2019-06-28
AU2015326930A1 (en) 2017-03-16
US20170298017A1 (en) 2017-10-19
EA032546B1 (ru) 2019-06-28
BR112017006299A2 (pt) 2018-01-16
KR102478311B1 (ko) 2022-12-15
ZA201702301B (en) 2018-12-19
JP2017531619A (ja) 2017-10-26
PH12017500571A1 (en) 2017-08-30
RS58461B1 (sr) 2019-04-30
LT3201176T (lt) 2019-03-25
WO2016050841A1 (en) 2016-04-07
CA2959573A1 (en) 2016-04-07
HRP20190199T1 (hr) 2019-04-05
TW201630879A (zh) 2016-09-01
MX2017004299A (es) 2017-07-19
KR20170063802A (ko) 2017-06-08
CN107001264B (zh) 2021-06-15
WO2016050841A9 (en) 2016-06-02
CL2017000782A1 (es) 2017-11-03
JP6732736B2 (ja) 2020-07-29
PL3201176T3 (pl) 2019-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2714074T3 (es) Derivados de indol mono- o disustituidos como inhibidores de la replicación del virus del dengue
ES2711117T3 (es) Indoles mono o disustituidos como inhibidores de la replicación del virus del dengue
ES2941674T3 (es) Derivados de indol mono o disustituidos como inhibidores de la replicación vírica del dengue
ES2904575T3 (es) Derivados de indol como inhibidores de la replicación del virus del dengue
ES2884151T3 (es) Derivados de indolina sustituidos como inhibidores de la replicación vírica de dengue
ES2778431T3 (es) Derivados de indol mono- o disustituidos como inhibidores de la replicación viral del dengue
ES2884067T3 (es) Derivados de indolina sustituidos como inhibidores de la replicación viral del dengue
ES2893298T3 (es) Derivados de indol mono- o disustituidos como inhibidores de la replicación viral del dengue
ES2923771T3 (es) Derivados de indolina sustituidos como inhibidores de la replicación vírica de dengue
ES2882488T3 (es) Derivados de indol sustituidos como inhibidores de la replicación vírica del dengue
ES2887673T3 (es) Derivados de indolina sustituidos como inhibidores de la replicación vírica de dengue
EA040657B1 (ru) Производные моно- или дизамещенных индолов в качестве ингибиторов репликации вирусов денге