EA032546B1 - Производные моно- или дизамещенных индолов в качестве ингибиторов репликации вирусов денге - Google Patents

Производные моно- или дизамещенных индолов в качестве ингибиторов репликации вирусов денге Download PDF

Info

Publication number
EA032546B1
EA032546B1 EA201790758A EA201790758A EA032546B1 EA 032546 B1 EA032546 B1 EA 032546B1 EA 201790758 A EA201790758 A EA 201790758A EA 201790758 A EA201790758 A EA 201790758A EA 032546 B1 EA032546 B1 EA 032546B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compound
methoxyphenyl
chloro
mmol
compounds
Prior art date
Application number
EA201790758A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201790758A1 (ru
Inventor
Барт Рудольф Романи Кестелейн
Жан-Франсуа Бонфанти
Тим Хьюго Мария Йонкерс
Пьер Жан-Мари Бернар Рабуассон
Доротея Алис Мари-Ева Бардио
Арно Дидье М Маршан
Original Assignee
Янссен Фармасьютикалз, Инк.
Католике Университейт Левен
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=54199687&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA032546(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Янссен Фармасьютикалз, Инк., Католике Университейт Левен filed Critical Янссен Фармасьютикалз, Инк.
Publication of EA201790758A1 publication Critical patent/EA201790758A1/ru
Publication of EA032546B1 publication Critical patent/EA032546B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/14—Radicals substituted by nitrogen atoms, not forming part of a nitro radical
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/30—Indoles; Hydrogenated indoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/42—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

Изобретение относится к производным моно- или дизамещенных индолов формулы (I), которые пригодны для предупреждения или лечения вирусных инфекций, вызываемых вирусом денге, а также относится к указанным соединениям для применения в качестве лекарственного препарата, более предпочтительно для применения в качестве лекарственного препарата для лечения или предупреждения вирусных инфекций, вызываемых вирусом денге. Изобретение, кроме того, относится к фармацевтическим композициям или комбинированным препаратам на основе таких соединений, к таким композициям или препаратам для применения в качестве лекарственного препарата, более предпочтительно для предупреждения или лечения вирусных инфекций, вызываемых вирусом денге. Настоящее изобретение также относится к способам получения таких соединений.

Description

Изобретение относится к производным моно- или дизамещенных индолов формулы (I), которые пригодны для предупреждения или лечения вирусных инфекций, вызываемых вирусом денге, а также относится к указанным соединениям для применения в качестве лекарственного препарата, более предпочтительно для применения в качестве лекарственного препарата для лечения или предупреждения вирусных инфекций, вызываемых вирусом денге. Изобретение, кроме того, относится к фармацевтическим композициям или комбинированным препаратам на основе таких соединений, к таким композициям или препаратам для применения в качестве лекарственного препарата, более предпочтительно для предупреждения или лечения вирусных инфекций, вызываемых вирусом денге. Настоящее изобретение также относится к способам получения таких соединений.
032546 В1
032546 Β1
Настоящее изобретение относится к моно- или дизамещенным индольным соединениям, способам предупреждения или лечения вирусных инфекций, вызываемых вирусом денге, с применением указанных соединений, а также относится к указанным соединениям для применения в качестве лекарственного препарата, более предпочтительно для применения в качестве лекарственного препарата для лечения или предупреждения вирусных инфекций, вызываемых вирусом денге. Настоящее изобретение, кроме того, относится к фармацевтическим композициям или комбинированным препаратам на основе таких соединений, к таким композициям или препаратам для применения в качестве лекарственного препарата, более предпочтительно для предупреждения или лечения вирусных инфекций, вызываемых вирусом денге. Настоящее изобретение также относится к способам получения таких соединений.
Предпосылки к созданию изобретения
Флавивирусы, которые переносятся москитами или клещами, являются причиной угрожающих жизни инфекций у человека, таких как энцефалит и геморрагическая лихорадка. Известны четыре различных, но тесно связанных серотипа флавивируса, вызывающего денге, так называемые ΌΕΝν-1, -2, -3 и -4. Денге является эндемическим заболеванием в большинстве тропических и субтропических зон по всему миру, преимущественно в городских и полугородских областях. Согласно Всемирной организации здравоохранения (АНО) 2,5 миллиарда людей, из которых 1 миллиард детей, подвержены риску заражения ΌΕΝν (АНО, 2002 г.). По оценкам ежегодно во всем мире происходит от 50 до 100 миллионов случаев лихорадки денге [ИР], полмиллиона случаев заболевания денге с тяжелым течением (т.е. геморрагической лихорадки денге [ΌΠΡ] и шока при геморрагической лихорадке денге [Ό88]) и более чем 20000 смертей. ΌΠΡ стала основной причиной госпитализации и смерти среди детей в эндемических зонах. В целом, вирус денге является наиболее распространенной причиной арбовирусного заболевания. Вследствие недавних крупных вспышек в странах, расположенных в Латинской Америке, Юго-Восточной Азии и Западной части Тихого Океана (в том числе Бразилии, Пуэрто-Рико, Венесуэле, Камбодже, Индонезии, Вьетнаме, Таиланде), количество случаев денге сильно возросло за последние годы. Не только количество случаев денге увеличивается по мере распространения заболевания в новые области, но и вспышки становятся более тяжелыми.
Для предупреждения и/или контроля заболевания, ассоциированного с вирусной инфекцией, вызываемой вирусом денге, в настоящее время единственными доступными способами являются стратегии, направленные на уничтожение москитов, для контроля переносчика инфекции. Несмотря на прогресс в разработке вакцин против вируса денге, возникает много трудностей. Они включают наличие явления, называемого зависимым от антитела усилением (ΑΌΕ). Выздоровление от инфекции, вызванной одним серотипом, обеспечивает пожизненный иммунитет против данного серотипа, однако, придает только частичную и временную защиту против последующей инфекции, вызываемой одним из трех других серотипов. После заражения другим серотипом уже существующие гетерологичные антитела образуют комплексы с вновь инфицирующим серотипом вируса денге, но не нейтрализуют патоген. Вместе с тем предполагают, что облегчается проникновение вируса в клетки, что приводит к неконтролируемой репликации вируса и повышенным пиковым титрам вируса. Как при первичном, так и при вторичном заражениях повышенные титры вируса ассоциированы с заболеванием денге с более тяжелым течением. Одной из причин того, что дети более подвержены заболеванию денге с тяжелым течением, чем взрослые, может быть тот факт, что материнские антитела могут легко передаваться младенцам при грудном вскармливании.
В регионах с двумя или более серотипами, которые циркулируют одновременно, также называемых сверхэндемическими зонами, риск заболевания денге в серьезной форме значительно выше из-за повышенного риска перенести вторичную инфекцию с более тяжелым течением. Более того, в условиях повышенной эндемичности вероятность появления более вирулентных штаммов является повышенной, что, в свою очередь, повышает вероятность геморрагической лихорадки денге (ΌΠΡ) или шока при геморрагической лихорадке денге.
Москиты, которые переносят вирус денге, в том числе Аебек асцур(1 и Аебек а1Ьор1с1ик (желтолихорадочный комар), движутся на север земного шара. Согласно центрам по контролю и профилактике заболеваний (СЭС) Соединенных Штатов (США) оба вида москитов в настоящее время являются повсеместными в южном Техасе. Распространение на север москитов, переносящих вирус денге, не ограничивается территорией США, а наблюдается также и в Европе.
Несмотря на большие усилия в течение последних 3 десятилетий, в настоящее время не существует вакцины, способной защитить людей от вирусного заболевания денге. Основной проблемой является разработка вакцины, которая предоставляла бы защиту от всех четырех серотипов (квадривалентной вакцины) в одинаковой степени. Более того, на сегодня отсутствуют специальные противовирусные лекарственные средства для лечения или предупреждения вирусной инфекции, представляющей собой лихорадку денге. Очевидно, что все еще существует большая нереализованная потребность медицины в терапевтических средствах для предупреждения или лечения вирусных инфекций у животных, более конкретно у людей, а особенно вирусных инфекций, вызванных флавивирусами, более конкретно вирусом денге. Чрезвычайно необходимыми являются соединения с хорошей противовирусной активностью, которые не имеют побочных эффектов или имеют низкие степени проявления побочных эффектов, с ши
- 1 032546 роким спектром активности против множества серотипов вируса денге, низкой токсичностью и/или хорошими фармакокинетическими или динамическими свойствами.
В данный момент настоящее изобретение предусматривает соединения, производные моно- или дизамещенных индолов, которые проявляют высокую эффективную активность против всех четырех (4) серотипов вируса денге. Также соединения согласно настоящему изобретению обладают хорошим фармакокинетическим профилем и, неожиданно, эти конкретные соединения проявляют улучшенную хиральную устойчивость.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение основано на неожиданном открытии того, что по меньшей мере одна из вышеупомянутых проблем может быть решена с помощью имеющихся соединений по настоящему изобретению.
Настоящее изобретение предусматривает соединения, которые, как было показано, обладают высокой противовирусной активностью против всех четырех (4) серотипов, известных на сегодняшний день. В настоящем изобретении, более того, продемонстрировано, что эти соединения эффективно ингибируют пролиферацию вируса денге (ΌΕΝν). Следовательно, эти соединения составляют подходящий класс сильнодействующих соединений, которые можно применять при лечении и/или предупреждении вирусных инфекций у животных, млекопитающих и людей, более конкретно для лечения и/или предупреждения инфекций, вызываемых вирусами денге.
Настоящее изобретение, более того, относится к применению таких соединений в качестве лекарственных препаратов и к их применению для изготовления лекарственных препаратов для лечения и/или предупреждения вирусных инфекций, в частности, вызываемых вирусами, принадлежащих к семейству вирусов денге, у животных или млекопитающих, более конкретно у людей. Настоящее изобретение также относится к способам получения всех таких соединений и к фармацевтическим композициям, включающим их в эффективном количестве.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения или предупреждения вирусных инфекций, вызываемых вирусом денге, у людей путем введения пациенту, который нуждается в этом, эффективного количества одного или нескольких таких соединений или их фармацевтически приемлемых солей необязательно в комбинации с одним или несколькими другими лекарственными препаратами, например с другим противовирусным средством.
Одним аспектом настоящего изобретения является обеспечение соединений формулы (I)
С1
их стереоизомерной формы, фармацевтически приемлемой соли, сольвата или полиморфа, содержащих моно- или дизамещенную индольную группу; при этом указанное соединение выбрано из группы, где
Κι представляет собой Н, Κ2 представляет собой Т и Κ3 представляет собой Н, Т или СН3;
К! представляет собой Т или СН3, Κ2 представляет собой ОСН3 и Κ3 представляет собой Н;
Κι представляет собой Т, К2 представляет собой Н и К3 представляет собой СН3;
Κι представляет собой Н, К2 представляет собой ОСН3 и К3 представляет собой Н;
Κ1 представляет собой Н, К2 представляет собой С1 и К3 представляет собой Н или СН3;
Κι представляет собой Т, К2 представляет собой Т и К3 представляет собой Н, или
Κι представляет собой СН3, К2 представляет собой Н и К3 представляет собой Т.
В частности, соединения по настоящему изобретению или их стереоизомерная форма, фармацевтически приемлемая соль, сольват или полиморф выбраны из группы
- 2 032546
Частью настоящего изобретения также является фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) или его стереоизомерную форму, фармацевтически приемлемую соль, сольват или полиморф вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми наполнителями, разбавителями или носителями.
Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I) включают их соли присоединения кислот и основные соли. Подходящие соли присоединения кислот образуются из кислот, которые образуют
- 3 032546 нетоксичные соли. Подходящие основные соли образуются из оснований, которые образуют нетоксичные соли.
Соединения по настоящему изобретению также могут существовать в несольватированной и сольватированной формах. Термин сольват используется в данном документе для описания молекулярного комплекса, содержащего соединение по настоящему изобретению и одну или несколько молекул фармацевтически приемлемого растворителя, например этанола.
Термин полиморф относится к способности соединения по настоящему изобретению существовать в более чем одной форме или кристаллической структуре.
Соединения по настоящему изобретению можно вводить в виде кристаллических или аморфных продуктов. Они могут быть получены, например, в виде твердой прессованной массы, порошков или пленок посредством таких способов, как осаждение, кристаллизация, лиофильная сушка, сушка распылением или сушка выпариванием. Их можно вводить отдельно или в комбинации с одним или несколькими другими соединениями по настоящему изобретению или в комбинации с одним или несколькими другими лекарственными средствами. Как правило, их будут вводить в виде состава совместно с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми наполнителями. Термин наполнитель используется в данном документе для описания любого ингредиента, отличного от соединения (соединений) по настоящему изобретению. Выбор наполнителя в большой степени зависит от таких факторов, как конкретный способ введения, влияние наполнителя на растворимость и устойчивость и природа лекарственной формы.
Соединения по настоящему изобретению или любая их подгруппа могут быть составлены в различные фармацевтические формы для целей введения. В качестве подходящих композиций могут быть упомянуты все композиции, обычно применяемые для системно вводимых лекарственных средств. Для получения фармацевтических композиций по настоящему изобретению эффективное количество конкретного соединения, необязательно в форме соли присоединения, в качестве активного ингредиента объединяют в однородную смесь с фармацевтически приемлемым носителем, при этом носитель может принимать широкое разнообразие форм в зависимости от формы препарата, требуемого для введения. Такие фармацевтические композиции желательны в единичной лекарственной форме, подходящей, например, для перорального или ректального введения. Например, при получении композиций в пероральной лекарственной форме можно использовать любую из общепринятых фармацевтических сред, таких как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т. п., в случае жидких препаратов для перорального введения, таких как суспензии, сиропы, настойки, эмульсии и растворы; или твердых носителей, таких как крахмалы, сахара, каолин, разбавители, смазывающие средства, связующие, разрыхлители и т. п., в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Благодаря своей простоте введения таблетки и капсулы представляют собой наиболее преимущественные единичные лекарственные формы для перорального введения, в случае которых безусловно используют твердые фармацевтические носители. Также включены препараты в твердой форме, которые могут быть преобразованы, непосредственно перед применением, в жидкие формы.
Особенно преимущественным является составление вышеупомянутых фармацевтических композиций в единичную лекарственную форму для простоты введения и однородности дозирования. Единичная лекарственная форма, используемая в данном документе, относится к физически отдельным единицам, подходящим в качестве единичных доз, при этом каждая единица содержит предварительно установленное количество активного ингредиента, рассчитанное для получения необходимого терапевтического эффекта совместно с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких единичных лекарственных форм являются таблетки (в том числе делимые или покрытые оболочкой таблетки), капсулы, пилюли, пакетики с порошком, пластинки, суппозитории, растворы или суспензии для инъекций и т.п., а также их отдельные множества.
Специалисты в области лечения инфекционных заболеваний смогут определить эффективное количество, исходя из результатов тестов, представленных далее в данном документе. В целом, предполагается, что эффективное суточное количество будет составлять от 0,01 до 50 мг/кг массы тела, более предпочтительно от 0,1 до 10 мг/кг массы тела. Может быть целесообразным введение требуемой дозы в виде двух, трех, четырех или более частей дозы через соответствующие интервалы на протяжении дня. Указанные части дозы можно составлять в виде единичных лекарственных форм, например, содержащих от 1 до 1000 мг и, в частности, от 5 до 200 мг активного ингредиента на единичную лекарственную форму.
Точная дозировка и частота введения зависят от конкретного используемого соединения формулы (I), конкретного состояния, подлежащего лечению, тяжести состояния, подлежащего лечению, возраста, массы и общего физического состояния конкретного пациента, а также другого медикаментозного лечения, которое может получать индивидуум, что хорошо известно специалистам в данной области. Более того, очевидно, что эффективное количество может быть снижено или увеличено в зависимости от реакции подвергаемого лечению субъекта и/или в зависимости от оценки врача, назначающего соединения по настоящему изобретению. Таким образом, вышеупомянутые диапазоны эффективного количества являются только рекомендациями и не предназначены для ограничения в той или иной мере объема или применения настоящего изобретения.
- 4 032546
Подразумевается, что настоящее раскрытие также включает в себя любые изотопы атомов, присутствующих в соединениях по настоящему изобретению. Например, изотопы водорода включают тритий и дейтерий, а изотопы углерода включают С-13 и С-14.
Данные соединения, применяемые в настоящем изобретении, могут также существовать в их стереохимически изомерной форме, охватывая все возможные соединения, составленные из одних и тех же атомов, связанных с помощью такой же последовательности связей, однако имеющие разные пространственные структуры, не являющиеся взаимозаменяемыми. Если не упомянуто или не указано иное, химическое обозначение соединений охватывает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм, которыми могут обладать указанные соединения.
Указанная смесь может содержать все диастереомеры и/или энантиомеры с основной молекулярной структурой указанного соединения. Все стереохимически изомерные формы соединений, используемые в настоящем изобретении либо в чистом виде, либо в смеси друг с другом, предназначены для включения в объем настоящего изобретения, в том числе любые рацемические смеси или рацематы.
Чистые стереоизомерные формы упомянутых в настоящем документе соединений и промежуточных продуктов определяют как изомеры, по сути не содержащие других энантиомерных или диастереомерных форм одной и той же основной молекулярной структуры указанных соединений или промежуточных продуктов. В частности, термин стереоизомерно чистый относится к соединениям или промежуточным продуктам, характеризующимся стереоизомерным избытком, составляющим по меньшей мере от 80% (т.е. минимум 90% одного изомера и максимум 10% других возможных изомеров) до стереоизомерного избытка, составляющего 100% (т.е. 100% одного изомера и отсутствие другого), более конкретно, к соединениям или промежуточным продуктам, характеризующимся стереоизомерным избытком, составляющим от 90 до 100%, еще более конкретно характеризующимся стереоизомерным избытком, составляющим от 94 до 100%, и наиболее конкретно характеризующимся стереоизомерным избытком, составляющим от 97% до 100%. Термины энантиомерно чистый и диастереомерно чистый следует понимать подобным образом, но в таком случае в отношении соответственно энантиомерного избытка и диастереомерного избытка смеси, представляющей интерес.
Чистые стереоизомерные формы соединений и промежуточных соединений, используемые в настоящем изобретении, можно получать при применении процедур, известных в уровне техники. Например, энантиомеры можно отделять друг от друга с помощью селективной кристаллизации их диастереомерных солей с оптически активными кислотами или основаниями. Их примерами являются винная кислота, дибензоилвинная кислота, дитолуоилвинная кислота и камфорсульфоновая кислота. В качестве альтернативы энантиомеры можно разделять с помощью хроматографических методик с использованием хиральных неподвижных фаз. Указанные чистые стереохимически изомерные формы можно также получать из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм соответствующих исходных материалов при условии, что реакция протекает стереоспецифически. Предпочтительно, если необходим определенный стереоизомер, то указанное соединение будет синтезировано с помощью стереоспецифических способов получения. В таких способах преимущественно применяют энантиомерно чистые исходные материалы.
Общие подходы синтеза
Синтез соединений общей формулы I можно осуществлять, как изложено на схеме 1. 2-(4-Хлор-2метоксифенил)уксусная кислота (II) может быть превращена в соответствующий 2-(4-хлор-2метоксифенил)ацетилхлорид (III) с использованием реактива для хлорирования, такого как, например, тионилхлорид. Реакцию Фриделя-Крафтса ацетилхлорида III с замещенным индолом общей формулы IV можно осуществлять с использованием реактива, представляющего собой кислоту Льюиса, такого как, например, Е12А1С1. в подходящем растворителе, таком как, например, СН2С12, и при подходящих условиях реакции, которые, как правило, включают охлаждение, с получением 3-ацилированного индола общей формулы V. Введение анилинового фрагмента в альфа положение по отношению к карбонильному фрагменту соединения общей формулы V можно осуществлять при помощи последовательности реакций, которая включает, например, бромирование V реактивом, таким как, например, трибромид фенилтриметиламмония, в подходящем растворителе, таком как, например, ТНЕ, с получением соединений общей формулы VI, и последующее приведение в реакцию соединений общей формулы VI и 2-(3-амино5-метоксифенокси)этанола (VII) в подходящем растворителе, таком как, например, СН3СИ, и, как правило, с использованием основания, такого как, например, ТЕА или ИШЕА, с получением соединений общей формулы I в виде рацемических смесей. Хиральное разделение соединений общей формулы I можно осуществлять с помощью, например, хиральной хроматографии с получением энантиомеров А и В общей формулы I.
- 5 032546
В качестве альтернативного подхода промежуточное соединение общей формулы V также можно получить, как изложено на схеме 2. Ν-Вос-защищенный замещенный индол-3-карбальдегид общей формулы VIII можно превращать в соответствующее промежуточное соединение по типу соединения из реакции Штрекера общей формулы IX посредством проведения реакции с морфолином в присутствии реагентов, таких как, например, цианид натрия и бисульфит натрия, и в подходящем растворителе, таком как, например, смесь воды и смешиваемого с водой органического растворителя, такого как, например, диоксан. Алкилирование соединения общей формулы IX 4-хлор-2-метоксибензилхлоридом можно осуществлять в присутствии основания, такого как, например, гексаметилдисилазан калия, и в подходящем растворителе, таком как, например, ΌΜΤ, с получением соединения общей формулы X. Воздействие на соединение общей формулы X подходящего водного гидролитического кислого условия, такого как, например, обработка водным раствором хлористоводородной кислоты, при повышенной температуре, дает промежуточное соединение общей формулы V.
Способы ЬС/М8
Измерения в ходе высокоэффективной жидкостной хроматографии (ИРЬС) проводили с помощью насоса для ЬС, детектора на диодной матрице (ΌΆΌ) или УФ-детектора и колонки, которая описана в соответствующих способах. При необходимости включали дополнительные детекторы (см. приведенную ниже табл. способов).
Поток из колонки направляли в масс-спектрометр (Μ8), который был оснащен источником ионизации при атмосферном давлении. В компетенции специалиста в данной области находится установка настраиваемых параметров (например, диапазона сканирования, минимального времени измерения и т.п.) с целью получения ионов, обеспечивающих определение номинальной моноизотопной молекулярной массы (ΜΑ) соединения. Сбор данных проводили с помощью соответствующего программного обеспечения.
Соединения описаны по их экспериментальному времени удерживания (Кд) и ионам. Если в таблице данных не указано иное, то указанный молекулярный ион соответствует [М+Н]+ (протонированной молекуле) и/или [М-Н]- (депротонированной молекуле). В случае, если соединение не было непосредственно способно к ионизации, указывают тип аддукта (т. е. [Μ+ΝΗ4]+, [М+НСОО]- и т.д.). Для молекул со сложными изотопными распределениями (Вг, С1) указанное значение является таким значением, которое получено для наименьшей массы изотопа. Все результаты получали с экспериментальными погрешностями, которые обычно связаны с применяемым способом.
Далее в данном документе 8ΡΌ означает одиночный квадрупольный детектор, Μ8Ό означает масс-селективный детектор, КТ означает комнатную температуру, ВЕН означает мостиковый гибрид этилсилоксана/диоксида кремния, ΌΆΌ означает детектор на диодной матрице, Η88 означает диоксид кремния повышенной прочности.
- 6 032546
Коды способов ЬС/М8 (скорость потока, выраженная в мл/мин; температура колонки (Т) в °С; время анализа в минутах).
Код способа Прибор Колонка Подвижная фаза Градиент Поток Т колонки Время анализа (мин.)
ЬС-А АаЮгх: АссцШу ирье®- ОАЛ-8ЦО Аа!етз: ВЕН С18 (1,7 мкм, 2,1x50 мм) А: 10 мМ ΟΗ3ΟΟΟΝΗ4 в 95% Н2О+5% ΟΗ3ΟΝ В: ΟΗ3ΟΝ От 95% А до 5% А за 1,3 мин., удерживание в течение 0,7 мин. 0,8 мл/минуты 55°С 2
ЬС-В АаЮгх: АссцШу ирье®- ОАО-8РО Аа!ег8: Η88 Τ3 (1,8 мкм, 2,1x100 мм) А: 10 мМ ΟΗ3ΟΟΟΝΗ4 в 95% Н2О+5% ΟΗ3ΟΝ В: ΟΗ3ΟΝ От 100% А до 5% А за 2,10 мин., до 0% А за 0,90 мин., до 5% А за 0,5 мин. 07 мл/минуты 55°С 3,5
ЬС-С АаЮгх: Асс|ш1у“ ирье®ϋΑΟОиаРго Мюго™ Аа!етз: ВЕН С18 (1,7 мкм, 2,1x100 мм) А: 95% ΟΗ3ΟΟΟΝΗ4 7 мМ/5% ΟΗ3ΟΝ, В: ΟΗ3ΟΝ 84,2% А в течение 0,49 мин., до 10,5% А за 2,18 мин., удерживание в течение 1,94 мин., обратно до 84,2% А за 0,73 мин., удерживание в 0,343 мл/минуты 40°С 6,2
ьс-о Аа1сг5: Асс|ш1ув ирье®- ОАЛ-ТЦО Аа!еге: Η88 С18 (1,8 мкм, 2,1x50 мм А: 0,1% муравьиная кислота вН2О В: ΟΗ3ΟΝ течение 0,73 мин. От 50% А до 10% за 3,5 мин., удерживание в течение 1,5 мин. 0,5 мл/минуты 40°С 5
Способы 8ЕС-М8
Измерения в ходе 8РС проводили с применением аналитической системы хроматографии со сверхкритической подвижной фазой, укомплектованной насосом для двухкомпонентных смесей для доставки диоксида углерода (СО2) и модификатором, автоматическим дозатором, термостатом для колонок, детектором на диодной матрице, оснащенным проточной кюветой для работы под высоким давлением, выдерживающей значения до 400 бар. При оснащении масс-спектрометром (М8) поток из колонки направляли в (М8). В компетенции специалиста в данной области находится установка настраиваемых параметров (например, диапазона сканирования, минимального времени измерения и т. п.) с целью получения ионов, обеспечивающих определение номинальной моноизотопной молекулярной массы (М^) соединения. Сбор данных проводили с помощью соответствующего программного обеспечения.
Аналитические способы 8РС-М8 (скорость потока, выраженная в мл/мин.; температура колонки (Т) в °С; время анализа в минутах, противодавление (ВРК) в барах).________________________
Код способа Колонка Подвижная фаза Градиент Поток Т колонки Время анализа
ВРК
8ЕС-А Колонка Оа1се1 СЫга1рак® ΑΟ-Η (5 мкм, 150x4,6 мм) А:СО2 В: МеОН 30% В с удержанием 7 мин. 3 35 7 100
8ЕС-В Колонка Оа1се1 СЫга1рак® ΑΟ-Η (5 мкм, 150x4,6 мм) А: СО2 В: МеОН 40% В с удержанием 7 мин. 3 35 7 100
- 7 032546
згс-с Колонка Эа1се1 СЫга1рак® О1-Н (5 мкм, 250x4,6 мм) А: СО2 В: МеОН 40% В с удержанием 7 мин. 1 £ ί 7 100
8ГС-Ц Колонка Оа1се1 СЫга1рак® ОЭ-Н (5 мкм, 150x4,6 мм) А: СО2 В: МеОН 40% В с удержанием 7 мин. 3 35 7 100
8ГС-Е \¥НЕЬК-О1 (8,8) 250*4,6 мм 5 мкм Ке§18 А:СО2 В: МеОН 60% В с удержанием 7 мин. 3 35 7 100
ЗРС-Г Колонка Оа1се1 СЫга1рак® А83 (3,0 мкм, 150x4,6 мм) А: СО2 В: ЕЮН +0,2% ιΡγΝΗ2 +3%Н2О 25% В с удержанием 6 мин., до 50% за 1 мин. с удержанием 2,5 мин. 2,5 40 9,5 110
8ГС-С Колонка Оа1се1 СЫга1рак® А83 (3,0 мкм, 150x4,6 мм) А: СО2 В: ЕЮН +0,2% ιΡγΝΗ2 +3%Н2О 30% В с удержанием 6 мин., до 50% за 1 мин. с удержанием 2,5 мин. 2,5 40 9,5 110
Точки плавления
Значения представляют собой либо максимальные значения, либо диапазоны температур плавления, и их получают с экспериментальными погрешностями, которые обычно связаны с таким аналитическим способом.
Э8С823е (обозначен как Э8С)
Для ряда соединений точки плавления определяли с помощью Э8С823е (МеШег-То1е4о). Точки плавления измеряли с градиентом температур 10°С/мин. Максимальная температура составляла 300°С.
Углы вращения плоскости поляризации света
Углы вращения плоскости поляризации света измеряли на поляриметре Регкш-Е1шег 341 с натриевой лампой и обозначали следующим образом: [α]° (λ, с г/100 мл, растворитель, Т°С).
[α]λ τ= (100а)/(1хс), где 1 означает длину пробега в дм, а с означает концентрацию в г/100 мл для образца при температуре Т (°С) и длине волны X (в нм). Если используемая длина волны света составляет 589 нм (Т)-линия натрия), то вместо этого можно использовать символ Ώ. Всегда следует приводить знак направления вращения (+ или -). В случае использования данного уравнения концентрацию и растворитель всегда приводят в круглых скобках после угла вращения. Угол вращения указывают в градусах, а единицы концентрации не приводят (принято, что они представлены в г/100 мл).
Пример 1. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-фтор-1Н-индол-3-ил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5метоксифенил)амино)этанона (соединения 1) и хиральное разделение на энантиомеры 1А и 1В.
2-(4-Хлор-2-метоксифенил)уксусную кислоту [СА8 170737-95-8] (5,8 г, 28,9 ммоль) добавляли небольшими порциями к тионилхлориду (50 мл) и полученный раствор перемешивали в течение ночи при 60°С. Растворитель концентрировали при пониженном давлении и выпаривали совместно с толуолом с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)ацетилхлорида 1а (6,5 г) в виде маслянистого остатка, который использовали без дополнительной очистки на следующей стадии.
- 8 032546
Синтез промежуточного соединения 1Ь
Добавляли по каплям при 0°С 1 М диэтилалюминийхлорид в гексане (37,1 мл, 37,14 ммоль) к раствору 6-фтор-1Н-индола [СА8 399-51-9] (3,34 г, 24,76 ммоль) в СН2С12 (100 мл). Через 30 мин при 0°С раствор 2-(4-хлор-2-метоксифенил)ацетилхлорида 1а (6,3 г, 28,76 ммоль) в СН2С12 (100 мл) медленно добавляли при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 3 ч. Добавляли ледяную воду и осадок отфильтровывали, промывали водой и небольшим количеством СН2С12. Твердые вещества высушивали под вакуумом при 70°С в течение ночи с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-фтор-1Ниндол-3-ил)этанона 1Ь (4,9 г).
Синтез промежуточного соединения 1с
Добавляли по каплям при 0°С раствор трибромида фенилтриметиламмония [СА8 4207-5 6-1] (5,8 г, 15,4 ммоль) в ТНТ (65 мл) к смеси 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-фтор-1Н-индол-3-ил)этанона 1Ь (4,9 г, 15,4 ммоль) в ТНТ (60 мл). Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч при комнатной температуре в течение 2,5 ч. Осадок отфильтровывали и промывали с помощью ЕЮАе. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток поглощали с помощью ЕЮАе и промывали водой. В органическом слое возникал осадок и его отфильтровывали и высушивали с получением первой партии 2-бром-2-(4-хлор-2метоксифенил)-1-(6-фтор-1Н-индол-3-ил)этанона 1с (4,6 г). Органический слой отделяли, высушивали над Мд8О4, фильтровали и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Остаток кристаллизовали из ЕЮАе, осадок отфильтровывали, промывали с помощью Е12О и высушивали под вакуумом с получением второй фракции 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-фтор-1Н-индол-3-ил)этанона 1с (1,6 г).
Синтез соединения 1 и хиральное разделение на энантиомеры 1А и 1В
Смесь 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-фтор-1Н-индол-3-ил)этанона 1с (2,1 г, 5,3 ммоль), 2(3-амино-5-метоксифенокси)этанола [СА8 725237-16-1] (924 мг, 5,05 ммоль) и триэтиламина (1,47 мл, 10,6 ммоль) в СН3СЫ (16 мл) в запечатанной пробирке нагревали при 100°С в течение 30 мин с использованием микроволнового устройства Вю1адс® ΙηίΙίηΙΟΓ ЕХР 60 с выходной мощностью, варьирующейся от 0 до 400 Вт (фиксированное время удерживания). Реакционную смесь разбавляли с помощью СН2С12 и органический слой промывали водой, высушивали над Мд8О4, фильтровали и растворитель концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (15-40 мкм, 80 г) с использованием гептана/ЕЮАс, градиент от 50/50 до 0/100. Чистые фракции собирали и концентрировали с получением 1,1 г соединения 1. Эту фракцию объединяли с другой партией, составляющей 0,93 г соединения 1, и затем очищали посредством ахиральной 8ЕС (неподвижная фаза: ΤΎΛΝΟ 6 мкм 150x21,2 мм, подвижная фаза: 75% СО2, 25% МеОН) с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1(6-фтор-1Н-индол-3-ил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)этанона (соединение 1, 1,36 г) в виде рацемической смеси.
Энантиомеры соединения 1 (1,36 г) разделяли посредством хиральной 8ЕС (неподвижная фаза: СЫгасе1® О1 20x250 мм, подвижная фаза: 60% СО2, 40% МеОН) с получением 611 мг первого элюированного энантиомера и 586 мг второго элюированного энантиомера. Первый элюированный энантиомер поглощали с помощью СНзСМдиизопропилового эфира/гептана. Осадок отфильтровывали и высушивали с получением энантиомера 1А (496 мг) в виде аморфного порошка. Второй элюированный энантиомер поглощали с помощью СН3СМдиизопропилового эфира/гептана. Осадок отфильтровывали и высушивали с получением энантиомера 1В (458 мг) в виде аморфного порошка.
Соединение 1.
'11 ЯМР (500 МН/, 1)\18О-с1.) δ ррт 3,61 (8, 3Н) 3,64 (ц, 1=5,3 Нг, 2Н) 3,77-3,88 (т, 2Н) 3,96 (8, 3Н) 4,78 (1, 1=5,5 Нг, 1Н) 5,71 (1, 1=1,9 Нд 1Н) 5,93 (6, 1=1,9 Нд 2Н) 6,15 (6, 1=8,2 Нг, 1Н) 6,40 (6, 1=8,2 Нг, 1Н) 6,96 (66, 1=8,2, 1,9 Нг, 1Н) 7,02-7,08 (т, 1Н) 7,09 (6, 1=1,9 Нг, 1Н) 7,27 (66, 1=9,6, 2,4 Нг, 1Н) 7,35 (6, 1=8,5 Нг, 1Н) 8,13 (66, 1=8,8, 5,7 Нд 1Н) 8,43 (8, 1Н) 11,96-12,17 (т, 1Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-С): К1 2,95 минуты, МН+ 499
Энантиомер 1А.
'11 ЯМР (500 МН/, 1)\18О-с1.) δ ррт 3,57-3,68 (т, 5 Н) 3,77-3,89 (т, 2Н) 3,96 (8, 3Н) 4,73-4,87 (т, 1Н) 5,71 (1, 1=1,9 Нг, 1Н) 5,91-5,96 (т, 2Н) 6,15 (6, 1=8,2 Н, 1Н) 6,39 (6, 1=8,2 Нг, 1Н) 6,96 (66, 1=8,2, 1,9 Нд 1Н) 7,01-7,11 (т, 2Н) 7,27 (66, 1=9,6, 2,4 Нд 1Н) 7,36 (6, 1=8,2 Н, 1Н) 8,13 (66, 1=9,6, 5,7 Нд 1Н) 8,43 (8, 1Н) 11,45-12,31 (т, 1Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-С): К1 2,95, МН+ 499 |ιζ| 2 : +112,1° (с 0,281, ОМЕ)
Хиральная 8ЕС (способ 8ЕС-С): К 3,17 мин., МН+ 499, хиральная чистота 100%.
Энантиомер 1В.
'11 ЯМР (500 МН/, 1)\18О-с1.) δ ррт 3,57-3,67 (т, 5Н) 3,74-3,90 (т, 2Н) 3,96 (8, 3Н) 4,78 (Ьг. 8., 1Н) 5,70-5,74 (т, 1Н) 5,93 (8, 2Н) 6,15 (6, 1=8,2 Н, 1Н) 6,40 (6, 1=8,2 Н, 1Н) 6,96 (66, 1=8,2, 1,9 Нг, 1Н) 7,027,08 (т, 1Н) 7,09 (6, 1=1,9 Нг, 1Н) 7,27 (66, 1=9,6, 2,4 Н, 1Н) 7,36 (6, 1=8,2 Н, 1Н) 8,13 (66, 1=9,6, 5,5 Нг, 1Н) 8,43 (8, 1Н) 11,63-12,47 (т, 1Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-С): К1 2,95, МН+ 499
- 9 032546 [α]ο 20: -113,9° (с 0,28, Ι)ΜΤ)
Хиральная 8ТС (способ 8ТС-С): К 4,12 мин., МН+ 499, хиральная чистота 100%.
Пример 1.1. Хиральная устойчивость энантиомера 1А при рН 7,4
Хиральную устойчивость энантиомера 1А (К=ОМе) оценивали посредством определения энантиомерного избытка (ее%) после инкубирования в течение 24 и 48 ч. в буферном растворе при рН 7,4 при 40 и 60°С. Для оценки влияния метокси-заместителя энантиомера 1А (К=ОМе) на устойчивость к рацемизации хиральную устойчивость энантиомера 1'А (К=Н) тестировали при тех же условиях.
С этой целью получали 5 мкМ забуференные (рН=7,4) растворы 1А и 1'А посредством смешивания 25 мкл 100 мкМ раствора 1А или 1'А в ΏΜ8Ο с 475 мкл водного буфера, рН 7,4. Образцы отбирали через 24 и 48 ч после инкубирования при 40 и 60°С.
Аналитические образцы анализировали с помощью хиральной 8ТС (определение М8) и хиральную чистоту выражали в виде энантиомерного избытка (ее%=%энантиомера А - %энантиомера В). Оба энантиомера 1А и 1'А характеризовались хиральной чистотой 100% перед началом их инкубирования.
Пример 2. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-фтор-7-метил-1Н-индол-3-ил)-2-((3-(2гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)этанона (соединения 2) и хиральное разделение на энантиомеры 2А и 2В.
Раствор 6-фтор-7-метил-1Н-индола [СА8 57817-10-4] (1,10 г, 7,37 ммоль) в СН2С12 (40 мл) охлаждали на ледяной бане в потоке Ν2. В течение 15 мин добавляли по каплям 1 М диэтилалюминийхлорид в гексане (10 мл, 10 ммоль). После дополнительного перемешивания в течение 15 мин при 0°С добавляли раствор 2-(4-хлор-2-метоксифенил)ацетилхлорида 1а (2,06 г, 9,42 ммоль, синтез: см. пример 1) в СН2С12 (35 мл) в течение 75 мин при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч и затем гасили посредством медленного добавления раствора тетрагидрата тартрата калия-натрия (сегнетовой соли) [СА8 6100-16-9] (4,24 г, 15 ммоль) в воде (10 мл) при поддержании внутренней температуры смеси ниже 10°С. Ледяную баню удаляли, добавляли 2-метил-ТНР (160 мл) и Να28Ο4 (60 г) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь фильтровали через О1са1йе® и осадок на фильтре промывали несколькими порциями ТНР. Объединенные фильтраты выпаривали при пониженном давлении и остаток растирали с небольшим количеством СН2С12. Твердые вещества выделяли посредством фильтрации и высушивали под вакуумом с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-фтор7-метил-1Н-индол-3-ил)этанона 2а (1,9 г) в виде белого порошка.
Синтез соединения 2 и хиральное разделение на энантиомеры 2А и 2В
Раствор 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-фтор-7-метил-1Н-индол-3-ил)этанона 2а (1,9 г, 5,73 ммоль) в сухом ТНТ (60 мл) охлаждали на ледяной бане в потоке Ν2. Добавляли по каплям при 0°С раствор три
- 10 032546 бромида фенилтриметиламмония [СА8 4207-56-1] (2,3 г, 5,91 ммоль) в ТНТ (50 мл) в течение 1 ч и смесь перемешивали при 0°С в течение дополнительных 1,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток, содержащий неочищенное бромированное промежуточное соединение 2Ь, растворяли в СН3СN (100 мл). Добавляли 2-(3-амино-5-метоксифенокси)этанол [СА8 725237-16-1] (2,11 г, 11,5 ммоль) и диизопропилэтиламин (2 мл, 11,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Добавляли воду (350 мл) и продукты реакции экстрагировали с помощью 2-метил-ТНТ (3х 100 мл). Объединенные органические слои промывали с помощью 0,5 М НС1 (200 мл) и воды (3х 300 мл), высушивали над Мд804 и выпаривали при пониженном давлении. Остаток (2,48 г) очищали посредством колоночной хроматографии (неподвижная фаза: диоксид кремния 40 г, НР8рБег® 40 мкм; подвижная фаза: гептан/Е10Ас, градиент от 100/0 до 0/100). Фракции, содержащие продукт реакции, объединяли и выпаривали при пониженном давлении. Остаток растирали с небольшим количеством смеси Е10Ас/гептана (1/1), твердые вещества отфильтровывали и высушивали под вакуумом с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-фтор-7-метил-1Н-индол-3-ил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)этанона (соединение 2, 1,38 г) в виде рацемической смеси.
Энантиомеры соединения 2 (1,38 г) разделяли посредством препаративной 8ТС (неподвижная фаза: СЫга1рак® Б1асе1 А8 20x250 мм, подвижная фаза: СО2, Е10Н с 0,4% ϊΡγΝΙ 12). Первый элюированный энантиомер растворяли в смеси МеОН (50 мл) и воды (20 мл) и смесь выпаривали при пониженном давлении (200 мбар, водяная баня 40°С) до остаточного объема 20 мл. Полученную суспензию разбавляли с помощью 20 мл воды и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Белое твердое вещество отфильтровывали, промывали водой и высушивали под вакуумом при комнатной температуре с получением энантиомера 2А (631 мг) в виде аморфного белого порошка. Второй элюированный энантиомер растворяли в смеси МеОН (50 мл) и воды (20 мл) и смесь выпаривали при пониженном давлении (200 мбар, водяная баня 40°С) до остаточного объема 20 мл. Полученную суспензию разбавляли с помощью 20 мл воды и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Белое твердое вещество отфильтровывали, промывали водой и высушивали под вакуумом при комнатной температуре с получением энантиомера 2В (625 мг) в виде аморфного белого порошка.
Соединение 2.
1Н ЯМР (400 МН/, ΏΜ80-ά6) δ ррт 2,37 (Ьг δ, 3Н) 3,60 (δ, 3Н) 3,63 (ς, 1=5,2 Нг, 2Н) 3,76-3,89 (т, 2Н) 3,96 (δ, 3Н) 4,76 (1, 1=5,5 Нг, 1Н) 5,71 (1, 1=2,1 Нг, 1Н) 5,94 (ά, 1=2,2 Нг, 2Н) 6,16 (ά, 1=8,1 Нг, 1Н) 6,36 (ά, 1=8,1 Нг, 1Н) 6,95 (άά, 1=8,4, 2,0 Нг, 1Н) 7,00 (άά, 1=10,1, 8,8 Нг, 1Н) 7,08 (ά, 1=2,0 Нг, 1Н) 7,35 (ά, 1=8,1 Нг, 1Н) 7,95 (άά, 1=8,7, 5,2 Нг, 1Н) 8,41 (δ, 1Н) 12,17 (Ьг δ, 1Н).
БС/М8 (способ БС-А): Κ1 1,19 мин, МН+ 513
Энантиомер 2А.
1Н ЯМР (360 МНг, ΏΜ80-ά6) δ ррт 2,38 (δ, 3Н) 3,61 (δ, 3Н) 3,62-3,67 (т, 2Н) 3,82 (άά1, 1=15,4, 10,2, 5,1, 5,1 Нг, 2Н) 3,97 (δ, 3Н) 4,81 (1, 1=5,5 Нг, 1Н) 5,71 (Ьг 1, 1=1,8 Нг, 1Н) 5,95 (ά, 1=1,5 Нг, 2Н) 6,17 (Ьг ά, 1=8,4 Нг, 1Н) 6,40 (Ьг ά, 1=8,1 Нг, 1Н) 6,96 (άά, 1=8,4, 1,8 Нг, 1Н) 7,02 (Ьг άά, 1=10,1, 9,0 Нг, 1Н) 7,10 (ά, 1=1,8 Нг, 1Н) 7,36 (ά, 1=8,1 Нг, 1Н) 7,96 (άά, 1=8,6, 5,3 Нг, 1Н) 8,44 (δ, 1Н) 12,22 (Ьг δ, 1Н).
БС/М8 (способ БС-А): Κ1 1,20, МН+ 513 [а]п20: +83,3° (с 0,36, БМТ)
Хиральная 8ТС (способ 8ТС-Т): Κ1 2,05 мин, МН+ 513, хиральная чистота 100%.
Энантиомер 2В.
1Н ЯМР (360 МНг, ЭМ80-ф>) δ ррт 2,38 (δ, 3Н) 3,61 (δ, 3Н) 3,62-3,67 (т, 2Н) 3,83 (ς1, 1=10,2, 5,1 Нг, 2Н) 3,97 (δ, 3Н) 4,80 (1, 1=5,5 Нг, 1Н) 5,71 (Ьг 1, 1=2,2 Нг, 1Н) 5,95 (ά, 1=1,8 Нг, 2Н) 6,17 (ά, 1=8,1 Нг, 1Н) 6,40 (ά, 1=8,1 Нг, 1Н) 6,96 (άά, 1=8,4, 1,8 Нг, 1Н) 7,02 (άά, 1=10,2, 8,8 Нг, 1Н) 7,10 (ά, 1=1,8 Нг, 1Н) 7,36 (ά, 1=8,1 Нг, 1Н) 7,96 (άά, 1=8,6, 5,3 Нг, 1Н) 8,44 (δ, 1Н) 12,21 (Ьг δ, 1Н).
БС/М8 (способ БС-А): Κ1 1,20, МН+ 513 [а]о 20: -81,9° (с 0,515, БМТ)
Хиральная 8ТС (способ 8ТС-Т): Κ1 3,28 мин, МН+ 513, хиральная чистота 100%.
Пример 3. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-хлор-7-метил-1Н-индол-3-ил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)этанона (соединение 3) и хиральное разделение на энантиомеры 3А и 3В.
- 11 032546
Синтез промежуточного соединения 3а
Добавляли по каплям при 0°С 1 М диэтилалюминийхлорид в гексане (18,1 мл, 18,1 ммоль) к раствору 6-хлор-7-метил-1Н-индола [СА8 57817-09-1] (2 г, 12,08 ммоль) в СН2С12 (60 мл). Через 30 мин при 0°С раствор 2-(4-хлор-2-метоксифенил)ацетилхлорида 1а (3,21 г, 14,66 ммоль, синтез: см. пример 1) в СН2С12 (60 мл) медленно добавляли при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 3 ч. Добавляли ледяную воду, осадок отфильтровывали и промывали водой. Твердое вещество высушивали под вакуумом с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-хлор-7-метил-1Н-индол-3-ил)этанона 3а (3,2 г).
Синтез промежуточного соединения 3Ь
Добавляли по каплям при 0°С раствор трибромида фенилтриметиламмония [СА8 4207-56-1] (3,63 г, 9,65 ммоль) в ТНР (85 мл) к раствору 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-хлор-7-метил-1Н-индол-3ил)этанона 3а (3,2 г, 9,2 ммоль) в ТНЕ (85 мл). Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч и при комнатной температуре в течение 2,5 ч. Осадок отфильтровывали и промывали с помощью ЕЮАс. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток поглощали с помощью минимального количества СН3СЫ/диизопропилового эфира. Осадок отфильтровывали и высушивали под вакуумом с получением 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-хлор-7-метил-1Н-индол-3-ил)этанона 3Ь (4,1 г).
Синтез соединения 3 и хиральное разделение на энантиомеры 3А и 3В
Смесь 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-хлор-7-метил-1Н-индол-3-ил)этанона 3Ь (3,1 г, 7,26 ммоль), 2-(3-амино-5-метоксифенокси)этанола [СА8 725237-16-1] (1,33 г, 7,26 ммоль) и диизопропилэтиламина (1,9 мл, 10,9 ммоль) в СН3СЫ/ТНЕ (1/1) (120 мл) перемешивали при 70°С в течение 24 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли с помощью СН2С12 и промывали с помощью 1 н. НС1. Органический слой отделяли, высушивали над Мд8О4, фильтровали и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм, 80 г в СН2С12/МеОН (99,5/0,5)). Чистые фракции собирали и выпаривали при пониженном давлении (2,3 г). Небольшое количество кристаллизовали из Е12О/СН3ОЫ с получением аналитического образца 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-хлор-7-метил-1Н-индол-3-ил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)5-метоксифенил)амино)этанона (соединения 3) в виде рацемата.
Энантиомеры соединения 3 (2,2 г) разделяли посредством препаративной хиральной 8ЕС (неподвижная фаза: (8,8) \¥11е1к-О 1 5 мкм 250x21,1 мм, подвижная фаза: 45% СО2, 55% ЕЮН (+ 2% СН2С12)) с получением 1,11 г первого элюированного энантиомера и 1,07 г второго элюированного энантиомера. Первый элюированный энантиомер отверждали из СН3СН/ЕьО/гептана с получением энантиомера 3А (461 мг) в виде аморфного белого порошка. Второй элюированный энантиомер отверждали из СН3СЫ/Е12О/ гептана с получением энантиомера 3В (872 мг) в виде аморфного белого порошка.
Соединение 3.
'|| ЯМР (500 МН/, ЭМ8О-й6) δ ррт 12,26 (й, 1=2,8 Нд 1Н) 8,46 (й, 1=3,2 Нд 1Н) 7,97 (й, 1=8,5 Нг, 1Н) 7,35 (й, 1=8,2 Нд 1Н) 7,22 (й, 1=8,5 Нг, 1Н) 7,09 (й, 1=1,9 Н, 1Н) 6,96 (йй, 1=8,2, 1,9 Нг, 1Н) 6,40 (й, 1=8,2 Нг, 1Н) 6,18 (й, 1=8,2 Нг, 1Н) 5,95 (й, 1=2,2 Нг, 2Н) 5,71 (1, 1=2,2 Нг, 1Н) 4,79 (1, 1=5,5 Нд 1Н) 3,96 (8, 3Н) 3,77-3,89 (т, 2Н) 3,58-3,67 (т, 5Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-С): К1 3,28 минуты, МН+ 529
Температура плавления: 220°С
Энантиомер 3А.
'Н ЯМР (500 МН/, ЭМ8О-й6) δ ррт 12,26 (Ьг. 8., 1Н) 8,46 (8, 1Н) 7,97 (й, 1=8,2 Нг, 1Н) 7,36 (й, 1=8,2 Нд 1Н) 7,21 (й, 1=8,5 Нг, 1Н) 7,10 (й, 1=1,9 Н, 1Н) 6,96 (йй, 1=8,2, 1,9 Нг, 1Н) 6,40 (й, 1=7,9 Н, 1Н) 6,18 (й, 1=8,2 Н, 1Н) 5,95 (й, 1=2,2 Нг, 2Н) 5,71 (1, 1=2,0 Нд 1Н) 4,79 (1, 1=5,5 Нд 1Н) 3,97 (8, 3Н) 3,77-3,89 (т, 2Н) 3,59-3,67 (т, 5Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-С): К1 3,27 минуты, МН+ 529 |ιζ| 2 : +88,8° (с 0,2691, ЭМЕ)
Хиральная 8ЕС (способ 8ЕС-Е): И, 3,40 мин., МН+ 529, хиральная чистота 100%.
Энантиомер 3В.
'|| ЯМР (500 МН/, ЭМ8О-й6) δ ррт 12,26 (Ьг. 8., 1Н) 8,45 (8, 1Н) 7,97 (й, 1=8,5 Нг, 1Н) 7,36 (й, 1=8,5 Нд 1Н) 7,21 (й, 1=8,5 Нг, 1Н) 7,09 (й, 1=1,9 Н, 1Н) 6,96 (йй, 1=8,2, 1,9 Нг, 1Н) 6,40 (й, 1=8,2 Нг, 1Н) 6,18 (й, 1=8,2 Н, 1Н) 5,95 (й, 1=2,2 Нг, 2Н) 5,71 (1, 1=2,0 Нд 1Н) 4,79 (1, 1=5,5 Нд 1Н) 3,97 (8, 3Н) 3,76-3,90 (т, 2Н) 3,60-3,66 (т, 5Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-С): И1 3,27 минуты, МН+ 529 [а]с 20: -87,4° (с 0,2564, ЭМЕ)
Хиральная 8ЕС (способ 8ЕС-Е): И1 4,19 мин., МН+ 529, хиральная чистота 100%.
Пример 4. Синтез 1-(6-хлор-1Н-индол-3-ил)-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5метоксифенил)амино)этанона (соединения 4) и хиральное разделение на энантиомеры 4 А и 4В.
- 12 032546
Синтез промежуточного соединения 4а
Добавляли по каплям при 0°С 1 М диэтилалюминийхлорид в гексане (19,8 мл, 19,8 ммоль) к раствору 6-хлор-1Н-индола [СА8 17422-33-2] (2 г, 13,2 ммоль) в СН2С12 (45 мл). Через 30 мин при 0°С раствор 2-(4-хлор-2-метоксифенил)ацетилхлорида 1а (3,36 г, 15,3 ммоль, синтез: см. пример 1) в СН2С12 (45 мл) медленно добавляли при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 3 ч. Добавляли ледяную воду и осадок отфильтровывали, промывали водой и минимальным количеством СН2С12. Твердое вещество высушивали под вакуумом с получением 1-(6-хлор-1Н-индол-3-ил)-2-(4-хлор-2метоксифенил)этанона 4а (2,68 г).
Синтез промежуточного соединения 4Ь
Добавляли по каплям при 0°С раствор трибромида фенилтриметиламмония [СА8 4207-56-1] (3,165 г, 8,4 ммоль) в ТНР (50 мл) к раствору 1-(6-хлор-1Н-индол-3-ил)-2-(4-хлор-2-метоксифенил) этанона 4а (2,68 г, 8 ммоль) в ТНР (50 мл). Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч и при комнатной температуре в течение 2,5 ч. Осадок отфильтровывали и промывали с помощью ЕЮЛс. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в ЕЮЛс и промывали водой. Появлялся осадок и твердые вещества отфильтровывали и высушивали под вакуумом с получением 2-бром-1-(6-хлор-1Н-индол3-ил)-2-(4-хлор-2-метоксифенил)этанона 4Ь (2,75 г).
Синтез соединения 4 и хиральное разделение на энантиомеры 4А и 4В
Смесь 2-бром-1-(6-хлор-1Н-индол-3-ил)-2-(4-хлор-2-метоксифенил)этанона 4Ь (2,3 г, 5,6 ммоль), 2(3-амино-5-метоксифенокси)этанола [СЛ8 725237-16-1] (1,53 г, 8,4 ммоль) и диизопропилэтиламина (2,4 мл, 13,9 ммоль) в СН3С№/ТНР (1/1) (140 мл) перемешивали при 50°С в течение 12 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли с помощью ЕЮЛс, промывали с помощью 1 н. НС1 и затем водой. Органический слой высушивали над Мд8О4, фильтровали и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенное соединение очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм, 80 г в СН2С12/МеОН (99,5/0,5)). Чистые фракции собирали и выпаривали при пониженном давлении. Небольшое количество кристаллизовали из Е12О/СН3С№ с получением аналитического образца 1-(6-хлор-1Н-индол-3-ил)-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)этанона (соединения 4) в виде рацемической смеси. Оставшееся количество соединения 4 (2,1 г) дополнительно очищали посредством препаративной РС (неподвижная фаза: диоксид кремния без покрытия с частицами неправильной формы 150 г, подвижная фаза: толуолАРгОН 95/5).
Энантиомеры соединения 4 (1,9 г) разделяли посредством препаративной хиральной 8РС (неподвижная фаза: СЫга1рак® 1С 5 мкм, 250x30 мм, подвижная фаза: 60% СО2, 40% МеОН) с получением 870 мг первого элюированного энантиомера и 870 мг второго элюированного энантиомера. Два энантиомера снова очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (15-40 мкм, 24 г в СН2С12/МеОН (99,5/0,5)). Первый элюированный энантиомер (800 мг) отверждали из СН3СЖЕрО с получением энантиомера 4А (693 мг) в виде аморфного белого порошка. Второй элюированный энантиомер отверждали из СН3СЖЕ12О с получением энантиомера 4В (619 мг) в виде аморфного белого порошка.
Соединение 4.
1Н ЯМР (500 МН/, ЭМ8О-Й6) δ ррт 3,60 (з, 3Н) 3,64 (ΐ, 1=5,0 Н/, 2Н) 3,75-3,88 (т, 2Н) 3,95 (з, 3Н) 4,38-5,09 (т, 1Н) 5,71 (ΐ, 1=1,9 Нг, 1Н) 5,93 (ά, 1=2,2 Нг, 2Н) 6,13-6,18 (т, 1Н) 6,35-6,46 (т, 1Н) 6,97 (άά, 1=8,4, 1,9 Н/, 1Н) 7,09 (ά, 1=2,2 Н/, 1Н) 7,21 (άά, 1=8,5, 1,9 Н/, 1Н) 7,35 (ά, 1=8,4 Н/, 1Н) 7,53 (ά, 1=1,9 Н/, 1Н) 8,13 (ά, 1=8,5 Нг, 1Н) 8,46 (ά, 1=2,8 Нг, 1Н) 12,13 (ά, 1=2,8 Нг, 1Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-С): К, 3,11 мин, МН+ 515
Температура плавления: 154°С
Энантиомер 4А.
1Н ЯМР (500 МН/, ОМ8О-06) δ ррт 3,60 (з, 3Н) 3,64 (ς, 1=5,0 Н/, 2Н) 3,74-3,88 (т, 2Н) 3,95 (з, 3Н) 4,79 (ΐ, 1=5,0 Н/, 1Н) 5,71 (ΐ, 1=2,0 Н/, 1Н) 5,93 (ά, 1=2,0 Н/, 2Н) 6,15 (ά, 1=7,9 Н/, 1Н) 6,41 (ά, 1=8,2 Н/, 1Н) 6,97 (άά, 1=8,2, 1,9 Нг, 1Н) 7,09 (ά, 1=1,9 Нг, 1Н) 7,21 (άά, 1=8,5, 1,9 Нг, 1Н) 7,35 (ά, 1=8,2 Нг, 1Н) 7,53 (ά, 1=1,9 Нг, 1Н) 8,13 (ά, 1=8,5 Нг, 1Н) 8,46 (з, 1Н) 12,12 (Ьг. з., 1Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-С): К, 3,13 мин, МН+ 515 [а]п20: +111,6° (с 0,284, 1)\1П
Хиральная 8РС (способ 8РС-А): К, 3,68 мин, МН+ 515, хиральная чистота 100%.
- 13 032546
Энантиомер 4В.
1Н ЯМР (500 ΜΗζ, ΌΜδΟ-άβ) δ ррт 3,61 (§, 3Н) 3,62-3,68 (т, 2Н) 3,76-3,89 (т, 2Н) 3,95 (8, 3 Н) 4,74-4,83 (т, 1Н) 5,72 (1, 1=2,0 Ηζ, 1Н) 5,93 (ά, 1=2,0 Ηζ, 2Н) 6,15 (ά, 1=7,9 Ηζ, 1Н) 6,42 (ά, 1=8,2 Ηζ, 1Η)
6,97 (άά, 1=8,2, 1,9 Ηζ, 1Η) 7,09 (ά, 1=1,9 Ηζ, 1Η) 7,21 (άά, 1=8,5, 1,9 Ηζ, 1Η) 7,35 (ά, 1=8,2 Ηζ, 1Η) 7,53 (ά, 1=1,9 Ηζ, 1Η) 8,13 (ά, 1=8,5 Ηζ, 1Η) 8,46 (§, 1Η) 12,13 (Ьг. 8., 1Η).
ЬС/Μδ (способ ЬС-С): Щ 3,14 мин, МН+ 515 [α]π20: -113,9° (с 0,288, ΌΜΕ)
Хиральная 8ЕС (способ 8ЕС-А): Щ 5,04 мин, МН+ 515, хиральная чистота 100%.
Пример 5. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)-1-
Раствор ΝαΙ Ι5Ο3 (5,7 г, 54,5 ммоль) в воде (45 мл) добавляли к перемешиваемому раствору третбутил-3-формил-6-метокси-1Н-индол-1-карбоксилата [СА8 847448-73-1] (10 г, 36,3 ммоль) в диоксане (45 мл). Через 15 мин добавляли морфолин (4,8 мл, 54,5 ммоль) и спустя 35 мин добавляли цианид натрия (№С^ (1,96 г, 40 ммоль). Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней до завершения реакции. Продукт отфильтровывали и промывали смесью 1/1 диоксана/воды (3х 35 мл) и затем водой (3х 45 мл) и высушивали под вакуумом при 60°С. Твердые вещества взбалтывали в Εΐ2Ο (125 мл), отфильтровывали, промывали с помощью Εΐ2Ο (3х) и высушивали под вакуумом при 50°С с получением трет-бутил 3-(циано(морфолино)метил)-6-метокси-1Н-индол-1карбоксилата 5а (12,3 г).
Синтез промежуточного соединения 5Ь
Смесь трет-бутил-3-(циано(морфолино)метил)-6-метокси-1Н-индол-1-карбоксилата 5 а (6,0 г, 16,2 ммоль) в сухом ΌΜΕ (80 мл) перемешивали в атмосфере Ν2 при охлаждении на ледяной бане. Добавляли по каплям раствор 0,5 М ΚΗΜΌ8 в толуоле (35,5 мл, 17,8 ммоль) в течение 10 мин. После перемешивания в течение дополнительных 10 мин добавляли 4-хлор-1-(хлорметил)-2-метоксибензол [СА8 10107984-9] (3,09 г, 16,2 ммоль) и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Реакционную смесь выливали в холодную воду (400 мл) и продукт экстрагировали с помощью Εΐ2Ο (2х). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над Μ§8Ο4, фильтровали, выпаривали при пониженном давлении и выпаривали совместно с ксилолом. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии (неподвижная фаза: диоксид кремния Вю1аде® Сгасе Веуе1еп§ 120 г, подвижная фаза: гептан/ЕЮАс, градиент от 100/0 до 20/80). Необходимые фракции объединяли, выпаривали при пониженном давлении и выпаривали совместно с диоксаном с получением трет-бутил-3-(2-(4хлор-2-метоксифенил)-1-циано-1-морфолиноэтил)-6-метокси-1Н-индол-1-карбоксилата 5Ь (7,75 г).
Синтез промежуточного соединения 5с
К перемешиваемой суспензии трет-бутил-3-(2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-циано-1-морфолиноэтил)-6-метокси-1Н-индол-1-карбоксилата 5Ь (7,75 г, 14,7 ммоль) в диоксане (40 мл) и воде (20 мл) добавляли раствор 6 М НС1 в изопропаноле (36,8 мл, 220 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 60°С в течение 4 ч и затем при 80°С в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь оставляли на 20 ч для обеспечения кристаллизации продукта реакции. Продукт отфильтровывали, промывали смесью 1/1/1 ΐΡΓθΗ/^Ο/диоксана (2х 15 мл) и высушивали под вакуумом при 50°С с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-метокси-1Н-индол-3-ил)этанона 5 с (3,67 г).
Синтез соединения 5 и хиральное разделение на энантиомеры 5А и 5В
Перемешиваемую смесь 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-метокси-1Н-индол-3-ил)этанона 5 с (2,35 г,
7,13 ммоль) в ТНЕ (100 мл) охлаждали на ледяной бане в атм. Ν2. Добавляли трибромид фенилтриметил
- 14 032546 аммония |СЛ8 4207-56-1] (2,81 г, 7,48 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, затем при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Добавляли 2-(3-амино-5-метоксифенокси)этанол [СА8 725237-16-1] (2,61 г, 14,3 ммоль), диизопропилэтиламин (2,46 мл, 14,3 ммоль) и СН3СЫ (100 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч и при 55°С в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении до 50% исходного объема. Добавляли 2-(3амино-5-метоксифенокси)этанол [СА8 725237-16-1] (1 г) и диизопропилэтиламин (1,5 мл) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 65 ч. Реакционную смесь выливали в воду (400 мл) и продукт экстрагировали с помощью 2-МеТНР (2х). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над Мд8О4, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении. Остаток (7 г) очищали посредством флэш-хроматографии (неподвижная фаза: диоксид кремния Вю1аде® Стасе Реуе1еп8 120 г, подвижная фаза: гептан/Е1ОАс/Е1ОН, градиент от 100/0/0 до 50/37/13). Необходимые фракции объединяли и выпаривали при пониженном давлении. Остаток (5,8 г) дополнительно очищали посредством препаративной НРЬС (неподвижная фаза: ирйкрйеге® С18 ОЭВ 10 мкм, 200 г, 5 см, подвижная фаза: 0,25% раствор ЯН4НСО3 в воде, СН3СЫ). Фракции, содержащие продукт, объединяли и выпаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в МеОН (20 мл) и оставляли для кристаллизации на 4 ч. Твердые вещества отфильтровывали, промывали МеОН (3х 5 мл) и высушивали под вакуумом при 50°С с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)5-метоксифенил)амино)-1-(6-метокси-1Н-индол-3-ил)этанона (соединения 5, 2,06 г) в виде рацемической смеси.
Хиральное разделение соединения 5 (2 г) осуществляли посредством хирального разделения с использованием нормальной фазы (неподвижная фаза: ΆΌ-Н, подвижная фаза: 50% метанола, 50% этанола). Фракции, содержащие продукт, объединяли и выпаривали при пониженном давлении. Первый элюированный энантиомер кристаллизовали из перемешиваемого раствора МеОН (13 мл) посредством добавления воды (3 мл). После перемешивания в течение ночи твердые вещества отфильтровывали, промывали смесью 3/1 МеОН/Н2О (4х 3 мл) и высушивали под вакуумом при 50°С с получением энантиомера 5А (476 мг). Второй элюированный энантиомер кристаллизовали из исходного раствора МеОН (13 мл) посредством добавления воды (3 мл). После перемешивания в течение ночи твердые вещества отфильтровывали, промывали смесью 3/1 МеОН/Н2О (4х 3 мл) и высушивали под вакуумом при 50°С для получения энантиомера 5В (362 мг).
Соединение 5.
'|| ЯМР (400 МН/, ОМ8О-б6) δ ррт 3,61 (8, 3Н) 3,65 Щ, 1=5,3 Нг, 2Н) 3,77 (8, 3Н) 3,78-3,90 (т, 2Н)
3,97 (8, 3Н) 4,77 (1, 1=5,6 Нг, 1Н) 5,71 (1, 1=2,1 Нг, 1Н) 5,93 (б, 1=2,2 Нг, 2Н) 6,13 (б, 1=8,1 Нг, 1Н) 6,36 (б, 1=7,9 Нг, 1Н) 6,83 (бб, 1=8,7, 2,3 Нг, 1Н) 6,92-7,00 (т, 2Н) 7,09 (б, 1=2,0 Нг, 1Н) 7,36 (б, 1=8,4 Нг, 1Н) 8,01 (б, 1=8,6 Нг, 1Н) 8,29 (б, 1=2,9 Нг, 1Н) 11,81 (Ьг б, 1=2,2 Нг, 1Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-В): К1 1,93, МН+ 511
Энантиомер 5А.
'|| ЯМР (400 МНг, ОМ8О-б6) δ ррт 3,61 (8, 3Н) 3,64 Щ, 1=5,4 Нг, 2Н) 3,77 (8, 3Н) 3,78-3,90 (т, 2Н)
3,97 (8, 3Н) 4,77 (1, 1=5,5 Нг, 1Н) 5,71 (1, 1=2,0 Нг, 1Н) 5,93 (б, 1=2,0 Нг, 2Н) 6,13 (б, 1=8,1 Нг, 1Н) 6,36 (б, 1=7,9 Нг, 1Н) 6,83 (бб, 1=8,7, 2,3 Нг, 1Н) 6,92-6,99 (т, 2Н) 7,09 (б, 1=2,0 Нг, 1Н) 7,36 (б, 1=8,4 Нг, 1Н) 8,01 (б, 1=8,8 Нг, 1Н) 8,29 (б, 1=3,1 Нг, 1Н) 11, 81 (Ьг б, 1=2,4 Нг, 1Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-Л): К1 1,08, МН+ 511 |ιζ| 2 : +109,3° (с 0, 61, ЭМР)
Хиральная 8РС (способ 8РС-С): Р, 1,78 мин, МН+ 511, хиральная чистота 100%.
Энантиомер 5В '|| ЯМР (400 МНг, ОМ8О-б6) δ ррт 3,61 (8, 3Н) 3,64 Щ, 1=5,2 Нг, 2Н) 3,77 (8, 3Н) 3,78-3,89 (т, 2Н)
3,97 (8, 3Н) 4,77 (1, 1=5,6 Нг, 1Н) 5,71 (1, 1=2,1 Нг, 1Н) 5,93 (б, 1=2,0 Нг, 2Н) 6,12 (б, 1=7,9 Нг, 1Н) 6,35 (б, 1=7,9 Нг, 1Н) 6,82 (бб, 1=8,7, 2,3 Нг, 1Н) 6,91-7,01 (т, 2Н) 7,09 (б, 1=2,0 Нг, 1Н) 7,36 (б, 1=8,1 Нг, 1Н) 8,01 (б, 1=8,6 Нг, 1Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-Л): Р1 1,08, МН+ 511 |ιζ| 2 : -108,9° (с 0,52, ЭМР)
Хиральная 8РС (способ 8РС-С): Р1 2,19 мин, МН+ 511, хиральная чистота 100%.
Пример 6. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)-1(6-метокси-5-метил-1Н-индол-3-ил)этанона (соединения 6) и хиральное разделение на энантиомеры 6А и 6В.
- 15 032546
Синтез промежуточного соединения 6а
Добавляли по каплям при 0°С 1 М диэтилалюминийхлорид в гексане (13,5 мл, 13,5 ммоль) к раствору 6-метокси-5-метил-1Н-индола [СА8 1071973-95-9] (1,45 г, 9 ммоль) в СН2С12 (45 мл). Через 30 мин при 0°С раствор 2-(4-хлор-2-метоксифенил)ацетилхлорида 1а (2,4 г, 10,9 ммоль, синтез: см. пример 1) в СН2С12 (45 мл) медленно добавляли при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 3 ч. Добавляли ледяную воду, осадок отфильтровывали и промывали водой. Твердое вещество высушивали под вакуумом с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-метокси-5-метил-1Н-индол-3-ил)этанона 6а (2,1 г).
Синтез промежуточного соединения 6Ь
При 0°С добавляли по каплям раствор трибромида фенилтриметиламмония [СА8 4207-56-1] (2,4 г, 6,4 ммоль) в ТНТ (65 мл) к смеси 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-метокси-5-метил-1Н-индол-3ил)этанона 6а (2,1 г, 6,1 ммоль) в ТНТ (60 мл). Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч и при комнатной температуре в течение 2,5 ч. Осадок отфильтровывали и промывали с помощью ЕЮАс. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток поглощали с помощью минимального количества диизопропилового эфира. Осадок отфильтровывали и высушивали под вакуумом с получением 2-бром-2(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-метокси-5-метил-1Н-индол-3-ил)этанона 6Ь (2,36 г).
Синтез соединения 6 и хиральное разделение на энантиомеры 6А и 6В
Смесь 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6-метокси-5-метил-1Н-индол-3-ил)этанона 6Ь (1,35 г, 3,2 ммоль), 2-(3-амино-5-метоксифенокси)этанола [СА8 725237-16-1] (0,585 г, 3,2 ммоль) и диизопропилэтиламина (0,83 мл, 4,8 ммоль) в СН3СХ/ТНЕ (1/1) (80 мл) перемешивали при 70°С в течение 24 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли с помощью СН2С12, промывали с помощью 1 н. НС1 и воды. Органический слой отделяли, высушивали над М§804, фильтровали и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенное соединение очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм, 80 г в СН2С12/Ме0Н (99,5/0,5)). Небольшое количество кристаллизовали из Е!20/СН3С№ с получением аналитического образца 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-2-((3(2-гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)-1-(6-метокси-5-метил-1Н-индол-3-ил)этанона (соединения 6) в виде рацемической смеси. Оставшееся количество неочищенного соединения 6 смешивали с другой партией (общее количество 1,19 г) и дополнительно очищали дважды посредством препаративной ЬС (неподвижная фаза: диоксид кремния без покрытия с частицами неправильной формы 150 г, подвижная фаза: С^С^/МеОН (98/2), и затем толуол/1Рг0Н (95/5).
Энантиомеры соединения 6 (950 мг) разделяли посредством препаративной хиральной 8ЕС (неподвижная фаза: СЫга1рак® 1С 5 мкм, 250x30 мм, подвижная фаза: 50% СО2, 50% МеОН) с получением 485 мг первого элюированного энантиомера и 480 мг второго элюированного энантиомера. Первый элюированный энантиомер отверждали из СН3СЖЕ!20 с получением энантиомера 6А (406 мг) в виде аморфного белого порошка. Второй элюированный энантиомер отверждали из СН3СХ/Е!20 с получением энантиомера 6В (436 мг) в виде аморфного белого порошка.
Соединение 6.
1Н ЯМР (400 МН/, ΌΜ80-46) δ ррт 2,21 (8, 3Н) 3,61 (8, 3Н) 3,62-3,68 (т, 2 Н) 3,74-3,90 (т, 5Н) 3,97 (8, 3Н) 4,76 (!, 1=4,8 Πζ, 1Н) 5,68-5,74 (т, 1Н) 5,93 (4, 1=1,5 Ш, 2Н) 6,11 (4, 1=7,6 Ш, 1Н) 6,31 (4, 1=7,6 Ш, 1Н) 6,92 (8, 1Н) 6,95 (44, 1=8,3, 1,8 Ш, 1Н) 7,09 (4, 1=1,8 Ш, 1Н) 7,35 (4, 1=8,3 Ш, 1Н) 7,89 (8, 1Н) 8,22 (8, 1Н) 11,73 (Ьг. 8., 1Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-С): К, 3,02 минуты, МН+ 525
Энантиомер 6А.
1Н ЯМР (500 МН/, ОМ80-46) δ ррт 2,20 (8, 3Н) 3,60 (8, 3Н) 3,64 (ς, 1=5,3 Ш, 2Н) 3,75-3,88 (т, 5 Н)
3,97 (8, 3Н) 4,78 (!, 1=5,3 Ш, 1Н) 5,70 (!, 1=2,0 Ш, 1Н) 5,92 (4, 1=2,0 Πζ, 2Н) 6,11 (4, 1=7,9 Ш, 1Н) 6,33 (4, 1=7,9 Ш, 1Н) 6,92 (8, 1Н) 6,95 (44, 1=8,2, 1,9 Ш, 1Н) 7,09 (4, 1=1,9 Ш, 1Н) 7,35 (4, 1=8,2 Ш, 1Н) 7,88 (8, 1Н) 8,23 (8, 1Н) 11,75 (Ьг. 8., 1Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-С): К, 3,04 мин, МН+ 525 [а]п20: +116,8° (с 0,4536, ОМЕ)
Хиральная 8ЕС (способ 8ЕС-В): К, 2,40 мин, МН+ 525, хиральная чистота 100%.
- 16 032546
Энантиомер 6В.
1Н ЯМР (500 ΜΗζ, ΌΜ8Θ-ά6) δ ррт 2,20 (§, 3Н) 3,60 (δ, 3Н) 3,64 (ц, 1=5,4 Ηζ, 2Н) 3,77-3,88 (т, 5 Н)
3,97 (δ, 3Н) 4,78 (ΐ, 1=5,4 Ш, 1Н) 5,70 (ΐ, 1=2,0 Ш, 1Н) 5,92 (ά, 1=2,0 Ш, 2Н) 6,11 (ά, 1=7,9 Ш, 1Н) 6,33 (ά, 1=7,9 Ш, 1Н) 6,92 (δ, 1Н) 6,95 (άά, 1=8,2, 1,9 Ш, 1Н) 7,09 (ά, 1=1,9 Ш, 1Н) 7,35 (ά, 1=8,2 Ш, 1Н) 7,88 (δ, 1Н) 8,23 (δ, 1Н) 11,75 (Ьг. δ., 1Н).
БС/М8 (способ ЬС-С): Κ 3,04 мин, МН+ 525 [α]ο 20: -121,9° (с 0,3855, ΌΜΡ)
Хиральная 8рС (способ 8РС-Б): Κΐ 3,75 мин, МН+ 525, хиральная чистота 99,86%.
Пример 7. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5-фтор-6-метокси-1Н-индол-3-ил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)этанона (соединения 7) и хиральное разделение на энантиомеры 7 А и 7В.
Синтез промежуточного соединения 7а
Добавляли по каплям при 0°С 1 М диэтилалюминийхлорид в гексане (15,7 мл, 15,7 ммоль) к раствору 5-фтор-6-метокси-1Н-индола [СА8 1211595-72-0] (2 г, 12,1 ммоль) в СН2С12 (50 мл). Через 30 мин при 0°С раствор 2-(4-хлор-2-метоксифенил)ацетилхлорида 1а (3,2 г, 14,6 ммоль, синтез: см. пример 1) в СН2С12 (50 мл) медленно добавляли при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 3 ч. Добавляли ледяную воду и осадок отфильтровывали, промывали водой и минимальным количеством СН2С12. Твердое вещество высушивали под вакуумом с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5фтор-6-метокси-1Н-индол-3-ил)этанона 7а (2,82 г).
Синтез промежуточного соединения 7Ь
При 0°С добавляли по каплям раствор трибромида фенилтриметиламмония [СА8 4207-56-1] (3,5 г, 8,1 ммоль) в ТНР (20 мл) к раствору 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5-фтор-6-метокси-1Н-индол-3-ил) этанона 7а (2,82 г, 8,1 ммоль) в ТНР (46 мл). Смесь перемешивали при 0°С в течение 1ч. и при комнатной температуре в течение 4 ч. Осадок отфильтровывали и промывали с помощью ЕЮАс. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в ЕЮАс, промывали водой. Органическую фазу высушивали над М§804, фильтровали и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Остаток поглощали с помощью минимального количества ЕЮАс. Осадок отфильтровывали и высушивали под вакуумом с получением 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5-фтор-6-метокси-1Н-индол-3ил)этанона 7Ь (2,5 г).
Синтез соединения 7 и хиральное разделение на энантиомеры 7А и 7В
Смесь 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5-фтор-6-метокси-1Н-индол-3-ил)этанона 7Ь (2,4 г, 5,6 ммоль), 2-(3-амино-5-метоксифенокси)этанола [СА8 725237-16-1] (1,5 г, 8,2 ммоль) и диизопропилэтиламина (1,45 мл, 8,4 ммоль) в СН3СЫ/ТНР (1/1) (48 мл) перемешивали при 50°С в течение 12 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток разбавляли с помощью ЕЮАс, промывали с помощью 1 н. НС1 и воды. Органический слой отделяли, высушивали над М§804, фильтровали и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм, 80 г в СН2С12/Ме0Н (99,5/0,5)). Чистые фракции собирали и выпаривали при пониженном давлении. Небольшое количество отверждали из Е^0/СН3СЫ с получением аналитического образца 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5-фтор-6-метокси-1Н-индол-3-ил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5метоксифенил)амино)этанона (соединение 7) в виде рацемической смеси.
Энантиомеры соединения 7 (1,6 г) разделяли посредством препаративной хиральной 8РС (неподвижная фаза: СЫга1рак® Ю 5 мкм, 250x30 мм, подвижная фаза: 55% СО2, 45% МеОН) с получением 680 мг первого элюированного энантиомера и 720 мг второго элюированного энантиомера. Первый элюированный энантиомер отверждали из СН3СЫ/ЕС0 с получением энантиомера 7А (603 мг) в виде аморфного белого порошка. Второй элюированный энантиомер отверждали из СН3СЫ/ЕС0 с получением энантиомера 7В (505 мг) в виде аморфного белого порошка.
Соединение 7.
1Н ЯМР (400 ΜΙΙζ, ΌΜ80-ά6) δ ррт 3,60 (δ, 3Н) 3,62-3,67 (т, 2Н) 3,74-3,88 (т, 5Н) 3,96 (δ, 3Н) 4,77 (ΐ, 1=5,3 Ш, 1Н) 5,66-5,75 (т, 1Н) 5,92 (ά, 1=1,8 Ш, 2Н) 6,12 (ά, 1=8,1 Ш, 1Н) 6,37 (ά, 1=8,1 Ш, 1Н) 6,96
- 17 032546 (άά, 1=8,1, 1,8 Ηζ, 1Η) 7,09 (ά, 1=1,8 Ηζ, 1Η) 7,14 (ά, 1=7,6 Ηζ, 1Η) 7,35 (ά, 1=8,1 Ηζ, 1Η) 7,81 (ά, 1=11,6 Ηζ, 1Η) 8,33 (δ, 1Η) 11,94 (Ьг, 8., 1Η).
ЬС/М8 (способ ЬС-С): К, 2,90 минуты, МН+ 529
Энантиомер 7 А.
1Η ЯМР (500 ΜΗζ, ΌΜ8Θ-ά6) δ ррт 3,60 (δ, 3Η) 3,64 (ς, Э=5,5 Ηζ, 2Η) 3,76-3,88 (т, 5 Η) 3,96 (δ, 3Η) 4,79 (1, Э=5,5 Ηζ, 1Η) 5,71 (1, 1=1,9 Ηζ, 1Η) 5,92 (ά, 1=1,9 Ηζ, 2Η) 6,12 (ά, 1=8,2 Ηζ, 1Η) 6,39 (ά, 1=8,2 Ηζ, 1Η) 6,96 (άά, 1=8,2, 2,0 Ηζ, 1Η) 7,09 (ά, 1=1,9 Ηζ, 1Η) 7,14 (ά, 1=7,6 Ηζ, 1Η) 7,35 (ά, 1=8,2 Ηζ, 1Η) 7,81 (ά, 1=11,7 Ηζ, 1Η) 8,34 (δ, 1Η) 11,95 (Ьг. δ., 1Η).
ЬС/М8 (способ ЬС-С): К, 2,90 минуты, МН+ 529 [а]п20: +86,2° (с 0,232, ΌΜΕ)
Хиральная 8РС (способ 8РС-Б): К, 2,28 мин., МН+ 529, хиральная чистота 100%.
Энантиомер 7В.
1Н ЯМР (500 ΜΗζ, ΌΜ8Θ-ά6) δ ррт 3,60 (δ, 3Η) 3,64 (ς, 1=5,5 Ηζ, 2Η) 3,76-3,88 (т, 5Η) 3,96 (δ, 3Η) 4,79 (1, 1=5,5 Ηζ, 1Η) 5,71 (1, 1=1,9 Ηζ, 1Η) 5,92 (ά, 1=1,9 Ηζ, 2Η) 6,12 (ά, 1=8,2 Ηζ, 1Η) 6,39 (ά, 1=8,2 Ηζ, 1Η) 6,96 (άά, 1=8,2, 1,9 Ηζ, 1Η) 7,09 (ά, 1=1,9 Ηζ, 1Η) 7,14 (ά, 1=7,6 Ηζ, 1Η) 7,35 (ά, 1=8,2 Ηζ, 1Η) 7,81 (ά, 1=12,0 Ηζ, 1Η) 8,34 (δ, 1Η) 11,95 (Ьг. δ., 1Η).
1Χ7Μ8 (способ ЬС-С): К, 2,90 минуты, МН 529 [а]в20: -88,7° (с 0,3, ΌΜΕ)
Хиральная 8РС (способ 8РС-Б): К, 4,04 мин., МН+ 529, хиральная чистота 100%.
Пример 8. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5-фтор-7-метил-Ш-индол-3-ил)-2-((3-(2гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)этанона (соединения 8) и хиральное разделение на энантиомеры 8А и 8В.
Синтез промежуточного соединения 8а
Добавляли по каплям при 0°С 1 М диэтилалюминийхлорид в гексане (15,0 мл, 15,0 ммоль) к раствору 5-фтор-7-метил-Ш-индола [СА8 1082041-52-8] (1,49 г, 10,0 ммоль) в С112С12 (20 мл). Через 30 мин при 0°С раствор 2-(4-хлор-2-метоксифенил)ацетилхлорида 1а (3,28 г, 15,0 ммоль, синтез: см. пример 1) в С^С12 (10 мл) добавляли медленно при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 3 ч. Добавляли 1 М раствора сегнетовой соли и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Образовавшиеся твердые вещества отфильтровывали и распределяли между Е,ОАс и 1 н. ΗΟ. Фазы разделяли. Водный слой экстрагировали с помощью Е,ОАс. Органические фазы объединяли, промывали солевым раствором, высушивали над Μ§8Θ4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5-фтор-7-метил-Ш-индол-3ил)этанона 8а (2,03 г).
Синтез промежуточного соединения 8Ь
Добавляли по каплям при 0°С раствор трибромида фенилтриметиламмония [СА8 4207-56-1] (2,53 г, 6,72 ммоль) в ΤΗΕ (10 мл) к раствору 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5-фтор-7-метил-Ш-индол-3-ил) этанона 8а (2,03 г, 6,11 ммоль) в ΤΗΕ (50 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Осадок отфильтровывали и промывали с помощью Е,ОАс. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток поглощали с помощью минимального количества ацетонитрила. Осадок отфильтровывали, промывали ацетонитрилом и высушивали под вакуумом с получением 2-бром2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5-фтор-7-метил-Ш-индол-3-ил)этанона 8Ь (2,00 г).
Синтез соединения 8 и хиральное разделение на энантиомеры 8А и 8В
Смесь 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5-фтор-7-метил-Ш-индол-3-ил)этанона 8Ь (1,70 г, 4,14 ммоль) и 2-(3-амино-5-метоксифенокси)этанола [СА8 725237-16-1] (2,28 г, 12,4 ммоль) в ΤΗΕ (10 мл) и С^СЛ (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток распределяли между Е,ОАс и 1 н. ΗΟ. Фазы разделяли. Органическую фазу промывали дважды с помощью 1 н. ΗΟ, водным насыщенным раствором NаΗСО3 и солевым раствором, высушивали над Μ§804, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток поглощали с помощью минимального количества ацетонитрила. Осадок отфильтровывали и высушивали под вакуумом с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5-фтор-7-метил-Ш-индол-3
- 18 032546 ил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)этанона (соединения 8, 1,23 г) в виде рацемической смеси.
Энантиомеры соединения 8 (1,17 г) разделяли посредством хирального разделения с использованием нормальной фазы (неподвижная фаза: Оа1се1 СЫга1рак® ΟΌ-Н, подвижная фаза: 80% гептана, 20% этанола). Первый элюированный продукт дополнительно очищали посредством флэш-хроматографии (неподвижная фаза: диоксид кремния Вю1аде® Огасе Кеуе1еп§ 12 г, подвижная фаза: гептан/ЕЮАс/ЕЮН, градиент от 100/0/0 до 40/45/15). Чистые фракции объединяли и выпаривали. Продукт кристаллизовали в течение ночи из смеси МеОН (4 мл) и воды (1 мл), отфильтровывали, промывали МеОН (3х) и высушивали под вакуумом при 50°С для получения энантиомера 8А (37 мг). Второй элюированный продукт дополнительно очищали посредством флэш-хроматографии (неподвижная фаза: диоксид кремния Вю1аде® Огасе Кеуе1еп§ 12 г, подвижная фаза: гептан/БЮАс/БЮН, градиент от 100/0/0 до 40/45/15). Чистые фракции объединяли и выпаривали. Продукт кристаллизовали из смеси МеОН и Н2О, отфильтровывали, промывали МеОН и высушивали под вакуумом при 50°С для получения энантиомера 8В (177 мг).
Соединение 8.
1Н ЯМР (300 ΜΗζ, ΌΜ8Ο-ά6) δ ррт 2,48 (δ, 3Н) 3,56-3,71 (т, 5Н) 3,74-3,92 (т, 2Н) 3,97 (δ, 3Н) 4,79 (1, 1=5,5 га, 1Н) 5,72 (δ, 1Н) 5,95 (ά, 1=1,9 га, 2Н) 6,17 (ά, 1=7,9 га, 1Н) 6,40 (ά, 1=8,3 га, 1Н) 6,87-7,01 (т, 2Н) 7,10 (ά, 1=1,9 га, 1Н) 7,36 (ά, 1=8,3 га, 1Н) 7,65 (άά, 1=9,8, 2,3 га, 1Н) 8,46 (δ, 1Н) 12,22 (Ьг. δ., 1Н).
БС/Μδ (способ ЬС-ϋ): Кг 1,52 мин, МН+ 513
Энантиомер 8А.
1Н ЯМР (400 ΜΠζ, ΌΜ8Ο-ά6) δ ррт 3,61 (δ, 3Н) 3,64 (ς, 1=5,2 га, 2Н) 3,77 (δ, 3Н) 3,78-3,89 (т, 2Н)
3,97 (δ, 3Н) 4,77 (ί, 1=5,6 Н, 1Н) 5,71 (ί, 1=2,1 га, 1Н) 5,93 (ά, 1=2,0 га, 2Н) 6,12 (ά, 1=7,9 га, 1Н) 6,35 (ά, 1=7,9 га, 1Н) 6,82 (άά, 1=8,7, 2,3 га, 1Н) 6,91-7,01 (т, 2Н) 7,09 (ά, 1=2,0 га, 1Н) 7,36 (ά, 1=8,1 га, 1Н) 8,01 (ά, 1=8,6 га, 1Н) 8,29 (ά, 1=2,9 га, 1Н) 11,81 (Ьг ά, 1=2,4 га, 1Н).
БС/Μδ (способ ЬС-А): Кг 1,12 мин, МН+ 513 [а]в20: -83,8° (с 0,4725, ΌΜΡ)
Хиральная 8РС (способ 8РС-О): Кг 2,32 мин, МН+ 513, хиральная чистота 100%.
Энантиомер 8В.
1Н ЯМР (400 ΜΠζ, ΌΜ8Ο-ά6) δ ррт 2,47 (δ, 3Н) 3,61 (δ, 3Н) 3,65 (ς, 1=5,2 га, 2Н) 3,77-3,90 (т, 2Н)
3,97 (δ, 3Н) 4,77 (ί, 1=5,6 Н, 1Н) 5,72 (ί, 1=2,1 га, 1Н) 5,95 (ά, 1=2,0 га, 2Н) 6,16 (ά, 1=8,1 га, 1Н) 6,37 (ά, 1=7,9 га, 1Н) 6,92 (άά, 1=10,1, 2,0 га, 1Н) 6,96 (άά, 1=8,3, 1,9 га, 1Н) 7,10 (ά, 1=1,8 га, 1Н) 7,36 (ά, 1=8,4 га, 1Н) 7,65 (άά, 1=9,7, 2,4 га, 1Н) 8,45 (ά, 1=3,5 га, 1Н) 12,20 (Ьг ά, 1=2,9 га, 1Н).
БС/Μδ (способ ЬС-А): Кг 1,14 мин, МН+ 513 [а]о 20: +86,6° (с 0,4805, ΌΜΡ)
Хиральная 8РС (способ 8РС-О): Кг 1,44 мин, МН+ 513, хиральная чистота 100%.
Пример 9. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5,6-дифтор-1Н-индол-3-ил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)этанона (соединения 9) и хиральное разделение на энантиомеры 9А и 9В.
Синтез промежуточного соединения 9а
Добавляли по каплям при 0°С 1 М диэтилалюминийхлорид в гексане (14,9 мл, 14,9 ммоль) к раствору 5,6-дифтор-1Н-индола [СА8 169674-01-5] (1,50 г, 9,8 ммоль) в СН2С12 (20 мл). Через 30 мин при 0°С раствор 2-(4-хлор-2-метоксифенил)ацетилхлорида 1а (3,22 г, 14,7 ммоль, синтез: см. пример 1) в СН2С12 (20 мл) добавляли медленно при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч. Добавляли 1 М раствора сегнетовой соли и реакционную смесь энергично перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Осадок отфильтровывали и распределяли между БЮАс и 1 н. НС1. Фазы разделяли. Водный слой экстрагировали дважды с помощью БЮАс. Органические фазы объединяли, высушивали над Μ§8Ο4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток поглощали с помощью минимального количества ацетонитрила. Осадок отфильтровывали и высушивали под вакуу
- 19 032546 мом с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5,6-дифтор-1Н-индол-3-ил)этанона 9а (2,73 г).
Синтез промежуточного соединения 9Ь
Добавляли по каплям при 0°С раствор трибромида фенилтриметиламмония [СА8 4207-56-1] (3,36 г, 8,94 ммоль) в ТНЕ (50 мл) к раствору 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5,6-дифтор-1Н-индол-3-ил)-2-(4хлор-2-метоксифенил)этанона 9а (2,73 г, 8,13 ммоль) в ТНЕ (80 мл). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин и при комнатной температуре в течение 2 ч.
Осадок отфильтровывали и промывали с помощью ЕГОАс. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток поглощали с помощью минимального количества ацетонитрила. Осадок отфильтровывали и высушивали под вакуумом с получением 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5,6дифтор-1Н-индол-3-ил)этанона 9Ь (3,00 г).
Синтез соединения 9 и хиральное разделение на энантиомеры 9 А и 9В
Смесь 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(5,6-дифтор-1Н-индол-3-ил)этанона 9Ь (1,80 г, 4,34 ммоль) и 2-(3-амино-5-метоксифенокси)этанола [СА8 725237-16-1] (2,39 г, 13,0 ммоль) в ТНЕ (9 мл) и СН3СЫ (9 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 65 ч. Добавляли 1 н. НС1 и реакционную смесь экстрагировали с помощью ЕГОАс. Фазы разделяли. Органическую фазу промывали 1 н. НС1, высушивали над Мд8О4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Осадок очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле с использованием градиента ЕГОАс (15-70%) в дихлорметане. Чистые фракции объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением 2-(4хлор-2-метоксифенил)-1-(5,6-дифтор-1Н-индол-3-ил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)этанона (соединения 9, 1,20 г) в виде рацемической смеси. Фракции с примесями объединяли и очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле с использованием градиента этилацетата (15% 70%) в дихлорметане с получением второй партии соединения 9 (0,290 г) в виде рацемической смеси.
Энантиомеры соединения 9 (1,4 г) разделяли посредством хирального разделения с использованием нормальной фазы (неподвижная фаза: Эа1се1 СЫга1рак® ОЭ-Н. подвижная фаза: 80% гептана, 20% этанола). Первый элюированный продукт дополнительно очищали посредством флэш-хроматографии (неподвижная фаза: диоксид кремния ВюГаде® Стасе Реуе1еп8 12 г, подвижная фаза: СН2С12/МеОН, градиент от 100/0 до 90/10). Чистые фракции объединяли, выпаривали и выпаривали совместно с МеОН. Остаток лиофилизировали из смеси растворителей СН3СЫ (4,5 мл) и воды (2,5 мл) и высушивали под вакуумом при 45°С для получения энантиомера 9А (409 мг). Второй элюированный продукт дополнительно очищали посредством флэш-хроматографии (неподвижная фаза: диоксид кремния ВюГаде® Стасе Рете1еп8 12 г, подвижная фаза: СН2С12/МеОН, градиент от 100/0 до 90/10). Чистые фракции объединяли, выпаривали и выпаривали совместно с МеОН. Остаток лиофилизировали из смеси растворителей СН3СЫ (5 мл) и воды (3 мл) и высушивали под вакуумом при 45°С для получения энантиомера 9В (388 мг).
Соединение 9.
Ή ЯМР (300 МН/, ЭМ8О-б6) δ ррт 3,61 (8, 3Н) 3,62-3,70 (т, 2Н) 3,75-3,90 (т, 2Н) 3,95 (8, 3Н) 4,79 (ΐ, 1=5,6 Нд 1Н) 5,72 (ΐ, 1= 2,1 Н, 1Н) 5,93 (б, 1=2,0 Нг, 1Н) 6,15 (б, 1=8,1 Нг, 1Н) 6,42 (б, 1=8,1 Нг, 1Н)
6,97 (бб, 1=8,2, 2,2 Нд 1Н) 7,10 (б, 1=2,0 Нг, 1Н) 7,35 (б, 1=8,3 Нд 1Н) 7,54 (бб, 1=10,8, 7,0 Н, 1Н) 7,99 (бб, 1=11,2, 8,2 Нг, 1Н) 8,48 (8, 1Н) 12,19 (Ьг. 8., 1Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-Ό): К1 1,44 мин, МН+ 517
Энантиомер 9А.
Ή ЯМР (400 МН/, ЭМ8О-б6) δ ррт 3,61 (8, 3Н) 3,64 (ф 1=5,2 Нг, 2Н) 3,77-3,89 (т, 2Н) 3,95 (8, 3Н) 4,77 (ΐ, 1=5,5 Нг, 1Н) 5,72 (ΐ, 1=2,1 Нд 1Н) 5,93 (б, 1=2,0 Нд 2Н) 6,14 (б, 1=8,1 Нг, 1Н) 6,39 (б, 1=8,1 Нг, 1Н) 6,97 (бб, 1=8,4, 2,0 Н, 1Н) 7,09 (б, 1=2,0 Н, 1Н) 7,35 (б, 1=8,1 Нг, 1Н) 7,53 (бб, 1=10,8, 7,0 Нд 1Н) 7,99 (бб, 1=11,2, 8,1 Нг, 1Н) 8,47 (8, 1Н) 12,16 (Ьг 8, 1Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-А): КГ 1,15 мин, МН+ 517 |ιζ| 2 : -98,9° (с 0,445, ЭМЕ)
Хиральная 8ЕС (способ 8ЕС-С): В, 1,92 мин, МН+ 517, хиральная чистота 100%.
Энантиомер 9В 'Н ЯМР (400 МН/, ЭМ8О-б6) δ ррт 3,61 (8, 3Н) 3,64 (ф 1=5,2 Нг, 2Н) 3,75-3,91 (т, 2Н) 3,95 (8, 3Н) 4,77 (Г, 1=5,6 Нг, 1Н) 5,72 (Г, 1=2,1 Нд 1Н) 5,93 (б, 1=2,2 Нд 2Н) 6,14 (б, 1=8,1 Нг, 1Н) 6,39 (б, 1=8,1 Нг, 1Н) 6,97 (бб, 1=8,1, 2,0 Н, 1Н) 7,09 (б, 1=2,0 Н, 1Н) 7,35 (б, 1=8,1 Нг, 1Н) 7,53 (бб, 1=10,8, 7,0 Нд 1Н) 7,99 (бб, 1=11,1, 8,3 Нг, 1Н) 8,47 (8, 1Н) 12,16 (Ьг 8, 1Н).
ЬС/М8 (способ ЬС-А): ВГ 1,15 мин, МН+ 517 |ιζ| 2 : +98,9° (с 0,555, ЭМЕ)
Хиральная 8ЕС (способ 8ЕС-С): В, 1,36 мин., МН+ 517, хиральная чистота 100%.
Пример 10. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(7-фтор-5-метил-1Н-индол-3-ил)-2-((3-(2гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)этанона (соединения 10) и хиральное разделение на энантиомеры 10А и 10В.
- 20 032546
Синтез промежуточного соединения 10а
Добавляли по каплям при -15°С 1 М диэтилалюминийхлорид в гексане (16 мл, 16 ммоль) к раствору 7-фтор-5-метил-1Н-индола [САЗ 442910-91-0] (1,59 г, 10,7 ммоль) в СН2С12 (150 мл) в потоке Ν2. Через 15 мин. при -15°С раствор 2-(4-хлор-2-метоксифенил)ацетилхлорида 1а (3,27 г, 14,9 ммоль, синтез: см. пример 1) в СН2С12 (50 мл) медленно добавляли при -15°С. Реакционную смесь перемешивали при -15°С в течение 1 ч и при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали в перемешиваемую смесь ледяной воды/сегнетовой соли. Твердые вещества удаляли из реакционной смеси путем фильтрации через тонкую подушку из Э1саШе® и осадок на фильтре промывали несколько раз с помощью ΤΠΡ. Слои разделяли и водный слой экстрагировали с помощью ΤΠΡ. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, водой, высушивали над М§ЗО4, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении. Твердый остаток суспендировали в СН2С12 (10 мл). Твердые вещества отфильтровывали, промывали небольшим количеством СН2С12 и высушивали под вакуумом при 50°С с получением 2(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(7-фтор-5-метил-1Н-индол-3-ил)этанона 10а (2,22 г).
Синтез промежуточного соединения 10Ь
Добавляли по каплям при 0°С раствор трибромида фенилтриметиламмония [САЗ 4207-56-1] (2,77 г, 7,36 ммоль) в ΤΠΡ (50 мл) к раствору 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(7-фтор-5-метил-1Я-индол-3-ил) этанона 10а (2,22 г, 6,7 ммоль) в ΤΠΡ (150 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Осадок отфильтровывали и промывали с помощью ΤΠΡ. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток поглощали с помощью минимального количества СН2С12. Осадок отфильтровывали, промывали с помощью СН2С12 (2х) и высушивали под вакуумом при 50°С с получением 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(7-фтор-5-метил-1Н-индол-3-ил)этанона 10Ь (2,55 г).
Синтез соединения 10 и хиральное разделение на энантиомеры 10А и 10В
Смесь 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(7-фтор-5-метил-1Н-индол-3-ил)этанона 10Ь (2 г, 4,87 ммоль), 2-(3-амино-5-метоксифенокси)этанола [САЗ 725237-16-1] (1,6 г, 7,3 ммоль) и диизопропилэтиламина (1,26 мл, 7,3 ммоль) в СΠ3СN (100 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч., при 60°С в течение 8 ч. и снова при комнатной температуре в течение 16 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в СН2С12 (50 мл), промывали с помощью 0,5 М НС1 (50 мл) и воды (50 мл), высушивали над МдЗО4, фильтровали и выпаривали. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии (неподвижная фаза: диоксид кремния В1о£аде® Огасе Кеуе1еп8 120 г, подвижная фаза: ЕЮАс/гептан, градиент от 0/100 до 60/40). Фракции, содержащие продукт, объединяли, выпаривали и высушивали при 50°С под вакуумом с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(7-фтор-5-метил1Н-индол-3-ил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)этанона (соединения 10, 1,3 г) в виде белого твердого вещества.
Энантиомеры соединения 10 (1,3 г) разделяли посредством хирального разделения с использованием нормальной фазы (неподвижная фаза: ΑΌ-Π, подвижная фаза: 70% этанола, 30% метанола) с получением 637 мг первого элюированного энантиомера и 628 мг второго элюированного энантиомера. Первый элюированный продукт кристаллизовали из смеси МеОН/воды. Твердые вещества отфильтровывали и промывали смесью МеОН/воды (1/1) с получением энантиомера 10А (302 мг) в виде белого аморфного порошка. Второй элюированный продукт дополнительно очищали посредством флэш-хроматографии (неподвижная фаза: диоксид кремния В1о£аде® Огасе Кеуе1ег18 40 г, подвижная фаза: МеОН/СН2С12, градиент от 0/100 до 2/98). Фракции, содержащие продукт, объединяли и выпаривали с получением энантиомера 10В (335 мг) в виде белого аморфного порошка.
Соединение 10.
1Н ЯМР (400 ΜΠζ, ЭМЗО-дб) δ ррт 2,38 (δ, 3Π) 3,61 (δ, 3Π) 3,62-3,67 (т, 2Π) 3,77-3,89 (т, 2Π) 3,95 (8, 3Π) 4,77 (ΐ, 1=5,5 Πζ, 1Π) 5,72 (ΐ, 1=2,0 Πζ, 1Π) 5,94 (ά, 1=2,0 Πζ, 2Π) 6,15 (ά, 1=8,1 Πζ, 1Π) 6,34 (ά, 1=8,1 Πζ, 1Π) 6,90 (ά, 1=12,1 Πζ, 1Π) 6,96 (άά, 1=8,1, 2,0 Πζ, 1Π) 7,09 (ά, 1=2,0 Πζ, 1Π) 7,35 (ά, 1=8,4 Πζ, 1Π) 7,77 (δ, 1Π) 8,38 (8, 1Π) 12,46 (Ьг δ, 1Π).
ЬС/МЗ (способ ЬС-А): Κΐ 1,16 мин, МН+ 513
- 21 032546
Энантиомер 10А.
ΊI ЯМР (400 ΜΗζ, ΌΜδΘ-Τ,) δ ррт 2,38 (δ, 3Η) 3,62 (δ, 3Η) 3,66 (Ьг ΐ, 1=4,8 Ηζ, 2Η) 3,77-3,92 (т, 2Η) 3,96 (δ, 3Η) 4,78 (Ьг δ, 1Η) 5,73 (δ, 1Η) 5,96 (δ, 2Η) 6,17 (Ьг ά, 1=7,9 Ηζ, 1Η) 6,35 (Ьг ά, 1=8,1 Ηζ, 1Η) 6,91 (ά, 1=12,1 Ηζ, 1Η) 6,97 (άά, 1=8,3, 1,4 Ηζ, 1Η) 7,10 (ά, 1=1,5 Ηζ, 1Η) 7,36 (ά, 1=8,4 Ηζ, 1Η) 7,79 (δ, 1Η) 8,39 (δ, 1Η) 12,47 (Ьг δ, 1Η).
ЬС/Μδ (способ ЬС-А): К 1,15 мин, МН+ 513 [α]ο 20: +132,3° (с 0,505, ΌΜΡ)
Хиральная 8РС (способ 8РС-Р): Κΐ 2,13 мин, МН+ 513, хиральная чистота 100%.
Энантиомер 10В.
ΊI ЯМР (400 ΜΗζ, ΌΜ8Θ-ά6) δ ррт 2,38 (δ, 3Η) 3,61 (δ, 3Η) 3,63-3,68 (т, 2Η) 3,77-3,92 (т, 2Η) 3,96 (δ, 3Η) 4,77 (Ьг ΐ, 1=5,7 Ηζ, 1Η) 5,72 (ΐ, 1=2,0 Ηζ, 1Η) 5,95 (ά, 1=2,0 Ηζ, 2Η) 6,16 (ά, 1=7,9 Ηζ, 1Η) 6,35 (ά, 1=8,1 Ηζ, 1Η) 6,91 (ά, 1=12,1 Ηζ, 1Η) 6,97 (άά, 1=8,4, 2,0 Ηζ, 1Η) 7,09 (ά, 1=2,0 Ηζ, 1Η) 7,36 (ά, 1=8,4 Ηζ, 1 Η) 7,78 (δ, 1Η) 8,39 (δ, 1Η) 12,46 (Ьг δ, 1Η).
ΙΑ'7Μ8 (способ ЬС-А): Κΐ 1,15 мин, МН+ 513 [α]π20: -144,1° (с 0,4975, ΌΜΡ)
Хиральная 8РС (способ 8РС-Р): Κΐ 3,13 мин., МН+ 513, хиральная чистота 100%.
Пример 11. Синтез 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6,7-дифтор-Ш-индол-3-ил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5-метоксифенил)амино)этанона (соединения 11) и хиральное разделение на энантиомеры 11А и 11 В.
Синтез промежуточного соединения 11а
Добавляли по каплям при 0°С 1 М диэтилалюминийхлорид в гексане (15,0 мл, 15,0 ммоль) к раствору 6,7-дифтор-Ш-индола [СА8 271780-84-8] (1,53 г, 10,0 ммоль) в С^С^ (20 мл). Через 30 мин при 0°С раствор 2-(4-хлор-2-метоксифенил)ацетилхлорида 1а (3,28 г, 15,0 ммоль, синтез: см. пример 1) в СЫ2С12 (10 мл) добавляли медленно при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 3 ч. Добавляли 1 М раствора сегнетовой соли и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Твердые вещества отфильтровывали и распределяли между ЕЮАс и 1 н. ΗΟ. Фазы разделяли. Водный слой экстрагировали с помощью ЕЮАс. Органические фазы объединяли, промывали солевым раствором, высушивали над Μ§8Θ4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6,7-дифтор-Ш-индол-3-ил)этанона 11а (2,36 г).
Синтез промежуточного соединения 11Ь
Добавляли по каплям при 0°С раствор трибромида фенилтриметиламмония [СА8 4207-56-1] (2,90 г, 7,02 ммоль) в ΤΗΡ (10 мл) к раствору 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6,7-дифтор-Ш-индол-3-ил)этанона 11а (2,36 г, 7,02 ммоль) в ΤΗΡ (50 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Осадок отфильтровывали и промывали с помощью ЕЮАс. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток поглощали с помощью минимального количества ацетонитрила. Осадок отфильтровывали, промывали ацетонитрилом и высушивали под вакуумом с получением 2-бром-2-(4хлор-2-метоксифенил)-1-(6,7-дифтор-Ш-индол-3-ил)этанона 11Ь (2,34 г).
Синтез соединения 11 и хиральное разделение на энантиомеры 11А и 11В
Смесь 2-бром-2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6,7-дифтор-Ш-индол-3-ил)этанона 11Ь (1,70 г, 4,14 ммоль) и 2-(3-амино-5-метоксифенокси)этанола [СА8 725237-16-1] (2,25 г, 12,3 ммоль) в ΤΗΡ (10 мл) и СΗ3СN (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток распределяли между ЕЮАс и 1 н. ΗΟ. Фазы разделяли. Органическую фазу промывали дважды с помощью 1 н. ΗΟ, водным насыщенным раствором NаΗСΟ3 и солевым раствором, высушивали над Μ§8Θ4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле с использованием градиента ЕЮАс (20% - 100%) в гептане. Фракции, содержащие ожидаемое соединение, объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Остаток кристаллизовали из смеси Еΐ2Ο, ацетонитрила и гептана с получением 2-(4-хлор-2-метоксифенил)-1-(6,7-дифтор-Ш-индол-3-ил)-2-((3-(2-гидроксиэтокси)-5-мето
- 22 032546 ксифенил)амино)этанона (соединения 11, 1,54 г) в виде рацемической смеси.
Энантиомеры соединения 11 (1,22 г) разделяли посредством препаративной хиральной 8ЕС (неподвижная фаза: СЫга1се1® ΟΌ-Н 5 мкм 250x30 мм, подвижная фаза: 55% СО2, 45% МеОН) с получением 550 мг первого элюированного энантиомера и 570 мг второго элюированного энантиомера. Первый элюированный энантиомер отверждали из СН3С№диизопропилового эфира с получением энантиомера 11А (487 мг). Второй элюированный энантиомер отверждали из СН3С№/диизопропилового эфира с получением энантиомера 11В (460 мг). Оба энантиомера представлены в виде аморфных порошков.
Соединение 11.
'|| ЯМР (300 ΜΗζ, ΌΜ8Ο-ά6) δ ррт 3,56-3,69 (т, 5Н) 3,75-3,90 (т, 2Н) 3,95 (8, 3Н) 4,79 (1, 1=5,5 Нг, 1Н) 5,73 (8, 1Н) 5,95 (ά, 1=1,9 Нг, 2Н) 6,18 (ά, 1=8,3 Нг, 1Н) 6,41 (ά, 1=8,3 Нг, 1Н) 6,97 (άά, 1=8,1, 1,7 Нг, 1Н) 7,10 (ά, 1=1,9 Нг, 1Н) 7,16-7,30 (т, 1Н) 7,36 (ά, 1=8,3 Нг, 1Н) 7,92 (άά, 1=8,7, 4,5 Нг, 1Н) 8,50 (8, 1Н) 12,78 (Ьг. 8., 1Н).
ЬС/Μδ (способ ЬС-Ό): К1 1,52 мин, МН+ 517
Энантиомер 11А.
' Н ЯМР (500 МНг, ΌΜ8Ο-ά6) δ ррт 12,79 (Ьг. 8., 1Н) 8,50 (8, 1Н) 7,92 (άά, 1=8,7, 4,3 Нг, 1Н) 7,36 (ά, 1=8,5 Нг, 1Н) 7,20-7,27 (т, 1Н) 7,10 (ά, 1=1,6 Нг, 1Н) 6,97 (άά, 1=8,4, 1,7 Нг, 1Н) 6,42 (ά, 1=8,2 Нг, 1Н) 6,18 (ά, 1=8,2 Нг, 1Н) 5,95 (ά, 1=1,6 Нг, 2Н) 5,72 (8, 1Н) 4,79 (1, 1=5,4 Нг, 1Н) 3,94 (8, 3Н) 3,78-3,89 (т, 2Н) 3,593,68 (т, 5Н)
ЬС/Μδ (способ ЬС-С): К1 3,07 мин, МН+ 517 |ιζ| 2 : -99,6° (с 0,2218, ΌΜΡ)
Хиральная 8ЕС (способ 8РС-Э): 1,80 мин, МН+ 517, хиральная чистота 100%.
Энантиомер 11В 'Н ЯМР (500 ΜΠζ, ΌΜ8Ο-ά6) δ ррт 12,79 (Ьг. 8., 1Н) 8,50 (8, 1Н) 7,91 (άά, 1=8,7, 4,3 Нг, 1Н) 7,36 (ά, 1=8,2 Нг, 1Н) 7,17-7,28 (т, 1Н) 7,10 (ά, 1=1,9 Нг, 1Н) 6,97 (άά, 1=8,2, 1,9 Нг, 1Н) 6,41 (ά, 1=8,2 Нг, 1Н) 6,18 (ά, 1=8,2 Нг, 1Н) 5,95 (ά, 1=1,9 Нг, 2Н) 5,72 (1, 1=1,9 Нг, 1Н) 4,79 (1, 1=5,5 Нг, 1Н) 3,94 (8, 3Н) 3,77-3,88 (т, 2Н) 3,55-3,70 (т, 5Н)
ЬС/Μδ (способ ЬС-С): К1 3,07 мин, МН+ 517 |ιζ| 2 : +99,2° (с 0,2127, ΌΜΡ)
Хиральная 8ЕС (способ 8РС-Э): В, 3,38 мин, МН+ 517, хиральная чистота 100%.
Противовирусная активность соединений по настоящему изобретению Анализ противовирусной активности в отношении ϋΕΝν-2
Тестировали противовирусную активность всех соединений по настоящему изобретению против штамма 16681 ΌΕΝν-2, который метили усиленным зеленым флуоресцентным белком (еОЕР). Среда для культивирования состоит из минимальной поддерживающей среды, дополненной 2% термически инактивированной фетальной телячьей сыворотки, 0,04% гентамицина (50 мг/мл) и 2 мМ Ь-глутамина. Клетки Vе^ο, полученные из ЕСАСС, суспендировали в среде для культивирования и добавляли по 25 мкл в 384-луночные планшеты (2500 клеток/лунка), которые уже содержали противовирусные соединения. Как правило, эти планшеты содержали 4-кратное серийное разведение, состоящее из 9 стадий разведения, тестируемого соединения в 200-кратной конечной концентрации в 100% ΌΜ8Ο (200 нл). Кроме того, тестировали каждую концентрацию соединения в четырех параллельных анализах (диапазон конечной концентрации: 25-0,00038 мкМ). В результате каждый планшет содержал лунки, которые принимали в качестве контролей с вирусом (содержащих клетки и вирус без соединения), контролей с клетками (содержащих клетки без вируса и соединения) и контролей со средой (содержащих среду без клеток, вируса и соединений). В лунки, которые принимали в качестве контролей со средой, добавляли 25 мкл среды для культивирования вместо клеток Vе^ο. После того, как клетки добавляли в планшеты, планшеты инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре для обеспечения равномерного распределения клеток в лунках. Далее планшеты инкубировали в полностью увлажненном инкубаторе (37°С, 5% СО2) до следующего дня. Затем штамм 16681 ΌΕΝν-2, меченый еОЕР, добавляли при множественности заражения (ΜΟΙ), равной 0,5. Следовательно, 15 мкл вирусной суспензии добавляли во все лунки, содержащие тестируемое соединение, и во все лунки, которые принимали в качестве контролей с вирусом. Параллельно добавляли 15 мкл среды для культивирования к контролям со средой и клетками. Далее планшеты инкубировали в течение 3 дней в полностью увлажненном инкубаторе (37°С, 5% СО2). В день проведения считывания измеряли флуоресценцию еОЕР с использованием автоматизированного флуоресцентного микроскопа при 488 нм (голубой лазер). Применяя служебную систему ΌΙΜ8, рассчитывали кривые зависимости ингибирования от дозы для каждого соединения и определяли полумаксимальную эффективную концентрацию (ЕС50). Следовательно, рассчитывали процент ингибирования (I) для каждой тестируемой концентрации с использованием следующей формулы: 1=100*(8т-8СС)/(8^-8СС); при этом 8т, 8СС и δν(2 представляют собой уровень сигнала еОЕР в лунках с тестируемыми соединениями, контролями с клетками и контролями с вирусом соответственно. ЕС50 представляет собой концентрацию соединения, при которой репликация вируса ингибируется на 50%, что измерено с помощью 50% восстановления интенсивности флуоресценции еОЕР по сравнению с контролем с вирусом. Рассчитывали
- 23 032546
ЕС50 с применением линейной интерполяции (табл. 1).
Параллельно оценивали токсичность соединений в тех же планшетах. После того, как проводили считывание сигнала еОЕР, во все лунки 384-луночных планшетов добавляли 10 мкл резазурина, красителя, показывающего жизнеспособность клеток. Анализ с резазурином основан на восстановлении голубого резазурина с помощью ΝΑΌΌ, продуцирующегося клетками, в сильнофлюоресцирующий продукт, резоруфин. Образование розового флуоресцентного резоруфина непосредственно связано с количеством жизнеспособных клеток в лунке. Планшеты инкубировали в течение дополнительных 5 ч в полностью увлажненном инкубаторе (37°С, 5% СО2). Далее планшеты измеряли на сверхчувствительном считывающем устройстве (Тесап) с использованием длины волны возбуждения, составляющей 530 нм. Также определяли полумаксимальную цитотоксическую концентрацию (СС50), определенную как концентрация, необходимая для уменьшения превращения резазурина на 50% по сравнению с лунками с контролями с клетками (табл. 1). В результате определяли индекс селективности (81) для соединений, который рассчитывали как указано ниже: 81=СС5о/ЕС5о.
Таблица 1. ЕС50, СС50 и 81 для соединений по настоящему изобретению в анализе противовирусной активности в отношении ΌΕΝΥ-2
№ соединения ЕС50 (мкм) N СС50 (мкм) N 31 N
1 0,0030 4 6, 2 4 2053 4
1А 0,00081 14 4,3 16 5395 13
1В 0, 14 7 6, 3 7 44 7
2А 0,00081 4 4,2 4 5166 4
2В 0, 081 3 6, 2 3 77 3
3 0,00072 3 5, 5 3 7587 3
ЗА 0,00034 4 4,5 4 20070 4
ЗВ 0, 045 3 7,1 3 158 3
4 0,0014 3 6, 3 4 4398 3
4А 0,00070 3 4,9 3 6965 3
4В 0, 045 3 7,4 3 164 3
5 0,0023 3 6, 5 3 2860 3
5А 0,00084 4 5, 9 4 7057 4
5В 0,40 3 8, 1 3 21 3
6 0,0012 3 5, 6 3 4639 3
6А 0,00082 15 5, 1 15 6520 14
6В 0, 076 4 5, 4 4 71 4
7 0,0026 3 7,4 3 2860 3
7А 0, ООН 4 6, 1 4 5569 4
7В 0, 069 3 7,8 3 112 3
8 0,0024 3 8,0 3 3270 3
8А 0,0012 3 4,2 3 3457 3
8В 0,26 3 5, 7 3 22 3
9 0,0022 3 7,3 3 3329 3
9А 0,0044 4 3, 9 4 899 4
9А 0, 076 3 6, 5 3 85 3
10 0,0075 3 5, 8 3 767 3
10А 0,0032 3 4,5 3 1416 3
10В 0, 19 4 3, 8 3 20 3
11 0,0031 3 5, 8 3 1879 3
НА 0, 090 3 6, 5 3 72 3
11В 0,0012 3 4, 1 3 3526 3
Ν= количество независимых экспериментов, в которых тестировали соединения.
Анализ с количественной РСК с обратной транскриптазой (КТ-цРСК) в отношении квадривалентной вакцины
Протокол А.
Тестировали противовирусную активность соединений по настоящему изобретению против штамма ТС974#666 ΌΕΝν-1 (Жру), штамма 16681 ΌΕΝν-2, штамма Н87 ΌΕΝν-3 (ЖРУ) и штаммов Н241 (ЖГУ) и ΕΌΕΝ ΌΕΝν-4 (8Θ/06Κ2270ΌΚ1/2005; номер доступа в ОепБапк рО398256) в анализе с КТцРСК. В связи с чем, клетки Уего заражали или с помощью штамма ΌΕΝν-1, или -2, или -3, или -4 в присутствии или отсутствии тестируемых соединений. На 3 день после инфицирования клетки лизировали и клеточные лизаты использовали для получения кДНК как для вируса-мишени (3'ИТК ΌΕΝν; табл. 2), так и эталонного гена клетки (β-актин, табл. 2). Впоследствии, осуществляли дуплексную РСК в режиме реального времени на приборе Е1§Ысус1ег480. Полученное значение Ср является обратно пропорциональным по отношению к уровню экспрессии РНК этих мишеней. Ингибирование репликации ΌΕΝν с помощью тестируемого соединения привело к сдвигу Ср для гена 3'ИТК. С другой стороны, если тестируемое соединение является токсичным по отношению к клеткам, то будет наблюдаться похожий эффект и в отношении экспрессии β-актина. Сравнительный способ ААСр применяют для вычисления ЕС50, который основан на относительной генной экспрессии гена-мишени (3'ИТК), нормализованного конститутивным геном клетки (β-актином). Кроме того, определяли значения СС50 на основе значений Ср, полученных для конститутивного гена β-актина.
- 24 032546
Таблица 2. Праймеры и зонды, используемые для количественной КТ-РСК в режиме реального времени
Праймер/з онд Мишень Последовательность3' ь
ЕЗиБг258 ϋΕΝν 3’- итк 5’-СССТТАСАССАСАССССТС-3’
КЗиБг425 ϋΕΝν 3’- итк 5’-САСАСАССАССАТСТСТССТС-3’
РЗиБг343 ϋΕΝν 3’- итк КАМ-5 '-ААССАСТАСАССТТАСАССАСАСССССС-3’- ΒΗΰΐ
ЕасБ1п743 β-актин 5’-ССССАССТСАТСАССАТТ-3’
КасБ1п87 6 β-актин 5’-АТСТССАССТСАСАСТТСАТС-3’
РасБ1п773 β-актин НЕХ-5' -ТТССССТССССТСАСССТСТС-3 ’ -ΒΗζ}1
а Элементы указанных красителей (ТАМ, НЕХ) и гасителей люминесценции (ВНО1) выделены жирным и курсивом.
ь Выбирали нуклеотидную последовательность праймеров и зондов из консервативной области в 3'иТК области генома вируса денге на основании выравнивания 300 нуклеотидных последовательностей четырех серотипов вируса денге, депонированных в СепЬапк (Сопд е1 а1., 2013, МеШобз Мо1 Вю1, Сйар1ег 16).
Среда для культивирования состояла из минимальной поддерживающей среды, дополненной 2% термически инактивированной фетальной телячьей сыворотки, 0,04% гентамицина (50 мг/мл) и 2 мМ Бглутамина. Клетки Уего, полученные из ЕСАСС, суспендировали в среде для культивирования и добавляли по 75 мкл/лунка в 96-луночные планшеты (10000 клеток/лунка), которые уже содержали противовирусные соединения. Как правило, эти планшеты содержали 4-кратное серийное разведение, состоящее из 9 стадий разведения, тестируемого соединения в 200-кратной конечной концентрации в 100% ΌΜ8Θ (500 нл; диапазон конечной концентрации: 25-0,00038 мкМ). Кроме того, каждый планшет содержал лунки, которые принимали в качестве контролей с вирусом (содержащих клетки и вирус без соединения), контролей с клетками (содержащих клетки без вируса и соединения). После добавления клеток в планшеты, планшеты инкубировали в полностью увлажненном инкубаторе (37°С, 5% СО2) до следующего дня. Затем, добавляли штамм ТС974#666 ΌΕΝν-1, штамм 16681 ΌΕΝν-2, штамм Н87 ΌΕΝν-3 или штаммы Н241 или ΕΌΕΝ ΌΕΝν-4. Следовательно, 25 мкл вирусной суспензии, где Ср ~22 получали в КТ-цРСК, добавляли во все лунки, содержащие тестируемое соединение, и во все лунки, которые принимали в качестве контролей с вирусом. Параллельно добавляли 25 мкл среды для культивирования к контролям с клетками. Далее планшеты инкубировали в течение 3 дней в полностью увлажненном инкубаторе (37°С, 5% СО2). Через 3 дня удаляли надосадочную жидкость из лунок и дважды промывали клетки ледяным РВ8 (~100 мкл). Сгустки клеток в 96-луночных планшетах хранили при -80°С в течение по меньшей мере 1 дня. Далее экстрагировали РНК с применением набора для лизирования Се118-1о-СТ™ согласно инструкциям изготовителя (Аррйеб В1о8у81ешз). Клеточные лизаты можно было хранить при -80°С или сразу же использовать на стадии с обратной транскрипцией.
При подготовке к стадии с обратной транскрипцией, получали смесь А (табл. 3А) и распределяли по 7,57 мкл/лунка в 96-луночном планшете. После добавления 5 мкл клеточных лизатов осуществляли пятиминутную стадию денатурации при 75°С (табл. 3В). Позже добавляли 7,43 мкл смеси В (табл. 3С) и инициировали стадию с обратной транскрипцией (табл. 3Ό) для получения кДНК.
В конечном итоге получали смесь для КТ-цРСК, смесь С (табл. 4 А), распределенную в 9б-луночных планшетах ЫдЬ1Сус1ег для цРСК, к которым добавляли 3 мкл кДНК и осуществляли цРСК согласно условиям в табл. 4В на ЫдЫСускг 480.
Используя программное обеспечение ЫдЫСускг и служебную систему Б1М8, рассчитали кривые зависимости от дозы для каждого соединения и определяли полумаксимальную эффективную концентрацию (ЕС50) и полумаксимальную цитотоксическую концентрацию (СС50) (табл. 6-9).
- 25 032546
Таблица 3. Синтез кДНК с использованием смеси А, денатурации, смеси В и обратной транскрипции
Смесь А
Планшеты 8
Образцы 828 Об. реакцион ной смеси (мкл) 20
Элемент смеси Концентрация Объем (мкл)
Единица измерен ИЯ Исход ная Конеч ная 1 образец X образ цов
Μ111Ϊ-0 Н20 7,27 6019, 56
ИЗи0г425 мкМ 20 0,27 0, 15 124,2 0
КасЫп87 6 мкМ 20 0,27 0, 15 124,2 0
Объем смеси/лунка (мкл) 7,57
Клеточные лиза ты 5,00
Этап
В денатура ции
Стадия Темпера тура Время
Денатура ция 7 5°С 5’
Удержани е 4°С удерж ание
Образцы 864
Элемент смеси Концентрация Объем (мкл)
Единица измерен ИЯ Исход Конеч ная ная 1 образе Ц X образ цов
Буфер 2 Ехрапс! ΗΙΓΙ X 10, 00 1,00 2,00 1728, 0
МдС12 шМ 25, 00 3,50 2,80 2419, 2
άΝΤΡ шМ 10, 00 1,00 2,00 1728, 0
Ингибито р РНК- υ/μΐ 40, 00 1,00 0, 50 432,0
азы
ЕхрапЦ КТ υ/μΐ 50, 00 0,33 0, 13 112,3
Общий объем смеси (мкл) 7,43
Протокол синтеза кДНК
Стадия Темпера тура Время
Обратная транскри пция 42°С 30’
Денатура ция 99°С 5’
Удержани е 4°С удерж ание
- 26 032546
Таблица 4. Смесь для дРСК и протокол
А Смесь С
Образцы 833 Об. реакцион ной смеси (мкл) 25
Элемент смеси Концентрация Объем (мкл)
Единица измерен ИЯ Исход ная Конечна я 1 образе ц X образ цов
Н2О для РСК от КосНе 7, 74 6447, 42
Смесь КосЬе 2хММ X 2 1 12,50 10412 , 50
ЕЗиРг258 мкм 20 0,3 0,38 316, 5 4
КЗиРг425 мкм 20 0,3 0,38 316, 5 4
РЗиРг343 мкм 20 о, 1 0, 13 108,2 9
ЕасЫп743 мкм 20 0,3 0,38 316, 5 4
КасЫп87 6 мкм 20 0,3 0,38 316, 5 4
РасЫп773 мкм 20 о, 1 0, 13 108,2 9
Объем смеси/пробирка (мкл) 22,02
кДНК 3,00
В Протокол дРСКЗ
Стадия Темпера тура Время Скоро сть измен ения
предварит ельная инкуб./де нат. 95°С 10 мин. 4,4
Денатурац ИЯ 95°С 10 с 4,4 40 циклов
Отжиг 58°С 1 мин. 2,2
Элонгация 72°С 1 с 4,4
Охлаждени е 40°С 10 с 1,5
Анализ с количественной РСК с обратной транскриптазой (КТ-дРСК) в отношении квадривалентной вакцины
Протокол В.
Клетки Уего (4 х 104) высевали в 96-луночные планшеты. Через один день среду для культивирования клеток заменяли 100 мкл среды для количественного определения, содержащей 2х, 3х или 5х серийное разведение соединения (диапазон концентрации: 50 мкг/мл 0,00038 мкг/мл, 50 мкг/мл - 0,0076 мкг/мл и 50 мкг/мл 0,00013 мкг/мл, соответственно) и 100 мкл разведения вируса денге, где С! ~20 получали в КТ-дРСК. После 2-часового инкубационного периода 3 раза промывали клеточный монослой средой для количественного определения для удаления остаточного не адсорбированного вируса и дополнительно инкубировали в течение либо 4 дней (ΌΕΝν-2 ХСС-Топдайке), либо 7 дней (штамм Ό1/Η/ΙΜΤ88Α/98/606 Эцкоиб ΌΕΝν-1, прототип, представляющий собой штамм Н87 ΌΕΝν-3, штамм Н241 ΌΕΝν-4) в присутствии ингибитора. Собирали надосадочную жидкость и определяли РНК нагрузку с помощью количественной КТ-РСК в режиме реального времени. 50% эффективную концентрацию (ЕС50), которую определяют как концентрацию соединения, которая необходима для ингибирования репликации вирусной РНК на 50%, определяли с применением логарифмической интерполяции (табл. 7 и 8).
РНК выделяли из 100 мкл надосадочной жидкости с помощью набора Чис1ео8рт 96 νΐΓΗ8 (РПТег 8егу1се, Дюрен, Германия), как описано производителем. Последовательности праймеров ТадМап (прямой праймер для ΌΕΝν, обратный праймер для ΌΕΝν; табл. 5) и зондов ТадМап (зонд для ΌΕΝν, табл.
- 27 032546
5) выбирали из неструктурного гена 3 (N83) или N85 соответствующих флавивирусов с использованием программного обеспечения Рптег Εxр^еδδ (версия 2.0; Арр1^еά В^оδуδ1етδ, Ленник, Бельгия). Зонд ТацМап флюоресцентно метили с помощью 6-карбоксифлюоресцеина (ТАМ) на 5'-конце в качестве указанного красителя и с малой бороздой связующего вещества (МОВ) на 3'-конце в качестве гасителя люминесценции (табл. 5). Проводили одностадийную количественную ΚΤ-РСЯ в общем объеме 25 мкл, с содержанием 13,9375 мкл Н2О, 6,25 мкл мастер-микса (Еигодеп1ес, Серен, Бельгия), 0,375 мкл прямого праймера, 0,375 мкл обратного праймера, 1 мкл зонда, 0,0625 мкл обратной транскриптазы (Еигодеп1ес) и 3 мкл образца. Проводили ΚΤ-РСЯ с применением системы АВ1 7500 для быстрой РСЯ в режиме реального времени (Арр1^еά В^оδуδ1етδ, Бренчбург, Нью-Джерси, США) и с применением следующих условий: 30 мин при 48°С и 10 мин при 95°С, за чем следовало 40 циклов 15 с при 95°С и 1 мин при 60°С. Данные анализировали с использованием программного обеспечения АВ1 РШ8М 7500 8Ό8 (версия 1.3.1; Арр1^еά В^оδуδ1етδ). Для полного количественного анализа составляли стандартные кривые с использованием 10-кратного разведения полученной матрицы с известными концентрациями.
Таблица 5. Праймеры и зонды, используемые для количественной ΚΤ-РСЯ в режиме реального времени
Праймер/зонд Последовательность (5’ -> 3’) а Источни к ь Мишень
прямой праймер для ϋΕΝν ТСССАСССССАСТТТАСААА (ЗЕ<2 Ю Ν.1) ϋΕΝν 2 ЫСС N33
обратный праймер для ϋΕΝν ТСТТААССТССССССАТСАТ (ЗЕО Ю Ν.2)
зонд ϋΕΝν ΕΆΜ- АТТССАСАСААТСТСССАТ- ΜΟΒ (3Εζ) Ю Ν.3)
ОепЗ С САТ АСАС С АСАСАТ ССТССТСТ (3Εζ) Ю Ν.4) ϋΕΝν-1, -3, -4 N35
ОепА31-3 САТТССАТТТТСТССССТТС (ЗЕ<2 Ю Ν.5) ϋΕΝν-1, -3
ОепА34 СААТССАТСТТСССССССТС (ЗЕ<2 Ю N. 6) ϋΕΝν-4
Зонд ΏΕΝ 1-3 ΕΆΜ- САССАТ САТ Т ССАСССАСАС- МСВ (ЗЕ<2 Ю Ν.7) ϋΕΝν-1, -3
Зонд ΏΕΝ 4 ΕΆΜ- С ААС АТ С ААТ С С АС С С АС АС - МСВ (ЗЕ<2 Ю Ν.8) ϋΕΝΥ-4
а Элементы указанного красителя (ТАМ) и гасителя люминесценции (МОВ/ТАМНА) выделены жирным и курсивом.
Ь Нуклеотидную последовательность и положение праймеров и зондов в геноме выводили из нуклеотидной последовательности NОС ^ΕNV 2 (номер доступа в ОепВапк М29095; 1пе е1 а1., 1989), штамма О1/Н/1МТ88А/98/606 ОДЬоий серотипа 1 вируса денге (номер доступа в ОепЬапк АТ298808), прототипа, представляющего собой штамм Н87 серотипа 3 вируса денге (с93130), штамма Н241 серотипа 4 вируса денге (нет доступных последовательностей).
Цитотоксический анализ (протокол В).
Оценивали потенциальные цитотоксические эффекты соединений в неинфицированных клетках Vе^о. Клетки высевали при 4 х 104 клеток/лунка в 96-луночный планшет при двух-, трех- или пятикратных серийных разведениях (в диапазоне 50 мкг/мл - 0,0038 мкг/мл, 50 мкг/мл - 0,0076 мкг/мл и 50 мкг/мл - 0,00013 мкг/мл, соответственно) соединения и инкубировали в течение от 4 до 7 дней. Отбирали среду для культивирования и 100 мкл 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-5-(3-карбоксиметоксифенил)-2-(4-сульфофенил)-2Нтетразолий/феназинметосульфата (МТ8/РМ8; Рготеда, Лейден, Нидерланды) в РВ8 добавляли в каждую лунку.
После 2-часового инкубационного периода при 37°С определяли плотность клеток при 498 нм. Рассчитывали цитотоксическую активность с применением следующей формулы: % жизнеспособных клеток=100х(00 соединения/0ВСС), где 0Ό соединения и 0Осс соответствует оптической плотности при 498 нм соответственно неинфицированных культур клеток, обработанных соединением, и неинфицированных, необработанных культур клеток. 50% цитотоксическую концентрацию (т.е. концентрацию, которая уменьшает общее количество клеток на 50%; СС50) рассчитывали с использованием линейной интерполяции (табл. 7 и 8).
- 28 032546
Таблица 6. ЕС50, СС50 и 81 для соединений против серотипа 1 в анализах с КТ-цРСК
Протокол А
КТ-дРСК ТС974#666 серотипа 1
№ соединения ЕС50 (мкм) N СС50 (мкм) N 31 N
1А 0,0077 5 4,1 5 530 5
2А 0,0071 4 4,5 4 628 4
ЗА 0,0053 3 3,8 3 721 3
4А 0,0078 4 4, 6 3 447 3
5А 0, 013 3 5,2 3 392 3
6А 0,0036 к 4,8 5 1348 5
7А 0, 016 3 4, 6 3 282 3
8А 0,0096 3 3,5 3 368 3
9А 0,0050 3 4,7 3 934 3
10А 0, 014 3 4,1 3 290 3
11В 0, 018 3 3,7 3 202 3
Протокол В
КТ-дРСК РίтЬои-Ы серотипа 1
№ соединения ЕС50 (мкм) N СС50 (мкм) N 31 N
1А 0, 022 3 9,7 9 506 2
2А 0, 017 2 7,4 5 447 2
ЗА 0, 018 2 7,7 5 450 2
4А 0, 020 2 9,5 5 392 2
5А 0, 019 2 7, 8 5 471 2
6А <0,015 3 8, 1 7 >693 3
7А 0, 020 2 7,2 5 366 2
8А 0, 017 2 7,7 5 450 2
9А 0, 019 2 7, 9 5 454 2
10А 0, 020 2 8, 0 5 413 2
11В 0, 025 2 7,7 5 320 2
Ν= количество независимых экспериментов, в которых тестировали соединения
Таблица 7. ЕС50, СС50 и 81 для соединений против серотипа 2 в анализах с КТ-дРСК
Протокол А
КТ-дРСК 16681 серотипа 2
№ соединения ЕС50 (мкм) N СС50 (мкм) N 51 N
1А 0, ООН 9 4,7 9 4457 9
2А 0,00085 4 5,7 4 6744 4
ЗА 0,00024 3 4,3 6 25632 3
4А 0,00044 5 5,2 6 12915 5
5А 0,00050 4 4,5 5 10575 4
6А 0,00054 7 3,7 7 8391 6
7А 0,00091 3 4,7 4 5763 3
8А 0,0012 3 5,2 3 4406 3
9А 0,00079 3 3, 8 3 4833 3
10А 0,0032 3 4,2 3 1312 3
11В 0,0010 3 4,7 3 4562 3
Протокол В
КТ- дРСК ЖС-ТопдаНке серотипа 2
№ соединения ЕС50 (мкм) N СС50 (мкм) N 81 N
1А 0,00038 5 14 6 36900 5
2А 0,00040 3 13 3 31100 3
ЗА <0,00033 3 12 3 >37200 3
4А <0,00034 3 13 3 >37300 3
5А <0,00040 3 11 3 >28000 3
6А 0,00040 4 13 4 29300 3
7А 0,00027 3 12 2 18900 2
8А 0,0014 3 11 3 8050 3
9А <0,00031 3 12 3 >37300 3
10А 0,0014 3 12 3 8910 3
11В 0,00027 3 11 3 37900 1
Ν= количество независимых экспериментов, в которых тестировали соединения.
- 29 032546
Таблица 8. ЕС50, СС50 и для соединений против серотипа 3 в анализах с КТ-дРСК
Протокол А
КТ-дРСК Н87 серотипа 3
№ соединения ЕС50 (мкм) N СС50 (мкм) N 31 N
1А 0, 063 5 1,7 4 28 4
2А 0, 053 4 3, 9 3 76 3
ЗА 0, 036 3 3,7 3 104 3
4А 0, 065 4 3, 8 2 52 2
5А 0, 068 3 2,9 3 42 3
6А 0, 026 5 3, 0 4 106 4
7А 0, 070 3 4, 6 2 66 2
8А 0, 076 3 3, 6 3 47 3
9А 0, 063 3 3, 0 3 48 3
10А 0, 070 3 3,3 3 47 3
11В 0, 070 3 3,4 3 48 3
Протокол В
кт- дРСК Н87 серотипа 3
№ соединения ЕС50 (мкм) N СС50 (мкм) N 31 N
1А <0,015 6 9, 7 9 >1440 6
2А 0, 021 3 7,4 5 350 3
ЗА 0, 020 3 7,7 5 383 3
4А 0, 029 3 9, 5 5 376 3
5А 0, 025 3 7,8 5 291 3
6А <0,015 4 8,1 7 >591 4
7А <0,017 3 7,2 5 >423 3
8А 0, 032 3 7,7 5 244 3
9А 0, 018 3 7,9 5 400 3
10А 0, 027 3 8,0 5 291 3
11В 0, 026 3 7,7 5 294 3
Ν= количество независимых экспериментов, в которых тестировали соединения.
Таблица 9. ЕС50, СС50 и 8I для соединений против штаммов Н241 (А) и 8Θ/06Κ2270ΏΚ1/2005 (В) серотипа 4 в анализах с КТ-дРСК________________
Протокол А
КТ-дРСК Н241 серотипа 4
№ соединения ЕС50 (мкм) N СС50 (мкм) N 31 N
1А 2А ЗА 4А 5А 6А 7А 8А 9А 0,24 10 0,26 4 0, 18 5 0,24 4 0,32 4 0,084 8 0,23 3 0,30 3 0,24 3 3.1 9 1.7 3 3,0 5 2.4 4 4.5 4 2.1 8 2.8 3 3,1 2 2,7 3 13 9 7 3 17 5 10 4 13 4 25 8 12 3 11 2 11 3
10А 11В 0,32 3 0,35 3 2,7 2 2,5 3 8 2 7 3
Ν= количество независимых экспериментов, в которых тестировали соединения.
Протокол А
№ соединения ЕС50 (мкм) N СС50 (мкм) N 31 N
1А 0,0062 6 3,7 6 583 6
2А 0,0043 5 4,4 5 1007 5
ЗА 0,0029 4 4,1 3 1579 3
4А 0,0052 5 4,4 3 981 3
5А 0,0046 3 4,2 2 630 2
6А 0,0029 3 3,6 3 1241 3
7А 0,0066 4 3,7 3 536 3
8А 0,0065 4 4,5 4 690 4
9А 0,0047 3 2,6 3 717 3
10А 0,0086 4 4,4 3 436 3
11В 0,0098 4 4,0 3 374 3
Ν= количество независимых экспериментов, в которых тестировали соединения.
- 30 032546
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> Лапззеп РкагтасеиЬ1са1з, 1пс
КаДкоПеке ип1чегз1Ье1Ь Ьеи'уеп <120> ПРОИЗВОДНЫЕ МОНО- ИЛИ ДИЗАМЕЩЕННЫХ ИНДОЛОВ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ РЕПЛИКАЦИИ ВИРУСОВ ДЕНГЕ <130> Т1Р 326 РСТ <150> ЕР14187374.5 <151> 2014-10-01 <150> ЕР15159164.1 <151> 2015-03-16 <160> 14 <170> В155АР 1.2 <210> 1 <211> 20 <212> ДНК <213> Вирус денге <220>
<221> источник <222> (1)..(20)
<223> /организм=вирус денге тип_молекулы=' 11 неопределенная ДНК
<400> 1
Дсддадссдд адЬЬЬасааа 20
<210> 2
<211> 20
<212> ДНК
<213> Вирус денге
<220>
<221> источник
<222> (1)..(20)
<223> /организм=вирус денге тип_молекулы=' 11 неопределенная ДНК
<400> 2
ЬсЬЬаасдЬс сдсссаДдаД 20
<210> 3
<211> 19
<212> ДНК
<213> Вирус денге
<220>
<221> источник
<222> (1)..(19)
<223> /организм=вирус денге тип_молекулы=' 11 неопределенная ДНК
<400> 3
аДДссасаса аЬдЬддсаЬ 19
<210> 4
<211> 23
<212> ДНК
<213> Вирус денге
<220>
<221> источник
<222> (1)..(23)
<223> /организм=вирус денге тип_молекулы=' неопределенная ДНК
<400> 4
ддаДадасса дадаДссДдс ДдД 23
<210> 5
<211> 20
<212> ДНК
<213> Вирус денге
<220>
<221> источник
<222> (1)..(20)
<223> /организм=вирус денге тип_молекулы=' неопределенная ДНК
<400> 5
саЬЬссаЬЬЬ ЬсЬддсдЬЬс 20
- 31 032546 <210> 6 <211> 20 <212> ДНК <213> Вирус денге <220>
<221> источник <222> (1)..(20)
<223> /организм=вирус денге тип_молекулы=' 11 неопределенная ДНК
<400> 6
сааВссаВсВ ВдсддсдсВс 20
<210> 7
<211> 20
<212> ДНК
<213> Вирус денге
<220>
<221> источник
<222> (1)..(20)
<223> /организм=вирус денге тип_молекулы=' 11 неопределенная ДНК
<400> 7
садсаВсаВВ ссаддсасад 20
<210> 8
<211> 20
<212> ДНК
<213> Вирус денге
<220>
<221> источник
<222> (1)..(20)
<223> /организм=вирус денге тип_молекулы=' 11 неопределенная ДНК
<400> 8
саасаВсааВ ссаддсасад 20
<210> 9
<211> 19
<212> ДНК
<213> Вирус денге
<220>
<221> источник
<222> (1)..(19)
<223> /организм=вирус денге тип_молекулы=' неопределенная ДНК
<400> 9
сддВВададд адассссВс 19
<210> 10
<211> 21
<212> ДНК
<213> Вирус денге
<220>
<221> источник
<222> (1)..(21)
<223> /организм=вирус денге тип_молекулы=' неопределенная ДНК
<400> 10
дадасадсад даВсВсВддВ с 21
<210> 11
<211> 28
<212> ДНК
<213> Вирус денге
<220>
<221> источник
<222> (1)..(28)
<223> /организм=вирус денге тип_молекулы= неопределенная ДНК
<400> 11
ааддасВада ддВВададда дасссссс 28 <210> 12 <211> 18 <212> ДНК
- 32 032546 <213> Вирус денге <220>
<221> источник <222> (1)..(18) <223> /организм=вирус денге тип_молекулы=неопределенная ДНК <400> 12 ддссаддЕса ЕсассаЕЕ <210> 13 <211> 21 <212> ДНК <213> Вирус денге <220>
<221> источник <222> (1)..(21) <223> /организм=вирус денге тип_молекулы=неопределенная ДНК <400> 13 аЕдЕссасдЕ сасасЕЕсаЕ д <210> 14 <211> 21 <212> ДНК <213> Вирус денге <220>
<221> источник <222> (1)..(21) <223> / организм= вирус денге тип_молекулы= неопределенная ДНК <400> 14
ЕЕссдсЕдсс сЕдаддсЕсЕ с

Claims (6)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение формулы (I) его стереоизомерная форма или его фармацевтически приемлемая соль; при этом указанное соединение выбрано из группы, где
    К1 представляет собой Н, К2 представляет собой Е и К3 представляет собой Н, Е или СН3;
    К1 представляет собой Е или СН3, К2 представляет собой ОСН3 и К3 представляет собой Н;
    К1 представляет собой Е, К2 представляет собой Н и К3 представляет собой СН3;
    К1 представляет собой Н, К2 представляет собой ОСН3 и К3 представляет собой Н;
    К1 представляет собой Н, К2 представляет собой С1 и К3 представляет собой Н или СН3;
    К1 представляет собой Е, К2 представляет собой Е и К3 представляет собой Н, или
    К1 представляет собой СН3, К2 представляет собой Н и К3 представляет собой Е.
  2. 2. Соединение, стереоизомерная форма или фармацевтически приемлемая соль по п.1, где указанное соединение выбрано из группы
    - 33 032546
  3. 3. Фармацевтическая композиция для лечения вирусных инфекций, вызываемых вирусом денге, содержащая соединение формулы (I), его стереоизомерную форму или фармацевтически приемлемую соль по п.1 или 2 вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми наполнителями, разбавителями или носителями.
  4. 4. Применение соединения формулы (I), его стереоизомерной формы или его фармацевтически приемлемой соли по п.1 в качестве лекарственного препарата для лечения вирусных инфекций, вызываемых вирусом денге.
  5. 5. Применение фармацевтической композиции по п.3 в качестве лекарственного препарата для лечения вирусных инфекций, вызываемых вирусом денге.
  6. 6. Применение соединения, представленного следующей структурной формулой (I)
    - 34 032546 его стереоизомерной формы или его фармацевтически приемлемой соли;
    при этом указанное соединение выбрано из группы, где
    К1 представляет собой Н, К2 представляет собой Ε и К3 представляет собой Н, Ε или СН3;
    К1 представляет собой Ε или СН3, К2 представляет собой ОСН3 и К3 представляет собой Н; К1 представляет собой Ε, К2 представляет собой Н и К3 представляет собой СН3;
    К1 представляет собой Н, К2 представляет собой ОСН3 и К3 представляет собой Н;
    К1 представляет собой Н, К2 представляет собой С1 и К3 представляет собой Н или СН3;
    К1 представляет собой Ε, К2 представляет собой Ε и К3 представляет собой Н, или
    К1 представляет собой СН3, К2 представляет собой Н и К3 представляет собой Ε, для ингибирования репликации вируса (вирусов) денге у пациента.
EA201790758A 2014-10-01 2015-09-30 Производные моно- или дизамещенных индолов в качестве ингибиторов репликации вирусов денге EA032546B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14187374 2014-10-01
EP15159164 2015-03-16
PCT/EP2015/072551 WO2016050841A1 (en) 2014-10-01 2015-09-30 Mono- or di-substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201790758A1 EA201790758A1 (ru) 2017-07-31
EA032546B1 true EA032546B1 (ru) 2019-06-28

Family

ID=54199687

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201790758A EA032546B1 (ru) 2014-10-01 2015-09-30 Производные моно- или дизамещенных индолов в качестве ингибиторов репликации вирусов денге

Country Status (31)

Country Link
US (1) US9944598B2 (ru)
EP (1) EP3201176B1 (ru)
JP (1) JP6732736B2 (ru)
KR (1) KR102478311B1 (ru)
CN (1) CN107001264B (ru)
AU (1) AU2015326930B2 (ru)
BR (1) BR112017006299A2 (ru)
CA (1) CA2959573A1 (ru)
CL (1) CL2017000782A1 (ru)
CY (1) CY1121874T1 (ru)
DK (1) DK3201176T3 (ru)
EA (1) EA032546B1 (ru)
ES (1) ES2714074T3 (ru)
HR (1) HRP20190199T1 (ru)
HU (1) HUE041888T2 (ru)
IL (1) IL251396A0 (ru)
LT (1) LT3201176T (ru)
MA (1) MA40768B1 (ru)
ME (1) ME03360B (ru)
MX (1) MX2017004299A (ru)
PH (1) PH12017500571A1 (ru)
PL (1) PL3201176T3 (ru)
PT (1) PT3201176T (ru)
RS (1) RS58461B1 (ru)
SG (1) SG11201702463YA (ru)
SI (1) SI3201176T1 (ru)
TW (1) TWI681951B (ru)
UA (1) UA121119C2 (ru)
UY (1) UY36340A (ru)
WO (1) WO2016050841A1 (ru)
ZA (1) ZA201702301B (ru)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201116559D0 (en) 2011-09-26 2011-11-09 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
GB201305376D0 (en) 2013-03-25 2013-05-08 Univ Leuven Kath Novel viral replication inhibitors
ME03344B (me) * 2014-10-01 2019-10-20 Janssen Pharmaceuticals Inc Mono- ili di-supstituisani indoli kao inнibitori replikacije denga virusa
US9453018B2 (en) 2014-10-01 2016-09-27 Bristol-Myers Squibb Company Pyrimidinones as factor XIa inhibitors
KR102457840B1 (ko) 2014-10-01 2022-10-21 메르크 파텐트 게엠베하 보론산 유도체
JOP20160086B1 (ar) 2015-05-08 2021-08-17 2 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research And Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20160198B1 (ar) 2015-09-16 2022-03-14 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JO3633B1 (ar) 2015-09-16 2020-08-27 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research & Development مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
MX2018011784A (es) 2016-03-31 2019-02-13 Janssen Pharmaceuticals Inc Derivados de indol sustituidos como inhibidores de la replicacion virica del dengue.
WO2017167953A1 (en) * 2016-03-31 2017-10-05 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Substituted indoline derivatives as dengue viral replication inhibitors
JOP20170069B1 (ar) 2016-04-01 2021-08-17 1 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
BR112018068956A2 (pt) * 2016-04-01 2019-01-22 Janssen Pharmaceuticals Inc derivados do composto indol substituídos como inibidores da replicação viral da dengue
JOP20180025B1 (ar) 2017-03-31 2021-08-17 Janssen Pharmaceuticals Inc مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
JOP20180026A1 (ar) 2017-03-31 2019-01-30 Univ Leuven Kath مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك
PE20200342A1 (es) * 2017-05-22 2020-02-14 Janssen Pharmaceuticals Inc Derivados de indolina sustituidos como inhibidores de la replicacion virica de dengue
ES2929667T3 (es) 2017-05-22 2022-11-30 Janssen Pharmaceuticals Inc Derivados de indolina sustituidos como inhibidores de la replicación vírica de dengue

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013045516A1 (en) * 2011-09-26 2013-04-04 Katholieke Universiteit Leuven Viral replication inhibitors

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013045516A1 (en) * 2011-09-26 2013-04-04 Katholieke Universiteit Leuven Viral replication inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
EP3201176B1 (en) 2018-12-12
CN107001264A (zh) 2017-08-01
UY36340A (es) 2016-04-01
DK3201176T3 (en) 2019-03-25
SI3201176T1 (sl) 2019-05-31
MA40768A (fr) 2017-09-08
UA121119C2 (uk) 2020-04-10
CY1121874T1 (el) 2020-10-14
ES2714074T3 (es) 2019-05-27
SG11201702463YA (en) 2017-04-27
MA40768B1 (fr) 2019-03-29
IL251396A0 (en) 2017-05-29
EP3201176A1 (en) 2017-08-09
TWI681951B (zh) 2020-01-11
EA201790758A1 (ru) 2017-07-31
AU2015326930B2 (en) 2020-03-26
ME03360B (me) 2019-10-20
PT3201176T (pt) 2019-03-04
US9944598B2 (en) 2018-04-17
HUE041888T2 (hu) 2019-06-28
AU2015326930A1 (en) 2017-03-16
US20170298017A1 (en) 2017-10-19
BR112017006299A2 (pt) 2018-01-16
KR102478311B1 (ko) 2022-12-15
ZA201702301B (en) 2018-12-19
JP2017531619A (ja) 2017-10-26
PH12017500571A1 (en) 2017-08-30
RS58461B1 (sr) 2019-04-30
LT3201176T (lt) 2019-03-25
WO2016050841A1 (en) 2016-04-07
CA2959573A1 (en) 2016-04-07
HRP20190199T1 (hr) 2019-04-05
TW201630879A (zh) 2016-09-01
MX2017004299A (es) 2017-07-19
KR20170063802A (ko) 2017-06-08
CN107001264B (zh) 2021-06-15
WO2016050841A9 (en) 2016-06-02
CL2017000782A1 (es) 2017-11-03
JP6732736B2 (ja) 2020-07-29
PL3201176T3 (pl) 2019-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA032546B1 (ru) Производные моно- или дизамещенных индолов в качестве ингибиторов репликации вирусов денге
JP7451626B2 (ja) デングウイルス複製阻害剤としての一または二置換インドール誘導体
KR102478309B1 (ko) 뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 １치환 또는 ２치환 인돌
EP3436436B1 (en) Substituted indoline derivatives as dengue viral replication inhibitors
JP6970115B2 (ja) デングウイルス複製阻害剤としての置換インドリン誘導体
EA032362B1 (ru) Производные индола в качестве ингибиторов репликации вирусов денге
KR20190135496A (ko) 뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 치환 인돌린 유도체
KR20180051563A (ko) 뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 １치환 또는 ２치환 인돌 유도체
EA035663B1 (ru) Производные моно- или дизамещенных индолов в качестве ингибиторов репликации вирусов денге

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM