BR112018001858B1 - Composições compreendendo células modificadas que compreendem um receptor de antígeno quimérico (car), seus usos terapêuticos e método para modificar uma célula - Google Patents
Composições compreendendo células modificadas que compreendem um receptor de antígeno quimérico (car), seus usos terapêuticos e método para modificar uma célula Download PDFInfo
- Publication number
- BR112018001858B1 BR112018001858B1 BR112018001858-9A BR112018001858A BR112018001858B1 BR 112018001858 B1 BR112018001858 B1 BR 112018001858B1 BR 112018001858 A BR112018001858 A BR 112018001858A BR 112018001858 B1 BR112018001858 B1 BR 112018001858B1
- Authority
- BR
- Brazil
- Prior art keywords
- car
- cell
- antigen
- antibody
- cells
- Prior art date
Links
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 title claims abstract description 271
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 97
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title abstract description 32
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 360
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims abstract description 285
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 167
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 97
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims abstract description 36
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 28
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 28
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 23
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 153
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 142
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 138
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 138
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 107
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 99
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 claims description 98
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 claims description 94
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 68
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 67
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 56
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 56
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 55
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 47
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 46
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 45
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 45
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 44
- 101000863873 Homo sapiens Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type substrate 1 Proteins 0.000 claims description 41
- 102100029948 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type substrate 1 Human genes 0.000 claims description 41
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims description 38
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 claims description 37
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 claims description 37
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 34
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 32
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 26
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 26
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 23
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 23
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 20
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 claims description 19
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 18
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 18
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 17
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 16
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 15
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 15
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 10
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 claims description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 8
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 7
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 7
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 7
- 230000005889 cellular cytotoxicity Effects 0.000 claims description 7
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 7
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 7
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 7
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 claims description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 6
- 210000001589 microsome Anatomy 0.000 claims description 6
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 claims description 5
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 4
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 claims 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 claims 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 abstract description 13
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 abstract description 12
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 abstract description 5
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 abstract description 4
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 abstract description 4
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 abstract description 3
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 abstract description 3
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 abstract description 2
- 238000011467 adoptive cell therapy Methods 0.000 abstract 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 92
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 74
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 71
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 51
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 50
- 230000006870 function Effects 0.000 description 48
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 48
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 45
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 44
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 44
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 41
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 39
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 37
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 35
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 35
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 34
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 34
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 33
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 33
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 33
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 31
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 31
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 30
- 101001074035 Homo sapiens Zinc finger protein GLI2 Proteins 0.000 description 29
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 29
- 102100035558 Zinc finger protein GLI2 Human genes 0.000 description 29
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 29
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 29
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 28
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 28
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 27
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 25
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 25
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 23
- 239000000047 product Substances 0.000 description 23
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 22
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 22
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 22
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 22
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 21
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 21
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 21
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 21
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 21
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 description 20
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 20
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 20
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 18
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 18
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 18
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 18
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 17
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 17
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 17
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 17
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 17
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 16
- -1 monoclonal antibody Proteins 0.000 description 16
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 15
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 15
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 15
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 15
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 15
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 14
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 description 14
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 14
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 13
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 13
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 13
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 13
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 13
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 13
- 230000004044 response Effects 0.000 description 13
- 102100040840 C-type lectin domain family 7 member A Human genes 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 12
- 108010025838 dectin 1 Proteins 0.000 description 12
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 11
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 11
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 11
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 11
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 10
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 10
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 10
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 10
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 10
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 10
- 102000004082 Calreticulin Human genes 0.000 description 9
- 108090000549 Calreticulin Proteins 0.000 description 9
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 9
- PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N Cocarcinogen A1 Natural products CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC1C(C)C2(O)C3C=C(C)C(=O)C3(O)CC(CO)=CC2C2C1(OC(C)=O)C2(C)C PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 9
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 9
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 9
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 9
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 9
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 9
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 9
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 9
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 101000603882 Homo sapiens Nuclear receptor subfamily 1 group I member 3 Proteins 0.000 description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 8
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 8
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 7
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 7
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 7
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 7
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 7
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 7
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 7
- 102100029215 Signaling lymphocytic activation molecule Human genes 0.000 description 7
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 7
- 102000008229 Toll-like receptor 1 Human genes 0.000 description 7
- 108010060889 Toll-like receptor 1 Proteins 0.000 description 7
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 7
- 102100039387 Toll-like receptor 6 Human genes 0.000 description 7
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 7
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 7
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 210000004980 monocyte derived macrophage Anatomy 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 7
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 7
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 7
- 210000000680 phagosome Anatomy 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 6
- 102100024263 CD160 antigen Human genes 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101000761938 Homo sapiens CD160 antigen Proteins 0.000 description 6
- 101000994375 Homo sapiens Integrin alpha-4 Proteins 0.000 description 6
- 101000576894 Homo sapiens Macrophage mannose receptor 1 Proteins 0.000 description 6
- 101000633786 Homo sapiens SLAM family member 6 Proteins 0.000 description 6
- 101000633784 Homo sapiens SLAM family member 7 Proteins 0.000 description 6
- 102100032818 Integrin alpha-4 Human genes 0.000 description 6
- 102100032816 Integrin alpha-6 Human genes 0.000 description 6
- 102100025354 Macrophage mannose receptor 1 Human genes 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100029197 SLAM family member 6 Human genes 0.000 description 6
- 102100029198 SLAM family member 7 Human genes 0.000 description 6
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 6
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 6
- 201000003710 autoimmune thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 6
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 6
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 6
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 6
- SDZRWUKZFQQKKV-JHADDHBZSA-N cytochalasin D Chemical compound C([C@H]1[C@@H]2[C@@H](C([C@@H](O)[C@H]\3[C@]2([C@@H](/C=C/[C@@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)C/C=C/3)OC(C)=O)C(=O)N1)=C)C)C1=CC=CC=C1 SDZRWUKZFQQKKV-JHADDHBZSA-N 0.000 description 6
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 6
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 6
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 6
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 6
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 5
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 5
- 102100038078 CD276 antigen Human genes 0.000 description 5
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241001559542 Hippocampus hippocampus Species 0.000 description 5
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 5
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 5
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 5
- 101000831496 Homo sapiens Toll-like receptor 3 Proteins 0.000 description 5
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 5
- 101000669406 Homo sapiens Toll-like receptor 6 Proteins 0.000 description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 5
- 108091036407 Polyadenylation Proteins 0.000 description 5
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 5
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 5
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 5
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 102100024333 Toll-like receptor 2 Human genes 0.000 description 5
- 102100024324 Toll-like receptor 3 Human genes 0.000 description 5
- 102100039357 Toll-like receptor 5 Human genes 0.000 description 5
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 5
- 210000003690 classically activated macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 5
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 5
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 5
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 5
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 5
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 5
- 108010009992 CD163 antigen Proteins 0.000 description 4
- 108010005327 CD19-specific chimeric antigen receptor Proteins 0.000 description 4
- 101710185679 CD276 antigen Proteins 0.000 description 4
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 4
- 102100035793 CD83 antigen Human genes 0.000 description 4
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 4
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 108091033380 Coding strand Proteins 0.000 description 4
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 4
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 4
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 4
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 101000946856 Homo sapiens CD83 antigen Proteins 0.000 description 4
- 101001078158 Homo sapiens Integrin alpha-1 Proteins 0.000 description 4
- 101000994365 Homo sapiens Integrin alpha-6 Proteins 0.000 description 4
- 101001035237 Homo sapiens Integrin alpha-D Proteins 0.000 description 4
- 101001046687 Homo sapiens Integrin alpha-E Proteins 0.000 description 4
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 description 4
- 101000935040 Homo sapiens Integrin beta-2 Proteins 0.000 description 4
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 4
- 101001043809 Homo sapiens Interleukin-7 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 4
- 101000971538 Homo sapiens Killer cell lectin-like receptor subfamily F member 1 Proteins 0.000 description 4
- 101000961414 Homo sapiens Membrane cofactor protein Proteins 0.000 description 4
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 4
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 4
- 108010073816 IgE Receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000009438 IgE Receptors Human genes 0.000 description 4
- 102100025323 Integrin alpha-1 Human genes 0.000 description 4
- 102100039904 Integrin alpha-D Human genes 0.000 description 4
- 102100022341 Integrin alpha-E Human genes 0.000 description 4
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 4
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 description 4
- 102100025390 Integrin beta-2 Human genes 0.000 description 4
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 4
- 102100021593 Interleukin-7 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 4
- 102100021458 Killer cell lectin-like receptor subfamily F member 1 Human genes 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 210000004322 M2 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 102100039373 Membrane cofactor protein Human genes 0.000 description 4
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 4
- 102100038082 Natural killer cell receptor 2B4 Human genes 0.000 description 4
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 4
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 4
- 102000014128 RANK Ligand Human genes 0.000 description 4
- 108010025832 RANK Ligand Proteins 0.000 description 4
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 4
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 4
- 102100025831 Scavenger receptor cysteine-rich type 1 protein M130 Human genes 0.000 description 4
- 102100027744 Semaphorin-4D Human genes 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010074687 Signaling Lymphocytic Activation Molecule Family Member 1 Proteins 0.000 description 4
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000031981 Thrombocytopenic Idiopathic Purpura Diseases 0.000 description 4
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 4
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 4
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 4
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 4
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 4
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 4
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 4
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 4
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 4
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 4
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 3
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 3
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 3
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 3
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 3
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 3
- 102100038083 Endosialin Human genes 0.000 description 3
- 102100039554 Galectin-8 Human genes 0.000 description 3
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 3
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 3
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 3
- 101000608769 Homo sapiens Galectin-8 Proteins 0.000 description 3
- 101001109503 Homo sapiens NKG2-C type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 3
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 3
- 101000633780 Homo sapiens Signaling lymphocytic activation molecule Proteins 0.000 description 3
- 101000831567 Homo sapiens Toll-like receptor 2 Proteins 0.000 description 3
- 101000669460 Homo sapiens Toll-like receptor 5 Proteins 0.000 description 3
- 101000669402 Homo sapiens Toll-like receptor 7 Proteins 0.000 description 3
- 101000800483 Homo sapiens Toll-like receptor 8 Proteins 0.000 description 3
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 3
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 3
- 102100033486 Lymphocyte antigen 75 Human genes 0.000 description 3
- 101710157884 Lymphocyte antigen 75 Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108010061593 Member 14 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000003735 Mesothelin Human genes 0.000 description 3
- 108090000015 Mesothelin Proteins 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 102100022683 NKG2-C type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 3
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 3
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 3
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- 108010060818 Toll-Like Receptor 9 Proteins 0.000 description 3
- 102000008235 Toll-Like Receptor 9 Human genes 0.000 description 3
- 102100039390 Toll-like receptor 7 Human genes 0.000 description 3
- 102100033110 Toll-like receptor 8 Human genes 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 3
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 3
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 3
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 3
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 3
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 3
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 3
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000008676 import Effects 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 3
- 208000023356 medullary thyroid gland carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 3
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 3
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 3
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N tacrolimus Natural products CO[C@H]1C[C@H](CC[C@@H]1O)C=C(C)[C@H]2OC(=O)[C@H]3CCCCN3C(=O)C(=O)[C@@]4(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]4C)OC)[C@@H](C[C@H](C)CC(=C[C@@H](CC=C)C(=O)C[C@H](O)[C@H]2C)C)OC QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N 0.000 description 3
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- LTHJXDSHSVNJKG-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-(2-methylprop-2-enoyloxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCOCCOCCOCCOC(=O)C(C)=C LTHJXDSHSVNJKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 102100037982 Alpha-1,6-mannosylglycoprotein 6-beta-N-acetylglucosaminyltransferase A Human genes 0.000 description 2
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 2
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 208000000659 Autoimmune lymphoproliferative syndrome Diseases 0.000 description 2
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 2
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 2
- 108010051118 Bone Marrow Stromal Antigen 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100037086 Bone marrow stromal antigen 2 Human genes 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102100026094 C-type lectin domain family 12 member A Human genes 0.000 description 2
- 101710188619 C-type lectin domain family 12 member A Proteins 0.000 description 2
- 108700012439 CA9 Proteins 0.000 description 2
- 108010056102 CD100 antigen Proteins 0.000 description 2
- 108010017009 CD11b Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100038077 CD226 antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010062802 CD66 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102100027217 CD82 antigen Human genes 0.000 description 2
- 101710139831 CD82 antigen Proteins 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100025933 Cancer-associated gene 1 protein Human genes 0.000 description 2
- 102100024423 Carbonic anhydrase 9 Human genes 0.000 description 2
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100024533 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108091007741 Chimeric antigen receptor T cells Proteins 0.000 description 2
- 102100038449 Claudin-6 Human genes 0.000 description 2
- 108090000229 Claudin-6 Proteins 0.000 description 2
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 2
- 102000012466 Cytochrome P450 1B1 Human genes 0.000 description 2
- 108050002014 Cytochrome P450 1B1 Proteins 0.000 description 2
- 102100027816 Cytotoxic and regulatory T-cell molecule Human genes 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 101100500729 Drosophila ananassae ico gene Proteins 0.000 description 2
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 2
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 2
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 description 2
- 101000585551 Equus caballus Pregnancy-associated glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 101001065501 Escherichia phage MS2 Lysis protein Proteins 0.000 description 2
- 208000001640 Fibromyalgia Diseases 0.000 description 2
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 2
- 102100036939 G-protein coupled receptor 20 Human genes 0.000 description 2
- 101710108873 G-protein coupled receptor 20 Proteins 0.000 description 2
- 102100022086 GRB2-related adapter protein 2 Human genes 0.000 description 2
- 101001036711 Gallus gallus Heat shock protein beta-1 Proteins 0.000 description 2
- 208000007465 Giant cell arteritis Diseases 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 2
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000010956 Glypican Human genes 0.000 description 2
- 108050001154 Glypican Proteins 0.000 description 2
- 108050007237 Glypican-3 Proteins 0.000 description 2
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 2
- 102100029360 Hematopoietic cell signal transducer Human genes 0.000 description 2
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 2
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 description 2
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 2
- 101000884298 Homo sapiens CD226 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000933825 Homo sapiens Cancer-associated gene 1 protein Proteins 0.000 description 2
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 2
- 101000884275 Homo sapiens Endosialin Proteins 0.000 description 2
- 101000900690 Homo sapiens GRB2-related adapter protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000990188 Homo sapiens Hematopoietic cell signal transducer Proteins 0.000 description 2
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 2
- 101000878602 Homo sapiens Immunoglobulin alpha Fc receptor Proteins 0.000 description 2
- 101001046683 Homo sapiens Integrin alpha-L Proteins 0.000 description 2
- 101001046668 Homo sapiens Integrin alpha-X Proteins 0.000 description 2
- 101001015037 Homo sapiens Integrin beta-7 Proteins 0.000 description 2
- 101001047640 Homo sapiens Linker for activation of T-cells family member 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 2
- 101001090688 Homo sapiens Lymphocyte cytosolic protein 2 Proteins 0.000 description 2
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 description 2
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 2
- 101001109501 Homo sapiens NKG2-D type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 101000589305 Homo sapiens Natural cytotoxicity triggering receptor 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000873418 Homo sapiens P-selectin glycoprotein ligand 1 Proteins 0.000 description 2
- 101001124867 Homo sapiens Peroxiredoxin-1 Proteins 0.000 description 2
- 101000692259 Homo sapiens Phosphoprotein associated with glycosphingolipid-enriched microdomains 1 Proteins 0.000 description 2
- 101001043564 Homo sapiens Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000702132 Homo sapiens Protein spinster homolog 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000633778 Homo sapiens SLAM family member 5 Proteins 0.000 description 2
- 101000824971 Homo sapiens Sperm surface protein Sp17 Proteins 0.000 description 2
- 101000596234 Homo sapiens T-cell surface protein tactile Proteins 0.000 description 2
- 101000809875 Homo sapiens TYRO protein tyrosine kinase-binding protein Proteins 0.000 description 2
- 101000655352 Homo sapiens Telomerase reverse transcriptase Proteins 0.000 description 2
- 101000795169 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C Proteins 0.000 description 2
- 101000648507 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Proteins 0.000 description 2
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 description 2
- 101000679857 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 3 Proteins 0.000 description 2
- 101001047681 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase Lck Proteins 0.000 description 2
- 101000814512 Homo sapiens X antigen family member 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 102100038005 Immunoglobulin alpha Fc receptor Human genes 0.000 description 2
- 102100029616 Immunoglobulin lambda-like polypeptide 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710107067 Immunoglobulin lambda-like polypeptide 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100039688 Insulin-like growth factor 1 receptor Human genes 0.000 description 2
- 102100022339 Integrin alpha-L Human genes 0.000 description 2
- 108010041100 Integrin alpha6 Proteins 0.000 description 2
- 108010030465 Integrin alpha6beta1 Proteins 0.000 description 2
- 102100033016 Integrin beta-7 Human genes 0.000 description 2
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 2
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 102100024032 Linker for activation of T-cells family member 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 102100034709 Lymphocyte cytosolic protein 2 Human genes 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 2
- 208000037196 Medullary thyroid carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 2
- 101100236305 Mus musculus Ly9 gene Proteins 0.000 description 2
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 2
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 2
- 102100022680 NKG2-D type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 2
- 108010004217 Natural Cytotoxicity Triggering Receptor 1 Proteins 0.000 description 2
- 108010004222 Natural Cytotoxicity Triggering Receptor 3 Proteins 0.000 description 2
- 102100032870 Natural cytotoxicity triggering receptor 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100032851 Natural cytotoxicity triggering receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100032852 Natural cytotoxicity triggering receptor 3 Human genes 0.000 description 2
- 101710141230 Natural killer cell receptor 2B4 Proteins 0.000 description 2
- 108010069196 Neural Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 2
- 102100023616 Neural cell adhesion molecule L1-like protein Human genes 0.000 description 2
- 108010023356 Nonmuscle Myosin Type IIA Proteins 0.000 description 2
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000012547 Olfactory receptors Human genes 0.000 description 2
- 108050002069 Olfactory receptors Proteins 0.000 description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 102100034925 P-selectin glycoprotein ligand 1 Human genes 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 208000031845 Pernicious anaemia Diseases 0.000 description 2
- 102100026066 Phosphoprotein associated with glycosphingolipid-enriched microdomains 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100026181 Placenta-specific protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 108050005093 Placenta-specific protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100026547 Platelet-derived growth factor receptor beta Human genes 0.000 description 2
- 101710164680 Platelet-derived growth factor receptor beta Proteins 0.000 description 2
- 101710124239 Poly(A) polymerase Proteins 0.000 description 2
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100021923 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 101710120463 Prostate stem cell antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100036735 Prostate stem cell antigen Human genes 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102100035703 Prostatic acid phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 102100038098 Protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 5 Human genes 0.000 description 2
- 108010045108 Receptor for Advanced Glycation End Products Proteins 0.000 description 2
- 102000005622 Receptor for Advanced Glycation End Products Human genes 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- 102100029216 SLAM family member 5 Human genes 0.000 description 2
- 108010011005 STAT6 Transcription Factor Proteins 0.000 description 2
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 102100023980 Signal transducer and activator of transcription 6 Human genes 0.000 description 2
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 101800001271 Surface protein Proteins 0.000 description 2
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 description 2
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 102100035268 T-cell surface protein tactile Human genes 0.000 description 2
- 102100038717 TYRO protein tyrosine kinase-binding protein Human genes 0.000 description 2
- 102100036494 Testisin Human genes 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 108090000253 Thyrotropin Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102100029337 Thyrotropin receptor Human genes 0.000 description 2
- 108010060804 Toll-Like Receptor 4 Proteins 0.000 description 2
- 108010060826 Toll-Like Receptor 6 Proteins 0.000 description 2
- 108010060888 Toll-like receptor 2 Proteins 0.000 description 2
- 108010060812 Toll-like receptor 5 Proteins 0.000 description 2
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 2
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 2
- 102100029690 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C Human genes 0.000 description 2
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 description 2
- 102100033733 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Human genes 0.000 description 2
- 101710187830 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Proteins 0.000 description 2
- 102100022156 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 3 Human genes 0.000 description 2
- 102100024036 Tyrosine-protein kinase Lck Human genes 0.000 description 2
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 108010053099 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Proteins 0.000 description 2
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 2
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 2
- 102100022748 Wilms tumor protein Human genes 0.000 description 2
- 101710127857 Wilms tumor protein Proteins 0.000 description 2
- 102100039490 X antigen family member 1 Human genes 0.000 description 2
- 101001038499 Yarrowia lipolytica (strain CLIB 122 / E 150) Lysine acetyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 208000004631 alopecia areata Diseases 0.000 description 2
- 108010034034 alpha-1,6-mannosylglycoprotein beta 1,6-N-acetylglucosaminyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 2
- 208000027625 autoimmune inner ear disease Diseases 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940112129 campath Drugs 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013626 chemical specie Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 108010072917 class-I restricted T cell-associated molecule Proteins 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 2
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- RNPXCFINMKSQPQ-UHFFFAOYSA-N dicetyl hydrogen phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOP(O)(=O)OCCCCCCCCCCCCCCCC RNPXCFINMKSQPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010051081 dopachrome isomerase Proteins 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 2
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 2
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 2
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 2
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 238000002697 interventional radiology Methods 0.000 description 2
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 101150103001 mEFG1 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N micophenolic acid Natural products OC1=C(CC=C(C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 208000029766 myalgic encephalomeyelitis/chronic fatigue syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 2
- HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N mycophenolic acid Chemical compound OC1=C(C\C=C(/C)CCC(O)=O)C(OC)=C(C)C2=C1C(=O)OC2 HPNSFSBZBAHARI-RUDMXATFSA-N 0.000 description 2
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 108010043671 prostatic acid phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 2
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 201000003068 rheumatic fever Diseases 0.000 description 2
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 2
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 206010042863 synovial sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 206010043207 temporal arteritis Diseases 0.000 description 2
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 208000013818 thyroid gland medullary carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108010058721 transglutaminase 5 Proteins 0.000 description 2
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 2
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 2
- 230000005909 tumor killing Effects 0.000 description 2
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 2
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MNULEGDCPYONBU-WMBHJXFZSA-N (1r,4s,5e,5'r,6'r,7e,10s,11r,12s,14r,15s,16s,18r,19s,20r,21e,25s,26r,27s,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trio Polymers O([C@@H]1CC[C@@H](/C=C/C=C/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H]([C@H]2C)[C@H]1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](C[C@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-WMBHJXFZSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-DJRUDOHVSA-N (1s,4r,5z,5'r,6'r,7e,10s,11r,12s,14r,15s,18r,19r,20s,21e,26r,27s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers O([C@H]1CC[C@H](\C=C/C=C/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)C(C)C(=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)/C=C/C(=O)OC([C@H]2C)C1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](CC(C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-DJRUDOHVSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-YNZHUHFTSA-N (4Z,18Z,20Z)-22-ethyl-7,11,14,15-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethylspiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2'-oxane]-3,9,13-trione Polymers CC1C(C2C)OC(=O)\C=C/C(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)(O)C(O)C(C)C\C=C/C=C\C(CC)CCC2OC21CCC(C)C(CC(C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-YNZHUHFTSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-VVXVDZGXSA-N (5e,5'r,7e,10s,11r,12s,14s,15r,16r,18r,19s,20r,21e,26r,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers C([C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)OC([C@H]1C)[C@H]2C)\C=C\C=C\C(CC)CCC2OC21CC[C@@H](C)C(C[C@H](C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-VVXVDZGXSA-N 0.000 description 1
- WEVYNIUIFUYDGI-UHFFFAOYSA-N 3-[6-[4-(trifluoromethoxy)anilino]-4-pyrimidinyl]benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC(C=2N=CN=C(NC=3C=CC(OC(F)(F)F)=CC=3)C=2)=C1 WEVYNIUIFUYDGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-UHFFFAOYSA-N 4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers CC1C(C2C)OC(=O)C=CC(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)(O)C(O)C(C)CC=CC=CC(CC)CCC2OC21CCC(C)C(CC(C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- 108010013238 70-kDa Ribosomal Protein S6 Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000017918 ADRB3 Human genes 0.000 description 1
- 108060003355 ADRB3 Proteins 0.000 description 1
- 230000002407 ATP formation Effects 0.000 description 1
- 108020005176 AU Rich Elements Proteins 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 102100022907 Acrosin-binding protein Human genes 0.000 description 1
- 101710107749 Acrosin-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026402 Adhesion G protein-coupled receptor E2 Human genes 0.000 description 1
- 102100026423 Adhesion G protein-coupled receptor E5 Human genes 0.000 description 1
- 208000008190 Agammaglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 102100035248 Alpha-(1,3)-fucosyltransferase 4 Human genes 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 102100032187 Androgen receptor Human genes 0.000 description 1
- 102000009840 Angiopoietins Human genes 0.000 description 1
- 108010009906 Angiopoietins Proteins 0.000 description 1
- 102100023003 Ankyrin repeat domain-containing protein 30A Human genes 0.000 description 1
- 101710145634 Antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000003343 Antiphospholipid Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 101710192393 Attachment protein G3P Proteins 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000714230 Avian leukemia virus Species 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102100025218 B-cell differentiation antigen CD72 Human genes 0.000 description 1
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 108091007065 BIRCs Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 206010004146 Basal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000009137 Behcet syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102100034159 Beta-3 adrenergic receptor Human genes 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006143 Brain stem glioma Diseases 0.000 description 1
- 102100023458 C-type lectin-like domain family 1 Human genes 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 102000049320 CD36 Human genes 0.000 description 1
- 108010045374 CD36 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 1
- 108010058905 CD44v6 antigen Proteins 0.000 description 1
- 102100025221 CD70 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100037904 CD9 antigen Human genes 0.000 description 1
- 101150081060 CR4 gene Proteins 0.000 description 1
- 201000002829 CREST Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 101100174180 Caenorhabditis elegans fos-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100518995 Caenorhabditis elegans pax-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004631 Calcineurin Human genes 0.000 description 1
- 108010042955 Calcineurin Proteins 0.000 description 1
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100039510 Cancer/testis antigen 2 Human genes 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 101710169873 Capsid protein G8P Proteins 0.000 description 1
- BMZRVOVNUMQTIN-UHFFFAOYSA-N Carbonyl Cyanide para-Trifluoromethoxyphenylhydrazone Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(NN=C(C#N)C#N)C=C1 BMZRVOVNUMQTIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010051152 Carboxylesterase Proteins 0.000 description 1
- 102000013392 Carboxylesterase Human genes 0.000 description 1
- 208000031229 Cardiomyopathies Diseases 0.000 description 1
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 1
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 1
- 101710181340 Chaperone protein DnaK2 Proteins 0.000 description 1
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 208000005243 Chondrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000006332 Choriocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000030939 Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy Diseases 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- VWFCHDSQECPREK-LURJTMIESA-N Cidofovir Chemical compound NC=1C=CN(C[C@@H](CO)OCP(O)(O)=O)C(=O)N=1 VWFCHDSQECPREK-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091062157 Cis-regulatory element Proteins 0.000 description 1
- 102100035167 Coiled-coil domain-containing protein 54 Human genes 0.000 description 1
- 208000011038 Cold agglutinin disease Diseases 0.000 description 1
- 206010009868 Cold type haemolytic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- 208000019707 Cryoglobulinemic vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 108010060385 Cyclin B1 Proteins 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010037897 DC-specific ICAM-3 grabbing nonintegrin Proteins 0.000 description 1
- 101100481408 Danio rerio tie2 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 201000003066 Diffuse Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- GZDFHIJNHHMENY-UHFFFAOYSA-N Dimethyl dicarbonate Chemical compound COC(=O)OC(=O)OC GZDFHIJNHHMENY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010013142 Disinhibition Diseases 0.000 description 1
- 208000010975 Dystrophic epidermolysis bullosa Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100031334 Elongation factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710144543 Endosialin Proteins 0.000 description 1
- 206010014967 Ependymoma Diseases 0.000 description 1
- 208000031637 Erythroblastic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000036566 Erythroleukaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102100031507 Fc receptor-like protein 5 Human genes 0.000 description 1
- 101150032879 Fcrl5 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 1
- 108010084795 Fusion Oncogene Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000005668 Fusion Oncogene Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100021197 G-protein coupled receptor family C group 5 member D Human genes 0.000 description 1
- 102100032340 G2/mitotic-specific cyclin-B1 Human genes 0.000 description 1
- 102000027583 GPCRs class C Human genes 0.000 description 1
- 108091008882 GPCRs class C Proteins 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 208000000527 Germinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 201000010915 Glioblastoma multiforme Diseases 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 206010072579 Granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 208000035895 Guillain-Barré syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102100028967 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain G Human genes 0.000 description 1
- 108010024164 HLA-G Antigens Proteins 0.000 description 1
- 101000691214 Haloarcula marismortui (strain ATCC 43049 / DSM 3752 / JCM 8966 / VKM B-1809) 50S ribosomal protein L44e Proteins 0.000 description 1
- 208000001204 Hashimoto Disease Diseases 0.000 description 1
- 101710178419 Heat shock protein 70 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 102100022132 High affinity immunoglobulin epsilon receptor subunit gamma Human genes 0.000 description 1
- 108091010847 High affinity immunoglobulin epsilon receptor subunit gamma Proteins 0.000 description 1
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 1
- 101100118545 Holotrichia diomphalia EGF-like gene Proteins 0.000 description 1
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000718211 Homo sapiens Adhesion G protein-coupled receptor E2 Proteins 0.000 description 1
- 101000718243 Homo sapiens Adhesion G protein-coupled receptor E5 Proteins 0.000 description 1
- 101001022185 Homo sapiens Alpha-(1,3)-fucosyltransferase 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000757191 Homo sapiens Ankyrin repeat domain-containing protein 30A Proteins 0.000 description 1
- 101000934359 Homo sapiens B-cell differentiation antigen CD72 Proteins 0.000 description 1
- 101000906643 Homo sapiens C-type lectin-like domain family 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000884279 Homo sapiens CD276 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000934356 Homo sapiens CD70 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000738354 Homo sapiens CD9 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000889345 Homo sapiens Cancer/testis antigen 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000737052 Homo sapiens Coiled-coil domain-containing protein 54 Proteins 0.000 description 1
- 101001040713 Homo sapiens G-protein coupled receptor family C group 5 member D Proteins 0.000 description 1
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 1
- 101001019455 Homo sapiens ICOS ligand Proteins 0.000 description 1
- 101000777628 Homo sapiens Leukocyte antigen CD37 Proteins 0.000 description 1
- 101000984189 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000984186 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101001065550 Homo sapiens Lymphocyte antigen 6K Proteins 0.000 description 1
- 101000991061 Homo sapiens MHC class I polypeptide-related sequence B Proteins 0.000 description 1
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000896414 Homo sapiens Nuclear nucleic acid-binding protein C1D Proteins 0.000 description 1
- 101001117312 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001136981 Homo sapiens Proteasome subunit beta type-9 Proteins 0.000 description 1
- 101000932478 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Proteins 0.000 description 1
- 101001094545 Homo sapiens Retrotransposon-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 description 1
- 101000651021 Homo sapiens Splicing factor, arginine/serine-rich 19 Proteins 0.000 description 1
- 101000934341 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD5 Proteins 0.000 description 1
- 101100207070 Homo sapiens TNFSF8 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000714168 Homo sapiens Testisin Proteins 0.000 description 1
- 101000763537 Homo sapiens Toll-like receptor 10 Proteins 0.000 description 1
- 101000725972 Homo sapiens Transcriptional repressor CTCF Proteins 0.000 description 1
- 101000638154 Homo sapiens Transmembrane protease serine 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000597785 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6B Proteins 0.000 description 1
- 101000808105 Homo sapiens Uroplakin-2 Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 206010020983 Hypogammaglobulinaemia Diseases 0.000 description 1
- 102100034980 ICOS ligand Human genes 0.000 description 1
- 108010031794 IGF Type 1 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000010159 IgA glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 206010021263 IgA nephropathy Diseases 0.000 description 1
- 108010042653 IgA receptor Proteins 0.000 description 1
- 208000001718 Immediate Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000055031 Inhibitor of Apoptosis Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 101710184277 Insulin-like growth factor 1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 1
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000007482 Interleukin-13 Receptor alpha2 Subunit Human genes 0.000 description 1
- 108010085418 Interleukin-13 Receptor alpha2 Subunit Proteins 0.000 description 1
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 108020003285 Isocitrate lyase Proteins 0.000 description 1
- 208000003456 Juvenile Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000012528 Juvenile dermatomyositis Diseases 0.000 description 1
- 206010059176 Juvenile idiopathic arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000010824 Kaplan-Meier survival analysis Methods 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N L-N-acetyl-Cysteine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 208000018142 Leiomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010024305 Leukaemia monocytic Diseases 0.000 description 1
- 102100031586 Leukocyte antigen CD37 Human genes 0.000 description 1
- 102100025583 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100025578 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 208000004852 Lung Injury Diseases 0.000 description 1
- 102100032129 Lymphocyte antigen 6K Human genes 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000016200 MART-1 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100030301 MHC class I polypeptide-related sequence A Human genes 0.000 description 1
- 102100030300 MHC class I polypeptide-related sequence B Human genes 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100028123 Macrophage colony-stimulating factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 101710156564 Major tail protein Gp23 Proteins 0.000 description 1
- 206010064281 Malignant atrophic papulosis Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 208000007054 Medullary Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 description 1
- 102000008840 Melanoma-associated antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 108050000731 Melanoma-associated antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000027530 Meniere disease Diseases 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 206010059282 Metastases to central nervous system Diseases 0.000 description 1
- 206010049567 Miller Fisher syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000003250 Mixed connective tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 101100518997 Mus musculus Pax3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100351020 Mus musculus Pax5 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100481410 Mus musculus Tek gene Proteins 0.000 description 1
- 101100481579 Mus musculus Tlr11 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100481580 Mus musculus Tlr12 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100207071 Mus musculus Tnfsf8 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 1
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 1
- 206010028665 Myxoedema Diseases 0.000 description 1
- 102100024964 Neural cell adhesion molecule L1 Human genes 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- KUIFHYPNNRVEKZ-VIJRYAKMSA-N O-(N-acetyl-alpha-D-galactosaminyl)-L-threonine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1NC(C)=O KUIFHYPNNRVEKZ-VIJRYAKMSA-N 0.000 description 1
- 102000004473 OX40 Ligand Human genes 0.000 description 1
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 201000010133 Oligodendroglioma Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 240000007019 Oxalis corniculata Species 0.000 description 1
- 102100025386 Oxidized low-density lipoprotein receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710199789 Oxidized low-density lipoprotein receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010033701 Papillary thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 206010034038 Parotitis Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 1
- 108010077519 Peptide Elongation Factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010089430 Phosphoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007982 Phosphoproteins Human genes 0.000 description 1
- 208000007641 Pinealoma Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 206010065159 Polychondritis Diseases 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 208000007048 Polymyalgia Rheumatica Diseases 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100035764 Proteasome subunit beta type-9 Human genes 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000015690 Proto-Oncogene Proteins c-bcr Human genes 0.000 description 1
- 108010024221 Proto-Oncogene Proteins c-bcr Proteins 0.000 description 1
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 description 1
- 108010065868 RNA polymerase SP6 Proteins 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 208000012322 Raynaud phenomenon Diseases 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102100020718 Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Human genes 0.000 description 1
- 208000033464 Reiter syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 101150036449 SIRPA gene Proteins 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 201000010208 Seminoma Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 102100038081 Signal transducer CD24 Human genes 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 102100022441 Sperm surface protein Sp17 Human genes 0.000 description 1
- 102100027779 Splicing factor, arginine/serine-rich 19 Human genes 0.000 description 1
- 208000006045 Spondylarthropathies Diseases 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 102100025244 T-cell surface glycoprotein CD5 Human genes 0.000 description 1
- 238000010459 TALEN Methods 0.000 description 1
- 208000001106 Takayasu Arteritis Diseases 0.000 description 1
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 description 1
- 108050003829 Testisin Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 102100027009 Toll-like receptor 10 Human genes 0.000 description 1
- 108010043645 Transcription Activator-Like Effector Nucleases Proteins 0.000 description 1
- 102100027671 Transcriptional repressor CTCF Human genes 0.000 description 1
- 102100021393 Transcriptional repressor CTCFL Human genes 0.000 description 1
- 102100031989 Transmembrane protease serine 2 Human genes 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 206010069363 Traumatic lung injury Diseases 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 102100032100 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 8 Human genes 0.000 description 1
- 102100032101 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Human genes 0.000 description 1
- 102100035284 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6B Human genes 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 206010045240 Type I hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108010064978 Type II Site-Specific Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 102100038851 Uroplakin-2 Human genes 0.000 description 1
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 1
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 1
- 208000014070 Vestibular schwannoma Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 108010066342 Virus Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000018265 Virus Receptors Human genes 0.000 description 1
- 208000033559 Waldenström macroglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 1
- 210000001766 X chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 101100351021 Xenopus laevis pax5 gene Proteins 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- 238000010317 ablation therapy Methods 0.000 description 1
- 229960004308 acetylcysteine Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 208000004064 acoustic neuroma Diseases 0.000 description 1
- 208000017733 acquired polycythemia vera Diseases 0.000 description 1
- 208000021841 acute erythroid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 150000003838 adenosines Chemical class 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- 150000001338 aliphatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 108010080146 androgen receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011224 anti-cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000000823 artificial membrane Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 208000010216 atopic IgE responsiveness Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 208000036923 autoimmune primary adrenal insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 108010028263 bacteriophage T3 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 102000012740 beta Adrenergic Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010079452 beta Adrenergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- 108040005346 beta3-adrenergic receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003012 bilayer membrane Substances 0.000 description 1
- 201000007180 bile duct carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 108091006004 biotinylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 201000001531 bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000003969 blast cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000000053 blastoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 210000003103 bodily secretion Anatomy 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 208000003362 bronchogenic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000009172 cell transfer therapy Methods 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 208000025997 central nervous system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 208000011654 childhood malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000012191 childhood neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000010415 childhood type dermatomyositis Diseases 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 201000005795 chronic inflammatory demyelinating polyneuritis Diseases 0.000 description 1
- 208000024207 chronic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229960000724 cidofovir Drugs 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 238000001246 colloidal dispersion Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 201000003278 cryoglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000003436 cytoskeletal effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 229940093541 dicetylphosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- BPHQZTVXXXJVHI-UHFFFAOYSA-N dimyristoyl phosphatidylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC BPHQZTVXXXJVHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 201000008184 embryoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 108010087914 epidermal growth factor receptor VIII Proteins 0.000 description 1
- 208000004298 epidermolysis bullosa dystrophica Diseases 0.000 description 1
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 229960000390 fludarabine Drugs 0.000 description 1
- GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N fludarabine phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC(F)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O GIUYCYHIANZCFB-FJFJXFQQSA-N 0.000 description 1
- 238000012632 fluorescent imaging Methods 0.000 description 1
- 229940014144 folate Drugs 0.000 description 1
- 102000006815 folate receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020005243 folate receptor Proteins 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 125000002446 fucosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O1)C)* 0.000 description 1
- ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N furosemide Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC(C(O)=O)=C1NCC1=CC=CO1 ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005021 gait Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 201000003115 germ cell cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 201000009277 hairy cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 208000025750 heavy chain disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000002222 hemangioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 208000013210 hematogenous Diseases 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009033 hematopoietic malignancy Effects 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000046157 human CSF2 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000012606 in vitro cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229940074383 interleukin-11 Drugs 0.000 description 1
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000009191 jumping Effects 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 201000002215 juvenile rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 206010024627 liposarcoma Diseases 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 231100000515 lung injury Toxicity 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 208000019420 lymphoid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 108091005446 macrophage receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 239000010445 mica Substances 0.000 description 1
- 229910052618 mica group Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 201000004058 mixed glioma Diseases 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 201000006894 monocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 229940014456 mycophenolate Drugs 0.000 description 1
- 229960000951 mycophenolic acid Drugs 0.000 description 1
- 208000003786 myxedema Diseases 0.000 description 1
- 208000001611 myxosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 229960005027 natalizumab Drugs 0.000 description 1
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 208000025189 neoplasm of testis Diseases 0.000 description 1
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 229930191479 oligomycin Natural products 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-AWJDAWNUSA-N oligomycin A Polymers O([C@H]1CC[C@H](/C=C/C=C/C[C@@H](C)[C@H](O)[C@@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)/C=C/C(=O)O[C@@H]([C@@H]2C)[C@@H]1C)CC)[C@@]12CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-AWJDAWNUSA-N 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000010627 oxidative phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 101710135378 pH 6 antigen Proteins 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000004019 papillary adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000010198 papillary carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 1
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 208000028591 pheochromocytoma Diseases 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 208000024724 pineal body neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000004123 pineal gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010058237 plasma protein fraction Proteins 0.000 description 1
- 229940002993 plasmanate Drugs 0.000 description 1
- 201000006292 polyarteritis nodosa Diseases 0.000 description 1
- 208000037244 polycythemia vera Diseases 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 208000016800 primary central nervous system lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 208000002574 reactive arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 229960003452 romidepsin Drugs 0.000 description 1
- OHRURASPPZQGQM-GCCNXGTGSA-N romidepsin Chemical compound O1C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)[C@H]2CSSCC\C=C\[C@@H]1CC(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)N2 OHRURASPPZQGQM-GCCNXGTGSA-N 0.000 description 1
- 229940080817 rotenone Drugs 0.000 description 1
- JUVIOZPCNVVQFO-UHFFFAOYSA-N rotenone Natural products O1C2=C3CC(C(C)=C)OC3=CC=C2C(=O)C2C1COC1=C2C=C(OC)C(OC)=C1 JUVIOZPCNVVQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 1
- 201000008407 sebaceous adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 125000005630 sialyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- 201000005671 spondyloarthropathy Diseases 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010088201 squamous cell carcinoma-related antigen Proteins 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 201000010965 sweat gland carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 208000030045 thyroid gland papillary carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010043778 thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 238000002287 time-lapse microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000024664 tolerance induction Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000011277 treatment modality Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000013024 troubleshooting Methods 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 210000004981 tumor-associated macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 1
- 230000004222 uncontrolled growth Effects 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 208000010570 urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 238000010865 video microscopy Methods 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70517—CD8
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/15—Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001103—Receptors for growth factors
- A61K39/001106—Her-2/neu/ErbB2, Her-3/ErbB3 or Her 4/ErbB4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001111—Immunoglobulin superfamily
- A61K39/001112—CD19 or B4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001166—Adhesion molecules, e.g. NRCAM, EpCAM or cadherins
- A61K39/001168—Mesothelin [MSLN]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4614—Monocytes; Macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464403—Receptors for growth factors
- A61K39/464406—Her-2/neu/ErbB2, Her-3/ErbB3 or Her 4/ ErbB4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
- A61K39/464412—CD19 or B4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464466—Adhesion molecules, e.g. NRCAM, EpCAM or cadherins
- A61K39/464468—Mesothelin [MSLN]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70535—Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64 (CD2314/705F)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/7056—Lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0645—Macrophages, e.g. Kuepfer cells in the liver; Monocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
- A61K2039/892—Reproductive system [uterus, ovaries, cervix, testes]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
a presente invenção inclui métodos e composições para tratar câncer, seja um tumor sólido ou uma malignância hematológica. expressando-se um receptor de antígeno quimérico em um monócito, macrófago ou célula dendrítica, a célula modificada é recrutada ao microambiente tumoral onde atua como um efetor imune poderoso infiltrando-se o tumor e exterminando as células alvo. um aspecto inclui uma célula modificada e composições farmacêuticas que compreendem a célula modificada para terapia celular adotiva e tratamento de uma doença ou afecção associada à imunossupresão.
Description
[001]O presente pedido tem prioridade concedida disposta no Título 35 do Código dos Estados Unidos § 119(e) ao Pedido de Patente Provisório no U.S. 62/197.675, depositado em 28 de julho de 2015, estando incorporado ao presente documento em sua totalidade a título de referência.
[002]A imunoterapia contra câncer demonstrou resultados clínicos animadores no estabelecimento de diversos tumores sólidos e malignâncias hematológicas. O sistema imune endógeno é tipicamente não reativo a células malignas, ou pode ser ativamente imunossupressor em relação à reação do corpo à presença de células malignas. Uma forma de aprimorar o tratamento de tumores consiste em forçar o reconhecimento tumoral pelo sistema imune através de engenharia genética de leucócitos. As células T podem ser modificadas por engenharia genética para expressar um imunorreceptor sintético que compreende um anticorpo direcionado extracelular e um domínio de sinalização intracelular, conhecido como receptor de antígeno quimérico (CAR). As células T que expressam um CAR voltado contra CD19 foram mostradas tendo uma eficácia autileucêmica significativa, onde a remissão completa foi alcançada em 90% de pacientes com leucemia linfoblástica aguda tratados (Maude, et al., NEJM, vol. 371:1507-17, 2014). Esses resultados são acompanhados por proliferação de células T robustas e infiltração de células T claramente documentada em sítios tumorais em pacientes com leucemia tratados dessa forma. Apesar das altas taxas de resposta demonstradas em malignâncias hematopoiéticas, a eficácia de células T CAR em tumores sólidos (bem como em determinados tumores linfoides) pode ser limitada. Possíveis explicações para isso incluem a capacidade potencialmente prejudicada de células T infiltrarem em tumores sólidos, tráfego fraco, microambiente e tumor imunossupressor, e expressão de alguns antígenos específicos tumorais em células tumorais sólidas.
[003]Há uma necessidade na técnica por composições e métodos mais eficazes que tratam cânceres aperfeiçoando-se a especificidade por células tumorais e aperfeiçoando-se a infiltração em sítios tumorais tanto em tumores sólidos como em malignâncias hematológicas por essas composições. A presente invenção satisfaz essa necessidade.
[004]Conforme revelado no persente documento, a presente invenção inclui composições e métodos de utilização de uma célula fagocítica com atividade efetora direcionada.
[005]Em um aspecto, a invenção inclui uma célula modificada que compreende um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende um domínio de ligação ao antígeno, um domínio transmembranar e um domínio intracelular de uma molécula estimulatória e/ou co-estimulatória, e em que a célula é um monócito, macrófago ou célula dendrítica que possui atividade efetora direcionada.
[006]Em outro aspecto, a invenção inclui uma célula modificada que compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que a sequência de ácido nucleico compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica um domínio de ligação ao antígeno, uma sequência de ácido nucleico que codifica um domínio transmembranar e uma sequência de ácido nucleico que codifica um domínio intracelular de uma molécula estimulatória e/ou co-estimulatória, e em que a célula é um monócito, macrófago ou célula dendrítica que expressa o CAR e possui atividade efetora direcionada.
[007]Em ainda outro aspecto, a invenção inclui um método para modificar uma célula que compreende introduzir um receptor de antígeno quimérico (CAR) no monócito, macrófago ou célula dendrítica, em que o CAR compreende um domínio de ligação ao antígeno, um domínio transmembranar e um domínio intracelular de uma molécula estimulatória e/ou coestimulatória, e em que a célula é um monócito, macrófago ou célula dendrítica que expressa o CAR e possui atividade efetora direcionada.
[008]Em ainda outro aspecto, a invenção inclui uma composição que compreende a célula modificada de acordo com o método descrito no presente documento.
[009]Em várias modalidades dos aspectos anteriores ou qualquer outro aspecto da invenção delineada no presente documento, o domínio de ligação ao antígeno do CAR compreende um anticorpo selecionado a partir do grupo que consiste em um anticorpo monoclonal, um anticorpo policlonal, um anticorpo sintético, anticorpo humano, anticorpo humanizado, anticorpo de domínio simples, fragmento variável de cadeia simples e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos. Em outra modalidade, o domínio de ligação ao antígeno do CAR é selecionado a partir do grupo que consiste em um anticorpo anti-CD19, um anticorpo anti-HER2 e um fragmento dos mesmos. Em ainda outra modalidade, o domínio intracelular do CAR compreende domínios de sinalização duplos.
[010]Em outra modalidade, a atividade efetora direcionada é voltada contra um antígeno em uma célula alvo que se liga especificamente ao domínio de ligação ao antígeno do CAR. Em ainda outra modalidade, a atividade efetora direcionada é selecionada a partir do grupo que consiste em fagocitose, citotoxicidade celular direcionada, apresentação de antígeno e secreção de citocina.
[011]Em outra modalidade, a composição compreende, ainda, um agente selecionado a partir do grupo que consiste em um ácido nucleico, um antibiótico, um agente anti-inflamatório, um anticorpo ou fragmentos de anticorpo do mesmo, um fator de crescimento, uma citocina, uma enzima, uma proteína, um peptídeo, uma proteína de fusão, uma molécula sintética, uma molécula orgânica, um carboidrato, ou similares, um lipídeo, um hormônio, um microssomo, um derivado ou variação dos mesmos, e qualquer combinação dos mesmos.
[012]Em outra modalidade, a célula modificada tem pelo menos um marcador M1 suprarregulado (upregulated) e pelo menos um marcador M2 infrarregulado (downregulated). Em ainda outra modalidade, a célula modificada é geneticamente modificada para expressar o CAR. Em ainda outra modalidade, a atividade efetora direcionada é aprimorada pela inibição da atividade de CD47 ou SIRPa.
[013]Em outra modalidade, introduzir o CAR na célula compreende introduzir uma sequência de ácido nucleico que codifica o CAR, tal como eletroporar um mRNA que codifica o CAR ou transduzir a célula com um vetor viral que compreende a sequência de ácido nucleico que codifica o CAR.
[014]Em outra modalidade, a atividade efetora direcionada é voltada contra um antígeno em uma célula alvo que se liga especificamente ao domínio de ligação ao antígeno do CAR. Em outra modalidade, a atividade efetora direcionada é selecionada a partir do grupo que consiste em fagocitose, citotoxicidade celular direcionada, apresentação de antígeno e secreção de citocina.
[015]Em outra modalidade, o método descrito no presente documento compreende, ainda, inibir a atividade de CD47 ou SIRPα para aprimorar a atividade efetora direcionada, tal como colocando-se a célula em contato com um anticorpo anti-CD47 bloqueador ou um anticorpo anti-SIRPα bloqueador. Em ainda outra modalidade, o método compreende, ainda, modificar a célula para entregar um agente a um alvo, em que o agente é selecionado a partir do grupo que consiste em um ácido nucleico, um antibiótico, um agente anti-inflamatório, um anticorpo ou fragmentos de anticorpo do mesmo, um fator de crescimento, uma citocina, uma enzima, uma proteína, um peptídeo, uma proteína de fusão, uma molécula sintética, uma molécula orgânica, um carboidrato ou similares, um lipídeo, um hormônio, um microssomo, um derivado ou uma variação dos mesmos, e qualquer combinação dos mesmos.
[016]Em um aspecto, a invenção inclui uma composição farmacêutica que compreende a célula descrita no presente documento.
[017]Em outro aspecto, a invenção inclui um uso da célula modificada descrita no presente documento na fabricação de um medicamento destinado ao tratamento de uma resposta imune em um indivíduo em necessidade do mesmo. Em ainda outro aspecto, a invenção inclui um uso da célula modificada descrita no presente documento na fabricação de um medicamento destinado ao tratamento de um tumor ou câncer em um indivíduo em necessidade do mesmo.
[018]Em ainda outro aspecto, a invenção inclui um método para tratar uma doença ou afecção associadas a um tumor ou câncer em um indivíduo que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica que compreende a célula modificada descrita no presente documento.
[019]Em ainda outro aspecto, a invenção inclui um método para tratar um tumor em um indivíduo, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica que compreende a célula modificada descrita no presente documento.
[020]Em outro aspecto, a invenção inclui um método para estimular uma resposta imune a uma célula tumoral alvo ou tecido tumoral em um indivíduo que compreende administrar a um indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica que compreende a célula modificada descrita no presente documento.
[021]A descrição detalhada a seguir das modalidades preferenciais da invenção será mais bem entendida quando lida em conjunto com os desenhos anexos. Para o propósito de ilustrar a invenção, mostram-se nos desenhos modalidades que sejam presentemente preferenciais. No entanto, deve-se compreender que a invenção não se limita às disposições e instrumentalidades precisas das modalidades mostradas nos desenhos.
[022]A Figura 1A é uma série de imagens que mostra o diagrama conceitual de um receptor de antígeno quimérico (CAR) compreendido de um gene/produto de gene que compreende um domínio extracelular com função de direcionamento, um domínio de dobradiça, um domínio transmembranar, um domínio(s) de sinalização intracelular, e/ou um 2A (P2A, T2A) para coexpressão estequiométrica de um produto de gene adicional que pode não ser secretado, incluindo qualquer gene/transcrição/proteína, incluindo, porém sem limitação, uma citocina, anticorpo monoclonal, fragmento de anticorpo, fragmento variável de cadeia simples, enzima, receptor adicional, receptor negativo dominante, antígeno(s) associado(s) a tumor, e qualquer combinação dos mesmos. Além disso, o construto de CAR pode incluir a coentrega de material de edição de gene CRISPR/Cas9, ou pode ser introduzido no contexto de uma célula pré-editada de CRISPR/Cas9.
[023]A Figura 1B é uma série de imagens que mostra exemplos específicos de construtos de CAR, incluindo CARMA-Z, CARMA-y, e CARMA-Dectina, que contêm um scFv específico de antígeno, dobradiça CD8, transmembrana CD8, e um CD3 Z, subunidade FcεRI c y, ou o domínio intracelular de Dectina-1, respectivamente.
[024]A Figura 2A é um gráfico que mostra CAR19z expresso sobre a superfície de células mieloides após a transdução lentiviral. O lentivírus CAR19z foi titulado em três diluidores e usado para transduzir 1e5/0,1ml de células mRFP + THP1. mRFP é um gene repórter (proteína vermelha fluorescente) que foi expresso por transdução lentiviral da linhagem celular mieloide THP1. Essas células podem ser induzidas para diferenciação de macrófagos mediante exposição a PMA químico. As células THP1 foram coletadas 24 horas após a transdução e coradas para expressão de superfície de CAR com proteína L biotinilada seguido de estreptavidina-APC.
[025]A Figura 2B é um gráfico que mostra células THP1 transduzidas expandids e classificadas por FACS para gerar uma sub-linha 100% CAR19z positiva mRFP + THP1.
[026]A Figura 2C demonstra a expressão de construtos CAR lentivirais anti- CD19, anti-HER2 e anti-mesotelina em macrófagos THP1, com eventos de CAR(+) no quadrante superior direito.
[027]A Figura 3A é um fluxograma que mostra a visão geral de geração de sub-linha CARMA usando um modelo de macrófago THP1, diferenciação com 1ng/mL de forbol 12-miristato 13-acetato (PMA), e ensaio de fagocitose in vitro.
[028]A Figura 3B é um gráfico que mostra macrófagos CAR anti-CD19, porém não macrófagos tipo selvagem (Wt), células tumorais K562 submetidas à fagocitose que expressaram CD19, conforme demonstrado por ensaios de fagocitose baseados em microscópio fluorescente.
[029]A Figura 3C é um gráfico que mostra macrófagos CAR anti-HER2, porém não macrófagos tipo selvagem (Wt), células tumorais K562 submetidas à fagocitose que expressaram HER2, conforme demonstrado por ensaios de fagocitose baseados em microscópio fluorescente.
[030]A Figura 3D é um gráfico que mostra macrófagos CAR anti-mesotelina, porém não macrófagos tipo selvagem (Wt), células tumorais K562 submetidas à fagocitose que expressaram mesotelina, conforme demonstrado por ensaios de fagocitose baseados em microscópio fluorescente.
[031]A Figura 3E é um gráfico de FACS representativa que mostra que a fagocitose tumoral de CARMA foi validada por um ensaio baseado em citometria de fluxo, em que mRFP+ CARMA contra CD19 foram co-culturados com células CD19+ GFP+ K562 e eventos positivos duplos foram quantificados.
[032]A Figura 3F é uma imagem que mostra mRFP em um campo de visão padrão 10x usado na tabulação de função de fagocitose de CARMA.
[033]A Figura 3G é uma imagem que mostra uma sobreposição em um campo de visão padrão 10x usado na tabulação de função de fagocitose de CARMA.
[034]A Figura 3H é uma série de imagens que mostra que eventos positivos duplos de mRFP/GFP baseados em FACS foram definidos como eventos fagocíticos, e foram validados como por análise FACS Amnis Imagestream. Os eventos mostrados são selecionados em eventos positivos duplos e ordenados a partir de alto a baixo pelo algoritmo de fagocitose-erode Amnis Imagestream.
[035]A Figura 3I é uma série de imagens que mostra que a fagocitose de células tumorais por mRFP+ CARMA no modelo de linhagem celular THP-1 foi adicionalmente demonstrada por microscopia confocal, verificando que as células tumorais GFP+ foram completamente encerradas no interior de fagossomas através de reconstruções de pilhas z confocais tridimensionais.
[036]A Figura 3J é uma série de imagens que mostra que a fagocitose de células tumorais por mRFP+ CARMA no modelo de linhagem celular THP-1 foi adicionalmente demonstrada por microscopia confocal, verificando que as células tumorais GFP+ foram completamente encerradas no interior de fagossomas através de reconstruções de pilhas z confocais tridimensionais.
[037]A Figura 3K é uma série de imagens que demonstra o destino de uma única célula CARMA ao longo do tempo- com contato e a formação de sinapse imunológica sendo a primeira etapa, levando ao engolfamento fagocítico, degradação do tumor usando a perda de GFP como um marcador de morte celular, divisão de fagossoma e reparo de fagossoma - demonstrando que CARMA sobrevive após a fagocitose de células tumorais.
[038]A Figura 4A é um gráfico que mostra macrófagos CAR anti-CD19 testados usando um ensaio de fagocitose in vitro contra células tumorais CD19+ (alvo) ou CD19- (controle) GFP+ K562. Demonstrando a especificidade do antígeno de CARMA, apenas as células tumorais portadoras de antígenos foram fagocitadas. Para demonstrar o requisito do domínio da sinalização intracelular na função CARMA, construtos CAR19-ΔZ (que são desprovidos de um domínio de sinalização intracelular) foram usados.
[039]A Figura 4B é um gráfico que mostra que os macrófagos CAR19-ΔZ não conseguiram realizar a fagocitose de células tumorais.
[040]A Figura 4C é um gráfico que mostra que os macrófagos CAR19-ΔZ reduziram significativamente a função antitumoral através de um ensaio de lise específico baseado em luciferase in vitro.
[041]A Figura 4D é um gráfico que mostra o ensaio de fagocitose de CARMA in vitro realizado na presença de R406 (inibidor Syk). R406 revogou independentemente a função fagocítica de CARMA, indicando que a sinalização de CAR em macrófagos é dependente de Syk e resulta em polimerização de actina e na função fagocítica mediada por NMIIA.
[042]A Figura 4E é um gráfico que mostra o ensaio de fagocitose de CARMA in vitro realizado na presença de citocasalina D (inibidor de polimerização de actina). A citocasalina D revogou independentemente a função fagocítica de CARMA, indicando que a sinalização de CAR em macrófagos é dependente de Syk e resulta em polimerização de actina e na função fagocítica mediada por NMIIA.
[043]A Figura 4F é um gráfico que mostra o ensaio de fagocitose de CARMA in vitro realizado na presença de blebistatina (inibidor de miosina IIA não muscular). A blebistatina revogou independentemente a função fagocítica de CARMA, indicando que a sinalização de CAR em macrófagos é dependente de Syk e resulta em polimerização de actina e na função fagocítica mediada por NMIIA.
[044]A Figura 5A é um gráfico de citometria de fluxo que mostra a expressão de CD47 em linhagens de células alvo tumorais em relação ao controle de isótipo. K562 e K562-CD19+ (K19) foram usadas nesses experimentos, ambas as quais são linhagens celulares que expressam altamente CD47.
[045]A Figura 5B é um gráfico que mostra que a adição de anticorpo monoclonal anti-CD47 aumentou seletivamente a fagocitose mediada por macrófagos CAR, porém não por Wt de células tumorais portadoras de antígeno. Os macrófagos Wt ou CAR19Z foram incubados com células tumorais CD19+ K562 com 0, 0,01, 0,10, 1,00, ou 10,0 mcg/ml de anticorpo monoclonal anti-CD47.
[046]A Figura 5C é um gráfico que mostra que a adição de anticorpo monoclonal anti-SIRPα aumentou seletivamente a fagocitose mediada por macrófagos CAR, porém não por Wt de células tumorais portadoras de antígeno. Os macrófagos Wt ou CAR19Z foram incubados com células tumorais CD19+ K562 com 0, 0,01, 0,10, 1,00, ou 10,0 mcg/ml de anticorpo monoclonal anti-SIRPα.
[047]A Figura 5D é um gráfico que demonstra que o bloqueio do eixo geométrico de CD47/SIRPα com anticorpos monoclonais anti-SIRPα aumentou a polifagocitose (definida como um macrófago que engolfou 2 ou mais células tumorais de uma vez) por macrófagos CAR.
[048]A Figura 5E é um gráfico que mostra um ensaio de fagocitose in vitro. Para controlar a opsonização adicionada pelos anticorpos monoclonais de bloqueio de CD47/SIRPα, um anticorpo monoclonal anti-CD47 de controle (clone 2D3), que se liga a CD47, porém não bloqueia o CD47 para o sítio de ligação SIRPα, foi usado em um ensaio de fagocitose in vitro . Apenas o clone que bloqueou o sítio de ligação (anti-CD47, clone B6H12) ou o bloqueio do receptor SIRPα resultou diretamente no aumento de fagocitose de tumor CARMA.
[049]A Figura 5F é um gráfico que mostra uma fagocitose in vitro contra células tumorais negativas para antígeno (CD19 negativo). Para testar se o bloqueio do eixo geométrico de CD47/SIRPα em macrófagos CAR resulta na perda da especificidade de antígeno, uma fagocitose in vitro contra células tumorais negativas para o antígeno (CD19 negativo) foi conduzida na presença de anticorpo monoclonal anti-CD47 ou anti-SIRPα, e não houve fagocitose observável.
[050]A Figura 5G é um gráfico que mostra a especificidade de aumento fagocítico de CARMA na presença de anticorpo monoclonal de bloqueio de SIRPα testada por knockout do receptor SIRPα em macrófagos THP1, e comparação de fagocitose tumoral por CARMA ou CARMA SIRPα-KO na ausência ou presença de anticorpo anti-SIRPα. CRISPR/Cas9 foi usado para a deleção de SIRPα, e as células foram classificadas quanto à negatividade de SIRPα antes de ensaios funcionais. A eliminação da função CARMA aprimorada de SIRPα e a adição de anti- SIRPα de volta às células knockout não conseguiram aumentar ainda mais a fagocitose.
[051]A Figura 6A é um gráfico que mostra a lise específica de células CD19+ GFP+ Luciferase+ K562 por CARMA CAR19Z, porém não macrófagos Wt (usando o modelo de macrófago THP-1) em um ensaio de ensaio baseado em luciferase in vitro em 48 horas de maneira dose-dependente.
[052]A Figura 6B é um gráfico que demonstra a lise específica de células tumorais por monócitos THP-1 de CAR19Z ou Wt (indiferenciado, dessa forma, um modelo de monócitos em vez de macrófagos) em um ensaio de extermínio baseado em luciferase in vitro em 48 horas de maneira dose-dependente.
[053]A Figura 6C é um painel de imagens que mostra a bioluminescência conduzida por luciferase, derivada de células tumorais CD19 + K562 positivas para luciferase, após co-cultura de 48 horas com macrófagos Wt ou CAR19Z in vitro, na ausência ou presença de 10 ug/ml de anticorpo monoclonal anti-SIRPα.
[054]A Figura 6D é um gráfico que demonstra a lise específica de macrófagos Wt ou CAR19Z +/- anticorpo monoclonal anti-SIRPα.
[055]A Figura 7A é uma série de gráficos que mostra que os construtos de CAR com um domínio intracelular de subunidade comum de FcεRI y (CAR19y, CARMA19y) foram gerados, embalados em lentivírus, e usados para transduzir células mieloides THP-1 em uma diluição viral serial tripla. CAR19y foi expresso em macrófagos THP-1.
[056]A Figura 7B é um gráfico que mostra macrófagos CAR19y ou CAR19Z classificados para 100% de positividade de CAR e usados para caracterização funcional in vitro. Os macrófagos CAR19Z e CAR19y realizaram a fagocitose de células tumorais CD19+, e ambos exibiram sinergia com bloqueio do eixo geométrico de CD47/SIRPα pela adição de anticorpo monoclonal anti-SIRPα
[057]A Figura 7C é um gráfico que mostra uma inibição de R406 Syk ensaio de fagocitose in vitro que demonstra que os macrófagos CAR19Z e CAR19y realizam a sinalização através de Syk para conduzir a fagocitose tumoral.
[058]A Figura 7D é um gráfico que mostra que tanto os macrófagos CAR19Z como CAR19y THP1, porém não macrófagos THP1 Wt, exterminaram eficientemente as células tumorais CD19+ em um ensaio de lise específica baseado em luciferase in vitro após 24 horas de co-cultura em várias razões E:T.
[059]A Figura 8A é um gráfico que mostra que os macrófagos responderam a sinais moleculares conservados de infecção, como padrões moleculares associados a patógenos, através de receptores de reconhecimento de patógenos constitutivamente expressos.
[060]A Figura 8B é um gráfico que mostra um ensaio de fagocitose in vitro conduzido usando macrófagos CAR que foram iniciados com os ligantes de TLR1-9, independentemente, ou controle de meio para melhorar a função fagocítica de tumor de CARMA. Os ligantes de TLR1, 2, 4, 5 e 6 melhoraram a função fagocítica de CARMA.
[061]A Figura 8C é um gráfico que mostra a diferença entre ligantes TLR que aumentou ou não aumentou a fagocitose de CARMA de células tumorais em uma faixa de concentrações de ligante TLR3 ou TLR6.
[062]A Figura 9A é um gráfico que mostra β-glucano, um produto de levedura, ligado à Dectina-1 sobre a superfície de macrófagos e resultou na ativação e função efetora. Para testar a capacidade de β-glucano para aumentar a função de CARMA, ensaios de fagocitose tumoral in vitro foram conduzidos na ausência ou presença de 5mcg/ml de β-glucano. O β-glucano aumentou a capacidade fagocítica de macrófagos CAR, porém não de Wt.
[063]A Figura 9B é uma série de gráficos que mostra ensaios de lise específicos baseados em luciferase in vitro conduzidos em várias razões de efetor (E): alvo (T) na presença de 0, 0,5, 5 de 50 μg/ml de β-glucano para testar a capacidade de β-glucano para aumentar o extermínio de tumores de CARMA. O β- glucano aumentou a lise específica de células tumorais portadoras de antígeno por macrófagos CAR, porém não THP-1 Wt.
[064]A Figura 10A é uma série de imagens que mostra que construtos de CAR compreendidos de um domínio de sinalização intracelular de Dectina-1 foram gerados. Esses construtos foram embalados em lentivírus e usados para transduzir células mieloides THP-1 em uma diluição em série tripla de títulos lentivirais.
[065]A Figura 10B é um gráfico que mostra que CAR foi detectado sobre a superfície de macrófago que expressa construtos de CAR de CD8TM-Dectina1.
[066]A Figura 10C é um gráfico que mostra que CAR foi detectado sobre a superfície de macrófago que expressa construtos de CAR de DectinaTM-Dectina1.
[067]A Figura 10D é um gráfico que mostra macrófagos CAR de CD8TM- Dectina1 e CAR de DectinaTM-Dectina1 testados em um ensaio de extermínio baseado em luciferase in vitro. Ambos os construtos demonstraram lise específica de células tumorais.
[068]A Figura 10E é um gráfico que mostra macrófagos de Dectina1-CAR testados em um ensaio de fagocitose tumoral in vitro contra células tumorais K562 (controle) ou K19 (alvo). Os macrófagos de Dectina1-CAR realizaram seletivamente a fagocitose de células tumorais portadoras de antígenos cognatos.
[069]A Figura 10F é uma série de imagens que mostra que os macrófagos CAR de Dectina-1 demonstraram a capacidade de fagocitose de múltiplas células tumorais.
[070]A Figura 10G é um gráfico que mostra um ensaio de fagocitose tumoral in vitro. Os macrófagos Dectina1-CAR demonstraram sinergia com o bloqueio de SIRPα, ou com a iniciação com um ligante TLR.
[071]A Figura 11A é uma série de gráficos que mostra os níveis de calreticulina em três linhagens de célula alvo CD19+ diferentes em relação ao controle de isótipo.
[072]A Figura 11B é um gráfico que mostra a intensidade fluorescente média normalizada de expressão de calreticulina em três linhagens de células alvo CD19+ diferentes.
[073]A Figura 11C é um gráfico que mostra que baixos níveis de calreticulina protegeram moderadamente as células alvo, especificamente as linhagens celulares Nalm6 e JEKO, contra a fagocitose de macrófago CAR19z. Esses dados sugerem que a exploração de deposição/indução de calreticulina pode ser usada como uma tática adicional para aumentar a função efetora de CARMA.
[074]A Figura 12A é uma série de gráficos que mostra construtos de CAR anti-HER2 clonados em plasmídeos de expressão de mRNA, transcritos in vitro, e o mRNA diretamente eletroporado em monócitos humanos primários.
[075]A Figura 12B é uma série de gráficos que mostra a eficiência de eletroporação de mRNA de CAR anti-HER2 em macrófagos derivados de monócitos humanos primários (completamente dferenciados) em 79,7%.
[076]A Figura 12C é um gráfico que mostra que, embora a eletroporação de mRNA resulte em uma alta eficiência de transfecção de CAR tanto de monócitos como macrófagos, a expressão de CAR era temporária devido à degradação de mRNA, atingindo o pico no dia 2 e desaparecendo no dia 7 após a eletroporação in vitro.
[077]A Figura 13A é um gráfico que mostra camundongos NSGS injetados com células de câncer de ovário humanas 1E6 SKOV3 CBG/GFP + através de injeção de IP, um modelo de carcinomatose intraperitoneal metastática de câncer de ovário HER2 +. Os camundongos foram coinjetados com macrófagos humanos primários eletroporados simulados ou eletroporados por mRNA de CAR anti-HER2 (razão E:T 1:1) e a carga tumoral foi representada em imagens. Os macrófagos CAR demonstraram redução marginal em crescimento tumoral ao longo de aproximadamente duas semanas. O primeiro ponto de tempo em que a carga tumoral foi quantificada de forma bioluminescente foi 24 horas após o tratamento, demonstrando que monócitos e macrófagos CAR tiveram atividade nas primeiras 24 horas.
[078]A Figura 13B é um gráfico que mostra camundongos NSGS injetados com células de câncer de ovário humanas 1E6 SKOV3 CBG/GFP + através de injeção de IP, um modelo de carcinomatose intraperitoneal metastática de câncer de ovário HER2 +. Os camundongos foram coinjetados com monócitos humanos primários eletroporados simulados ou eletroporados por mRNA de CAR anti-HER2 (razão E:T 1:1) e a carga tumoral foi representada em imagens. Os monócitos CAR demonstraram redução marginal em crescimento tumoral ao longo de aproximadamente duas semanas. O primeiro ponto de tempo em que a carga tumoral foi quantificada de forma bioluminescente foi 24 horas após o tratamento, demonstrando que monócitos e macrófagos CAR tiveram atividade nas primeiras 24 horas.
[079]A Figura 14A é uma série de gráficos que mostra que a entrega lentiviral de transgenes CAR a macrófagos derivados de monócito humanos primários foi testada usando múltiplos construtos CAR. O CAR19 foi distribuído a macrófagos humanos através de transdução lentiviral, demonstrando uma eficiência de transdução de 4,27% e 38,9% no grupo controle vs. Grupos lentivirais CAR19 (MOI 10), respectivamente.
[080]A Figura 14B é uma série de gráficos FACS representativos que mostram a expressão de CAR anti-HER2 em macrófagos humanos primários, com uma eficiência de transdução de 1,47 e 18,1% entre o controle e condições de MOI 10 CAR LV, respectivamente.
[081]A Figura 15A é uma série de gráficos que mostra que a eficiência de transdução atingir seu pico no ponto médio de transdução (dia 4), para anti-CD19. Os macrófagos derivados de monócitos foram gerados por diferenciação de células CD14+ selecionadas (a partir de produtos de aférese de doadores normais em meios condicionados GM-CSF durante 7 dias. Para otimizar a entrega de CAR através de transdução lentiviral, o lentivírus anti-CD19 foi usado para transduzir macrófagos em diferentes pontos do processo de diferenciação de monócito para macrófago.
[082]A Figura 15B é uma série de gráficos que mostra que a eficiência de transdução atingir seu pico no ponto médio de transdução (dia 4), para anti-HER2. Os macrófagos derivados de monócitos foram gerados por diferenciação de células CD14+ selecionadas (a partir de produtos de aférese de doadores normais em meios condicionados GM-CSF durante 7 dias. Para otimizar a entrega de CAR através de transdução lentiviral, o lentivírus anti-HER2 foi usado para transduzir macrófagos em diferentes pontos do processo de diferenciação de monócito para macrófago.
[083]A Figura 15C é uma série de gráficos que mostra que a eficácia da fagocitose evoluiu com a eficiência de transdução de CAR, atingindo seu pico com macrófagos transduzidos no dia 4 durante o processo de diferenciação.
[084]A Figura 16A é uma série de gráficos que mostra que abordagens de transdução alternativas para a entrega de transgenes para macrófagos humanos primários foram testadas, uma vez que a eletroporação de mRNA era transitória e o lentivírus era apenas moderadamente eficiente e exigia alto título. O adenovírus (recombinante, deficiente em replicação) foi identificado como uma abordagem eficiente para a transdução de macrófago humano primário. A expressão de Receptor de Adenovírus Coxackie (a proteína de ancoragem para Ad5) e CD46 (a proteína de ancoragem para Ad35) foi testada em relação ao controle do isótipo em macrófagos humanos primários, e CD46, porém não o receptor de Adenovirus Coxackie, foi altamente expresso. Dessa forma, o adenovírus quimérico Ad5f35 foi utilizado para a transdução de macrófagos humanos primários e foi elaborado através de técnicas padrão de biologia molecular para expressar um receptor de antígeno quimérico (GFP e vírus vazios Ad5f35 foram usados como controles) contra HER2.
[085]A Figura 16B é um gráfico que mostra que, em um MOI de 1000, Ad5f35 distribuiu efetivamente um transgene (GFP foi usado como um modelo de transgene) em macrófagos humanos, e a expressão aumentou ao longo do tempo, conforme monitorado pela quantificação de sinal GFP em um Espectro IVIS.
[086]A Figura 16C é um gráfico que mostra a comparação entre a cinética de transdução de macrófagos humanos primários em pontos de tempo diferentes em uma ampla gama de MOIs - até 10.000.
[087]A Figura 16D é uma série de gráficos representativos de FACS de expressão de CAR anti-HER2 em macrófagos humanos transduzidos Ad5f35 48 horas após a transdução, em uma ampla gama de MOIs virais.
[088]A Figura 16E é uma série de imagens de microscópio fluorescente de macrófagos humanos primários transduzidos Ad5f35-GFP, com a eficiência de transdução mais alta demonstrada em um MOI de 1000.
[089]A Figura 17A é uma série de gráficos que mostra CARMA humano primário testado em um ensaio de fagocitose in vitro através de análise de FACS. Os macrófagos (CAR não transduzido ou anti-HER2) foram corados com DiI antes da co-cultura com células de câncer de ovário GFP+ SKOV3. Fagocitose, definida por eventos positivos duplos DiI/GFP, foi medida em um nível de 26,6% no grupo CAR e 4,55% no grupo de controle.
[090]A Figura 17B é uma série de imagens que demonstra visualmente que esses eventos positivos duplos representam fagocitose. Para validar que os dois eventos positivos duplos de DiI/GFP eram eventos fagocíticos e não dupletos, a citocalasina D (um inibidor de fagocitose) foi adicionada a um ramo do experimento e anulou completamente a fagocitose mediada por CAR até 1,74%. Para validar adicionalmente que os macrófagos CAR humanos primários poderiam fagocitar as células tumorais, eventos positivos duplos foram fechados por FACS Amnis Imagestream e ordenados de alto a baixo pelo algoritmo de fagocitose-erode Amnis.
[091]A Figura 17C é uma série de imagens que mostra imagens de microscópio confocal de macrófagos CAR-HER2 corados com DiI co-culturados com SKOV3-GFP.
[092]A Figura 18 é um gráfico que mostra células de câncer de mama fagocitadas por macrófagos humanos CAR, porém não UTD. Macrófagos humanos primários CAR Anti-HER2 gerados usando transdução de Ad5f35-CAR de macrófagos derivados de monócitos. Essas células (ou células não transduzidas de controle) foram usadas como efetores em um ensaio de fagocitose baseado em FACS in vitro de células de câncer de mama humanas SKBR3. Além disso, a adição de anticorpo monoclonal anti-SIRPα aumentou a fagocitose de macrófago CARMA, porém não UTD de células de câncer de mama. Esses resultados demonstram que a sinergia entre o bloqueio do eixo geométrico de CD47/SIRPα observado com CARMA no modelo THP-1 é traduzida para estudos de macrófagos humanos primários.
[093]A Figura 19 é uma série de gráficos de FACS representativos que mostram que CARMA exibe fagocitose intacta de partículas de E.Coli pH-Rodo Green. Para demonstrar que macrófagos CAR ainda eram células imunes funcionais inatas no sentido antimicrobiano e não perderam a capacidade de responder a estímulos infecciosos, macrófagos controle não transduzidos ou CAR foram empregados em um ensaio de fagocitose de E.Coli baseado em FACS.
[094]A Figura 20A é um gráfico que mostra CARMA anti-HER2 humano primário testado como células efetoras em ensaios de extermínio baseados em luciferase in vitro. Os macrófagos CARMA Anti-HER2, porém não UTD de controle, resultaram na lise específica de células HER2+ K562, porém não de células de controle K562, desprovidas de expressão de HER2, após 48 horas de co-cultura.
[095]A Figura 20B é um gráfico que mostra um ensaio de extermínio baseado em luciferase in vitro usando células de câncer de mama SKBR3 como alvos. Macrófagos CARMA, porém não UTD de controle ou Ad5f35 Vazio de controle transduzidos, tinham atividade antitumoral significativa contra ambos os modelos após 48 horas de co-cultura.
[096]A Figura 20C é um gráfico que mostra um ensaio de extermínio baseado em luciferase in vitro usando células de câncer de ovário SKOV3 como alvos. Macrófagos CARMA, porém não UTD de controle ou Ad5f35 Vazio de controle transduzidos, tinham atividade antitumoral significativa contra ambos os modelos após 48 horas de co-cultura.
[097]A Figura 20D é um gráfico que mostra a sinergia entre o bloqueio do eixo CD47/SIRPα em um ensaio de extermínio. As células de câncer de ovário SKOV3 foram co-culturadas com meios, macrófagos não transduzidos de controle, CARMA anti-HER2, CARMA anti-HER2 + mAB antiCD47 (10mcg/ml) ou CARMA anti-HER2 + anti-SIRPα (10mcg/ml) e o sinal de luciferase foi medido em série. CARMA resultou na erradicação de tumor total no dia 13, enquanto a cinética da erradicação do tumor foi ainda mais rápida na presença de bloqueio do eixo CD47/SIRPα.
[098]A Figura 20E é um gráfico que mostra a sinergia com o β-glucano, que foi demonstrada em um modelo de CARMA de macrófago THP-1, e a iniciação de β- glucano do CARMA resultou em cinética de extermínio de tumores melhorada.
[099]A Figura 20F é um gráfico que mostra que a exposição de CARMA a LPS (um ligante de TLR-4) ou Poli-IC (um ligante de TLR-3) resultou em modulação do efeito antitumoral.
[0100]A Figura 21 é uma série de imagens que mostra a capacidade de CARMA humano primário eliminar tumores em um ensaio de luciferase in vitro. As células de câncer de ovário GFP + SKOV3 foram co-culturadas com macrófagos UTD de controle, macrófagos UTD de controle mais 10 μc/ml de trastuzumabe, macrófagos transduzidos por vírus Ad5f35 vazio de controle, ou CARMA anti-HER2 humano primário. As condições de CARMA, porém não de controle, foram capazes de eliminar as células tumorais.
[0101]A Figura 22A é um painel de gráficos que mostra que uma supraregulação dose-dependente de marcadores M1 CD80/CD86 e uma infraregulação dose-dependente de marcador CD23 M2, foram medidas por FACS. Macrófagos são células fenotipicamente plásticas capazes de adotar diversas características funcionais, comumente separadas nas classificações de macrófago M1 e M2 - sendo M1 inflamatório/ativado e M2 sendo imunossupressor/promotor de tumor. Os marcadores M1 e M2 foram medidos 48 horas após a transdução de macrófagos humanos primários com vírus CAR Ad5f35.
[0102]A Figura 22B é uma série de gráficos que mostra se o efeito sobre os marcadores M1 e M2 era um resultado de expressão de CAR ou transdução de Ad5f35. Os macrófagos foram transduzidos com nada, Ad5f35 vazio ou Ad5f35 anti- HER2, e Ad5f35 Vazio/CAR mostrou o mesmo padrão de mudança de fenótipo.
[0103]A Figura 22C e um gráfico que mostra que o CARMA exposto a citocinas supressoras manteve sua atividade de extermínio em um ensaio de lise específica in vitro baseado em luciferase em 48 horas. Os macrófagos UTD de controle foram condicionados com citocinas supressoras demonstrando crescimento de tumor aumentado.
[0104]A Figura 22D é um painel de gráficos que mostra a resistência à imunossupressão de macrófagos CAR humanos, UTD de controle, Ad5f35 Vazio ou macrófagos transduzidos por CAR Ad5f35 anti-HER2 expostos a 10 ng/ml de IL-4, uma citocina de indução M2 canônica ou células cancerígenas que anteriormente foram mostradas para subverter macrófagos para M2 durante a co-cultura (SKOV3, linhagem de células de câncer de ovário, HDLM2, linhagem de células de linfoma de Hodgkin). Os macrófagos UTD de controle suprarregulam (upregulation) CD206, um marcador M2 que responde especificamente ao estímulo de IL-4 através da fosforilação de STAT6. Ad5f35 vazio, e mais macrófagos transduzidos por CAR- Ad5f35, exibiram resistência à IL-4 e subversão induzida por tumor ao fenótipo M2.
[0105]A Figura 22E é um gráfico que mostra o fenótipo metabólico de macrófagos UTD de controle ou CAR anti-HER2 expostos à IL-4 durante 24 horas para polarizar para M2 (ou não) e a taxa de consumo de oxigênio.
[0106]A Figura 22F é um gráfico que mostra que os ensaios fenotípicos, metabólicos e funcionais indicam que o CARMA é resistente à subversão de M2.
[0107]A Figura 23A é um painel de gráficos que mostra monócitos doadores normais humanos primários (purificados através de seleção positiva de CD14) transduzidos com Ad5f35-CAR-HER2 em MOI’s variando de 0 (UTD) a 1000. A expressão de CAR foi medida através de FACS 48 horas após a transdução. Os monócitos CAR foram eficientemente gerados com Ad5f35, com a expressão atingindo seu pico em um MOI de 1000.
[0108]A Figura 23B é um gráfico que mostra a eficiência de transdução de monócitos primários.
[0109]A Figura 23C é um gráfico que mostra que os monócitos mantiveram alta viabilidade (medida pela análise FACS Live/Dead Aqua) em MOIs de até 1000.
[0110]A Figura 23D é uma série de gráficos que mostra marcadores de ativação de M1 suprarregulados (upregulated) por monócitos humanos CAR, porém não-transduzidos (UTD).
[0111]A Figura 23E é uma série de gráficos que mostra marcadores de monócitos humanos CAR, porém não-transduzidos (UTD) infrarregulados (downregulated).
[0112]A Figura 24A é um gráfico que mostra o extermínio de células HER2 + SKBR3 (câncer de mama humano) por monócito CAR anti-HER2 avaliado através de um ensaio de extermínio in vitro baseado em luciferase.
[0113]A Figura 24B é um gráfico que mostra o extermínio de células HER2 + SKOV3 (câncer de ovário humano) por monócito CAR anti-HER2 avaliado através de um ensaio de extermínio in vitro baseado em luciferase.
[0114]A Figura 25A é um diagrama esquemático dos camundongos NOD- scid IL2Rg-null-IL3/GM/SF, NSG-SGM3 (NSGS) usados para modelar xenoenxertos de câncer de ovário humano HER2 (+) in vivo. No dia 0, os camundongos foram injetados intraperitonealmente (IP) com células de câncer de ovário SKOV3 positivas para luciferase de cleópteros 7.5E5 (CBG luc)/ positivas para proteína verde fluorescente (GFP) como um modelo de carcinomatose intraperitoneal, um modelo metastático inerentemente agressivo de malignidade sólida. Os camundongos não foram tratados (tumor individualmente), ou injetados com uma dose única de macrófagos humanos 4-E6 não transduzidos (UTD) ou CAR-HER2 (CARMA) no dia 0 através de injeção IP.
[0115]A Figura 25B é um gráfico que mostra os camundongos representados em imagens em série usando bioluminescência (fluxo total, fótons/segundo) como um substituto de carga tumoral.
[0116]A Figura 25C é um gráfico que mostra a porcentagem de sobrevivência de camundongos que receberam o tratamento com CARMA. Os camundongos tratados com CARMA tiveram uma redução da carga tumoral de aproximadamente duas ordens de grandeza.
[0117]A Figura 25D é um painel de imagens que mostra que os camundongos tratados com CARMA tiveram um benefício de sobrevivência de 30 dias (p = 0,018) em relação aos camundongos não tratados ou tratados com macrófago UTD.
[0118]A Figura 25E é um painel de gráficos que mostra tumores coletados de camundongos que morreram no dia 36 e avaliados quanto à presença de macrófagos humanos transferidos de forma adotiva através da expressão de CD45 humano na análise FACS.
[0119]A Figura 26A é um gráfico que mostra a expressão de CAR de superfície verificada por análise FACS 48 horas após a transdução de macrófagos humanos não transduzidos (UTD) ou transduzidos com vírions V5f35 vazios desprovidos de um transgene (Vazio) ou Ad5f35-CAR-HER2-Z (CARMA) em multiplicidades de infecção de 1000.
[0120]A Figura 26B é um painel de gráficos que mostra marcadores de superfície avaliados para demonstrar a polarização do macrófago M1 em células transduzidas por V5f35 vazio ou CAR-HER2-Z Ad5f35. Os marcadores M1 (HLA DR, CD86, CD80, PDL1) foram suprarregulados (upregulated) enquanto os marcadores M2 (CD206, CD163) foram infrarregulados (downregulated).
[0121]A Figura 26C é um diagrama esquemático dos camundongos NSGS usados em um modelo IP de câncer de ovário metastático HER2 + e estratificado em quatro grupos de tratamento (n = 5 por grupo). Os camundongos não foram tratados ou receberam injeções IP de macrófagos não transduzidos por 1-E7, transduzidos por Ad5f35 vazio ou macrófagos transduzidos por CAR-HER2-Z no dia 0.
[0122]A Figura 26D é um painel de imagens que mostra a carga tumoral monitorada através de imageamento bioluminescente serial, com dados representativos mostrados no dia 27 após o engolfamento tumoral.
[0123]A Figura 26E é um gráfico que mostra a carga tumoral monitorada através de imageamento bioluminescente serial, com dados representativos mostrados no dia 27 após o engolfamento tumoral.
[0124]A Figura 27A é um diagrama esquemático dos camundongos NSGS usados em um modelo IP de câncer de ovário metastático HER2 + e estratificado em quatro grupos de tratamento (n = 5 por grupo), incluindo sem tratamento, e macrófagos humanos 3E6, 1E7, ou 2E7 CAR-HER2—Z, administrados IP no dia 0.
[0125]A Figura 27B é um gráfico que mostra a carga tumoral monitorada através de imageamento bioluminescente serial. Uma resposta dose-dependente ao número de macrófagos foi observada nesse modelo.
[0126]A Figura 27C é um gráfico que mostra que as doses únicas de macrófagos CAR-HER2 em macrófagos 3E6, 1E7, ou 2E7 por camundongo resultaram na erradicação de tumor dose-dependente (em relação aos camundongos não tratados) no dia 36 após o engolfamento.
[0127]A Figura 28 é uma ilustração da abordagem terapêutica proposta para CARMA. Em suma, os monócitos de pacientes poderiam ser selecionados a partir do sangue periférico, diferenciados ex vivo e transduzidos para expressar um CAR, coestimulado (ou não) com compostos sinérgicos e injetados novamente no paciente por via intravenosa, intraperitoneal, intratumoral, através de procedimento radiológico intervencionista, ou por outra via. Salienta-se que o processo diferenciado poderia ser ignorado e os monócitos podem ser transduzidos e infundidos novamente no paciente. A fonte de monócitos também pode ser um doador compatível com HLA.
[0128]Exceto onde definido em contrário, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o mesmo significado conforme comumente entendido por um indivíduo com conhecimento comum na técnica à qual a invenção pertence. Muito embora quaisquer métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos no presente documento possam ser usados na prática para testar a presente invenção, os materiais e métodos preferenciais são descritos no presente documento. Ao descrever e reivindicar a presente invenção, a terminologia a seguir será usada.
[0129]Deve-se compreender, também, que a terminologia usada no presente documento serve para o propósito de descrever modalidades particulares somente, e não é destinada a ser limitante.
[0130]Os artigos “um” e “uma” são usados no presente documentos para se referir a um ou mais de um (isto é, a pelo menos um) do objeto gramático do artigo. A título de exemplo, “um elemento” significa um elemento ou mais de um elemento.
[0131]“Cerca de” conforme o uso em questão quando refere-se a um valor mensurável como uma quantidade, uma duração temporal, e similares, destina-se a abranger variações de ±20% ou ±10%, com mais preferência, ±5%, com mais preferência ainda, ±1%, e com mais preferência ainda, ±0,1% a partir do valor especificado, visto que tais variações são adequadas para realizar os métodos revelados.
[0132]“Ativação,” conforme o uso em questão, refere-se ao estado de um monócito/macrófago que foi suficientemente estimulado para induzir a proliferação celular detectável ou foi estimulado para exercer sua função efetora. A ativação também pode estar associada à produção de citocina induzida, fagocitose, sinalização celular, extermínio de célula alvo, ou processamento e apresentação de antígenos. O termo “monócitos/macrófagos ativados” refere-se a, entre outros, monócitos/macrófagos que estão sendo submetidos à divisão celular ou exercendo a função efetora.
[0133]O termo “agente” ou “agente biológico” ou “agente terapêutico” conforme o uso em questão, refere-se a uma molécula que pode ser expressa, liberada, secretada ou entregue a um alvo pela célula modificada descrita no presente documento. O agente inclui, porém sem limitação, um ácido nucleico, um antibiótico, um agente anti-inflamatório, um anticorpo ou fragmentos de anticorpo dos mesmos, um fator de crescimento, uma citocina, uma enzima, uma proteína, um peptídeo, uma proteína de fusão, uma molécula sintética, uma molécula orgânica (por exemplo, uma molécula pequena), um carboidrato ou similares, um lipídeo, um hormônio, um microssomo, um derivado ou uma variação dos mesmos, e qualquer combinação dos mesmos. O agente pode se ligar a qualquer porção celular, como um receptor, um determinante antigênico, ou outro sítio de ligação presente em um alvo ou célula alvo. O agente pode se difundir ou ser transportado para dentro da célula, onde o mesmo pode atuar de maneira intracelular.
[0134]O termo “anticorpo,” conforme o uso em questão, refere-se a uma molécula de imunoglobulina que se liga especificamente a um antígeno. Os anticorpos podem ser imunoglobulinas intactas distribuídas a partir de fontes naturais ou de fontes recombinantes e podem ser porções imunorreativas de imunoglobulinas intactas. Os anticorpos são tipicamente tetrâmeros de moléculas de imunoglobulina. Os anticorpos na presente invenção podem se apresentar em uma variedade de formas incluindo, por exemplo, anticorpos policlonais, anticorpos monoclonais, Fv, Fab e F(ab)2, bem como anticorpos de cadeia única (scFv) e anticorpos humanizados (Harlow et al., 1999, Em: Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY; Harlow et al., 1989, Em: Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, Nova Iorque; Houston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879 a 5883; Bird et al., 1988, Science 242:423 a 426).
[0135]O termo “fragmento de anticorpo” refere-se a uma porção de um anticorpo intacto e refere-se às regiões variáveis determinantes antigênicas de um anticorpo intacto. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, porém sem limitação, fragmentos Fab, Fab’, F(ab’)2 e Fv, anticorpos lineares, anticorpos scFv, e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpo.
[0136]Uma “cadeia pesada de anticorpo”, conforme o uso em questão, refere-se ao maior dos dois tipos de cadeias de polipeptídeos presentes em todas as moléculas de anticorpo em suas conformações de ocorrência natural.
[0137]Uma “cadeia leve de anticorpo”, conforme o uso em questão, refere-se ao menor dos dois tipos de cadeias de polipeptídeos presentes em todas as moléculas de anticorpo em suas conformações de ocorrência natural. As cadeias leves α e β referem-se aos dois principais isótipos de cadeia leve de anticorpo.
[0138]Pelo termo “anticorpo sintético” conforme o uso em questão, entende- se um anticorpo que é gerado usando tecnologia de DNA recombinante, como, por exemplo, um anticorpo expresso por um bacteriófago conforme descrito no presente documento. O termo também deveria ser entendido como significando um anticorpo que foi gerado pela síntese de uma molécula de DNA que codifica o anticorpo e tal molécula de DNA expressa uma proteína de anticorpo ou uma sequência de aminoácidos que especifica o anticorpo, em que o DNA ou sequência de aminoácidos foi obtido utilizando tecnologia de DNA ou sequência de aminoácidos que está disponível e é bem conhecida na técnica.
[0139]O termo “antígeno” ou “Ag” conforme o uso em questão é definido como uma molécula que provoca uma resposta imune. Essa resposta imune pode envolver tanto a produção de anticorpos, como a ativação de células competentes imunologicamente específicas, ou ambas. O versado na técnica entenderá que qualquer macromolécula, incluindo praticamente todas as proteínas ou peptídeos, pode servir como um antígeno. Além disso, os antígenos podem ser derivados de DNA recombinante ou genômico. O versado na técnica entenderá que qualquer DNA, que compreende uma sequência de nucleotídeos ou uma sequência de nucleotídeos parcial que codifica uma proteína que provoca uma resposta imune, portanto, codifica um “antígeno” como esse termo é usado no presente documento. Além disso, o versado na técnica entenderá que um antígeno não precisa ser codificado exclusivamente por uma sequência de nucleotídeos de comprimento total de um gene. É prontamente evidente que a presente invenção inclui, porém sem limitação, o uso de sequências de nucleotídeos parciais de mais de um gene e que essas sequências de nucleotídeos são dispostas em várias combinações para provocar a resposta imune desejada. Além disso, um versado na técnica entenderá que um antígeno não precisa de modo algum ser codificado por um “gene”. É prontamente evidente que um antígeno pode ser gerado sintetizado ou pode ser derivado de uma amostra biológica. Tal amostra biológica pode incluir, porém sem limitação, uma amostra de tecido, uma amostra de tumor, uma célula ou um fluido biológico.
[0140]O termo “efeito antitumoral” conforme o uso em questão, refere-se a um efeito biológico que pode ser manifestado por uma redução no volume de tumor, uma redução no número de células tumorais, uma redução no número de metástases, um aumento da expectativa de vida, ou melhora de vários sintomas fisiológicos associados à condição cancerígena. Um “efeito antitumoral” também pode ser manifestado pela capacidade dos peptídeos, polinucleotídeos, células e anticorpos da invenção na prevenção da ocorrência de tumor em primeiro lugar.
[0141]O termo “autoantígeno” significa, de acordo com a presente invenção, qualquer autoantígeno que é reconhecido pelo sistema imune como sedo estranho. Os autoantígenos compreendem, porém sem limitação, proteínas celulares, fosfoproteínas, proteínas de superfície celular, lipídeos celulares, ácidos nucleicos, glicoproteínas, incluindo receptores de superfície celular.
[0142]O termo “doença autoimune” conforme o uso em questão é definido como um distúrbio que resulta de uma resposta autoimune. Uma doença autoimune é o resultado de uma resposta inadequada e excessiva a um autoantígeno. Exemplos de doenças autoimunes incluem, porém sem limitação, doença de Addision, alopecia areata, espondilite anquilosante, hepatite autoimune, parotidite autoimune, doença de Crohn, diabetes (Tipo I), epidermólise bolhosa distrófica, epididimite, glomerulonefrite, doença de Graves, síndrome de Guillain-Barr, doença de Hashimoto, anemia hemolítica, lúpus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla, miastenia grave, pênfigo vulgar, psoríase, febre reumática, artrite reumatoide, sarcoidose, esclerodermia, síndrome de Sjogren, espondiloartropatias, tiroidite, vasculite, vitiligo, mixedema, anemia perniciosa, colite ulcerativa, entre outros.
[0143]Conforme o uso em questão, o termo “autólogo” se destina a se referir a qualquer material derivado do mesmo indivíduo ao qual o mesmo será posteriormente reintroduzido no indivíduo.
[0144]“Alogênico” refere-se a um enxerto derivado de um animal diferente da mesma espécie.
[0145]“Xenogênico” refere-se a um enxerto derivado de um animal de uma espécie diferente.
[0146]O termo “câncer” conforme o uso em questão é definido como doença caracterizada pelo crescimento rápido e descontrolado de células anormais. As células cancerígenas podem se espalhar localmente ou através da corrente sanguínea e sistema linfático para outras partes do corpo. Exemplos de vários cânceres incluem, porém sem limitação, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer cervical, câncer de pele, câncer pancreático, câncer colorretal, câncer renal, câncer de fígado, câncer de cérebro, linfoma, leucemia, câncer de pulmão e similares. Em determinadas modalidades, o câncer é carcinoma medular da tireoide.
[0147]O termo “receptor de antígeno quimérico” ou “CAR”, conforme o uso em questão, refere-se a um receptor de superfície de células T artificiais que é elaborado para ser expresso em uma célula efetora imune e se liga especificamente a um antígeno. Os CARs podem ser usados como uma terapia com transferência de células adotivas. Os monócitos são removidos de um paciente (sangue, tumor ou fluido ascítico) e modificados de modo que os mesmos expressem os receptores específicos para uma forma específica de um antígeno. Em algumas modalidades, os CARs foram expressos com especificidade a um antígeno associado a tumor, por exemplo. Os CARs também podem compreender um domínio de ativação intracelular, um domínio transmembranar e um domínio extracelular que compreende uma região de ligação a antígeno associada a tumor. Em alguns aspectos, os CARs compreendem fusões de anticorpos monoclonais derivados de fragmentos variáveis de cadeia única (scFv), fundidos com a transmembrana CD3-zeta e domínio intracelular. A especificidade de desenhos de CAR pode ser derivada de ligantes de receptores (por exemplo, peptídeos). Em algumas modalidades, um CAR pode alvejar cânceres redirecionando um monócito/macrófago que expressa o CAR específico para antígenos associados a tumor.
[0148]O termo “molécula de sinalização intracelular quimérica” refere-se a um receptor recombinante que compreende um ou mais domínios intracelulares de uma ou mais moléculas estimulatórias e/ou co-estimulatórias. A molécula de sinalização intracelular quimérica é substancialmente desprovida de um domínio extracelular. Em algumas modalidades, a molécula de sinalização intracelular quimérica compreende domínios adicionais, como um domínio transmembranar, uma etiqueta detectável, e um domínio espaçador.
[0149]Conforme o uso em questão, o termo “modificações de sequência conservadora” se destina a se referir a modificações de aminoácido que não afetam ou alteram significativamente as características de ligação do anticorpo contendo a sequência de aminoácidos. Tais modificações conservadoras incluem substituições, adições e deleções de aminoácidos. As modificações podem ser introduzidas em um anticorpo da invenção por técnicas padrão na técnica, como mutagênese sítio- dirigida e mutagênese mediada por PCR. As substituições de aminoácidos conservadoras são aquelas em que o resíduo de aminoácido é substituído por um resíduo de aminoácido que tem uma cadeia lateral similar. As famílias de resíduos de aminoácidos que têm cadeias laterais foram definidas na técnica. Essas famílias incluem aminoácidos com cadeias laterais básicas (por exemplo, lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares não carregadas (por exemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína, triptofano), cadeias laterais não-polares (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina , metionina), cadeias laterais beta-ramificadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Portanto, um ou mais resíduos de aminoácidos dentro das regiões CDR de um anticorpo podem ser substituídos por outros resíduos de aminoácidos da mesma família de cadeias laterais e o anticorpo alterado pode ser testado quanto à capacidade de ligação a antígenos usando os ensaios funcionais descritos no presente documento.
[0150]“Ligante co-estimulatório”, conforme o uso no presente documento, inclui uma molécula em uma célula apresentadora de antígeno (por exemplo, um aAPC, célula dendrítica, célula B, e similares) que se liga especificamente a uma molécula co-estimulatória cognata em um monócito/macrófago, fornecendo assim um sinal que media uma resposta a monócito/macrófago, incluindo, porém sem limitação, proliferação, ativação, diferenciação, e similares. Um ligante co- estimulatório pode incluir, mas não se limita a, CD7, B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), PD- L1, PD-L2, 4-1BBL, OX40L, ligante co-estimulatório induzível (ICOS-L), molécula de adesão intercelular (ICAM, CD30L, CD40, CD70, CD83, HLA-G, MICA, MICB, HVEM, receptor de linfotoxina beta, 3/TR6, ILT3, ILT4, HEVEM, um agonista ou anticorpo que se liga ao receptor de ligante Toll e um ligante que se liga especificamente a B7-H3. Um ligante co-estimulatório também abrange, inter alia, um anticorpo que se liga especificamente a uma molécula co-eestimulatória presente em uma célula T, como mas não se limitando a, CD27, CD28, 4-1BB, OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, antígeno-1 associado à função de linfócito (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, e um ligante que se liga especificamente a CD83.
[0151]Uma “molécula co-estimulatória” refere-se a uma molécula em uma célula imune inata que é usada para aumentar ou reduzir o estímulo inicial. Por exemplo, os receptores de reconhecimento de padrão associado a patógeno, como TLR (aumentar) ou o eixo CD47/SIRPα (reduzir), são moléculas em células imunes inatas. As moléculas co-estimulatórias incluem, porém sem limitação, TCR, CD3 zeta, CD3 gama, CD3 delta, CD3 épsilon, CD86, FcR gama comum, FcR beta (Fc Épsilon R1b), CD79a, CD79b, Fcgama RIIa, DAP10, DAP12, receptor de células T (TCR), CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, antígeno-1 associado à função de linfócito (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, um ligante que se liga especificamente a CD83, CDS, ICAM-1, GITR, BAFFR, HVEM (LIGHTR), SLAMF7, NKp80 (KLRF1), CD127, CD160, CD19, CD4, CD8alfa, CD8beta, IL2R beta, IL2R gama, IL7R alfa, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA- 1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tátil), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, NKp44, NKp30, NKp46, NKG2D, outras moléculas co-estimulatórias descritas no presente documento, qualquer derivado, variante, ou fragmento do mesmo, qualquer sequência sintética qualquer sequência sintética de uma molécula co-estimulatória que tem a mesma capacidade funcional, e qualquer combinação dos mesmos.
[0152]Um “sinal co-estimulatório”, conforme o uso em questão, refere-se a um sinal, que em combinação com um sinal primário, como ativação do CAR em um macrófago, resulta na ativação do macrófago.
[0153]O termo “citotóxico” ou “citotoxicidade” refere-se ao extermínio ou dano a células. Em uma modalidade, a citotoxicidade das células metabolicamente melhoradas é aprimorada, por exemplo, atividade citolítica aumentada de macrófagos.
[0154]Uma “doença” é um estado de saúde de um animal em que o animal não pode manter a homeostase, e em que se a doença não for melhorada, então, a saúde do animal continua a se deteriorar. Em contrapartida, um “distúrbio” em um animal é um estado de saúde em que o animal é capaz de manter a homeostase, porém em que o estado de saúde do animal é menos favorável do que poderia ser na ausência do distúrbio. Sem tratamento, um distúrbio não causa necessariamente uma redução adicional no estado de saúde do animal.
[0155]“Quantidade eficaz” ou “quantidade terapeuticamente eficaz” são usados de forma intercambiável no presente documento, e se referem a uma quantidade de um composto, formulação, material, ou composição, como descrito no presente documento eficaz para obter um resultado biológico específico ou fornecer um benefício terapêutico ou profilático. Tais resultados incluem, porém sem limitação, atividade antitumoral como determinado por quaisquer meios adequados na técnica.
[0156]“Codificação” refere-se à propriedade inerente de sequências específicas de nucleotídeos em um polinucleotídeo, como um gene, um cDNA, ou um mRNA, para servir como modelos para a síntese de outros polímeros e macromoléculas em processos biológicos que têm uma sequência definida de nucleotídeos (isto é, rRNA, tRNA e mRNA) ou uma sequência definida de aminoácidos e as propriedades biológicas resultantes dos mesmos. Dessa forma, um gene codifica uma proteína se a transcrição e tradução de mRNA correspondente àquele gene produz a proteína em uma célula ou outro sistema biológico. Tanto a cadeia de codificação, cuja sequência de nucleotídeos é idêntica à sequência de mRNA e é geralmente é fornecida em listagens de sequências, e a cadeia de não codificação, usada como o modelo para a transcrição de um gene ou cDNA, pode ser chamada de codificação da proteína ou outro produto daquele gene ou cDNA.
[0157]Conforme o uso em questão “endógeno” refere-se a qualquer material derivado ou produzido dentro de um organismo, célula, tecido ou sistema.
[0158]Conforme o uso em questão, o termo “exógeno” refere-se a qualquer material introduzido ou produzido fora de um organismo, célula, tecido ou sistema.
[0159]O termo “expandir” conforme o uso em questão refere-se ao aumento no número, como em um aumento no número de monócitos/macrófagos. Em uma modalidade, os monócitos/macrófagos que são expandidos ex vivo aumentam em número em relação ao número originalmente presente na cultura. Em outra modalidade, os monócitos/macrófagos que são expandidos ex vivo aumentam em número em relação a outros tipos de célula na cultura. O termo “ex vivo”, conforme o uso em questão, refere-se a células que foram removidas de um organismo vivo, (por exemplo, um ser humano) e propagadas fora do organismo (por exemplo, em uma placa de cultura, tubo de ensaio ou biorreator).
[0160]O termo “expressão” conforme o uso em questão é definido como a transcrição e/ou tradução de uma sequência de nucleotídeos específica conduzida por seu promotor.
[0161]“Vetor de expressão” refere-se a um vetor que compreende um polinucleotídeo recombinante que compreende sequências de controle de expressão ligadas de maneira funcional a uma sequência de nucleotídeos que será expressa. Um vetor de expressão compreende elementos de atuação cis suficientes para a expressão; outros elementos para a expressão podem ser fornecidos pela célula hospedeira ou em um sistema de expressão in vitro. Os vetores de expressão incluem aqueles conhecidos na técnica, como cosmídeos, plasmídeos (por exemplo, nus ou contidos em lipossomas) e vírus (por exemplo, lentivírus, retrovírus, adenovírus, e vírus adeno-associados) que incorporam o polinucleotídeo recombinante.
[0162]“Homólogo” conforme o uso em questão, refere-se à identidade de sequência de subunidade entre duas moléculas poliméricas, por exemplo, entre duas moléculas de ácido nucleico, como, duas moléculas de DNA ou duas moléculas de RNA, ou entre duas moléculas de polipeptídeo. Quando uma posição de subunidade em ambas as duas moléculas for ocupada pela mesma subunidade monomérica; por exemplo, se uma posição em cada uma das duas moléculas de DNA for ocupada por adenina, então a mesmas são homólogas naquela posição. A homologia entre duas sequências é uma função direta do número de posições correlacionadas ou homólogas; por exemplo, se metade (por exemplo, cinco posições em um polímero com dezenas de subunidades de comprimento) das posições em duas sequências for homóloga, as duas sequências são 50% homólogas; se 90% das posições (por exemplo, 9 de 10), forem correlacionadas ou homólogas, as duas sequências são 90% homólogas. Conforme aplicado ao ácido nucleico ou proteína, “homólogo” conforme o uso em questão refere-se a uma sequência que tem cerca de 50% de identidade de sequência. Com mais preferência, a sequência homóloga tem cerca de 75% de identidade de sequência, com mais preferência ainda, tem pelo menos cerca de 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% de identidade de sequência.
[0163] Formas “humanizadas” de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos) são imunoglobulinas quiméricas, cadeias de imunoglobulina ou fragmentos das mesmas (como Fv, Fab, Fab’, F(ab’)2 ou outras subsequências de ligação ao antígeno de anticorpos) que contêm sequência mínima derivada de imunoglobulina não humana. Na maior parte, os anticorpos humanizados são imunoglobulinas humanas (anticorpo receptor) em que os resíduos de uma região determinante complementar (CDR) do receptor são substituídos por resíduos de uma CDR de uma espécie não humana (anticorpo doador) como camundongo, rato ou coelho que tem especificidade, afinidade e capacidade desejadas. Em alguns casos, os resíduos de região de estrutura Fv (FR) da imunoglobulina humana são substituídas por resíduos não humanos correspondentes. Além disso, os anticorpos humanizados podem compreender resíduos que não são encontrados no anticorpo receptor nem na CDR importada ou sequências de estrutura. Essas modificações são feitas para aprimorar e otimizar ainda mais o desempenho de anticorpo. Em geral, o anticorpo humanizado compreenderá substancialmente todos ou pelo menos um, e tipicamente dois, domínios variáveis, em que todas ou substancialmente todas as regiões CDR correspondem àquelas de uma imunoglobulina não humana e todas ou substancialmente todas as regiões FR são aquelas de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado também irá compreender idealmente pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente aquela de uma imunoglobulina humana. Para detalhes adicionais, consulte Jones et al., Nature, 321: 522 a 525 1986; Reichmann et al., Nature, 332: 323 a 329, 1988; Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593 a 596, 1992.
[0164]“Completamente humana” refere-se a uma imunoglobulina, como um anticorpo, em que a molécula inteira é de origem humana ou consiste em uma sequência de aminoácidos idêntica a uma forma humana do anticorpo.
[0165]“Identidade” conforme o uso em questão refere-se à identidade de sequência de subunidade entre duas moléculas poliméricas particularmente entre duas moléculas de aminoácido, como, entre duas moléculas de polipeptídeo. Quando duas sequências de aminoácidos têm os mesmos resíduos nas mesmas posições; por exemplo, se uma posição em cada uma das duas moléculas de polipeptídeo for ocupada por uma Arginina, então, a mesmas são idênticas naquela posição. A identidade ou extensão na qual duas sequências de aminoácidos têm os mesmos resíduos nas mesmas posições em um alinhamento é geralmente expressa como uma porcentagem. A identidade entre duas sequências de aminoácidos é uma função direta do número de posições correlacionadas ou idênticas; por exemplo, se metade (por exemplo, cinco posições em um polímero com dezenas de aminoácidos de comprimento) das posições em duas sequências for idêntica, as duas sequências são 50% idênticas; se 90% das posições (por exemplo, 9 de 10), forem correlacionadas ou homólogas, as duas sequências são 90% idênticas.
[0166]Por “substancialmente idêntico” entende-se um polipeptídeo ou molécula de ácido nucleico que exibe pelo menos 50% de identidade com uma sequência de aminoácidos de referência (por exemplo, qualquer uma das sequências de aminoácidos descritas no presente documento) ou sequência de ácido nucleico (por exemplo, qualquer uma das sequências de ácido nucleicos descritas no presente documento). De preferência, tal sequência é pelo menos 60%, com mais preferência, 80% ou 85%, e com mais preferência, 90%, 95% ou ainda 99% idêntica no nível de aminoácido ou ácido nucleico à sequência usada para comparação.
[0167]A sequência guia de ácido nucleico pode ser complementar a uma fita (sequência de nucleotídeos) de um sítio alvo de DNA dupla fita. A porcentagem de complementação entre a sequência guia de ácido nucleico e a sequência alvo pode ser pelo menos 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 63%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%. A sequência-guia de ácido nucleico pode ter pelo menos 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 ou mais nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência-guia de ácido nucleico compreende uma extensão contígua de 10 a 40 nucleotídeos. O domínio de alvejamento variável pode ser composto de uma sequência de DNA, uma sequência de RNA, uma sequência de DNA modificada, uma sequência de RNA modificada (consulte, por exemplo, as modificações descritas no presente documento), ou qualquer combinação dos mesmos.
[0168]A identidade de sequência é tipicamente medida usando o software para análise de sequências (por exemplo, Sequence Analysis Software Package of the Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, 1710 University Avenue, Madison, Wis. 53705, BLAST, BESTFIT, GAP, ou programas PILEUP/PRETTYBOX). Tal software correlaciona sequências idênticas ou similares atribuindo graus de homologia a várias substituições, deleções e/ou outras modificações. As substituições conservadoras tipicamente incluem substituições dentro dos seguintes grupos: glicina, alanina; valina, isoleucina, leucina; ácido aspártico, ácido glutâmico, asparagina, glutamina; serina, treonina; lisina, arginina; e fenilalanina, tirosina. Em uma abordagem exemplificativa para determinar o grau de identidade, um programa BLAST pode ser usado, com uma pontuação de probabilidade entre e-3 e e-100 indicando uma sequência estritamente relacionada.
[0169]O termo “imunoglobulina” ou “Ig,” conforme o uso em questão é definido como uma classe de proteínas, que funcionam como anticorpos. Os anticorpos expressos por células B, às vezes, são chamados do BCR (receptor de células B) ou receptor de antígeno. Os cinco membros incluídos nessa classe de proteínas são IgA, IgG, IgM, IgD e IgE. IgA é o anticorpo primário que está presente em secreções corporais, como saliva, lágrimas, leite materno, secreções gastrointestinais e secreções mucosas dos tratos respiratório e genitourinário. IgG é o anticorpo de circulação mais comum. IgM é a imunoglobulina principal produzida na resposta imune principal na maioria dos indivíduos. Essa é a imunoglobulina mais eficiente em aglutinação, fixação ao complemento, e outras respostas de anticorpos, e é importante na defesa contra bactérias e vírus. IgD é a imunoglobulina que não tem função de anticorpo conhecido, porém pode servir como um receptor de antígeno. IgE é a imunoglobulina que media a hipersensibilidade imediata causando a liberação de mediadores a partir de células de mastócitos e basófilos mediante a exposição ao alérgeno.
[0170]O termo “resposta imune” conforme o uso em questão é definido como uma resposta celular a um antígeno que ocorre quando os linfócitos identificam moléculas antigênicas como estranhas e induzem a formação de anticorpos e/o ativam linfócitos para remover o antígeno.
[0171]Conforme o uso em questão, um “material instrucional” inclui uma publicação, um registro, um diagrama, ou qualquer outro meio de expressão que pode ser usado para comunicar a utilidade das composições e métodos da invenção. O material instrucional do kit da invenção pode, por exemplo, ser fixado a um recipiente que contém o ácido nucleico, peptídeo e/ou composição da invenção ou ser enviado juntamente com um recipiente que contém o ácido nucleico, peptídeo e/ou composição. Alternativamente, o material instrucional pode ser enviado separadamente do recipiente com a intenção que o material instrucional e o composto sejam usados cooperativamente pelo receptor.
[0172]“Isolado” significa alterado ou removido do estado natural. Por exemplo, um ácido nucleico ou um peptídeo naturalmente presente em um animal vivo não é “isolado”, porém o mesmo ácido nucleico ou peptídeo parcial ou completamente separado dos materiais coexistentes de seu estado natural é “isolado”. Um ácido nucleico ou proteína isolada pode se apresentar sob a forma substancialmente purificada, ou pode se apresentar em um ambiente não nativo como, por exemplo, uma célula hospedeira.
[0173]Um “lentivírus” conforme o uso em questão refere-se a um gênero da família Retroviridae. Os lentivírus são exclusivos dentre os retrovírus pelo fato de serem capazes de infectar células não divisoras; os mesmos podem distribuir uma quantidade significativa de informações genéticas no DNA da célula hospedeira, então os mesmos são um dos métodos mais eficientes de um vetor de entrega de genes. HIV, SIV e FIV são exemplos de lentivírus. Os vetores derivados de lentivírus oferecem os meios para obter níveis significativos de transferência de gene in vivo.
[0174]Pelo termo “modificado” conforme o uso em questão, entende-se um estado ou estrutura alterada de uma molécula ou célula da invenção. As moléculas podem ser modificadas de muitas maneiras, incluindo de forma química, estrutural e funcional. As células podem ser modificadas através da introdução de ácidos nucleicos.
[0175]Pelo termo “modulação”, conforme o uso em questão, entende-se a mediação de um aumento ou redução detectável no nível de uma resposta em um indivíduo em comparação com o nível de uma resposta no indivíduo na ausência de um tratamento ou composto e/ou em comparação com o nível de uma resposta em um indivíduo, de outro modo, idêntico, porém não tratado. O termo abrange perturbar e/ou afetar um sinal nativo ou resposta mediando, assim, uma resposta terapêutica benéfica em um indivíduo, de preferência, um ser humano.
[0176]No contexto da presente invenção, as seguintes abreviações das bases de ácido nucleico comumente ocorrentes são usadas. “A” refere-se à adenosina, “C” refere-se à citosina, “G” refere-se à guanosina, “T” refere-se à timidina e “U” refere-se à uridina.
[0177]Exceto onde especificado em contrário, uma “sequência de nucleotídeos que codifica uma sequência de aminoácidos” inclui as sequências de nucleotídeos que são versões degeneradas umas das outras e que codificam a mesma sequência de aminoácidos. A frase sequência de nucleotídeos que codifica uma proteína ou um RNA também pode incluir íntrons na medida em que a sequência de nucleotídeos que codifica a proteína pode conter em algumas versões um íntron(s).
[0178]O termo “ligado de maneira funcional” refere-se à ligação funcional entre uma sequência reguladora e uma sequência de ácidos nucleicos heteróloga resultando na expressão da última. Por exemplo, uma primeira sequência de ácidos nucleicos está ligada de maneira funcional a uma segunda sequência de ácido nucleico quando a primeira sequência de ácidos nucleicos for colocada em uma relação funcional à segunda sequência de ácidos nucleicos. Por exemplo, um promotor está ligado de maneira funcional a uma sequência de codificação se o promotor afetar a transcrição ou expressão da sequência de codificação. Em geral, as sequências de DNA ligadas de maneira funcional são contíguas e, quando necessário une-se duas regiões de codificação de proteína, no mesmo quadro de leitura.
[0179]O termo antígeno tumoral “superexpresso” ou “superexpressão” de um antígeno tumoral destina-se a indicar um nível de expressão anormal de um antígeno tumoral em uma célula a partir de uma área doente como um tumor sólido dentro de um tecido ou órgão específico do paciente em relação ao nível de expressão em uma célula normal daquele tecido ou órgão. Os pacientes que têm tumores sólidos ou uma malignidade hematológica caracterizada pela superexpressão do antígeno tumoral podem ser determinados por ensaios padrão conhecidos na técnica.
[0180]A administração “parenteral” de uma composição imunogênica inclui, por exemplo, técnicas de injeção ou infusão subcutânea (s.c.), intravenosa (i.v.), intramuscular (i.m.), intratumoral (i.t.) ou intraperitoneal (i.p.), ou intrasternal.
[0181]O termo “polinucleotídeo” conforme o uso em questão é definido como uma cadeia de nucleotídeos. Além disso, ácidos nucleicos são polímeros de nucleotídeos. Dessa forma, ácidos nucleicos e polinucleotídeos conforme o uso em questão são intercambiáveis. O versado na técnica tem o conhecimento geral que ácidos nucleicos são polinucleotídeos, que podem ser hidrolisados nos “nucleotídeos” monoméricos. Os nucleotídeos monoméricos podem ser hidrolisados em nucleosídeos. Conforme o uso em questão os polinucleotídeos incluem, porém sem limitação, todas as sequências de ácidos nucleicos que são obtidas por quaisquer meios disponíveis na técnica, incluindo, sem limitação, meios recombinantes, isto é, a clonagem de sequências de ácidos nucleicos de uma biblioteca recombinante ou um genoma celular, usando tecnologia de clonagem comum e PCR™, e similares, e por meios sintéticos.
[0182]Conforme o uso em questão, os termos “peptídeo”, “polipeptídeo” e “proteína” são usados de forma intercambiável, e se referem a um composto compreendido de resíduos de aminoácidos covalentemente ligados por ligações peptídicas. Uma proteína ou peptídeo deve conter pelo menos dois aminoácidos, e sem limitação, é colocado no número máximo de aminoácidos que podem compreender uma sequência de proteínas ou peptídeos. Os polipeptídeos incluem qualquer peptídeo ou proteína que compreende dois ou mais aminoácidos unidos uns aos outros por ligações peptídicas. Conforme o uso em questão, o termo refere- se tanto a cadeias curtas, que também são comumente chamadas na técnica de peptídeos, oligopeptídeos e oligômeros, por exemplo, e a cadeias mais longas, que em geral são chamadas na técnica de proteínas, das quais há muitos tipos. Os “polipeptídeos” incluem, por exemplo, fragmentos biologicamente ativos, polipeptídeos substancialmente homólogos, oligopeptídeos, homodímeros, heterodímeros, variantes de polipeptídeos, polipeptídeos modificados, derivados, análogos, proteínas de fusão, entre outros. Os polipeptídeos incluem peptídeos naturais, peptídeos recombinantes, peptídeos sintéticos, ou uma combinação dos mesmos.
[0183]O termo “promotor” conforme o uso em questão é definido como uma sequência de DNA reconhecida pela maquinaria sintética da célula, ou maquinaria sintética introduzida, necessária para iniciar a transcrição específica de uma sequência de polinucleotídeos.
[0184]Conforme o uso em questão, o termo “sequência promotora/reguladora” significa uma sequência de ácido nucleico que é necessária para a expressão de um produto de gene ligado de maneira funcional à sequência promotora/reguladora. Em alguns casos, essa sequência pode ser a sequência promotora de núcleo e em outros casos, essa sequência também pode incluir uma sequência potencializadora e outros elementos reguladores que são necessários para a expressão do produto de gene. A sequência promotora/reguladora pode ser, por exemplo, uma que expressa o produto de gene de maneira específico quanto a tecido.
[0185]Um promotor “constitutivo” é uma sequência de nucleotídeos que, quando ligada de maneira funcional a um polinucleotídeo que codifica ou especifica um produto do gene, faz com que o produto do gene seja produzido em uma célula sob a maioria ou todas as condições fisiológicas da célula.
[0186]Um promotor “induzível“ é uma sequência de nucleotídeos que, quando ligada de maneira funcional a um polinucleotídeo que codifica ou especifica um produto do gene, faz com que o produto do gene seja produzido em uma célula substancialmente apenas quando um indutor que corresponde ao promotor está presente na célula.
[0187]Um promotor “específico quanto a tecido” é uma sequência de nucleotídeos que, quando ligada de maneira funcional a um polinucleotídeo codificado ou especificado por um gene, faz com que o produto genético seja produzido em uma célula apenas se a célula for uma célula do tipo de tecido correspondente ao promotor.
[0188]O termo “resistência à imunosupressão” refere-se à falta de supressão ou supressão reduzida de uma atividade ou ativação de sistema imune.
[0189]Uma “via de transdução de sinal” refere-se à relação bioquímica entre uma variedade de moléculas de transdução de sinal que exercem uma função na transmissão de um sinal a partir de uma porção de uma célula para outra porção de uma célula. A frase “receptor de superfície celular” inclui moléculas e complexos de moléculas capazes de receber um sinal e transmitir sinal através da membrana plasmática, de uma célula.
[0190]“Anticorpos de cadeia única” referem-se a anticorpos formados por técnicas de DNA recombinante em que fragmentos de imunoglobulina de cadeia pesada e leve são ligados à região Fv através de um span de aminoácidos modificado por engenharia genética. Vários métodos de geração de anticorpos de cadeia única são conhecidos, inclusive aqueles descritos na patente US n° 4.694.778; Bird (1988) Science 242:423 a 442; Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879 a 5883; Ward et al. (1989) Nature 334:54454; Skerra et al. (1988) Science 242:1038 a 1041.
[0191]Pelo termo “se liga especificamente”, conforme o uso em questão em relação a um anticorpo, entende-se um anticorpo que reconhece um antígeno específico, porém não reconhece ou se liga substancialmente a outras moléculas em uma amostra. Por exemplo, um anticorpo que se liga especificamente a um antígeno a partir de uma espécie também pode se ligar àquele antígeno de uma ou mais espécies. Porém, tal reatividade cruzada de espécies não altera por si só a classificação de um anticorpo como específico. Em outro exemplo, um anticorpo que se liga especificamente a um antígeno também pode se ligar a formas alélicas diferentes do antígeno. Entretanto, tal reatividade cruzada não altera por si só a classificação de um anticorpo como específico. Em alguns casos, os termos “ligação específica” ou “se liga especificamente”, podem ser usados em referência à interação de um anticorpo, uma proteína, ou um peptídeo com uma segunda espécie química, para significar que a interação é dependente da presença de uma estrutura específica (por exemplo, um determinante ou epítopo antigênico) da espécie química; por exemplo, um anticorpo reconhece e se liga a uma estrutura de proteína específica em vez de proteínas em geral. Se um anticorpo for específico quanto a epítopo “A”, a presença de uma molécula contendo epítopo A (ou A livre, não marcado), em uma reação contendo “A” marcado e o anticorpo, reduzirá a quantidade de A marcado ligada ao anticorpo.
[0192]Pelo termo “estimulação”, entende-se uma resposta primária induzida pela ligação de uma molécula estimulatória (por exemplo, um complexo TCR/CD3) com o seu ligante cognato, mediando assim um evento de transdução de sinal, como, porém sem limitação, transdução de sinal através da maquinaria do receptor Fc ou através do CAR sintético. A estimulação pode mediar a expressão alterada de determinadas moléculas, como infraregulação de TGF-beta, e/ou reorganização de estruturas citoesqueléticas e similares.
[0193]Uma “molécula estimulatória” conforme o uso no presente documento, significa uma molécula em um monócito/macrófago que se liga especificamente a um ligante estimulatório cognato presente em uma célula apresentadora de antígeno.
[0194]Um “ligante estimulatório” significa um ligante, conforme o uso em questão, significa um ligante que, quando presente em uma célula apresentadora de antígeno (por exemplo, uma aAPC, uma célula dendrítica, uma célula B e similares) ou célula tumoral pode se ligar especificamente a um parceiro de ligação cognato (chamado no presente documento de uma “molécula estimulatória”) em um monócito/macrófago, mediando assim uma resposta pela célula imune, incluindo, porém sem limitação, ativação, iniciação de uma resposta imune, proliferação e similares . Os ligantes estimuladores são bem conhecidos na técnica e abrangem, inter alia, um ligante do receptor do tipo Toll (TLR), um anticorpo receptor do tipo anti-toll, um agonista e um anticorpo para um receptor de monócito/macrófago. Além disso, citocinas, como interferon-gama, são potentes estimulantes de macrófagos.
[0195]O termo “indivíduo” destina-se a incluir organismos vivos em que uma resposta imune pode ser obtida (por exemplo, mamíferos). Um “indivíduo” ou “paciente,” como usado no presente documento, pode ser um ser humano ou mamífero não humano. Os mamíferos não humanos incluem, por exemplo, gado e animais de estimação, como mamíferos ovinos, bovinos, suínos, caninos, felinos e murinos. De preferência, o indivíduo é um ser humano.
[0196]Conforme o uso em questão, uma célula “substancialmente purificada” é uma célula que é essencialmente isento de outros tipos de célula. Uma célula substancialmente purificada também refere-se a uma célula que foi separada de outros tipos de célula com a quais a mesma está normalmente associada e seu estado de ocorrência natural. Em alguns casos, uma população de células substancialmente purificadas refere-se a uma população homogênea de células. Em outros casos, esse termo refere-se simplesmente a uma célula que foi separada das células com as quais a mesma está naturalmente associada em seu estado natural. Em algumas modalidades, as células são cultivadas in vitro. Em outras modalidades, as células não são cultivadas in vitro.
[0197]Um “sítio alvo” ou “sequência alvo” refere-se a uma sequência genômica de ácidos nucleicos que define uma porção de um ácido nucleico ao qual uma molécula de ligação pode se ligar especificamente sob condições suficientes para a ligação ocorrer.
[0198]Por “alvo” entende-se uma célula, órgão, ou sítio dentro do corpo que está em necessidade de tratamento.
[0199]Conforme o uso em questão, o termo “receptor de células T” ou “TCR” refere-se a um complexo de proteínas membranares que participa da ativação de célula T em resposta à apresentação de antígeno. O TCR é responsável pelo reconhecimento de antígenos ligados a moléculas do complexo principal de histocompatibilidade. O TCR é composto de um heterodímero de uma cadeia alfa (a) e beta (β), embora em algumas células o TCR consista em cadeias gama e delta (y/δ). Os TCRs podem existir em formas alfa/beta e gama/delta, que são estruturalmente similares, porém têm localizações e funções anatômicas diferentes. Cada cadeia é composta de dois domínios extracelulares, um domínio variável e um domínio constante. Em algumas modalidades, o TCR pode ser modificado em qualquer célula que compreende um TCR, incluindo, por exemplo, uma célula T auxiliar, uma célula T citotóxica, uma célula T de memória, célula T reguladora, célula T assassina natural e célula T gama delta.
[0200]O termo “terapêutico” conforme o uso em questão significa um tratamento e/ou profilaxia. Um efeito terapêutico é obtido por supressão, remissão, ou erradicação de um estado de doença.
[0201]O termo “transfectado” ou “transformado” ou “transduzido” conforme o uso em questão refere-se a um processo por meio do qual o ácido nucleico exógeno é transferido ou introduzido na célula hospedeira. Uma célula “transfectada” ou “transformada” ou “transduzida” é uma que foi transfectada, transformada ou transduzida com ácido nucleico exógeno. A célula inclui a célula em questão primária e sua progênie.
[0202]“Tratar” uma doença como o termo usado no presente documento, significa reduzir a frequência ou gravidade de pelo menos um sinal ou sintoma de uma doença ou distúrbio experimentado por um indivíduo.
[0203]O termo “tumor” conforme o uso em questão, refere-se a um crescimento anormal de tecido que pode ser benigno, pré-cancerígeno, maligno ou metastático.
[0204]A frase “sob controle transcricional” ou “ligado de maneira funcional” conforme o uso em questão significa que o promotor está na localização e orientação corretas em relação a um polinucleotídeo para controlar a iniciação de transcrição por RNA polimerase e expressão do polinucleotídeo.
[0205]Um “vetor” é uma composição de substância que compreende um ácido nucleico isolado e que pode ser usada para distribuir o ácido nucleico isolado para o interior de uma célula. Vários vetores são conhecidos na técnica incluindo, porém sem limitação, polinucleotídeos lineares, polinucleotídeos associados a compostos iônicos ou anfifílicos, plasmídeos e vírus. Dessa forma, o termo “vetor” inclui um plasmídeo de replicação autônoma ou um vírus. O termo também deveria ser interpretado como incluindo compostos não plasmídicos e não virais que facilitam a transferência de ácido nucleico para dentro das células, como, por exemplo, compostos de polilisina, lipossomas, e similares. Exemplos de vetores virais incluem, porém sem limitação, vetores adenovirais, vetores virais adeno- associados, vetores retrovirais, vetores lentivirais, e similares.
[0206]Intervalos: ao longo desta revelação, vários aspectos da invenção podem ser apresentados em um formato de intervalo. Deve-se compreender que a descrição em formato de intervalo serve apenas para conveniência e brevidade e não deve ser interpretada como uma limitação inflexível no escopo da invenção. Consequentemente, a descrição de um intervalo deve ser considerada como tendo revelado especificamente todos os possíveis subintervalos, bem como valores numéricos individuais dentro daquele intervalo. Por exemplo, a descrição de um intervalo como de 1 a 6 deve ser considerada como tendo revelado especificamente os subintervalos como de 1 a 3, de 1 a 4, de 1 a 5, de 2 a 4, de 2 a 6, de 3 a 6 etc., bem como números individuais daquele intervalo, por exemplo, 1, 2, 2.7, 3, 4, 5, 5.3 e 6. Isto se aplica independentemente da amplitude do intervalo.
[0207]O acúmulo de evidências sugere que os macrófagos são abundantes no microambiente tumoral de vários tipos de câncer, em que os mesmos podem adotar um fenótipo classicamente ativado (M1, antitumoral) ou um alternativamente ativado (M2, pró-tumor). Os macrófagos são potentes efetores do sistema imune inato e são capazes de pelo menos três funções antitumorais distintas: fagocitose, citotoxicidade celular e apresentação de antígeno para orquestrar uma resposta imune adaptável. Embora as células T necessitem de ativação dependente do antígeno através do receptor de células T ou do imunorreceptor quimérico, os macrófagos podem ser ativados de várias maneiras. A ativação direta de macrófago é independente de antígeno, dependendo de mecanismos como o reconhecimento de padrões moleculares associados a patógeno por receptores tipo Toll (TLRs). A ativação mediada por complexo imune é dependente de antígeno, porém exige a presença de anticorpos específicos de antígeno e a ausência da interação inibitória de CD47-SIRPα.
[0208]Os macrófagos associados a tumor revelaram ser reprogramáveis pelo microambiente tumoral para se tornarem os principais imunossupressores no microambiente. Portanto, a capacidade de elaborar geneticamente macrófagos para impedir o desenvolvimento de uma reprogramação genética imunossupressora poderia representar um avanço vertical no campo.
[0209]A presente invenção inclui composições e métodos para tratar uma malignidade em um indivíduo. A invenção inclui a expressão de um receptor de antígeno quimérico em um monócito, macrófago ou célula dendrítica. Tal célula modificada é recrutada para o microambiente tumoral em que a mesma atua como um efetor imune potente infiltrando o tumor e exterminando as células alvo.
[0210]Em um aspecto da invenção, um monócito modificado, macrófago, ou célula dendrítica é gerado expressando-se um CAR. Logo, a presente invenção abrange um CAR e uma construção de ácido nucleico que codifica um CAR, em que o CAR inclui um domínio de ligação ao antígeno, um domínio transmembranar e um domínio intracelular.
[0211] Em um aspecto, a invenção inclui uma célula modificada que compreende um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende um domínio de ligação ao antígeno, um domínio transmembranar e um domínio intracelular de uma molécula co-estimulatória, e em que a célula é um monócito, macrófago, ou célula dendrítica que possui atividade efetora direcionada. Em outro aspecto, a invenção inclui uma célula modificada que compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que a sequência de ácido nucleico compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica um domínio de ligação ao antígeno, uma sequência de ácido nucleico que codifica um domínio transmembranar e uma sequência de ácido nucleico que codifica um domínio intracelular de uma molécula co-estimulatória, e em que a célula é um monócito, macrófago, ou célula dendrítica que expressa o CAR e possui atividade efetora direcionada. Em uma modalidade, a atividade efetora direcionada é voltada contra um antígeno em um a célula alvo que se liga especificamente ao domínio de ligação ao antígeno do CAR. Em outra modalidade, a atividade efetora direcionada é selecionado a partir do grupo que consiste em fagocitose, citotoxicidade celular direcionada, apresentação de antígeno e secreção de citocina.
[0212]Em uma modalidade, o CAR da invenção compreende um domínio de ligação ao antígeno que se liga a um antígeno em uma célula alvo. Exemplos de marcadores de superfície celular que podem atuar como um antígeno que se liga ao domínio de ligação ao antígeno do CAR incluem aqueles associados a infecções virais, bacterianas e parasíticas, doenças autoimunes e células cancerígenas.
[0213]A escolha do domínio de ligação ao antígeno depende do tipo e do número de antígenos que estão presentes na superfície de uma célula alvo. Por exemplo, o domínio de ligação ao antígeno pode ser escolhido para reconhecer um antígeno que atua como um marcador de superfície celular em uma célula alvo associada a um estado de doença particular.
[0214]Em uma modalidade, o domínio de ligação ao antígeno se liga a um antígeno tumoral, tal como um antígeno que seja específico para um tumor ou câncer de interesse. Em uma modalidade, o antígeno tumoral da presente invenção compreende um ou mais epítopos de câncer antigênicos. Exemplos não limitantes de antígenos associados a tumor incluem CD19; CD123; CD22; CD30; CD171; CS-1 (também referidos como CD2 subconjunto 1, CRACC, SLAMF7, CD319 e 19A24); molécula-1 tipo lectina tipo C (CLL-1 ou CLECL1); CD33; variante de receptor de fator de crescimento epidérmico III (EGFRvIII); gangliosideo G2 (GD2); gangliosideo GD3 (aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer); maturação de célula B de membro da família do receptor TNF (BCMA); antígeno Tn ((Tn Ag) ou (GalNAcα-Ser/Thr)); antígeno membranar próstata-específico (PSMA); receptor 1 orfano tipo tirosina quinase receptor (ROR1); Tirosina Quinase tipo Fms 3 (FLT3); glicoproteína associada a tumor 72 (TAG72); CD38; CD44v6; antígeno carcinoembriônico (CEA); molécula de adesão celular epitelial (EPCAM); B7H3 (CD276); KIT (CD117); subunidade.e de receptor de interleucina-13 alfa-2 (IL-13Ra2 ou CD213A2); Mesotelina; receptor de interleucina 11 alfa (IL-11Ra); antígeno de célula-tronco da próstata (PSCA); Protease Serina 21 (Testisina ou PRSS21); receptor de fator de ecrescimento endotelial vascular 2 (VEGFR2); antígeno de Lewis(Y); CD24; receptor de fator de crescimento derivado de plaquetas beta (PDGFR-beta); antígeno-4 embriônico estágio-específico (SSEA-4); CD20; receptor de folato alfa; tirosina receptor-proteína quinase ERBB2 (Her2/neu); Mucina 1, superfície celular associada (MUC1); receptor de fator de crescimento epidérmico (EGFR); molécula de adesão celular neural (NCAM); Prostase; fosfatase de ácido prostático (PAP); fator de alongamento 2 mutado (ELF2M); Efrina B2; proteína alfa de ativação de fibroblasto (FAP); receptor de fator de crescimento 1 tipo insulina (receptor IGF-I), anidrase carbônica IX (CAIX); Subunidade de Proteassoma (Prossoma, Macropaina), Beta Tipo, 9 (LMP2); glicoproteína 100 (gp100); proteína de fusão de oncogene que consiste em uma região de grupamento de ponto de ruptura (BCR) e homólogo de oncogene viral de leucemina de murinho de Abelson 1 (Abl) (bcr-abl); tirosinase; receptor 2 de efrina tipo A (EphA2); Fucosil GM1; molécula de adesão de Lewis sialil (sLe); gangliosídeo GM3 (aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1- 4)bDGlcp(1-1)Cer); transglutaminase 5 (TGS5); antígeno associado à metanoma de alto peso molecular (HMWMAA); o-acetyl-GD2 gangliosídeo (OAcGD2); receptor beta de folato; marcador endotelial tumoral 1 (TEM1/CD248); marcador endotelial tumoral 7-relacionado (TEM7R); claudina 6 (CLDN6); receptor de hormônio estimulante da tireoide (TSHR); receptor acoplado à proteína G classe C grupo 5, membro D (GPRC5D); fase de leitura abertura de cromossomo X 61 (CXORF61); CD97; CD179a; linfoma quinase anaplásico (ALK); ácido polissiálico; placenta- específico 1 (PLAC1); porção de hexassacarídeo de glicoceramida globoH (GloboH); antígeno de diferenciação de glândula mamária (NY-BR-1); uroplacina 2 (UPK2); receptor 1 do vírus da hepatite A (HAVCR1); adrenoceptor beta 3 (ADRB3); panexina 3 (PANX3); receptor acoplado à proteína G 20 (GPR20); complexo de antígeno linfocítico 6, locus K 9 (LY6K); receptor olfativo 51E2 (OR51E2); proteína de Fase de Leitura Alternada TCR Gama (TARP); proteína de tumor de Wilms (WT1); antígeno de câncer de testículo 1 (NY-ESO-1); antígeno de câncer de testículo 2 (LAGE-1a); antígeno associado a melanoma 1 (MAGE-A1); gene variante de translocação ETS 6, situado no cromossomo 12p (ETV6-AML); proteína de esperma 17 (SPA17); Família de Antígeno X, Membro 1A (XAGE1); receptor de superfície celular de ligação a angiopoietina 2 (Tie 2); antígeno 1 de melanoma e câncer de testículo (MAD-CT-1); antígeno 2 de melanoma e câncer de testículo (MAD-CT-2); antígeno relacionado a Fos 1; proteína tumoral p53 (p53); mutante p53; prosteina; sobrevivência; telomerase; antígeno tumoral-1 de carcinoma da próstata (PCTA-1 ou Galectina 8), antígeno de melanoma reconhecido por células T 1 (MelanA ou MART1); sarcoma de ratos (Ras) mutante; transcriptase reversa de Telomerase humana (hTERT); pontos de ruptura de translocação de sarcoma; inibidor de melanoma de apoptose (ML-IAP); ERG (gene de fusão ETS de protease transmembranar, serina 2 (TMPRSS2)); N-Acetil glucosaminil-transferase V (NA17); proteína Pax-3 de caixa pareada (PAX3); receptor de andrógeno; Ciclina B1; homólogo derivado de neroblastoma de oncogene vital de mioelocitomatose aviária myc (MYCN); Membro da família de Homólogos Ras C (RhoC); proteína 2 relacioanda a tirosinase (TRP-2); Citocromo P450 1B1 (CYP1B1); fator de ligação a CCCTC tipo (proteína de dedo de zinco) (BORIS ou Irmão do Regulador de Sítios Impressos), Antigeno de Carcinoma de Células Escamosas reconhecido por Células T 3 (SART3); proteína Pax-5 de caixa pareada (PAX5); proteína de ligação a proacrosina sp32 (OY-TES1); proteína tirosina quinase específica a linfócito (LCK); proteína 4 de quinase âncora A 4 (AKAP-4); sarcoma sinovial, ponto de ruptura X 2 (SSX2); Receptor para Produtos Finais de Glicação Avançada (RAGE-1); renal ubíquo 1 (RU1); renal ubíquo 2 (RU2); legumaina; vírus de papiloma humano E6 (HPV E6); vírus de papiloma humano E7 (HPV E7); carboxil esterase intestinal; proteína de choque térmico 70-2 mutada (mut hsp70-2); CD79a; CD79b; CD72; receptor 1 tipo imunoglobulina associada a leucócito (LAIR1); fragmento Fc de receptor IgA (FCAR ou CD89); membro 2 da subfamília A de receptor tipo imunoglobulina associada a leucócito (LILRA2); membro da família tipo molécula CD300 f (CD300LF); domínio de lectina tipo C família 12 membro A (CLEC12A); antígeno de célula estromal de medula óssea 2 (BST2); receptor tipo 2 de hormônio tipo mucina contendo módulo tipo EGF (EMR2); antígeno de linfócito 75 (LY75); Glipicano-3 (GPC3); receptor Fc tipo 5 (FCRL5); e polipeptídeo tipo lambda de imunoglobulina 1 (IGLL1).
[0215]O domínio de ligação ao antígeno pode incluir qualquer domínio que se ligue ao antígeno e pode incluir, sem limitação, um anticorpo monoclonal, um anticorpo policlonal, um anticorpo sintético, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo não humano, e qualquer fragmento do mesmo. Logo, em uma modalidade, a porção de domínio de ligação ao antígeno compreende um anticorpo de mamífero ou um fragmento do mesmo. Em outra modalidade, o domínio de ligação ao antígeno do CAR é selecionado a partir do grupo que consiste em um anticorpo anti-CD19, um anticorpo anti-HER2, e um fragmento do mesmo.
[0216]Em alguns exemplos, o domínio de ligação ao antígeno é derivado a partir da mesma espécie na qual o CAR será ultimamente usado. Por exemplo, para uso em seres humanos, o domínio de ligação ao antígeno do CAR compreende um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, ou um fragmento dos mesmos.
[0217]Em alguns aspectos da invenção, o domínio de ligação ao antígeno é operacionalmente ligado a outro domínio do CAR, tal como o domínio transmembranar ou o domínio intracelular, para expressão na célula. Em uma modalidade, um ácido nucleico que codifica o domínio de ligação ao antígeno é operacionalmente ligado a um ácido nucleico que codifica um domínio transmembranar e um ácido nucleico que codifica um domínio intracelular.
[0218]Em relação ao domínio transmembranar, o CAR pode ser projetado para compreender um domínio transmembranar que conecta o domínio de ligação ao antígeno do CAR ao domínio intracelular. Em uma modalidade, o domínio transmembranar é naturalmente associado a um ou mais domínios no CAR. Em alguns casos, o domínio transmembranar pode ser selecionado ou modificado por substituição de aminoácido para evitar a ligação desses domínios aos domínios transmembranares de proteínas de membrana superficial iguais ou diferentes para minimizar interações com outros membros do complexo receptor.
[0219]O domínio transmembranar pode ser derivado seja a partir de uma fonte natural ou a partir de uma forma sintética. Quando a fonte for natural, o domínio pode ser derivado a partir de qualquer proteína ligada à membrana ou transmembranar. As regiões transmembranas de uso particular nesta invenção podem ser derivadas (isto é, compreende pelo menos as regiões transmembranares de) a partir da cadeia alfa, beta ou zeta do receptor de célula T, CD28, CD3 épsilon, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, receptor tipo Toll 1 (TLR1), TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, e TLR9. Em alguns casos, uma variedade de dobradiças humanas pode ser empregada, bem como incluindo a dobradiça Ig humana (imunoglobulina).
[0220]Em uma modalidade, o domínio transmembranar pode ser sintética, sendo que nesse caso o mesmo compreenderá predominantemente resíduos hidrofóbicos, tais como leucina e valina. De preferência, um tripleto de fenilalanina, triptofano e valina será encontrado em cada extremidade de um domínio transmembranar sintético.
[0221]O domínio intracelular ou, de outro modo, o domínio citoplásmico do CAR, inclui um domínio intracelular igual ou similar à sinalização intracelular quimérica descrita no presente documento, e é responsável pela ativação da célula na qual o CAR é expressado.
[0222]Em uma modalidade, o domínio intracelular do CAR inclui um domínio responsável pela ativação e/ou transdução de sinal.
[0223]Exemplos de um domínio intracelular para uso na invenção incluem, mas não se limitam a, porção citoplásmica de um receptor superficial, molécula co- estimulatória, e qualquer molécula que atue em conjunto para iniciar a transdução de sinal no monócito, macrófago ou célula dendrítica, bem como qualquer derivado ou variante desses elementos e qualquer sequência sintética que tenha a mesma capacidade funcional.
[0224]Exemplos do domínio intracelular incluem um fragmento ou domínio de uma ou mais moléculas ou receptores incluindo, sem limitação, TCR, CD3 zeta, CD3 gama, CD3 delta, CD3 épsilon, CD86, FcR gama comum, FcR beta (Fc Épsilon R1b), CD79a, CD79b, Fcgama RIIa, DAP10, DAP12, receptor de célula T (TCR), CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, antígeno-1 associado à função de linfócito (LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, um ligante que se liga especificamente a CD83, CDS, ICAM-1, GITR, BAFFR, HVEM (LIGHTR), SLAMF7, NKp80 (KLRF1), CD127, CD160, CD19, CD4, CD8alfa, CD8beta, IL2R beta, IL2R gama, IL7R alfa, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA- 1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, NKp44, NKp30, NKp46, NKG2D, receptor tipo Toll 1 (TLR1), TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, outras moléculas co-estimulatórias descritas no presente documento, qualquer derivado, variante, ou fragmento dos mesmos, qualquer sequência sintética de uma molécula co-estimulatória que tenha a mesma capacidade funcional, e qualquer combinação dos mesmos.
[0225]Em uma modalidade, o domínio intracelular do CAR compreende domínios de sinalização duplos, tais como 41BB, CD28, ICOS, TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLR10, TLR11, cadeia beta de receptor CD116, CSF1-R, LRP1/CD91, SR-A1, SR-A2, MARCO, SR-CL1, SR-CL2, SR-C, SR-E, CR1, CR3, CR4, dectina 1, DEC-205, DC-SIGN, CD14, CD36, LOX-1, CD11b, juntos a quaisquer domínios de sinalização listados no parágrafo anterior e qualquer combinação. Em outra modalidade, o domínio intracelular do CAR inclui qualquer porção de uma ou mais moléculas co-estimulatória, tal como pelo menos um domínio de sinalização de CD3, cadeia Fc épsilon RI gama, qualquer derivado ou variante do mesmo, qualquer sequência sintética do mesmo que tenha a mesma capacidade funcional, e qualquer combinação dos mesmos.
[0226]Entre o domínio de ligação ao antígeno e o domínio transmembranar do CAR, ou entre o domínio intracelular e o domínio transmembranar do CAR, um domínio espaçador pode ser incorporado. Conforme o uso em questão, o termo “domínio espaçador” significa, em geral, qualquer oligopeptídeo ou polipeptídeo que funcione para ligar o domínio transmembranar a qualquer domínio de ligação ao antígeno ou domínio intracelular na cadeia de polipeptídeo. Em uma modalidade, o domínio espaçador pode compreender até 300 aminoácidos, de preferência, 10 a 100 aminoácidos e, com a máxima preferência, 25 a 50 aminoácidos. Em outra modalidade, um ligante de oligopeptídeo ou polipeptídeo curto, de preferência, entre 2 e 10 aminoácidos de comprimento pode formar a ligação entre o domínio transmembranar e o domínio intracelular do CAR. Um exemplo de um ligante inclui um dupleto glicina-serina.
[0227]Pode ser preferível usar anticorpos humanos ou fragmentos dos mesmos ao usar o domínio de ligação ao antígeno de um CAR. Anticorpos completamente humanos são particularmente desejáveis para o tratamento terapêutico de indivíduos humanos. Os anticorpos humanos podem ser feitos por uma variedade de métodos conhecidos na técnica incluindo métodos de exibição de fagos usando bibliotecas de anticorpos derivadas a partir de sequências de imunoglobulina humana, incluindo aperfeiçoamentos a essas técnicas. Consulte, também, as Patentes nos U.S. 4.444.887 e 4.716.111; e as Publicações PCT WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 e WO 91/10741; estando cada uma dessas incorporadas ao presente documento em suas totalidades a título de referência.
[0228]Os anticorpos humanos também podem ser produzidos usando camundongos transgênicos que podem ser incapazes de expressar imunoglobulinas endógenas funcionais, mas que podem expressar genes de imunoglobulina humana. Por exemplo, os complexos de gene de imunoglobulina humana de cadeia pesada e cadeia leve podem ser introduzidos aleatoriamente ou por recombinação homóloga em células-tronco embrionárias de camundongos. Alternativamente, a região variável humana, região constante, e região de diversidade podem ser introduzidas em células-tronco embrionárias de camundongos além dos genes humanos de cadeia pesada e cadeia leve. Os genes de imunoglobulina de camundongos de cadeia pesada e cadeia leve podem ser tornados separadamente não funcionais ou simultaneamente com a introdução de loci de imunoglobulina humana por recombinação homóloga. Por exemplo, descreveu-se que a deleção homozigoto do gene de região de união (JH) de cadeia pesada de anticorpo gene em camundongos mutantes quiméricos e de linhagem germinativa resulta em uma inibição completa de produção de anticorpos endógenos. As células-tronco embrionárias modificadas são expandidas e microinjetadas em blastócitos para produzir camundongos quiméricos. Os camundongos quiméricos são, então, reproduzidos para produzir uma ninhada homozigoto que expressa anticorpos humanos. Os camundongos transgênicos são imunizados da maneira normal com um antígeno selecionado, por exemplo, todo ou uma porção de um polipeptídeo da invenção. Os anticorpos voltados contra o alvo de escolha podem ser obtidos a partir dos camundongos imunizados transgênicos usando uma tecnologia de hibridoma convencional. Os transgenes de imunoglobulina humana albergado pelos camundongos transgênicos são redispostos durante a diferenciação de células B, e, subsequentemente, são submetidos à troca de classe e mutação somática. Logo, usando essa técnica, é possível produzir anticorpos IgG, IgA, IgM e IgE terapeuticamente úteis, incluindo, sem limitação, IgG1 (gama 1) e IgG3. Para uma visão geral dessa tecnologia para produzir anticorpos humanos, vide, Lonberg and Huszar (Int. Rev. Immunol., 13:6593 (1995)). Para uma discussão detalhada dessa tecnologia para produzir anticorpos humanos e anticorpos monoclonais humanos e protocolos para produzir esses anticorpos, vide, por exemplo, as Publicações nos PCT WO 98/24893, WO 96/34096, e WO 96/33735; e as Patentes nos U.S. 5.413.923; 5.625.126; 5.633.425; 5.569.825; 5.661.016; 5.545.806; 5.814.318; e 5.939.598, estando cada uma dessas incorporadas ao presente documento em suas totalidades a título de referência. Além disso, empresas como Abgenix, Inc. (Freemont, Calif.) e Genpharm (San Jose, Calif.) podem estar engajadas em proporcionar anticorpos humanos voltados contra um antígeno selecionado usando uma tecnologia similar àquela descrita anteriormente. Para uma discussão específica de transferência de um arranjo de genes de imunoglobulina de linhagem germinativa humana em camundongos mutantes de linhagem germinativa que resultarão na produção de anticorpos humanos mediante um desafio de antígenos vide, por exemplo, Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggermann et al., Year in Immunol., 7:33 (1993); e Duchosal et al., Nature, 355:258 (1992).
[0229]Os anticorpos humanos também podem ser derivados a partir de bibliotecas de exibição de fagos (Hoogenboom et al., J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991); Vaughan et al., Nature Biotech., 14:309 (1996)). Pode-se usar a tecnologia de exibição de fagos (McCafferty et al., Nature, 348:552-553 (1990)) para produzir anticorpos humanos e fragmentos de anticorpo in vitro, a partir de repertórios de gene de domínio variável (V) de imunoglobulina de doadores não imunizados. De acordo com essa técnica, os genes de domínio de anticorpo V são clonados em moldura em um gene de proteína de revestimento principal ou secundário de um bacteriófago filamentoso, como M13 ou fd, e exibidos como fragmentos de anticorpo funcionais sobre a superfície da partícula de fago. Devido ao fato de partícula filamentosa conter uma cópia de DNA de fita simples do genoma de fago, as seleções baseadas em propriedades funcionais do anticorpo também resultam na seleção do gene que codifica o anticorpo que exibe essas propriedades. Logo, o fago imita algumas das propriedades da célula B. A exibição de fagos pode ser realizada e uma variedade de formatos; para sua análise vide, por exemplo, Johnson, Kevin S, and Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3:564-571 (1993). Diversas fontes de segmentos de gene V podem ser usadas para exibição de fagos. Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) isolou um arranjo diverso de anticorpos de anti- oxazolona a partir de uma biblioteca combinatória aleatória pequena de genes V derivados a partir dos baços de camundongos não imunizados. Um repertório de genes V de doadores humanos não imunizados pode ser construído e anticorpos a um arranjo diverso de antígenos (incluindo auto-antígenos) podem ser isolados essencialmente seguindo as técnicas descritas por Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991), ou Griffith et al., EMBO J., 12:725-734 (1993). Vide, também, as Patentes nos U.S. 5.565.332 e 5.573.905, estando cada uma dessas incorporadas ao presente documento em suas totalidades a título de referência.
[0230]Os anticorpos humanos também podem ser gerados por células B ativadas in vitro (vide as Patentes nos U.S. 5.567.610 e 5.229.275, estando cada uma dessas incorporadas ao presente documento em suas totalidades a título de referência). Os anticorpos humanos também podem ser gerados in vitro usando técnicas de hibridoma como, sem limitação, aquelas descritas por Roder et al. (Methods Enzymol., 121:140-167 (1986)).
[0231]Alternativamente, em algumas modalidades, um anticorpo não humano pode ser humanizado, onde sequências ou regiões específicas do anticorpo são modificadas para aumentar a similaridade a um anticorpo naturalmente produzido em um ser humano. Por exemplo, na presente invenção, o anticorpo ou fragmento do mesmo pode compreender um scFv de mamífero não humano. Em uma modalidade, a porção de domínio de ligação ao antígeno é humanizada.
[0232]Um anticorpo humanizado pode ser produzido usando uma variedade de técnicas conhecidas na arte, incluindo, sem limitação, enxerto CDR (vide, por exemplo, a Patente Europeia no EP 239,400; Publicação Internacional no WO 91/09967; e Patentes nos U.S. 5.225.539, 5.530.101 e 5.585.089, estando cada uma dessas incorporadas ao presente documento em suas totalidades a título de referência), folheamento ou recomposição (vide, por exemplo, as Patentes Europeias nos EP 592.106 e EP 519.596; Padlan, 1991, Molecular Immunology, 28(4/5):489-498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering, 7(6):805-814; e Roguska et al., 1994, PNAS, 91:969-973, estando cada uma dessas incorporadas ao presente documento em suas totalidades a título de referência), embaralhamento de cadeia (vide, por exemplo, Patente no U.S. 5,565,332, estando incorporada ao presente documento em sua totalidade a título de referência), e as técnicas reveladas, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente no U.S. US2005/0042664, Publicação de Pedido de Patente no U.S. US2005/0048617, Patente no U.S. 6.407.213, Patente no U.S. 5.766.886, Publicação Internacional no WO 9317105, Tan et al., J. Immunol., 169:1119-25 (2002), Caldas et al., Protein Eng., 13(5):353-60 (2000), Morea et al., Methods, 20(3):267-79 (2000), Baca et al., J. Biol. Chem., 272(16):10678-84 (1997), Roguska et al., Protein Eng., 9(10):895-904 (1996), Couto et al., Cancer Res., 55 (23 Supp):5973s-5977s (1995), Couto et al., Cancer Res., 55(8):1717-22 (1995), Sandhu J S, Gene, 150(2):409-10 (1994), e Pedersen et al., J. Mol. Biol., 235(3):959-73 (1994), estando cada uma dessas incorporadas ao presente documento em suas totalidades a título de referência. Geralmente, resíduos nas regiões de moldura serão substituídos pelo resíduo correspondente do anticorpo doador CDR para alterar, de preferência, aperfeiçoar a ligação ao antígeno. Essas substituições de moldura são identificadas por métodos notórios na técnica, por exemplo, por modelagem das interações do CDR e resíduos de moldura para identificar resíduos de moldura importantes para ligação ao antígeno e comparação de sequência para identificar resíduos de moldura não usuais em posições particulares. (Vide, por exemplo, Queen et al., Patente no U.S. 5.585.089; e Riechmann et al., 1988, Nature, 332:323, estando incorporadas ao presente documento em suas totalidades a título de referência.)
[0233]Um anticorpo humanizado tem um ou mais resíduos de aminoácido introduzidos no mesmo a partir de uma fonte que seja não humana. Esses resíduos de aminoácido não humanos são geralmente referidos como resíduos de “importação”, que são tipicamente tomados a partir de um domínio variável de “importação”. Logo, os anticorpos humanizados compreendem um ou mais CDRs de moléculas de imunoglobulina não humanas e regiões de moldura de humanos. A humanização de anticorpos é notória na técnica e pode ser essencialmente realizada seguindo o método de Winter e colaboradores (Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)), substituindo-se CDRs de roedores ou sequências de CDR pelas sequências correspondentes de um anticorpo humano, isto é, enxerto CDR (EP 239.400; Publicação PCT no WO 91/09967; e Patentes nos U.S. 4.816.567; 6.331.415; 5.225.539; 5.530.101; 5.585.089; 6.548.640, estando os conteúdos incorporados ao presente documento em suas totalidades a título de referência). Nesses anticorpos quiméricos humanizados, substancialmente menos que um domínio variável humano intacto foi substituído pela sequência correspondente de uma espécie não humana. Na prática, os anticorpos humanizados são tipicamente anticorpos humanos nos quais alguns resíduos CDR e, possivelmente, alguns resíduos de moldura (FR) são substituídos por resíduos de sítios análogos em anticorpos de roedores. A humanização de anticorpos também pode ser alcançada por folheamento ou recomposição (EP 592.106; EP 519.596; Padlan, 1991, Molecular Immunology, 28(4/5):489-498; Studnicka et al., Protein Engineering, 7(6):805-814 (1994); e Roguska et al., PNAS, 91:969-973 (1994)) ou embaralhamento de cadeia (Patente no U.S. 5.565.332), estando os conteúdos incorporados ao presente documento em suas totalidades a título de referência.
[0234]A escolha de domínios variáveis humanos, tanto leve como pesado, que será usada na produção de anticorpos humanizados serve para reduzir a antigenicidade. De acordo com o suposto método de “melhor ajuste”, a sequência do domínio variável de um anticorpo de roedor é triada em relação à biblioteca inteira de sequências de domínio variável humano conhecidas. A sequência humana que seja mais próxima àquela do roedor é, então, aceita como a moldura humana (FR) para o anticorpo humanizado (Sims et al., J. Immunol., 151:2296 (1993); Chothia et al., J. Mol. Biol., 196:901 (1987), estando os conteúdos incorporados ao presente documento em suas totalidades a título de referência). Outro método usa uma moldura particular derivada a partir da sequência consenso de todos os anticorpos humanos de um subgrupo particular de cadeias leves ou pesadas. A mesma moldura pode ser usada para diversos anticorpos humanizados diferentes (Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol., 151:2623 (1993), estando os conteúdos incorporados ao presente documento em suas totalidades a título de referência).
[0235]Os anticorpos podem ser humanizados retendo alta afinidade pelo antígeno alvo e possuindo outras propriedades biológicas favoráveis. De acordo com um aspecto da invenção, os anticorpos humanizados são preparados por um processo de análise das sequências parentais e vários produtos humanizados conceituais usando modelos tridimensionais das sequências parentais e humanizadas. Os modelos de imunoglobulina tridimensionais são comumente disponíveis e familiares aos indivíduos versados na técnica. Programas computacionais se encontram disponíveis que ilustram e exibem prováveis estruturas conformacionais tridimensionais de sequências de imunoglobulina candidata selecionada. A inspeção dessas exibições permite uma análise do papel de probabilidade dos resíduos no funcionamento da sequência de imunoglobulina candidata, isto é, a análise dos resíduos que influenciam a capacidade da imunoglobulina candidata para ligar o antígeno alvo. Dessa forma, os resíduos FR podem ser selecionados e combinados a partir das sequências receptoras e de importação ide modo que a característica de anticorpo desejada, tal como uma afinidade aumentada pelo antígeno alvo, seja alcançada. Em geral, os resíduos CDR são diretamente e mais substancialmente envolvidos em influenciar a ligação ao antígeno.
[0236]Um anticorpo humanizado retém uma especificidade antigênica similar como o anticorpo original. No entanto, usando determinados métodos de humanização, a afinidade e/ou a especificidade de ligação do anticorpo ao antígeno alvo podem ser aumentadas usando métodos de “evolução direcionada,” conforme descrito por Wu et al., J. Mol. Biol., 294:151 (1999), estando os conteúdos incorporados ao presente documento em suas totalidades a título de referência.
[0237]Um vetor pode ser usado para introduzir o CAR em um monócito, macrófago ou célula dendrítica conforme descrito no presente documento. Em um aspecto, a invenção inclui um vetor que compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica um CAR conforme descrito no presente documento. Em uma modalidade, o vetor compreende um vetor de plasmídeo, um vetor viral, retrotransposão (por exemplo, piggyback, sleeping beauty), vetor de inserção sítio- direcionado (por exemplo CRISPR, nucleases de dedo de Zn, TALEN), ou vetor de expressão suicida, ou outro vetor conhecido na técnica.
[0238]Todas as construções mencionadas anteriormente são capazes de duas plasmídeos de vetor lentiviral de terceira geração, outros vetores virais, ou RNA aprovado par auso em células humanas. Em uma modalidade, o vetor é um vetor viral, tal como um vetor lentiviral. Em outra modalidade, o vetor é um vetor de RNA.
[0239]A produção de qualquer uma das moléculas descritas no presente documento pode ser verificada por sequenciamento. A expressão das proteínas de comprimento completo pode ser verificada usando imunoblot, imuno-histoquímica, citometria de fluxo ou outra tecnologia bem conhecida e disponível na técnica.
[0240]A presente invenção também proporciona um vetor no qual o DNA da presente invenção é inserido. Vetores, incluindo aqueles derivados a partir de retrovírus como lentivírus, são ferramentas adequadas para alcançar uma transferência de gene a longo prazo visto que permitem uma integração estável a longo prazo de um transgene e sua propagação em células filhas. Os vetores lentivirais têm a vantagem adicional em relação a vetores derivados a partir de onco- retrovírus, como vírus de leucemia de murinos, caracterizados pelo fato de que podem transduzir células de não proliferação, como hepatócitos. Os mesmos também apresentam a vantagem adicional de resultar em baixa imunogenicidade no indivíduo no qual eles são introduzidos.
[0241]A expressão de ácidos nucleicos naturais ou sintéticos é tipicamente alcançada ligando-se operacionalmente um ácido nucleico ou porções do mesmo a um promotor, e incorporando-se a construção em um vetor de expressão. O vetor é geralmente capaz de replicação em uma célula de mamífero, e/ou também capaz de integração no genoma celular do mamífero. Vetores típicos contêm terminadores de transcrição e translação, sequências de iniciação, e promotores úteis para regulação da expressão da sequência de ácido nucleico desejada.
[0242]O ácido nucleico pode ser clonado em qualquer número de diferentes tipos de vetores. Por exemplo, o ácido nucleico pode ser clonado em um vetor incluindo, sem limitação, um plasmídeo, um fagemídeo, um derivado de fago, um vírus animal, e um cosmídeo. Os vetores de interesse particular incluem vetores de expressão, vetores de replicação, vetores de geração de sonda e vetores de sequenciamento.
[0243]O vetor de expressão pode ser proporcionado a uma célula sob a forma de um vetor viral. A tecnologia de vetor viral é notória na técnica e é descrita, por exemplo, em Sambrook et al., 2012, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, volumes 1 a 4, Cold Spring Harbor Press, NY), e em outros manuais de virologia e biologia molecular. Os vírus, que são úteis como vetores incluem, mas não se limitam a, retrovírus, adenovírus, vírus adeno-associados, vírus da herpes e lentivírus. Em geral, um vetor adequado contém uma origem de replicação funcional em pelo menos um organismo, uma sequência promotora, sítios de endonuclease de restrição conveniente, e um ou mais marcadores selecionáveis, (por exemplo, WO 01/96584; WO 01/29058; e Patente no U.S. 6.326.193).
[0244]Elementos promotores adicionais, por exemplo, acentuadores, regulam a frequência de iniciação transcricional. Tipicamente, os mesmos ficam situados na região 30-110 bp a montante do sitio inicial, embora uma série de promotores tenham sido recentemente mostrados contendo elementos funcionais a jusante do sítio inicial. O espaçamento entre os elementos promotores frequentemente é flexível, de modo que a função do promotor seja preservada quando elementos forem invertidos ou movidos um em relação ao outro. No promotor de timidina quinase (tk), o espaçamento entre os elementos promotores pode ser aumentado para 50 bp antes que a atividade comece a declinar. Dependendo do promotor, parece que elementos individuais podem funcionar seja cooperativa ou independentemente para ativar a transcrição.
[0245]Um exemplo de um promotor é a sequência promotora de citomegalovírus precoce imediato (CMV). Essa sequência promotora é uma sequência promotora constitutiva forte capaz de acionar altos níveis de expressão de qualquer sequência de polinucleotídeo operacionalmente ligada à mesma. No entanto, outras sequências promotoras constitutivas também podem ser usadas, incluindo, sem limitação, promotor precoce de vírus 40 de símios (SV40), vírus tumoral mamário de camundongo (MMTV), promotor de repetição terminal longa (LTR) de vírus da imunodeficiência humana (HIV), promotor MoMuLV, um promotor de vírus de leucemia em aves, um promotor precoce imediato do vírus de Epstein- Barr, um promotor do vírus de sarcoma de Rous, o promotor de fator-lα de alongamento, bem como promotores de gene humano como, sem limitação, o promotor de actina, o promotor de miosina, o promotor de hemoglobina, e o promotor de creatina quinase. Ademais, a invenção não deve se limitar ao uso de promotores constitutivos. Os promotores induzíveis também são contemplados como parte da invenção. O uso de um promotor induzível proporciona uma comutação molecular capaz de ativar a expressão da sequência de polinucleotídeo que é operacionalmente ligada quando essa expressão for desejada, ou desativar a expressão quando a mesma não for desejada. Exemplos de promotores induzíveis incluem, mas não se limitam a, um promotor de metalotionina, um promotor de glucocorticoide, um promotor de progesterona e um promotor de tetraciclina.
[0246]A fim de avaliar a expressão de um polipeptídeo ou porções do mesmo, o vetor de expressão a ser introduzido em uma célula também pode conter um gene marcador selecionável ou um gene repórter, ou ambos, para facilitar a identificação e a seleção de células de expressão da população de células que se imagina ser transfectada ou infectada através de vetores virais. Em outros aspectos, o marcador selecionável pode ser transportado em um pedaço separado de DNA e usado em um procedimento de co-transfecção. Tanto os marcadores selecionáveis como os genes repórteres podem ser flanqueados com sequências regulatórias apropriadas para permitir a expressão nas células hospedeiras. Os marcadores selecionáveis úteis incluem, por exemplo, genes resistentes a antibiótico, como neo e similares.
[0247]Os genes repórteres sã usados para identificar células potencialmente transfectadas e para avaliar a funcionalidade de sequências regulatórias. Em geral, um repórter é um gene que não está presente nem é expressado pelo organismo ou tecido receptor e que codifica um polipeptídeo cuja expressão é manifestada por alguma propriedade facilmente detectável, por exemplo, atividade enzimática. A expressão do gene repórter é avaliada em um tempo adequado após o DNA ter sido introduzido nas células receptoras. Os genes repórteres adequados podem incluir genes que codificam luciferase, beta-galactosidase, cloranfenicol acetil transferase, fosfatase alcalina secretada, ou gene de proteína fluorescente verde (por exemplo, Ui-Tei et al., 2000 FEBS Letters 479: 79-82). Os sistemas de expressão adequados são notórios e podem ser preparados usando técnicas conhecidas ou comercialmente obtidas. Em geral, a construção com a região de flanqueamento 5' mínima que mostra o maior nível de expressão de gene repórter é identificada como o promotor. Essas regiões promotoras podem ser ligadas a um gene repórter e usadas para avaliar agentes para a capacidade de modular uma transcrição acionada por promotor.
[0248]Em um aspecto, a invenção inclui um método para modificar uma célula que compreende introduzir um receptor de antígeno quimérico (CAR) no monócito, macrófago ou célula dendrítica, em que o CAR compreende um domínio de ligação ao antígeno, um domínio transmembranar e um domínio intracelular de uma molécula co-estimulatória, e em que a célula é um monócito, macrófago ou célula dendrítica que expressa o CAR e possui atividade efetora direcionada. Em uma modalidade, introduzir o CAR na célula compreende introduzir uma sequência de ácido nucleico que codifica o CAR. Em outra modalidade, introduzir a sequência de ácido nucleico compreende eletroporar um mRNA que codifica o CAR.
[0249]Os métodos para introduzir e expressar genes, como CAR, em uma célula são conhecidos na técnica. No contexto de um vetor de expressão, o vetor pode ser prontamente introduzido em uma célula hospederia, por exemplo, célula de mamífero, bacteriana, levedura ou inseto por qualquer método na técnica. Por exemplo, o vetor de expressão pode ser transferido em uma célula hospedeira por meios físicos, químicos ou biológicos.
[0250]Os métodos físicos para introduzir um polinucleotídeo em uma célula hospedeira incluem precipitação de fosfato de cálcio, lipofecção, bombardeamento de partícula, microinjeção, eletroporação, e similares. Os métodos para produzir células que compreendem vetores e/ou ácidos nucleicos exógenos são notórios na técnica. Vide, por exemplo, Sambrook et al., 2012, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, volumes 1 a 4, Cold Spring Harbor Press, NY). Os ácidos nucleicos podem ser introduzidos em células alvo usando métodos comercialmente disponíveis que incluem eletroporação (Amaxa Nucleofector-II (Amaxa Biosystems, Cologne, Alemanha)), (ECM 830 (BTX) (Harvard Instruments, Boston, Mass., EUA) ou Gene Pulser II (BioRad, Denver, Colo., EUA), Multiporator (Eppendort, Hamburgo, Alemanha). Os ácidos nucleicos também podem ser introduzidos em células usando transfecção mediada por lipossomo catiônico usando lipofecção, usando encapsulação de polímero, usando transfecção mediada por peptídeo, ou usando sistemas de entrega de partículas biolísticas como “pistolas de gene” (vide, por exemplo, Nishikawa, et al. Hum Gene Ther., 12(8):861-70 (2001).
[0251]Os métodos biológicos para introduzir um polinucleotídeo de interesse em uma célula hospedeira incluem o uso de vetores de DNA e RNA. Os vetores de RNA incluem vetores tendo um promotor de RNA e/ outros domínios relevantes para produção de uma transcrição de RNA. Os vetores virais, e, essencialmente, vetores retrovirais, se tornaram o método mais amplamente usado para inserir genes em células de mamíferos, por exemplo, seres humanos. Outros vetores virais podem ser derivados a partir de lentivírus, poxvírus, vírus herpes simplex, adenovírus e vírus adeno-associados, e similares. Vide, por exemplo, as Patentes nos U.S. 5.350.674 e 5.585.362.
[0252]Os meios químicos para introduzir um polinucleotídeo em uma célula hospedeira incluem sistemas de dispersão coloidal, tais como complexos de macromoléculas, nanocápsulas, microesferas, esferas, e sistemas baseado em lipídeos incluindo emulsões óleo em água, micelas, micelas mistas e lipossomos. Um sistema coloidal exemplificador para uso como um veículo de entrega in vitro e in vivo consiste em um lipossomo (por exemplo, uma vesícula membranar artificial).
[0253]No caso onde um sistema de entrega não viral é utilizado, um veículo de entrega exemplificador é um lipossomo. O uso de formulações de lipídeo é contemplado para a introdução dos ácidos nucleicos em uma célula hospedeira (in vitro, ex vivo ou in vivo). Em outro aspecto, o ácido nucleico pode ser associado a um lipídeo. O ácido nucleico associado a um lipídeo pode ser encapsulado no interior aquoso de um lipossomo, intercalado na bicamada de lipídeo de um lipossomo, fixado a um lipossomo através de uma molécula de ligação que é associada ao lipossomo e ao oligonucleotídeo, aprisionado em um lipossomo, complexado com um lipossomo, disperso em uma solução contendo um lipídeo, misturado com um lipídeo, combinado com um lipídeo, contido como uma suspensão em um lipídeo, contido ou complexado com uma micela, ou, de outro modo, associado a um lipídeo. Composições associadas a lipídeo, lipídeo/DNA ou lipídeo/vetor de expressão não se limitam a qualquer estrutura particular em uma solução. Por exemplo, eles podem estar presentes em uma estrutura de bicamada, como micelas, ou com uma estrutura “colapsada”. Os mesmos podem ser simplesmente intercalados em uma solução, possivelmente formando agregados que não sejam uniformes em tamanho ou formato. Os lipídeos são substâncias graxas que podem ser lipídeos de ocorrência natural ou sintéticos. Por exemplo, os lipídeos incluem gotículas graxas que ocorrem naturalmente no citoplasma, bem como a casse de compostos que contém hidrocarbonetos alifáticos de cadeia longa e seus derivados, tais como ácidos graxos, álcoois, aminas, amino álcoois e aldeídos
[0254]Os lipídeos adequados para uso podem ser obtidos a partir de fontes comerciais. Por exemplo, dimiristil fosfatidilcolina (“DMPC”) pode ser obtido junto a Sigma, St. Louis, MO, EUA; dicetil fosfato (“DCP”) pode ser obtido junto a K & K Laboratories (Plainview, NY, EUA); colesterol (“Choi”) pode ser obtido junto a Calbiochem-Behring; dimiristil fosfatidilglicerol (“DMPG”) e outros lipídeos podem ser obtidos junto a Avanti Polar Lipids, Inc. (Birmingham, AL., EUA). Soluções estoque de lipídeos em clorofórmio ou clorofórmio/metanol podem ser armazenadas a cerca de -200C. O clorofórmio é usado como o único solvente visto que é mais prontamente evaporado do que metanol. “Lipossomo” é um termo genérico que abrange uma variedade de veículos de lipídeo único e multilamelar formados pela geração de bicamadas de lipídeo confinadas ou agregados. Os lipossomos podem ser caracterizados como tendo estruturas vesiculares com uma membrana de bicamada de fosfolipídeo e um meio aquoso interno. Os lipossomos multilamelares têm múltiplas camadas de lipídeo separadas por um meio aquoso. Eles se formam espontaneamente quando fosfolipídeos forem suspensos em um excesso de solução aquosa. Os componentes de lipídeo são submetidos à auto-redisposição antes da formação de estruturas fechadas e aprisionam água e solutos dissolvidos entre as bicamadas de lipídeo (Ghosh et al., 1991 Glycobiology 5: 505-10). No entanto, as composições que têm estruturas diferentes em solução em relação à estrutura vesicular normal também são abrangidas. Por exemplo, os lipídeos podem assumir uma estrutura micelar ou meramente existir como agregados não uniformes de moléculas de lipídeo. Contemplam-se, também, complexos de lipofectamina- ácido nucleico.
[0255]Independentemente do método usado para introduzir ácidos nucleicos exógenos em uma célula hospedeira ou, de outro modo, expor uma célula às moléculas descritas no presente documento, a fim de confirmar a presença dos ácidos nucleicos na célula hospedeira, uma variedade de ensaios pode ser realizada. Esses ensaios incluem, por exemplo, ensaios “biológicos moleculares” bem conhecidos pelos indivíduos versados na técnica, tais como Southern e Northern blotting, RT-PCR e PCR; ensaios “bioquímicos”, como detectar a presença ou ausência de um peptídeo particular, por exemplo, por meios imunológicos (ELISAs e Western blots) ou por ensaios descritos no presente documento para identificar agentes que se enquadram no escopo da invenção.
[0256]Em uma modalidade, uma ou mais sequências de ácido nucleico são introduzidas por um método selecionado a partir do grupo que consiste em transduzir a população de células, transfectar a população de células, e eletroporar a população de células. Em uma modalidade, uma população de células compreende uma ou mais sequências de ácido nucleico descritas no presente documento.
[0257]Em uma modalidade, os ácidos nucleicos introduzidos na célula são RNA. Em outra modalidade, o RNA é mRNA que compreende RNA transcrito in vitro ou RNA sintético. O RNA é produzido por transcrição in vitro usando um template gerado por reação em cadeia de polimerase (PCR). DNA de interesse de qualquer fonte pode ser diretamente convertido por PCR em um template para síntese de mRNA in vitro usando iniciadores apropriados e RNA polimerase. A fonte do DNA pode ser, por exemplo, DNA genômico, DNA de plasmídeo, DNA de fago, cDNA, sequência de DNA sintético ou qualquer outra fonte apropriada de DNA. O template desejado para transcrição in vitro é um CAR.
[0258]PCR pode ser usado para gerar um template para transcrição in vitro de mRNA que é, então, introduzido em células. Os métodos para realizar PCR são bem conhecidos na técnica. Os iniciadores para uso em PCR são projetados para ter regiões que sejam substancialmente complementares a regiões do DNA a ser usado como um template para o PCR. “Substancialmente complementar”, conforme o uso em questão, se refere a sequências de nucleotídeos onde a maioria ou todas as bases na sequência de iniciador é complementar, ou uma ou mais bases são não complementares, ou defasados. Sequências substancialmente complementares são capazes de têmpera ou se hibridizarem com o alvo de DNA pretendido sob condições de têmpera usadas para PCR. Os iniciadores podem ser projetados para que sejam substancialmente complementares a qualquer porção do template de DNA. Por exemplo, os iniciadores podem ser projetados para amplificar a porção de um gene que seja normalmente transcrito em células (a fase de leitura aberta), incluindo 5' e 3' UTRs. Os iniciadores também podem ser projetados para amplificar uma porção de um gene que codifica um domínio de interesse particular. Em uma modalidade, os iniciadores são projetados para amplificar a região de codificação de um cDNA humano, incluindo todos ou porções dos 5' e 3' UTRs. Os iniciadores úteis para PCR são gerados por métodos sintéticos que sejam bem conhecidos na técnica. “Iniciadores dianteiros” são iniciadores que contêm uma região de nucleotídeos que sejam substancialmente complementares a nucleotídeos no template de DNA que estão a montante da sequência de DNA que deve ser amplificada. “A montante” é usado no presente documento para se referir a um local 5, à sequência de DNA a ser amplificada em relação ao filamento de codificação. “Iniciadores reversos” são iniciadores que contêm uma região de nucleotídeos que sejam substancialmente complementares a um template de DNA de fita dupla que estejam a jusante da sequência de DNA que deve ser amplificada. O termo “a jusante” é usado no presente documento para se referir a um local 3' à sequência de DNA a ser amplificada em relação ao filamento de codificação.
[0259]As estruturas químicas que têm a capacidade de promover estabilidade e/ou eficiência de translação do RNA também podem ser usadas. De preferência, o RNA tem 5' e 3' UTRs. Em uma modalidade, o 5' UTR está entre zero e 3000 nucleotídeos de comprimento. O comprimento de sequências 5' e 3' UTR a serem adicionadas à região de codificação pode ser alterado por diferentes métodos, incluindo, sem limitação, projetar iniciadores para PCR que sofrem têmpera em diferentes regiões dos UTRs. Usando essa abordagem, um indivíduo com conhecimento comum na técnica pode modificar os comprimentos de 5' e 3' UTR exigidos para alcançarem uma eficiência de translação ideal seguindo a transfecção do RNA transcrito.
[0260]Os 5' e 3' UTRs podem ser de ocorrência natural, 5' e 3' UTRs endógenos para o gene de interesse. Alternativamente, as sequências de UTR que não sejam endógenas ao gene de interesse podem ser adicionadas incorporando-se as sequências de UTR nos iniciadores dianteiros e reversos ou por quaisquer outras modificações do template. O uso de sequências de UTR que não são endógenas ao gene de interesse pode ser útil para modificar a estabilidade e/ou a eficiência de translação do RNA. Por exemplo, sabe-se que elementos ricos em AU em sequências de 3' UTR podem reduzir a estabilidade de mRNA. Portanto, 3' UTRs podem ser selecionados ou projetados para aumentar a estabilidade do RNA transcrito com base nas propriedades de UTRs que são bem conhecidos na técnica.
[0261]Em uma modalidade, o 5' UTR pode conter a sequência de Kozak do gene endógeno. Alternativamente, quando um 5' UTR que não seja endógeno ao gene de interesse estiver sendo adicionado por PCR conforme descrito anteriormente, uma sequência de Kozak consenso pode ser reprojetada adicionando-se a sequência de 5' UTR. As sequências de Kozak podem aumentar a eficiência de translação de algumas transcrições de RNA, mas não parece que é necessário que todos os RNAs permitam uma translação eficiente. A exigência por sequências de Kozak para muitos mRNAs é conhecida na técnica. Em outras modalidades, o 5' UTR pode ser derivado a partir de um vírus de RNA cujo genoma de RNA é estável em células. Em outras modalidades, vários análogos de nucleotídeo podem ser usados no 3' ou 5' UTR para impedir a degradação de exonuclease do mRNA.
[0262]Para permitir a síntese de RNA a partir de um template de DNA sem a necessidade por clonagem de gene, um promotor de transcrição deve ser ligado ao template de DNA a montante da sequência a ser transcrita. Quando uma sequência que funciona como um promotor para uma RNA polimerase for adicionada à extremidade 5' do iniciador dianteiro, o promotor de RNA polimerase se torna incorporado ao produto PCR a montante da fase de leitura aberta que deve ser transcrita. Em uma modalidade, o promotor é um promotor T7 polimerase, conforme descrito no presente documento. Outros promotores úteis incluem, mas não se limitam a, promotores de RNA polimerase T3 e SP6. As sequências de nucleotídeo consenso para promotores T7, T3 e SP6 são conhecidas na técnica.
[0263]Em uma modalidade, o mRNA tem uma terminação na extremidade 5' e uma cauda 3' poli(A) que determina a ligação de ribossomo, iniciação de translação e estabilidade de mRNA na célula. Em um template de DNA circular, por exemplo, o DNA de plasmídeo, RNA polimerase produzem um produto concatamérico longo que não é adequado para expressão em células eucarióticas. A transcrição de DNA de plasmídeo linearizado na extremidade do 3' UTR resulta em mRNA de tamanho normal que não seja eficaz em transfecção eucariótica mesmo se for poliadenilado após transcrição.
[0264]Em um template de DNA linear, RNA polimerase de fago T7 pode estender a extremidade 3' da transcrição além da última base do template (Schenborn and Mierendorf, Nuc Acids Res., 13:6223-36 (1985); Nacheva and Berzal-Herranz, Eur. J. Biochem., 270:1485-65 (2003).
[0265]O método convencional de integração de estiramentos poliA/T em um template de DNA é a clonagem molecular. No entanto, a sequência poliA/T integrada ao DNA de plasmídeo pode causar instabilidade de plasmídeo, sendo esse o motivo pelo qual os templates de DNA de plasmídeo obtidos a partir de células bacterianas são geralmente altamente contaminados com deleções e outras aberrações. Isso torna procedimentos de clonagem não apenas trabalhosos e demorados, mas geralmente não confiáveis. Esse é o motivo pelo qual permite-se uma construção de templates de DNA com um estiramento poliA/T 3' sem uma clonagem altamente desejável.
[0266]O segmento poliA/T do template de DNA transcricional pode ser produzido durante PCR utilizando-se um iniciador reverso contendo uma cauda poliT, como a cauda 100T (o tamanho pode ser de 50-5000 T), ou após PCR por qualquer outro método, incluindo, sem limitação, ligação de DNA ou recombinação in vitro. As caudas poli(A) também proporcionam estabilidade aos RNAs e reduzem sua degradação. Em geral, o comprimento de uma cauda poli(A) se correlaciona positivamente com a estabilidade do RNA transcrito. Em uma modalidade, a cauda poli(A) está entre 100 e 5000 adenosinas.
[0267]As caudas poli(A) de RNAs podem ser adicionalmente estendidas seguindo uma transcrição in vitro com o uso de uma polimerase poli(A), tal como E. coli poliA polimerase (E-PAP). Em uma modalidade, aumentar o comprimento de uma cauda poli(A) de 100 nucleotídeos a entre 300 e 400 nucleotídeos resulta em cerca de um aumento de duas vezes na eficiência de translação do RNA. Adicionalmente, a ligação de diferentes grupos químicos à extremidade 3' pode aumentar a estabilidade de mRNA. Essa ligação pode conter nucleotídeos modificados/artificiais, aptâmeros e outros compostos. Por exemplo, análogos de ATP podem ser incorporados na cauda poli(A) usando poli(A) polimerase. Os análogos de ATP podem aumentar adicionalmente a estabilidade do RNA.
[0268]As terminações 5' também proporcionam estabilidade a moléculas de RNA. Em uma modalidade preferencial, RNAs produzidos pelos métodos revelados no presente documento incluem uma terminação 5'. A terminação 5' é proporcionada usando técnicas conhecidas na técnica e descritas no presente documento (Cougot, et al., Trends in Biochem. Sci., 29:436-444 (2001); Stepinski, et al., RNA, 7:1468-95 (2001); Elango, et al., Biochim. Biophys. Res. Commun., 330:958-966 (2005)).
[0269]Os RNAs produzidos pelos métodos revelados no presente documento também podem conter uma sequência de sítio de entrada de ribossomo interno (IRES). A sequência IRES pode ser qualquer sequência projetada viral, cromossômica ou artificial que inicia o ribossomo independente de terminação que se liga ao mRNA e facilita a iniciação de translação. Quaisquer solutos adequados para eletroporação celular, que pode conter fatores que facilitam a permeabilidade e a viabilidade celular como açúcares, peptídeos, lipídeos, proteínas, antioxidantes e tensoativos podem ser incluídos.
[0270]Alguns vetores de RNA transcritos in vitro (IVT-RNA) são conhecidos na literatura que são utilizados de maneira padronizada como um template para transcrição in vitro e que foram geneticamente modificados de modo que as transcrições de RNA estabilizado sejam produzidas. Atualmente, os protocolos usados na técnica se baseiam em um vetor de plasmídeo com a estrutura a seguir: um promotor de 5' RNA polimerase que permite transcrição de RNA, seguido por um gene de interesse que é flanqueado seja 3' e/ou 5' por regiões não transladadas (UTR), e um cassete de 3' poliadenil contendo de 50 a 70 A nucleotídeos. Antes da transcrição in vitro, o plasmídeo circular é linearizado a jusante do cassete de poliadenil por enzimas de restrição tipo II (sequência de reconhecimento corresponde ao sítio de clivagem). Logo, o cassete de poliadenil corresponde à última sequência poli(A) na transcrição. Como resultado desse procedimento, alguns nucleotídeos permanecem como parte do sítio de clivagem de enzima após a linearização e estendem ou mascaram a sequência poli(A) na extremidade 3'. Não fica claro se esse overhang não fisiológico afeta a quantidade de proteína produzida intracelularmente a partir dessa construção.
[0271]Em um aspecto, a construção de RNA é entregue nas células por eletroporação. Vide, por exemplo, as formulações e metodologia de eletroporação de construções de ácido nucleico em células de mamífero conforme ensinado em US 2004/0014645, US 2005/0052630A1, US 2005/0070841A1, US 2004/0059285A1, US 2004/0092907A1. Os vários parâmetros incluindo resistência de campo elétrico necessária para eletroporação de qualquer tipo celular são geralmente conhecidos na literatura de pesquisa relevante bem como várias patentes e pedidos no campo. Vide, por exemplo, a Patente no U.S. 6.678.556, Patente no U.S. 7.171.264, e Patente no U.S. 7.173.116. O aparelho para aplicação terapêutica de eletroporação se encontra comercialmente disponível, por exemplo, como o Sistema de Terapia de Eletroporação de DNA MedPulser™ (Inovio/Genetronics, San Diego, Calif., EUA), e é descrito em patentes como Patente no U.S. 6.567.694; Patente no U.S. 6.516.223, Patente no U.S. 5.993.434, Patente no U.S. 6.181.964, Patente no U.S. 6.241.701, e Patente no U.S. 6.233.482; a eletroporação também pode ser usada para transfecção de células in vitro conforme descrito, por exemplo, em US20070128708A1. A eletroporação também pode ser utilizada para entregar ácidos nucleicos em células in vitro. De modo correspondente, a administração mediada por eletroporação em células de ácidos nucleicos incluindo construções de expressão utilizando qualquer dentre os múltiplos dispositivos disponíveis e sistemas de eletroporação conhecidos pelos indivíduos versados na técnica apresentam um novo meio animador para entregar um RNA de interesse a uma célula alvo.
[0272]Em uma modalidade, células fagocíticas são usadas nas composições e métodos descritos no presente documento. Uma fonte de células fagocíticas, tais como monócitos, macrófagos e/ou células dendríticas, é obtida a partir de um indivíduo. Exemplos não limitantes de indivíduos incluem seres humanos, cães, gatos, camundongos, ratos e espécies transgênicas dos mesmos. De preferência, o indivíduo é um ser humano. As células podem ser obtidas a partir de uma série de fontes, incluindo células mononucleares de sangue periférico, medula óssea, tecido de linfonodo, tecido do baço, cordão umbilical e tumores. Em determinadas modalidades, pode-se usar qualquer número de monócito, macrófago, célula dendrítica ou linhagens celulares progenitoras disponíveis na técnica. Em determinadas modalidades, as células podem ser obtidas a partir de uma unidade de sangue coletado a partir de um indivíduo usando qualquer número de técnicas conhecidas pelos artesãos versados, tal como separação de Ficoll. Em uma modalidade, as células do sangue em circulação de um indivíduo são obtidas por aferese ou leucaferese. Tipicamente, o produto de aferese contém linfócitos, incluindo células T, monócitos, granulócitos, células B, outros glóbulos brancos nucleados, hemácias e plaquetas. As células coletadas por aferese podem ser lavadas para remover a fração de plasma e colocar as células em um tampão ou meio apropriado, como uma solução salina tamponada de fosfato (PBS) ou uma solução de lavagem desprovida de cálcio e pode ser desprovida de magnésio ou pode ser desprovida de muitos, senão todos, os cátions divalentes, para etapas de processamento subsequentes. Após a lavagem, as células podem ser ressuspensas em uma variedade de tampões biocompatíveis, como, por exemplo, PBS isento de Ca, isento de Mg. Alternativamente, os componentes indesejáveis da amostra de aferese podem ser removidos e as células diretamente ressuspensas em um meio de cultura.
[0273]Em outra modalidade, as células são isoladas do sangue periférico lisando-se as hemácias e depletando-se os linfócitos e hemácias, por exemplo, por centrifugação através de um gradiente PERCOLL™. Alternativamente, as células podem ser isoladas do cordão umbilical. Em qualquer evento, uma subpopulação específica dos monócitos, macrófagos e/ou células dendríticas pode ser adicionalmente isolada por técnicas de seleção positiva ou negativa.
[0274]As células mononucleares isoladas podem ser depletadas de células que expressam determinados antígenos, incluindo, sem limitação, CD34, CD3, CD4, CD8, CD14, CD19 ou CD20. A depleção dessas células pode ser realizada usando um anticorpo isolado, uma amostra biológica que compreende um anticorpo, tal como fluido de ascites, um anticorpo ligado a um suporte físico, e um anticorpo ligado à célula.
[0275]O enriquecimento de uma população de monócito, macrófago e/ou célula dendrítica por seleção negativa pode ser realizado usando uma combinação de anticorpos direcionados para marcadores superficiais exclusivos às células negativamente selecionadas. Um método preferencial é a classificação e/ou seleção celular através de imunoaderência magnética negativa ou citometria de fluxo que usa um coquetel de anticorpos monoclonais direcionados a marcadores de superfície celular presentes nas células negativamente selecionadas. Por exemplo, o enriquecimento de uma população celular para monócitos, macrófagos e/ou células dendríticas por seleção negativa pode ser realizado usando um coquetel de anticorpo monoclonal que tipicamente inclui anticorpos a CD34, CD3, CD4, CD8, CD14, CD19 ou CD20.
[0276]Durante o isolamento de uma população desejada de células por seleção positiva ou negativa, a concentração de células e superfície (por exemplo, partículas como microesferas) pode ser variada. Em determinadas modalidades, pode ser desejável diminuir significativamente o volume no qual as microesferas e células são misturadas (isto é, aumentar a concentração de células), garantir um contato máximo das células e microesferas. Por exemplo, em uma modalidade, utiliza-se uma concentração de 2 bilhões de células/ml. Em uma modalidade, utiliza- se uma concentração de 1 bilhão de células /ml. Em uma a modalidade adicional, mais de 100 milhões de células/ml são usadas. Em uma modalidade adicional, utiliza-se uma concentração de células de 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 milhões de células/ml. Em ainda outra modalidade, utiliza-se uma concentração de células de 75, 80, 85, 90, 95 ou 100 milhões de células/ml. Em modalidades adicionais, podem-se usar concentrações de 125 ou 150 milhões de células/ml. O uso de altas concentrações de células pode resultar em um rendimento celular aumentado, ativação celular e expansão celular.
[0277]Em uma modalidade, uma população de células compreende os monócitos, macrófagos ou células dendríticas da presente invenção. Exemplos de uma população de células incluem, mas não se limitam a, células mononucleares de sangue periférico, células sanguíneas de cordão umbilical, uma população purificada de monócitos, macrófagos ou células dendríticas, e uma linhagem celular. Em outra modalidade, as células mononucleares de sangue periférico compreendem a população de monócitos, macrófagos, ou células dendríticas. Em ainda outra modalidade, as células purificadas compreendem a população de monócitos, macrófagos ou células dendríticas.
[0278]Em outra modalidade, as células têm marcadores M1 suprarregulados (upregulated) e marcadores M2 infrarregulados (downregulated). Por exemplo, pelo menos um marcador M1, tal como HLA DR, CD86, CD80 e PDL1, é suprarregulado (upregulated) na célula fagocítica. Em outro exemplo, pelo menos um marcador M2, como CD206, CD163, é infrarregulado (downregulated) na célula fagocítica. Em uma modalidade, as células têm pelo menos um marcador M1 suprarregulado (upregulated) e pelo menos um marcador M2 infrarregulado (downregulated).
[0279]Em ainda outra modalidade, a atividade efetora direcionada na célula fagocítica é aprimorada pela inibição da atividade de CD47 ou SIRPα. A atividade de CD47 e/ou SIRPα pode ser inibida tratando-se a célula fagocítica com um anticorpo anti-CD47 ou anti-SIRPα. Alternativamente, a atividade de CD47 ou SIRPα pode ser inibida por qualquer método conhecido pelos indivíduos versados na técnica.
[0280]Em uma modalidade, as células ou população de células que compreende monócitos, macrófagos ou células dendríticas são culturadas para expansão. Em outra modalidade, as células ou população de células que compreende células progenitoras são culturadas para diferenciação e expansão de monócitos, macrófagos ou células dendríticas. A presente invenção compreende expandir uma população de monócitos, macrófagos ou células dendríticas que compreendem um receptor de antígeno quimérico conforme descrito no presente documento.
[0281]Conforme demonstrado pelos dados revelados no presente documento, a expansão das células pelos métodos revelados no presente documento pode ser multiplicada por cerca de 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 40 vezes, 50 vezes, 60 vezes, 70 vezes, 80 vezes, 90 vezes, 100 vezes, 200 vezes, 300 vezes, 400 vezes, 500 vezes, 600 vezes, 700 vezes, 800 vezes, 900 vezes, 1.000 vezes, 2.000 vezes, 3.000 vezes, 4.000 vezes, 5.000 vezes, 6.000 vezes, 7.000 vezes, 8.000 vezes, 9.000 vezes, 10.000 vezes, 100.000 vezes, 1.000.000 vezes, 10.000.000 vezes, ou maior, e qualquer e todos os números inteiros ou parciais entre esses intervalos. Em uma modalidade, as células se expandem na faixa de cerca de 20 vezes a cerca de 50 vezes.
[0282]Após a cultura, as células podem ser incubadas em um meio celular em um aparelho de cultura por um período de tempo ou até que as células alcancem uma confluência ou alta densidade celular para passagem ideal antes de passar as células a outro aparelho de cultura. O aparelho de cultura pode ser qualquer aparelho de cultura comumente usado para culturar células in vitro. De preferência, o nível de confluência é 70% ou maior antes de passar as células a outro aparelho de cultura. Com mais preferência, o nível de confluência é 90% ou maior. Um período de tempo pode ser qualquer tempo adequado para a cultura de células in vitro. O meio de cultura pode ser substituído durante a cultura das células em qualquer tempo. De preferência, o meio de cultura é substituído cerca de a cada 2 a 3 dias. As células são, então, colhidas do aparelho de cultura ao qual as células podem ser usadas imediatamente ou armazenadas para uso em um momento posterior.
[0283]A etapa de cultura conforme descrito no presente documento (contato com agentes conforme descrito no presente documento) pode ser muito curta, por exemplo, menor que 24 horas, como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 ou 23 horas. A etapa de cultura conforme descrito no presente documento (contanto com agentes conforme descrito no presente documento) pode ser mais longa, por exemplo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, ou mais dias.
[0284]Em uma modalidade, as células podem ser culturadas por várias horas (cerca de 3 horas) a cerca de 14 dias ou qualquer valor horário inteiro entre esse intervalo. As condições apropriadas para cultura celular incluem um meio apropriado (por exemplo, meio completo de macrófago, DMEM/F12, DMEM/F12-10 (Invitrogen)) que pode conter fatores necessários para proliferação e viabilidade, incluindo soro (por exemplo, soro bovino fetal ou humano), L-glutamina, insulina, M- CSF, GM-CSF, IL-10, IL-12, IL-15, TGF-beta, e TNF-α. ou quaisquer outros aditivos para o crescimento de células conhecidos pelos artesãos versados. Outros aditivos para o crescimento de células incluem, mas não se limitam a, tensoativo, plasmanato, e agentes de redução como N-acetil-cisteina e 2-mercaptoetanol. Os meios podem incluir RPMI 1640, AIM-V, DMEM, MEM, α-MEM, F-12, X-Vivo 15, e X- Vivo 20, Optimizer, com aminoácidos adicionados, piruvato de sódio, e vitaminas, sejam isentas de soro ou suplementadas com uma quantidade apropriada de soro (ou plasma) ou um conjunto definido de hormônios, e/ou uma quantidade de citocinas suficiente para o crescimento e expansão das células. Antibióticos, por exemplo, penicilina e estreptomicina, são incluídos somente em culturas experimentais, não em culturas de células que devam ser infundidas em um indivíduo. As células alvo são mantidas sob condições necessárias para suportar o crescimento, por exemplo, uma temperatura apropriada (por exemplo, 37° C) e atmosfera (por exemplo, ar mais 5% de CO2).
[0285]O meio usado para culturar as células pode incluir um agente que pode ativar as células. Por exemplo, um agente que seja conhecido na técnica para ativar o monócito, macrófago ou célula dendrítica é incluído no meio de cultura.
[0286]As células modificadas descritas no presente documento podem ser incluídas em uma composição para tratamento de um indivíduo. Em um aspecto, a composição compreende a célula modificada que compreende o receptor de antígeno quimérico descrito no presente documento. A composição pode incluir uma composição farmacêutica e incluir, ainda, um carreador farmaceuticamente aceitável. Pode-se administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição farmacêutica que compreende as células modificadas.
[0287]Em um aspecto, a invenção inclui um método para tratar uma doença ou afecção associada a um tumor ou câncer em um indivíduo que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica que compreende a célula modificada descrita no presente documento. Em outro aspecto, a invenção inclui um método para tratar um tumor sólido em um indivíduo, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica que compreende a célula modificada descrita no presente documento. Em outro aspecto, a invenção inclui um método para estimular uma resposta imune a uma célula tumoral alvo ou tecido tumoral em um indivíduo que compreende administrar a um indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica que compreende a célula modificada descrita no presente documento. Em ainda outro aspecto, a invenção inclui o uso da célula modificada descrita no presente documento na fabricação de um medicamento destinado ao tratamento de uma resposta imune em um indivíduo em necessidade do mesmo. Em ainda outro aspecto, a invenção inclui o uso da célula modificada descrita no presente documento na fabricação de um medicamento destinado ao tratamento de um tumor ou câncer em um indivíduo em necessidade do mesmo.
[0288]As células modificadas geradas conforme descrito no presente documento possuem atividade efetora direcionada. Em uma modalidade, as células modificadas têm uma atividade efetora direcionada voltada contra um antígeno em uma célula alvo, como através de uma ligação específica a um domínio de ligação ao antígeno de um CAR. Em outra modalidade, a atividade efetora direcionada inclui, mas não se limita a, fagocitose, citotoxicidade celular direcionada, apresentação de antígeno e secreção de citocina.
[0289]Em outra modalidade, a célula modificada descrita no presente documento tem a capacidade de entregar um agente, um agente biológico ou um agente terapêutico ao alvo. A célula pode ser modificada ou modificada por engenharia genética para entregar um agente a um alvo, em que o agente é selecionado a partir do grupo que consiste em um ácido nucleico, um antibiótico, um agente anti-inflamatório, um anticorpo ou fragmentos de anticorpo do mesmo, um fator de crescimento, uma citocina, uma enzima, uma proteína, um peptídeo, uma proteína de fusão, uma molécula sintética, uma molécula orgânica, um carboidrato, ou similares, um lipídeo, um hormônio, um microssomo, um derivado ou uma variação do mesmo, e qualquer combinação dos mesmos. Como um exemplo não limitante, um macrófago modificado com um CAR que direciona um antígeno tumoral é capaz de secretar um agente, como uma citocina ou anticorpo, para auxiliar na função de macrófago. Anticorpos, como mAB anti-CD47/antiSIRPα, também podem auxiliar na função de macrófago. Em ainda outro exemplo, o macrófago modificado com um CAR que direciona um antígeno tumoral é modificado por engenharia genética para codificar um siRNA que auxilia a função de macrófago infraregulando- se genes inibitórios (isto é, SIRPα). Outro exemplo, o macrófago CAR é modificado por engenharia genética para expressar uma versão negativa dominante (ou, de outro modo, mutada) de um receptor ou enzima que auxilia na função de macrófago.
[0290]Em uma modalidade, o macrófago é modificado por múltiplos genes, em que pelo menos um gene inclui um CAR e pelo menos outro gene compreende um elemento genético que aprimora a função de macrófago CAR. Em outra modalidade, o macrófago é modificado por múltiplos genes, em que pelo menos um gene inclui um CAR e pelo menos outro gene auxilia ou reprograma a função de outras células imunes (como células T em um microambiente de tumor).
[0291]Ademais, as células modificadas podem ser administradas a um animal, de preferência, um mamífero, com ainda mais preferência, um ser humano, para suprimir uma reação imune, como aquela comum a doenças autoimunes como as diabetes, psoríase, artrite reumatoide, esclerose múltipla, GVHD, indução de tolerância de aloenxerto de aprimoramento, rejeição a transplante, e similares. Além disso, as células da presente invenção podem ser usadas para tratar qualquer afecção na qual uma resposta imune reduzida ou, de outro modo, inibida, especialmente uma resposta imune mediada por célula, é desejável para tratar ou aliviar a doença. Em um aspecto, a invenção inclui tratar uma afecção, como uma doença autoimune, em um indivíduo, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica que compreende uma população das células descritas no presente documento. Além disso, as células da presente invenção podem ser administradas como pré- tratamento ou condicionamento antes do tratamento com uma imunoterapia anticâncer alternativa, incluindo, sem limitação, células T CAR, linfócito infiltrante de tumor, ou um inibidor de ponto de verificação.
[0292]Exemplos de doenças autoimunes incluem, mas não se limitam a, Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (SIDA, que é uma doença viral com um componente autoimune), alopecia areata, espondilite anquilosante, síndrome antifosfolipídica, doença de Addison autoimune, anemia hemolítica autoimune, hepatite autoimune, doença autoimune do ouvido interno (AIED), síndrome linfoproliferativa autoimune (ALPS), púrpura trombocitopênica autoimune (ATP), doença de Behcet, cardiomiopatia, dermatite hepetiforme; síndrome de disfunção imune de fadiga crônica (CFIDS), polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica (CIPD), pendigigênio cicatricial, doença aglutinina fria, síndrome da crista, doença de Crohn, doença de Degos, dermatomiosite-juvenil, lúpus discoide, crioglobulinemia mista essencial, fibromialgia-fibromiosite, doença de Graves, síndrome de Guillain- Barre, tireoidite de Hashimoto, fibrose pulmonar idiopática, púrpura de trombocitopenia idiopática (ITP), nefropatia de IgA, diabetes mellitus insulino- dependente, artrite crônica juvenil (doença de Still), artrite reumatóide juvenil, doença de Meniere, doença mista do tecido conjuntivo, esclerose múltipla, miastenia gravis, anemia perniciosa, poliarterite nodosa, policondrite, síndromes poligelares, polimialgia reumática, polimiosite e dermatomiosite, agamaglobulinemia primária, cirrose biliar primária, psoríase, artrite psoriática, fenômeno de Raynaud, síndrome de Reiter, febre reumática, artrite reumatóide, sarcoidose, escleroderma (esclerose sistêmica progressiva (PSS), também conhecida como esclerose sistêmica (SS)), síndrome de Sjogren, síndrome do homem rígido, lúpus eritematoso sistêmico, arterite de Takayasu, arterite temporal/arterite de células gigantes, colite ulcerosa, uveíte, vitiligo e granulomatose de Wegener.
[0293]As células também podem ser usadas para tratar distúrbios inflamatórios. Exemplos de distúrbios inflamatórios incluem, mas não se limitam a, distúrbios inflamatórios crônicos e agudos. Exemplos de distúrbios inflamatórios incluem doença de Alzheimer, asma, alergia atópica, alergia, aterosclerose, asma brônquica, eczema, glomerulonefrite, doença do enxerto vs. hospedeiro, anemias hemolíticas, osteoartrite, sepse, acidente vascular cerebral, transplante de tecido e órgãos, vasculite, retinopatia diabética e lesão pulmonar induzida por ventilação.
[0294]As células da presente invenção podem ser usadas para tratar cânceres. Os cânceres incluem tumores que não são vascularizados, ou ainda não sejam substancialmente vascularizados, bem como tumores vascularizados. Os cânceres podem compreender tumores não sólidos (como tumores hematológicos, por exemplo, leucemias e linfomas) ou podem compreender tumores sólidos. Os tipos de cânceres a serem tratados com as células da invenção incluem, mas não se limitam a, carcinoma, blastoma e sarcoma, e determinadas malignâncias de leucemia ou linfoide, tumores benignos e malignos, e malignâncias, por exemplo, sarcomas, carcinomas e melanomas. Tumores/cânceres adultos e tumores/cânceres pediátricos também são incluídos.
[0295]Os tumores sólidos são massas anormais de tecido que geralmente não contêm cistos ou áreas líquidas. Os tumores sólidos podem ser benignos ou malignos. Diferentes tipos de tumores sólidos são nomeados pelo tipo de células que os formam (como sarcomas, carcinomas e linfomas). Exemplos de tumores sólidos, como sarcomas e carcinomas, incluem fibrosarcoma, mixosarcoma, lipossarcoma, condrossarcoma, osteossarcoma e outros sarcomas, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiossarcoma, rabdomiossarcoma, carcinoma do cólon, malignidade linfóide, câncer de pâncreas, câncer de mama, câncer de pulmão, câncer de ovário, câncer de próstata, carcinoma hepatocelular, carcinona de células escamosas, carcinoma basocelular, adenocarcinoma, carcinoma de glândulas sudoríparas, carcinoma medular da tireoide, carcinoma papilar da tireoide, carcinoma de glândulas sebáceas de feocromocitomas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, carcinoma medular, carcinoma broncogênico, carcinoma de células renais, hepatoma, carcinoma do ducto biliar, coriocarcinoma, tumor de Wilms, câncer do colo do útero, tumor testicular, seminoma, carcinoma da bexiga, melanoma e tumores do SNC (como um glioma (como glioma do tronco encefálico e gliomas mistos), asma de glioblastoma (também conhecida como glioblastoma multiforme), linfoma do SNC, germinoma, meduloblastoma, Schannannoma craniopharyogioma, ependimoma, pinealoma, hemangiobla estoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, menangioma, neuroblastoma, retinoblastoma e metástases cerebrais).
[0296]Os cânceres hematológicos são cânceres do sangue ou da medula óssea. Exemplos de cânceres hematológicos (ou hematogenosos) incluem leucemias, incluindo leucemias agudas (como leucemia linfocítica aguda, leucemia mielocítica aguda, leucemia mielográfica aguda e mieloblástica, promielocítica, mielomonocítica, monocítica e eritroleucemia), leucemias crônicas (como leucemia miococítica crônica (granulocítica), leucemia mielóide crônica e leucemia linfocítica crônica), policitemia vera, linfoma, doença de Hodgkin, linfoma não-Hodgkin (formas indolentes e de alto grau), mieloma múltiplo, macroglobulinemia de Waldenstrom, doença da cadeia pesada, síndrome mielodisplásica, leucemia de células pilosas e mielodisplasia.
[0297]As células da invenção podem ser administradas em dosagens e rotas e em tempos a serem determinados em experimentação e ensaios pré-clínicos e clínicos apropriados. As composições celulares podem ser administradas várias vezes em dosagens dentro dessas faixas. A administração das células da invenção pode ser combinada com outros métodos úteis para tratar a doença ou afecção desejada conforme determinado pelos indivíduos versados na técnica.
[0298]As células da invenção a serem administradas podem ser autólogas, alogênicas ou xenogênicas em relação ao indivíduo sendo submetido à terapia.
[0299]A administração das células da invenção pode ser realizada de qualquer maneira conveniente conhecida pelos indivíduos versados na técnica. As células da presente invenção podem ser administradas a um indivíduo por aerossol inalação, injeção, ingestão, transfusão, implante ou transplante. As composições descritas no presente documento podem ser administradas a um paciente de modo transarterial, subcutâneo, intradérmico, intratumoral, intranodal, intramedular, intramuscular, por injeção intravenosa (i.v.), ou intraperitoneal. Em outros casos, as células da invenção são injetadas diretamente em um sítio de inflamação no indivíduo, um sítio de doença local no indivíduo, um linfonodo, um órgão, um tumor, e similares.
[0300]As composições farmacêuticas da presente invenção podem compreender as células conforme descrito no presente documento, em combinação com um ou mais carreadores farmacêutica ou fisiologicamente aceitáveis, diluentes ou excipientes. Essas composições podem compreender tampões como uma solução salina tamponada neutra, uma solução salina tamponada de fosfato e similares; carboidratos tais como glicose, manose, sacarose ou dextranos, manitol; proteínas; polipeptídeos ou aminoácidos tal como glicina; antioxidantes; agentes quelantes como EDTA ou glutationa; adjuvantes (por exemplo, hidróxido de alumínio); e conservantes. De preferência, as composições da presente invenção são formuladas para administração intravenosa.
[0301]As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser administradas de modo apropriado à doença a ser tratada (ou evitada). A quantidade e frequência de administração serão determinadas por esses fatores como a condição do paciente, e o tipo e a gravidade da doença do paciente, embora dosagens apropriadas possam ser determinadas por ensaios clínicos.
[0302]Quando “uma quantidade imunologicamente eficaz”, “uma quantidade eficaz de resposta anti-imune”, “uma quantidade eficaz de inibição de resposta imune”, ou “quantidade terapêutica” for indicada, a quantidade precisa das composições da presente invenção a serem administradas pode ser determinada por um médico considerando-se as diferenças individuais de idade, peso, resposta imune, e condição do paciente (indivíduo). Em geral, pode-se declarar que uma composição farmacêutica que compreende as células descritas no presente documento pode ser administrada em uma dosagem de 104 a 109 células/kg de peso corporal, de preferência, 105 a 106 células/kg de peso corporal, incluindo todos os valores inteiros dentro desses intervalos. As composições celulares descritas no presente documento também podem ser administradas várias vezes nessas dosagens. As células podem ser administradas utilizando-se técnicas de infusão que são comumente conhecidas em imunoterapia (vide, por exemplo, Rosenberg et al., New Eng. J. of Med. 319:1676, 1988). A dosagem ideal e o regime de tratamento para um paciente particular podem ser prontamente determinados por um indivíduo versado na técnica da medicina monitorando-se o paciente por sinais de doença e ajustando-se o tratamento de modo correspondente.
[0303]Em determinadas modalidades, pode ser desejável administrar monócitos, macrófagos ou células dendríticas a um indivíduo e, então, extrair subsequentemente sangue (ou ter uma aferese realizada), ativar os monócitos, macrófagos, ou células dendríticas de acordo com a presente invenção, e reinfundir o paciente com essas células ativadas. Esse processo pode ser realizado várias vezes por algumas semanas. Em determinadas modalidades, as células podem ser ativadas a partir das coletas de sangue de 10 ml a 400 ml. Em determinadas modalidades, as células são ativadas a partir das coletas de sangue de 20 ml, 30 ml, 40 ml, 50 ml, 60 ml, 70 ml, 80 ml, 90 ml, ou 100 ml. Sem se ater à nenhuma teoria, usando esse protocolo de coleta de sangue múltipla/reinfusão múltipla, podem-se selecionar determinadas populações de células.
[0304]Em determinadas modalidades da presente invenção, as células são modificadas usando os métodos descritos no presente documento, ou outros métodos conhecidos na técnica onde as células são expandidas a níveis terapêuticos, são administradas a um paciente em conjunto (por exemplo, antes, simultaneamente ou após) com qualquer número de modalidades de tratamento relevantes, incluindo, sem limitação, um tratamento com agentes como terapia antiviral, cidofovir e interleucina-2, Citarabina (também conhecido como ARA-C) ou tratamento com natalizumab para pacientes MS ou tratamentos para pacientes PML. Em modalidades adicionais, as células da invenção podem ser usadas em combinação com uma terapia celular CART, quimioterapia, radiação, agentes imunossupressivos, como ciclosporina, azatioprina, metotrexato, micofenolato, e FK506, anticorpos, ou outros agentes imunoablativos como anticorpo anti-CD52 alemtuzumab (CAM PATH), anticorpos anti-CD3 ou outras terapias de anticorpo, citoxina, fludaribina, ciclosporina, FK506, rapamicina, ácido micofenólico, esteroides, FR901228, citocinas, e irradiação. Esses fármacos inibem a calcineurina de fosfatase dependente de cálcio (ciclosporina e FK506) ou inibir a quinase p70S6 que é importante para uma sinalização induzida por fator de crescimento (rapamicina). (Liu et al., Cell 66:807-815, 1991; Henderson et al., Immun. 73:316-321, 1991; Bierer et al., Curr. Opin. Immun. 5:763-773, 1993). Em uma modalidade adicional, as composições celulares da presente invenção são administradas a um paciente em conjunto (por exemplo, antes, simultaneamente ou após) com transplante de medula óssea, terapia ablativa de linfócito usando agentes quimioterapêuticos como, fludarabina, terapia por radiação em feixes externos (XRT), ciclofosfamida, Rituxan, ou anticorpos como OKT3 ou CAMPATH. Por exemplo, em uma modalidade, os indivíduos podem ser submetidos a um tratamento padrão com quimioterapia de alta dosagem segunda por transplante de célula-tronco de sangue periférico. Em determinadas modalidades, após o transplante, os indivíduos receberam uma infusão das células da presente invenção. Em uma modalidade adicional, as células podem ser administradas antes ou após a cirurgia.
[0305]A dosagem dos tratamentos anteriores a ser administrada a um indivíduo variará com a natureza precisa da afecção sendo tratada e com o receptor do tratamento. O escalonamento de dosagens para administração em seres humanos pode ser realizado de acordo com as práticas aceitas na técnica. A dose para CAMPATH, por exemplo, geralmente estará na faixa de 1 a cerca de 100 mg para um paciente adulto, geralmente administrado diariamente por um período entre 1 e 30 dias. A dose diária preferencial é de 1 a 10 mg ao dia, embora, em alguns casos, doses maiores de até 40 mg ao dia podem ser usadas (descritas na Patente no U.S. 6.120.766).
[0306]Deve-se compreender que o método e as composições que seriam úteis na presente invenção não se limitam às formulações particulares apresentadas nos exemplos. Os exemplos a seguir são apresentados para proporcionar aos indivíduos com conhecimento comum na técnica uma revelação completa e uma descrição de como produzir e usar as células, métodos e expansão e cultura, e métodos terapêuticos da invenção, e não são destinados a limitarem o escopo do que os inventores consideram como sendo sua invenção.
[0307]A prática da presente invenção emprega, exceto onde indicado em contrário, técnicas convencionais de biologia molecular (incluindo técnicas recombinantes), microbiologia, biologia celular, bioquímica e imunologia, que estejam dentro da alçada do artesão versado. Essas técnicas são explicadas completamente na literatura, como, “Molecular Cloning: A Laboratory Manual”, quarta edição (Sambrook, 2012); “Oligonucleotide Synthesis” (Gait, 1984); “Culture of Animal Cells” (Freshney, 2010); “Methods in Enzymology” “Handbook of Experimental Immunology” (Weir, 1997); “Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells” (Miller and Calos, 1987); “Short Protocols in Molecular Biology” (Ausubel, 2002); “Polymerase Chain Reaction: Principles, Applications and Troubleshooting”, (Babar, 2011); “Current Protocols in Immunology” (Coligan, 2002). Essas técnicas são aplicáveis à produção dos polinucleotídeos e polipeptídeos da invenção, e, como tais, podem ser considerados na produção e prática da invenção. Técnicas particularmente úteis para modalidades particulares serão discutidas nas seções que se seguem.
[0308]A invenção será adicionalmente descrita em detalhes com referência aos exemplos experimentais a seguir. Esses exemplos são proporcionados apenas por propósitos de ilustração, e não são destinados a serem limitantes, exceto onde especificado em contrário. Logo, a invenção não deve, de forma alguma, ser construída como sendo limitada aos exemplos a seguir, mas, ao invés disso, deve ser construída para abranger toda e qualquer variação que se torne evidente como resultado dos ensinamentos fornecidos no presente documento.
[0309]Sem a necessidade de uma descrição adicional, acredita-se que um indivíduo com conhecimento comum na técnica possa, usando a descrição precedente e os exemplos ilustrativos a seguir, produzir e utilizar os compostos da presente invenção e praticar os métodos reivindicados. Portanto, os exemplos funcionais a seguir apontam especificamente as modalidades preferenciais da presente invenção, e não devem ser construídos como limitantes, de forma alguma, ao restante da revelação.
[0310]Agora, descrevem-se os materiais e métodos empregados nesses experimentos.
[0311]Cultura celular: THP1, K562, SKOV3, SKBR3, HDLM2, MD468, e todas as linhagens celulares foram culturadas em RPMI 1640 suplementado com soro bovino fetal a 10% e penicilina/estreptomicina a 37C em CO2 a 5%. Um THP1 mRFP+ sub-linha (Wt) foi gerado por transdução lentiviral e purificação FACS de mRFP+ linhagens celulares. THP1 mRFP+ sub-linha foi usado para gerar sub-linhas THP1 mRFP+ CAR19z+ (CAR19z; CARMA19z), THP1 mRFP+ CAR19Δz+ (CAR19Δz; CARMA19Δz), THP1 mRFP+ MesoZ+ e THP1 mRFP+ CARHer2z+ (CARHer2z; CARMAHer2z). Uma diferenciação de monócito foi induzida culturando- se as células durante 48 horas com 1ng/mL de forbol 12-miristato 13-acetato em um meio de cultura.
[0312]Macrófagos humanos primários: Monócitos humanos primários foram purificados a partir de um produto de aferese de doador normal usando Miltenyi CD14 MicroBeads (Miltenyi, 130-050-201). Os monócitos foram culturados em um meio X-Vivo suplementado com soro AB humano a 5% ou RPMI 1640 suplementado com soro bovino fetal a 10%, com penicilina/estreptomicina, glutamax, e 10ng/mL de GM-CSF humano recombinante (PeproTech, 300-03) durante 7 dias em Bolsas de Diferenciação Celular MACS GMP (Miltenyi, 170-076-400). Os macrófagos foram coletados no dia 7 e criopreservados em FBS + 10% DMSO pendente de uso subsequente.
[0313]Ensaio de fagocitose: Wt ou CARMA mRFP+ THP1 sub-linhas foram diferenciadas durante 48 horas com 1ng/mL de forbol 12-miristato 13-acetato. GFP+ sub-linhas tumorais portando antígeno, isto é, K562 CD19+ GFP+ células, foram adicionados aos macrófagos THP1 diferenciados em uma razão 1:1 seguindo uma lavagem com PMA. Os macrófagos foram co-culturados com células tumorais alvo durante 4 horas, e a fagocitose foi quantificada por microscopia fluorescente usando o Sistema de Imageamento Celular EVOS FL Auto. Uma média de três campos de visão foi considerada como n, e todas as condições foram quantificadas em triplicatas. A fagocitose baseada em FACS foi analisada em um BD LSR-Fortessa. FlowJo (Treestar, Inc.) foi usado para analisar os dados citométricos de fluxo. Eventos positivos vivos duplos de mRFP/GFP dependentes de singletos foram considerados fagocitose. Um bloqueio de eixo CD47/SIRPα foi realizada através da adição de anticorpos monoclonais de bloqueio na iniciação da co-cultura em concentrações indicadas (CD47 clone B6H12 anti-humano de camundongo, eBioscience #14-0479-82; CD47 clone 2D3 anti-humano de camundongo como controle negativo, eBioscience #14-0478-82; SIRPα clone SE5A5 anti-humano de camundongo, BioLegend #323802). Um coestímulo TLR foi realizado adicionando-se agonistas TLR1-9 (kit agonista TLR 1-9 humano; Invivogen #tlrl-kit1hw) no momento da co-cultura.
[0314]Ensaio de extermínio in vitro: Macrófagos portando Wt ou CAR foram co-culturados com células tumorais alvo de luciferase verde de besouro-saltador (CBG)/proteína fluorescente verde (GFP) portando antígeno ou de controle em razões variáveis entre efetor e alvo (iniciando em 30:1 e diminuindo em diluidores de três vezes). Utilizou-se um imageamento bioluminescente para determinar a carga tumoral, usando o Sistema de Imageamento de Espectro IVIS (Perkin Elmer). A lise específica percentual foi calculada da seguinte forma: % de lise específica = ((Poço tratado - poço contendo somente tumor)/(extermínio máximo - poço contendo somente tumor)*100)
[0315]Microscopia por lapso de tempo: Realizou-se uma microscopia de vídeo por lapso de tempo RFluorescente de fagocitose mediada por CAR usando o Sistema de Imageamento Celular EVOS FL Auto. As imagens foram capturadas a cada 40 segundos durante 18 horas. A análise da imagem foi realizada com um software de imageamento FIJI.
[0316]Produção e transfecção lentiviral: Construções de receptor de antígeno quimérico foram sintetizadas novamente por GeneArt (Life Technologies) e clonadas em um vetor lentiviral conforme previamente descrito. O lentivírus concentrado foi gerado usando células HEK293T conforme previamente descrito.
[0317]Produção e transfecção adenoviral: Vetores adenovirais qjuiméricos Ad5f35 que codificam GFP, CAR, ou nenhum transgene sob um promotor CMV foram produzidos ne titulados de acordo com o procedimento de biologia molecular padrão. Os macrófagos humanos primários foram transduzidos com multiplicidades variáveis de infecção e serialmente imageado para expressão e viabilidade de GFP usando o Sistema de Imageamento Celular EVOS FL Auto. A expressão de CAR foi avaliada por análise FACS ou expressão de CAR superficial usando um antígeno marcado com His e anticorpo secundário anti-His-APC (R&D Biosystems Clone AD1.1.10).
[0318]Citometria de fluxo: FACS foi realizado em um BD LSR Fortessa. A expressão de CAR superficial foi detectada com uma proteína L biotilinada (GenScript M00097) e estreptavidina APC (BioLegend, #405207) ou antígeno marcado com His e anticorpo secundário anti-His-APC (R&D Biosystems Clone AD1.1.10). Os receptores Fc foram bloqueados com Human Trustain FcX (BioLegend, #422301) antes da coloração. A expressão CD47 foi determinada usando CD47 APC anti-humano de camundongo (eBioscience #17-0479-41) com controle de isotipo de IgG1 kappa APC de camundongo para determinação antecedente. A expressão de calreticulina foi determinada com um PE clone FMC75 anti-calreticulina de camundongo (Abcam #ab83220). Todos os resultados de fluxo são dependentes de células únicas vivas (Live/Dead Aqua Fixable Dead Cell Stain, Life Technologies L34957).
[0319]Citometria de fluxo com imagem: FACS com imageamento fluorescente de célula única foi realizado em um Citômetro de Fluxo de Imageamento ImageStream Mark II (EMD Millipore). Resumidamente, macrófagos tingidos mRFP+ ou DiI (CAR ou controle) foram co-culturados com GFP+ células tumorais durante 4 horas, antes da fixação e aquisição de dados ImageStream. Os dados foram analisados usando um software ImageStream (EMD Millipore).
[0320]Eletroporação de RNA: Construções de CAR foram clonadas em plasmídeos de transcrição in vitro sob o controle de um promotor T7 usando técnicas de biologia molecular padrão. mRNA CAR foi transcrito in vitro usando um kit de transcrição in vitro mMessage mMachine T7 Ultra (Thermo Fisher), purificado usando um kit de purificação RNEasy RNA (Qiagen), e eletroporado em macrófagos humanos usando um eletroporador BTX ECM850 (BTX Harvard Apparatus). A expressão de CAR foi ensaiada em pontos de tempo variáveis pós-eletroporação usando análise FACS.
[0321]Primação TLR/Dectina-1: Primação TLR ou Dectina-1 em macrófagos Wt ou CAR antes da fagocitose in vitro ou ensaios de extermínio foi realizado pré- incubando-se as células com doses recomendadas de agonistas TLR 1-9 (Human TLR1-9 Agonist Kit, Invivogen) ou beta-glucan (MP Biomedicals, LLC), respectivamente, durante 30 minutos antes da co-cultura. A função in vitro de macrófagos Wt ou CAR foi comparada entre as condições não primadas e primadas.
[0322]Fenótipo de Macrófago/Monócito: Os marcadores superficiais a seguir foram avaliados como parte de um painel FACS de imunofenótipo de macrófago/monócito, para distinção M1/M2: CD80, CD86, CD163, CD206, CD11B, HLA-DR, HLA-A/B/C, PDL1 e PDL2 (BioLegend). TruStain FcX foi usado para bloqueio de receptor Fc antes da imunocoloração. Macrófagos/monócitos foram expostos a condições de ativação, isto é, transdução Ad5f35 durante 48 horas, ou não, antes da avaliação de fenótipo.
[0323]Ensaio Seahorse: O consumo de fenótipo metabólico e oxigênio de macrófagos foi determinado usando o ensaio Seahorse (Seahorse XF, Agilent). Os macrófagos de controle ou CAR foram expostos a um controle de meio ou citocinas imunossupressivas durante 24 horas antes da análise. As células foram tratadas com oligomicina, FCCP, e rotenona sequencialmente ao longo do ensaio Seahorse. O ensaio foi realizado com 6 réplicas por condição.
[0324]Ensaios in nivo: Camundongos NOD-scid IL2Rg-null-IL3/GM/SF, NSG- SGM3 (NSGS) foram usados para modelos de xenoenxerto humano. Os camundongos enxertados com células de câncer ovariano SKOV3 humano positivo CBG-luciferase foram deixados sem tratamento, ou tratados com macrófagos humanos não transduzidos, transduzidos com Ad5f35 vazio, ou transduzidos com Ad5f35 CAR-HER2 em diferentes doses. O imageamento bioluminescente serial foi realizado para monitorar a carga tumoral (IVIS Spectrum, Perkin Elmer). Os órgãos e o tumor foram coletados após sacrifício para análise FACS. A sobrevivência geral foi monitorada e comparada usando uma análise Kaplan-Meier.
[0325]Agora, descrevem-se os resultados dos experimentos.
[0326]A Figura 1A é um diagrama conceitual de um receptor de antígeno quimérico (CAR) composto por um produto gene/gene contendo um domínio extracelular com função de direcionamento, um domínio de dobradiça, um domínio transmembranar, um domínio de sinalização intracelular e/ou um 2A (P2A, T2A) para coexpressão estequiométrica de um produto de gene adicional que pode, ou não, ser secretado, incluindo qualquer gene/transcrição/proteína, incluindo, sem limitação, uma citocina, anticorpo monoclonal, fragmento de anticorpo, fragmento variável de cadeia simples, enzima, receptor adicional, receptor negativo dominante, antígeno associado a tumor, e qualquer combinação dos mesmos. Além disso, a construção CAR pode incluir a co-entrega de material de edição genética CRISPR/Cas9, ou ser introduzido no contexto de uma célula pré-editada CRISPR/Cas9. Exemplos específicos de construções CAR são modelados na Figura 1B, incluindo CARMA-Z, CARMA-y, e CARMA-Dectina, que contêm um scFv específico a antígeno, dobradiça CD8, transmembrana CD8, e um CD3 Z, subunidade y de FcεRI comum, ou o domínio intracelular de Dectina-1, respectivamente.
[0327]A Figura 2A é um gráfico que mostra CAR19z expressado na superfície de células mieloides pós transdução lentiviral. O lentivíirus CAR19z foi titulado em diluidores de três vezes e usado para transduzir 1e5/0,1mL de mRFP + células THP1. mRFP é um gene repórter (proteína fluorescente vermelha) que foi expressado por transdução lentiviral da linhagem celular mieloide THP1. Essas células podem ser induzidas para se diferenciarem em macrófagos mediante a exposição ao PMA químico. As células THP1 foram coletadas 24 horas pós- transdução e tingidas para expressão superficial CAR com uma proteína L biotinilada seguida por estreptavidina-APC. As células THP1 transduzidas foram expandidas e classificadas por FACS para gerar uma sub-linha 100% CAR19z positiva mRFP + THP1 (Figura 2B). A Figura 2C demonstra a expressão de construções CAR lentiviral anti-CD19, anti-HER2 e anti-mesotelina em macrófagos THP1, com eventos CAR(+) no quadrante superior direito.
[0328]A Figura 3A é um fluxograma que mostra a visão geral de geração de sub-linha CARMA usando um modelo de macrófago THP1, diferenciação com 1ng/mL de forbol 12-miristato 13-acetato (PMA), e ensaio de fagocitose in vitro. Os macrófagos CAR anti-CD19, anti-HER2 e anti-mesotelina, porém não macrófagos tipo selvagem (Wt), células tumorais K562 submetidas à fagocitose que expressaram CD19, HER2 ou mesotelina, respectivamente, conforme demonstrado por ensaios de fagocitose baseados em microscópio fluorescente (Figuras 3B a 3C). A fagocitose tumoral de CARMA foi adicionalmente validada por um ensaio baseado em citometria de fluxo, em que mRFP+ CARMA contra CD19 foram co-culturados com células CD19+ GFP+ K562 e eventos positivos duplos foram quantificados (gráfico FACS representativo mostrado - Figura 3E). Um campo de visão padrão de 10x usado na tabulação de função de fagocitose de CARMA é mostrado, tanto mRFP individualmente (Figura 3F) como sobreposto (Figura 3G). Os eventos positivos duplos de mRFP/GFP baseados em FACS foram definidos como eventos fagocíticos, e foram validados como por análise FACS Amnis Imagestream. Os eventos mostrados são selecionados em eventos positivos duplos e ordenados a partir de alto a baixo pelo algoritmo de fagocitose-erode Amnis Imagestream (Figura 3H). A fagocitose de células tumorais por mRFP+ CARMA no modelo de linhagem celular THP-1 foi adicionalmente demonstrada por microscopia confocal, verificando que as células tumorais GFP+ foram completamente encerradas no interior de fagossomas através de reconstruções de pilhas z confocais tridimensionais (Figuras 3I e 3J). A Figura 3K demonstra o destino de uma única célula CARMA ao longo do tempo- com contato e a formação de sinapse imunológica sendo a primeira etapa, levando ao engolfamento fagocítico, degradação do tumor usando a perda de GFP como um marcador de morte celular, divisão de fagossoma e reparo de fagossoma - demonstrando que CARMA sobrevive após a fagocitose de células tumorais. A Figura 3L demonstra a capacidade de CARMA realizar a polifagocitose de muitas células tumorais de uma vez.
[0329]Os macrófagos CAR anti-CD19 foram testados usando um ensaio de fagocitose in vitro contra células tumorais CD19+ (alvo) ou CD19- (controle) GFP+ K562. Demonstrando a especificidade do antígeno de CARMA, apenas as células tumorais portadoras de antígenos foram fagocitadas (Figura 4A). Para demonstrar o requisito do domínio da sinalização intracelular na função CARMA, construtos CAR19-ΔZ (que são desprovidos de um domínio de sinalização intracelular) foram usados. Os macrófagos CAR19-ΔZ não conseguiram realizar a fagocitose de células tumorais e reduziram significativamente a função antitumoral através de um ensaio de lise específico baseado em luciferase in vitro (Figuras 4B e 4C). Os ensaios de fagocitose de CARMA in vitro foram realizados na presença de R406 (inibidor de Syk), citocalasina D (inibidor de polimerização de actina) ou blebistatina (inibidor de miosina IIA não muscular). R406, citocasalina e beblistatina revogaram independentemente a função fagocítica de CARMA, indicando que a sinalização de CAR em macrófagos é dependente de Syk e resulta em polimerização de actina e na função fagocítica mediada por NMIIA (Figuras 4D a 4F).
[0330]A Figura 5A é um gráfico de citometria de fluxo que mostra a expressão de CD47 em linhagens de células alvo tumorais em relação ao controle de isótipo. K562 e K562-CD19+ (K19) foram usadas nesses experimentos, ambas as quais são linhagens celulares que expressam altamente CD47.
[0331]A Figura 5B é um gráfico que mostra que a adição de anticorpo monoclonal anti-CD47 aumentou seletivamente a fagocitose mediada por macrófagos CAR, porém não por Wt de células tumorais portadoras de antígeno. Os macrófagos Wt ou CAR19Z foram incubados com células tumorais CD19+ K562 com 0, 0,01, 0,10, 1,00, ou 10,0 mcg/ml de anticorpo monoclonal anti-CD47.
[0332]A Figura 5C é um gráfico que mostra que a adição de anticorpo monoclonal anti-SIRPα aumentou seletivamente a fagocitose mediada por macrófagos CAR, porém não por Wt de células tumorais portadoras de antígeno. Os macrófagos Wt ou CAR19Z foram incubados com células tumorais CD19+ K562 com 0, 0,01, 0,10, 1,00, ou 10,0 mcg/ml de anticorpo monoclonal anti-SIRPα.
[0333]A Figura 5D é um gráfico que demonstra que o bloqueio do eixo geométrico de CD47/SIRPα com anticorpos monoclonais anti-SIRPα aumentou a polifagocitose (definida como um macrófago que engolfou 2 ou mais células tumorais de uma vez) por macrófagos CAR.
[0334]Para controlar a opsonização adicionada pelos anticorpos monoclonais de bloqueio de CD47/SIRPα, um anticorpo monoclonal anti-CD47 de controle (clone 2D3), que se liga a CD47, porém não bloqueia o CD47 para o sítio de ligação SIRPα, foi usado em um ensaio de fagocitose in vitro. Apenas o clone que bloqueou o sítio de ligação (clone B6H12 Anti-CD47) ou o bloqueio do receptor SIRPα resultou diretamente no aumento de fagocitose de tumor CARMA (Figura 5E).
[0335]Para testar se o bloqueio do eixo geométrico de CD47/SIRPα em macrófagos CAR resulta na perda da especificidade de antígeno, uma fagocitose in vitro contra células tumorais negativas para o antígeno (CD19 negativo) foi conduzida na presença de anticorpo monoclonal Anti-CD47 ou Anti-SIRPα, e não houve fagocitose observável (Figura 5F).
[0336]A especificidade de aumento fagocítico de CARMA na presença de anticorpo monoclonal de bloqueio de SIRPα foi testada por knockout do receptor SIRPα em macrófagos THP1, e comparação de fagocitose tumoral por CARMA ou CARMA SIRPα-KO na ausência ou presença de anticorpo anti-SIRPα. CRISPR/Cas9 foi usado para a deleção de SIRPα, e as células foram classificadas quanto à negatividade de SIRPα antes de ensaios funcionais. A eliminação da função CARMA aprimorada de SIRPα e a adição de anti-SIRPα de volta às células knockout não conseguiram aumentar ainda mais a fagocitose (Figura 5G).
[0337]A Figura 6A demonstra a lise específica de células CD19+ GFP+ Luciferase+ K562 por CARMA CAR19Z, porém não macrófagos Wt (usando o modelo de macrófago THP-1) em um ensaio de ensaio baseado em luciferase in vitro em 48 horas de maneira dose-dependente.
[0338]A Figura 6B é um gráfico que demonstra a lise específica de células tumorais por monócitos THP-1 de CAR19Z ou Wt (indiferenciado, dessa forma, um modelo de monócitos em vez de macrófagos) em um ensaio de extermínio baseado em luciferase in vitro em 48 horas de maneira dose-dependente.
[0339]A Figura 6C é um painel de imagens que mostra a bioluminescência conduzida por luciferase, derivada de células tumorais CD19 + K562 positivas para luciferase, após co-cultura de 48 horas com macrófagos Wt ou CAR19Z in vitro, na ausência ou presença de 10 mcg/ml de anticorpo monoclonal anti-SIRPα. A Figura 6D é um gráfico que demonstra a lise específica de macrófagos Wt ou CAR19Z +/- anticorpo monoclonal anti-SIRPα.
[0340]Os construtos de CAR com um domínio intracelular de subunidade comum de FcεRI y (CAR19y, CARMA19y) foram gerados, embalados em lentivírus, e usados para transduzir células mieloides THP-1 em uma diluição viral serial tripla. CAR19y foi expresso em macrófagos THP-1 Figura 7A).
[0341]Os macrófagos CAR19y ou CAR19Z foram classificados para 100% de positividade de CAR e usados para caracterização funcional in vitro. Os macrófagos CAR19Z e CAR19y realizaram a fagocitose de células tumorais CD19+, e ambos exibiram sinergia com bloqueio do eixo geométrico de CD47/SIRPα pela adição de anticorpo monoclonal anti-SIRPα (Figura 7B)
[0342]Os macrófagos CAR19Z e CAR19y realizam a sinalização através de Syk para conduzir a fagocitose tumoral, conforme demonstrado e um ensaio de fagocitose in vitro de inibição de R406 Syk (Figura 7C).
[0343]Tanto os macrófagos CAR19Z como CAR19y THP1, porém não macrófagos THP1 Wt, exterminaram eficientemente as células tumorais CD19+ em um ensaio de lise específica baseado em luciferase in vitro após 24 horas de co- cultura em várias razões E:T (Figura 7D).
[0344]Como glóbulos brancos do sistema imune inato, os macrófagos respondem a sinais moleculares conservados de infecção, como padrões moleculares associados a patógenos, através de receptores de reconhecimento de patógenos constitutivamente expressos. Os receptores tipo Toll são os receptores de reconhecimento de patógenos melhor caracterizados, e são conhecidos por ativar macrófagos.
[0345]Para aprimorar a função fagocítica do tumor de CARMA, ensaios de fagocitose in vitro foram conduzidos usando macrófagos CAR que foram iniciados com os ligantes para TLR1-9, independentemente, ou controle de meio. Os ligantes de TLR1, 2, 4, 5 e 6 melhoraram a função fagocítica de CARMA (Figura 8A). Isso sugere que os ligantes de TLR podem ser usados para iniciar o CARMA durante o processo de produção, ou os domínios de sinalização de TLR podem ser codificados no construto CAR para aumentar a sinalização de CAR e a função efetora a jusante como um construto de CARMA de segunda geração/subsequente inovador.
[0346]As Figuras 8B e 8C demonstram que a diferença entre ligantes TLR que aumentaram ou não aumentaram a fagocitose de CARMA de células tumorais se aplica em uma ampla faixa de concentrações de ligante TLR3 ou TLR6.
[0347]β-glucano, um produto de levedura, se liga à Dectina-1 sobre a superfície de macrófagos e resulta na ativação e função efetora. Para testar a capacidade de β-glucano para aumentar a função de CARMA, ensaios de fagocitose tumoral in vitro foram conduzidos na ausência ou presença de 5mcg/ml de β- glucano. O β-glucano aumentou a capacidade fagocítica de macrófagos CAR, porém não de Wt (Figura 9A).
[0348]Para testar a capacidade de β-glucano aumentar o extermínio de tumores de CARMA, ensaios de lise específica baseados em luciferase in vitro foram conduzidos em várias razões E:T, na presença de 0, 0,5, de 50mcg/ml de β-glucano. B-glucano aumentou a lise específica de células tumorais portadoras de antígeno por macrófagos CAR, porém não THP-1 Wt (Figura 9B). Esses resultados indicam que o β-glucano pode ser usado como um adjuvante durante o processo de produção de CARMA, ou o domínio de sinalização intracelular de Dectina-1 pode ser codificado no transgene CAR.
[0349]Dado que o β-glucano melhorou a função de CARMA, construtos CAR compreendidos de um domínio de sinalização intracelular de Dectina-1 foram gerados (Figura 10A). Esses construtos foram embalados em lentivírus e usados para transduzir células mieloides THP-1 em uma diluição em série tripla de títulos lentivirais. O CAR foi detectado sobre a superfície, tanto nos construtos CAR CAR8- Dectina1 como em CAR DectinaTM-Dectina1 (Figuras 10B e 10C). As células foram classificadas quanto a 100% de positividade e usadas para experimentos funcionais a jusante in vitro.
[0350]CAR de CD8TM-Dectina1 e CAR de DectinaTM-Dectina1 testados em um ensaio de extermínio baseado em luciferase in vitro. Ambos os construtos demonstraram lise específica de células tumorais (10D).
[0351]Os macrófagos Dectina1-CAR foram testados em um ensaio de fagocitose tumoral in vitro contra células tumorais K562 (controle) ou K19 (alvo) e células tumorais portadoras de antígeno cognato seletivamente fagocitadas por macrófagos Dectina1-CAR (Figura 10E). Macrófagos CAR de Dectina-1 demonstraram a capacidade de fagocitose de múltiplas células tumorais (Figura 10F).
[0352]Em um ensaio de fagocitose tumoral in vitro, os macrófagos Dectina1- CAR demonstraram sinergia com o bloqueio de SIRPα, ou com a iniciação com um ligante TLR (Figura 10G).
[0353]A Figura 11A é um gráfico que mostra os níveis de calreticulina em três linhagens de células alvo CD19+ diferentes em relação ao controle de isótipo.
[0354]A Figura 11B é um gráfico que mostra a intensidade fluorescente média normalizada de expressão de calreticulina em três linhagens de células alvo CD19+ diferentes.
[0355]A Figura 11C é um gráfico que mostra que baixos níveis de calreticulina protegeram moderadamente as células alvo, especificamente as linhagens celulares Nalm6 e JEKO, contra a fagocitose de macrófago CAR19z. Esses dados sugerem que a exploração de deposição/indução de calreticulina pode ser usada como uma tática adicional para aumentar a função efetora de CARMA.
[0356]Para validar e testar a função de CAR em macrófagos derivados de monócitos humanos primários, várias abordagens de entrega de genes foram testadas. Na Figura 12A, construtos de CAR anti-HER2 clonados em plasmídeos de expressão de mRNA, transcritos in vitro, e o mRNA foi diretamente eletroporado em monócitos humanos primários. A Figura 13A demonstra a estratégia de seleção, viabilidade, e eficiência de transfecção de 84,3% em relação a células eletroporadas simuladas. A Figura 12B demonstra a eficiência de eletroporação de mRNA de CAR anti-HER2 em macrófagos derivados de monócitos humanos primários (completamente diferenciados) em 79,7%.
[0357]A Figura 12C é um gráfico que demonstra que, embora a eletroporação de mRNA resulte em uma alta eficiência de transfecção de CAR tanto de monócitos como macrófagos, a expressão de CAR é temporária devido à degradação de mRNA, atingindo o pico no dia 2 e desaparecendo no dia 7 após a eletroporação in vitro.
[0358]Os camundongos NSGS foram injetados com células de câncer de ovário humanas 1E6 SKOV3 CBG/GFP + através de injeção de IP, um modelo de carcinomatose intraperitoneal metastática de câncer de ovário HER2 +. Os camundongos foram coinjetados com monócitos humanos primários eletroporados simulados ou eletroporados por mRNA de CAR anti-HER2 ou macrófagos humanos primários (razão E:T 1:1) e a carga tumoral foi representada em imagens. Os macrófagos CAR (Figura 13A) e monócitos CAR (Figura 13B) demonstraram redução marginal no crescimento tumoral durante aproximadamente duas semanas. O primeiro ponto de tempo em que a carga tumoral foi quantificada de forma bioluminescente foi 24 horas após o tratamento, demonstrando que monócitos e macrófagos CAR tiveram atividade nas primeiras 24 horas.
[0359]A entrega lentiviral de transgenes CAR a macrófagos derivados de monócito humanos primários foi testada usando múltiplos construtos CAR. Na Figura 14A, o CAR19 foi distribuído a macrófagos humanos através de transdução lentiviral, demonstrando uma eficiência de transdução de 4,27% e 38,9% no grupo controle vs. Grupos lentivirais CAR19 (MOI 10), respectivamente. A estratégia de seleção de FACS é mostrada.
[0360]A Figura 14B é um gráfico FACS representativo que mostram a expressão de CAR anti-HER2 em macrófagos humanos primários, com uma eficiência de transdução de 1,47 e 18,1% entre o controle e condições de MOI 10 CAR LV, respectivamente.
[0361]Os macrófagos derivados de monócitos foram gerados por diferenciação de células CD14+ selecionadas (a partir de produtos de aférese de doadores normais em meios condicionados GM-CSF durante 7 dias. Para otimizar a entrega de CAR através de transdução lentiviral, os lentivírus anti-CD19 e anti-HER2 foram usados para transduzir macrófagos em diferentes pontos do processo de diferenciação de monócito para macrófago. A eficiência da transdução atingiu seu pico no ponto médio de transdução (dia 4), tanto para construtos anti-CD19 como CAR anti-HER2 (Figuras 15A e 15B). Os macrófagos humanos primários CAR anti- CD19 foram usados em um ensaio de fagocitose baseado em FACS in vitro contra células tumorais CD19 + GFP + K562, com os eventos CD11b+/GFP+ sendo definidos como eventos fagocíticos. Os macrófagos transduzidos em diferentes pontos de tempo como na Figura 15A foram usados nesse ensaio. A Figura 15C demonstra que a eficácia da fagocitose evoluiu com a eficiência de transdução de CAR, atingindo seu pico com macrófagos transduzidos no dia 4 durante o processo de diferenciação.
[0362]Abordagens de transdução alternativas para a entrega de transgenes para macrófagos humanos primários foram testadas, uma vez que a eletroporação de mRNA era transitória e o lentivírus era apenas moderadamente eficiente e exigia alto título. O adenovírus (recombinante, deficiente em replicação) foi identificado como uma abordagem eficiente para a transdução de macrófago humano primário. A expressão de Receptor de Adenovírus Coxackie (a proteína de ancoragem para Ad5) e CD46 (a proteína de ancoragem para Ad35) foi testada em relação ao controle do isótipo em macrófagos humanos primários, e CD46, porém não o receptor de Adenovirus Coxackie, foi altamente expresso (Figura 16A). Dessa forma, o adenovírus quimérico Ad5f35 foi utilizado para a transdução de macrófagos humanos primários e foi elaborado através de técnicas padrão de biologia molecular para expressar um receptor de antígeno quimérico (GFP e vírus vazios Ad5f35 foram usados como controles) contra HER2.
[0363]A Figura 16B mostra que, em um MOI de 1000, Ad5f35 distribuiu efetivamente um transgene (GFP foi usado como um modelo de transgene) em macrófagos humanos, e a expressão aumentou ao longo do tempo, conforme monitorado pela quantificação de sinal GFP em um Espectro IVIS. A Figura 16C compara a cinética de transdução de macrófagos humanos primários em pontos de tempo diferentes em uma ampla gama de MOIs - até 10.000.
[0364]A Figura 16C mostra gráficos representativos de FACS de expressão de CAR anti-HER2 em macrófagos humanos transduzidos Ad5f35 48 horas após a transdução, em uma ampla gama de MOIs virais.
[0365]A Figura 16D mostra imagens de microscópio fluorescente de macrófagos humanos primários transduzidos Ad5f35-GFP, com a eficiência de transdução mais alta demonstrada em um MOI de 1000.
[0366]Os CARMA humanos primários foram testados em um ensaio de fagocitose in vitro através de análise FACS. Os macrófagos (CAR não transduzido ou anti-HER2) foram corados com DiI antes da co-cultura com células de câncer de ovário GFP+ SKOV3. Fagocitose, definida por eventos positivos duplos DiI/GFP, foi medida em um nível de 26,6% no grupo CAR e 4,55% no grupo de controle (Figura 17A). Para validar que os dois eventos positivos duplos de DiI/GFP eram eventos fagocíticos e não dupletos, a citocalasina D (um inibidor de fagocitose) foi adicionada a um ramo do experimento e anulou completamente a fagocitose mediada por CAR até 1,74%. Para validar adicionalmente que os macrófagos CAR humanos primários poderiam fagocitar as células tumorais, eventos positivos duplos foram fechados por FACS Amnis Imagestream e ordenados de alto a baixo pelo algoritmo de fagocitose- erode Amnis, demonstrando visualmente que esses eventos positivos duplos representam a fagocitose (Figura 17B). Além disso, os macrófagos CAR-HER2 corados com DiI foram co-culturados com SKOV3-GFP e representados em imagens por microscópio confocal e a fagocitose foi verificada.
[0367]Os macrófagos humanos primários CAR Anti-HER2 foram gerados usando transdução de Ad5f35-CAR de macrófagos derivados de monócitos. Essas células (ou células não transduzidas de controle) foram usadas como efetores em um ensaio de fagocitose baseado em FACS in vitro de células de câncer de mama humanas SKBR3. A Figura 18 demonstra que macrófagos humanos CAR, porém não UTD realizam a fagocitose de células de câncer de mama. Além disso, a adição de anticorpo monoclonal anti-SIRPα aumentou a fagocitose de macrófago CARMA, porém não UTD de células de câncer de mama. Esses resultados demonstram que a sinergia entre o bloqueio do eixo geométrico de CD47/SIRPα observado com CARMA no modelo THP-1 é traduzida para estudos de macrófagos humanos primários.
[0368]Os macrófagos são glóbulos brancos do sistema imune inato e, dessa forma, têm propriedades antimicrobianas sentinela. Para demonstrar que macrófagos CAR ainda são células imunes funcionais inatas no sentido antimicrobiano e não perdem a capacidade de responder a estímulos infecciosos, macrófagos controle não transduzidos ou CAR foram empregados em um ensaio de fagocitose de E.Coli baseado em FACS. A Figura 19 é um gráfico de FACS representativo que mostra que CARMA exibe fagocitose intacta de partículas de E.Coli pH-Rodo Green.
[0369]Os CARMA anti-HER2 humanos primários foram testados como células efetoras em ensaios de extermínio baseados em luciferase in vitro. Os macrófagos CARMA Anti-HER2, porém não UTD de controle, resultaram na lise específica de células HER2+ K562, porém não de células de controle K562, desprovidas de expressão de HER2, após 48 horas de co-cultura (Figura 20A). Para demonstrar que o extermínio de CARMA pode ser traduzido para células tumorais que expressam HER2 em níveis fisiológicos (em oposição a K562-HER2 que é transduzido lentiviralmente para sobre-expressar HER2), células de câncer de mama SKBR3 e células de câncer de ovário SKOV3 foram usadas como alvos. Macrófagos CARMA, porém não UTD de controle ou Ad5f35 Vazio de controle transduzidos, tinham atividade antitumoral significativa contra ambos os modelos após 48 horas de co-cultura (Figuras 20B e 20C). Para testar a sinergia entre o bloqueio do eixo CD47/SIRPα em um ensaio de extermínio, as células de câncer de ovário SKOV3 foram co-culturadas com meios, macrófagos não transduzidos de controle, CARMA anti-HER2, CARMA anti-HER2 + mAB antiCD47 (10mcg/ml) ou CARMA anti-HER2 + anti-SIRPα (10mcg/ml) e o sinal de luciferase foi medido em série. CARMA resultou na erradicação de tumor total no dia 13, enquanto a cinética da erradicação do tumor foi ainda mais rápida na presença de bloqueio do eixo CD47/SIRPα (Figura 20D). A sinergia com β-glucano, que foi demonstrada em um modelo de macrófago CARMA THP-1, foi testada em um experimento similar, e a iniciação de β-glucano do CARMA levou à cinética de extermínio de tumores aprimorada (Figura 20E). A exposição de CARMA a LPS (um ligante de TLR-4) ou Poli-IC (um ligante de TLR-3) resultou em modulação do efeito antitumoral (Figura 20F).
[0370]A capacidade de CARMA humano primário eliminar tumores in vitro foi demonstrada por ensaio de luciferase nas Figuras 20A a 20F. Para validar esses resultados, as células de câncer de ovário GFP + SKOV3 foram co-culturadas com macrófagos UTD de controle, macrófagos UTD de controle mais 10 μc/ml de trastuzumabe, macrófagos transduzidos por vírus Ad5f35 vazio de controle, ou CARMA anti-HER2 humano primário. As condições de CARMA, porém não de controle, foram capazes de eliminar as células tumorais (Figura 21).
[0371]Macrófagos são células fenotipicamente plásticas capazes de adotar diversas características funcionais, comumente separadas nas classificações de macrófago M1 e M2 - sendo M1 inflamatório/ativado e M2 sendo imunossupressor/promotor de tumor. 48 horas após a transdução de macrófagos humanos primários com vírus Ad5f35 CAR, uma supraregulação dose-dependente de marcadores M1 CD80/CD86 e uma infraregulação dose-dependente de marcador CD23 M2, foram medidas por FACS (Figura 22A). Para testar se esse efeito foi um resultado da expressão de CAR ou transdução de Ad5f35, os macrófagos que foram transduzidos com nada, Ad5f35 vazio ou Ad5f35 anti-HER2 e Ad5f35 vazio/CAR mostraram o mesmo padrão de mudança de fenótipo (Figura 22B).
[0372]O microambiente do tumor sólido é, em geral, imunossupressor e pode levar à polarização macrófago para o estado M2. Para testar se o CARMA, que é polarizado por M1 devido à transdução viral, é resistente à subversão mediada por citocina imunossupressora para M2, os macrófagos humanos CAR não transduzidos ou anti-HER2 foram expostos à IL-4, IL-10 ou IL-13 durante 24 horas antes da co- cultura com células de câncer de ovário SKOV3. Os macrófagos UTD de controle condicionados com citocinas supressoras resultaram no aumento do crescimento tumoral, enquanto o CARMA exposto a citocinas supressoras manteve sua atividade de extermínio em um ensaio de lise específica in vitro baseado em luciferase em 48 horas (Figura 22C).
[0373]Para testar adicionalmente a resistência à imunossupressão de macrófagos CAR humanos, macrófagos UTD de controle, Ad5f35 Vazio ou transduzidos por CAR Ad5f35 anti-HER2 foram expostos a 10 ng/ml de IL-4, uma citocina de indução M2 canônica ou células cancerígenas que anteriormente foram mostradas para subverter macrófagos para M2 durante a co-cultura (SKOV3, linhagem de células de câncer de ovário, HDLM2, linhagem de células de linfoma de Hodgkin). Os macrófagos UTD de controle suprarregulam (upregulation) CD206, um marcador M2 que responde especificamente ao estímulo de IL-4 através da fosforilação de STAT6. Ad5f35 vazio, e mais macrófagos transduzidos por CAR- Ad5f35, exibiram resistência à IL-4 e subversão induzida por tumor ao fenótipo M2 (Figura 22D).
[0374]Para caracterizar ainda mais o fenótipo de macrófagos CAR, o fenótipo metabólico foi sondado usando o ensaio Seahorse para medir o consumo de oxigênio. Os macrófagos M2 têm uma taxa de consumo de oxigênio basal mais alta do que os macrófagos M0 ou M1, devido a uma maior dependência de fosforilação oxidativa para a produção de ATP. Os macrófagos UTD de controle ou CAR anti-HER2 foram expostos à IL-4 durante 24 horas para polarizar para M2 (ou não), e a taxa de consumo de oxigênio foi medida. Os macrófagos UTD de controle demonstraram a característica de aumento do consumo de oxigênio basal característica de macrófagos M2, enquanto o CARMA não respondeu à IL-4, sugerindo que é resistente à subversão de M2 (Figura 22E). Esses dados combinados ilustram, usando ensaios fenotípicos, metabólicos e funcionais, que os CARMA são resistentes à subversão de M2.
[0375]Os monócitos doadores normais humanos primários (purificados através de seleção positiva de CD14) foram transduzidos com Ad5f35-CAR-HER2 em MOI’s variando de 0 (UTD) a 1000. A expressão de CAR foi medida através de FACS 48 horas após a transdução. Os monócitos CAR foram eficientemente gerados com Ad5f35, com a expressão atingindo seu pico em um MOI de 1000 (Figuras 23A e 23B). Os monócitos mantiveram alta viabilidade (medida pela análise FACS Live/Dead Aqua) em MOIs de até 1000 (Figura 23C). Os marcadores de ativação M1 suprarregulados (upregulated) por monócitos humanos CAR, porém não transduzidos (UTD) (Figura 23D) e o marcador M2 infraregulado (downregulated) (Figura 23E), conforme analisado pelo FACS, demonstraram um fenótipo de monócito M1 48 horas após a transdução.
[0376]O extermínio de monócitos CAR anti-HER2 foi avaliado através de ensaio de extermínio in vitro baseado em luciferase em uma faixa de razões de efetor:alvo (E: T). Os monócitos não transduzidos (UTD) ou CAR-HER2-zeta (CAR) foram co-culturados com células HER2 + SKBR3 (câncer de mama humano) ou HER2 + SKOV3 (câncer de ovário humano) in vitro. A lise específica foi calculada e determinada 24, 48 e 96 horas após a iniciação da co-cultura. Os monócitos CAR, porém não UTD realizaram a lise de células de câncer de mama e ovário in vitro (Figuras 24A e 24B).
[0377]Os camundongos NOD-scid IL2Rg-null-IL3/GM/SF, NSG-SGM3 (NSGS) foram usados para modelar xenoenxertos de câncer de ovário humano HER2 (+) in vivo. No dia 0, os camundongos foram injetados intraperitonealmente (IP) com células de câncer de ovário SKOV3 positivas para luciferase de cleópteros 7.5E5 (CBG luc)/ positivas para proteína verde fluorescente (GFP) como um modelo de carcinomatose intraperitoneal, um modelo metastático inerentemente agressivo de malignidade sólida. Os camundongos não foram tratados (tumor individualmente), ou injetados com uma dose única de macrófagos humanos 4-E6 não transduzidos (UTD) ou CAR-HER2 (CARMA) no dia 0 através de injeção IP (diagrama esquemático, Figura 25A). Os camundongos foram representados em imagens em série usando bioluminescência (fluxo total, fótons/segundo) como um substituto de carga tumoral. Os camundongos que receberam o tratamento com CARMA tiveram uma redução na carga tumoral de aproximadamente duas ordens de grandeza (Figuras 25B e 25C). Os camundongos tratados com CARMA tiveram um benefício de sobrevivência de 30 dias (p = 0,018) em relação aos camundongos não tratados ou tratados com macrófago UTD (Figura 25D). Para demonstrar o tráfego de macrófagos no nódulo de tumor sólido, os tumores foram coletados de camundongos que morreram no dia 36 e avaliados quanto à presença de macrófagos humanos transferidos de forma adotiva através da expressão de CD45 humano na análise FACS (Figura 25E).
[0378]Os macrófagos humanos foram tanto não transduzidos (UTD) como transduzidos com vírions V5f35 vazios desprovidos de um transgene (Vazio) ou Ad5f35-CAR-HER2-Z (CARMA) em multiplicidades de infecção de 1000. A expressão de CAR de superfície foi verificada por análise FACS 48 horas após a transdução (Figura 26A). Os marcadores de superfície foram avaliados para demonstrar a polarização do macrófago M1 em células transduzidas por V5f35 vazio ou CAR- HER2-Z Ad5f35. Os marcadores M1 (HLA DR, CD86, CD80, PDL1) foram suprarregulados (upregulated) enquanto os marcadores M2 (CD206, CD163) foram infrarregulados (downregulated) (Figura 26B). Os camundongos NSGS foram usados novamente em um modelo IP de câncer de ovário metastático HER2 + e foram estratificados em quatro grupos de tratamento (n = 5 por grupo). Os camundongos não foram tratados ou receberam injeções IP de macrófagos não transduzidos por 1-E7, transduzidos por Ad5f35 vazio ou macrófagos transduzidos por CAR-HER2-Z no dia 0 (Figura 26C). A carga tumoral foi monitorada através de imageamento bioluminescente serial, com dados representativos mostrados no dia 27 após o enxerto tumoral (Figuras 26D e 26E). Os camundongos tratados com CARMA apresentaram carga de tumores aproximadamente 2.400 vezes menor do que os camundongos não tratados no dia 20 após o tratamento.
[0379]Os camundongos NSGS foram usados em um modelo IP de câncer de ovário metastático HER2 + e foram estratificados em quatro grupos de tratamento (n = 5 por grupo), incluindo sem tratamento, e macrófagos humanos 3E6, 1E7, ou 2E7 CAR-HER2-Z, administrados IP no dia 0 (Figura 27A). A carga tumoral foi monitorada através de imageamento bioluminescente serial, e uma resposta dose-dependente do número de macrófagos foi observada nesse modelo (Figura 27B). As doses únicas de macrófagos CAR-HER2 em macrófagos 3E6, 1E7, ou 2E7 por camundongo resultaram na erradicação de tumor dose-dependente (em relação aos camundongos não tratados) no dia 36 após o engolfamento (Figura 27C).
[0380]A Figura 28 é uma ilustração da abordagem terapêutica proposta para CARMA. Em suma, os monócitos de pacientes poderiam ser selecionados a partir do sangue periférico, diferenciados ex vivo e transduzidos para expressar um CAR, coestimulado (ou não) com compostos sinérgicos e injetados novamente no paciente por via intravenosa, intraperitoneal, intratumoral, através de procedimento radiológico intervencionista, ou por outra via. Salienta-se que o processo diferenciado poderia ser ignorado e os monócitos podem ser transduzidos e infundidos novamente no paciente. A fonte de monócitos também pode ser um doador compatível com HLA.
[0381]A citação de uma listagem de elementos em qualquer definição de uma variável no presente documento inclui definições dessa variável como qualquer elemento único ou uma combinação (ou subcombinação) de elementos listados. A citação de uma modalidade no presente documento inclui que a modalidade como qualquer modalidade única ou em combinação com quaisquer outras modalidades ou porções das mesmas.
[0382]As revelações de cada patente, pedido de patente e publicação citadas no presente documento se encontram incorporadas ao presente documento em duas totalidades a título de referência. Muito embora esta invenção tenha sido revelada com referência a modalidades específicas, é aparente que outras modalidades e variações desta invenção possam ser desenvolvidas por outros indivíduos versados na técnica sem divergir do verdadeiro âmbito e escopo da invenção. As reivindicações anexas são destinadas a serem construídas para incluírem todas essas modalidades e variações equivalentes.
Claims (25)
1. Composição farmacêutica CARACTERIZADA pelo fato de que compreende uma célula modificada compreendendo um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende um domínio de ligação ao antígeno, um domínio transmembrana e um domínio intracelular de uma molécula estimulatória e/ou co-estimulatória, e em que a célula é um monócito, macrófago ou célula dendrítica que possui atividade efetora direcionada e compreende um componente de adenovírus Ad5f35, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
2. Composição farmacêutica CARACTERIZADA pelo fato de que compreende uma célula modificada compreendendo uma sequência de ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que a sequência de ácido nucleico compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica um domínio de ligação ao antígeno, uma sequência de ácido nucleico que codifica um domínio transmembrana e uma sequência de ácido nucleico que codifica um domínio intracelular de uma molécula estimulatória e/ou co-estimulatória, e em que a célula é um monócito, macrófago, ou célula dendrítica que expressa o CAR e possui atividade efetora direcionada e compreende um componente de adenovírus Ad5f35, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
3. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADA pelo fato de que o domínio de ligação ao antígeno do CAR compreende um anticorpo selecionado dentre o grupo que consiste em um anticorpo monoclonal, um anticorpo policlonal, um anticorpo sintético, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo de domínio simples, um fragmento variável de cadeia simples, e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos.
4. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADA pelo fato de que o domínio de ligação ao antígeno do CAR é selecionado dentre o grupo que consiste em um anticorpo anti-CD19, um anticorpo anti-HER2 e um fragmento dos mesmos.
5. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADA pelo fato de que o domínio intracelular do CAR compreende domínios de sinalização duplos.
6. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADA pelo fato de que a atividade efetora direcionada é voltada contra um antígeno em uma célula alvo que se liga especificamente ao domínio de ligação ao antígeno do CAR.
7. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADA pelo fato de que a atividade efetora direcionada é selecionada dentre o grupo que consiste em fagocitose, citotoxicidade celular direcionada, apresentação de antígeno e secreção de citocina.
8. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende ainda um agente selecionado dentre o grupo que consiste em um ácido nucleico, um antibiótico, um agente anti- inflamatório, um anticorpo ou fragmentos de anticorpo do mesmo, um fator de crescimento, uma citocina, uma enzima, uma proteína, um peptídeo, uma proteína de fusão, uma molécula sintética, uma molécula orgânica, um carboidrato ou similares, um lipídeo, um hormônio, um microssomo, um derivado ou uma variação dos mesmos, e qualquer combinação dos mesmos.
9. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADA pelo fato de que a célula modificada tem pelo menos um marcador M1 suprarregulado (upregulated) e pelo menos um marcador M2 infrarregulado (downregulated).
10. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADA pelo fato de que a célula modificada é geneticamente modificada para expressar o CAR.
11. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADA pelo fato de que a atividade efetora direcionada é aprimorada pela inibição da atividade de CD47 ou SIRPα.
12. Uso de uma célula modificada compreendendo um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende um domínio de ligação ao antígeno, um domínio transmembrana e um domínio intracelular de uma molécula estimulatória e/ou co-estimulatória, e em que a célula é um monócito, macrófago ou célula dendrítica que possui atividade efetora direcionada e compreende um componente de adenovírus Ad5f35 ou compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que a sequência de ácido nucleico compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica um domínio de ligação ao antígeno, uma sequência de ácido nucleico que codifica um domínio transmembrana e um sequência de ácido nucleico que codifica um domínio intracelular de uma molécula estimulatória e/ou co-estimulatória, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma resposta imune em um indivíduo em necessidade do mesmo.
13. Uso de uma célula modificada compreendendo um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que o CAR compreende um domínio de ligação ao antígeno, um domínio transmembrana e um domínio intracelular de uma molécula estimulatória e/ou co-estimulatória, e em que a célula é um monócito, macrófago ou célula dendrítica que possui atividade efetora direcionada e compreende um componente de adenovírus Ad5f35 ou compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR), em que a sequência de ácido nucleico compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica um domínio de ligação ao antígeno, uma sequência de ácido nucleico que codifica um domínio transmembrana e uma sequência de ácido nucleico que codifica um domínio intracelular de uma molécula estimulatória e/ou co-estimulatória, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de um tumor ou câncer em um indivíduo em necessidade do mesmo.
14. Uso da composição farmacêutica, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para tratar uma doença ou condição associada a um tumor ou câncer em um indivíduo.
15. Uso da composição farmacêutica, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para estimular uma resposta imune a uma célula tumoral alvo ou tecido tumoral em um indivíduo.
16. Método para modificar uma célula CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: introduzir um receptor de antígeno quimérico (CAR) no monócito, macrófago ou célula dendrítica, em que o CAR compreende um domínio de ligação ao antígeno, um domínio transmembrana e um domínio intracelular de uma molécula estimulatória e/ou co-estimulatória, e em que a célula é um monócito, macrófago ou célula dendrítica que expressa o CAR e possui atividade efetora direcionada, em que o domínio de ligação ao antígeno do CAR é selecionado dentre o grupo que consiste em um anticorpo anti-CD19, um anticorpo anti-HER2, e um fragmento dos mesmos, e em que o CAR é introduzido pela transdução da célula com um vetor de adenovírus Ad5f35 que compreende a sequência de ácido nucleico que codifica o CAR.
17. Método, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de que introduzir o CAR na célula compreende introduzir uma sequência de ácido nucleico que codifica o CAR.
18. Método, de acordo com a reivindicação 17, CARACTERIZADO pelo fato de que introduzir a sequência de ácido nucleico compreende eletroporar um mRNA que codifica o CAR.
19. Método, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de que a atividade efetora direcionada é voltada contra um antígeno em uma célula alvo que se liga especificamente ao domínio de ligação ao antígeno do CAR.
20. Método, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de que a atividade efetora direcionada é selecionada dentre o grupo que consiste em fagocitose, citotoxicidade celular direcionada, apresentação de antígeno e secreção de citocina.
21. Método, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda inibir a atividade de CD47 ou SIRPα para aprimorar a atividade efetora direcionada.
22. Método, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que inibir a atividade de CD47 ou SIRPα compreende colocar a célula em contato com um anticorpo anti-CD47 de bloqueio ou um anticorpo anti-SIRPα de bloqueio.
23. Método, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de que o domínio intracelular do CAR compreende domínios de sinalização duplos.
24. Método, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de que o domínio de ligação ao antígeno do CAR compreende um anticorpo selecionado dentre o grupo que consiste em um anticorpo sintético, anticorpo humano, anticorpo humanizado, anticorpo de domínio simples, fragmento variável de cadeia simples e fragmentos de ligação ao antígeno do mesmo.
25. Método, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda modificar a célula para entregar um agente a um alvo, em que o agente é selecionado dentre o grupo que consiste em um ácido nucleico, um antibiótico, um agente anti-inflamatório, um anticorpo ou fragmentos de anticorpo do mesmo, um fator de crescimento, uma citocina, uma enzima, uma proteína, um peptídeo, uma proteína de fusão, uma molécula sintética, uma molécula orgânica, um carboidrato ou similares, um lipídeo, um hormônio, um microssomo, um derivado ou uma variação do mesmo, e qualquer combinação dos mesmos.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201562197675P | 2015-07-28 | 2015-07-28 | |
US62/197,675 | 2015-07-28 | ||
PCT/US2016/044440 WO2017019848A1 (en) | 2015-07-28 | 2016-07-28 | Modified monocytes/macrophage expressing chimeric antigen receptors and uses thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
BR112018001858A2 BR112018001858A2 (pt) | 2018-09-18 |
BR112018001858B1 true BR112018001858B1 (pt) | 2022-02-08 |
Family
ID=57885035
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
BR112018001858-9A BR112018001858B1 (pt) | 2015-07-28 | 2016-07-28 | Composições compreendendo células modificadas que compreendem um receptor de antígeno quimérico (car), seus usos terapêuticos e método para modificar uma célula |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (12) | US11034749B2 (pt) |
EP (1) | EP3328402A4 (pt) |
JP (3) | JP7032304B2 (pt) |
KR (1) | KR20180028533A (pt) |
CN (2) | CN115747168A (pt) |
AU (2) | AU2016298229B2 (pt) |
BR (1) | BR112018001858B1 (pt) |
CA (1) | CA2992742A1 (pt) |
HK (1) | HK1256141A1 (pt) |
IL (3) | IL297905A (pt) |
MX (2) | MX2018001182A (pt) |
RU (1) | RU2766690C2 (pt) |
WO (1) | WO2017019848A1 (pt) |
ZA (1) | ZA201800611B (pt) |
Families Citing this family (71)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20170151281A1 (en) | 2015-02-19 | 2017-06-01 | Batu Biologics, Inc. | Chimeric antigen receptor dendritic cell (car-dc) for treatment of cancer |
US10434153B1 (en) | 2015-05-20 | 2019-10-08 | Kim Leslie O'Neill | Use of car and bite technology coupled with an scFv from an antibody against human thymidine kinase 1 to specifically target tumors |
MX2018001182A (es) * | 2015-07-28 | 2018-04-20 | Univ Pennsylvania | Monocitos/macrofagos modificados que expresan receptores de antigeno quimerico y sus usos. |
US11352439B2 (en) | 2015-08-13 | 2022-06-07 | Kim Leslie O'Neill | Macrophage CAR (MOTO-CAR) in immunotherapy |
WO2017044487A1 (en) | 2015-09-09 | 2017-03-16 | Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) | Genetic engineering of macrophages for immunotherapy |
US10875919B2 (en) * | 2016-04-26 | 2020-12-29 | Alector Llc | Chimeric receptors and methods of use thereof |
JOP20190009A1 (ar) | 2016-09-21 | 2019-01-27 | Alx Oncology Inc | أجسام مضادة ضد بروتين ألفا منظم للإشارات وطرق استخدامها |
EP4089116A1 (en) | 2016-09-27 | 2022-11-16 | Cero Therapeutics, Inc. | Chimeric engulfment receptor molecules |
CN107286246B (zh) * | 2016-12-28 | 2019-12-17 | 时力生物科技(北京)有限公司 | 治疗脑胶质瘤的嵌合抗原受体修饰的树突状细胞及其制备方法 |
US10415017B2 (en) | 2017-05-17 | 2019-09-17 | Thunder Biotech, Inc. | Transgenic macrophages, chimeric antigen receptors, and associated methods |
CA3062978A1 (en) * | 2017-05-17 | 2018-11-22 | Thunder Biotech Inc. | Transgenic macrophages, chimeric antigen receptors, and associated methods |
CA3073421A1 (en) * | 2017-09-26 | 2019-04-04 | Daniel Mark COREY | Chimeric engulfment receptor molecules and methods of use |
US20210052646A1 (en) * | 2017-12-27 | 2021-02-25 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Nucleic-acid containing lipid nano-particle and use thereof |
CN108047332B (zh) * | 2018-01-15 | 2021-08-24 | 阿思科力(苏州)生物科技有限公司 | 以cd19为靶点的特异性抗体、car-nk细胞及其制备和应用 |
SG11202007171PA (en) | 2018-02-02 | 2020-08-28 | Univ Pennsylvania | Modified monocytes/macrophages/dendritic cells expressing chimeric antigen receptors and uses in diseases and disorders associated with protein aggregates |
US11813292B2 (en) * | 2018-03-12 | 2023-11-14 | Immunity Bio, Inc. | Use of CD33CAR modified high affinity NK cells (t-haNK) to reduce myeloid-derived suppressor cells suppressor activity (or reduce negative impact on NK cell activity) |
MX2020009774A (es) | 2018-03-21 | 2020-10-08 | Alx Oncology Inc | Anticuerpos contra proteína alfa reguladora de señal y métodos de uso. |
KR20210024441A (ko) * | 2018-03-28 | 2021-03-05 | 세로 테라퓨틱스, 인코포레이티드 | 키메라 포식작용 수용체를 위한 발현 벡터, 유전적으로 변형된 숙주 세포, 및 그의 용도 |
WO2019191332A1 (en) * | 2018-03-28 | 2019-10-03 | Cero Therapeutics, Inc. | Chimeric engulfment receptors and uses thereof for neurodegenerative diseases |
EP3774865A1 (en) * | 2018-03-28 | 2021-02-17 | Cero Therapeutics, Inc. | Cellular immunotherapy compositions and uses thereof |
CN110615843B (zh) * | 2018-06-20 | 2023-05-09 | 上海隆耀生物科技有限公司 | 一种包含第三信号受体的嵌合抗原受体及其应用 |
WO2020016897A1 (en) * | 2018-07-19 | 2020-01-23 | Oncohost Ltd | Il-31 improves efficacy of macrophage-based adoptive cell therapy for cancer |
US20210293789A1 (en) * | 2018-08-27 | 2021-09-23 | Nantbio, Inc. | Rp182 compositions and methods |
KR20210053925A (ko) | 2018-08-31 | 2021-05-12 | 노일 이뮨 바이오테크 가부시키가이샤 | Car 발현 t 세포 및 car 발현 벡터 |
CN109266618B (zh) * | 2018-10-18 | 2021-04-23 | 赛元生物科技(杭州)有限公司 | 能够靶向肿瘤细胞的巨噬细胞及其制备方法 |
EP3876977A1 (en) | 2018-11-06 | 2021-09-15 | The Regents Of The University Of California | Chimeric antigen receptors for phagocytosis |
SG11202109057XA (en) | 2019-03-05 | 2021-09-29 | Nkarta Inc | Cd19-directed chimeric antigen receptors and uses thereof in immunotherapy |
US12018061B2 (en) * | 2019-03-08 | 2024-06-25 | St Phi Therapeutics Co., Ltd. | Chimeric endocytic receptors and method of use thereof |
SG11202111985XA (en) * | 2019-04-30 | 2021-11-29 | Myeloid Therapeutics Inc | Engineered chimeric fusion protein compositions and methods of use thereof |
US11026973B2 (en) * | 2019-04-30 | 2021-06-08 | Myeloid Therapeutics, Inc. | Engineered phagocytic receptor compositions and methods of use thereof |
KR20220038020A (ko) * | 2019-05-29 | 2022-03-25 | 오르비스 헬스 솔루션즈 엘엘씨 | 키메라 수용체를 발현하기 위한 전달 벡터 및 입자 및 그의 사용 방법 |
EP3991746A4 (en) | 2019-06-26 | 2023-08-09 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | TRANSFECTION PROCESS |
EP3999080B1 (en) * | 2019-07-19 | 2023-07-26 | Institut Gustave-Roussy | P21 expressing monocytes for cancer cell therapy |
CN112279923B (zh) * | 2019-07-22 | 2023-07-18 | 南京助天中科科技发展有限公司 | 一种嵌合抗原受体及其应用 |
WO2021019706A1 (ja) * | 2019-07-31 | 2021-02-04 | 国立大学法人信州大学 | Car発現免疫細胞を含む細胞集団の製造方法 |
GB2605276A (en) | 2019-09-03 | 2022-09-28 | Myeloid Therapeutics Inc | Methods and compositions for genomic integration |
CN114502781A (zh) * | 2019-09-20 | 2022-05-13 | 纳维再生科技股份有限公司 | 个人化癌症免疫治疗 |
KR102498546B1 (ko) * | 2019-09-27 | 2023-02-09 | 한국생명공학연구원 | 항체를 분비하는 대식세포의 제조방법 및 이를 이용한 항암치료 기술 |
US10980836B1 (en) | 2019-12-11 | 2021-04-20 | Myeloid Therapeutics, Inc. | Therapeutic cell compositions and methods of manufacturing and use thereof |
CN110954701B (zh) * | 2019-12-18 | 2023-07-21 | 重庆医科大学 | 一种肝纤维化或肝硬化的诊断试剂盒 |
CN113106067B (zh) * | 2020-01-10 | 2024-06-21 | 南京大学 | 一种嵌合抗原受体-单核/巨噬细胞(car-m)的构建及其应用 |
CA3184807A1 (en) * | 2020-06-04 | 2021-12-09 | Carisma Therapeutics Inc. | Novel constructs for chimeric antigen receptors |
CN111840324B (zh) * | 2020-06-16 | 2023-05-12 | 上海市第一人民医院 | 应用于骨肉瘤细胞成像或治疗的Au DENPs-巨噬细胞复合物 |
CN116113422A (zh) * | 2020-06-26 | 2023-05-12 | 凯瑞斯马治疗公司 | 免疫细胞的mRNA转染 |
CN111925448B (zh) * | 2020-08-03 | 2022-06-21 | 山东大学 | 在体生成car-巨噬细胞的制备方法及肿瘤免疫治疗中的应用 |
GB202014920D0 (en) | 2020-09-22 | 2020-11-04 | Unikum Therapeutics Aps | Methods for treating cancer and autoimmune and inflammatory diseases |
GB2617474A (en) | 2020-11-04 | 2023-10-11 | Myeloid Therapeutics Inc | Engineered chimeric fusion protein compositions and methods of use thereof |
CN112830974B (zh) * | 2021-01-08 | 2022-07-26 | 深圳市珈钰生物科技有限公司 | 一种嵌合抗原受体、载体、人树突状细胞、细胞系、实体肿瘤治疗药物及制备方法和应用 |
KR20230132806A (ko) * | 2021-01-15 | 2023-09-18 | 고쿠리츠 다이가쿠 호우징 도우카이 고쿠리츠 다이가쿠 기코우 | 키메라 표적 인자 수용체 |
WO2022186625A1 (ko) * | 2021-03-03 | 2022-09-09 | 서울대학교산학협력단 | 키메릭 항원 수용체-대식 세포의 제조 방법 및 그 세포의 용도 |
KR20220131801A (ko) | 2021-03-22 | 2022-09-29 | 주식회사 이뮤노로지컬디자이닝랩 | 키메릭 항원 수용체(car)를 포함하는 형질전환된 항원 특이적 전문적 항원표출세포 및 이의 용도 |
WO2022203226A1 (ko) * | 2021-03-22 | 2022-09-29 | 주식회사 이뮤노로지컬디자이닝랩 | 키메릭 항원 수용체(car)를 포함하는 형질전환된 항원 특이적 전문적 항원표출세포 및 이의 용도 |
WO2022203227A1 (ko) * | 2021-03-23 | 2022-09-29 | 주식회사 이뮤노로지컬디자이닝랩 | 키메릭 항원 수용체(car)를 포함하는 형질전환된 항원 특이적 전문적 항원표출세포 및 이의 용도 |
KR20220132401A (ko) | 2021-03-23 | 2022-09-30 | 주식회사 이뮤노로지컬디자이닝랩 | 키메릭 항원 수용체(car)를 포함하는 형질전환된 항원 특이적 전문적 항원표출세포 및 이의 용도 |
WO2022211376A1 (ko) * | 2021-04-01 | 2022-10-06 | 주식회사 이뮤노로지컬디자이닝랩 | 키메릭 항원 수용체(car)를 포함하는 형질전환된 항원 특이적 전문적 항원표출세포 및 이의 용도 |
KR20220136876A (ko) | 2021-04-01 | 2022-10-11 | 주식회사 이뮤노로지컬디자이닝랩 | 키메릭 항원 수용체(car)를 포함하는 형질전환된 항원 특이적 전문적 항원표출세포 및 이의 용도 |
WO2022215920A1 (ko) * | 2021-04-06 | 2022-10-13 | 주식회사 이뮤노로지컬디자이닝랩 | 키메릭 항원 수용체(car)를 포함하는 형질전환된 항원 특이적 전문적 항원표출세포 및 이의 용도 |
CN114934071B (zh) * | 2021-04-30 | 2023-10-17 | 四川大学华西医院 | 一种表达免疫调节因子的car载体及其应用 |
CN113321743B (zh) * | 2021-07-02 | 2022-10-21 | 海南精准医疗科技有限公司 | 一种靶向赖氨酰氧化酶1的嵌合抗原受体及其用途 |
KR20230089464A (ko) * | 2021-12-13 | 2023-06-20 | 주식회사 이뮤노로지컬디자이닝랩 | 키메릭 항원 수용체(car)를 포함하는 형질전환된 항원 특이적 전문적 항원표출세포 및 이의 용도 |
KR20230089462A (ko) | 2021-12-13 | 2023-06-20 | 주식회사 이뮤노로지컬디자이닝랩 | 키메릭 항원 수용체(car)를 포함하는 형질전환된 항원 특이적 전문적 항원표출세포 및 이의 용도 |
CN114410588B (zh) * | 2022-01-29 | 2022-11-04 | 西安电子科技大学 | 一种α1β1整合素依赖增强型CAR巨噬细胞及其制备方法和应用 |
CN114657143B (zh) * | 2022-03-11 | 2022-10-25 | 西安电子科技大学 | 一种肿瘤微环境调控型car-单核/巨噬细胞及其制备方法和应用 |
WO2023194608A1 (en) | 2022-04-07 | 2023-10-12 | Institut Curie | Myeloid cells modified by chimeric antigen receptor and uses thereof for anti-cancer therapy |
WO2023194607A1 (en) | 2022-04-07 | 2023-10-12 | Institut Curie | Myeloid cells modified by chimeric antigen receptor with cd40 and uses thereof for anti-cancer therapy |
WO2023205646A2 (en) * | 2022-04-18 | 2023-10-26 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Combinational immunotherapies using car-m, car-nk, car-eos, and car-n cells |
CN114949190B (zh) * | 2022-04-29 | 2024-04-30 | 苏州易慕峰生物科技有限公司 | 抗原递呈细胞及car-t细胞联合在抗肿瘤中的应用 |
GB202208605D0 (en) | 2022-06-13 | 2022-07-27 | Unikum Therapeutics Aps | Engineered immune cells |
WO2024034656A1 (ja) * | 2022-08-09 | 2024-02-15 | Agc株式会社 | 増殖性マクロファージ様細胞(pMAC)の製造方法 |
CN115957335B (zh) * | 2023-01-03 | 2024-05-28 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 基于嵌合抗原受体修饰的单核细胞外囊泡类似物、制备方法及应用 |
CN116218786B (zh) * | 2023-03-09 | 2024-01-23 | 山东大学齐鲁医院 | 一种多重基因编辑的通用型巨噬细胞及在制备抗肿瘤药物中的应用 |
Family Cites Families (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3334764A (en) | 1966-10-25 | 1967-08-08 | John P Fouser | Infant nurser |
US20040053837A1 (en) | 1998-09-30 | 2004-03-18 | Ludwig Institute For Cancer Research | Composition and method for modulating vasculogenesis or angiogenesis |
AU2001297703B2 (en) * | 2000-11-07 | 2006-10-19 | City Of Hope | CD19-specific redirected immune cells |
AU2003219805B2 (en) * | 2002-02-15 | 2009-06-04 | Eisai Inc. | Electroporation methods for introducing bioactive agents into cells |
WO2006036445A2 (en) | 2004-09-24 | 2006-04-06 | Trustees Of Dartmouth College | Chimeric nk receptor and methods for treating cancer |
CA2583843C (en) | 2004-10-13 | 2010-09-21 | Crucell Holland B.V. | Improved adenoviral vectors and uses thereof |
DE602005025512D1 (de) * | 2004-10-13 | 2011-02-03 | Crucell Holland Bv | Verbesserte adenovirusvektoren und deren verwendung |
RU2433825C2 (ru) | 2004-12-06 | 2011-11-20 | Медисинова, Инк. | Способ лечения невропатической боли и связанных с ней синдромов |
JP4604892B2 (ja) | 2005-07-15 | 2011-01-05 | 船井電機株式会社 | 情報記録/再生装置 |
FR2888850B1 (fr) * | 2005-07-22 | 2013-01-11 | Pf Medicament | Nouveaux anticorps anti-igf-ir et leurs applications |
JP2010519313A (ja) * | 2007-02-23 | 2010-06-03 | ベイラー リサーチ インスティテュート | Clec−6を介したヒト抗原提示細胞の活性化 |
EP2279253B1 (en) | 2008-04-09 | 2016-11-16 | Maxcyte, Inc. | Engineering and delivery of therapeutic compositions of freshly isolated cells |
AU2011220721B2 (en) * | 2010-02-25 | 2015-02-05 | Abt Holding Company | Modulation of macrophage activation |
CA2795947A1 (en) * | 2010-04-16 | 2011-10-20 | Bellicum Pharmaceuticals, Inc. | Method for treating solid tumors |
KR20230133410A (ko) * | 2010-12-09 | 2023-09-19 | 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 | 암을 치료하기 위한 키메릭 항원 수용체 변형 t 세포의 용도 |
US9175308B2 (en) * | 2011-10-07 | 2015-11-03 | Mie University | Chimeric antigen receptor |
JP6021617B2 (ja) | 2012-12-05 | 2016-11-09 | カンタツ株式会社 | 撮像レンズ |
US9221908B2 (en) * | 2012-12-12 | 2015-12-29 | Vasculox, Inc. | Therapeutic CD47 antibodies |
EP3744736A1 (en) * | 2013-02-20 | 2020-12-02 | Novartis AG | Effective targeting of primary human leukemia using anti-cd123 chimeric antigen receptor engineered t cells |
US20160145348A1 (en) | 2013-03-14 | 2016-05-26 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Compositions and methods to modify cells for therapeutic objectives |
DE102013215794A1 (de) | 2013-08-09 | 2015-02-12 | Krones Ag | Vorrichtung und Verfahren zum Ausrichten von unrunden Behältern |
GB201315036D0 (en) | 2013-08-22 | 2013-10-02 | Renishaw Plc | Apparatus and method for building objects by selective solidification of powder material |
EP3186284B1 (en) | 2014-08-28 | 2022-04-06 | BioAtla, Inc. | Conditionally active chimeric antigen receptors for modified t-cells |
US20170151281A1 (en) | 2015-02-19 | 2017-06-01 | Batu Biologics, Inc. | Chimeric antigen receptor dendritic cell (car-dc) for treatment of cancer |
EP3270936A4 (en) | 2015-03-17 | 2018-08-08 | Chimera Bioengineering Inc. | Smart car devices, de car polypeptides, side cars and uses thereof |
US20180355318A1 (en) | 2015-04-29 | 2018-12-13 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Modified hematopoietic stem/progenitor and non-t effector cells, and uses thereof |
CN104829733B (zh) * | 2015-05-25 | 2018-06-05 | 广州百暨基因科技有限公司 | 抗原结合单元稳定的嵌合抗原受体及制备方法与应用 |
GB201509413D0 (en) | 2015-06-01 | 2015-07-15 | Ucl Business Plc | Fusion protein |
US20170216354A1 (en) | 2015-06-12 | 2017-08-03 | Batu Biologics, Inc. | Clinically useful non-antigen pulsed dendritic cells |
MX2018001182A (es) * | 2015-07-28 | 2018-04-20 | Univ Pennsylvania | Monocitos/macrofagos modificados que expresan receptores de antigeno quimerico y sus usos. |
WO2017025944A2 (en) * | 2015-08-13 | 2017-02-16 | Brigham Young University | Macrophage car (moto-car) in imunotherapy |
CA3184807A1 (en) * | 2020-06-04 | 2021-12-09 | Carisma Therapeutics Inc. | Novel constructs for chimeric antigen receptors |
-
2016
- 2016-07-28 MX MX2018001182A patent/MX2018001182A/es unknown
- 2016-07-28 CN CN202211374453.1A patent/CN115747168A/zh active Pending
- 2016-07-28 IL IL297905A patent/IL297905A/en unknown
- 2016-07-28 RU RU2018107047A patent/RU2766690C2/ru active
- 2016-07-28 JP JP2018504165A patent/JP7032304B2/ja active Active
- 2016-07-28 CA CA2992742A patent/CA2992742A1/en active Pending
- 2016-07-28 WO PCT/US2016/044440 patent/WO2017019848A1/en active Application Filing
- 2016-07-28 BR BR112018001858-9A patent/BR112018001858B1/pt active IP Right Grant
- 2016-07-28 US US15/747,555 patent/US11034749B2/en active Active
- 2016-07-28 IL IL292507A patent/IL292507A/en unknown
- 2016-07-28 CN CN201680054514.2A patent/CN108025024B/zh active Active
- 2016-07-28 KR KR1020187005871A patent/KR20180028533A/ko active IP Right Grant
- 2016-07-28 AU AU2016298229A patent/AU2016298229B2/en active Active
- 2016-07-28 EP EP16831340.1A patent/EP3328402A4/en active Pending
-
2018
- 2018-01-14 IL IL256892A patent/IL256892B/en unknown
- 2018-01-26 MX MX2022008288A patent/MX2022008288A/es unknown
- 2018-01-29 ZA ZA2018/00611A patent/ZA201800611B/en unknown
- 2018-11-28 HK HK18115222.8A patent/HK1256141A1/zh unknown
-
2020
- 2020-04-24 US US16/858,183 patent/US11306133B2/en active Active
-
2021
- 2021-09-16 US US17/477,436 patent/US11319358B2/en active Active
- 2021-09-16 US US17/477,485 patent/US11306134B2/en active Active
- 2021-09-16 US US17/477,461 patent/US20220033467A1/en not_active Abandoned
- 2021-09-16 US US17/477,206 patent/US11407805B2/en active Active
- 2021-09-16 US US17/477,057 patent/US20220033465A1/en not_active Abandoned
- 2021-09-16 US US17/477,475 patent/US11325963B2/en active Active
- 2021-09-16 US US17/477,448 patent/US11332511B2/en active Active
- 2021-09-16 US US17/477,114 patent/US11359002B2/en active Active
- 2021-11-18 JP JP2021187803A patent/JP2022028831A/ja active Pending
-
2022
- 2022-03-10 US US17/691,842 patent/US11498954B2/en active Active
- 2022-10-06 US US17/938,501 patent/US20230279074A1/en active Pending
- 2022-11-01 AU AU2022263479A patent/AU2022263479A1/en active Pending
-
2023
- 2023-05-09 JP JP2023077024A patent/JP2023090882A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11306134B2 (en) | Modified monocytes/macrophage expressing chimeric antigen receptors and uses thereof | |
US11890301B2 (en) | Methods and compositions for cells expressing a chimeric intracellular signaling molecule | |
US20240026293A1 (en) | Methods and Compositions for Cells Expressing a Chimeric Intracellular Signaling Molecule |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
B07D | Technical examination (opinion) related to article 229 of industrial property law [chapter 7.4 patent gazette] |
Free format text: DE ACORDO COM O ARTIGO 229-C DA LEI NO 10196/2001, QUE MODIFICOU A LEI NO 9279/96, A CONCESSAO DA PATENTE ESTA CONDICIONADA A ANUENCIA PREVIA DA ANVISA. CONSIDERANDO A APROVACAO DOS TERMOS DO PARECER NO 337/PGF/EA/2010, BEM COMO A PORTARIA INTERMINISTERIAL NO 1065 DE 24/05/2012, ENCAMINHA-SE O PRESENTE PEDIDO PARA AS PROVIDENCIAS CABIVEIS. |
|
B07E | Notification of approval relating to section 229 industrial property law [chapter 7.5 patent gazette] | ||
B06U | Preliminary requirement: requests with searches performed by other patent offices: procedure suspended [chapter 6.21 patent gazette] | ||
B07A | Application suspended after technical examination (opinion) [chapter 7.1 patent gazette] | ||
B09A | Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette] | ||
B16A | Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette] |
Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 28/07/2016, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS. |