BR112015020695A2

BR112015020695A2 - novo bacteriófago e composição antibacteriana compreendendo o mesmo

Info

Publication number: BR112015020695A2
Application number: BR112015020695A
Authority: BR
Inventors: Kyung Son Bo; Duk Bae Gi; Won Kim Jae
Original assignee: Cj Cheiljedang Corp
Priority date: 2013-02-27
Filing date: 2014-02-26
Publication date: 2019-11-19
Also published as: CN105008525B; ES2724298T3; JP6110515B2; EP2961835A4; US20160076004A1; KR101381797B1; CN105008525A; WO2014133323A1; BR112015020695B1; EP2961835B1; PH12015501887B1; DK2961835T3; EP2961835A1; US9745555B2; JP2016518810A; TR201906890T4; PH12015501887A1

Abstract

novo bacteriófago e composição antibacteriana compreendendo o mesmo" a presente invenção se refere a um novo bacteriófago fcj21 (kccm 11363p). a presente invenção se refere ainda a uma composição antibacteriana, compreendendo o bacteriófago 0cj2i (kccm 11363p) como um ingrediente ativo. além disso, a presente invenção proporciona urn método de prevenção e/ou tratamento de doenças infecciosas causadas por clostridium perfringens em animais, exceto seres humanos, utilizando o bacteriófago (dcj2l (kccmi1363p) ou a composição antibacteriana compreendendo o bacteriófago pc:j2i (kccm 11363p) corno um ingrediente ativo.

Description

“NOVO BACTERIÓFAGO E COMPOSIÇÃO ANTIBACTERIANA

COMPREENDENDO O MESMO”

Campo Técnico

A presente Invenção se refere a um novo bacteriófago. com uma atividade baetericida específica contra o patogênico. e um composição antíbacteriana compreendendo o mesmo. A presente Invenção se refere ainda a um método de prevenção e tratamento de doenças de. animais utilizando o novo bacteriófago ou a composição antibaeteriana.

Antecedentes da Invenção

O .Clatfrídittm (CP), que é um bacilo anaeróbio obrigatório grande grampositivo, é conhecido como uma bactéria que não possui flageles e form a um esporo. O Ctosmáfem que é uma bactéria causadora de diarréia, ou similar, particularmente em animais domésticos tais como frango, porco, etc., e similares, tem sido reconhecida como uma das bactérias patogênicas perigosas e fetais na indústria animai, tal como a Sabnoneda, causando a febre tifoide aviária.

Atualmente, uma das doenças frequentemente geradas nas indústrias de aves e suínas é a enterite neerótíea por C&árèúfey?? Sabe-se que a entente necrótica é frequentemente gerada por uma coinfecção de Í.Vos/r/dzua? per/rôrgom? e Coccú/e», e como sintoma principal da enterite .necrêüca, produz diarréia com sangue devido a lesões 20 necróticas-graves em uma porção inferior do intestino delgado de frangas, suínas e similares.

Esta enterite necrótica gera sintomas de desidratação, diarréia periódica e sintomas similares no animal infectado, de acordo com a gravidade da doença, e graduahnento debi lita o corpo do .animal, causando atraso no crescimento, dentre outras problemas, de tal modo que a enterite necrótica tornou-se um problema significative na indústria animal. Além disso, 25 como o Ctosfridíwn ptv/mzgms é facilmente propagado através de fezes de animais, a

2/28 transmissão entre animais num espaço comum de reprodução pode ser facilmente gerada por infecção oral através do solo, alimentos contaminados ou situações similares. Particularmente, a incidência, em animais jovens é elevada, de tal modo que o CÍatfriífium· /Mír/ríngem· tornou-se um grande problema.

Por sua vez, o bacteríófago é um tipo especializado de vírus que infecta e destrói somente bactérias, e pode se autorreplicar somente dentro de bactérias hospedeiras. O bacteríófago apresenta forte especificidade hospedeira em comparação com os antibióticos e, reeentemente, o aparecimento de uma estirpe resistente a antibióticos tornou-se um grave problema, de tal modo que o interesse no uso prático do bacteríófago tem aumentado 10 (Documentos não patentáríos I e 2),

Portanto, pesquisas relativas a bacteriófagos foram ativamente, conduzida em vários paises de todo o mundo e, além de pedidos de 'patentes para 'bacteriófago-s, houve um. aumento gradual nos pedidos de aprovação encaminhados ao Food and Drug- Administration (EDA) para composições contendo o bacteríófago,

Com relação aos bacteriófagos disponíveis no estado técnica, o Documento Patentàrío revela um bacteríófago com uma atividade bactericida específica contra o óferòv/ran? /x?r/r?>ige»5', e o Documento Pateníário 2 revela um bacteríófago com uma atividade bactericida especifica contra roo-ero. Além destes, o Documento Pateníário 3 descreve uma proteína lítica derivada de um bacteríófago que destrói especi ficamente a 20 estrutura do peptidoglicano da membrana -celular bacteriana, e bactérias lisadas pela proteína iiüca.

Entrentanto, apesar da existência dos referidos documentos no estado da técnica, uma tecnologia associada com o bacterióíago para prevenir c/ou tratar doenças infecciosas-, partículannente a entente necrótíca por C/roraàfenn parfe/ngnns; que é ainda um problema 25 importante na indústria animal, incluindo as indústrias de aves e suínos, é ainda insuficiente.

3/28 de modo que um bacteriòfago e uma tecnologia associada com o bacteriòfago devem ser desenvolvidos.

Documentos disponíveis no estado da tèníca

Doc u men tos Patentários .5 -Documento Patemário I: Patente coreana publicada No. 10-2012-0076710 A

-Documento Patentário 2: Patente coreana registrada No. 10-0910961 BI

-Documento Palemário 3: Patente coreana publicada No.. I 0-2009-0021475 A

Documentos não Pateidârios

-Documento não Patentário h Cfcto M et at., drck fowtó Titer. 2:/75--/83. /987

-Documento nâo Patentário 2: /fow Ktm et cd, PaeZer/ó/qgo. «ovos n/íermí/vw, PòZ. 7 No./5. 2005, M/C

Divulgação

Problema Técnico

Os inventores da presente invenção realizaram estudos para Solucionar problemas como a presença de bactérias resistentes a antibióticos, a presença de antibióticos remanescentes na carne, além de prevenir e tratar eficientemente doenças infecciosas causadas por ílosmú/óu?? /jer/nngeos e, como resultado, os inventores da presente invenção isolaram o novo bacteriòfago 4>CJ2i (K.CCMI I363P) que possui uma atividade bacterícida específica contra o C&M/riuOuw pc?7rm«rns presente na natureza.

Além disso, os inventores da presente invenção identificaram características morlbíógicas. bioquímicas e genéticas do novo bacteriófago e confirmaram que o bacteriòfago tem ama excelente resistência, a ácidos, resistência ao calor, resistência â seca e a condições similares, desenvolvendo assim um antibiótico, um desinfetante, um aditivo alimentar, e outras composições usando o novo bacteriófago. Além disso, os: inventores da presente invenção desenvolveram uma composição para á prevenção ou tratamento de

4/28 doenças infecciosas por C'Zos/rzz/ww per/rmgem· e um método para prevenir ©u tratar a doença utífizándo a composição,

A presente invenção visa proporcionar um novo baeteriótago <PCJ2I (KCCM11363P) com uma atividade bactericída especifica contra o Clasírídíum perfh'ngens'.

A presente invenção visa proporcionar ainda uma composição para a prevenção e/ou tratamento de doenças infecciosas por C/o.r/rMm/w pezfnngam' contendo o -bacteríófiigo4>CJ21 (KCCM1I363P) como um ingrediente ativo.

Ademais, a presente invenção visa proporcionar um antibiótico, um aditivo alimentar, um aditivo para água potável, um desinfetante ou um produto de limpeza contendo o bacteriõfago ΦΟ21 (KCCM1I363P) como um ingrediente ativo.

Além disso, a presente invenção visa proporcionar um método de prevenção e/ou tratamento de doenças infecciosas por CGrám/mm /KrfrmgeMSí em animais, exceto para os seres humanos, utilizando o baeteriótago <PCJ2l (KCCMI1363P) ou uma composição contendo o mesmo (KCCM i I363P) como um ingrediente ativo..

Solução Técnica

De acordo com uma configuração, a presente invenção proporciona um novo bactenótago ΦΟ2ί (KCCMl 1343P) com uma -atividade bactericída específica contra o

De acordo com. outra configuração, a presente invenção proporciona uma composição para a prevenção ou tratamento de doença infecciosa causada por C/ostrá/àm? ptuyr/ugm.us. a dria composição· contendo o baeteriótago $CJ2| (KCC1MII363P) como um ingrediente ativo, conforme acima descrito.

De acordo com outra configuração, a presente invenção proporciona um antibiótico, um aditivo alimentar, um aditivo para água potável, um desinfetante ou um produto de limpeza contendo o bacteriófago ΦΟ21 (KCCMH363P) como um ingrediente ativo.

5/28 conforme acima descrito.

De acordo com outra configuração, a presente invenção proporciona um método de prevenção ou tratamento de doença infecciosa causada por Cfarfridfam perfringenx compreendendo a administração do bacteri.ófogo ΦΟ121 (KCCMI I 363P) ou da composição 5 contendo o mesmo, conforme acima descrito, para os animais, exceto para, os seres humanos.

Efeitos Vantajusos

O bacteriófago ΦΟ21. (KCCMI 1363P) de acordo com a presente invenção tem o efeito específico de.matar o CVosmlf/Wt

Além disso, o bacteriófago Φ(?32Ι (KCCMH363P) de acordo com a presente 10 invenção tem uma excelente resistência a ácidos, resistência ao calor e resistência à seca, de tal modo que o bacteriófago <PCJ21 (KCCM I I363P) pode ser usado para prevenir ou tratar doenças infecciosas- por CfosímSwi per/r/ngem· em vários níveis de temperatura ou de pH e condições de humidade, podendo ser utliizado como um antibiótico., um aditivo alimentar, um aditivo para água potável, um desinfetante, um produto de limpeza ou similar.

I 3 Ademais, de acordo com a presente invenção, doenças infecciosas causadas por

Cfobrfefonr per/rríTgess podem ser prevenidas ou tratadas através da administração do bacteriófago Φ€121 (KCCM11363F) ou da composição contendo o mesmo (KCX-M11363P) como um ingrediente ativo para animais, exceto para seres humanos.

Descrição das Figuras

FIG. I é uma fotografia, obtida de um microscópio de elétrons, do novo bacteriófago

ΦΟ21 (KCCM11363P, doravante denominado *Φ€'Ι2 Γ’).

FIG. 2 mostra o resultado de uma eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) do novo bacteriófago ΦΟ2Ι.

FIG. 3 ilustra o resultado de ama eletroforese em gel de poliacrilamida-dodecil sul foto 25 de sódio (SDS-PAGE) do bacteriófago ΦΟ21.

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FIG. 4 é um gráfico mostrando o resultado de um teste de resistência ao ácido do novo bacteriófago ®CJ 21,

FIG. 5 é um gráfico mostrando o resultado de übi teste de resistência ao calor do novo bactenófego ΦΟ21.

FIG. 6 é um gráfico mostrando o resultado de um teste de resistência à.seca do novo bacteriófago ΦΟ21.

Configu ração I dea l

A seguir, a presente invenção será descrita em detalhes. Considerações óbvias e 10 facilmente- interpretáveis pelos peritos na arte serão omitidas no presente relatório descritivo.

Em uma configuração, a presente invenção proporciona um novo- bacteriófago ΦΟ.Ι21 (KCCM11363P). com uma atividade baciericida específica contra o C/o-v/r/í/ím» xw/Hqsmm (CP).

E sabido, que o (.''fotfrtâíam que é um bacilo anaeróbío obrigatório15 grande gram-positivo, não possui fiagelos e forma um esporo. O Cfotârfdfam que é uma bactéria que cansa diarréia ou problemas similares em animais, particularmente· em animais domésticos tais como aves domésticas, suínos e similares, tem sido reconhecida como uma das bactérias patogênicas perigosas' e fatais na indústria animal, tal como a ót/Pnoee/àí, causando a febre Lifbide aviária.

Um bacteriófago é um virus bactéría-específico que infecta bactérias específicas para suprimir e inibir o crescimento da bactéria,, e constitui um vírus contendo ácido desoxirribonucleico (DNA) em cadeia simples ou dupla, ou ácido ribonucieíco (R.NA) como um material genético.

O bacteriófago ΦΟ21 de acordo com a presente invenção, que é um bacteriófago especifico para infectar seletívamente o Gosomhzm/ tem uma cápside isornéfrica e uma cauda não contrâtil e. morfologicamente, pertence à (FIG. I), Os dados

7/28 da análise de homdogia de sequências de ítódos nudeicos entre o .bacteríófago· ΦΟ21 e outros bacteriófagos estão ilustrados na Tabela I- A atividade do bacteriófago ΦΟ21 permaneceu estável na faixa de pH 4 a. pH 9,8 (resistência a ácidos* ver FIG, 4), O $CJ2I reteve :$ua atividade por 2 horas quando foi exposto a 60 X {resistência ao calor, ver FIG. 5), e seu titulo tbi reduzido cerca de 01.0 após a secagem (ver FIG. 6). A sequência de ácido nucleico do bacteríòmgo ΦΓ.Ι21 ê a mesma da 8EQ I D NO: 1,

O bacteriófago ΦΟ21 isolado pela primeira vez pelos inventores da presente •invenção foi depositado no Centro Coreano de Cultura de M.icrorgauismos (361-221, Hongjedong, Seodaemuu-gu, Seul, Coréia) sob o número de depósito KCCM1 I363P em 30 de janeiro de 2013,

Em outra configuração, a presente invenção proporciona uma composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas causadas por CtoMrtâfam perfriugemconteudo o baeferióiãgo Φ.Ο21 corno um ingrediente ativo, Como um exemplo preferível da composição, a presente invenção proporciona um antibiótico.

Uma vez que o bacteridfago ΦΟ2Ι tem ma atividade antíbacteríana capaz de matar especificamente o Ctaráfem o bactenófago $CJ2.I pode ser utilizado para prevenir ou tratar doenças· geradas pela infecção de ΟοχόΝ/Φοί /mrfrmqeas. Um exemplo típico de doença infecciosa causada por C7o3Zr/íZáw.pe^ó?gen.v que pode ser tratada com a utilização do bacteriófago ΦΟ21. ê a enterite necrôtica, mas a presente invenção- não se Umita ao tratamento da mesma.

A enterite neurótica, que é uma das principais doenças infecciosas provocadas por C/rxmúfrw per/r-ótgenx. se caracteriza por ser uma doeaç-a bacteriana cuja ocorrência mais frequente se dá em animais de criação doméstica, partied armente aves domésticas, causando danos significativos. A doença pode atacar aves domésticas, parti c alarm ente frangos em todas as idades, mas se manifesta prineipalmente em .galinhas (2 a 5 semanas de idade)

8/28 criadas soltas e também com frequência em galinhas 02 a 1.6 semanas de idade) criadas em gaiolas.

Como o Cto/rítóam ;?eF/b'pgímx e excess* vamenfe proliferado no intestino delgado, ocorrem os sintomas de enteríte necrótica causando a necrose da mucosa gastrointestinal, 5 diarréia súbita, e efeitos similares. Por exemplo, suínos com entente neerôticâ muito aguda morrem apôs l a 2 dias de ocorrência, e no caso de enteríte necrótica aguda seguida de diarréia com sangue, os animais morrem após 2 a 3. Além disso, no caso de entente necrótica subaguda, a diarréia (sem. sangue nas fezes) prossegue durante 5 a 7 dias e, em seguida ocorre fraqueza e desidratação, e no caso d'e: entente necrótica crônica, ocorre diarréia 1-0 .intermitente que pode causar distúrbio de crescimento.

O termo prevenção, tal como utilizado no presente relatório descritivo, se refere a todas as ações relacionadas com a aplicação do bacteriófago ΦΟ21 e/ou da composição contendo o mesmo como ingrediente ativo para animais, exceto para seres humanos, a. fim de suprimir a doença correspondente ou retardar a ocorrência da doença.

O termo ’’tratamento*, tal como utilizado no presente relatório descritivo, se refere a todas as ações relacionadas- com a aplicação- do bacteriófago Φ0.Ι21 e/ou da composição contendo o mesmo como ingrediente ativo para animais, exceto para seres humanos, a fim de permitir a melhora ou alivio dos sintomas da doença causada pela infecção,

Um exemplo de doença infecciosa causada por Chfràta /Mr/rtoftw na qual o 20 bacteriófago ΦΟ2Ι e/ou a composição contendo o mesmo como ingrediente ativo podem ser aplicados, é a enteríte necrótiea, mas a presente invenção não está limitada a ela.

Λ composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas provocadas por nn/rêvngavy de acordo com a presente invenção, pode- conter o baeteríó&go ΦΟ21 com um teor preferível de 5x1 (f a 5xl0^:! pftòrê. mais preferivelmente, de Ix I(Γ a 25 Ixl0^!l·’ ptúfefe

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A cémpósíção para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas provocadas por C/avfrfe/mm/wfm,g8ffs de acordo com a presente invenção pode ainda confer um excipiente farmacêutico aceitável e ser 'formulada juntamente .com o .excipiente para., dessa forma, ser fornecida como alimento, um fármaco, um aditivo alimentar, um aditivo para água potável, e similares. G termo excipiente farmacêutico aceitável”, tal como utilizado no presente· relatório descritivo, significa' uma substância ou um diluente que não estimula o organismo vivo enão ini.be a atividade biológica e as propriedades de uma composição administrada;

O tipo de-excipiente que pode ser utilizado na presente, invenção não é limitado a um tipo específico, podendo ser utilizada qualquer substância comumente utilizada na técnica como excipiente farmacêutico aceitável.. Como exemplos não restritivos do excipiente, podemos citar solução salina, água esterilizada, solução de Ringer, soro, fisiológico tamponado, solução injetável de albumina, solução de dextrose, solução de maltodextrina, gücerol,· eiáítül, e outros similares. Estes podem ser utilizados isoladamente ou como uma mistura de pelo menos dois destes,

Além disso, se necessário, outros aditivos em gerai, tais como um antioxidante, uma solução tampão, e/ou um agente bacteriostático, ete>, também podem ser utilizados, e a composição pode ser preparada com uma. formulação para injeção, iai como solução aquosa, suspensão, emulsão, ou similares, pílulas, cápsulas, grânulos, comprimidos, ou similares, através da adição de um diluente, um dispersante, um surfactants e/ou um lubrificante, etc., para então serem utilizadas.

Um método de administração da composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas por í.7osfrà/?mn não apresenta limitações, de tal sorte que qualquer método comumente utilizado na arte pode ser tniltzado. Como exemplo não Hmitativo do método de administração, a composição pode ser administrada por via oral ou parentérica.

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Como exemplos não restritivos da formulação para a administração por via oral, podemos citar troeiscos, pastilhas, comprimidos, -suspensões aquosas, suspensões oleosas, pó preparado, grânulos preparados, emulsões, cápsulas duras, cápsulas moles, xaropes, elixires ou similares.

A fim de formulsr a composição de acordo com a presente Invenção em uma formulação tal como um comprimido, uma cápsula, ou similar, a .formulação- pode ainda conter um aglutínante tal como a lactose, sacarose, sorbitol, manitol, amido, amilopectina, celulose, gelatina; um excipiente tal -como fosfato dic-álcíco, ou-similar; um desintegrame tal como amido de milho, amido de batata doce, ou similar; um lubrificante tal como estearatu dc magnésio, estearãto de cálcio, estearil fomarato de sódio, cera de polietilenoglicoí, ou similares. No caso de formulação em cápsula, a formulação pode ainda conter um excipíente liquido, além dos materiais acima mencionadosComo um método dc administração parcntèrfoa. é possível utilizar um método de administração intravenoso, um método de administração intraperitoneal, um método de administração intramuscular, um método de administração por via subcutânea, um método de .administração locai, etc., Além disso, também é possível utilizar um método de aplicação ou pulverização da composição sobre o local da doença, embora a presente invenção nao esteja linutada a tal método..

Exemplos de formulações- para administração parentéríça podem incluir formulações injetáveis para serem aplicadas por meio de injeção subcutânea. injeção intravenosa, injeção intramuscular, ou similares; formulações para supositóríos; formulações para pulverização, tais como formulações de aerossol, que podem ser inaladas através do si-ste-ma respiratório, ou similares, embora a presente invenção não esteja limitada a tais formulações. A fim de preparar a composição para, a .formulação de injeção, a composição de acordo com a presente invenção pode ser misturada com um estabilizador ou uma solução- tampão em água para

11/28 preparar uma solução ou suspensão e, em seguida, a solução preparada ou suspensão pode ser formulada em dose individual para uma ampola ou frasco,. No caso da composição formulada para pulverização, tal como a formulação de aerossol ou similar, um propulsor ou similar pode ser misturado iuntamente com um aditivo para que a composição condensada em água 5 ou em pá seja dispersa,

Uma aplicação apropriada, spray, ou dose de administração da composição para a prevenção ou tratamento de doenças infbcciosas por Oostw/rwn pode ser diferentemente determinada dependendo de fatores tais como a idade, peso, sexo, grau dos sintomas da doença, tipo de alimentação e taxa de excreção dos animais sujeitos â 10 administração, óu condições similares, bem corno o método de formulação da composição, o método de administração, o tempo de administração e/ou via de administração. De modo gerai, um veterinário com conhecimentos na técnica pode facilmente determinar e prescrever uma dose eficaz para o tratamento pretendido,

Em outra configuração, a presente invenção pode proporcionar um antibiótico 1.5 contendo o bacteriõfago 4>CJ2l como um ingrediente ativo.

() termo antibiótico, tal como utilizado no presente relatório descritivo, significa um agente capaz de ser ministrado em animais, incluindo seres humanos, em forma de droga para matar as bactérias, e corresponde a um conceito representando coletivamente um conservante, um desinfetante, e um agente antibacteriano.

O antibiótico contendo o bacteriõfago ΦΟ21 como 'ingrediente ativo, de acordo com a presente invenção, pode apresentar uma elevada especificidade para o pe/yriogen.? se comparado com outros antibióticos disponíveis no estado da técnica, com a capacidade de não matar bactérias benéficas, mas apenas bactérias patogênicas específicas, sendo caracterizado ainda por não- induzir resistência â droga, de modo que o antibiótico de 25 acordo com a presente invenção pode ser fornecido comb um novo antibiótico com tempo de

12/28 vida consideravelmente maior quando comparado com os antibióticos disponíveis no estado técnica.

Em outra, configuração, a presente invenção pode proporcionar um aditivo -alimentar e um aditivo para água potável contendo o bactériófago <>CJ21 como um ingrediente ativo.

O aditivo alimentar e o aditivo pare água, potável de acordo com a presente invenção pode ser utilizado de tal forma que o bactériófago ΦΟ21 ou a composição c-ontendo o mesmo seja preparado individualmente como um aditivo alimentar ou para água potável, e em seguida misturado a um alimento ou água potável, ou de tal forma que- o bacteriófego 4>CJ2I. ou a composição contendo o mesmo seja dirctamente adicionada no momento da I0 preparação do alimento ou da água potável.

O bactériófago ΦϋΙ2Ι ou a composição contendo o. mesmo utilizada como aditivo alimentar ou para água potável de acordo com a presente invenção pode ser fònpul-adç no estado liquido ou sólido, preferivelmente em. forma de pó seco.

Um método de secagem para a preparação do aditivo alimentar e do aditivo para água 15 potável sob a forma dê põ seco- de acordo com a presente invenção não- apresenta limitações e um método comumente utilizado pelos peritos na arte pode ser utilizado. Como exemplos não limitativos do método de secagem, podemos usar um método de secagem com ar, um método de secagem natural, um método de secagem por pulverização, um. método de secagem por congelamento, ou métodos similares. Um destes métodos pode ser utilizado 20 sozinho ou pelo menos dois destes métodos podem ser utilizados em conjunto.

Outro micróbio não patogênico pode ser adicionado ao aditivo alimentar ou aditivo para água potável. Como exemplo não restritivo do micróbio a ser adicionado, é possível escolher um micróbio selecionado dentre um grupo compreendendo /foc/í/m Mfo?/Zfo< capaz de produzir, protease, lipase e/ou enzima de conversão de açúcar, tal como 2/nfoZ/ux áwfo/ífo 25 ou similares; um Lactttâaeíftus sp com atividade fisiológica c atividade de degradação para

13/28 um material orgânico em condições anaeróbicas. tal como o estômago de vaca; fungo de mofo com capacidade de aumentar o peso de um animai doméstico, a produção de leite, e a digestão de alimentos como /isperg/Mo· orr<«e, ou similares? e leveduras como &eeáaro#??yrx\v cerevAzw, ou similares.. Estes podem ser utilizados isoladamente ou pela 5 comb inação de pelo menos dois deles.

O aditivo alimentar ou aditivo para água potável contendo o baçterió.fago como ingrediente ativo, de acordo com a presente invenção, pode ainda conter outros aditivos, .conforme necessário. Como um -exemplo não restritivo de aditivo, -é. possível utilizar um aglutinante, um emulsifícante, um conservante, e similares, os quais são adicionados para 10 evitar a deterioração do- alimento ou da água: arain.oácidos, vitaminas, enzimas, probíóticos, agentes, aromatizantes, composições nítrogenadas não proteícas, silicates, soluções tampão, agentes corantes, agentes extratantes, oligossacarídeos, e similares, que sâo adicionados de modo a aumentar a utilidade do alimento ou da água potável O aditivo pode mcknr ainda um agente de mistura para alimentos, ou similar. Estes aditivos, podem ser utilizados isoladamente ou pela combinação de pelo menos dois deles.

O aditivo alimentar pode ser adicionado num teor de 0,05 a 10, preferivelmente de 0,1 a 2 partes -por peso com base em 100 partes por peso do alimento. O aditivo para água potável pode ser adicionado num teor entre- 0,0001 a 0,01, preferivelmente de 0,001 a 0,005 partes nor peso com base em 100 partes por peso de água potável A atividade do. 20 bacteriôfágo ΦΟ2Ι contra o perfringen»' pode ser sufieientemeute demonstrada nas faixas acima mencionadas.

Em nutra configuração, a presente invenção permite elaborar um alimento ou água potável pela adição de um aditivo alimentar ou de água potável contendo o mesmo como ingrediente ativo, ou pela adição dircte do bactcriõfago $CJ2I no alimento ou na água 25 potável.

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O alimento utilizado na presente invenção não apresenta limitações, de tal sorte que qualquer outro alimento comumente usado pelos peritos na arte pode ser utilizado. Um exemplo não restritivo do alimento pode incluir alimentos vegetais como grãos, raízes e frutas, subprodutos d.e processamento de alimentos, algas, fibras, subprodutos farmacêuticos, gorduras, amidos, cacurhitáceas ou subprodutos- de cereais; e alimentos para animais, tais como proteínas, materiais inorgânicos, gorduras, minerais, proteínas de células individuais, plânctons animais ou alimentos, Estes podem ser utilizados isoladamente ou pela combinação de pelo menos dois deles.

A água potável usada na presente invenção não apresenta limitações, de tal sorte que qualquer âgua potável pode ser usada na presente invenção.

Em outra configuração, a presente invenção pode fornecer um desinfetante ou um produto de limpeza contendo o baeteriõfàgo ΦΟ21 como um ingrediente ativo. Uma formulação do desinfetante ou produto de limpeza não apresenta. limitações, de tal sorte que o desinfetante ou o produto de limpeza podem ser preparados com qualquer formulação conhecida na arte.

O desinfetante pode ser pulverizado de modo a eliminar o Cktârkiium /jerfrmgem·: em uma região onde vivem os animais, em am matadouro, e.m uma âreq de mortalidade, em tuna cozinha ou em um equipamento de cozinha, ou similares, não estando a presente invenção limitada a estes exemplos.

O produto de limpeza pode ser usado para lavar as superfícies da pele ou todos os locais dos corpos dos animais expostos ou a serem expostos ao particularmente aves domésticas ou suínos, não estando a presente invenção limitada a estes exemplos.

Em outra configuração, a presente invenção proporciona um método de prevenção ou tratamento de doenças infecciosas provocadas por (dastridiuM perp/igetty utilizando o

15/28 bacteriófhgo $CJ2i ou a composição contendo o mesmo como um ingrediente ativo. A doença infecciosa pode ser preferivelmente a enteríte necrótica, não estando a presente Invenção limitada, ao tratamento e prevenção desta doença. O objetivo de prevenir ou tratar doenças infecciosas causadas por Oosótí/ow /vrfeòígumf pode ser aplicado a aves 5 domésticas ou suínos, não estando a presente invenção limitada ao tratamento destes- animais.

Especiflcamente, o método de prevenção ou tratamento de doenças infecciosas de acordo com a presente invenção pode incluira administração do bacteriófago. $CJ2i pu da composição contendo- o mesmo como ingrediente ativo para animais infectados ou que estão em risco de infecção por Cfotârídfam peffrmgeMS, em uma dosagem farmacêutica eficaz, 10 exceto para os seres humanos. Será evidente- para os peritos na arte que, quando a composição farmacêutica é administrada ao pac-iente, a dose total diária adequada pode ser determinada por um medico assistente ou veterinário de acordo com sua avaliação- médica.

Uma dose farmaceuticamente eficaz específica do bacteriófago ΦΟ21 ou da composição contendo o mesmo como ingrediente ativo para um determinado animal, pode 15 ser determinada considerando-se o tempo de administração e a via de administração do bacterkSfago ΦΟ21 ou da composição contendo o mesmo, a taxa de secreção da. composição, o período de duraçáo de tratamento, o-u fatores similares, somados ao tipo e ao grau de resposta desejada, a idade, peso, estado geral de saúde, sexo, ou dieta de determinado animal Além disso, a dose farmaceuticamente eficaz pode ser alterada de acordo com diversos 20 fatores, tais como os ingredientes das drogas ou de outras composições usadas simultaneamente ou separadamente, e outros fatores similares bem conhecidos na área médica.

O baeterióíago ΦΟ2Ι de acordo com a presente invenção ou a composição contendo o mesmo como ingrediente ati vo pode ser administrado como uma forma farmacêutica (spray 25 nasal) para animais ou administrado como um método de adição direta em um alimento ou na

16/28 água potável dos animals, que em seguida comem o alimento ou bebem a água potável. Aléra disso, o bacteriófago $CJ21 ou a composição contendo o mesmo podem ser misturados em um alimento ou na água potável em forma de aditivo alimentar ou aditivo para água potável, para então ser administrados.

A via de administração e o método de administração do bacteríófago ΦΟ21 de acordo com a presente invenção ou da composição contendo o mesmo como ingrediente ativo não apresentam limitações, de tai sorte que qualquer via de administração e método de administração podem ser utilizados, desde que o bacteríófago d>CJ21 ou a composição contendo o mesmo possam chegar ao tecido desejado. Isto é, o bacteriófago 4>CJ21 ou a composição contendo- o mesmo como o ingrediente ativo pode ser administrado através de várias vias orai ou parentética. Exemplos não restritivos da via de administração podem ser a via Oral, ratal, local, ihtrávenósa, intraperitoneal, intramuscular, intraarterial, subcutânea e administração nasal ou inalação, etc..

Doravante, a presente invenção serâ descrita em detalhes através de exemplos. Entretanto, estes exemplos são apenas ilustrativos e não têm o propósito de limitar o escopo da presente invenção.

|Exemplo l] isolamento do bacteriófago infectando Cfostrídium pér/wççrw <Exemplo 1 1Seleção do bactenólago.e.j.solamento.de um único bacteriófago

Foi isolada uma amostra de 5(W de fezes colhida na empresa Samwhaw Gps. Breeding Agri. Inc., uma fazenda agrícola de galinhas e porcos da província de Chungchong do Sul, Republica da Coréia, introduzida numa garrafa centrífuga e centrifugada a 4.000 rpm por H) minutos, o. sobrenadante. foi filtrado com. um filtro de 0,45» para preparar uma solução da amostra, e em seguida foi aplicado um método de sobreposição de ágar macio utilizando a solução da amostra preparada. O método de sobreposição de ágar macio è um

17/28 método de observação da ação da lise do bacteriófago utilizando células hospedeiras crescendo em ágar de superfície (sobre um meio sólido com 0,7% de ágar).

Especificam ente, ÍSifo de amostra filtrada foi misturada coin 150/fo de uma solução agitada da cultura -ÇODôra ~ 2) de Clostridium (CP. BCCP 17-1) isolada na

Agenda de Quarentena de Animais e Plantas local, e 2»£ de infusão de 1 ÔXBram-heart (doravante denominado meio ΉΗ.Γ) (composta para gerar um volume final de 11..) e -cultivada a 37^üC por 1'8 horas. Em seguida, a solução da cultura foi centrifugada a 4.000 rpm -por 10 minutos, e o sobrenadanie foi filtrado com filtro de 0<45;au, Em seguida» uma mistura de 5s)E de ágar a 0,7% (w/v) e 150/fo da solução agitada da cultura (0¾% ^:::: 2) de Cfos/rúfow .0 pen/rm/qw (BCCP 17-1) foi despejada e endurecida nuftta placa BH1 (8HI + 0,2% de sangue de ovelha), KW da solução' filtrada da cultura da amostra foi derramada sobre a mesma, seguida por uma cultura a 30. ^aC por 18 horas. Em seguida, coa firmou-se a. formação de uma placa.

Depois de filtrada, a. solução da cultura' da amostra na qual, a Use foi gerada, foi '.5 adequadamente diluída e misturada.com i50;fo de solução agitada dá cultura (OWs; 2) de Ouxmàfovtf (BCCP 17-1), o método de sobreposição em ágar macio foi realizado, obtendo-se assim uma única placa. Considerando-se que uma única placa foi formada a partir de- um único bacteriófago, foi selecionada uma única placa para purificar e isolar o único bacteriótãgo, colocada em 40(W de uma -solução SM (NaCI 3,8 g/I;

MgSO47H2O 2g / I : I M de Trís-Cl (pH 7,5), 50rf: H2O, composta de modo a gerar um volume final de 1L). e deixada à temperatura ambiente durante 4 horas, purificando e isolando assim um único bacteriófago.

A fim de garantir uma grande quantidade do bacteriófago isolado, 1(KW de um sobrenadante de uma única solução de bacteriófago foram selecionados e misturados com

18/28

12ϊ··7 de 0,7% de ágar e 50(W da solução agitada da cultura de per/nngemtBCCP 17-1), sendo realizado em seguida o método de sobreposição de àgar mamo em um meio LB com um diâmetro de 150 mm. Depois de derramar a solução de ISgte da solução SM em uma placa em que a lise foi completamente gerada, a placa foi suavemente agitada à temperatura ambiente durante 4 horas, descarregando assim o bacteriófàgo no ágar de superfície. A solução SM em que o bacterióihgo foi descarregado foi recuperada. sendo adicionado clorofórmio numa quantidade de 1% do-volume final e adequadamente misturada durante 10 minutos, seguida por centrlfogação a 4.000 rpm por 10 minutos·.. O sobrenadante obtido tal como descrito acima foi filtrado com .um filtro de 0_s45pm e armazenado a uma temperatura fria.

<lõsrmpios )-2>

Cultura em grande escala e.purifo'.q'' debgcterfofago bacterlófago selecionado foi cultivado em grande escala, utilizando Cfó.wm/Zuw (BCCP 17 -I) e, em seguida, o bacleriófago foi purificado.

Especificam ente, 1% da solução agitada da cultura de CVosmúfom? per/rmgem (BCCP 17-1) foi inoculada num meio de cultura líquida para produção em massa e, ao mesmo tempo., o bacterlófago foi colocado no seu interior em multiplicidade de infecção (MOl) de 0J, simultaneamente com a inoculação de C/mmifoum (BCCP 17-1). realizando assim a coinfecçâo. Em seguida, a cultura estática foi realizada a 3U°C sob condições anaerõbias.

Em seguida, a centrifUgação foi realizada a 4*C e 12.000 rpm por 20 .minutos e„ em seguida, o sobrenadante foi filtrado com um filtre de 0.45çs. Em seguida, NaCi e polietilenoslicol (PEG) foram adicionados ao sobrenadante filtrado de modo a obter uma concentração final de IM e 10% (w/v) respecfivamente, e a mistura foi deixada a uma temperatura de 4*C durante 8 horas ou foi realizada uma. centrifugação a

19/28

4'^:‘C e 12.000 rpm por 20 minutos, o sobrenadante tbi removido e os precipitados foram obtidos.

O precipitado obtido foi ressu.spend.ido em 5®i? d.a solução SM e foi deixado a uma temperatura ambiente durante 20 minutos. Em seguida, o sobrenadante foi filtrado com um 5 filtro de 0.45a®, e foi realizada uma ultracentrifugação (35.000rpm, 1 hora, 4*C) utilizando um método de .gradiente de densidade de glicerol (densidade: 40%, 5% de glicerol), purificando assim o bacteriõfago ΦΟ2Ι. Depois do $CJ2l purificado ser ressuspendido em SOOtfo da solução SM, um título foi medido.

Os inventores da presente invenção denominaram o bacteriófago obtido através da 10 extração da amostra de fezes com atividade bactericída específica contra o

/.«.'r/rózgen^ de Bacteriófago. ΦΟ21 ”, e depositaram o bacteriófago no Centro de Cultura Coreano de Microrganismos (361-221, Hongjedong, Seodaemun-gu, Seoul Coréia) em 30 de janeiro de 2013 sob o número de depósito KCCM11363ÍL «Exemplo 2>

Lfeeryação ,í?}orfolggiça. do ,Φ€)2 j

O bacteriófago Φ€.12Ί purificado foi diluído em solução de gelatina a 0,01%, e em seguida fixado em solução de glqtaraldeido a 2,3%, O bacteriófágo fixado foi derramado sobre uma. placa, de mica revestida com carbono (cerca de 2,5 mm x 2,5 mm) durante 10 minutos e lavado com ãgua destilada estéril. Uma película de carbono- foi disposta sobre uma 20 grelha de cobre, tingida com 4% de acetato de uranilo durante 30 a 60 segundos, seca, e observada através de um microscópio de transmissão de elétrons (JEMdOH, 8ókV, ampliação: XI20.000 para X2OO.0OO) (FIG, I).

A FIG, .1 mostra uma fotografia do bacteriófago foCJ21 feita pelo microscópio de elétrons onde é possível observar que, como o bacteriófago não tem uma cápside isométrica e 25 uma cauda eontrátil. o bacteriófago pertence morfologicamente à dpkevmdae.

20/28 <Exem pin 3>

O DNA genômico fol extraído a partir do 'bacterióíago ΦΟ2Ι purificado por ultracentrifugação. O ácido etilenodiaminotetracético- (EDTA, pH 8,(1). proteinase K e 5 dodecilsulfato de sódio (SDS) foram adicionados a uma solução da cultura do bacteríófago <ICJ2-l purificado de modo a ter uma concentração final de 20 mM, SOpsífofo e 0,5% (w/v) respect ivamente e, em seguida, foram colocados em estado estacionário a 50⁸C por 1 hora. Depois disso, um volume igual de fénol .(pH 8,0} foi adicionado, agitou-se, e centrifugou-se· em temperatura ambiente e 12.000 rpm por 10 minutos, obtendo-se assim um sobrenadante.

W O sobrenadante foi misturado com um volume igual de PC ('.fenol; clorofórmio I: 1) e centrifugado em temperatura ambiente e 12.000 rpm durante 10 minutos, obtendo-se assim um sobrenadante. O sobrenadante- foi misturado com em volume Igual de clorofórmio e centrifugado em temperatura ambiente e 12.000 rpm por 10 minutos, obtendo-se assim um sobrenadante. O -sobrenqdante obtido foi misturado sequencialmente com 10% (v/v) de 15 acetato de sódio 3M e um duplo volume de etanol frio a 95% com base no volume- total, e deixado a -2Q*C durante 1 hora. Em seguida foi realizada centrifugação a 0°C e 12.000 rpm por 10 minutos, e o precipitado- foi obtido por remoção do sobrenadante. Em seguida, 50/d? de Tris-EDTA (TE) solução tampão (pH 8,0) foi adicionado à mesma, para assim dissolver o precipitado obtido. O DNA extraído foi diluído 10 vezes e a concentração foi mensurada 20 medindo-se a absorção em OD^v

Em seguida, lug de DNA foi carregado em 1% de eleírotbrese em gel de campo pulsado- (-PFGE), em gel de agarose, e a detroforese foi realizada em temperatura ambiente durante 20 horas utilizando um programa do sistema BI.ORAD PFGE, programa 7 (tamanho: 25-100 kb; tempo de comutação: 0,4-2,() segundos, forma linear; tensão, direta: 180V; tensão 25 inversa: 120V) (FIG. 2).

21/28

Λ FIG. 2 e uma fotografia da eietroforese em gel de campo pulsado (PEGE) de DNA genômico do bacteriòfago <DCJ2I, onde pode ser confirmado que 0 DNA genómíco do bacteriòfago 4021 tem um tamanho de cerca de 56kb.

Análise dfijaãdrâoJa^g^

I5fo^; da solução do bacteriòfago Φ(?.Ι2Ι purificado (título I0'^!!pfu/mi) foi misturada •com de urna solução- de amostra 5X SDS s aquecida durante 5 minutos. .Em seguida, a proteína total do bacteriòfago 4021 foi expandida, em 15% de gel SDS-PAGE e, em seguida, 0. gel foi tingido em temperatura ambiente durante 1 hora usando uma solução de I (I corante azul de coomassie (FIG. 3).

A FIG. 3 é uma fotografia da eletrofbrese mostrando o resultado da SDS-PAGE realizada no bacteriòfago 4021, sendo observadas proteínas principais com tamanhos de cerca de 40kDa, 5lkDa, 53kDa e 70kDa. Na FIG. 3, M é uma proteína que se torna um padrão para medir 0 peso molecular.

Anáhge da.seguêneia dn.gene.dó 0ÇJ2.I

A fim de confirmar características genéticas do bacteriòfago 4021 purificado, o DNA do bacteriòfago 4021 foi analisado utilizando um sequenciador de titânio FEX (Roche), que é- um aparelho de análise do gene. Genes foram montados em Macrpgen INC. 20 utilizando GS e o software Afo «oro (Roche). A análise da sequência de um quadro aberto de leitura foi realizada utilizando GeneMArk.hmng Glimmer v3.02, e software FGE-NE8.B:, A identificação do quadro aberto de. leitura foi. realizada -usando BLASTP e programa InterProScsn.

A sequência do genoma do novo bacteríó&go obtido apresentava várias semelhanças 25 com -as dos bacterióiagos existentes, .mas foi confirmado que um bacteriòfago com todas as

22/28 frações (10(i%) iguais ás do bacteriófago da presente invenção não existia. Deste modo, ficou confirmado que «m novo bacteriófago de acordo com apresente invenção foi isolado.

Dados da análise de homologia da sequência de ácido nucleico entre o bacteriófago <bCJ2l e outms bacteríófagos estão ilustrados na tabela 1, (Tabeh 11

	Objrto		kkotsíisdí-s
Υ·.·ι«<'	Conjpn Í<J	iísksü	Fim	IteseríçS»	E-Vsí«e	MaidVrotsí	P«. {%)
,íj>:í⁵.>:)ò:23	54J	?b	55?	rr>j!írij!isf<e«as?4 Xímséixíidií ]' C i> járiS im ba i.<! !;· Wm SRTiUA'25]	SE 55	425:6:	2ú
·0·	207	:	?ra	?f oioina iüpótéúç y pí6 3 4Q Fp?? iCkóiílJíí:	215-42	w	•4?
LfriiSgrtxVi jx'iWju	54?	:S	4M	iYfSeína :apctò5fca ChC4 _4<Í88 rVesridmtr· botuiiíi!·.!» ΒΚΪΟΙ 5^l>25j	5E-i·?	ãJ.CVí
eooiígPíW· ; txdUGCJ 5'		7	>7Õ	'T !IT:;ÍÍSM g<iίο» f CfeSii'll! ÍWSB bsMfeiiffi £4 sir. 84N Í E Bí.5262j	LV.'-PP	ϊΡΡ-Ί 90	5?
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24/28

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A sequência parcial do genotna do bacteriófago ΦΟ121 é a mesma para SEQ II) No:

l. A sequência do genoma foi determinada por analisador genético.

25/28 <Exempin 6>

Teste de estabilidade do ΦΟ2ί dependendo do pH

A fim de confirmar a estabilidade do bacteriòfago 4>CJ2l em um ambiente de baixo pH, foi realizado o teste de estabilidade sobre uma larga gama de pH (pH 4,0 / 5,5 / 6,4 / 6,9 / 5 7,4 / 8,2 / 9.0 e 9,8).

Pars o teste, várias soluções de pH [solução- tampão de acetato de sódio (pH 4,0 / pH 5,5 e pH 6,4), solução tampão de fosfato de sódio (pH 6,9 e pH 7,4), e ama solução de TrisHCI (pH 8,2 / pH 9,0 e pH 9,8)] foram preparadas a uma concentração de 0,2 M, respectivamente.

Depois que 90ifo de cada uma das soluções de pl-l foí misturada com KW de solução d© bacteriòfago com um título l.0X10^ypfu/n$, de tal modo que uma -concentração de cada solução d© pH tornou-se I M, cada uma das soluções de pH foí deixada em. temperatura ambiente durante 30 minutos, 1 hora, e 2 horas. Em seguida, a solução reacional foi diluída passo a passo, lórfo da solução diluída em cada passo foí derramada e cultivada a. 3(FC durante 18 horas através de um método de sobreposição em ãgar macio, e o título foi medido através da. presença ou ausência de íise {FIG. 4).

A FIG. 4 mostra um resultado do teste de resistência ao áeido do bacteriòfago ΦΟ.Ι21. Conforme ilustrado na FIG. 4, foi confirmado que o 'bacteriòfago ΦΟ321 não perde a sua atividade e permaneceu sigmfíeativamente estável em um intervalo de pH de 4.0 a 9,8 por até 20 2 horas.

lestejcestabilid^

Foí realizado um teste para confirmar a estabilidade contra o calor gerado durante o processo de formulação do bacteriòfago, no caso de usar o bacteriòfago como uma 25 formulação de aditivo alimentar entre as formulações do bacteriòfago.

26/28

Especificamente, 2(M)í.fo da solução do bacteriófogo Φ€'Ι21 com um título LOX I (Npfu/nfo foram deixados a 60 X por 0, 10, 30, 60, e 120 minutos. Então, as soluções acima foram diluídas passo a passo, l();.fo de cada uma das soluções diluídas foram derramadas e cultivadas a 30 °C durante l8 horas através de um método de sobreposição em 5 ágar macio, e O título foi medido através da presença ou ausência de líse (FIG, 5).

A FIG. 5 mostra o resultado de um teste de resistência ao calor do bacteriófago <&CJ2l. Conforme, ilustrado na FIG. 5, é possível verificar que a atividade não foi. significativamente diminuída, até o bacteriófago ΦΟ2.1 ser exposto a uma temperatura de ótFC durante 2 horas.

«Exemplo 8>

Foi realizado um teste para confirmar a estabilidade contra condições de secagem geradas durante um processo de formulação do bacteriófago, no caso de usar o bacteriófago como uma formulação destinada a aditivo alimentar dentre as demais formulações do 15 bacteriófago.

Especificamente, lOfofo de solução do bacteriófago <b€J2.l com um títuloLdXl t/pfofofo foram secos a 6t)°C durante 120 minutos, utilizando um concentrador centrífugo a vácuo (Speed-Vaccum Concentrator 5301, Eppendorf). O sedimento obtido após a secagem foi colocado e ressuspendído numa solução de SM a um valor- equivalente ao de 20 uma solução ittidal a 4'C durante um dia.

Em seguida, as soluções acima foram diluídas passo a passo. 1 fofo da solução diluída em cada passo foi derramada e cultivada a JO^C durante 18 horas através de um método de sobreposição em ágar macio, e o título foi medido através da presença ou ausência de lise (FIG. 6).

Λ FIG. 6 mostra ο resultado de um teste de resistência à secagem do bactériófago OCJ2L Conforme ilustrado na FIG. 6, é possível notar que o título do bactériófago ΦΟΙ21 após a secagem foi reduzido cerca de 1/10 em relação ao titulo antes da secagem, <Exemplo 9>

hbfoak,Sâuâfobl..ík,Íh^eAo ΐ equi rebgao a c-forpes do tipo selvagem tto

Cfo$ry/í^

Tendo ou não atividade foiça, o bactériófago ΦΟ21 foi testado em. 45 estirpes de tipo selvagem de CZm/r«íím>? pcr/Hngem isolados pela Agência de Quarentena Vegetal e Animal e pela Universidade Kunkuk diferentes dos C/astrídmíw /x-rfofogenv (BCCP 17-1) utilizados 10 no experimento..

Especificamente, l (M de solução do bactériófago foCJSI com um. título l ,0X 10^!Vpfu/W foram misturados com uma solução de 15(W de cultura agitada (OD_óoo^:::: 2) de cada estirpe, sendo derramada e cultivada a 30*C por 18 horas através de um método de sobreposição em ágar macio. Em seguida, observou-se se uma placa foi ou não formada.

5 Como resultado do experimento, entre 45 estirpes de tipo selvagem, de C/aróWów /xu7nr?ge?is, 44 estirpes foram infectadas-, de tal forma que a proporção de infecção foi de cerca de 97,7^!fo e a razão de iisc foi de cerca de 97,7%. Os resultados estão .nas Tabelas 2 e 3.

[Tabela 2]
Origem do CP	l slíipt	do CP	lufoeiividude
Kunkuk University	Hi YS-		T·
Kunk.uk University	HI ν·
	J>’ 1
	k( CM	40747'
			_______________________________________________________________________i
	ÍOYS-2		___________________________________________________________________;
	ÍKCCM	12098

28/28 [Tabela 3]

(íneem da CP Xgència de Quarentena Vegetai e Animal	Estirpe do CP -I CP-OW~Í í	Infeciividade	P-airpc d<> CP BCCP43-I	15 ·λ ;

Animal and Plani	fcP-JSIM	4.4..,;..	ÍBCCP44-3	t-C
Quarantine Agere	' ( P-OYS-2	4.4.4..		B( CP47-2	-S-T-4-
	CP-BC··!	~4-i-		IH i. Pàb~!

ivida.de

CP-BsW-4

BCt P5B-I-3

t ί’ΉΒΜ-Ι	4.._W.	Bí ι..Ρ5Π·Ρ·8
cp-in.	^4.4.	BC(T?l-l-i
UP-KW-I H-+	Bt t P51-I-5
( P-BSC	.................................	Bí v P52-2-8
rp fil .]		BCCP?>-2-a
CP I JV-l	4.,.:.,4..	BCt P54-3A
B( ( PI 7-1		Bt CP55-3-I
BUCP23 l	4-44-	^BCCP4?Q-7
Bí. ( ItoT.?	44 + ( J 1	SBí í'P4i
Bt { PA-'	^..4-4	.....SBCCP343

lk'CP3‘!-i

SBCCP361

BCCP441...............3B( CP-li-3 .........RKim

4..........................................i...........

ÍELCCP64 ;Ήί' intestinos

BCCPC¹? 4-t-

Claims

REIVINDICAÇÕES

L Um novo bacteriófago ΦΟ2.Ι (KCCMII363P). caracterizado por apresentar uma atividade bactericida especifica contra o CZmaráÂw per/rmg<w.
2. Uma composição para a prevenção ou tratamento de doenças infecciosas causadas por

5 CVostrâ/m?» pegfrwgam; caracterizada por compreender o bacteriófago ΦΟ21. (K.CCM II363P) da reivindicação 1 como um ingrediente ativo.

z. A composição de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato da doença infecciosa ser a entente necróíica,
4. Um antibiótico, caracterizado por compreender o bacteriófago ΦΟ21 (KCCMII363P) da W reivindicação I como um ingrediente ativo.

b. Um aditivo alimentar ou um aditivo para ág«.a potável, caracterizado por compreender o bacteriófago 4XJ21 (KCCM11363P) da reivindicação I como um ingrediente ativo.
6. Um desinfetante ou um produto de limpeza, caracterizado por compreender o bacteriófago $CJ2i (KCLMl 13&3P) da reivindicação- l como um ingrediente ativo.

15 z. Um método de prevenção ou tratamento de doenças infecciosas causadas por CZosvrm
7w? caracterizado por compreender a administração do bacteriófago ΦΟ21 (KcCMI I363P) da reivindicação 1 ou da composição da reivindicação 2, para animais, exceto seres humanos.
8,0 método de acordo com a reivindicação 7. caracterizado pelo fato da doença infecciosa 20 ser a entente necrótica.