CN110628727B - 一种新型产气荚膜梭菌噬菌体组合物及其应用 - Google Patents
一种新型产气荚膜梭菌噬菌体组合物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种新型产气荚膜梭菌噬菌体组合物及其应用,本发明筛选得到了4株新型产气荚膜梭菌噬菌体,进行生物学性质和基因组分析,并利用该4株新型产气荚膜梭菌噬菌体获得噬菌体组合物,用于制备裂解产气荚膜梭菌产品,用于养殖企业产气荚膜梭菌感染的防治,可以特异性地用于预防或治疗流行性产气荚膜梭菌的感染,而不会影响其他正常菌群,具有较少的副作用,有效替代抗生素的使用。
Description
技术领域
本发明涉及一种新型产气荚膜梭菌噬菌体组合物及其应用,属于微生物领域。
背景技术
产气荚膜梭菌是畜禽和人类肠道正常存在的厌氧菌,广泛分布于自然界。该菌能够产生六种主要的致病毒素(α、β、ε、ι、β2和肠毒素),引起动物和人的感染甚至猝死。不仅严重危害养禽业,而且是人类食源性细菌的第三大病因。
在养殖业中,产气荚膜梭菌引起的坏死性肠炎和亚临床感染严重影响了动物的生长性能,造成了巨大的经济损失。动物的坏死性肠炎通常由添加到饲料中的抗生素来预防,然而抗生素的广泛使用导致抗药性逐渐增加,坏死性肠炎的发病率和其亚临床感染率随之增加,我国全面实施《全国遏制动物源细菌耐药行动计划(2017-2020)》和兽用抗菌药物减量化使用试点,到2020年元旦将全面禁用饲料中抗生素促生长剂。欧洲禁用促生长剂后导致产气荚膜梭菌感染大幅度反弹,因此,抗生素的禁用和限用都迫切需要新的可替代产品及应用方案防控产气荚膜梭菌。而噬菌体是特异性裂解细菌的病毒,具有特异性强、治疗所需剂量小、研发周期短等优势,在替代抗生素防治产气荚膜梭菌感染方面有巨大的潜力。
发明内容
本发明克服了上述现有技术的不足,提供一种新型产气荚膜梭菌噬菌体组合物及其应用。本发明筛选得到了4株新型产气荚膜梭菌噬菌体,进行生物学性质和基因组分析,并利用该4株新型产气荚膜梭菌噬菌体获得噬菌体组合物,用于制备裂解产气荚膜梭菌产品,用于养殖企业产气荚膜梭菌感染的防治,从而减少养殖企业抗生素的使用量,提高企业的经济效益。
一种新型产气荚膜梭菌噬菌体组合物,所述组合物为噬菌体4YP、噬菌体PA8、噬菌体DYP1、噬菌体TAP1的任意1-4种的组合;
所述噬菌体4YP、噬菌体DYP1、噬菌体PA8、噬菌体TAP1的噬菌体的DNA序列分别如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.4所示;
SEQ ID NO.1:
TAAATAAAATAATCCTTATAGATAGTTTACCGGGCGTAAATGTAATTAAGAGTGGGTATATAACAATAAAAAATAACCCCTAACCAATTCCCATTTACAGAAATTGGATTAAGGGTCATCTTTAGAAAGGAGGTGTACATCATACTAAGATTTAATTTACAATATAATTATAACATAGCATTATAATTATGTCAATGGGAAAATAAAAATAATTTTTTAAAAAAGGGTATTGACAAGGGGTGGTTATAAATGTATAATAAAGTTAATAAATGAATTAATGAAAAAATGGAGAGTGATTAATAATGAGAAGAGTTTTTGAAACTGCACACGCATTAACTAGACAATTTATATCTACTTACGGGGGAGATTATAGGGGTCAATTTATCGTAACATTAAAGATGTTATGTGAGGAGAAGAAAAATATTAAATTAAGACTTGAAAGGTTAATTGATGAAAAAAGACAAAGGGGTATAACATCAATCAATGTATATTTTAAAAATGGTGTATCACTTTTTGGTGATGTTGATTGTATAGATGTTAACAACAATAATTTTATTTTTAGAGATTTTTTAAAGGAAAAATATATTAAAACAACTAGAAGAACATCATTCCATAGTTTAATGAAAATAGATTATAGATTAGTTGATTGGGTATCATAAAATATAATAAATTGGTTGGTGATAGAGTATGAGAAAAATATTTCAAGGTGTATTATTATGTGTAGCATTCATAATGAGTGCTATATCATTTTTATATTTATATAACAATACTTTTAAGAGTACATTAATTTTTATATTGTTAGTATTAGCAATAATAATTTTATTAACTAATATTTTATATGATTAGGAGTGATAAAATGAAGCTTAAAGAGTTTATTGAAAATTTTTGTTATAAAGATACAGATATTAAAATCCGTGGAATATCTACAAGTAGTAATTCTATTACATATATGGTATTTCAGGGTTACGAATACGACATAGCAAGTGAAACGGAAGTATTTAGTATAATAGAGGATTTAAATGTAATAGGCGTGAAAGTTGATAAGGATTATCTAATAATAGTAATAAATGATATGATTTAATTTTAAAATGGCACTTGAAAAGTGCCTTTTTTTATTGTATAATAAAGTTAGCAAGTGAAAGGGGATAAATATCATGAAATATCAAGTTACTAAATTAAATGTAATAAATCAAGAACACTACGACATTATAAAAGAAAAATGTTTTACTGAATTATCTGAAATACCATTAACAACTCATTACGTACTAGATACAGAAACATGCCGAACAAGTGAACAAATGCTATTAGATACAAACATGGAGCAGGAAGTAAAAACCTATGCCGTAGGGGTAATGAGTGTAGGTGATAAAGATAATAATATGTTTGTGTGTGAAACATGGGAAATGTTTTTCGAAAACATCTATAAAACTGTACAAGCTAACTTAAATTTTTATCTAAAGAACAACCAAAAGAGAGATAAAAAGAATTTAGACATAACCATTAAGGTTGGAGTTCATAACGTAAAATACGAAAATAGTTTCATGCAATATGTTTTAAATAATTTAGGTTATGTATATTCTACCGGTGTAATAGCGTACAACGATAAAAAAGGTTGCTCCTTCAATAAGGTTATGTTAGATACTGGGTGCTATAATATAACGCAAGCTAACGGCGTACACTATGGCTCTAAGGTGTGTTTAAAAGATACTATAATAAATCAAAAGATAATATCTAAAGGGAAAAACAAAGGGAAATTAGTTGAACAAGAAATAAAAATCTATTTAGAATTTTGGGATACGCTAAAGGTTGCACAAACTAGCCTAGAAAAAGCTCATAAATTCGTTGAAATGAACGAAATGTATTATAAGCTTAATAAAGAATATGATTATGACAAAGTTAGAGCTAATGGTCATATTTTGGACGCCCTTGAGCTTGAGTATTTATATAATGACTTATACGCAACTAAGAAATTAGTTGAAGACTTTTATTATGACACTCTTTTAACTTTTAAAGGTAAGGAGAAAACTATTTATTTAAATGATAATCTTAAAACATCTGCGTCAATAGCTTTTAATACTGCAATAGCTTACACTTTCAGTAATGGAGAAAATGAAATTACAAATATTAAAGGCGCTAGGGAACTATTTAACGAACATTTTGAAATAGATAAAAGAATTGGATTAAAACAAGAAATAAAAGATATGGAGCGTCTATCGTACCGTGGTGGGTGGACGCACGCAAACCTAAAACATATAAATAACATAGTAGAGAAAAATGGTACTTCTATTGATAAAAATTCAAGTTATCCTGCTCAGATGTGTTTTGGTTTATTACCGTATGGAGCACCAATAGAATTTAATAGTATTGAGGATATGAGAGAATATATGAAGGAAAATAATCTTGCAATGGATAATCATGTTTTTATAATAAATACTGGTTTTGATTATGTAAGACCAAAATGTGAAAAATATGATTTAGAAGTCATTCAATTAGGGTCAGTAAATGCAACTATGGAATTTAAGAAAATGGCTTTCGAACATGAGGGAAAAGTAGTACAAAATGGTAACACATTTATAAATAGAAACTACTGGGACGAAGATAACAAAATACAAATATATAAAAAAGGTTGTGAGGAAATTGCAAACTATAATTTTACAATAACAAACGTTGAATATGATTTTTTAAGTAAATATTATGAGTTCGGGTATCATTCAGAAATAGACTTCATAGATGATGAAATAACTTTCGGAGAATTAAAAACTGGTAAAGTATTATTATATAAAGCCGAAAAAGGACTTTTAAGAGAGTATATAGAAGAATTATATTTAATGAAAGATGAAGTAAAAAGAAGAATAAACACAGGTGAAAAGGGTCTTGACGCTCTTTATTCATCAATAAAAGTTCTTTTAAATTCATTGTATGGCAAATTTGGTTCAAAGGTTAGAAAAACATTGGACAACCTATTTTTAAATGATGAGGGTATTTTCACTTGGGATATAGGTTGCAAAAAAGAGTTACGTCAAAATGAAAACGAACTTGATTTACTAGAATATGATAGTGAAGAATATTACGTGCCTTTCGCTTCCTTTGTTACGGCTTACGCTAGAGTTGAAATTCAAACCATTGTAATTGAAGCAATAGGAGTTAAAAATTTCTTATATACTGACACAGATAGTATTTACTGCTCTCTAACTAAGGAACAATTAATTAAAGCTCTTAAAAAGATTAATTATGAGCTTGACGGGTACGAATTAGGAAAATGGGACTTAGAACACGAATTTAATAAATTTAAATCTCTAGGAGCTAAAAAGTATATGCTTTATGATACTAAAATAGAAAAAATATGTGTAGCGTGTGCCGGTGTACCTAAAAAAGCTCAATCTATACTAGCGAAACAAGGATTTAATGAGTTTTATCTTGGTAAAGCTATTGAGGGGAAATTACAAAGTAAACAAGTTAAGGGTGGTACGCTTCTAACTAACATAGATTTTGTAATCCAAAATACCACCTATATACCGCATTAAAAAATTTTTAAATAGGGGTTGTAATGCTCCCTATATAATGATATAATAAAGACATGAAAGGGGAATAAATAAAATGGCTAAAAGAACAACAAAACAACAATTTATGAAAAAATGGGACAAGGCTGTTAAAAATAACAGCTATATATTCTTACAAGATAAGGACAATATGAAAAAGGCACAAAAATATTTTGGTTTATCTAACGAATATGTATCCATAGTTGGTAACAAGGCAAAGGCTAATTATCAAATAGATAATAAAAAGAAAATCGTTAATGAGAGAAAAACAAAATTAAGAGATAGCTTATTACAAGATGGTACAGTTGATAAAACAGATATTAAAAAGATAATCAACAACGATAGACTTTATAAGAAGCTAAATACTAGAAATGTACGCTCAAGCGTAAACAAAGCTATCCAAACTGAATTTTTTAATATCATATCTAACATAGGACTTTTTAAAGATAATGGAGCATTTAGAAGGGCGTTAAAAGGAAATGACACGCCAATTAAAGAATTTAAAAAGAAGGTTTTAGAAGCTATTCAAAAATCGGACAAGCCTTTTGAGTTATTACTTTCTTTTAGTGAAAGAATAGATAAGGCTTTTGAGTTAATATATGAAGCATATCCCGAAGGTGCTTTAAATTCTGTACAAGGAAGTAGAGTAGTTAATAAATTTATTGATATAATTGAGACTGAAATGTTAAGGAGTGTATAATAATGAAAATAATAAAAGCAACTAAAAATGGAAAATCAAAGCACGTAGTATTAGAAGGGGAACATATTACAAAGGAGCAATTAAAGGAGCTATTAAAAACTACTAATGGTGTAAGATTTTCTTATTTTGGCTCTGAATATAGAAACTTTCAAGAAATTAAAGATATGTTAGAAATCACTATCGGATTAAAAGAGAATTATATTTTAATAACTAAGAGAAGGGGAGTAAAATTCTAATGGGTGAATATTGTAAATTCAAATTTAAAGGTGAAATATACTACGGTACTATTACGGAAGAACACGAAGATTATTTTGTTATAAAAGTTAATAATAAATTTCCTCATTACTTTTTCAAGGAAGATTTAGAAATCATTTATAAAATGACTTATGAAAGATAGATGGAATAGGGGGTTAATAGAATGAAAAAGAAAACTATATATTTGAAAGTTGATATAATTGGAGGGGAAAAGGATTTATTAGAAAATCCCATGGAATATTTAAGTGTTGATTTTGACGGTGATTACGCTTATTTAGATTATGAAATAATAAAAGAAAAAGTAGAAGAATAATAAAACAAGTTAACTTTAGGGATAGGTGAAATACTATGAAAGGTTTTATTTACAGTTTATTATTTATGTTTTCAATAGGTGGTGGGGTCTTAATGGCTCTACCAACTAATGATATAGAACCGCAACCAATACAAGAAACTATAGCAGTTGAAAAGGAGAATATAGAAATGGATAATAACCTTACACTTACAAA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SEQ ID NO.2
ACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTGGGTATATAACAATAAAAAATAACCCCTAACCAATTCCCATTTACAGAAATTGGATTAAGGGTCATCTTTAGAAAGGAGGTGTACATCATACTAAGATTTAATTTACAATATAATTATAACATAGCATTATAATTATGTCAATGGGAAAATAAAAATAATTTTTTAAAAAAGGGTATTGACAAGGGGTGGTTATAAATGTATAATAAAGTTAATAAATGAATTAATGAAACAATGGAGAGTGATTAATAATGAAAAGAGTTTTCGAAACTGCACACGCATTAACTAGACAATTTATATCTACTTACGGTGGAGATTATAGGGGTCAATTTATCGTAACATTAAAGATGTTATGTGAGGAGAAGAAAAATATTAAATTAAGACTTGAAAGGTTAATTGAGGAAAAAAGACAAAAAGGTATAACATCAATCAATGTATATTTTAAAAATGGTGTATCACTTTTCGGTGATGTTGCTTGTATAGATGTTAACAACAATAATTTTATTTTTAGAGATTTTTTAAAGGAAAAATATATTAAAACAACTAGAAGAACATCATTCCATAGTTTAATGAAAATAGATTATAGATTAGTTGATTGGGTATCATAAAATATATTGAATTGGTTGGTGATAGAGCATGAGAAAAATATTTCAGGGTATATTATTATGTGTGGCGTTTGTTTTAAGCGCCATATCATTCCTATATTTATACAACAATACTTTAAAAAGTACATTATTTTTTTTATTGTTAGTATTAGCAATAATAATTTTATTAAGTAATATTTTATATGATTAGGAGTGATAAAATGAAGCTTAAAGAGTTTATTGAAAATTTTTGTTATAAAGATACAGATATTAAAATCCGGGGAATATCATACAAAAGTAATTCTATTACATATATGGTATTTCAAGGTTACGAATACGACATAGCAAGTGAAACGGAAGTATTTAGTATAATAGAGGATTTAAATGTAATAGGCGTGAAAGTTGATAAGGATTATCTAATAATAGTAATAAATGATATGATTTAATTTTAAAATGGCACTTGAAAAGTGCCTTTTTTTATTGTATAATAAAATTAACAAGTGAAAGGGGATAAATATCATGAAATATCAAGTAGCTAAATTAAACGTAATAAATGAAGAACACTACAACATTATAAAAGAAAAATGTTTTACCGAATTATCTGAAATACCGTTAACAAATCACTACGTATTAGATACAGAAACATGCCGAACAAATAAAGCAATGCTTTTAGATACAAACATGGAGCAAGAAGTAAAAACCTACGCCGTGGGTGTAATGAGTGTAGGGGATAAAAATAATAATATGTTTGTATGTGAAACATGGGAAATGTTTTTCGAAAACATCTATAAAACTGTACAAACTAACTTAAATTTTTATCTAAAGAACAACCAAAAGAGAGATAAAAAGAATTTAGACATAACCATTAAGGTTGGAGTTCATAACGTAAAATACGAAAATAGTTTCATGCAATATGTTTTAAATAATTTAGGTTATGTATATTCTACCGGTGTAATAGCGTACAACGATAAAAAAGGTTGTTCCTTCAATAAGGTTATGTTAGATACTGGGTGTTATAATATAACTCAAGCTAACGGCGTACACTATGGCTCTAAGGTGTGCTTAAAAGATACTATCATAAATCAAAAGATAATATCTAAAGGGAAAAACAAAGGGAAATTAGTTGAGCAGGAAATAAAAATCTATTTAGAATTTTGGGATACGCTAAAGGTTGCACAAACTAGCCTAGAAAAAGCTCATAAATTCGTTGAAATGGACGAAATGTATTATAAACTTAATGAAGAATATGATTACGACAAAGTTAGGTCTAATGGTCATATTTTAGACGCTTTAGAGCTTGAGTATCTATATAACGATTTATACGCAACTAAGAAATTAGTTGAGGATTTTTATTACAACACTCTTTTAACTTTTAAAGGTAAGGAGAAAACTATTTATTTAAATGATAATCTTAAAACATCTGCGGCAATAGCTTTTAATACGGCAATAGCTTATACTTTCAGTAATGGCGAAAGTGAAATTACAAATATTAAGGGTTCTAGGGAACTATTTAACGAACACTTTGAAATAGATAAAAGAATTGGTTTAAAACAAGAAATAAAAGATATGGAGCGTCTATCGTACCGTGGTGGGTGGACGCACGCAAACCTAAAACATATAAATAACATAGTAGAGAAAAATGGTACTTCTATTGATAAAAATTCAAGTTATCCGGCTCAGATGTGTTTCGGTTTATTACCGTATGGAGCACCAATAGAATTTAATAGTATTGAGGATATGAGAGAATATATGAAGGAAAATAATCTTGCAATGGATAATCATGTTTTTATAATAAATACTGGTTTTGATTATGTAAGGCCAAAATGTGAAAAATATGATTTAGAAGTCATTCAATTAGGGTCAGTAAATGCAACTATGGAATTTAAGAAAATGGCTTTTAAACATGAGGGAAAAGTAGTACAAAATGGTAATACATTTATAAATAGAAACTATTGGGACGAAGATAACAAAATACAAATATATAAAAAAGGTTGTGAGGAAATTGCAAACTATAATTTTACAATAACAAACGTTGAATATGATTTTTTAAGTAAATATTATGAGTTCGGTTATCATTCAGAAATAGAGTTCATAGATGATGAAATAACTTTCGGAGAATTAAAAACTGGTAAGGTATTATTATATAAAGCCGAAAAAGGACTTTTAAGAGAGTATATAGAAGAATTATACTTGATGAAAGATGAAGTAAAAAGAAGAATAAACAAAGGTGAAAAAGGACTTGACGCTCTTTATTCATCAATAAAAGTTCTTTTAAATTCATTGTATGGCAAATTTGGTTCAAAGGTTAGAAAAACACTTGACAACTTATTTTTAAATGATGAGGGTATTTTCGCATGGGATATAGGTTGCAAAAAAGAGTTACGTCAAAATGAAAACGAACTTGATTTACTAGAATATGATAGTGAAGAATATTACGTGCCTTTCGCTTCCTTTGTTACGGCTTACGCTAGAGTTGAAATTCAAACCATTGTAATTGAAGCAATAGGAGTTAAAAATTTCTTATATACTGATACAGACAGCATTTATTGCTCTCTAACTAAGGAACAATTAATTAAAGCTCTTAAAAAGATTAATTATGAGCTTGACGGGTACGAATTAGGAAAATGGGACTTAGAACATGAATTTAATAAATTTAAATCTCTAGGAGCTAAAAAGTATATGCTTTATGATACTAAATCAGAAAAAATATGTGTAGCGTGTGCAGGTGTACCTAAAAAAGCTCAATCTATACTAGCGAAACAAGGATTTAATGAATTTTATCTGGGTAAAGCTATCGAAGGGAAATTACAAAGTAAACAAGTTAAGGGGGGTACGCTTTTAACTAACATAGATTTTGTAATCCAAGATACGACTTATATACCTCATTAAAAATTTTTAAATAGGGGTTGTAATGCCCCCTATATAATGTTATAATAAAGACATGAAAGGGGAATAAATAAAATGGCTAAAAGAACAACAAAACAACAATTTATGAAAAAATGGGACAAGGCTGTTAAAAATAACAGTTATATATTCTTACAAGATAAGGACAATATGAAAAAGGCACAAAAATATTTTGGTTTATCTAACGAATATGTATCCATAGTTGGTAACAAGGCAAAGGCTAATTATCAAATAGATAATAAAAAGAAAATCGTTAATGAGAGAAAAACAAAATTAAGAGATAGCTTATTACAAGATGGTACAGTTGATAAAACAGATATTAAAAAGATAATCAACAACGATAGACTTTATAAGAAGCTAAATACTAGAAATGTACGCTCAAGCGTAAACAAAGCTATCCAAACTGAATTTTTTAATATCATATCTAACATAGGACTTTTTAAAGATAATGGAGCATTTAGAAGGGCGTTAAAAGGAAATGACACGCCAATTAAAGAATTTAAAAAGAAGGTTTTAGAAGCTATTCAAAAATCGGACAAGCCTTTTGAGTTATTACTTTCTTTTAGTGAAAGAATAGATAAGGCTTTTGAGTTAATATATGAAGCATATCCCGAAGGTGCTTTAAATTCTGTACAAGGAAGTAGAGTAGTTAATAAATTTATTGATATAATTGAGACTGAAATGTTAAGGAGTGTATAATAATGAAAATAATAAAAGCAACTAAAAATGGAAAATCAAAGCACGTAGTATTAGAAGGTGAACATATTACAAAGGAGCAATTAAAGGAGCTATTAAAAACTACTAATGGTGTAAGATTTTCTTATTTTGGCTCTGAATATAGAAACTTTCAAGAAATTAAAGATATGATAGAAATCACTATCGGATTAAAAGAGAATTATATTTTAATAACTAAGAGAAGGGGAGTAAAATTCTAATGGGTGAATATTGTAAATTCAAATTTAAAGGTGAAATATACTACGGTACTATCACGGAAGAACACGAAGATTATTTTGTTATAAAAGTTAATAATAAATTTCCTCATTACTTTTTCAAGGAAGATTTAGAAATCATTTATAAAATGACTTATGAAAGATAGATGGAATAGGGGGTTAATAGAATGGAAAAGAAAACCATATATTTGAAAGTTGATATAATTGGAGGGGAAAAGGATTTATTAGAAAATCCCATGGAATATTTAAGTGTTGATTTTGACGGTGATTACGCTTATTTAGATTATGAAATAATAAAAGAAAAAGTAGAAGAATAATAAAACAAGTTAACTTTAGGGATAGGTGAAATACTATGAAAGGTTTTATTTACAGTTTATTATTTATGTTTTCAATAGGTGGTGGGGTCTTAATGGCTCTACCAACTAATGAGATAGAACCACAACCAATAAAAGAAACTATAACAGTTGAAAAGGAGCTTGATGAAATGGAGAATGAATTAACACTCACAAAGGAATTTTTATTAAAATCATATG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SEQ ID NO.3
CAAAATGGAGAGCCTAGCGATACACAAAGACAGAAGGGTAATGATGTATATAACAATAAAAAATAACCCCTAACCAATTCCCATTTACAGAAATTGGATTAAGGGTCATCTTTAGAAAGGAGGTGTACATCATACTAAGATTTAATTTACAATATAATTATAACATAGCATTATAATTATGTCAATGGGAAAATAAAAATAATTTTTTAAAAAAGGGTATTGACAAGGGGTGGTTATAAATGTATAATAAAGTTAATAAATGAATTAATGAAACAATGGAGAGTGATTAATAATGAAAAGAGTTTTCGAAACTGCACACGCATTAACTAGACAATTTATATCTACTTACGGTGGAGATTATAGGGGTCAATTTATCGTAACATTAAAGATGTTATGTGAGGAGAAGAAAAATATTAAATTAAGACTTGAAAGGTTAATTGAGGAAAAAAGACAAAAAGGTATAACATCAATCAATGTATATTTTAAAAATGGTGTATCACTTTTCGGTGATGTTGCTTGTATAGATGTTAACAACAATAATTTTATTTTTAGAGATTTTTTAAAGGAAAAATATATTAAAACAACTAGAAGAACATCATTCCATAGTTTAATGAAAATAGATTATAGATTAGTTGATTGGGTATCATAAAATATATTGAATTGGTTGGTGATAGAGCATGAGAAAAATATTTCAGGGTATATTATTATGTGTGGCGTTTGTTTTAAGCGCCATATCATTCCTATATTTATACAACAATACTTTAAAAAGTACATTATTTTTTTTATTGTTAGTATTAGCAATAATAATTTTATTAAGTAATATTTTATATGATTAGGAGTGATAAAATGAAGCTTAAAGAGTTTATTGAAAATTTTTGTTATAAAGATACAGATATTAAAATCCGGGGAATATCATACAAAAGTAATTCTATTACATATATGGTATTTCAAGGTTACGAATACGACATAGCAAGTGAAACGGAAGTATTTAGTATAATAGAGGATTTAAATGTAATAGGCGTGAAAGTTGATAAGGATTATCTAATAATAGTAATAAATGATATGATTTAATTTTAAAATGGCACTTGAAAAGTGCCTTTTTTTATTGTATAATAAAATTAACAAGTGAAAGGGGATAAATATCATGAAATATCAAGTAGCTAAATTAAACGTAATAAATGAAGAACACTACAACATTATAAAAGAAAAATGTTTTACCGAATTATCTGAAATACCGTTAACAAATCACTACGTATTAGATACAGAAACATGCCGAACAAATAAAGCAATGCTTTTAGATACAAACATGGAGCAAGAAGTAAAAACCTACGCCGTGGGTGTAATGAGTGTAGGGGATAAAAATAATAATATGTTTGTATGTGAAACATGGGAAATGTTTTTCGAAAACATCTATAAAACTGTACAAACTAACTTAAATTTTTATCTAAAGAACAACCAAAAGAGAGATAAAAAGAATTTAGACATAACCATTAAGGTTGGAGTTCATAACGTAAAATACGAAAATAGTTTCATGCAATATGTTTTAAATAATTTAGGTTATGTATATTCTACCGGTGTAATAGCGTACAACGATAAAAAAGGTTGTTCCTTCAATAAGGTTATGTTAGATACTGGGTGTTATAATATAACTCAAGCTAACGGCGTACACTATGGCTCTAAGGTGTGCTTAAAAGATACTATCATAAATCAAAAGATAATATCTAAAGGGAAAAACAAAGGGAAATTAGTTGAGCAGGAAATAAAAATCTATTTAGAATTTTGGGATACGCTAAAGGTTGCACAAACTAGCCTAGAAAAAGCTCATAAATTCGTTGAAATGGACGAAATGTATTATAAACTTAATGAAGAATATGATTACGACAAAGTTAGGTCTAATGGTCATATTTTAGACGCTTTAGAGCTTGAGTATCTATATAACGATTTATACGCAACTAAGAAATTAGTTGAGGATTTTTATTACAACACTCTTTTAACTTTTAAAGGTAAGGAGAAAACTATTTATTTAAATGATAATCTTAAAACATCTGCGGCAATAGCTTTTAATACGGCAATAGCTTATACTTTCAGTAATGGCGAAAGTGAAATTACAAATATTAAGGGTTCTAGGGAACTATTTAACGAACACTTTGAAATAGATAAAAGAATTGGTTTAAAACAAGAAATAAAAGATATGGAGCGTCTATCGTACCGTGGTGGGTGGACGCACGCAAACCTAAAACATATAAATAACATAGTAGAGAAAAATGGTACTTCTATTGATAAAAATTCAAGTTATCCGGCTCAGATGTGTTTCGGTTTATTACCGTATGGAGCACCAATAGAATTTAATAGTATTGAGGATATGAGAGAATATATGAAGGAAAATAATCTTGCAATGGATAATCATGTTTTTATAATAAATACTGGTTTTGATTATGTAAGGCCAAAATGTGAAAAATATGATTTAGAAGTCATTCAATTAGGGTCAGTAAATGCAACTATGGAATTTAAGAAAATGGCTTTTAAACATGAGGGAAAAGTAGTACAAAATGGTAATACATTTATAAATAGAAACTATTGGGACGAAGATAACAAAATACAAATATATAAAAAAGGTTGTGAGGAAATTGCAAACTATAATTTTACAATAACAAACGTTGAATATGATTTTTTAAGTAAATATTATGAGTTCGGTTATCATTCAGAAATAGAGTTCATAGATGATGAAATAACTTTCGGAGAATTAAAAACTGGTAAGGTATTATTATATAAAGCCGAAAAAGGACTTTTAAGAGAGTATATAGAAGAATTATACTTGATGAAAGATGAAGTAAAAAGAAGAATAAACAAAGGTGAAAAAGGACTTGACGCTCTTTATTCATCAATAAAAGTTCTTTTAAATTCATTGTATGGCAAATTTGGTTCAAAGGTTAGAAAAACACTTGACAACTTATTTTTAAATGATGAGGGTATTTTCGCATGGGATATAGGTTGCAAAAAAGAGTTACGTCAAAATGAAAACGAACTTGATTTACTAGAATATGATAGTGAAGAATATTACGTGCCTTTCGCTTCCTTTGTTACGGCTTACGCTAGAGTTGAAATTCAAACCATTGTAATTGAAGCAATAGGAGTTAAAAATTTCTTATATACTGATACAGACAGCATTTATTGCTCTCTAACTAAGGAACAATTAATTAAAGCTCTTAAAAAGATTAATTATGAGCTTGACGGGTACGAATTAGGAAAATGGGACTTAGAACATGAATTTAATAAATTTAAATCTCTAGGAGCTAAAAAGTATATGCTTTATGATACTAAATCAGAAAAAATATGTGTAGCGTGTGCAGGTGTACCTAAAAAAGCTCAATCTATACTAGCGAAACAAGGATTTAATGAATTTTATCTGGGTAAAGCTATCGAAGGGAAATTACAAAGTAAACAAGTTAAGGGGGGTACGCTTTTAACTAACATAGATTTTGTAATCCAAGATACGACTTATATACCTCATTAAAAATTTTTAAATAGGGGTTGTAATGCCCCCTATATAATGTTATAATAAAGACATGAAAGGGGAATAAATAAAATGGCTAAAAGAACAACAAAACAACAATTTATGAAAAAATGGGACAAGGCTGTTAAAAATAACAGTTATATATTCTTACAAGATAAGGACAATATGAAAAAGGCACAAAAATATTTTGGTTTATCTAACGAATATGTATCCATAGTTGGTAACAAGGCAAAGGCTAATTATCAAATAGATAATAAAAAGAAAATCGTTAATGAGAGAAAAACAAAATTAAGAGATAGCTTATTACAAGATGGTACAGTTGATAAAACAGATATTAAAAAGATAATCAACAACGATAGACTTTATAAGAAGCTAAATACTAGAAATGTACGCTCAAGCGTAAACAAAGCTATCCAAACTGAATTTTTTAATATCATATCTAACATAGGACTTTTTAAAGATAATGGAGCATTTAGAAGGGCGTTAAAAGGAAATGACACGCCAATTAAAGAATTTAAAAAGAAGGTTTTAGAAGCTATTCAAAAATCGGACAAGCCTTTTGAGTTATTACTTTCTTTTAGTGAAAGAATAGATAAGGCTTTTGAGTTAATATATGAAGCATATCCCGAAGGTGCTTTAAATTCTGTACAAGGAAGTAGAGTAGTTAATAAATTTATTGATATAATTGAGACTGAAATGTTAAGGAGTGTATAATAATGAAAATAATAAAAGCAACTAAAAATGGAAAATCAAAGCACGTAGTATTAGAAGGTGAACATATTACAAAGGAGCAATTAAAGGAGCTATTAAAAACTACTAATGGTGTAAGATTTTCTTATTTTGGCTCTGAATATAGAAACTTTCAAGAAATTAAAGATATGATAGAAATCACTATCGGATTAAAAGAGAATTATATTTTAATAACTAAGAGAAGGGGAGTAAAATTCTAATGGGTGAATATTGTAAATTCAAATTTAAAGGTGAAATATACTACGGTACTATCACGGAAGAACACGAAGATTATTTTGTTATAAAAGTTAATAATAAATTTCCTCATTACTTTTTCAAGGAAGATTTAGAAATCATTTATAAAATGACTTATGAAAGATAGATGGAATAGGGGGTTAATAGAATGGAAAAGAAAACCATATATTTGAAAGTTGATATAATTGGAGGGGAAAAGGATTTATTAGAAAATCCCATGGAATATTTAAGTGTTGATTTTGACGGTGATTACGCTTATTTAGATTATGAAATAATAAAAGAAAAAGTAGAAGAATAATAAAACAAGTTAACTTTAGGGATAGGTGAAATACTATGAAAGGTTTTATTTACAGTTTATTATTTATGTTTTCAATAGGTGGTGGGGTCTTAATGGCTCTACCAACTAATGAGATAGAACCACAACCAATAAAAGAAACTATAACAGTTGAAAAGGAGCTTGATGAAATGGAGAATGAATTAACACTCACAAAGGAATTTTTAT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SEQ ID NO.4
TACAGATGAGGATATAACAATAAAAAATAACCCCTAACCAATTCCCATTTACAGAAATTGGATTAAGGGTCATCTTTAGAAAGGAGGTGTACATCATACTAAGATTTAATTTACAATATAATTATAACATAGCATTATAATTATGTCAATGGGAAAATAAAAATAATTTTTTAAAAAAGGGTATTGACAAGGGGTGGTTATAAATGTATAATAAAGTTAATAAATGAATTAATGAAACAATGGAGAGTGATTAATAATGAAAAGAGTTTTCGAAACTGCACACGCATTAACTAGACAATTTATATCTACTTACGGTGGAGATTATAGGGGTCAATTTATCGTAACATTAAAGATGTTATGTGAGGAGAAGAAAAATATTAAATTAAGACTTGAAAGGTTAATTAAGGAAAAAAGACAAAAAGGTATAACATCAATCAATGTATATTTTAAAAATGGTGTATCACTTTTCGGTGATGTTGCTTGTATAGATGTTAACAACAATAATTTTATTTTTAGAGATTTTTTAAAGGAAAAATATATTAAAACAACTAGAAGAACATCATTCCATAGTTTAATGAAAATAGATTATAGACTAGTTGATTGGGTATCATAAAATATATTGAATTGGTTGGTGATAGAGTATGAGAAAAATATTTCAAGGTATATTATTATGTGTGGCGTTTGTTTTAAGCGCCATATCATTCCTATATTTATACAACAATACTTTAAAAAGTACATTATTTTTTTTATTGTTAGTATTAGCAATAATAATTTTATTAAGTAATATTTTATATGATTAGGAGTGATAAAATGAAGCTTAAAGAGTTTATTGAAAATTTTTGTTATAAAGATACAGATATTAAAATCCGGGGAATATCATACAAAAGTAATTCTATTACATATATGGTATTTCAAGGTTACGAATACGACATAGCAAGTGAAACGGAAGTATTTAGTATAATAGAGGATTTAAATGTAATAGGCGTGAAAGTTGATAAGGATTATCTAATAATAGTAATAAATGATATGATTTAATTTTAAAATGGCACTTGAAAAGTGCTTTTTTTTATTGTATAATAAAATTAACAAGTGAAAGGGGATAAATATCATGAAATATCAAGTAGCTAAATTAAACGTAATAAATGAAGAACACTACAACATTATAAAAGAAAAATGTTTTACCGAATTATCTGAAATACCGTTAACAAATCACTACGTATTAGATACAGAAACATGCCGAACAAATAAAGCAATGCTTTTAGATACAAACATGGAGCAAGAAGTAAAAACCTACGCCGTGGGTGTAATGAGTGTAGGGGATAAAAATAATAATATGTTTGTATGTGAAACATGGGAAATGTTTTTCGAAAACATCTATAAAACTGTACAAACTAACTTAAATTTTTATCTAAAGAACAACCAAAAGAGAGATAAAAAGAATTTAGACATAACCATTAAGGTTGGAGTTCATAACGTAAAATACGAAAATAGTTTCATGCAATATGTTTTAAATAATTTAGGTTATGTATATTCTACCGGTGTAATAGCGTACAACGATAAAAAAGGTTGCTCCTTCAATAAGGTTATGTTAGATACTGGGTGTTATAATATAACTCAAGCTAACGGCGTACACTATGGCTCTAAGGTGTGCTTAAAAGATACTATCATAAATCAAAAGATAATATCTAAAGGGAAAAACAAAGGGAAATTAGTTGAGCAGGAAATAAAAATCTATTTAGAATTTTGGGATACGCTAAAGGTTGCACAAACTAGCCTAGAAAAAGCTCATAAATTCGTTGAAATGGACGAAATGTATTATAAACTTAATGAAGAATATGATTACGACAAAGTTAGGTCTAATGGTCATATTTTAGACGCTTTAGAGCTTGAGTATCTATATAACGATTTATACGCAACTAAGAAATTAGTTGAGGATTTTTATTACAACACTCTTTTAACTTTTAAAGGTAAGGAGAAAACTATTTATTTAAATGATAATCTTAAAACATCTGCGGCAATAGCTTTTAATACGGCAATAGCTTATACTTTCAGTAATGGCGAAAGTGAAATTACAAATATTAAGGGTTCTAGGGAACTATTTAACGAACACTTTGAAATAGATAAAAGAATTGGTTTAAAACAAGAAATAAAAGATATGGAGCGTCTATCGTACCGTGGTGGGTGGACGCACGCAAACCTAAAACATATAAATAACATAGTAGAGAAAAATGGTACTTCTATTGATAAAAATTCAAGTTATCCGGCTCAGATGTGTTTCGGTTTATTACCGTATGGAGCACCAATAGAATTTAATAGTATTGAGGATATGAGAGAATATATGAAGGAAAATAATCTTGCAATGGATAATCATGTTTTTATAATAAATACTGGTTTTGATTATGTAAGGCCAAAATGTGAAAAATATGATTTAGAAGTCATTCAATTAGGGTCAGTAAATGCAACTATGGAATTTAAGAAAATGGCTTTTAAACATGAGGGAAAAGTAGTACAAAATGGTAATACATTTATAAATAGAAACTATTGGGACGAAGATAACAAAATACAAATATATAAAAAAGGTTGTGAGGAAATTGCAAACTATAATTTTACAATAACAAACGTTGAATATGATTTTTTAAGTAAATATTATGAGTTCGGTTATCATTCAGAAATAGAGTTCATAGATGATGAAATAACTTTCGGAGAATTAAAAACTGGTAAGGTATTATTATATAAAGCCGAAAAAGGACTTTTAAGAGAGTATATAGAAGAATTATACTTGATGAAAGATGAAGTAAAAAGAAGAATAAACAAAGGTGAAAAAGGACTTGACGCTCTTTATTCATCAATAAAAGTTCTTTTAAATTCATTGTATGGCAAATTTGGTTCAAAGGTTAGAAAAACACTTGACAACTTATTTTTAAATGATGAGGGTATTTTCGCATGGGATATAGGTTGCAAAAAAGAGTTACGTCAAAATGAAAACGAACTTGATTTACTAGAATATGATAGTGAAGAATATTACGTGCCTTTCGCTTCCTTTGTTACGGCTTACGCTAGAGTTGAAATTCAAACCATTGTAATTGAAGCAATAGGAGTTAAAAATTTCTTATATACTGATACAGACAGCATTTATTGCTCTCTAACTAAGGAACAATTAATTAAAGCTCTTAAAAAGATTAATTATGAGCTTGACGGGTACGAATTAGGAAAATGGGACTTAGAACATGAATTTAATAAATTTAAATCTCTAGGAGCTAAAAAGTATATGCTTTATGATACTAAATCAGAAAAAATATGTGTAGCGTGTGCAGGTGTACCTAAAAAAGCTCAATCTATACTAGCGAAACAAGGATTTAATGAATTTTATCTGGGTAAAGCTATCGAAGGGAAATTACAAAGTAAACAAGTTAAGGGGGGTACGCTTTTAACTAACATAGATTTTGTAATCCAAGATACGACTTATATACCTCATTAAAAATTTTTAAATAGGGGTTGTAATGCCCCCTATATAATGTTATAATAAAGACATGAAAGGGGAATAAATAAAATGGCTAAAAGAACAACAAAACAACAATTTATGAAAAAATGGGACAAGGCTGTTAAAAATAACAGTTATATATTCTTACAAGATAAGGACAATATGAAAAAGGCACAAAAATATTTTGGTTTATCTAACGAATATGTATCCATAGTTGGTAACAAGGCAAAGGCTAATTATCAAATAGATAATAAAAAGAAAATCGTTAATGAGAGAAAAACAAAATTAAGAGATAGCTTATTACAAGATGGTACAGTTGATAAAACAGATATTAAAAAGATAATCAACAACGATAGACTTTATAAGAAGCTAAATACTAGAAATGTACGCTCAAGCGTAAACAAAGCTATCCAAACTGAATTTTTTAATATCATATCTAACATAGGACTTTTTAAAGATAATGGAGCATTTAGAAGGGCGTTAAAAGGAAATGACACGCCAATTAAAGAATTTAAAAAGAAGGTTTTAGAAGCTATTCAAAAATCGGACAAGCCTTTTGAGTTATTACTTTCTTTTAGTGAAAGAATAGATAAGGCTTTTGAGTTAATATATGAAGCATATCCCGAAGGTGCTTTAAATTCTGTACAAGGAAGTAGAGTAGTTAATAAATTTATTGATATAATTGAGACTGAAATGTTAAGGAGTGTATAATAATGAAAATAATAAAAGCAACTAAAAATGGAAAATCAAAGCACGTAGTATTAGAAGGTGAACATATTACAAAGGAGCAATTAAAGGAGCTATTAAAAACTACTAATGGTGTAAGATTTTCTTATTTTGGCTCTGAATATAGAAACTTTCAAGAAATTAAAGATATGATAGAAATCACTATCGGATTAAAAGAGAATTATATTTTAATAACTAAGAGAAGGGGAGTAAAATTCTAATGGGTGAATATTGTAAATTCAAATTTAAAGGTGAAATATACTACGGTACTATCACGGAAGAACACGAAGATTATTTTGTTATAAAAGTTAATAATAAATTTCCTCATTACTTTTTCAAGGAAGATTTAGAAATCATTTATAAAATGACTTATGAAAGATAGATGGAATAGGGGGTTAATAGAATGGAAAAGAAAACCATATATTTGAAAGTTGATATAATTGGAGGGGAAAAGGATTTATTAGAAAATCCCATGGAATATTTAAGTGTTGATTTTGACGGTGATTACGCTTATTTAGATTATGAAATAATAAAAGAAAAAGTAGAAGAATAATAAAACAAGTTAACTTTAGGGATAGGTGAAATACTATGAAAGGTTTTATTTACAGTTTATTATTTATGTTTTCAATAGGTGGTGGGGTCTTAATGGCTCTACCAACTAATGAGATAGAACCACAACCAATAAAAGAAACTATAACAGTTGAAAAGGAGCTTGATGAAATGGAGAATGAATTAACACTCACAAAGGAATTTTTATTAAAATCATATGAAAGTTCTAGCGAAGCTTTCGATA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CTGTAACCTTTGTTACTTGAGTGTCTTGTATAAATTGAGTAGGTGTATCACTTGTACCCATTCCGGCATCTTTTGCGGATATACCACTCATATACTTTGTAAGCATATCTTTCAGTAATTTATACTCTAATCTATAAAGACCTCTTGTATTCTTAGTCATTAATTGACTTATCATATCACCTAGACCGTATTCACTTGTAAACGCTCTTCTTAAATCAAAGTCTTTAATAGTAGTCTTAAATTTCTTTTCAAAGTTGATAGATAAATAGTTTGCGTAAACCTTGTTATCAACTAACTTGAATATATCATCACATTCAGTAGACCCACCGTCAAAGTGTTCAGAATAATCAACGGCATCAGATGCATCTACATATAAATCCTCTATAGTGTAACCATAAGTGATATTACCATCAACAAACATCTTTAAAGGGTTTTCCCATGCTTTACTCCAAAATCTGCTCATAAATACCTTATTAACTAATGCACCTATGAAAGCGTTTTTTAATACACTATATCCGAATAACTTCGTTGATATTGCCCTACTCTTTTGGTCGTTTGTCATTGTTTGGTCGTCTAATATTGGCTGTAATTCTTCTTTAAGCTCTCCCCCAACATCGTTAACTAATGCTTGAGTAACTTCGACATTCGTTTTCTTTCCAGTTGTCATTTACATATTCCCCCCCTATATATCCCAGTCTTTTATAAAGTCGTCAAAAGTTTGTTTTATTTCGGGTTTTTTCATTTCTTCATCGTCTTCAATTTGTTCTTCTCCACCCGATACTCTTAGAAATAACTTCATGTTATTTTCTCTTAGCCTTTGTGTTTCTTTTTCTTTTTCTTGCAAGGCTTCTTTATTTCTTCTTATTTCTTCCTGTAAAGATACAATAGTATCGTTTTGCTCTGTAATCTTTACTAAAGCTTCGTCAAGCTCCATATTATCACCACCTAAAAATTTAATAGAGATTTTTTAATACCCCTTTGTATATGCACAGGTCGTTCCGCAACATTCAAACGCCAATAGTGAAGGCAGGCTCTACCCCGTGCGTACCCTTCATCTATACCTATGCACATAAAAAGAGATACCTTAATTGGCATCTCTATTTTATTAAGGTACTACGTGAGCTTTATATATTAAATTTTATTTTATCTCTAATGTAATATATTCTGTCTTAAATGTTTTTGATATTTTTCCTAATACTTCAACTTCTAAACCTTCATTTTCAACTAAATTTTGTATAGCTTCTTTACCGTATTTCTCAAAGAAATCTTTAAACATATTTGTTATAGCGTTTCCACCGAAATAAAAATGATTGTTATCCTCTTTGATAGTGAATACTATTAAGTCTTTAATTTCTCCACTCATTTTATCTGTTACATTTTCCATTAAATCAACGTTTGTTATTGTAACAATTTTATCTTTCCAATCCTTAATTTTTCCACTCTCTTTATTTGCCATGAAATCAAATCCAAATTGTTGGTCTTTCTTTAATTGTTCTTTTAAGTTTAGCATTTTTACATTACCTCTTTCTTTCATTAAATATTTTTTGTATTTTACTTTCGGAAGTGTTATCCCTTCCTATGCTTTTATTATACTCTAGTCTTTTGAGTTTGTCAAGACTTTTTTACTAGAGTTTTGATAGAATTTTTTAATACATTTGTACAAGATATGTGAGTTTATATGTTTAATTTTATTTCGTAAGGTTTGCCCTTACAATTATTATTATACTAAAGTTTATAACATTTGTAAAGCATTTTCTTTAAAATTTTTATTTTTATTTTTAATATTTTTATTGACATGGTTGCACTATTATGTTACAATAATATTGTAGTTAGTTACTGGTTATTGTTTTTCATGAATTAAATACCCCTTTAAAATAGCTTCTATTGAAATTTTCTAAATGGGAATTTCATAGGAGTTATTTTTTATTGTTATATACTTAGGTTTGGAAGAAATTATTTAGAAGGAAGAAAAGAATTTACAGAGCTAATTTCT。
进一步的,上述组合物为噬菌体4YP,或噬菌体PA8,或噬菌体DYP1,或噬菌体TAP1;
进一步的,上述组合物为噬菌体4YP和噬菌体PA8的组合,或噬菌体4YP和噬菌体DYP1的组合,或噬菌体4YP和噬菌体TAP1的组合,或噬菌体PA8和噬菌体DYP1的组合,或噬菌体PA8和噬菌体TAP1组合,或噬菌体DYP1和噬菌体TAP1的组合物;
上述组合物中每种组合中各噬菌体的生物量比为1:1。
进一步的,上述组合物为噬菌体4YP、噬菌体PA8和噬菌体DYP的组合;
或噬菌体4YP、噬菌体PA8和噬菌体TAP1;
或噬菌体PA8、噬菌体DYP1和噬菌体TAP1的组合;
或噬菌体DYP1、噬菌体TAP1和噬菌体4YP的组合;
所述组合物中每种组合中各噬菌体的生物量比为1:1:1。
进一步的,上述组合物包括噬菌体4YP、噬菌体PA8、噬菌体DYP1、噬菌体TAP1;
所述组合物中噬菌体4YP、噬菌体PA8、噬菌体DYP1、噬菌体TAP1的生物量比为1:1:1:1。
进一步的,上述的噬菌体4YP、噬菌体PA8、噬菌体DYP1、噬菌体TAP1不含毒力基因或抗药性基因。
进一步的,上述的噬菌体4YP、噬菌体PA8、噬菌体DYP1、噬菌体TAP1不识别非致病性细菌;上述噬菌体4YP、噬菌体PA8、噬菌体DYP1、噬菌体TAP1不识别非宿主致病性细菌。
进一步的,上述新型产气荚膜梭菌噬菌体组合物在制备裂解产气荚膜梭菌产品中的应用。
进一步的,上述新型产气荚膜梭菌噬菌体组合物在治疗感染产气荚膜梭菌的动物中的应用。
进一步的,上述新型产气荚膜梭菌噬菌体组合物在净化养殖环境中的产气荚膜梭菌的应用。
有益效果:
使用包含噬菌体4YP、PA8、DYP1、TAP1作为活性成分的组合物来预防和治疗产气荚膜梭菌感染的方法,与基于包括常规抗生素的化学物质的常规方法相比,具有对产气荚膜梭菌特异性高的优点,可以特异性地用于预防或治疗流行性产气荚膜梭菌的感染,而不会影响其他正常菌群,因此具有较少的副作用,有效替代抗生素的使用。同时,使用从自然界中分离的噬菌体作为活性成分,对环境影响较小,有利于维护环境的良好发展。
附图说明
图1PA8与4YP的最适生长温度图。
图2PA8与4YP的最适pH值图。
图3PA8与4YP最佳感染复数图。
图4PA8与4YP一步生长曲线图
图5PA8与4YP在电镜下的形态图。
图6PA8与4YP基因组注释图。
具体实施方式
为了使本技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案,下面结合实施例对本发明作进一步说明,所描述的实施例仅是本申请一部分实施例,而不是全部,本发明不受下述实施例的限制。
实施例1产气荚膜梭噬菌体的筛选
(1)产气荚膜梭的分离
取肉鸡坏死性肠炎的内容物,用生理盐水稀释,划线接种在血平板上,取有溶血环的菌落,接种于牛奶培养基,45℃恒温培养,产生汹涌发酵的菌株,质谱鉴定得到BCP1,4度冷藏保存。
(2)产气荚膜梭噬菌体的分离纯化
样品预处理:若为粪样等固体样品,则应取适量掺于SM缓冲液中,振荡2小时后,4000rpm离心15min,用覆有双层滤纸的漏斗过滤上清液于新的容器中,滤液8000rpm、15min离心,用注射器吸取上清液后连接到0.22μm滤器将上清再次过滤到新的50ml洁净离心管中,备用。若样品为沼液或污水,可不需处理;
半固体培养基的制备:加0.6%琼脂粉到胰-亚硫酸盐-环丝氨酸液体培养基(TSC)中,加热煮沸,分装于适当大小的玻璃瓶中,121℃灭菌15min;半固体培养基冷却至45~55℃,取3ml于5ml EP管中并加入100μl菌液BCP1、100μl上述滤液,颠倒混匀后迅速倾倒于固体LB平板上摇晃铺平,超净台中冷却凝固后将培养基倒置于45℃恒温培养箱中培养4~6h,观察结果;若平板上有噬菌斑出现,则挑取单个的较为清透的噬菌斑于SM缓冲液中,静置约4h后再次纯化;重复步骤4~5以纯化噬菌斑,至双层平板上噬菌斑单一为止;
富集:将100μl菌液BCP1与100μl的噬菌体加入到液体TSC培养基中45℃过夜振荡培养,培养物经8000rpm离心15min并用0.22μm滤膜过滤,得到富集原液,备用;
保存:上述原液与等体积80%甘油混溶,-20℃保存。
(3)产气荚膜梭噬菌体全基因组测序
噬菌体富集与浓缩噬菌体富集后,将浓缩的噬菌体液体进行基因组提取。提取噬菌体基因组后,使用Miseq454平台进行全基因组测序。
二、结果
1、筛选获得4株噬菌体,分别为噬菌体4YP、噬菌体DYP1、噬菌体PA8、噬菌体TAP1。
2、噬菌体4YP、噬菌体DYP1、噬菌体PA8、噬菌体TAP1的噬菌体的DNA序列分别如SEQID NO.1-SEQ ID NO.4所示。
实施例2产气荚膜梭噬菌体的生物学性质分析
以噬菌斑大且透亮的噬菌体(PA8、4YP)为例。其余两株噬菌体与PA8、4YP这两株分析方法相同。
一、材料与方法
1、产气荚膜梭噬菌体效价测定
1)首先将新鲜宿主菌液BCP1与噬菌体原液按适当比例一同加入到TSC液体培养基中培养12h,12000r/min离心4min,用0.22μm滤器过滤;
2)取12个灭菌离心管装上灭菌水,每管900μL,用移液器吸取100μL产气荚膜梭菌噬菌体放入到第一个离心管,吹打混匀,从第一管中取100μL液体转入到第二管中,吹打混匀后吸100μL液体到第三管中,重复上述步骤,依次稀释到第12管;
3)取三个梯度(根据经验取4、7、9、管)的液体,每个梯度的噬菌体液100μL与100μL宿主菌液BCP1混匀,加入4mL 45℃左右的TSC半固体培养基颠倒混匀5次以上倒入TSC固体板中铺平,凝固后倒放于37℃温箱培养12h,每个梯度必须做3个重复;
4)挑选噬菌斑个数在30~300以内的平板进行噬菌斑计数,取三个平板的平均数,噬菌体效价=平均数×10×稀释倍数。
2、产气荚膜梭噬菌体最适生长温度测定
将噬菌体原液10倍倍比稀释到合适浓度取100μL与100μL宿主菌BCP1液混合,再加入半固体混匀后倒双层平板,凝固后分别在20℃、30℃、37℃、40℃、50℃和60℃下培养6h,每个温度三个平行,查看结果,进行噬菌斑计数。
3、产气荚膜梭噬菌体pH值稳定性测定
提前配制好pH值为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11的FTG培养基,取各个pH的FTG培养基各100μL与等体积的噬菌体液混匀,37℃温箱静置2h后取出,十倍稀释后倒双层平板测定效价,每个pH值三个平行。
4、产气荚膜梭噬菌体最佳感染复数测定
感染复数(multiplicity of infection,MOI)为噬菌体与宿主菌BCP1数量的比值。首先制备新鲜的宿主菌液,10倍倍比稀释后涂板测定菌体效价,留下108cfu/mL的宿主菌液4℃冷藏备用。将500μL噬菌体液体与宿主菌液按MOI比值为0.001、0.01、0.1、10、100、1000、10000的比例放入离心管,在振荡器上混匀后放于摇床中在40℃下以180r/min的转速厌氧振荡培养6h,12000r/min离心3min,10倍倍比稀释测定不同MOI比值的上清液中的效价,感染复数最高者即为该噬菌体的最佳MOI。每组重复三次。
5、产气荚膜梭噬菌体一步生长曲线测定
按照最佳感染复数取噬菌体原液2.5mL放入7mL无菌离心管中,再加入2.5mL的噬菌体颠倒混匀,37℃,180r/min厌氧培养30min,12000r/min离心2min弃掉上清。加入2mL灭菌去离子水重悬沉淀,混匀后再次离心重复上述步骤2次,灭菌水洗涤过两次后,可将未吸附到宿主菌上的游离噬菌体全部洗掉(动作迅速)。迅速向沉淀内加入7mL 37℃的FTG液体培养基,用移液器吹打混匀(动作应轻柔快速),然后分装于2mL灭菌离心管内,每管600ΜL的BCP1菌液,在管盖上标记好,从T0标记至T7,将T1~T7 37℃,180r/min厌氧培养,每隔20min取出一管,全部取出后,测试各管噬菌体效价,每管选取3个梯度,每个梯度重复三次。最后以时间为横坐标、噬菌体效价为纵坐标绘制其一步生长曲线。
6、产气荚膜梭噬菌体的电镜观察
将纯化好的噬菌体原液进行电镜观察。噬菌体效价应高于109cfu/mL,如果噬菌体原始效价低于标准,则应对其进行PEG浓缩沉淀。详细操作步骤如下:
1)向500mL噬菌体裂解培养物中加入29.2g固体NaCl至终浓度为1mol/L,用玻璃棒缓慢搅拌至其完全溶解后,静置于冰水浴中冰浴1h;
2)将冰浴后的噬菌体裂解培养物放于4℃离心机内,10000r/min离心10min,收集上清液,放于洁净量筒中测定上清体积;将上清转至三角瓶中,加入PEG8000至其终浓度为10%,于室温搅拌溶解PEG8000(搅拌动作应轻柔);
3)溶解完全后,将上述溶液分装于100mL离心管中并配平,冰浴1h,以使噬菌体颗粒充分沉淀;
4)于4℃,11000r/min离心10min,弃去上清,将离心管倾斜倒置5min,以使管内剩余的溶液充分流干,也可用移液器吸取残余液体;
5)用移液器吸取适量的SM缓冲液重悬噬菌体沉淀;
6)向悬液中加入等体积的氯仿,并温和震荡30s以充分混匀,3000r/min离心15min,分离有机相与亲水相,从而去除含有PEG和细胞碎片的有机相,回收含有噬菌体颗粒的亲水相;
7)用注射器取上清接上滤器过滤到灭菌的EP管中放于4℃保存。
7、噬箘体基因组注释分析
提取噬菌体基因组后,使用Miseq454平台进行全基因组测序。
二、结果
1、产气荚膜梭噬菌体效价测定
结果显示噬菌体PA8、4YP的效价均高于109pfu/mL,此结果说明这两株噬菌体活性较强,有作为噬菌体制剂的潜力。
2、最适生长温度的测定
如图1所示,产气荚膜梭菌烈性噬菌体PA8与4YP的最适生长温度均为37℃,在50℃的培养温度下,噬菌体4YP的噬菌体效价仍保持在1010以上,噬菌体PA8的效价下降至101,说明噬菌体4YP比PA8对高温的耐受能力强。
3、噬菌体对pH的稳定性
图2可知,噬菌体4YP在pH值为4.0~11.0范围内活性较高,表明噬菌体pH适应范围较广;当pH=8、9时噬菌体效价最高说明其为噬菌体4YP的最适pH,且在该pH下噬菌体裂解能力最强;而pH小于4.0或者高于9.0时,噬菌体裂解活性下降。pH=2、3时噬菌体PA8的的效价低于101,说明在该pH下噬菌体几乎全部失活,当噬菌体在pH=5、6、7显现出最高滴度(噬菌体最稳定),pH超过7时,噬菌体效价则缓慢降低。对比两株噬菌体我们可以发现噬菌体4YP比噬菌体PA8对酸碱度的耐受能力强。总体来说这两株噬菌体在pH4~8的范围内均是比较稳定的。
4、噬菌体最佳感染复数
由图3可知,噬菌体4YP的最佳感染复数为0.01,噬菌体PA8的MOI为1。
5、噬菌体4YP与PA8的一步生长曲线
如图4所示,噬菌体PA8与4YP感染宿主菌BCP1后的40min内没有效价,表明它们潜伏期约为40min,噬菌体4YP感染后50~100min内噬菌体的数量骤然上升,之后趋于平缓,说明其爆发时间为60min;噬菌体PA8感染宿主细胞后50~120min内噬菌体的数量骤然上升表明噬菌体裂解期约为80min。
6、噬菌体形态观察
电镜结果如图5,通过观察,噬菌体4YP与PA8具均具有二十面型头部与非收缩的尾巴。噬菌体4YP头部长度为50nm,尾部长度为12nm;PA8头部长度为45nm,尾部长度为28nm,两者均为短尾噬菌体。
7、噬箘体基因组注释分析
4YP、PA8的基因组注释结果如图6所示,标签上标注的为该基因预测编码的蛋白质。噬菌体PA8与噬菌体4YP基因组编码的物质相同,包括衣壳蛋白、头蛋白、衣领蛋白和尾蛋白、连接蛋白与一些酶类(DNA聚合酶、溶菌酶肽酶)以及细胞内溶素。噬菌体PA8与噬菌体4YP均不携带抗药性相关基因、毒力基因、溶原性基因及其它有害基因,表明这两株噬菌体具有开发为噬菌体产品的潜力。以上基因组信息有利于我们后续对这些噬菌体的利用以及改造。
实施例3产气荚膜梭菌感染与噬菌体治疗效果
AA雏鸡饲养到10日龄,选择健康AA肉鸡40只,笼养,分2组,每组20只,每笼4只,自由饮食,环境舒适。
培养产气荚膜梭菌BCP1菌液108cfu/mL,用移液器取1、2、3、4mL插入1组肉鸡食管注入,结果表明3mL可导致1组半数致死。
同样方法用3mL的BCP1攻毒2组,2小时后用移液器取2mL的PA8噬菌体109pfu/mL,食管灌服,连续观察7天,每天死亡数分别为2、2、0、1、0、0、0只,累计死亡率25%。表明噬菌体针对性治疗有确切疗效。
由于临床分离菌株的不确定性、筛选噬菌体的难度和时效性,所以需要筛选多株噬菌体,建立噬菌体库,筛选噬菌体组成鸡尾酒疗法。
SEQUENCE LISTING
<110> 山东省农业科学院畜牧兽医研究所
<120> 一种新型产气荚膜梭菌噬菌体组合物及其应用
<130> 2019
<160> 4
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 16915
<212> DNA
<213> DNA序列
<400> 1
taaataaaat aatccttata gatagtttac cgggcgtaaa tgtaattaag agtgggtata 60
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tctccaattg cactttggtt attagcaata ttttgcttaa tctctgtgag tatttgttcg 7020
gaaataagtt cggttaaagt tccgtcatct ttccattgac ctaataatgt gataacttct 7080
tcctttaaac ctacctcatg aagccattca agtaaattca atgatttatt acttgcttct 7140
atacactcat ttattttagt aaaaaatctg catagtaatt catttaagct catacaatcg 7200
tcaaagtcat aagagttgaa tacactacaa tttaaatccc atttgtttaa cttatttatc 7260
attttatttt ccacctttcg tgttcttaaa gaataaatta atttggttga ataagtattt 7320
agtttccgga ttattgaaat atatatatcc tagcttatta ttaagttcaa gctctttaat 7380
tgtataagga ttaagttgag taatatgttt attgttacct ttttgatatt caaagtcaaa 7440
aaagtattcc tgggttaatc ctttagtagc gttatcaaca taataatatg acacttcttt 7500
tccttgacat tcccatatag tgattacttt gtctttgtcc accctaactc taaatttaag 7560
tttcaattta ttagtttctt taagctcttt tttattaaca caattaaaag tatcatttga 7620
aatattttca ttatcaatgt tatatttagc cgtccccgtt atctccatta atcgaccaag 7680
tttagttttt cttacagctt ttttaaattc attacttgat tgagcttttt gaattacggc 7740
tacatcatta cttgtatatc cctcttcttt taaagttgga tagagtttaa gagcgtcaaa 7800
tatgggtgaa tagtaccctg tattgttacc aacacaaaat acttttatcc tatcttcaaa 7860
tctatcgaca gttgccaaga aactctctaa cttttggtat tctcttttta ctttatgctc 7920
cccgggctct ggcattattt cctcaaagac tatgttcata acttttccat atgaaccacc 7980
acgcccaact ccactaccat ttaaggctag gaaggtacaa aatagtttac cgtcaatata 8040
cattttatta tgaactcttt taaatgtata tccttcgtaa gctccactct caaggagctt 8100
atcgaaatat gtttcttgca tttcgtcggc ttgagttttt aatcttctaa gtacaacgct 8160
ttgcgctcca aactctaaaa aatcatctat catctttttc tgtaagctcc acgacttacc 8220
atatccccta ccacttatta taatataaat taacttatac gggtatttct caagtagctc 8280
atttatctca aaatatttca atttattcaa tcctccttaa tatctctgta aaaataaatc 8340
atatcctcca tctattactt tactaattaa tgaataagtt acctcaatcc aacctttctt 8400
taagtctgac gcacttgtta cgcctatgtt acccacccca tgagttacaa cattctccgt 8460
aaataattta tccctgtttg aattatccga actattggta ttagttgaat tatttccatt 8520
tgttgagttg ctagacccta aattttctga tatagtttcc tttgtattat cagttaatcc 8580
actctcaaaa cctaagttag ccataccgtc atttacacta gaatttaaag tatctgtagt 8640
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attaataatt tcctcttttt ccttctctgt tatatcccta gttaacgtct ctgtatattc 8760
tttattgttc ataaagtcaa tggctttagt tcttaattca atttcccata gttgtttaaa 8820
ataatcgtta ttttcttcta ggtaagattg aagtctaaat ttaaactctc caatggttgg 8880
aaatccaatt tgcctaaaag cgtatctttt tataaagagt ttttcaaatt ggggttttaa 8940
atcctcatta aagaatgggt aatcaaaatt aaaaaggtta tctatatgcc taagttctaa 9000
attatattta taaaatgtca tcaccaatca cctcacttct taatgattta aaaaattgtt 9060
ctaagtattc catatttaga acacatttta cttcgggata tattttctgc aattcaacca 9120
tagcgtctaa tctacctttt gctctgatac taaggtttaa attaacaaat tcctcattcc 9180
cattaacctc atctgttatt aatctctctt tcttttccat gttaacatta cttacaccta 9240
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cacaaacttt atttatattt cttttctttc ccatgcttcc aacctcttct ctatacctgt 9900
taatgttact tttaaatcgg ttatagtttc agttagtttt tgattttggt tgaacatgaa 9960
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tttagagcat cttctttact ggtaaatgcg taaactctga tttgccacct tttttgtttt 10140
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caactgtact aactaatgat tttaaagaca tgtttttatt catagcgttg accattcttg 11100
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tttcttgtat attttttgag ttttgtaata atgtgcttcg tgtcctagag ataaaatttg 11340
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cacccgaact atctgttaat attcctaaag gtacggtact agcaattacg accgtatctg 13080
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ttggtaattg agtttcagta gccgtaaata tcttacagtt taaaaatggt actataccaa 14520
ctaaaccgtg gaaatgtaag aagtagtttt tagctaatgc gttcgggttc tcaatttctc 14580
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attaaatcaa cgtttgttat tgtaacaatt ttatctttcc aatccttaat ttttccactc 16380
tctttatttg ccatgaaatc aaatccaaat tgttggtctt tctttaattg ttcttttaag 16440
tttagcattt ttacattacc tctttctttc attaaatatt ttttgtattt tactttcgga 16500
agtgttatcc cttcctatgc ttttattata ctctagtctt ttgagtttgt caagactttt 16560
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ctttaaaatt tttatttttt atttttaata tttttattga catggttgca ctattatgtt 16740
acaataatat tgtagttagt tactggttat tgtttttcat gaattaaata cccctttaaa 16800
atagcttcta ttgaaatttt ctaattggga atttcatagg agttattttt tattgttata 16860
taaattctta gaattaactc ttatgttagt tccatcaaag ttagctgatt caaat 16915
<210> 2
<211> 16265
<212> DNA
<213> DNA序列
<400> 2
actggagttc agacgtgtgc tcttccgatc tgggtatata acaataaaaa ataaccccta 60
accaattccc atttacagaa attggattaa gggtcatctt tagaaaggag gtgtacatca 120
tactaagatt taatttacaa tataattata acatagcatt ataattatgt caatgggaaa 180
ataaaaataa ttttttaaaa aagggtattg acaaggggtg gttataaatg tataataaag 240
ttaataaatg aattaatgaa acaatggaga gtgattaata atgaaaagag ttttcgaaac 300
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tatcgtaaca ttaaagatgt tatgtgagga gaagaaaaat attaaattaa gacttgaaag 420
gttaattgag gaaaaaagac aaaaaggtat aacatcaatc aatgtatatt ttaaaaatgg 480
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gaaaatagat tatagattag ttgattgggt atcataaaat atattgaatt ggttggtgat 660
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tcatacaaaa gtaattctat tacatatatg gtatttcaag gttacgaata cgacatagca 960
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gtagtattag aaggtgaaca tattacaaag gagcaattaa aggagctatt aaaaactact 4320
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ctatcacgga agaacacgaa gattattttg ttataaaagt taataataaa tttcctcatt 4560
actttttcaa ggaagattta gaaatcattt ataaaatgac ttatgaaaga tagatggaat 4620
agggggttaa tagaatggaa aagaaaacca tatatttgaa agttgatata attggagggg 4680
aaaaggattt attagaaaat cccatggaat atttaagtgt tgattttgac ggtgattacg 4740
cttatttaga ttatgaaata ataaaagaaa aagtagaaga ataataaaac aagttaactt 4800
tagggatagg tgaaatacta tgaaaggttt tatttacagt ttattattta tgttttcaat 4860
aggtggtggg gtcttaatgg ctctaccaac taatgagata gaaccacaac caataaaaga 4920
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atttttatta aaatcatatg aaagttctag cgaagctttc gataaattgc atttaaatga 5040
cgttaataaa ctagatgacc aaatcgcctt agagtaccta gaagaatata attactggaa 5100
tgatgaactt aatcaattaa tgacactatt taaaaagaat ctatcatatg aagattataa 5160
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gaaagtttct tcggaataat tattattaaa aacaattgac ccaccagtga agtttgcccc 6060
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atgacgtccg ttttgatata accaagttct attgtcaact atagttgcaa tcaacccata 6360
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tgtataatcc catgtcataa aaggtatttc aggtgtaccc acacccacaa catataaacc 6660
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ttcaagtaaa ttcaatgatt tattacttgc ttctatacac tcatttattt tagtaaaaaa 7260
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acaatttaaa tcccatttgt ttaatttatt tatcatttat ttttcacctt tcgtattctt 7380
gaagaataaa ttaatttggt tgaataagta tttagtttcc ggattattga aataaatata 7440
acctagctta ttattaacct caagttcctt aatagtataa ggattaagtt gagtaatatg 7500
tttattgtta cctttttgat attcaaagtc aaagaagtat tcttgagtta atcctttagt 7560
agcattatca acataataat atgacacttc ttttccttga cattcccata tagtgattac 7620
tttgtctttg tcaaccctaa ctctaaattt aagtttcaat ttattagttt ctttaagctc 7680
ttttttatta acacaattaa aagtatcatt tgaaatattt tcattatcaa tgttatattt 7740
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ttcattactt gattgagctt tttgaattac ggctacatca ttacttgtat atccctcttc 7860
ttttaaagtt gggtataatt taagtgcttc aaatataggt gaatagtacc ctgtattgtt 7920
accaacacaa aatactttta tcctatcttc aaatctatcg acagttgcca agaaactctc 7980
taacttttgg tattctcttt ttactttatg ctcccccggc tctggcatta tttcctcaac 8040
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tagaaaggta caaaatagtt taccgtcaat atacatttta ttatgaactc ttttaaaagt 8160
gtatccgtca tatgctccac tctcaaggag cttatcgaaa tatgtttctt gcatttcgtc 8220
ggcttgagtt tttaatcttc taagtacaac gctttgcgct ccatactcta aaaaatcatc 8280
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caatcctcct taatatctct gtaaaaataa atcataccct ccgtcaatta ctttgctaat 8460
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tagttgggtc gccataaata tttagttccc cactattaga gattggtaaa caaatcattc 9780
ctaagttttc atcattataa aaaccaactt gaccatgttc gaataaaaaa ttttctatat 9840
gcctactttc tattccattc ggtagtccct cccatttaaa gacatttgtt gctagatttt 9900
tgtacagtag gaagagcaac gctctcctat ctgcacaaac tttgtttata tttcttttct 9960
ttcccaagct tctaacctct tttctatacc tgataatgtt acttttaaat ctgttatagt 10020
ttcagttagt ttttgatttt ggttgaacat gaataaacac gcaactatag gaaatccaat 10080
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atttatctaa atatacgttt ggaattgatg atgttaaaat attaacttct ttagttttaa 10920
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tactaatacc atttacacca ccacttaaaa ttgatgtatc tctagccgtt tcataattat 11340
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tacctttaca atattgtggc ttaatattga atggttcatt aataccatca aataaagtta 11640
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ctaactttgt aattgaagcg atgtcgctta atttagaacc ttttaatact ttaatctcat 14100
tatcattcat atactttgtg agtgagttta aaaatgcttt tcttctttgt aataataatg 14160
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cttcgtagcc ttgagaataa tggttgtcat aaaatagatc attagccact ttattaagca 14460
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tacaatttaa gaacggtact atacctacta aaccgtggaa atgtaagaag taatttttcg 14640
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ttaataaaat agagatacct taattggcat ctctatttta ttaaggtact acgtgagctt 16260
tatat 16265
<210> 3
<211> 17026
<212> DNA
<213> DNA序列
<400> 3
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aaataacccc taaccaattc ccatttacag aaattggatt aagggtcatc tttagaaagg 120
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gtcaatggga aaataaaaat aattttttaa aaaagggtat tgacaagggg tggttataaa 240
tgtataataa agttaataaa tgaattaatg aaacaatgga gagtgattaa taatgaaaag 300
agttttcgaa actgcacacg cattaactag acaatttata tctacttacg gtggagatta 360
taggggtcaa tttatcgtaa cattaaagat gttatgtgag gagaagaaaa atattaaatt 420
aagacttgaa aggttaattg aggaaaaaag acaaaaaggt ataacatcaa tcaatgtata 480
ttttaaaaat ggtgtatcac ttttcggtga tgttgcttgt atagatgtta acaacaataa 540
ttttattttt agagattttt taaaggaaaa atatattaaa acaactagaa gaacatcatt 600
ccatagttta atgaaaatag attatagatt agttgattgg gtatcataaa atatattgaa 660
ttggttggtg atagagcatg agaaaaatat ttcagggtat attattatgt gtggcgtttg 720
ttttaagcgc catatcattc ctatatttat acaacaatac tttaaaaagt acattatttt 780
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ttcagaaata gagttcatag atgatgaaat aactttcgga gaattaaaaa ctggtaaggt 2760
attattatat aaagccgaaa aaggactttt aagagagtat atagaagaat tatacttgat 2820
gaaagatgaa gtaaaaagaa gaataaacaa aggtgaaaaa ggacttgacg ctctttattc 2880
atcaataaaa gttcttttaa attcattgta tggcaaattt ggttcaaagg ttagaaaaac 2940
acttgacaac ttatttttaa atgatgaggg tattttcgca tgggatatag gttgcaaaaa 3000
agagttacgt caaaatgaaa acgaacttga tttactagaa tatgatagtg aagaatatta 3060
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tgaagcaata ggagttaaaa atttcttata tactgataca gacagcattt attgctctct 3180
aactaaggaa caattaatta aagctcttaa aaagattaat tatgagcttg acgggtacga 3240
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gtatatgctt tatgatacta aatcagaaaa aatatgtgta gcgtgtgcag gtgtacctaa 3360
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cgaagggaaa ttacaaagta aacaagttaa ggggggtacg cttttaacta acatagattt 3480
tgtaatccaa gatacgactt atatacctca ttaaaaattt ttaaataggg gttgtaatgc 3540
cccctatata atgttataat aaagacatga aaggggaata aataaaatgg ctaaaagaac 3600
aacaaaacaa caatttatga aaaaatggga caaggctgtt aaaaataaca gttatatatt 3660
cttacaagat aaggacaata tgaaaaaggc acaaaaatat tttggtttat ctaacgaata 3720
tgtatccata gttggtaaca aggcaaaggc taattatcaa atagataata aaaagaaaat 3780
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tgtacgctca agcgtaaaca aagctatcca aactgaattt tttaatatca tatctaacat 3960
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taaagaattt aaaaagaagg ttttagaagc tattcaaaaa tcggacaagc cttttgagtt 4080
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ccctgtattg ttaccaacac aaaatacttt tatcctatct tcaaatctat cgacagttgc 7980
caagaaactc tctaactttt ggtattctct ttttacttta tgctcccccg gctctggcat 8040
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tattataata taaattaact tatccgggta tttctcaagt agctcattta tctcaaaata 8400
tttcaattta ttcaatcctc cttaatatct ctgtaaaaat aaatcatacc ctccgtcaat 8460
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ttctaggtaa gattgaagtc taaatttaaa ctctccaatg gttggaaatc caatttgcct 9000
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tgggtaatca aaattaaaaa ggttatctat atgcctaagt tctaaattat atttataaaa 9120
tgtcatcacc aatcacctca cttcttaatg atttaaaaaa ttgttctaag tattctatat 9180
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cttttgctct gatactaaga tttaaattaa caaactcctc atttccgtta acctcatctg 9300
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cactttcacg gcttctctct tcggctctta gtttatccac tagatattca acattagccg 9420
ttaacagttt taaaccgtca aaaccatctt cccctaaagt cttatctatt attacaacat 9480
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caatagcgaa ataaggcttt acttgttttc ttaaatttgc tcttattgcc gtctcaatat 9600
caagcatttc ttgaacatag taattaacat ataacttagt tggtactagg ttcggattat 9660
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acatataaaa tttagttggg tcgccataaa tatttagttc cccactatta gagattggta 9780
aacaaatcat tcctaagttt tcatcattat aaaaaccaac ttgaccatgt tcgaataaaa 9840
aattttctat atgcctactt tctattccat tcggtagtcc ctcccattta aagacatttg 9900
ttgctagatt tttgtacagt aggaagagca acgctctcct atctgcacaa actttgttta 9960
tatttctttt ctttcccaag cttctaacct cttttctata cctgataatg ttacttttaa 10020
atctgttata gtttcagtta gtttttgatt ttggttgaac atgaataaac acgcaactat 10080
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<210> 4
<211> 16993
<212> DNA
<213> DNA序列
<400> 4
tacagatgag gatataacaa taaaaaataa cccctaacca attcccattt acagaaattg 60
gattaagggt catctttaga aaggaggtgt acatcatact aagatttaat ttacaatata 120
attataacat agcattataa ttatgtcaat gggaaaataa aaataatttt ttaaaaaagg 180
gtattgacaa ggggtggtta taaatgtata ataaagttaa taaatgaatt aatgaaacaa 240
tggagagtga ttaataatga aaagagtttt cgaaactgca cacgcattaa ctagacaatt 300
tatatctact tacggtggag attatagggg tcaatttatc gtaacattaa agatgttatg 360
tgaggagaag aaaaatatta aattaagact tgaaaggtta attaaggaaa aaagacaaaa 420
aggtataaca tcaatcaatg tatattttaa aaatggtgta tcacttttcg gtgatgttgc 480
ttgtatagat gttaacaaca ataattttat ttttagagat tttttaaagg aaaaatatat 540
taaaacaact agaagaacat cattccatag tttaatgaaa atagattata gactagttga 600
ttgggtatca taaaatatat tgaattggtt ggtgatagag tatgagaaaa atatttcaag 660
gtatattatt atgtgtggcg tttgttttaa gcgccatatc attcctatat ttatacaaca 720
atactttaaa aagtacatta ttttttttat tgttagtatt agcaataata attttattaa 780
gtaatatttt atatgattag gagtgataaa atgaagctta aagagtttat tgaaaatttt 840
tgttataaag atacagatat taaaatccgg ggaatatcat acaaaagtaa ttctattaca 900
tatatggtat ttcaaggtta cgaatacgac atagcaagtg aaacggaagt atttagtata 960
atagaggatt taaatgtaat aggcgtgaaa gttgataagg attatctaat aatagtaata 1020
aatgatatga tttaatttta aaatggcact tgaaaagtgc ttttttttat tgtataataa 1080
aattaacaag tgaaagggga taaatatcat gaaatatcaa gtagctaaat taaacgtaat 1140
aaatgaagaa cactacaaca ttataaaaga aaaatgtttt accgaattat ctgaaatacc 1200
gttaacaaat cactacgtat tagatacaga aacatgccga acaaataaag caatgctttt 1260
agatacaaac atggagcaag aagtaaaaac ctacgccgtg ggtgtaatga gtgtagggga 1320
taaaaataat aatatgtttg tatgtgaaac atgggaaatg tttttcgaaa acatctataa 1380
aactgtacaa actaacttaa atttttatct aaagaacaac caaaagagag ataaaaagaa 1440
tttagacata accattaagg ttggagttca taacgtaaaa tacgaaaata gtttcatgca 1500
atatgtttta aataatttag gttatgtata ttctaccggt gtaatagcgt acaacgataa 1560
aaaaggttgc tccttcaata aggttatgtt agatactggg tgttataata taactcaagc 1620
taacggcgta cactatggct ctaaggtgtg cttaaaagat actatcataa atcaaaagat 1680
aatatctaaa gggaaaaaca aagggaaatt agttgagcag gaaataaaaa tctatttaga 1740
attttgggat acgctaaagg ttgcacaaac tagcctagaa aaagctcata aattcgttga 1800
aatggacgaa atgtattata aacttaatga agaatatgat tacgacaaag ttaggtctaa 1860
tggtcatatt ttagacgctt tagagcttga gtatctatat aacgatttat acgcaactaa 1920
gaaattagtt gaggattttt attacaacac tcttttaact tttaaaggta aggagaaaac 1980
tatttattta aatgataatc ttaaaacatc tgcggcaata gcttttaata cggcaatagc 2040
ttatactttc agtaatggcg aaagtgaaat tacaaatatt aagggttcta gggaactatt 2100
taacgaacac tttgaaatag ataaaagaat tggtttaaaa caagaaataa aagatatgga 2160
gcgtctatcg taccgtggtg ggtggacgca cgcaaaccta aaacatataa ataacatagt 2220
agagaaaaat ggtacttcta ttgataaaaa ttcaagttat ccggctcaga tgtgtttcgg 2280
tttattaccg tatggagcac caatagaatt taatagtatt gaggatatga gagaatatat 2340
gaaggaaaat aatcttgcaa tggataatca tgtttttata ataaatactg gttttgatta 2400
tgtaaggcca aaatgtgaaa aatatgattt agaagtcatt caattagggt cagtaaatgc 2460
aactatggaa tttaagaaaa tggcttttaa acatgaggga aaagtagtac aaaatggtaa 2520
tacatttata aatagaaact attgggacga agataacaaa atacaaatat ataaaaaagg 2580
ttgtgaggaa attgcaaact ataattttac aataacaaac gttgaatatg attttttaag 2640
taaatattat gagttcggtt atcattcaga aatagagttc atagatgatg aaataacttt 2700
cggagaatta aaaactggta aggtattatt atataaagcc gaaaaaggac ttttaagaga 2760
gtatatagaa gaattatact tgatgaaaga tgaagtaaaa agaagaataa acaaaggtga 2820
aaaaggactt gacgctcttt attcatcaat aaaagttctt ttaaattcat tgtatggcaa 2880
atttggttca aaggttagaa aaacacttga caacttattt ttaaatgatg agggtatttt 2940
cgcatgggat ataggttgca aaaaagagtt acgtcaaaat gaaaacgaac ttgatttact 3000
agaatatgat agtgaagaat attacgtgcc tttcgcttcc tttgttacgg cttacgctag 3060
agttgaaatt caaaccattg taattgaagc aataggagtt aaaaatttct tatatactga 3120
tacagacagc atttattgct ctctaactaa ggaacaatta attaaagctc ttaaaaagat 3180
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atttaaatct ctaggagcta aaaagtatat gctttatgat actaaatcag aaaaaatatg 3300
tgtagcgtgt gcaggtgtac ctaaaaaagc tcaatctata ctagcgaaac aaggatttaa 3360
tgaattttat ctgggtaaag ctatcgaagg gaaattacaa agtaaacaag ttaagggggg 3420
tacgctttta actaacatag attttgtaat ccaagatacg acttatatac ctcattaaaa 3480
atttttaaat aggggttgta atgcccccta tataatgtta taataaagac atgaaagggg 3540
aataaataaa atggctaaaa gaacaacaaa acaacaattt atgaaaaaat gggacaaggc 3600
tgttaaaaat aacagttata tattcttaca agataaggac aatatgaaaa aggcacaaaa 3660
atattttggt ttatctaacg aatatgtatc catagttggt aacaaggcaa aggctaatta 3720
tcaaatagat aataaaaaga aaatcgttaa tgagagaaaa acaaaattaa gagatagctt 3780
attacaagat ggtacagttg ataaaacaga tattaaaaag ataatcaaca acgatagact 3840
ttataagaag ctaaatacta gaaatgtacg ctcaagcgta aacaaagcta tccaaactga 3900
attttttaat atcatatcta acataggact ttttaaagat aatggagcat ttagaagggc 3960
gttaaaagga aatgacacgc caattaaaga atttaaaaag aaggttttag aagctattca 4020
aaaatcggac aagccttttg agttattact ttcttttagt gaaagaatag ataaggcttt 4080
tgagttaata tatgaagcat atcccgaagg tgctttaaat tctgtacaag gaagtagagt 4140
agttaataaa tttattgata taattgagac tgaaatgtta aggagtgtat aataatgaaa 4200
ataataaaag caactaaaaa tggaaaatca aagcacgtag tattagaagg tgaacatatt 4260
acaaaggagc aattaaagga gctattaaaa actactaatg gtgtaagatt ttcttatttt 4320
ggctctgaat atagaaactt tcaagaaatt aaagatatga tagaaatcac tatcggatta 4380
aaagagaatt atattttaat aactaagaga aggggagtaa aattctaatg ggtgaatatt 4440
gtaaattcaa atttaaaggt gaaatatact acggtactat cacggaagaa cacgaagatt 4500
attttgttat aaaagttaat aataaatttc ctcattactt tttcaaggaa gatttagaaa 4560
tcatttataa aatgacttat gaaagataga tggaataggg ggttaataga atggaaaaga 4620
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tggaatattt aagtgttgat tttgacggtg attacgctta tttagattat gaaataataa 4740
aagaaaaagt agaagaataa taaaacaagt taactttagg gataggtgaa atactatgaa 4800
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accaactaat gagatagaac cacaaccaat aaaagaaact ataacagttg aaaaggagct 4920
tgatgaaatg gagaatgaat taacactcac aaaggaattt ttattaaaat catatgaaag 4980
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tattctatta gttggtgttt ctaagtaaag taaaccgaaa gtttcttcgg aataattatt 6000
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tatttcaggt gtacccacac ccacaacata taaaccttta gtatttaaac tttgagttac 6660
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ttgtttaaaa taatcgttat tttcttctag gtaagattga agtctaaatt taaactctcc 8940
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cggttttaaa tcctcattaa agaatgggta atcaaaatta aaaaggttat ctatatgcct 9060
aagttctaaa ttatatttat aaaatgtcat caccaatcac ctcacttctt aatgatttaa 9120
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attccaccat tgcgtctaat ctaccttttg ctctgatact aagatttaaa ttaacaaact 9240
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taaattcgta tatattctta aaatatatat cacactctgc tttccttcta gcttttaatc 12600
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tgtcataaaa tagatcatta gccactttat taagcatggc ttttattact tcgtttgttt 14460
caacgggaac ggaataaccg tcccctaata gttcccttac tttcattttc tacccctcca 14520
attttggtaa ttgttgttca gtagccgtaa atatcttaca atttaagaac ggtactatac 14580
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ctctcatttc taataatgaa ggttttaatt gtaatagctt agcgtccatt aatagagcta 14700
ttggtttatc atttacgtaa ctagttgttc ctgtaccgct cttaattaca tttacatcag 14760
gtaaactatc tataaggatt attttattta atatttttac tctatcctca ttgtaagttt 14820
tcgctaagta gttatctata tgtccatata cttgaggagt agtaactatt actgtatcac 14880
tcataggact aaattgcatt acaccggcac tattatattt atcactctca aattcaaatt 14940
gttccccgta aattctgata tttaaaagta agttttcaat aagttcctta gtagttgcac 15000
ctgtaacctt tgttacttga gtgtcttgta taaattgagt aggtgtatca cttgtaccca 15060
ttccggcatc ttttgcggat ataccactca tatactttgt aagcatatct ttcagtaatt 15120
tatactctaa tctataaaga cctcttgtat tcttagtcat taattgactt atcatatcac 15180
ctagaccgta ttcacttgta aacgctcttc ttaaatcaaa gtctttaata gtagtcttaa 15240
atttcttttc aaagttgata gataaatagt ttgcgtaaac cttgttatca actaacttga 15300
atatatcatc acattcagta gacccaccgt caaagtgttc agaataatca acggcatcag 15360
atgcatctac atataaatcc tctatagtgt aaccataagt gatattacca tcaacaaaca 15420
tctttaaagg gttttcccat gctttactcc aaaatctgct cataaatacc ttattaacta 15480
atgcacctat gaaagcgttt tttaatacac tatatccgaa taacttcgtt gatattgccc 15540
tactcttttg gtcgtttgtc attgtttggt cgtctaatat tggctgtaat tcttctttaa 15600
gctctccccc aacatcgtta actaatgctt gagtaacttc gacattcgtt ttctttccag 15660
ttgtcattta catattcccc ccctatatat cccagtcttt tataaagtcg tcaaaagttt 15720
gttttatttc gggttttttc atttcttcat cgtcttcaat ttgttcttct ccacccgata 15780
ctcttagaaa taacttcatg ttattttctc ttagcctttg tgtttctttt tctttttctt 15840
gcaaggcttc tttatttctt cttatttctt cctgtaaaga tacaatagta tcgttttgct 15900
ctgtaatctt tactaaagct tcgtcaagct ccatattatc accacctaaa aatttaatag 15960
agatttttta ataccccttt gtatatgcac aggtcgttcc gcaacattca aacgccaata 16020
gtgaaggcag gctctacccc gtgcgtaccc ttcatctata cctatgcaca taaaaagaga 16080
taccttaatt ggcatctcta ttttattaag gtactacgtg agctttatat attaaatttt 16140
attttatctc taatgtaata tattctgtct taaatgtttt tgatattttt cctaatactt 16200
caacttctaa accttcattt tcaactaaat tttgtatagc ttctttaccg tatttctcaa 16260
agaaatcttt aaacatattt gttatagcgt ttccaccgaa ataaaaatga ttgttatcct 16320
ctttgatagt gaatactatt aagtctttaa tttctccact cattttatct gttacatttt 16380
ccattaaatc aacgtttgtt attgtaacaa ttttatcttt ccaatcctta atttttccac 16440
tctctttatt tgccatgaaa tcaaatccaa attgttggtc tttctttaat tgttctttta 16500
agtttagcat ttttacatta cctctttctt tcattaaata ttttttgtat tttactttcg 16560
gaagtgttat cccttcctat gcttttatta tactctagtc ttttgagttt gtcaagactt 16620
ttttactaga gttttgatag aattttttaa tacatttgta caagatatgt gagtttatat 16680
gtttaatttt atttcgtaag gtttgccctt acaattatta ttatactaaa gtttataaca 16740
tttgtaaagc attttcttta aaatttttat ttttattttt aatattttta ttgacatggt 16800
tgcactatta tgttacaata atattgtagt tagttactgg ttattgtttt tcatgaatta 16860
aatacccctt taaaatagct tctattgaaa ttttctaaat gggaatttca taggagttat 16920
tttttattgt tatatactta ggtttggaag aaattattta gaaggaagaa aagaatttac 16980
agagctaatt tct 16993
Claims (5)
1.一种新型产气荚膜梭菌噬菌体组合物,其特征在于,所述组合物为噬菌体4YP和噬菌体PA8中的任意1种或2种的组合;
所述噬菌体4YP、噬菌体PA8的DNA序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示。
2.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述组合物为噬菌体4YP和噬菌体PA8 的组合;所述组合物中每种组合中的各噬菌体的生物量比为1:1。
3.如权利要求1或2所述的新型产气荚膜梭菌噬菌体组合物在制备裂解产气荚膜梭菌产品中的应用。
4.如权利要求1或2所述的新型产气荚膜梭菌噬菌体组合物在净化养殖环境中的产气荚膜梭菌的应用。
5.噬菌体PA8在制备治疗感染产气荚膜梭菌的动物的药物中的应用,所述噬菌体PA8的DNA序列如SEQ ID NO.3所示。
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