CN110719784A - 治疗性噬菌体组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种噬菌体组合物，其包含选自Sa87、J‑Sa36，或Sa83，或其突变体的一种或更多种(合适地两种或更多种，或三种)噬菌体。还包括所述噬菌体组合物用于医疗或非医疗应用的用途，以及包含所述噬菌体组合物的试剂盒、绷带和伤口敷料。
Description
技术领域
本发明涉及噬菌体的组合物，以及其在医疗和非医疗应用中的用途。
背景技术
近年来，抗菌剂(通常以小分子(化学)抗生素的形式(诸如青霉素或四环素))的广泛使用，已导致耐抗生素细菌菌株的大量增加。赋予抗生素抗性的突变或编码抗生素抗性酶的基因(诸如青霉素酶)，在全世界的致病细菌中变得越来越普遍。例如，耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(MRSA)细菌是一种越来越常见的感染形式，通常在临床环境中进行手术或其他侵入性治疗后发生。MRSA感染极难用常规抗生素治疗。
由于表现出对抗菌剂(特别是所谓的最后抗生素(例如甲氧西林、万古霉素等))抗性的病原菌的流行性增加，因此需要替代的抗菌剂和治疗策略。
噬菌体是能够感染特定细菌种或菌株的靶向治疗剂。通过病毒结构元件(诸如尾纤维)促进噬菌体-靶标结合。然后将通常包裹在噬菌体头内的病毒核酸(通常通过尾部)注射到细菌靶细胞中。在专性裂解性噬菌体的情况下，注射的病毒核酸利用细菌的细胞内机制指导噬菌体后代的产生。在细胞周期结束时通过裂解杀死宿主细胞，同时释放病毒后代。
发明内容
在一个方面，本发明提供了一种噬菌体组合物，其包含选自Sa87、J-Sa36、Sa83或其突变体的一种或更多种噬菌体。所述噬菌体组合物是常规抗菌剂/治疗剂的替代物，并且克服了与其相关的一个或更多个问题。
本发明的噬菌体组合物特别有利于用于医疗中，并显示出治疗金黄色葡萄球菌感染的临床功效。例如，令人惊讶地发现所述噬菌体组合物特别适合于治疗金黄色葡萄球菌肺部感染。另外地，本发明的噬菌体组合物对广谱的金黄色葡萄球菌菌株有效。
例如，当与包含Sa87、J-Sa36、Sa83和J-Sa37(或基本上由Sa87、J-Sa36、Sa83和J-Sa37组成)，可选地进一步包括其一种或更多种突变体的组合物比较时，包含Sa87、J-Sa36和Sa83(或基本上由Sa87、J-Sa36和Sa83组成，可选地进一步包括其一种或更多种突变体的噬菌体组合物令人惊讶地表现出降低的噬菌体拮抗作用和/或减少金黄色葡萄球菌靶细菌的抗性发展。
噬菌体Sa87、J-Sa36和Sa83于2017年2月9日以ECACC登录号17020901(Sa87)、17020903(J-Sa36)和17020902(Sa83)保藏于ECACC，培养物收藏单位，英国公共卫生部门，波顿唐，索尔兹伯里，威尔特郡，SP4 0JG，英国。所有这些保藏都是根据国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约的规定进行的。
在一个实施方案中，噬菌体组合物包含选自Sa87、J-Sa36、Sa83或其突变体的至少两种噬菌体。包含至少两种噬菌体的噬菌体组合物在本文中可称为噬菌体的“组”。在一个实施方案中，噬菌体组合物包含Sa87、J-Sa36、Sa83或其突变体。合适地，噬菌体组合物可包含Sa87、J-Sa36和Sa83。在一个实施方案中，噬菌体组合物基本上由Sa87、J-Sa36和Sa83或其突变体组成。合适地，噬菌体组合物基本上由Sa87、J-Sa36和Sa83组成。
本文所用的术语“基本上由......组成”是指在噬菌体组合物中仅存在明确指出的噬菌体，但所述组合物还可含有进一步的非噬菌体成分，诸如适当的载体、稀释剂等。
如本文所用的术语“突变体”是指通过一个或更多个核苷酸与Sa87、J-Sa36或Sa83在基因上不同但仍保留感染和裂解金黄色葡萄球菌靶细菌的能力的噬菌体。在一个实施方案中(可选地或另外地)，如Sa87、J-Sa36和/或Sa83，“突变体”噬菌体能够裂解相同的靶细菌菌株，并且进一步能够裂解一种或更多种另外的细菌菌株。在一个实施方案中，当与Sa87、J-Sa36或Sa83相比时，突变体在其整个基因组中可具有至少75％、80％、85％、90％、95％或99％的序列一致性。
在一个实施方案中，“突变体”可以是噬菌体后代。噬菌体后代可以是在使用本发明的噬菌体(即“亲本噬菌体”)裂解金黄色葡萄球菌靶细菌后可获得的噬菌体。换句话说，噬菌体后代可以是第二代(或更后代)噬菌体。
在一个实施方案中，噬菌体后代可通过以下方式获得：使一种或更多种噬菌体Sa87、J-Sa36和/或Sa83与金黄色葡萄球菌靶细菌接触，使得一种或更多种噬菌体感染并裂解所述靶细菌；并且在裂解所述靶细菌后获得已释放的噬菌体。当与相关亲本噬菌体相比时，所述噬菌体后代通常包含一个或更多个核苷酸突变。
如本文所用的术语“可获得的(obtainable)”还包括术语“获得的(obtained)”。在一个实施方案中，术语“可获得的”是指获得的。
可以使用多种序列比对方法中的任何一种来确定一致性百分比，包括但不限于全局方法、局部方法和杂交方法，诸如分段法(segment approach methods)。确定百分比一致性的方案是本领域技术人员范围内的常规程序。全局方法从分子的开始到结束比对序列，并通过将各个核苷酸对的数量相加以及通过施加空位罚分来确定最佳比对。非限制性方法包括例如CLUSTAL W，参见例如Julie D.Thompson et al.,CLUSTAL W:Improving theSensitivity of Progressive Multiple Sequence Alignment Through SequenceWeighting,Position-Specific Gap Penalties and Weight Matrix Choice,22(22)Nucleic Acids Research 4673-4680(1994)；和迭代细化。非限制性方法包括例如BLAST、Match-box，参见例如Align-M,see,e.g.,Ivo Van WaIIe et al.,Align-M-A NewAlgorithm for Multiple Alignment of Highly Divergent Sequences,20(9)Bioinformatics:1428-1435(2004)。
本发明的噬菌体组合物靶向一种或更多种金黄色葡萄球菌菌株。在一个实施方案中，靶向的金黄色葡萄球菌菌株是耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)。在另一个实施方案中，靶向的金黄色葡萄球菌菌株是耐万古霉素的金黄色葡萄球菌(VRSA)。
本发明的噬菌体组合物可以以单一治疗性组合物的形式提供(优选的)，或作为多种单独的组合物(每种组合物包含一种或更多种组合物成分)提供。在噬菌体以多种单独的组合物提供的实施方案中，所述噬菌体可以依次或同时(合适地同时)施用于受试者。
包含在本发明组合物中的噬菌体可以通过本领域已知的任何合适的方法繁殖。例如，一种或更多种噬菌体可以在能够支持噬菌体生长的宿主细菌菌株中单独生长。通常地，噬菌体将在所述宿主细菌菌株中生长至高浓度，测定滴度并组合以形成本发明的组合物。
使用的每种噬菌体的量(例如在本发明的噬菌体组合物、方法或用途中)将取决于其对靶细菌种的毒力。
计数细菌菌株可用于组合物的开发，即是组合物(例如组)的个体预期成员的指示的细菌菌株。计数菌株可允许噬菌体组合物的一个预期成员比任何其他成员多至少1000倍的噬菌斑形成。以这种方式，可以获得对多种细菌分离物始终有效的组合物(例如组)。
通常，所述一种或更多种噬菌体可以组合形成组合物，每毫升所述组合物包含至少约1×107、1×108、1×109或1×1010，或1×1011噬斑形成单位(PFU)的每种噬菌体。合适地，所述一种或更多种噬菌体可以组合形成组合物，每毫升所述组合物包含至少约1×108或1×109PFU的每种噬菌体。
当选择包含在本发明组合物中的噬菌体时，可以使用WO2013/164640A1(通过引用并入本文)中教导的方法。在一个实施方案中，所述方法包括
a.提供两种或更多种不同的噬菌体，其中，所述两种或更多种不同的噬菌体中的每一种独立地阻碍靶菌种或菌株的生长；
b.将所述两种或更多种不同的噬菌体中的至少两种组合；和
c.在所述两种或更多种不同的噬菌体的组合存在下确定靶菌种或菌株的生长，其中，靶菌种或菌株生长条件在步骤a和c中相同或等同；
d.其中，当所述组合阻碍靶菌种或菌株的生长至少等于由所述两种或更多种不同噬菌体中的任何一种独立实现的最大生长阻碍时，该组合被认为是噬菌体的组合物；和
e.其中，当所述组合阻碍靶菌种或菌株的生长小于由所述两种或更多种不同噬菌体中的任何一种独立实现的最大生长阻碍时，该组合最初作为噬菌体组合物被排除。合适地，靶标可以是金黄色葡萄球菌靶细菌菌株。
本发明人惊奇地发现，通过采用前述实施方案的方法，获得了经改善的噬菌体组合物(包含噬菌体Sa87、J-Sa36和Sa83(及其可选的突变体))。有利地，当与常规噬菌体组合物和/或包含噬菌体Sa87、J-Sa36、Sa83和J-Sa37(及其可选的突变体)的组合物相比时，所述噬菌体组合物显示出对金黄色葡萄球菌的改善的治疗功效。因此，优选的噬菌体组合物包含Sa87、J-Sa36和Sa83或基本上由Sa87、J-Sa36和Sa83组成。
在一些实施方案中，本发明的噬菌体组合物可以进一步包含一种或更多种另外的噬菌体。所述一种或更多种另外的噬菌体可靶向金黄色葡萄球菌种或菌株，或不同的细菌靶标，例如选自下列属中的一种或更多种：葡萄球菌(Staphylococcus)、螺杆菌(Helicobacter)、克雷伯氏菌(Klebsiella)、李斯特菌(Listeria)、分枝杆菌(Mycobacterium)、埃希氏菌(Escherichia)、脑膜炎球菌(Meningococcus)、弯曲杆菌(Campylobacter)、链球菌(Streptococcus)、肠球菌(Enterococcus)、志贺氏菌(Enterococcus)、假单胞菌(Pseudomonas)(例如铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa)、伯克霍尔德氏菌(Burkholderia)、梭菌(Clostridium)、军团菌(Legionella)、醋酸杆菌(Acetinobacter)、沙门氏菌(Salmonella)或其组合。
一种或更多种另外的噬菌体可以是WO2009/044163(通过引用并入本文)中教导的噬菌体，其中描述的噬菌体K和/或噬菌体P68。
在一个实施方案中，一种或更多种另外的噬菌体可以是WO 2005/009451A1(通过引用并入本文)中教导的一种或更多种。合适地，所述一种或更多种另外的噬菌体可以靶向假单胞菌属细菌，诸如铜绿假单胞菌细菌。
在一个实施方案中，本发明的组合物包含WO2013/068743A9(通过引用并入本文)中教导的一种或更多种噬菌体。在一个实施方案中，本发明的组合物包含葡萄球菌噬菌体K突变体，其相对于野生型葡萄球菌噬菌体K(SEQ ID No.1)的核苷酸序列，在选自一个或更多个以下区域内包含一个或更多个突变：
a)ORF18和ORF19之间的区域；和/或
b)ORF41和ORF42之间的区域；和/或
c)ORF68；和/或
d)ORF86/88/90内的重叠区域；和/或
e)ORF92；和/或
f)ORF93；和/或
g)ORF96；和/或
h)ORF100。
优选地，葡萄球菌噬菌体K突变体包含上述所有区域中的突变(或由上述所有区域中的突变组成)。
可以使用GeneMark软件(http://exon.biology.gatech.edu/)鉴定上面提到的ORF名称。然后可以使用BLAST将个体阅读框与NCBI GenBank进行比较，并将最高评分匹配然后归于相应的ORF。合适地，上面提到的ORF可以是O'Flaherty S.et al.(J.Bacteriol.(2004),186(9)2862-2871)描述的噬菌体K ORF，其教导通过引用并入本文。
在一个实施方案中，SEQ ID No.1包含118个ORF。ORF可以如下注释(所示的核苷酸编号是SEQ ID No.1的核苷酸编号，并且从起始密码子朝向到终止密码子)：ORF1：2934-2449；ORF2：3358 2927；ORF3：3914-3372；ORF4：4414-3926；ORF5：4825-4427；ORF6：5529-4822；ORF7：6183-5629；ORF8：8050-7502；ORF9：9194-8457；ORF10：10003-9614；ORF11：10798-10316；ORF12：11390-10848；ORF13：11923-11390；ORF14：13213-12368；ORF15：13809-13225；ORF16：15233-14817；ORF17：15669-15367；ORF18：18110-16062；ORF19：19226-18648；ORF20：19845-19219；ORF21：20734-19838；ORF22：21767-21027；ORF23：22433-21819；ORF24：22874-22449；ORF25：23719-23078；ORF26：24971-24279；ORF27：25793-25158；ORF28：26651-25860；ORF29：26959-26651；ORF30：27701-27072；ORF31：28472-27972；ORF32：29435-28632；ORF33：29938-29435；ORF34：34507-34833；ORF35：34848-36665；ORF36：36658-37479；ORF37：37636-38115；ORF38：38157-39350；ORF39：39435-39776；ORF40：39794-40165；ORF41：40169-41860；ORF42：42054-42827；ORF43：42846-43796；ORF44：43912-45303；ORF45：45704-46612；ORF46：46626-47504；ORF47：47504-48124；ORF48：48143-48979；ORF49：49223-50986；ORF50：51059-51487；ORF51：51767-52225；ORF52：52514-52825；ORF53：52957-53415；ORF54：53459-53995；ORF55：54051-58106；ORF56：58185-60611；ORF57：60625-61512；ORF58：61512-64058；ORF59：64165-64956；ORF60：64956-65480；ORF61：65480-66184；ORF62：66199-67245；ORF63：67266-70325；ORF64：70436-70957；ORF65：70978-74436；ORF66：74644-76566；ORF67：76589-76963；ORF68：76970-78346；ORF69：78438-80186；ORF70：80198-81811；ORF71：81804-83246；ORF72：83325-84362；ORF73：84362-84739；ORF74：84739-86658；ORF75：86658-87254；ORF76：87269-88336；ORF77：88741-89193；ORF78：89180-89788；ORF79：89805-90197；ORF80：90212-92326；ORF81：92340-93389；ORF82：93407-93736；ORF83：93720-94040；ORF84：94247-94843；ORF85：94853-95158；ORF86：95234-96106；ORF87：96314-96784；ORF88：96920-98263；ORF89：98429-99238；ORF90：99472-100332；ORF91：100660-101142；ORF92：101229-102500；ORF93：102560-103816；ORF94：104160-104822；ORF95：104950-105582；ORF96：105605-106117；ORF97：106719-107474；ORF98：107467-108717；ORF99：108731-109099；ORF100：109086-109397；ORF101：109990-110757；ORF102：110735-111181；ORF103：112416-113417；ORF104：113165-113623；ORF105：113688-114131；ORF106：114148-114852；ORF107：114914-115312；ORF108：115706-116176；ORF109：117041-117349；ORF110：117346-118254；ORF111：118272-119741；ORF112：120082-120477；ORF113：121090-121401；ORF114：121407-121706；ORF115：122253-122606；ORF116：122625-123011；ORF117：124587-124913；和ORF118：125811-126158。
据信一些ORF相对于SEQ ID No.1反向转录，如上面的核苷酸编号所反映的(例如ORF1-33)。
在一个实施方案中，所述突变发生在野生型葡萄球菌噬菌体K(SEQ ID No.1)的相应核苷酸序列的ORF96内。
在一个实施方案中，突变可以是选自野生型葡萄球菌噬菌体K(SEQ ID No.1)的相应核苷酸序列的C105975T、C18554T、G40894A、G78197A、G99388C、G102111A、T103720C、C105975T和/或A109329G的一种或更多种突变。
噬菌体K突变体可以包含(或进一步包含)野生型葡萄球菌噬菌体K(SEQ ID No.1)的相应核苷酸序列的116111位的插入。合适地，插入可以是长度至少为9000个碱基对的插入(例如长度为9547个碱基对)。
在一个实施方案中，本发明的组合物包含葡萄球菌噬菌体K(突变体)，其包含与SEQ ID No.1具有至少70％或至少80％序列一致性的核苷酸序列。在另一个实施方案中，本发明的组合物包含葡萄球菌噬菌体K(突变体)，其包含与SEQ ID No.1具有至少80％或至少90％序列一致性的核苷酸序列。合适地，本发明的组合物可包含葡萄球菌噬菌体K(突变体)，其包含与SEQ ID No.1至少具有95％或至少100％的序列一致性的核苷酸序列。
在一个实施方案中，噬菌体组合物包含选自Sa87、J-Sa36和Sa83，或其突变体的一种或更多种(优选至少两种)噬菌体，和药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合。合适的载体、稀释剂和/或赋形剂可包括等渗盐溶液，诸如磷酸盐缓冲盐水。
本发明的噬菌体组合物可以配制成消毒剂组合物。消毒剂组合物可以是用于表面的喷雾或液体洗涤剂的形式。该组合物可以是洗手液。合适地，当组合物是用于局部施用的制剂时，其可以采用洗剂、霜、软膏、糊剂、凝胶、泡沫的形式，或作为通常已知用于局部施用的载体的任何其他物理形式。这种增稠的局部制剂是特别有利的，因为制剂粘附在放置材料的皮肤区域上，因此使得能够将局部高浓度的噬菌体引入待消毒的特定区域。例如，在本领域中通常是已知的基于石蜡和羊毛脂的霜，其特别适用于将产品应用于鼻腔。然而，可以使用其他增稠剂，诸如聚合物增稠剂。制剂还可包含以下一种或更多种：水、防腐剂、活性表面活性剂、乳化剂、抗氧化剂或溶剂。
本发明的噬菌体组合物可以配制用于鼻、口、肠胃外、肌肉内、静脉内、皮下、透皮、眼或耳内施用。这样的噬菌体制剂可以直接使用、用适当的冷冻保护剂(例如10％蔗糖)冷冻保存在水性溶液或其他溶液中、冷冻干燥并在使用前再水化，或者在包括(但不限于)片剂、乳液、软膏或浸渍伤口敷料或其他项目的一些其他制剂中稳定释放。对于涉及治疗肺部细菌感染的实施方案，可以配制用于通过鼻或口服施用(例如通过噬菌体组合物的气雾化)进行肺部递送的噬菌体组合物。因此，在一个实施方案中，噬菌体组合物可包含在肺部递送装置中，诸如吸入器或呼吸器。
在一个方面，提供了包含本发明的噬菌体组合物的肺部递送装置(诸如吸入器或呼吸器)。
本发明还涉及本文的噬菌体组合物作为药物(例如用于治疗金黄色葡萄球菌感染的药物)的用途。因此，在一个方面，提供了作为药物的本发明的噬菌体组合物。还提供了治疗疾病的相应方法，包括向受试者施用噬菌体组合物。
在一个方面，提供了用于治疗细菌感染的本发明的噬菌体组合物。在相关方面，提供了本发明的噬菌体组合物在制备用于治疗细菌感染的药物中的用途，以及治疗细菌感染的方法，包括将噬菌体组合物施用于受试者。
合适地，噬菌体组合物特别适用于治疗金黄色葡萄球菌细菌感染。在一个实施方案中，细菌感染是肺部细菌感染。合适地，肺部细菌感染可包括金黄色葡萄球菌(或由金黄色葡萄球菌组成)。
在一个方面，本发明提供了本发明的噬菌体组合物在制备用于治疗受试者肺部细菌感染的药物中的用途，其中，将所述噬菌体组合物施用于所述受试者，并且其中，所述细菌感染包括金黄色葡萄球菌。在相关方面，提供了治疗受试者肺部细菌感染的方法，包括向受试者施用本发明的噬菌体组合物，其中，细菌感染包括金黄色葡萄球菌。
当治疗金黄色葡萄球菌感染(例如肺部感染)时，包含Sa87、J-Sa36、Sa83或其突变体或基本上由Sa87、J-Sa36、Sa83或其突变体组成的噬菌体组合物是特别有利的。
本文所用的术语“治疗(treat/treating)”包括预防性治疗(例如预防疾病的发作)以及矫正治疗(已经患有疾病的受试者的治疗)。本文所用的“治疗(treat/treating)”优选是指矫正治疗。
本发明的用途或方法通常包括向受试者施用本文所述的噬菌体组合物。如本文所用，“受试者”是哺乳动物，诸如人或其他动物。优选地，术语“受试者”是指人受试者。在一个实施方案中，受试者是患有金黄色葡萄球菌感染(例如金黄色葡萄球菌肺部感染)的人类受试者。
本发明的噬菌体组合物可以以治疗有效量或预防有效量施用于受试者。
“治疗有效量”是当单独或组合施用于受试者以治疗细菌感染(或其症状)时，足以实现对感染或其症状的这种治疗的任何量的组合物。
“预防有效量”是当单独或组合施用于受试者时，抑制或延迟细菌感染(或其症状)的发作或复发的任何量的组合物。在一些实施方案中，预防有效量完全防止细菌感染的发作或复发。“抑制”发作意味着减少细菌感染发作(或其症状)的可能性，或完全预防发作。
合适的剂量范围是产生所需治疗效果的剂量范围(例如，其中，组合物以治疗或预防有效量给药)。
在一个实施方案中，将噬菌体组合物以每种噬菌体至少约1×107PFU或每种噬菌体至少约5×107PFU的剂量施用于受试者。合适地，噬菌体组合物可以以每种噬菌体至少约1×108PFU或每种噬菌体至少约1×109PFU的剂量施用。合适的剂量范围可以是每种噬菌体约1×107PFU至每种噬菌体约1×1011PFU，优选每种噬菌体约5×107PFU至每种噬菌体约5×109PFU。
在一些实施方案中，噬菌体组合物每天施用至少一次、两次、三次或四次。合适地，噬菌体组合物可以每天施用两次。因此，在一个实施方案中，每天至少一次、两次、三次或四次施用每种噬菌体至少约5×107PFU的剂量。在另一个实施方案中，每天至少一次、两次、三次或四次施用至少约1×108PFU的每种噬菌体。在进一步实施方案中，每天至少一次、两次、三次或四次施用至少约1×109PFU的每种噬菌体。合适地，可以每天至少一次、两次、三次或四次施用每个噬菌体约1×107PFU至每个噬菌体约1×1011PFU的剂量范围。优选地，每天至少一次、两次、三次或四次施用每种噬菌体约5×107PFU至每种噬菌体约5×109PFU的剂量范围。
用作药物的噬菌体组合物可以通过基于待治疗病症选择的任何途径施用。在一个实施方案中，施用途径是鼻、口、肺、肠胃外、肌肉内、静脉内、皮下、透皮、眼、耳或其组合。当用于治疗肺部细菌感染时，噬菌体组合物可以经鼻或口施用，例如通过使用适当的肺部递送装置(诸如吸入器或呼吸器)雾化。
在一个实施方案中，抗生素(合适地，化学抗生素)可以与本发明的噬菌体组合物组合施用。WO 2008/110840和WO 2005/009451中教导了抗生素和噬菌体的组合施用，该教导通过引用并入本文。抗生素可以与噬菌体组合物同时或相继施用。合适地，可以在组合物后施用一种或更多种抗生素，使得在抗生素治疗开始之前已经建立了噬菌体复制。在这种情况下，抗生素治疗可以自施用一种或更多种噬菌体起延迟一小时或数小时，或一天或数天。在一个实施方案中，抗生素治疗可延迟至少12或24小时，合适地至少48小时。在另一个实施方案中，抗生素治疗可以延迟至少3或4天，合适地至少5天。在另一个实施方案中，抗生素治疗可延迟至少一周，例如至少8、9或10天。在向受试者施用组合物的每种噬菌体表现出不同菌株特异性的噬菌体组合物的情况下，至少一种或更多种噬菌体能够靶向细菌感染就足够了。
因此，在一些实施方案中，噬菌体组合物包含一种或更多种抗生素，诸如一种或更多种化学抗生素。噬菌体组合物和抗生素(例如化学抗生素)的组合可提供增强的(例如协同的)治疗，其在治疗金黄色葡萄球菌感染时，特别是当用于治疗肺部金黄色葡萄球菌感染时显示出意想不到的改善的功效。
可以基于金黄色葡萄球菌种或菌株对所述抗生素的敏感性来选择抗生素。合适地，金黄色葡萄球菌种或菌株可以是待治疗的受试者中存在的相同种或菌株。在一个实施方案中，金黄色葡萄球菌种或菌株取自待治疗的受试者并测试抗生素敏感性。敏感性可以通过本领域已知的体外敏感性测定来确定。
可选地或另外地，可选择抗生素，因为已知其对已知(或可能认为)与待治疗的金黄色葡萄球菌感染一起存在的细菌(例如作为细菌生物膜的一部分)具有活性。
在一个实施方案中，抗生素包含(或由其组成)青霉素、青霉素酶抗性青霉素、头孢菌素、β-内酰胺酶抑制剂、四环素或其组合，或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，抗生素包括以下一种或更多种：万古霉素、萘夫西林、苯唑西林、替考拉宁、青霉素、甲氧西林、氟氯西林、双氯西林、头孢唑啉、头孢噻吩、头孢氨苄、头孢呋辛、克林霉素、头孢唑啉、阿莫西林/克拉维酸、氨苄青霉素/舒巴坦、林可霉素、红霉素、甲氧苄啶、磺胺甲恶唑、达托霉素、利奈唑胺、利福平、环丙沙星、庆大霉素、四环素、多四环素、二甲胺四环素、替加环素或其组合或其药学上可接受的盐。合适地，抗生素可以是万古霉素和/或替考拉宁，或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，本发明的用途或方法包括：
a.在体内向受试者施用噬菌体组合物；
b.体外监测来自感染(例如存在于受试者中)或来自相同菌株的另一种感染的细菌细胞样品对一种或更多种抗生素的敏感性；和
c.当已经确定所述一种或更多种抗生素对所述一种或更多种抗生素的敏感性已经被诱导时，施用所述一种或更多种抗生素。
在一个实施方案中，在组合物诱导了经取样细菌对抗生素的敏感性的时间段，施用抗生素(例如化学抗生素)。在一些实施方案中，所述时间段可以是至少12或24小时，合适地至少48小时。在其他实施方案中，噬菌体组合物和抗生素可以间隔一天至两个月的间隔施用，优选间隔一至四周，合适地间隔两周。
在一个实施方案中，抗生素以每日一次或两次至少约50或约100mg/kg(合适地至少约150mg/kg)的剂量施用。合适地，抗生素可以每天一次或两次以约100mg/kg的剂量施用。
在一个方面，噬菌体组合物可用于杀死表面上的细菌(例如金黄色葡萄球菌)的方法中，所述方法包括将本发明的噬菌体组合物(例如配制成消毒剂组合物)施用于表面。合适地，表面是污染部位或预期的污染部位。
在一个实施方案中，表面是哺乳动物(例如人)的皮肤，例如鼻腔。可替代地或另外地，表面可以是设备(合适的医疗设备)、床上用品、家具、墙壁或地板(例如在临床环境中)。
合适地，噬菌体组合物可以以(适当地每种)噬菌体的PFU与细菌的菌落形成单位(CFU)的比例为至少4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1，至少20:1、40:1、50:1、至少100:1施用于表面。
在一个方面，本发明还提供了试剂盒，其包含：根据本发明的噬菌体组合物；及使用噬菌体组合物的说明书(例如在医疗中)。该试剂盒可以进一步包含抗生素(例如化学抗生素)和与噬菌体组合物组合使用的说明书。该试剂盒还可以包含用于测试抗生素抗性的装置，例如，如前述实施方案中所述。
在一个实施方案中，说明书提供了如本文所述的给药本发明的噬菌体组合物的细节。在一个实施方案中，本发明的试剂盒中包括的说明书使将试剂盒用于治疗金黄色葡萄球菌感染，例如肺部感染。
在一个方面，本发明提供了本发明的噬菌体组合物或试剂盒在非医疗应用中的用途。例如，噬菌体组合物或试剂盒可用于食品卫生、农业或作物保护，和/或环境卫生应用。因此，在一个实施方案中，试剂盒包括在非医疗应用中使用噬菌体组合物的说明书。
在一个方面，提供了包含本发明的噬菌体组合物的绷带或伤口敷料。伤口敷料可以是垫或贴膏药型(sticking plaster-type)敷料。在施用于伤口敷料或绷带之前，可以将噬菌体作为消毒剂制剂或外用霜施用于伤口敷料或绷带。或者，可以将伤口敷料或绷带浸泡在含有噬菌体的载体中并干燥以在敷料或绷带内浸渍所述噬菌体。还可以使用本领域公知的技术将噬菌体吸附到绷带或伤口敷料的表面上。这种方法的优点是绷带或伤口敷料使得噬菌体能够与可能含有细菌的伤口接触。在一个相关方面，本发明还提供了通过向受试者施用绷带或伤口敷料来抑制细菌生长和/或治疗和/或杀死细菌的方法。
在一个方面，本发明提供治疗受试者的肺部细菌感染的方法，包括向受试者施用四种噬菌体的组，其中，所述组包含噬菌体Sa87、J-Sa36、J-Sa37和Sa83，并且其中，细菌感染包括金黄色葡萄球菌。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。Singleton,et al.,DICTIONARY OFMICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY,20ED.,John Wiley and Sons,New York(1994)，以及Hale&Marham,THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY,Harper Perennial,NY(1991)提供具有本发明中使用的许多术语的通用字典的能力。
本发明不受本文公开的示例性方法和材料的限制，并且与本文描述的那些类似或等同的任何方法和材料可以用于实践或测试本发明的实施方案。数字范围包括定义范围的数字。本文提供的标题不是对本发明的各个方面或实施方案的限制，其可以通过参考整个说明书获得。因此，通过参考整个说明书，可以更全面地定义下面紧接被定义的术语。
术语的其他定义可以出现在整个说明书中。在更详细地描述示例性实施方案之前，应理解，本发明不限于所描述的特定实施方案，因此当然可以改变。还应理解，本文使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并不旨在限制，因为本发明的范围仅受所附权利要求的限制。
在提供数值范围的情况下，应当理解，除非上下文另有明确规定，还具体公开了该范围的上限和下限之间的介于下限单位的十分之一的每个中间值。本发明涵盖在规定范围内的任何规定值或中间值与规定范围内的任何其他规定值或中间值之间的每个较小范围。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括或排除在该范围内，并且涵盖了在该较小范围中包括任一个端点、不包括端点或包括两个端点的每个范围，其在规定范围内的端点受任何特别的排除。当规定的范围包括一个或两个端点的情况下，则还包括排除这些端点中的一个或两个的范围
必须注意的是，除非上下文另有明确说明，如本文和所附权利要求中所使用的，单数形式“a”、“an”和“the”包括复数指代。因此，例如，提及“噬菌体组合物”包括多种这样的候选试剂，并且提及“噬菌体”包括提及一种或更多种噬菌体及其本领域技术人员已知的等同物，等等。
本文讨论的出版物仅仅是为了它们在本申请的提交日之前的公开内容而提供的。本文中的任何内容均不应被解释为承认这些出版物构成所附权利要求的现有技术。
现在将参考以下附图和实施例仅通过举例描述本发明。
附图说明
现在将参考下图仅以举例的方式描述本发明的实施方案，其中：
图1显示了金黄色葡萄球菌肺炎模型中噬菌体组对万古霉素的功效：剂量组的统计分析。使用Tukey的多重比较测试(Graphpad Prism 6，La Jolla，CA)进行统计学分析。仅显示在配对比较中证明显著差异的组(p<0.05)。在将两组与第三组进行比较的情况下，所呈现的p值是两个配对比较中的较高者。**p≤0.001，*p≤0.05。
具体实施方式
实施例1
噬菌体组的组合(assembly)
在一起而具有针对最近多种金黄色葡萄球菌临床分离株(未发表的数据)的组的广泛活性的四种噬菌体Sa87、J-Sa36、J-Sa37和Sa83的组合物(组)，被用于动物研究。在示例性方法中，使用制造宿主SPS1216和SPS1226制备噬菌体裂解物，其在生产循环期间不释放内源性原噬菌体。在噬菌体添加之前，将培养物在生物反应器中培养至OD600为0.2。继续在37℃孵育，并且至少每60分钟读取吸光度。在细菌裂解后收获培养物，并且通过几个过滤步骤从噬菌体中分离杂质，然后进行能够减少诸如宿主细胞蛋白和宿主细胞DNA的碎片的色谱步骤。纯化后，使用离心柱(
Ultra 15-100kDa，Merck Millipore，达姆施塔特，德国)额外地浓缩裂解物，使得最终噬菌体滴度≥1×1011PFU/mL。在该过程结束时，更换缓冲液并将所有材料过滤灭菌(0.22μm过滤器)并在2-8℃下储存。噬斑测定用于测定噬菌体原液的滴度(Carlson,K.,In E.Kutter and A.Sulakvelidze(ed.),Bacteriophages:Biology and Application,(2005)437-494,CRC Press,Boca Raton,FL.,Hyman,P.,etal.,Meth.Mol.Biol.(2009)501:175-202)。组合四个经纯化的噬菌体样品，使得每个噬菌体以每个噬菌体2×1010PFU/mL的浓度存在于最终组中，然后另外以1:10或1:100稀释以获得3个给药溶液。最终的内毒素水平<1000EU/mL，这对于动物研究是可接受的。
实施例2
细菌菌株
将金黄色葡萄球菌UNT109-3和UNT144-3(从UNT培养收集中心获得)的冷冻原液接种到TrypticaseTM大豆肉汤(BBLTM Laboratories)+5％去纤维蛋白绵羊血液(TSBb)中并在37℃下孵育18小时(振荡)。18小时后，将培养物1:10稀释到新鲜的TSBb中并进一步孵育5小时，然后在新鲜TSB中稀释而用于接种到小鼠中。
实施例3
鼠肺炎模型中金黄色葡萄球菌毒力的评估
相对于单个噬菌体和4种噬菌体组，评估在感染的动物模型中已使用的两种金黄色葡萄球菌临床分离株UNT109-3(NRS234，天然瓣膜心内膜炎)和UNT144-3的敏感性。在一些实施方案中，两种菌株对组以及单独的噬菌体Sa87、J-Sa36和Sa83完全敏感。与噬菌体J-Sa37相比，噬菌体Sa87、J-Sa36和Sa83表现出针对UNT109-3的改善的功效。然后在鼠肺感染模型中评估两种菌株的毒力。雌性Hsd:ICR(CD1)小鼠(Harlan Laboratories，休斯顿，德克萨斯州)在感染前第4天和第1天施用150和100mg/kg环磷酰胺以使其中性粒细胞减少。然后通过腹膜内(IP)注射0.15mL盐酸氯胺酮(100mg/kg体重)和甲苯噻嗪(10mg/kg体重)的混合物麻醉5只小鼠的组。一旦麻醉，通过将滴剂滴在外鼻孔上并使得能够吸入50μl接种物来鼻内感染小鼠。感染后24小时，通过吸入CO2对小鼠实施安乐死，并对肺进行细菌滴度处理。在脑心浸液琼脂(Difco TM Laboratories)+0.5％活性炭(Sigma-Aldrich)板上计数细菌计数，以便于回收和检测金黄色葡萄球菌(Barr,J.G.,et al.,J.Clin.Pathol.(1987)40:372-376)。接受7.13log10CFU菌株UNT109-3的小鼠在24小时收获之前全部死于感染，表明为不适合的毒力。用6.95log10CFU菌株UNT144-3感染的所有小鼠存活直至取样，并且分别显示出6.78±0.34和8.17±0.91的感染后2小时和24小时的平均log10CFU/肺对滴度。这些数据表明UNT144-3菌株的毒力，无论是在肺滴度和存活率方面，都与其他MRSA分离株的历史结果相当(未发表的数据)。基于这些结果，选择UNT144-3用于功效研究。
实施例4
4种噬菌体组在金黄色葡萄球菌肺炎模型中的功效
如上所述，使5只小鼠的6组中性白细胞减少。麻醉后，50μL菌株UNT144-3中6.98log10CFU的接种物滴鼻递送，在2小时内导致7.24log10CFU/肺对的平均细菌肺滴度，在未治疗的对照组中，于24小时时增加至9.18log10CFU/肺对(图1)。感染后2小时和6小时皮下注射100mg/kg万古霉素；将PBS-Mg稀释剂在感染后2小时和6小时鼻内递送至未处理的对照组。
评估三个噬菌体组处理组的功效：每种噬菌体2×1010PFU/mL、每种噬菌体2×109PFU/mL，和每种噬菌体2×108PFU/mL。如下所述，根据其剂量组，在感染后2小时和6小时施用50μL剂量的噬菌体，使得在每个时间点每只小鼠接受每种噬菌体1×109PFU、每种噬菌体1×108PFU，或每种噬菌体1×107PFU。在第一次施用50μL噬菌体时，肺中的菌落计数为7.24log10CFU/肺对。因此，当施用第一次噬菌体剂量时，在2小时时间点，3个剂量组的感染复数为～60，～6和～0.6。
施用两个剂量的噬菌体组使得1×109PFU/噬菌体、1×108PFU/噬菌体和1×107PFU/噬菌体处理组的金黄色葡萄球菌肺滴度分别为6.08、6.16和7.8log10CFU/肺对。与24小时载体对照组相比，这些对应1.38-3.1log10CFU的减少，对于1×109PFU/噬菌体和1×108PFU/噬菌体组，与感染后2小时的细菌滴度相比，减少1.08-1.16log10CFU。图1显示了通过ANOVA分析(Tukey的多重比较检验)确定的证明统计学显著性的不同处理组的比较。1×109PFU/噬菌体、1×108PFU/噬菌体相比24小时未治疗对照、处理组显示肺CFU显著降低(两者均P<0.0001)。施用万古霉素(100mg/kg SC，2小时和6小时)引起24小时细菌肺滴度为5.55log10CFU，类似于两个最高噬菌体剂量(观察到这3组之间没有显著差异)。
实施例5
从感染后小鼠肺匀浆产生的菌落分析
评估从小鼠肺部感染模型中回收的总共27个金黄色葡萄球菌菌落对单个噬菌体组分(Sa83、Sa87、J-Sa36、J-Sa37)和4种噬菌体组的敏感性。来自2小时未处理组的菌落在BHI-炭板上看起来是均匀的；因此从3只不同的小鼠的每一只中分离出单个菌落。在一些情况下，观察到正常和半透明菌落，并因此从每组(例如，24小时未处理和万古霉素组)3只不同的小鼠评估两种菌落类型。还评估了在噬菌体处理组中观察到的来自三种金黄色葡萄球菌形态类型中的每一种的四个菌落(总共12个)：这些菌落包括具有典型金黄色葡萄球菌形态的菌落以及半透明菌落。使用5μL未稀释、10-1、10-2、10-3和10-4的连续噬菌体稀释液的斑点，对27个回收菌落的菌苔(lawns)进行了斑点测试，以评估对4种噬菌体和噬菌体组的噬菌体敏感性(Carlson，K，同上，Hyman，P，同上)。测试以一式三份进行。易感对照菌株(SPS1216和SPS1226)平行进行。如果观察到可归于生产性噬菌体感染的菌苔的可见清除(例如，连续稀释中的一致评分或进展至单个噬斑)，则认为细菌是敏感的。27个菌落对噬菌体组以及三种单独的噬菌体Sa83、Sa87和J-Sa36表现出对UNT144-3的等同敏感性。
在这项研究中，我们证明了噬菌体组在1×108PFU/噬菌体(第一次给药时每种噬菌体的MOI～6)和1×109PFU/噬菌体(第一次给药时每种噬菌体的MOI～60)的功效，与以100mg/kg SC给药的万古霉素相当。另外，从感染小鼠中重新分离的金黄色葡萄球菌分离株对噬菌体组仍然敏感。这些数据提供了噬菌体治疗剂评估和开发的第一步，包括给药方案的初步评估。
表1、金黄色葡萄球菌中性白细胞减少的肺模型
表2、4种噬菌体组对万古霉素的评估
实施例6
3种噬菌体的噬菌体组的组合
靶向金黄色葡萄球菌的许多噬菌体(包括Sa87、J-Sa36、Sa83和J-Sa37)在允许的宿主菌株上生长，然后通过以下方法对一系列金黄色葡萄球菌菌株进行测试：菌苔上的斑点测试、计数噬斑测定和使用平板读数器测定系统的肉汤培养。平板读数器以多孔板形式监测含有噬菌体的合适宿主的肉汤培养的光密度。后一种方法使得能够评估感染过程的详细动力学。选择显示出良好噬斑形成的噬菌体。
候选噬菌体在液体(肉汤)培养物中繁殖并制备裂解物。通过蔗糖垫(在离心之前，将27ml每种裂解物小心地以重叠层(over-layered)铺在36ml聚丙烯管中5ml无菌10％w/v蔗糖“垫”上)离心纯化澄清的裂解物。
然后在较高的MOI(感染复数[感染的噬菌体与细菌宿主细胞的比例])单独地和作为混合物重新测试各个噬菌体(包括Sa87、J-Sa36、Sa83和J-Sa37)。该测试的结果令人惊讶，当分离测试每种噬菌体时，噬菌体Sa87、J-Sa36、Sa83、J-Sa37产生细菌宿主数的有效减少且抗性的发展非常有限。然而，当使用所有四种噬菌体(Sa87、J-Sa36、Sa83、J-Sa37)的混合物时，抗性形式的发展比分离使用噬菌体时更快，表明在混合的噬菌体感染中具有拮抗作用，其能够使细菌逃逸增强。
进一步的测试表明，噬菌体J-Sa37似乎对噬菌体Sa87、J-Sa36和/或Sa83在减少细菌耐药性的发展中的作用具有拮抗作用(通过OD600的光密度测量)，说明了J-Sa37的拮抗作用。提供了一种改进的噬菌体组合物，其具有噬菌体Sa87、J-Sa36和Sa83，当使用肺炎模型测试时，其显示出增强的治疗功效(参见实施例3-5)。
实施例7
Sa87、J-Sa36和Sa83突变体的制备
使用常规技术将噬菌体Sa87、J-Sa36和Sa83用金黄色葡萄球菌菌株迭代传代(参见例如Kelly et al,(2011),Bioengineered Bugs,2:1,31-37，其通过引用并入本文)。选择能够裂解先前抗性的金黄色葡萄球菌菌株的逃逸噬菌体。通过基因测序证实所述逃逸噬菌体与噬菌体Sa87、J-Sa36和/或Sa83相比的遗传突变。基于实施例6的方法选择包含在含有Sa87、J-Sa36和/或Sa83的噬菌体组合物中的逃逸噬菌体。当使用肺炎模型进行测试时，该噬菌体组合物与具有噬菌体Sa87、J-Sa36和Sa83的组合物表现出类似的增强的治疗功效(参见实施例3-5)。
序列
SEQ ID No.1
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上述说明书中提及的所有出版物均通过引用并入本文。在不脱离本发明的范围和精神的情况下，本发明所述方法和系统的各种修改和变化对于本领域技术人员来说是显而易见的。尽管已经结合特定的优选实施方案描述了本发明，但是应该理解，要求保护的本发明不应该不适当地限于这些特定的实施方案。实际上，对于生物化学和生物技术或相关领域的技术人员显而易见的用于实施本发明的所述模式的各种修改旨在落入所附权利要求的范围内。
序列表
<110> 阿玛塔制药公司
<120> 治疗性噬菌体组合物
<130> P47470WO
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 127395
<212> DNA
<213> 葡萄球菌噬菌体K
<400> 1
ggatttgatt attatgacaa atacaataca agcattttta caaggacaag aagcaagcac 60
agttaaggac gtagcaactc atggagtaca aagcggagca attggcaaat taatctacac 120
atcagacgta gtaaacttct ttgatagtta cgagcaggac attgaagcgg tcatcactga 180
atacattgaa gaggttacag gacaacaata ttatgactta ttgaactatg agcttatgag 240
agacctcgag aattatgcaa atgtagaatt tgaagacgaa gacgaatata ataacattca 300
atttgaccta gcagaaaaca ttgcttctga tgaggttgaa ggatttgaag acatggacga 360
agcagaccgg gcggaagcaa tctatgaggc tatggatgat gttgaattag aactacaaga 420
aactgacaag gttcaatatg ttaatctagc ggttgagatt gtagctcaaa gaatggcact 480
atagaaagca cacagagaag cttaaccgct tctctaatac aattaatcag gagatgttga 540
agatgaatac aagacgggta aacagagcgt taaacgaagc agttagatta ttagatgaac 600
aaatagcaga tactcaaaag actatgcagg agttgaataa acaactagag aagcaaataa 660
aggctaagca agagctaatg gtattagttg atgttatgaa tggtgatgat gagtaatgaa 720
cattagagag gttcacaatg tcgttaagag tgctaagagc aaactcctgc aggagcaggc 780
tcacccaacg gataacctca tagagcagta catcaatgat gagctacaca gacgcacaca 840
gagaagcgga acaatacaga tgaacaataa tactacttca tatagtaata gcccatatgg 900
tagcttagaa gagcttagag aagcttatga cctatcgtca ttatctactg gtgagattaa 960
agaactaata caaacatttg tttaaattat tttatcaaaa cgctttacaa tcttttagtt 1020
tgtatgatat aatgaactta acaaattaaa agaaaaggaa atgatgaaca tgacaaactt 1080
acaagaaaga aaacaagaat tgaaaacgtt actatttaac ttagctttag agaagaacaa 1140
agcaactgat gagacactgc ttagcgtatt agagcaagca catcaagagg taggaaatca 1200
attaagaaaa gtaagaaaag aaatagaaat tttagtagaa gaaaaagaaa gggaattttg 1260
gaatgatatc gaatttaatg gattagacta agagggaata aaatccctct tttattttta 1320
tcctattata taattttttt atattatacg ggggcagggg taaaatgcca ctcaatgggg 1380
gtgggtctat atacccctat ggtctaccca ggtacttatt ttttggggaa aattatgaaa 1440
ataaatattt aaaagtcaac acctaaaata tagaacgtaa gtcaacaccc tatattaaaa 1500
gtcaacaatt tatagtacaa atagagaacc tctaaatata aagtcaacat atctaaaata 1560
agaaagaggg aaattaaatc cctcctctta ggtattatta acaacctcta attcatgtat 1620
agtaatcata tccatcccat agaaatctct tgggtctcct ttaatgaact cttgctctcc 1680
tctatggttt gtttcctctt tataaccttc ttctttaata cgtttaatta agttctcctt 1740
atctgtatat atcttatctt ctctaaaatg gaagttatct tcataaggtt cacaattatc 1800
atgttctact tggtatagtt tcattagtca ttttcctcct cttcgtaaga ccatgtacca 1860
tattctgcat tatagtgtgc tgtatctgcg ccttcatctt catattctac actataccat 1920
gcatcctcct ctgtttctgc atctatatat cttacctctt ctgtagtaat agtacgtttt 1980
actttgtatc tcttcaactg tttttactcc tttatatttt cctctagtat ttgttttaat 2040
gtctgacagt ctttttggtc tagagtatcc caactctcta aattttgtaa ttggtatagt 2100
aactcattta caatttcatc gaaggcttct gcttttttat atacttcttc tagttctgtt 2160
tctgctaatt ttctattcct tttaatttgt tctgctttag ctactaagat atgggcttta 2220
ttcatttcct ctataataaa gtttttatag ttttccatta ttatttatcc ctcctatttt 2280
ctatccgttg ttttatctct tctctattgc ggtggtgctc cttactcatt tctttacgtt 2340
ccttatttgt taaccttatc ctataaacaa ggtagttaat gtataagata ccggctgacc 2400
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ctccttatat tctttatagc tcttaatggc tattttacaa atacctctat ttacagcaac 2520
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ttgaaagagc aaatagtttt ctaaaacact aatagctgta atagtagtta gatataatat 2640
agataataag taatccttta attttagttt aacaaatggt tttttgtgct cacctgttct 2700
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gtctacattt aatgcatgta gagcgtaaat aataactgca ggaataccta taatgaatgc 2820
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ttttgaatac tctaatgtgt ttttacctag gaacttaaaa aatgttttat tcatcttctt 2940
cctccttgga attactttct gtaattgtaa tttctaacat attattgtaa taatcattct 3000
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tctttttcta taaaatattt atatatttta tatcttcttt catctgcacc tgatatttta 3600
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aggtctttaa cattacctct gcctacatgg tcattatagc aatcatattt aacttttttc 3720
ttttgttttc tatcattaac tacaatgaat atattatata cgatataagc tttaaaatgg 3780
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tttaatgtaa tattatttga tatgttaact acagtagagc cctcatgttt tttattaaga 3900
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ccattacttt gcctaataga ttctgacctt tccagttact ttgctctaat attttagggt 4020
catttgcttt aagacctact ccccatattt tatcataagg tgaagcttct acaaaatctt 4080
tacgtacatc tgtgtctaat attctttgct ttaggtgtgt agtcataaat ttatctttaa 4140
ctacttctac cataatatta tatcttactt tattccactg ttcttcatta aaattacgaa 4200
ctttacgacc taaactttta gcatggtttg ggttcttagc atttagtatt tcacctgcta 4260
tttgaaagtc attaaagtat cttgctttgc gccacataaa ggcttgctct gagttattaa 4320
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atggtaatac aattttaaaa ttatctaata ttttactttg tacctgttca agctcatcat 4500
atttatccat atcaaaatca tccatttctt tatgataata ttttattaag cttaaaatat 4560
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ccatatccac atgattacta ctctctataa atgcatttag gtcagcgtat agctgaataa 4680
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gtttctaaat actgcgccaa catcacacat taacatgtct ccattaattt ctacttctcc 4920
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tcttgaccat attaattggt caattgtttg ttcttctaca ggtttccaac taaccccacc 5040
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tcggtctacg ttttccataa tattataaaa ctcatcatca tggttcccta acagagttac 5340
tacattatca tcattagaca ttaaatcaaa tatatagtta acaacatctt ttgacctttt 5400
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tattttatcc ataattgtta ataatttttg gtattctccg tgaatatcgg gaacaacgta 5520
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ttgtttgtct tcattacttt ttgttgtaaa ttcgggaaca tctgttaata tagactcttt 6360
accattaata gtccatgata ttttaaaaga cccttggcta tacactgtat tcggtgtcag 6420
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ttgtacaatt aatataacaa aaaaacacct attagtttaa ataggtgtcc gacagagctc 6600
ccgtacttag attacggtta ataatatttt acgacaacta tatgagaccc tctgtcgttg 6660
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tacccatata gttaggctct tattctcatt ataaggttaa aaaggctaac tgtgtttagc 7440
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tactatgttt aaggagatat tttaatttca ttaaaaaaga atttttttct ttttctataa 7620
tatcttcttt atcatcatat tctgaaaaca taatgaattc tatacctata ctatttctat 7680
tatgtgaaaa catatttata gaaaaaggtg aatcaaaatt tttatcatct ttattaatac 7740
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cttgtgtacc atgtttatct actaagtatg agttattcat aacatttaaa ctatcttctg 8220
agtaactaaa atttatgtta tagtctacta aaaaattaat aatatttttc atttacataa 8280
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ctactacaat aatattcatc atatctacat atatagcttc tatatacggt gtaatatttt 8400
cctcttcttg tatgtgttta cctatgatat catataataa ttctgagtgt attcgtttat 8460
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tagaatgtat aaaacttaac aaggtcttta ccagttaatt ctcctttttt tagtatatta 8820
ttaatattac cgataacaga atatgctata ggcttaaaat tagctctaac ataagttaaa 8880
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ttatttatat ctttactata cactattttt tatattttgt caacaaaaaa aggctactaa 10080
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actttactat tatattgtct gactaagtac tctagttcat cttctatacc tgctagttct 11040
cctgatttaa ctccaagtaa ctttctatac atgtcataat cttcagaaag actttctact 11100
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ctcctttatt aatagggtct tgtgttaaga acatttctaa gttctctttt gtaataggta 11460
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aatcatcaat atctttagtt tcatgtgtat ccatatcata cataaacata caattatatg 14580
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aatcaatagt taccgtaagt tcttgacctt cataaagtat gtttgctata taatatttcc 14700
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acatccttac tacctttata gtgttcaggt aaatgtgcat ctacttgtat attataataa 15060
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tcattagacc attctttaga tactgatagt gcatcttcta taattgttac ttttaattta 15180
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cctcctaaat tatataaaaa aaaacaccct gcttggctac aagcaaggtg aaaaaggaaa 15300
gatattatgg aagtgtacta tctaagtaca cctcataata taacagtttt ccttgctagt 15360
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caacacacct caaaa 127395
PCT/RO/134表
Claims (24)
1.一种噬菌体组合物，包含选自Sa87、J-Sa36、Sa83及其突变体的一种或更多种噬菌体。
2.根据权利要求1所述的噬菌体组合物，包含选自Sa87、J-Sa36、Sa83或其突变体的至少两种噬菌体。
3.根据权利要求1或2所述的噬菌体组合物，包含噬菌体Sa87、J-Sa36、Sa83或其突变体。
4.根据前述权利要求中任一项所述的噬菌体组合物，基本上由Sa87、J-Sa36和Sa83或其突变体组成。
5.根据前述权利要求中任一项所述的噬菌体组合物，其中，当与Sa87，J-Sa36或Sa83相比时，所述突变体在其整个基因组中具有至少75％的序列一致性。
6.根据前述权利要求中任一项所述的噬菌体组合物，其中，当与Sa87，J-Sa36或Sa83相比时，所述突变体在其整个基因组中具有至少80％的序列一致性。
7.根据前述权利要求中任一项所述的噬菌体组合物，其中，当与Sa87，J-Sa36或Sa83相比时，所述突变体在其整个基因组中具有至少90％的序列一致性。
8.根据前述权利要求中任一项所述的噬菌体组合物，其中，当与Sa87，J-Sa36或Sa83相比时，所述突变体在其整个基因组中具有至少95％的序列一致性。
9.根据前述权利要求中任一项所述的噬菌体组合物，进一步包含抗生素(例如化学抗生素)。
10.根据前述权利要求中任一项所述的噬菌体组合物，进一步包含药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合。
11.根据前述权利要求中任一项所述的噬菌体组合物，所述噬菌体组合物用作药物。
12.根据前述权利要求中任一项所述的噬菌体组合物，所述噬菌体组合物用于治疗细菌感染。
13.根据前述权利要求中任一项所述的噬菌体组合物在制备用于治疗细菌感染的药物中的用途。
14.一种治疗细菌感染的方法，包括向受试者施用根据权利要求1-10中任一项所述的噬菌体组合物。
15.根据权利要求11-14中任一项所述的用于所述用途的噬菌体组合物、用途，或方法，其中，所述细菌感染是金黄色葡萄球菌细菌感染。
16.根据权利要求11-15中任一项所述的用于所述用途的噬菌体组合物、用途，或方法，其中，所述细菌感染是肺部细菌感染。
17.根据权利要求11-16中任一项所述的用于所述用途的噬菌体组合物、用途，或方法，进一步包括向受试者施用抗生素(例如化学抗生素)。
18.试剂盒，包括：
a.根据权利要求1-10中任一项所述的噬菌体组合物；和
b.使用所述噬菌体组合物的说明书(例如在医疗中)。
19.根据权利要求18所述的试剂盒，进一步包含抗生素(例如化学抗生素)以及将其与所述噬菌体组合物组合使用的说明书。
20.根据权利要求18或19所述的试剂盒，其中，所述说明书是将所述试剂盒用于治疗金黄色葡萄球菌感染，优选金黄色葡萄球菌肺部感染。
21.一种杀死表面上细菌的方法，所述方法包括将根据权利要求1-10中任一项所述的噬菌体组合物施用于所述表面。
22.根据权利要求21所述的方法，其中，所述表面是哺乳动物的皮肤、设备(合适地是医疗设备)、床上用品、家具、墙壁、地板或其组合。
23.根据权利要求1-10中任一项所述的噬菌体组合物或根据权利要求18-20中任一项所述的试剂盒在非医疗应用中的用途。
24.一种绷带或伤口敷料，包含根据权利要求1-10中任一项所述的噬菌体组合物。
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