BR112014001934B1 - Hidrazina contendo moduladores de transporte nuclear e seus usos - Google Patents

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Abstract

hidrazina contendo moduladores de transporte nuclear e seus usos. a invenção refere-se genericamente aos moduladores de transporte nuclear, por exemplo, inibidores de crm1, e mais particularmente a um composto representado pela fórmula estrutural (i): ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que os valores e valores alternativos para as variáveis são como aqui definido e descrito. a invenção também inclui a síntese e a utilização de um composto de fórmula estrutural i, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou uma sua composição, por exemplo, no tratamento, modulação e/ou prevenção de condições fisiológicas associadas com atividade crm1.

Description

Pedidos relacionados
[0001] O presente pedido reivindica o benefício do pedido provisional US no. 61/513.428, depositado em 29 de julho de 2011, pedido provisional US no. 61/513.432, depositado em 29 de julho de 2011, pedido provisional US no. 61/610.178, depositado em 13 de março de 2012, pedido provisional no. 61/654.651, depositado em 1 de junho de 2012, e pedido provisional US no. 61/653.588, depositado em 31 de maio de 2012. Os teores dos pedidos acima são aqui incorporados a título de referência na íntegra.
Antecedentes da invenção
[0002] Células a partir da maioria das principais malignidades hematológicas e sólidas humanas apresentam localização celular anormal de uma variedade de proteínas oncogênicas, proteínas supressoras de tumor, e reguladores de ciclo de célula (Cronwshaw e outros, 2004, Falini e outros 2006). Por exemplo, certas mutações p53 levam à localização no citoplasma em vez de no núcleo. Isso resulta na perda de regulação de crescimento normal, apesar de função intacta do supressor de tumor. Em outros tumores, p53 do tipo selvagem é sequestrado no citoplasma ou rapidamente degradado, novamente levando à perda de sua função supressora. A recuperação de localização nuclear apropriada de proteína p53 funcional pode normalizar algumas propriedades de células neoplásicas (Cai e outros. 2008; Hoshino e outros. 2008; Lain e outros. 1999a; Lain e outros. 1999b; Smart e outros. 1999), pode recuperar a sensibilidade de células de câncer para agentes danificadores de DNA (Cai e outros. 2008), e pode levar à regressão de tumores estabelecidos (Sharpless & De Pinho 2007, Xue e outros. 2007). Dados similares foram obtidos para outras proteínas supressoras de tumor como forquilha (Turner e Sullivan 2008) e c-Abl (Vignari e Wang 2001). Além disso, a localização anormal de várias proteínas reguladoras de crescimento e supressoras de tumor pode estar envolvida na patogênese de doenças autoimunes (Davis 2007, Nakahara 2009). A inibição de CRM1 pode fornecer utilidade particularmente interessante em síndromes de câncer familiar (por exemplo, Síndrome Li-Fraumeni devido à perda de um alelo p53, síndromes de câncer BRCA1 ou 2) onde proteínas supressoras de tumor específicas (TSP) são eliminadas ou disfuncionais e onde níveis de TSP crescentes por administração sistêmica (ou local) de inibidores de CRM1 poderiam ajudar a recuperar função normal de supressor de tumor.
[0003] Proteínas específicas e RNAs são carregadas para dentro e para fora do núcleo por moléculas de transporte especializado, que são classificadas como importins se transportarem moléculas para dentro do núcleo, e exportins se transportarem moléculas para fora do núcleo (Terry e outros. 2007; Sorokin e outros. 2007). As proteínas que são transportadas para dentro ou para fora do núcleo contêm sequências de localização/importação nuclear (NLS) ou exportação (NES) que permitem que as mesmas interajam com os transportadores relevantes. A Manutenção de região cromossômica 1 (Crm1 ou CRM1) que também é chamada exportin-1 ou Xpo1 é uma exportin principal.
[0004] A superexpressão de Crm1 foi reportada em vários tumores, incluindo câncer de ovário humano (Noske e outros. 2008), câncer cervical (van der Watt e outros. 2009), câncer pancreático (Huang e outros. 2009), carcinoma hepatocelular (Pascale e outros. 2005) e osteosarcoma (Yao e outros. 2009) e é independentemente correlacionado com resultados clínicos ruins nesses tipos de tumor.
[0005] A inibição de Crm1 bloqueia o êxodo de proteínas supressoras de tumor e/ou reguladores de crescimento como p53, c-Abl, p21, p27, pRB, BRCA1, IkB, ICp27, E2F4, KLF5, YAP1, ZAP, KLF5, HDAC4, HDAC5 ou proteínas forquilha (por exemplo, FOXO3a) a partir do núcleo que são associadas a expressão de gene, proliferação de células, angiogênese e epigenética. Inibidores de Crm1 foram mostrados induzir apoptose em células de câncer mesmo na presença de ativação de sinais de estimulação de crescimento ou oncogênicos, enquanto poupa células normais (não transformadas). A maioria dos estudos de inibição Crm1 utilizou o inibidor Crm1 de produto natural Leptomicina B (LMB). A própria LMB é altamente tóxica a células neoplásicas, porém insuficientemente tolerada com toxicidade gastrointestinal acentuada em animais (Roberts e outros 1986) e seres humanos (Newlands e outros, 1996). A derivatização de LMB para melhorar as propriedades similares à droga leva a compostos que retêm atividade antitumor e são mais bem toleradas em modelos de tumor de animal (Yang e outros. 2007, Yang e outros. 2008, Mutka e outros. 2009). Portanto, inibidores de exportação nuclear poderiam ter efeitos benéficos em distúrbios neoplásticos e outros distúrbios proliferativos.
[0006] Além de proteínas supressoras de tumor, Crm1 também exporta várias proteínas principais que estão envolvidas em muitos processos inflamatórios. Essas incluem IkB, NF-kB, Cox-2, RXRα, Commd1, HIF1, HMGB1, FOXO, FOXP e outras. A família do fator nuclear kappa B (NF-kB/rel) de ativadores de transcrição, nomeada pela descoberta de que aciona expressão de gene kappa de imunoglobulina, regula a expressão mRNA de variedade de genes envolvidos em inflamação, proliferação, imunidade e sobrevivência de células. Sob condições basais, um inibidor de proteína de NF-kB, chamado IkB, se liga a NF-kB no núcleo e o complexo IkB-NF-kB torna inativa a função de transcrição NF-kB. Em resposta a estímulos inflamatórios, IkB dissocia do complexo IkB-NF-kB, que libera NF-kB e desmascara sua atividade de transcrição potente. Muitos sinais que ativam NF-kB fazem isso por direcionar IkB para proteólise (fosforilação de IkB torna a mesma “marcada” para ubiquitinação e então proteólise). O complexo IkBa-NF-kB nuclear pode ser exportado para o citoplasma por Crm1 onde dissocia e NF-kB pode ser reativado. IkB ubiquitinado também pode dissociar do complexo NF-kB, recuperando a atividade de transição NF-kB. A inibição de Crm1 induziu exportação em neutrófilos humanos e células similares a macrófago (U937) por LMB não somente resulta em acúmulo de complexo IkB-NF-kB nuclear, inativo de modo de transcrição como também evita a ativação inicial de NF-kB mesmo após estimulação de célula (Ghosh 2008, Huang 2000). Em um estudo diferente, o tratamento com LMB inibiu ligação de DNA NF-kB induzida por IL-1β (a primeira etapa na ativação de transcrição NF-kB), expressão IL-8 e expressão de molécula de adesão intercelular em células endoteliais microvasculares pulmonares (Walsh 2008). COMMD1 é outro inibidor nuclear tanto de NF-kB como atividade de transcrição de fator 1 induzível por hipóxia (HIF1). O bloqueio da exportação nuclear de COMMD1 por inibir Crm1 resulta em inibição aumentada de NF-kB e atividade de transcrição HIF1 (Muller 2009).
[0007] Crm1 também media transporte de receptor X retinoide α (RXRα). RXRα é altamente expresso no fígado e desempenha um papel central em regular ácido bile, colesterol, ácido graxo, esteroide e metabolismo xenobiótico e homeostases. Durante inflamação do fígado, níveis de RXRα nucleares são significativamente reduzidos, principalmente devido à exportação nuclear mediada por inflamação de RXRα por Crm1. LMB é capaz de evitar aumento citoplásmico induzido por IL-1β em níveis de RXRα em células derivadas de fígado humano (Zimmerman 2006).
[0008] O papel de exportação nuclear mediada por Crm1 em sinalização de NF-kB, HIF-1 e RXRα sugere que o bloqueio de exportação nuclear pode ser potencialmente benéfico em muitos processos inflamatórios através de múltiplos tecidos e órgãos incluindo a vasculatura (vasculite, arterite, polimialgia reumática, aterosclerose), dermatológica (vide abaixo), reumatológica (artrite reumatoide e relacionada, artrite psoriática, espondiloartropatias, artropatias de cristal, lúpus eritematoso sistêmico, doença misturada de tecido conectivo, síndromes de miosite, dermatomiosite, miosite de corpo de inclusão, doença não diferenciada de tecido conectivo, síndrome de Sjogren, síndromes de sobreposição e escleroderma, etc.).
[0009] A inibição de CRM1 afeta a expressão de gene por inibir/ativar uma série de fatores de transcrição como ICp27, E2F4, KLF5, YAP1 e ZAP.
[00010] A inibição de Crm1 tem efeitos terapêuticos em potencial através de muitas síndromes dermatológicas incluindo dermatoses inflamatórias (atopia, dermatite alérgica, dermatite química, psoríase), dano pelo sol (dano ultravioleta (UV)) e infecções. A inibição de CRM1, estudada melhor com LMB, mostrou efeitos mínimos sobre ceratinócitos normais, e exerceu atividade antiinflamatória em ceratinócitos submetidos à UV, TNFα ou outros estímulos inflamatórios (Kobayashi & Shinkai 2005, Kannan & Jaiswal 2006). A inibição de Crm1 também regula ascendentemente a atividade NRF2 (fator 2 relacionado à eritróide de fator nuclear) que protege ceratinócitos (Schafer e outros. 2010, Kannan & Jaiswal 2006) e outros tipos de células (Wang e outros. 2009) contra dano oxidativo. LMB induz apoptose em ceratinócitos infectados com cepas de papiloma vírus humano oncogênico (HPV) como HPV16, porém não em ceratinócitos não infectados (Jolly e outros. 2009).
[00011] Crm1 também media o transporte de proteínas neuroprotetoras principais que podem ser úteis em doenças neurodegenerativas incluindo doença de Parkinson (PD), doença de Alzheimer, e esclerose lateral amiotrófica (ALS). Por exemplo, por (1) forçar a retenção nuclear de reguladores neuroprotetores principais como NRF2 (Wang 2009), FOXA2 (Kittappa e outros. 2007), estacionar em células neuronais, e/ou (2) inibir atividade de transcrição NFkB por sequestrar IkB para o núcleo em células gliais, a inibição de Crm1 poderia diminuir ou evitar forte de célula neuronal encontrada nesses distúrbios. Há também evidência ligando proliferação anormal de células gliais com anormalidades em níveis de CRM1 ou função de CRM1 (Shen 2008).
[00012] Exportação nuclear intacta, principalmente mediada através de CRM1, também é exigida para a maturação intacta de muitos vírus. Vírus onde exportação nuclear, e/ou o próprio CRM1, foi envolvido em seu ciclo de vida incluem vírus de imunodeficiência humana (HIV), adenovírus, retrovírus de símio tipo 1, vírus de doença Borna, influenza (cepas comuns bem como H1N1 e cepas H5N1 de ave), vírus de hepatite B (HBV) e C (HCV), papilomavirus humano (HPV), vírus sincicial respiratório (RSVA), Dungee, coronavirus de Síndrome Respiratória aguda severa, vírus de febre amarela, vírus de West Nile, vírus de herpes simplex (HSV), citomegalovírus (CMV), e poliomavirus de célula Merkel (MCV). (Bhuvanakantham 2010, Cohen 2010, Wittaker 1998). Prevê-se que infecções virais adicionais baseadas em exportação nuclear intacta serão descobertas no futuro.
[00013] Proteína HIV-1 Rev, que transita através de nucléolos e comuta entre o núcleo e citoplasma, facilita a exportação de transcritos de HIV não unidos e individualmente unidos contendo RNA de Elementos de resposta Rev (RRE) pela via de exportação CRM1. A inibição de transporte RNA mediada por Rev utilizando inibidores CRM1 como LMB ou PKF050-638 pode deter o processo de transcrição de HIV-1, inibir a produção de novos vírions HIV-1, e desse modo reduzir níveis de HIV-1 (Pollard 1998, Dalemans 2002).
[00014] Vírus da dengue (DENV) é o agente causativo da doença viral carregada por artrópode comum, febre de Dengue (DF), e dengue de febre hemorrágica potencialmente mortal e mais grave (DHF). DHF parece ser o resultado de uma resposta inflamatória exuberante em excesso para DENV. NS5 é a proteína maior e mais conservada de DENV. CRM1 regula o transporte de NS5 a partir do núcleo para o citoplasma, onde a maioria das funções NS5 é mediada. A inibição de exportação mediada por CRM1 de NS5 resulta em cinética alterada de produção de vírus e reduz a indução da quimiocina inflamatória interleucina-8 (IL-8), apresentando um novo caminho para o tratamento de doenças causadas por DENV e outros flavivírus medicamente importantes incluindo vírus de hepatite C (Rawlinson 2009).
[00015] Outras proteínas de ligação de RNA codificadas por vírus que utilizam CRM1 para sair do núcleo incluem a proteína de tegumento HSV tipo 1 (VP13/14, ou hUL47), proteína de CMV humana pp65, a Proteína ORF 3b de Coronavirus SARS e a proteína de matriz (M) RSV (Williams 2008, Sanchez 2007, Freundt 2009, Ghildyal 2009).
[00016] De modo interessante, muitos desses vírus são associados a tipos específicos de câncer humano incluindo carcinoma hepatocelular (HCC) devido à infecção crônica por HBV ou HCV, câncer cervical devido a HPV, e carcinoma de célula Merkel associada a MCV. Inibidores de CRM1 poderiam, ter portanto efeitos benéficos tanto sobre o processo infeccioso viral como sobre o processo de transformação neoplásica devido a esses vírus.
[00017] CRM1 controla a localização nuclear e, portanto, atividade de múltiplas enzimas de metabolizar DNA incluindo deacetilases de histona (HDAC), acetil transferases de histona (HAT), e metil transferases de histona (HMT). A supressão de hipertrofia cardiomiócito com inibidores de CRM1 irreversíveis foi demonstrada e se acredita ser ligada a retenção nuclear (e ativação) de HDAC 5, uma enzima conhecida por suprimir um programa genético hipertrófico (Monovich e outros 2009). Desse modo, a inibição de CRM1 pode ter efeitos benéficos em síndromes hipertróficos, incluindo certas formas de insuficiência cardíaca congestiva e cardiomiopatias hipertróficas.
[00018] CRM1 também foi ligado a outros distúrbios. Distúrbio de Leber, um distúrbio hereditário caracterizado por degeneração de células de gânglio retinal e perda visual, é associado à inação da comutação CRM1 (Gupta N 2008). Há também evidência ligando distúrbios neurodegenerativos a anormalidades em transporte nuclear.
[00019] Até a presente data, entretanto, inibidores de Crm1 similares à droga, de molécula pequena para uso in vitro e in vivo são incomuns.
Sumário da invenção
[00020] A presente invenção se refere a compostos, ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, úteis como moduladores de transporte nuclear. A invenção também provê composições farmaceuticamente aceitáveis compreendendo compostos da presente invenção e métodos de utilizar os compostos e composições no tratamento de vários distúrbios, como aqueles associados a respostas celulares anormais acionadas por transporte nuclear inadequado.
[00021] Em uma modalidade da invenção, compostos são representados pela fórmula I:
Figure img0001
ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, em que os valores e valores alternativos para cada variável são como definido e descrito aqui.
[00022] Outra modalidade da invenção é uma composição compreendendo um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
[00023] Ainda outra modalidade da invenção é um método para tratar um distúrbio associado à atividade de CRM1, o método compreendendo administrar a um sujeito necessitando do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição compreendendo um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00024] Outra modalidade da invenção é o uso de um composto da invenção para tratar um distúrbio associado à atividade de CRM1 em um sujeito.
[00025] Outra modalidade da invenção é o uso de um composto da invenção para a fabricação de um medicamento para tratar um distúrbio associado à atividade de CRM1 em um sujeito.
[00026] Os moduladores de transporte nuclear da presente invenção, e sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou composições dos mesmos, fornecem excelente exposição in vivo como medido por AUC em camundongo, rato, cão e macaco, enquanto apresenta níveis baixos de penetração no cérebro. Portanto, os compostos da presente invenção, e sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou composições dos mesmos, são uteis para tratar uma variedade de doenças, distúrbios ou condições, associadas a respostas celulares anormais acionadas por transporte nuclear inadequado, como aquelas doenças, distúrbios ou condições descritas aqui. Os compostos fornecidos pela presente invenção são também úteis para o estudo de modulação de transporte nuclear em fenômenos biológicos e patológicos; o estudo de vias de transdução de sinal intracelular mediadas por cinases; e a avaliação comparativa de moduladores de transporte nuclear.
Breve descrição das figuras
[00027] A figura 1 é um gráfico de volume de tumor como uma função de tempo e mostra o efeito de composto I-3 sobre o volume do tumor em um modelo de xenoenxerto de camundongo de Câncer de mama negativo triplo (TNBC).
[00028] A figura 2A é uma imagem de Western blot que mostra o efeito de aumentar concentrações do composto I-1 em CRM1 e proteínas marcadoras de apoptose em células TNBC MDA-MB-468.
[00029] A figura 2B é uma imagem de Western blot que mostra o efeito de aumentar concentrações de composto I-3 sobre CRM1 e proteínas marcadoras de apoptose em células BC luminais DU4475.
[00030] A figura 2C é uma imagem de Western blot que mostra o efeito de aumentar concentrações do Composto I-3 em CRM1 e proteínas marcadoras de apoptose em células TNBC HS578T.
[00031] A figura 3 são imagens de Western blot que mostram o efeito de aumentar concentrações do Composto I-3 em proteínas de ciclo de célula e anti-apoptose em linhagens de célula TNBC MDA-MB-468 e HSS578T.
[00032] A figura 4 é um gráfico de peso corpóreo médio versus tempo para os dias 0 a 12 em camundongos artríticos Balb/c machos induzidos por anticorpo submetidos ao tratamento indicado.
[00033] A figura 5 é um gráfico de marcações artríticas clínicas de pata total média versus tempo para os dias - a 12 em camundongos artríticos BALB/c machos induzidos por anticorpo submetidos ao tratamento indicado.
[00034] A figura 6 é um gráfico de barras de marcação para espessura média de orelha, descamação e dobra determinado do dia 0 a 7 em camundongos psoriáticos BALB/c machos induzidos por PMA submetidos ao tratamento indicado.
[00035] A figura 7 é um conjunto de gráficos que mostra preferencia de objeto de ratos tratados como indicado no Modelo de reconhecimento de Objeto novo.
[00036] A figura 8A é um conjunto de gráficos que mostra ingestão de alimento cumulativa e média versus tempo em ratos Zucker obesos e magros tratados como indicado.
[00037] A figura 8B é um conjunto de gráficos que mostra média e percentagem de peso corpóreo versus tempo em ratos Zucker obesos e magros tratados como indicado.
Descrição detalhada
[00038] As características novas da presente invenção se tornarão evidentes para aqueles versados na técnica após exame da seguinte descrição detalhada da invenção. Deve ser entendido, entretanto, que a descrição detalhada da invenção e exemplos específicos apresentados, embora indiquem certas modalidades da presente invenção, são fornecidos para fins de ilustração somente porque várias alterações e modificações compreendidas no espírito e escopo da invenção se tornarão evidentes para aqueles versados na técnica a partir da descrição detalhada da invenção e reivindicações que seguem.
Compostos da invenção
[00039] Uma modalidade da invenção são os compostos representados pela fórmula I:
Figure img0002
Ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em que:
[00040] R1é selecionado de hidrogênio e metila;
[00041] R2é selecionado de piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirazin-2-il, e quinoxalin-2- il, pirimidin-4-il, 1,1-dioxotetrahidrotiofen-3-il e ciclopropil, em que R2é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentes selecionados de metila e halogênio; ou
[00042] R1e R2são tomados juntamente com seus átomos intermediários para formar 4-hidroxipiperidin-1-il, pirrolidin-1-il, azepan-1-il, 4-benzilpiperazin-1-il, 4- etilpiperazin-1-il, 3-idroxiazetidin-1-il, ou morfolin-4- il;
[00043] R3é selecionado de hidrogênio e halo; e
[00044] »AA representa uma ligação única em que uma ligação dupla de carbono-carbono ligada à mesma está em uma configuração (E)- ou (Z)-.
[00045] Como descrito genericamente acima, R1é selecionado de hidrogênio e metila. Em algumas modalidades, R1 éhidrogênio. Em algumas modalidades, R1 é metila.
[00046] Como descrito genericamente acima, R2é selecionado de piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirazin-2-il, quinoxalin-2-il, pirimidin-4-il, 1,1- dioxotetrahidrotiofen-3-il e ciclopropil, em que R2é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentes selecionados de metil e halogênio. Em algumas modalidades da fórmula I, R2é piridin-2-il. Em algumas modalidades da fórmula I, R2é piridin-3-il. Em algumas modalidades da fórmula I, R2é piridin-4-il. Em algumas modalidades da fórmula I, R2é pirazin-2-il. Em algumas modalidades da fórmula I, R2é pirimidin-4-il. Em algumas modalidades da fórmula I, R2é quinoxalin-2-il. Em algumas modalidades da fórmula I, R2é selecionado de piridin-2-il, piridin-3-il e piridin-4-il. Em algumas modalidades da fórmula I, R2é selecionado de piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirazin-2-il e pirimidin-4-il. Em algumas modalidades da fórmula I, R2é selecionado de piridin-2-il, piridin-4-il, pirazin-2-il e pirimidin-4-il.
[00047] Em algumas modalidades, R2é selecionado de:
Figure img0003
[00048] Em algumas modalidades da fórmula I, R2 é opcionalmente substituído com um substituinte único selecionado de metila e cloro. Em algumas modalidades da fórmula I, R2é opcionalmente substituído com um grupo de metila. Em algumas modalidades da fórmula I, R2é opcionalmente substituído com um grupo de cloro. Em algumas modalidades, R2é selecionado de:
Figure img0004
[00049] Em algumas modalidades, R2 é selecionado de:
Figure img0005
[00050] Em algumas modalidades, R2 é selecionado de:
Figure img0006
[00051] Em algumas modalidades da fórmula I, R1 e R2são tomados juntos com seus átomos intermediários para formar 4-hidroxipiperidin-1-il, pirrolidin-1-il, azepan-1- il, 4-benzilpiperazin-1-il, 4-etilpiperazin-1-il, 3- hidroxiazetidin-1-il, ou morfolin-4-il. Em algumas modalidades da fórmula I, R1e R2são tomados juntos com seus átomos intermediários para formar 4-hidroxipiperidin- 1-il.
[00052] Como descrito genericamente acima, R3é selecionado de hidrogênio e halogênio. Em algumas modalidades, R3é hidrogênio. Em algumas modalidades, R3é halogênio (por exemplo, cloro, bromo, iodo ou flúor). Em algumas dessas modalidades, R3é cloro.
[00053] Como descrito genericamente acima, ligação dupla de carbono carbono entre a fração de triazol e a fração de carbonila está em uma configuração (E) ou uma configuração (Z). em algumas modalidades, a ligação dupla está em uma configuração (E). em algumas modalidades, essa ligação dupla está em uma configuração (Z) e o composto é representado pela fórmula (II):
Figure img0007
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R1, R2e R3são como definido acima e descrito aqui.
[00054] Uma modalidade adicional da invenção é um composto representado pela formula II, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que os valores e valores alternativos para as variáveis são como definido acima para um composto da fórmula I.
[00055] Em um primeiro aspecto dessa modalidade adicional, R1é como definido acima; e R2é selecionado de piridin-2-il, piridin-4-il, pirazin-2-il e pirimidin-4-il, em que R2é opcionalmente substituído com um único substituinte selecionado de metil e cloro; ou R1e R2são tomados juntos com seus átomos intermediários para formar 4-hidroxipiperidin-1-il.
[00056] Em um aspecto específico do primeiro aspecto, R3é hidrogênio. Os valores e valores alternativos para as variáveis restantes são como descrito acima para um composto da fórmula I ou na modalidade adicional, ou primeiro aspecto da mesma.
[00057] Compostos exemplares da formula I são expostos na tabela 1.
[00058] Tabela 1. Composto exemplar da formula
Figure img0008
Figure img0009
Figure img0010
[00059] Em algumas modalidades, o composto da invenção é selecionado de qualquer dos compostos I-3 a I26. Em um aspecto dessas modalidades, o composto é selecionado dos compostos I-3, I-4, I-5, I-7, I-8, I-10, I12, I-18, I-19 e I-24. Em um aspecto mais específico, o composto da invenção é selecionado de I-3 e I-4.
[00060] Farmacocinética (PK) desempenha um papel crescente em descoberta e desenvolvimento de droga. Farmacocinética é o estudo quantitativo do curso de tempo de absorção de droga, distribuição, metabolismo e/ou excreção. Quando uma droga é administrada, distribui rapidamente a partir de seu local de administração para a circulação sanguínea sistêmica. Uma medida da extensão da distribuição de um agente terapêutico é a curva da área sob a concentração de plasma-tempo (AUC), calculada até a última concentração medida (AUCt) e extrapolada até infinito (AUCInf). AUC é desse modo uma métrica útil para quantificar exposição à droga.
[00061] Geralmente, quanto mais elevada à exposição de um agente terapêutico, maiores os efeitos do agente. Entretanto, exposição elevada de um agente terapêutico pode ter efeitos prejudiciais sobre certos tecidos como o cérebro. Enquanto a barreira de cérebro- sangue (BBB), uma rede de proteção consistindo em junções apertadas entre células endoteliais, limita a difusão de moléculas hidrofílicas e/ou grandes, drogas com AUC elevada são ainda capazes de penetrar na BBB e/ou fluido cerebrospinal. Tal penetração é frequentemente indesejável e pode levar a efeitos colaterais indesejáveis. Esforços de descoberta de droga atuais são dirigidos, em parte a atingir um equilíbrio entre maximizar exposição à droga (por exemplo, AUC) enquanto minimiza penetração no cérebro.
[00062] A razão de cérebro para plasma (B:P) é um método de quantificar a distribuição relativa de um agente terapêutico em tecido do cérebro para aquela em circulação e, como tal, provê uma indicação da penetração do cérebro de um agente terapêutico dado. Uma razão elevada de cérebro para plasma é preferida ao alvejar doenças localizadas no sistema nervoso central (CNS), incluindo o cérebro e o fluido cerebrospinal. Entretanto, uma razão mais baixa de cérebro para plasma é geralmente preferível para agentes terapêuticos não CNS para minimizar a penetração no cérebro e evitar efeitos colaterais em potencial causados por acúmulo indesejável dos agentes terapêuticos no cérebro e tecido CNS.
[00063] Como exposto em mais detalhe na Exemplificação, os compostos da presente invenção exigem uma AUC mais elevada e/ou uma B:P mais baixa em comparação com outros inibidores de transporte nuclear, como aqueles revelados no pedido de patente US copertencente no. 13/041.377, depositado em 5 de março de 2011 e pulicado como US 2009/0275607 em 10 de novembro de 2011. Em algumas modalidades da presente invenção, o composto da fórmula I tem uma atividade de exportação nuclear menor do que aproximadamente 1 μ M, uma AUCinf maior do que aproximadamente 3300 (por exemplo, maior do que aproximadamente 3500), e uma razão B:P menor do que aproximadamente 2,5 quando dosada em um camundongo a 10 mg/kg po.
Métodos sintéticos da invenção
[00064] De acordo com a presente invenção, é fornecido um método de preparar derivados de (Z)-olefina de um composto da fórmula Z úteis na preparação do composto da invenção (por exemplo, precursores para os compostos da invenção):
Figure img0011
Ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
[00065] O anel A é um anel opcionalmente substituído selecionado de fenila, um anel de arila bicíclico com 8 - 10 membros, um anel de heteroarila monocíclico com 5-6 membros tendo 1-4 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, e um anel de heteroarila bicíclico com 8-10 membros tendo 1-4 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre;
[00066] Y é uma ligação covalente ou -L-;
[00067] L é um radical de hidrocarboneto bivalente C1-8 saturado ou insaturado, linear ou ramificado, em que uma ou duas unidades de metileno de L é opcionalmente substituída por -NR-, -N(R)C(O)-, -C(O)N(R)-, -O-, -C(O)-, -OC(O)-, -C(O)O-, -S-, -SO-, -SO2-, -C(S)-, -C(NOR)- ou -C(NR)-;
[00068] Cada R é independentemente hidrogênio ou um grupo opcionalmente selecionado de C1-6 alifático, fenila, um anel carbocíclico de 4-7 membros, saturado ou parcialmente insaturado, um anel heterocíclico de 4-7 membros saturado ou parcialmente insaturado tendo 1-2 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, um anel de heteroarila monocíclico com 5-6 membros tendo 1-4 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, um anel de arila bicíclico de 8-10 membros, e um anel de heteroarila bicíclico de 8-10 membros tendo 1-4 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre; ou
[00069] dois grupos R no mesmo nitrogênio são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual são ligados para formar um anel heterocíclico de 4-7 membros saturado ou parcialmente insaturado tendo 1-4 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre ou um anel de heteroarila com 5-6 membros tendo 1-4 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigeno e enxofre;
[00070] cada um de V1, V2e V3é independentemente C(Ry) ou N;
[00071] cada Rx e Ry é independentemente selecionado de -R, halogênio, -OR, -SR, -N(R)2, -CN, -NO2, -N3, -SOR, -SO2R, -SO2NR, -C(O)R, -CO2R, -C(O)OR, -C(O)N(R)2, -NRC(O)R, -OC(O)R,-OC(O)N(R)2, -NRC(O)OR, -NRC(O)NR2 e -NRSO2R;
[00072] cada R1e R2são independentemente hidrogênio, deutério, trítio ou halogênio;
[00073] W é -CN, haloalquila, -NO2 ou -C(=Z)R3;
[00074] Z é O, S, ou NR;
[00075] R3é selecionado de hidrogênio, -R, OR, -SR e -N(R4)2;
[00076] cada R4é independentemente -R; ou
[00077] dois R4no mesmo nitrogênio são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual são ligados para formar um anel heterocíclico de 4-7 membros saturado ou parcialmente insaturado tendo 1-4 heteroátomos independentemente selecionado de nitrogênio, oxigênio e enxofre ou um anel de heteroarila com 5-6 membros tendo 1-4 heteroátomos independentemente selecionado de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, em que o anel desse modo formado é opcionalmente substituído com -(R5)n;
[00078] cada R5é independentemente selecionado de -R, halogênio, -OR, -SR, -N(R)2, -CN, -NO2, -N3, -SOR, -SO2R, -SO2NR, -C(O)R, -CO2R, -C(O)OR, -C(O)N(R)2, -NRC(O)R, -OC(O)R, -OC(O)N(R)2, -NRC(O)OR, -NRC(O)NR2 e -NRSO2R; e
[00079] cada m e n é independentemente selecionado de 0, 1, 2, 3 e 4.
[00080] Compostos da fórmula Z foram descritos, por exemplo, em US 13/041,377, depositado em 5 de março de 2011, e no pedido provisional U.S. Nos. 61/513.428, depositado em 29 de julho de 2011 e 61/653.588, depositado em 1 de junho de 2012. Os compostos da formula Z são geralmente sintetizados como uma mistura de isômeros de (E)- e (Z) olefina, que devem ser separados. A separação de isômeros (E)- e (Z)-olefina requer cromatografia extensa e resulta em uma perda de 50% do intermediário avançado A, visto que o isômero indesejável não pode ser tipicamente convertido no isômero desejado. Um rendimento de 50% é ineficiente e caro em qualquer etapa de uma síntese, porém tais rendimentos inaceitáveis são ainda mais problemáticos ao término de uma síntese de múltiplas etapas. Foi descoberto agora surpreendentemente que o uso de bases estericamente impedidas em uma adição de 1,4-nucleofílico pode efetuar (Z)-seletividade da reação, desse modo fornecendo o isômero cis-olefina como o produto principal ou exclusivo. Por conseguinte, a presente invenção prove uma síntese seletiva-(Z) de compostos da formula Z, e métodos de preparar intermediários sintéticos uteis para preparar compostos da fórmula Z. Uma etapa principal na síntese de compostos da fórmula Z é representada no esquema I.
[00081] Em certas modalidades, os compostos da fórmula Z são preparados de acordo com o esquema I, exposto abaixo: Esquema I
Figure img0012
Em que LG é um grupo de saída e cada do anel A, Y, V1, V2, V3, Rx, R1, R2, W e m é como definido acima com relação a um composto da fórmula Z e descrito nas modalidades da presente invenção.
[00082] Em algumas modalidades da etapa S-1.1, o intermediário A é acoplado ao intermediário B através de uma reação de adição/eliminação 1,4-nucleofílico. Em algumas modalidades da etapa S-1.1, LG é um grupo de saída apropriado. Em algumas dessas modalidades da etapa S-1.1, LG é um halogênio. Em algumas modalidades, LG é iodo. Em algumas modalidades da etapa S-1,1, LG é bromo. Em algumas modalidades da etapa S-1,1, LG é sulfonado. Em algumas dessas modalidades, LG é metanossulfonato (mesilato).
[00083] Em algumas modalidades da etapa S-l.1, o intermediário A é acoplado com o intermediário B na presença de uma base nucleofílica estericamente impedida. Uma pessoa versada na técnica será capaz de selecionar uma base estericamente impedida adequada. Bases nucleofílicas adequadas estericamente impedidas para utilização na presenta invenção incluem l,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7- eno (DBU), 1,5-diazabiciclo[4,3,0]non-5-eno(DBN),l,4- diazabiciclo(2,2,2)octano(DABCO),N,N-diciclo- hexilmetilamina, 2,6-di-terc-butil-4-metilpiridina, quinuclidina, 1,2,2,6,6-pentametilpiperidina(PMP), 7-metil- l,5,7-triazabiciclo(4,4,0)-dec-5-eno(MTBD), trifenilfosfina, tri-terc-butilfosfina e triciclohexilfosfina.
[00084] Em certas modalidades, os compostos da fórmula Y são preparados de acordo com o Esquema II, definido abaixo: Esquema II
Figure img0013
Em que LG é um grupo de saída e cada de R x, R y, R 1, R 2, W e m é como definido acima com relação a um composto da fórmula Z e descrito em modalidades aqui.
[00085] Em algumas modalidades da etapa de S- 2.1, o intermediário C é reagido com um sal de tiolato para fornecer o intermediário D. Em algumas modalidades da etapa S-2,1, o sal de tiolato é tiolato de sódio. Em algumas modalidades da etapa S-2,1, o sal de tiolato é tiolato de potássio.
[00086] Na etapa S-2.2, o intermediário D é reagido com um equivalente de hidrazina de modo a proporcionar o intermediário E.
[00087] Na etapa S-2.3, o intermediário E é acoplado com o intermediário B para proporcionar um composto de fórmula Y. Em algumas modalidades da etapa S- 2.3, LG é um grupo de saída adequado. Em algumas de tais modalidades da etapa S-2.3, LG é um halogênio. Em algumas modalidades, LG é iodo. Em algumas modalidades da etapa S- 2.3, LG é bromo. Em algumas modalidades da etapa S-2.3, LG é um sulfonato. Em algumas de tais modalidades, LG é o metanossulfonato (mesilato).
[00088] Em algumas modalidades da etapa S-2.3, o intermediário E é acoplado com o intermediário B na presença de uma base nucleofílica estericamente impedida. Uma pessoa versada na técnica será capaz de selecionar uma base estericamente-impedida adequada. Bases nucleofílicas adequadas estericamente impedidas para utilização na presente invenção incluem l ,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7- eno(DBU), 1,5-diazabiciclo[4,3,0]non-5-eno(DBN), l,4- diazabiciclo(2,2,2)octano(DABCO), hexilmetilamina, 2,6-di-terc-butil-4-metilpiridina, quinuclidina, 1,2,2,6,6-pentametilpiperidina(PMP), 7-metil- l,5,7-triazabiciclo(4,4,0)dec-5-eno(MTBD), trifenilfosfina, tri-terc-butilfosfina e triciclohexilfosfina.
[00089] De acordo com um aspecto, a presente invenção proporciona um método para proporcionar um composto de fórmula Z:
Figure img0014
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que cada do anel A, Y, V1, V2, V3, Rx, R, R1, R2, W e m é como definido acima com relação a um composto da fórmula Z, Compreendendo as etapas de: (a) fornecer um composto da fórmula A:
Figure img0015
em que cada um do anel A, Rx, Y, V1, V2, V3e m é como definido acima para um composto de fórmula Z; e (B) reagir o composto de fórmula A com uma olefina de fórmula B:
Figure img0016
em que LG é halogênio, -OSO2R ou -OSO2CF3; e cada um de R, W, R1e R2são como definido acima para um composto de fórmula Z; na presença de uma base nucleofílica estericamente impedida, para formar um composto de fórmula Z.
[00090] Como descrito acima, um composto de fórmula A é acoplado com o intermediário B através de uma reação de adição/eliminação 1,4-nucleofílica. Em algumas modalidades, um composto de fórmula A é acoplado com o intermediário B na presença de uma base nucleofílica estericamente impedida. Bases estericamente impedidas adequadas incluem bases de amina terciária. Em algumas modalidades, uma base estericamente impedida inclui bases de aminas secundárias estericamente impedidas. Em algumas modalidades, a base nucleofílica estericamente impedida é selecionada a partir de l,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno (DBU), l,5-diazabiciclo[4,3,0]non-5-eno(DBN), l,4- diazabiciclo(2,2,2)octano(DABCO), N,N-diciclo- hexilmetilamina, 2,6-di-terc-butil-4-metilpiridina, quinuclidina, 1,2,2,6,6-pentametilpiperidina(PMP), 7-metil- l,5,7-triazabiciclo(4,4,0)-dec-5-eno(MTBD), trifenilfosfina, tri-terc-butilfosfina e triciclohexilfosfina. Em algumas modalidades, a base nucleofílica estericamente impedida é l,4- diazabiciclo(2,2,2)octano (DABCO). Em algumas modalidades, a base nucleofílica estericamente impedida é l,8- diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno (DBU).
[00091] Em algumas modalidades, a base nucleofílica estericamente impedida é uma fosfina. Em algumas de tais modalidades, a base nucleofílica estericamente impedida é trifenilfosfina.
[00092] Em algumas modalidades, a etapa (b) acima é realizada em uma faixa de temperaturas de aproximadamente 0°C a aproximadamente 100°C. Em algumas modalidades, a etapa (b) é realizada a uma temperatura de aproximadamente 0°C. Em algumas modalidades, a etapa (b) é realizada a uma temperatura de aproximadamente 25°C. Em algumas modalidades, a etapa (b) é realizada a uma temperatura de aproximadamente 50°C. Em algumas modalidades, a etapa (b) é realizada a uma temperatura de aproximadamente 100°C.
[00093] Uma pessoa com conhecimentos comuns na técnica reconhecerá que a reação de adição/eliminação 1,4- nucleofílica de um composto de fórmula A e o intermediário B requer a utilização de um solvente orgânico polar, aprótico. Solventes orgânicos polares apróticos adequados incluem éteres, tais como dioxano, tetrahidrofurano e éter metil-terc-butílico (MTBE), e amidas, tais como dimetilformamida (DMF) e dimetilacetamida (DMA). Uma pessoa com conhecimentos comuns na técnica é capaz de selecionar o solvente apropriado para a temperatura de reação desejada.
[00094] De acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um método de fornecer um composto de fórmula Y:
Figure img0017
Ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que cada de R, Rx, Ry, R1, R2, W e m são como definido acima com relação a um composto da fórmula Z, Compreendendo as etapas de: (a) Fornecer um composto da fórmula E:
Figure img0018
Em que cada de Rx, Rye m são como definido acima para um composto da fórmula Y; e (b) Reagir o composto da fórmula E com uma olefina da fórmula B:
Figure img0019
Em que: LG é halogênio, -OSO2R ou -OSO2CF3; e Cada de R, W, R1e R2são como definido acima para um composto da fórmula Y, Na presença de uma base nucleofílica estericamente impedida para formar um composto da fórmula Y.
[00095] Como descrito acima, um composto de fórmula E é acoplado com o intermediário B através de uma reação de adição/eliminação 1,4-nucleofílica. Em algumas modalidades, um composto de fórmula E é acoplado com o intermediário B na presença de uma base nucleofílica estericamente impedida. Bases estericamente impedidas adequadas incluem bases de amina terciária. Em algumas modalidades, um base estericamente impedida inclui bases de aminas secundárias estericamente impedidas. Em algumas modalidades, a base nucleofílica estericamente impedida é selecionada entre 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno (DBU), l,5-diazabiciclo[4,3,0]non-5-eno(DBN), 1,4-diazabiciclo (2,2,2) octano (DABCO), N,N-diciclo-hexilmetilamina, 2,6- di-terc-butil-4-metilpiridina, quinuclidina, 1,2,2,6,6- pentametilpiperidina (PMP), 7-metil-1,5,7-triazabiciclo (4,4,0)-dec-5-eno (MTBD), trifenilfosfina, tri-terc- butilfosfina e triciclohexilfosfina. Em algumas modalidades, a base nucleofílica estericamente impedida é l,4-diazabiciclo(2,2,2)octano (DABCO). Em algumas modalidades, a base nucleofílico estericamente impedida é l,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno (DBU).
[00096] Em algumas modalidades, a base nucleofílica estericamente impedida é uma fosfina. Em algumas de tais modalidades, a base nucleofílica estericamente impedida é trifenilfosfina.
[00097] Em algumas modalidades, a etapa (b) acima é realizada em uma faixa de temperaturas de aproximadamente 0°C a aproximadamente 100°C. Em algumas modalidades, a etapa (b) é realizada a uma temperatura de aproximadamente 0°C. Em algumas modalidades, a etapa (b) é realizada a uma temperatura de aproximadamente 25°C. Em algumas modalidades, a etapa (b) é realizada a uma temperatura de aproximadamente 50°C. Em algumas modalidades, a etapa (b) é realizada a uma temperatura de aproximadamente 100°C.
[00098] Uma pessoa com conhecimentos comuns na técnica reconhecerá que a reação de adição/eliminação 1,4-nucleofílica de um composto de fórmula E e intermediário B requer a utilização de um solvente orgânico polar, aprótico. Solventes orgânicos polares apróticos adequados incluem éteres, tais como dioxano, tetrahidrofurano e éter metil-terc-butílico (MTBE), e amidas, tais como dimetilformamida (DMF) e dimetilacetamida (DMA). Uma pessoa com conhecimentos comuns na técnica é capaz de selecionar o solvente apropriado para a temperatura de reação desejada.
[00099] Em algumas modalidades de um composto de fórmula Y, W representa-CN. Em algumas modalidades, o W é haloalquila. Em algumas de tais modalidades, W é -CF3. Em algumas modalidades, W é -NO2.
[000100] Em algumas modalidades, W é -C(O)R3, em que R3é selecionado de -OR, -SR ou -N(R4)2. Em algumas modalidades, W é -C(O)OR. Em algumas modalidades, W é - C(O)OR, em que R é selecionado de metil, etil, isopropil, butil, terc-butil e sec-butil. Em algumas modalidades, W é -C(O)OCH3. Em algumas modalidades, W é -C(O)OCH2CH3. Em algumas modalidades, W é -C(O)OCH(CH3)2.
[000101] Em algumas modalidades, W é -C(O)N(R4)2. Em algumas modalidades, W é -(O)NH(R4). Em algumas modalidades, W é -C(O)NH2. Em algumas modalidades, W é - C(=O)N(R4)2, em que os dois grupos R4são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual são ligados para formar um anel heterocíclico saturado de 4-7 membros tendo 1-4 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, em que o anel desse modo formado é opcionalmente substituído com -(R5)n. em algumas modalidades, W é -C(O)N(R4)2, em que os dois grupos R4são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual são ligados para formar um anel heterocíclico saturado de 4-7 membros tendo 1-3 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, em que o anel desse modo formado é opcionalmente substituído com -(R5)n. em algumas modalidades, W é -C(O)N(R4)2, em que os dois grupos R4são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual são ligados para formar um anel heterocíclico saturado de 4-7 membros tendo 1-2 heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, em que o anel desse modo formado é opcionalmente substituído com -(R5)n. Em algumas modalidades, W é -C(O)N(R4)2, em que os dois grupos R4são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual são ligados para formar um anel heterocíclico saturado de 4-7 membros tendo 1 átomo de nitrogênio, em que o anel desse modo formado é opcionalmente substituído com -(R5)n.
[000102] Em algumas modalidades, W é -C(O)N(R4)2, em que os dois grupos R4são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual são ligados para formar um anel heterocíclico saturado de 4-6 membros tendo 1 átomo de nitrogênio, em que o anel desse modo formado é opcionalmente substituído com -(R5)n. Em algumas modalidades, W é -C(O)N(R4)2, em que os dois grupos R4são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual são ligados para formar um anel heterocíclico saturado de 4-6 membros tendo 1 átomo de nitrogênio, em que o anel desse modo formado é opcionalmente substituído com -(R5)n. Em algumas modalidades, W é -C(O)N(R4)2, em que os dois grupos R4são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual são ligados para formar um anel heterocíclico saturado de 4- membros tendo 1 átomo de nitrogênio, em que o anel desse modo formado é opcionalmente substituído com -(R5)n. Em algumas modalidades, W é -C(O)N(R4)2, em que os dois grupos R4são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual são ligados para formar um anel heterocíclico saturado de 4- membros tendo 1 átomo de nitrogênio, em que o anel desse modo formado é substituído com flúor. Em algumas modalidades, W é -C(O)N(R4)2, em que os dois grupos R4são tomados juntos com o átomo de nitrogênio ao qual são ligados para formar um anel heterocíclico saturado de 4 membros tendo 1 átomo de nitrogênio, em que o anel desse modo formado é substituído com pelo menos dois flúores. Em  algumas modalidades, W é .
Figure img0020
[000103] Em algumas modalidades, R1é hidrogênio. Em algumas modalidades, R1é deutério. Em algumas modalidades, R2é hidrogênio. Em algumas modalidades, R2é deutério. Em algumas modalidades, R1e R2 são individualmente hidrogênios.
[000104] Em algumas modalidades, m é 1. Em algumas modalidades, m é 2. Em algumas dessas modalidades, Rx é haloalquila. Em algumas modalidades, Rx é -CF3.
[000105] Em algumas modalidades, Ryé hidrogênio.
[000106] Em algumas modalidades, a presente invenção provê um método de fornecer um composto da fórmula E:
Figure img0021
em que Rx, Rye m são como descritos para um composto da fórmula Z, compreendendo as etapas de: (a) fornecer um composto da fórmula D:
Figure img0022
Em que cada de Rxe m são como definido acima para um composto da fórmula E; e (b) reagir o composto da formula D para formar um composto da fórmula E.
[000107] Em algumas modalidades, as condições eficazes para formar um composto de fórmula D incluem um equivalente de hidrazina. Assim, em algumas modalidades, a etapa (b) do método de fornecimento de um composto de fórmula E inclui a reação do composto de fórmula D com um equivalente de hidrazina sob a forma do composto de fórmula E. Em algumas modalidades, o intermediário D é reagido com hidrato de hidrazina para proporcionar um composto de fórmula E. Em algumas modalidades, o intermediário D é reagido com uma forma protegida de hidrazina, tais como hidrazinacarboxilato de terc-butila e, subsequentemente, desprotegido para fornecer o intermediário D.
[000108] Uma pessoa com conhecimentos comuns na técnica reconhecerá que a adição de hidrazina a intermediário D requer um solvente orgânico polar, aprótico. Solventes orgânicos polares apróticos adequados incluem éteres, tais como dioxano, tetrahidrofurano e éter metil-terc-butílico (MTBE), álcoois tais como álcool isopropílico, e amidas, tais como dimetilformamida (DMF) e dimetilacetamida (DMA). Uma pessoa com conhecimentos comuns na técnica é capaz de selecionar o solvente apropriado para a temperatura de reação desejada.
[000109] Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona um método para a preparação de um composto de fórmula D:
Figure img0023
em que Rxe m são como definido acima para um composto da fórmula Z, compreendendo as etapas de: (a) fornecer um composto da fórmula (C): αCN
Figure img0024
em que cada de Rxe m são como definido acima para um composto da fórmula D; e (b) Reagir o composto da fórmula C para formar um composto da fórmula D.
[000110] Como descrito acima, em algumas modalidades, o intermediário C é tratado com um sal de tiolato para fornecer o intermediário D. Em algumas modalidades, o sal de tiolato é tiolato de sódio. Uma pessoa com conhecimentos comuns na técnica reconhecerá que a reação de intermediário C, com um sal de tiolato, requer o uso de um solvente polar, aprótico. Solventes apróticos polares apropriados incluem éteres, tais como dioxano, tetrahidrofurano e éter metil-terc-butílico (MTBE).
[000111] Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona um método para a preparação de um composto de fórmula B:
Figure img0025
Em que:
[000112] LG é halogênio, -OSO2R ou -OSO2CF3; e cada de R, R1, R1e W são como definido acima para um composto da fórmula Z, compreendendo as etapas de: (a) fornecer um composto da fórmula F: R2 = w (F) em que cada de R2e W é como definido acima para um composto da fórmula B; e (b) reagir o composto da fórmula F para formar um composto da fórmula B.
[000113] Como descrito acima, em algumas modalidades de intermediário B, LG é um halogênio. Em algumas de tais modalidades, um composto de fórmula F é tratado com um sal de haleto. Em algumas modalidades, um composto de fórmula F é tratado com um haleto de sódio. Em algumas de tais modalidades, um composto de fórmula F é tratado com iodeto de sódio. Em algumas modalidades, o intermediário F é tratado com um sal de haleto na presença de um ácido. Os ácidos adequados incluem os ácidos minerais e ácidos orgânicos. Em algumas modalidades, o intermediário F é tratado com um sal de haleto e um ácido orgânico tal como ácido acético. Em algumas modalidades, o intermediário F é tratado com iodeto de sódio na presença de ácido acético para proporcionar um composto de fórmula B.
[000114] Uma pessoa com conhecimentos comuns na técnica reconhecerá que a adição de um sal de haleto de intermediário F requer um solvente orgânico polar, aprótico. Solventes orgânicos polares apróticos adequados incluem éteres, tais como dioxano, tetrahidrofurano e éter metil-terc-butílico (MTBE).
[000115] De acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um método de fornecimento de um composto de fórmula X:
Figure img0026
Ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que cada de R, Rx, Ry, R1, R2, R4e m são como definido acima com relação a um composto da fórmula Z, Compreendendo as etapas de: (a) fornecer um composto da fórmula E: 
Figure img0027
Em que cada de Rx, Rye m são como definido acima para um composto da fórmula X; e (b) reagir o composto da formula E com uma olefina da fórmula G:
Figure img0028
Em que: LG é halogênio, -OSO2R ou -OSO2CF3; e Cada de R, R1, R2e R4são como definido acima Na presença de um base nucleofílica estericamente impedida para formar um composto da formula X. De acordo com outro aspect a presente invenção prove um método de fornecer um composto da fórmula W:
Figure img0029
Ou um sal farmaceuticamente em que cada de R, Rx, Ry, R1, R2, R5, m e n são como definido acima com relação a um composto da fórmula Z, Compreendendo as etapas de: (a) fornecer um composto da fórmula E:
Figure img0030
Em que cada de Rx, Ry e m são como definido acima para um composto da fórmula W; e (b) reagir o composto da formula E com uma olefina da fórmula H:
Figure img0031
Em que: LG é halogênio, -OSO2R ou -OSO2CF3; e Cada de R, R1, R2, R5e n são como definido acima para um composto da fórmula W, Na presença de uma base nucleofílica estericamente impedida para formar um composto da formula W. De acordo com outro aspecto, a presente invenção prove um método de fornecer um composto da fórmula V:
Figure img0032
Ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que cada de R, Rx, Ry, R1, R2, e m são como definido acima com relação a um composto da fórmula Z, Compreendendo as etapas de: (a) fornecer um composto da fórmula E:
Figure img0033
Em que cada de Rx, Rye m são como definido acima para um composto da fórmula V; e (b) reagir o composto da formula E com uma olefina da fórmula J:
Figure img0034
Em que: LG é halogênio, -OSO2R ou -OSO2CF3; e Cada de R, R1e R2é como definido acima para um composto da fórmula V, Na presença de uma base nucleofílica estericamente impedida para formar um composto da fórmula V. Em algumas modalidades, a presente invenção provê um método para preparar um composto da fórmula G:
Figure img0035
Em que: LG é halogênio, -OSO2R ou -OSO2CF3; e Cada de R, R1, R2e R4são como descrito aqui com relação a um composto da fórmula Z, Compreendendo as etapas de: (a) fornecer um composto da fórmula K:
Figure img0036
Em que cada de R2e R4é como definido acima para um composto da fórmula G; e (b) reagir o composto da formula K para formar um composto da fórmula G.
[000116] Como descrito acima, em algumas modalidades do intermediário G, LG é um halogênio. Em algumas de tais modalidades, um composto de fórmula K é  tratado com um sal de haleto. Em algumas modalidades, um composto de fórmula K é tratado com um haleto de sódio. Em algumas de tais modalidades, um composto de fórmula é tratado com iodeto de sódio. Em algumas modalidades, o intermediário K é tratado com um sal de haleto na presença de um ácido. Os ácidos adequados incluem os ácidos minerais e ácidos orgânicos. Em algumas modalidades, o intermediário K é tratado com um sal de haleto e um ácido orgânico tal como ácido acético. Em algumas modalidades, o intermediário K é tratado com iodeto de sódio em presença de ácido acético para proporcionar um composto de fórmula G.
[000117] Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona um método para a preparação de um composto de fórmula K:
Figure img0037
Em que cada de R2e R4é como definido acima com relação a um composto da fórmula Z, Compreendendo as etapas de: (a) fornecer um composto da fórmula L:
Figure img0038
Em que R2é hidrogênio, deutério, trítio ou halogênio; e (c) reagir o composto da fórmula L com HN(R4), em que cada R4é como definido acima com relação a um composto da fórmula K, para formar um composto da fórmula K.
[000118] Em algumas modalidades, um composto de fórmula L é tratado com um agente de acoplamento de amida na presença de HN (R4)2 para formar um composto de fórmula K. Os agentes de acoplamento de amida adequados incluem HOBt, HOAt, HAMDU, HAMTU, PyBOP, PyBrOP, TBTU, HATU e T3P.  Uma pessoa versada na técnica reconhecerá que a utilização de tais reagentes de acoplamento de amida requer o uso de uma base. As bases adequadas incluem bases orgânicas, tais como trietilamina, diisopropiletilamina, piridina, 4- dimetilpiridina (DMAP), e similares.
[000119] Em algumas modalidades, um composto de fórmula L é reagido com um agente de cloração tal como cloreto de tionila para formar um cloreto de acila, o qual é então reagido com HN(R4)2 para formar um composto de fórmula K.
[000120] Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona um método para a preparação de um composto de fórmula G:
Figure img0039
Em que: LG é halogênio, -OSO2R ou -OSO2CF3; e Cada de R, R1, R2e R4são como definido acima com relação a um composto da fórmula Z, compreendendo as etapas de: (a) fornecer um ácido propargílico da fórmula L:
Figure img0040
Em que R2é como definido acima para um composto da fórmula G; (b) reagir o composto da formula L com um álcool tendo a fórmula HO-R para formar um éster propargílico da fórmula M:
Figure img0041
Em que cada de R e R2é como definido acima para um composto da fórmula G; (c) reagir o éster propargílico da formula M para formar um composto da fórmula N:
Figure img0042
Em que cada de R, R1, R2e LG são como definido acima para um composto da fórmula G; (d) hidrolisar o composto da formula N para formar um composto da fórmula Q:
Figure img0043
Em que cada R, R1, R2e LG são como definido acima para um composto da fórmula G; e (e) reagir o composto da formula Q com HN(R4)2, em que cada R4é como definido acima para um composto da fórmula G, para formar um composto da fórmula G.
[000121] Em algumas modalidades, um ácido propargílico de fórmula L é tratado com um álcool para formar um éster propargílico de fórmula M. Álcoois adequados incluem metanol, etanol e isopropanol. Uma pessoa versada na técnica reconhecerá que a esterificação de um ácido propargílico de fórmula L pode ser efetuada por ácido catalítico. Assim, em algumas modalidades, um ácido propargílico de fórmula L é tratado com metanol ou etanol, na presença de ácido sulfúrico catalítico para proporcionar um éster propargílico de fórmula M.
[000122] Uma pessoa versada na técnica reconhecerá que essa esterificação pode ser realizada a temperaturas de aproximadamente 25°C a aproximadamente 100°C, ou até ao ponto de ebulição do álcool. Em algumas modalidades, a esterificação de um ácido propargílico de fórmula L é aquecida até refluxo (ponto de ebulição do álcool).
[000123] Como descrito acima, em algumas modalidades de um composto de fórmula N, LG é um halogênio. Em algumas de tais modalidades, um composto de fórmula M é tratado com um sal de haleto. Em algumas modalidades, um composto de fórmula M é tratado com um haleto de sódio. Em algumas de tais modalidades, um composto de fórmula M é tratado com iodeto de sódio. Em algumas modalidades, um composto de fórmula M é tratado com um sal de haleto na presença de um ácido. Os ácidos adequados incluem os ácidos minerais e ácidos orgânicos. Em algumas modalidades, um composto de fórmula M é tratado com um sal de haleto e um ácido orgânico tal como ácido acético. Em algumas modalidades, um composto de fórmula M é tratado com iodeto de sódio na presença de ácido acético para proporcionar um composto da fórmula N.
[000124] Em algumas modalidades, o éster de um composto de fórmula N é hidrolisado com o ácido acrílico. As condições de hidrólise adequadas são conhecidas para aqueles versados na técnica e inclui o hidróxido, tal como hidróxido de lítio, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio e hidróxido de césio, na presença de água. Uma pessoa com conhecimentos comuns na técnica reconhecerá que tal hidrólise pode ser realizada a temperaturas de aproximadamente 25°C a aproximadamente 100°C. Em algumas modalidades, a hidrólise de um acrilato de fórmula N é aquecida até refluxo.
[000125] Em algumas modalidades, um ácido acrílico de fórmula Q é reagido com HN(R4)2 para formar um composto de fórmula G. Em algumas modalidades, um ácido acrílico de fórmula Q é tratado com um agente de acoplamento de amida na presença de HN(R4)2 para formar um composto de fórmula G. Os agentes de acoplamento de amida adequados incluem HOBt, HOAt, HAMDU, HAMTU, PyBOP, PyBrOP, TBTU, HATU e T3P. Uma pessoa com conhecimentos comuns na técnica reconhecerá que a utilização de tais reagentes de acoplamento de amida requer o uso de uma base. As bases adequadas incluem bases orgânicas, tais como trietilamina, diisopropiletilamina, piridina, 4-dimetilpiridina (DMAP), e similares.
[000126] Em algumas modalidades, um composto de fórmula Q é reagido com um agente de cloração tal como cloreto de tionila para formar um cloreto de acila, o qual é então reagido com HN(R4)2 para formar um composto de fórmula G.
[000127] Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona um método de fornecimento de um composto de fórmula V:
Figure img0044
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que cada de R, Rx, Ry, R1, R2e m são como definido acima com relação a um composto da fórmula Z, compreendendo as etapas de: (a) fornecer um composto da fórmula L:
Figure img0045
em que R2é como definido acima para um composto da fórmula V; (b) reagir o composto da formula L com para formar um composto da fórmula R:
Figure img0046
Figure img0047
em que R2 é como definido acima para um composto da fórmula V; (c) reagir o composto da formula R para fornecer um composto da fórmula J:
Figure img0048
Em que: LG é halogênio, -OSO2R ou -OSO2CF3; e cada de R, R1e R2é como definido acima para um composto da fórmula V; e (d) reagir o composto da formula J com um composto da formula E:
Figure img0049
em que cada de Rx, Rye m são como definido acima para um composto da fórmula V, na presença de uma base nucleofílica estericamente impedida para fornecer um composto da fórmula V.
[000128] Em algumas modalidades, a presente invenção provê um método de fornecer um composto da fórmula V:
Figure img0050
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que cada de R, Rx, Ry, R1, R2e m são como definido acima com relação a um composto da fórmula Z, compreendendo as etapas de: (a) fornecer um composto da fórmula L:
Figure img0051
em que R2é como definido acima para um composto da fórmula V; (b) reagir o composto da formula L com um álcool tendo a fórmula HO-R para formar um composto da fórmula M:
Figure img0052
em que cada de R e R2é como definido acima para um composto da fórmula V, (c) reagir o composto da formula M para fornecer um composto da fórmula N:
Figure img0053
em que: LG é halogênio, -OSO2R ou -OSO2CF3; e cada de R, R1e R2é como definido acima para um composto da fórmula V; (d) hidrolisar o composto da formula N para formar um composto da fórmula Q:
Figure img0054
em que cada de R1, R2e LG é como definido acima para um composto da fórmula V; (e) reagir o composto da formula Q com F >■/ para formar um composto da fórmula J:
Figure img0055
Figure img0056
em que: LG é halogênio, -OSO2R ou -OSO2CF3; e cada de R, R1e R2é como definido acima para um composto da fórmula V; e (f) reagir o composto da formula J com um composto da fórmula E:
Figure img0057
em que cada de Rx, Rye m são como definido acima para um composto da fórmula V, na presença de uma base nucleofílica estericamente impedida para fornecer um composto da fórmula V.
Definições
[000129] Os compostos desta invenção incluem aqueles descritos geralmente acima, e são ainda ilustrados pelas classes, subclasses e espécies aqui revelados. Como aqui utilizado, as seguintes definições aplicam-se a menos que indicado de outra forma. Para os fins da presente invenção, os elementos químicos são identificados de acordo com a Tabela Periódica de Elementos, versão CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75aEd. Além disso, os princípios gerais da química orgânica são descritos em "Organic Chemistry", Thomas Sorrell, Science University Books, Sausalito: 1999, e "March’s Advanced Organic Chemistry", 5a Ed, Ed:. Smith, MB e March, J., John Wiley & Sons, Nova York: 2001, o teor integral do qual é aqui incorporado a título de referência.
[000130] A menos que especificado de outro modo neste relatório descritivo, a nomenclatura utilizada no presente relatório descritivo, geralmente segue os exemplos e regras estabelecidas na Nomenclatura de Química Orgânica, seções A, B, C, D, E, F e H, Pergamon Press, Oxford, 1979, a qual é incorporada a título de referência, por seus nomes de estrutura química exemplares e regras sobre como nomear estruturas químicas. Opcionalmente, um nome de um composto pode ser gerado usando um programa de nomenclatura química: ACD/ChemSketch, Versão 5.09/Setembro de 2001, Advanced Chemistry Development, Inc., Toronto, Canadá.
[000131] Os compostos da presente invenção podem ter centros assimétricos, eixos quirais, e planos quirais (por exemplo, tal como descrito em: E.L. Eliel e S.H. Wilen, Stereo-chemistry of carbono compounds, de John Wiley & Sons, Nova York, 1994, páginas 1119-1190), e ocorrer como racematos, misturas racêmicas, e como diastereômeros individuais, ou enantiômeros, com todos os isômeros e misturas possíveis dos mesmos, incluindo isômeros ópticos, sendo incluídos na presente invenção.
[000132] O termo "alifático"ou "grupo alifático", tal como aqui utilizado, designa um radical hidrocarboneto monovalente, que é de cadeia linear (isto é, não ramificado), ramificado ou cíclico (incluindo fundido, ligado, e policíclico espiro-fundido). Um grupo alifático pode ser saturado ou pode conter uma ou mais unidades de insaturação, porém não é aromático. A menos que especificado em contrário, os grupos alifáticos contêm 1-6 átomos de carbono. Entretanto, em algumas modalidades, um grupo alifático contém 1-10 ou 2-8 átomos de carbono. Em algumas modalidades, os grupos alifáticos contêm 1-4 átomos de carbono e, em ainda outras modalidades, os grupos alifáticos contêm 1-3 átomos de carbono. Grupos alifáticos adequados incluem, mas não estão limitados a, linear ou ramificada, alquila, alcenila, e alcinila, e seus híbridos tais como (cicloalquil)alquila, (cicloalcenil)alquila ou (cicloalquil)alcenila.
[000133] O termo "alquila", como aqui utilizado, significa um grupo alifático, de cadeia linear ou ramificada saturado. Em um aspecto, um grupo alquila contém 1-10 ou 2-8 átomos de carbono. Alquila inclui, mas não está limitado a, metila, etila, propila, iso-propila, n-butila, sec-butila, t-butila, e similares.
[000134] O termo "alcenila", como aqui utilizado, significa um grupo alifático de cadeia linear ou ramificada possuindo uma ou mais ligações duplas carbono- carbono (isto é,-CH = CH-). Em um aspecto, um grupo alcenila tem dois a oito átomos de carbono, e inclui, por exemplo, e sem estar limitado a eles, etenila, 1-propenila, 1-butenila e similares. O termo "alcenila" abrange radicais que têm ligações duplas carbono-carbono nos "cis" e "trans" ou, alternativamente, configurações "E" e "Z". Se um grupo alcenila incluir mais do que uma ligação dupla carbono- carbono, cada ligação dupla carbono-carbono é, independentemente, uma ligação dupla cis ou trans, ou uma mistura dos mesmos.
[000135] O termo "alcinila", como aqui utilizado, significa um radical alifático de cadeia linear ou ramificada, tendo uma ou mais ligações triplas carbono- carbono (isto é, -C = C-) . Em um aspecto, um grupo de alquila tem dois a oito átomos de carbono, e inclui, por exemplo, e sem estar limitado a estes, 1-propinila (propargila), 1-butinila e similares.
[000136] Os termos "cicloalifático", "carbociclila", "carbociclo" e "carbocíclico", utilizados sozinho ou como parte de uma fração maior, referem-se a um sistema de anel monocíclico ou bicíclico alifático cíclico saturado ou parcialmente insaturado, tal como descrito aqui, possuindo de 3 a 10 membros, em que o sistema de anel alifático é opcionalmente substituído como definido acima e descrito aqui. Grupos cicloalifáticos incluem, sem limitação, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclopentenila, ciclohexila, ciclohexenila, cicloheptila, cicloheptenila, ciclo-octila, ciclo-octenila e ciclo- octadienila. Os termos "cicloalifático", "carbociclila", "carbociclo" e "carbocíclico" incluem também anéis alifáticos que são fundidos com um ou mais anéis aromáticos ou não aromáticos, tais como deca-hidronaftila, tetra- hidronaftila, decalina, ou biciclo[2,2,2]octano.
[000137] O termo "cicloalquila", tal como aqui utilizado, significa um sistema de anel monocíclico ou bicíclico alifático saturado cíclico com 3-10 membros. Um cicloalquila pode ser opcionalmente substituído tal como aqui descrito. Em algumas modalidades, um grupo cicloalquila tem 3-6 carbonos.
[000138] O termo "heterocicloalquila", como aqui utilizado, significa um sistema de anel alifático, saturado ou insaturado, em que pelo menos um átomo de carbono é substituído com um heteroátomo selecionado a partir de N, S e O. O heterocicloalquila pode conter um ou mais anéis, que podem ser ligados juntos de uma maneira pendente ou podem ser fundidos. Em um aspecto, uma heterocicloalquila é um sistema de anel de três a sete membros e inclui, por exemplo, e sem estar limitado a estes, piperidinila, piperazinila, pirrolidinila, tetra-hidrofuranila e similares.
[000139] O termo "heteroátomo"significa um ou mais de oxigênio, enxofre, nitrogênio, fósforo ou silício, e inclui qualquer forma oxidada de nitrogênio, enxofre, fósforo, ou de silício, a forma quaternizada de qualquer nitrogênio básico, e um nitrogênio substituível de um anel heterocíclico, por exemplo N (como em 3,4-di-hidro-2H- pirrolila), NH (como em pirrolidinila) ou NR+(como em pirrolidinila N-substituída).
[000140] O termo "insaturado", como aqui utilizado, significa que uma fração tem uma ou mais unidades de insaturação.
[000141] O termo "halo" ou "halogênio", tal como aqui utilizado, significa halogênio e inclui, por exemplo, e sem estar limitado a estes, flúor, cloro, bromo, iodo e similares, em ambas as formas radioativas e não radioativas.
[000142] O termo "haloalquila", como aqui utilizado, significa um grupo alifático, que é substituído com um ou mais átomos de halogênio. Em algumas modalidades, haloalquila refere-se a um grupo alifático perhalogenado. Em algumas modalidades, haloalquila refere-se a um grupo alquila que é substituído com um ou mais átomos de halogênio. Grupos haloalquila exemplificativos incluem -CF3, -CCl3, -CF2CH3, -CH2CF3, -CH2(CF3)2, -CF2(CF3)2, e similares.
[000143] O termo "arila", sozinho ou em combinação, tal como aqui utilizado, significa um sistema carbocíclico aromático contendo um ou mais anéis, que podem ser ligados juntos de uma maneira pendente ou podem ser fundidos. Em modalidades particulares, arila é um, dois ou três anéis. Em um aspecto, a arila tem cinco a doze átomos de anel. O termo "arila" abrange radicais aromáticos tais como fenila, naftila, tetra-hidronaftila, indanila, bifenila, fenantrila, antrila e acenaftila. Um grupo "arila" pode ter 1 a 4 substituintes, tais como alquila inferior, hidroxila, halo, haloalquila, nitro, ciano, alcoxi, alquilamino inferior e similares.
[000144] O termo "heteroarila", sozinho ou em combinação, tal como aqui utilizado, significa um sistema aromático em que pelo menos um átomo de carbono é substituído por um heteroátomo selecionado a partir de N, S e O. Uma heteroarila pode conter um ou mais anéis, que podem ser ligados juntos de uma maneira pendente ou podem ser fundidos. Em modalidades particulares, heteroarila é um, dois ou três anéis. Em um aspecto, a heteroarila tem cinco a doze átomos de anel. O termo "heteroarila" abrange grupos heteroaromáticos como triazolila, imidazolila, pirrolila, pirazolila, tetrazolila, piridila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, indolila, furila, benzofurila, tienila, benzotienila, quinolila, oxazolila, oxadiazolila, isoxazolila e similares. Um grupo "heteroarila" pode ter 1 a 4 substituintes, tais como alquila inferior, hidroxila, halo, haloalquila, nitro, ciano, alcoxi, alquilamino inferior e similares.
[000145] Entende-se que substituintes e padrões de substituição nos compostos da invenção podem ser selecionados por uma pessoa versada na técnica para proporcionar compostos que são quimicamente estáveis e que podem ser prontamente sintetizados por técnicas conhecidas na arte, bem como os métodos descritos abaixo. Em geral, o termo "substituído", se precedido pelo termo "opcionalmente" ou não, significa que um ou mais hidrogênios da fração designada são substituídos com um substituinte adequado. A menos que indicado de outra forma, um grupo "opcionalmente substituído"pode ter um substituinte adequado em cada posição substituível do grupo, e quando mais do que uma posição em uma dada estrutura pode ser substituída com mais do que um substituinte selecionado a partir de um grupo especificado, o substituinte pode ser igual ou diferente em cada posição. Alternativamente, um grupo "opcionalmente substituído"pode ser não substituído.
[000146] As combinações de substituintes previstas por esta invenção são de preferência aquelas que resultam na formação de compostos estáveis ou quimicamente exequíveis. Se um substituinte for ele mesmo substituído com mais do que um grupo, é entendido que estes múltiplos grupos possam estar no mesmo átomo de carbono ou em diferentes átomos de carbono, desde que resulte em uma estrutura estável. O termo "estável", tal como aqui utilizado, refere-se a compostos que não são substancialmente alterados quando sujeitos a condições que permitem a sua produção, detecção, e, em certas modalidades, a sua recuperação, purificação, e uso para uma ou mais das finalidades aqui reveladas.
[000147] Substituintes monovalentes adequados em um átomo de carbono substituível de um grupo "opcionalmente substituído" são, independentemente, halogênio, -(CH2)o-4R°; -(CH2)o-4OR°; -O(CH2)o-4Ro, -O-(CH2)o-4C(O)OR°; -(CH2)o- 4CH(OR°)2; -(CH2)O-4SR°; -(CH2)0-4Ph, que pode ser substituído com R°; -(CH2)o-4O(CH2)o-1Ph que pode ser substituído com R°; -CH=CHPh, que pode ser substituído com R°; -(CH2)o-4O(CH2)o-1-piridil que pode ser substituído com R°; -NO2; -CN; -N3; -(CH2)o-4N(R°)2; -(CH2)o-4N(R°)C(O)R°; -N(R°)C(S)R°; -(CH2)o-4N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)C(S)NR°2; -(CH2)o-4N(R°)C(O)OR°; -N(R°)N(R°)C(O)R°; -N(R°)N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)N(R°)C(O)OR°; -(CH2)o-4C(O)R°; -C(S)R°; -(CH2)o-4C(O)OR°; -(CH2)o-4C(O)SR°; -(CH2)o-4C(O)OSiR°3; -(CH2)o-4OC(O)R°; -OC(O)(CH2)o-4SR-, SC(S)SR°; -(CH2)o-4SC(O)R°; -(CH2)o-4C(O)NR°2; -C(S)NR°2; -C(S)SR°; -SC(S)SR°, -(CH2)o-4OC(O)NR°2; -C(O)N(OR°)R°; -C(O)C(O)R°; -C(O)CH2C(O)R°; -C(NOR°)R°;-(CH2)o-4SSR°; -(CH2)o-4S(O)2R°; -(CH2)o-4S(O)2OR°; -(CH2)o-4OS(O)2R°; -S(O)2NR°2; -(CH2)o-4S(O)R°; -N(R°)S(O)2NR°2; -N(R°)S(O)2R°; -N(OR°)R°; -C(NH)NR°2; -P(O)2R°; -P(O)R°2; -OP(O)R°2; -OP(O)(OR°)2; SiR°3; -(alquileno de C1-4 linear ou ramificado)O-N(R°)2; ou -(alquileno C1-4 linear ou ramificado)C(O)O-N(R°)2, em que cada R° pode ser substituído como definido abaixo e é independentemente hidrogênio, C1-6 alifático, -CH2Ph, -O(CH2)o-1Ph, -CH2-(anel heteroarila de 5-6 membros) ou um anel arila saturado, parcialmente insaturado, de 5-6 membros tendo o-4 heteroátomos selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, ou, apesar da definição acima, duas ocorrências independentes de R°, tomados em conjunto com os seus átomo(s) intermediário(s), formam um anel arilo monocíclico ou bicíclico saturado, parcialmente insaturado, de 3-12 membros com 0-4 heteroátomos selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre, que pode ser substituído como definido abaixo.
[000148] Substituintes monovalentes adequados em R° (ou o anel formado tomando duas ocorrências independentes de R° em conjunto com os seus átomos intervenientes), são, independentemente, halogênio, -(CH2)O-2R*, -(haloR*), -(CH2)o—2θH, -(CH2)O-20R*, -(CH2)O-2CH(OR*)2; -O(haloR*), -CN, -N3, -(CH2)O-2C(0) R*, -(CH2)o-2C(O)OH, -(CH2)o-2C(O)OR*, -(CH2)o-2SR*, -(CH2)o-2SH, -(CH2)o-2NH2, -(CH2)o-2NHR*, -(CH2)o-2NR*2, -NO2, -SiR*3, -OSiR*3, -C(O)SR*, -(alquileno C1-4 linear ou ramificado)C(O)OR*, ou -SSR*em que cada R*é não substituído ou quando precedido por "halo"é substituído com apenas um ou mais halogênios, e é selecionado, independentemente, a partir de C1-4 alifático, -CH2Ph, -O(CH2)o-1Ph, ou um anel arila saturado, parcialmente insaturado, de 5-6 membros tendo o-4 heteroátomos selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigénio, e enxofre. Substituintes divalentes adequados em um átomo de carbono saturado de R° incluem =O e =S.
[ooo149] Substituintes divalentes adequados em um átomo de carbono saturado de um grupo "opcionalmente substituído"incluem o seguinte: =O, =S, =NNR*2, =NNHC(O)R*, =NNHC(O)OR*, =NNHS(O)2R*, =NR*, =NOR*, -O(C(R*2))2-3O-, e -S(C(R*2))2-3S-, em que cada ocorrência independente de R*é selecionada de hidrogênio, C1-6 alifático que pode ser substituído, tal como definido abaixo, ou um anel de arila não substituído, de 5-6 membros, saturado, parcialmente insaturado possuindo o-4 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio e enxofre. Substituintes divalentes adequados que estão ligados a átomos de carbono vicinais substituíveis de um grupo "opcionalmente substituído", incluem: -O(CR*2)2-3O-, em que cada ocorrência independente de R* é selecionada a partir de hidrogênio, C1-6 alifático que pode ser substituído como definido abaixo, ou um anel de arila não substituído, de 5-6 membros, saturado, parcialmente insaturado, com 0-4 heteroátomos selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio, e enxofre.
[000150] Substituintes adequados no grupo alifático de R* incluem halogênio -R*, - (haloR*) , -OH, — OR*, -OChaloR*), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR*, -NH2, —NHR*, —NR*2, e -NO2, em que cada R* é não substituído ou onde precedido por “halo” é substituído somente com um ou mais halogênios, e é independentemente C1-4 alifático, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, ou um anel de arila de 5-6- membros, saturado, parcialmente insaturado, possuindo 0-4 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigénio e enxofre.
[000151] Os substituintes adequados em um nitrogênio substituível de um grupo "opcionalmente substituído", incluem -R+, -NR+2, -C(O)R+, -C(O)OR+, -C(O)C(O)Rt, -C(O)CH2C(O)R+, -S(O)2Rf, -S(O)2NRf2, -C(S)NR+2, -C(NH)NRf2, e -N(Rt)S(O)2Rt; em que cada Rfé independentemente hidrogênio, C1-6 alifático que pode ser substituído como definido abaixo, -OPh não substituído, ou um anel de arila de não substituído de 5-6 membros saturado, parcialmente insaturado, tendo 0-4 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, ou, apesar da definição acima, duas ocorrências independentes de Rftomadas em conjunto com seu(s) átomo(s) interveniente(s) formam um anel de arila monocíclico ou bicíclico não substituído de 3-12 membros saturado, parcialmente insaturado, com 0-4 heteroátomos selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre.
[000152] Substituintes adequados no grupo alifático de R'são independentemente halogênio, -R*, -(haloR*), -OH, -OR*, -O(haloR*), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR*, -NH2, -NHR*, -NR*2, ou -NO2, em que cada R*é não substituído ou onde precedido por “halo” é substituído somente com um ou mais halogênios, e é independentemente C1-4 alifático, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, ou um anel de arila de 5-6-membros saturado, parcialmente insaturado, tendo 0-4 heteroátomos selecionados independentemente a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre.
[000153] Tal como aqui utilizado, "hidrazina equivalente" significa um reagente químico que pode ser usado para introduzir uma fração-N-N em uma molécula. Equivalentes de hidrazina incluem hidrato de hidrazina, bem como as formas protegidas de hidrazina, tal como terc-butil carboxilato hidrazina.
[000154] Tal como aqui usado, "grupo de saída" refere-se a um grupo funcional que é deslocado a partir de uma molécula durante uma reação química. Os grupos de saída incluem halogênios, assim como grupos sulfonato, tais como tosilato e mesilato.
[000155] Tal como aqui utilizado, o termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se àqueles sais que são, dentro do âmbito do bom julgamento médico, adequados para utilização em contato com os tecidos de humanos e animais inferiores sem as indevidas toxicidades, irritação, resposta alérgica e similares, e são comensuráveis com uma razão benefício / risco razoável. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na arte. Por exemplo, S.M. Berge e outros descrevem sais farmaceuticamente aceitáveis em detalhe em J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19, os ensinamentos relevantes dos quais são aqui incorporados a título de referência na íntegra. Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da presente invenção incluem sais derivados de ácidos e bases inorgânicas e orgânicas apropriadas que são compatíveis com o tratamento de pacientes.
[000156] Os exemplos de sais de adição de ácido não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis são os sais de um grupo amino formado com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico e ácido perclórico ou com ácidos orgânicos tais como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico ou ácido malônico ou usando outros métodos usados na arte tais como troca iónica. Outros sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis diferentes incluem sais de adipato, alginato, ascorbato, aspartato, benzenossulfonato, benzoato, bissulfato, borato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, formato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, iodidrato, 2-hidroxi- etanossulfonato, lactobionato, lactato, laurato, lauril sulfato, malato, maleato, malonato, metanossulfonato, 2- naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3- fenilpropionato, fosfato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartarato, tiocianato, p- toluenossulfonato, undecanoato, valerato, e similares.
[000157] Em algumas modalidades, os ácidos inorgânicos exemplificativos que formam sais apropriados incluem, mas não se limitam a estes, ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico e ácido fosfórico e sais metálicos de ácidos tais como o ortofosfato monohidrogênio de sódio e sulfato de hidrogênio de potássio. Ácidos orgânicos ilustrativos que formam sais adequados incluem os ácidos mono-, di- e tricarboxílicos. Ilustrativos de tais ácidos são, por exemplo, acético, glicólico, láctico, pirúvico, malônico, succínico, glutárico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, maleico, hidroximaleico, benzóico, hidroxibenzóico, fenilacético, cinâmico, salicílico, 2-fenoxibenzóico, ácido p-toluenossulfônico e outros ácidos sulfônicos tais como ácido metanossulfônico e ácido 2-hidroxietanossulfônico. Quer os sais de mono- ou diácido podem ser formados e esses sais podem existir quer em uma forma hidratada, solvatada ou substancialmente anidra. Em geral, os sais de adição de ácidos destes compostos são mais solúveis em água e em diversos solventes orgânicos hidrofílicos, e em geral, demonstram pontos de fusão mais elevados em comparação com as suas formas de base livre.
[000158] Em algumas modalidades, os sais de adição de ácido dos compostos de fórmula I são mais adequadamente formados a partir de ácidos farmaceuticamente aceitáveis, e incluem, por exemplo, aqueles formados com ácidos inorgânicos, por exemplo, ácido clorídrico, sulfúrico ou fosfórico e ácidos orgânicos, por exemplo, ácido succínico, maleico, acético ou fumárico.
[000159] Outros sais não farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, oxalatos podem ser usados, por exemplo, no isolamento de compostos de fórmula I para utilização laboratorial ou para subsequente conversão em um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável. Também estão incluídos dentro do âmbito da invenção os sais de adição de base (como sais de sódio, potássio e amónio), solvatos e hidratos dos compostos da invenção. A conversão de um determinado sal de composto em um sal de composto desejado é conseguida por aplicação de técnicas convencionais, bem conhecidas por uma pessoa versada na técnica.
[000160] Um "sal de adição de base farmaceuticamente aceitável" é qualquer sal de adição de base orgânica ou inorgânica não tóxica dos compostos de ácido representados pela fórmula I ou qualquer dos seus intermediários. Bases inorgânicas ilustrativas que formam sais adequados incluem, mas não estão limitados aos mesmos, hidróxidos de lítio, de sódio, de potássio, de cálcio, de magnésio ou de bário. As bases orgânicas ilustrativas que formam sais adequados incluem alifáticos, alicíclicos ou aminas aromáticas orgânicas tais como metilamina, trimetilamina e picolina ou amoníaco. A seleção do sal apropriado pode ser importante de modo a que uma funcionalidade de éster, se for o caso, em outras posições da molécula é não hidrolisada. Os critérios de seleção para o sal apropriado serão conhecidos de uma pessoa versada na técnica.
[000161] Os sais derivados de bases apropriadas incluem metal alcalino, metal alcalino-terroso, amônio e N + (C1-4 alquila)4 sais. Sais alcalinos ou alcalino-terrosos representativos de metal terroso incluem sódio, lítio, potássio, cálcio, magnésio, e outros similares. Além disso, os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, quando apropriado, amónio não tóxico, amónio quaternário, e cátions de amina formados usando contra-íons tais como haleto, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, sulfonato de alquila inferior e sulfonato de arila.
[000162] A menos que indicado de outra forma, as estruturas aqui ilustradas pretendem também incluir todas as formas isoméricas (por exemplo, enantiomérica, diastereoisomérica e geométrica (ou conformacionais)) da estrutura, por exemplo, as configurações R e S para cada centro assimétrico, isômeros de ligação dupla Z e E, e isômeros de conformação Z e E. Portanto, os isômeros estereoquímicos individuais bem como misturas enantiomérica, diastereoisomérica e geométrica (ou conformacional) dos presentes compostos estão dentro do âmbito da invenção. A menos que indicado de outra forma, todas as formas tautoméricas dos compostos da invenção estão dentro do âmbito da invenção.
[000163] Além disso, a menos que indicado de outra forma, as estruturas aqui descritas também pretendem incluir compostos que diferem apenas na presença de um ou mais átomos isotopicamente enriquecidos. Por exemplo, os compostos produzidos pela substituição de um átomo de hidrogénio por deutério ou trítio, ou de um átomo de carbono com um carbono enriquecido 13C ou 14C estão dentro do âmbito da presente invenção. Tais compostos são úteis, por exemplo, como ferramentas analíticas, como sondas em ensaios biológicos, ou como agentes terapêuticos de acordo com a presente invenção.
[000164] O termo "estereoisômeros" é um termo geral para todos os isómeros de uma molécula individual que diferem apenas na orientação dos seus átomos no espaço. O mesmo inclui isómeros de imagem em espelho (enantiômeros), geométricos (cis / trans) isômeros e isômeros de compostos com mais do que um centro quiral que não são imagens em espelho um do outro (diastereômeros).
[000165] O termo "tratamento" ou "tratar" significa aliviar um ou mais sintomas, eliminar a causa de um ou mais sintomas, quer em uma base temporária ou permanente, ou para prevenir ou retardar o aparecimento de um ou mais sintomas associados a um distúrbio ou condição.
[000166] O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" significa uma quantidade de um composto que é eficaz no tratamento ou diminuição da gravidade de um ou mais sintomas de um distúrbio ou condição.
[000167] O termo "veículo farmaceuticamente aceitável"significa um solvente não-tóxico, dispersante, excipiente, adjuvante ou outro material que é misturado com o ingrediente ativo, a fim de permitir a formação de uma composição farmacêutica, isto é, uma forma de dosagem capaz de ser administrada a um paciente. Um exemplo de tal veículo é o óleo farmaceuticamente aceitável tipicamente utilizado para administração parenteral. Os veículos farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na arte.
[000168] Ao apresentar os elementos aqui revelados, os artigos "um", "uma", "o", e "referido" pretendem significar que existem um ou mais dos elementos. Os termos "compreendendo", "tendo" e "incluindo" destinam- se a ser ilimitados e significam que pode haver elementos adicionais além dos elementos listados.
Formulação e Administração Composições farmaceuticamente aceitáveis
[000169] Outra modalidade da invenção é uma composição que compreende um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um veículo farmaceuticamente aceitável, adjuvante ou veículo. A quantidade de composto em uma composição da invenção é uma quantidade que é eficaz para inibir de forma mensurável CRMl em uma amostra biológica ou em um paciente. Em certas modalidades, uma composição da invenção é formulada para administração a um paciente necessitando da composição. O termo "paciente", como aqui utilizado, significa um animal. Em algumas modalidades, o animal é um mamífero. Em certas modalidades, o paciente é um paciente veterinário (isto é, um paciente mamífero não-humano). Em algumas modalidades, o paciente é um cão. Em outras modalidades, o paciente é um ser humano.
[000170] A frase "veículo farmaceuticamente aceitável, adjuvante ou veículo"refere-se a um veículo não tóxico, adjuvante ou veículo que não destrua a atividade farmacológica do composto com o qual é formulado. Veículos farmaceuticamente aceitáveis, adjuvantes ou veículos que podem ser utilizados nas composições da presente invenção incluem, mas não estão limitados a, permutadores de íons, alumina, estearato de alumínio, lecitina, proteínas séricas, tais como albumina do soro humano, substâncias tampão tais como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potássio, misturas de glicerídeo parciais de ácidos graxos saturados vegetais, água, sais ou eletrólitos, tais como sulfato de protamina, fosfato de hidrogénio dissódico, fosfato de potássio, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trissilicato de magnésio, polivinil- pirrolidona, substâncias à base de celulose, polietileno- glicol, carboximetilcelulose de sódio, poliacrilatos, ceras, polímeros de polietileno-polioxipropileno, polietileno-glicol e gordura de lã.
[000171] As composições da presente invenção podem ser administradas por via oral, parenteral (incluindo subcutânea, intramuscular, intravenosa e intradérmica), por pulverização de inalação, por via tópica, retal, nasal, bucal, vaginal ou por meio de um reservatório implantado. Em algumas modalidades, os compostos ou composições fornecidas são administráveis por via intravenosa e / ou por via intraperitoneal.
[000172] O termo "parenteral", tal como aqui utilizado, inclui injeção subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraocular, intravítrea, intra-articular, intra-sinovial, intrasternal, intratecal, intra-hepática, técnicas de injeção ou infusão intralesionais intraperitoneais e intracranianas. De preferência, as composições são administradas por via oral, por via subcutânea, intraperitoneal ou intravenosa. Formas injetáveis esterilizadas das composições da presente invenção podem ser uma suspensão aquosa ou oleaginosa. Estas suspensões podem ser formuladas de acordo com técnicas conhecidas na arte utilizando agentes adequados de dispersão ou agentes umectantes e agentes de suspensão. A preparação injetável estéril pode também ser uma solução injetável estéril ou suspensão em um diluente parenteralmente aceitável, não tóxico, ou solvente, por exemplo, uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os veículos aceitáveis e solventes que podem ser empregados estão a água, solução de Ringer e solução isotônica de cloreto de sódio. Além disso, óleos estéreis, fixos são convencionalmente utilizados como um meio solvente ou de suspensão.
[000173] As composições farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser administradas por via oral em qualquer forma de dosagem oralmente aceitável incluindo, mas não limitado a, cápsulas, comprimidos, suspensões e soluções aquosas. No caso de comprimidos para utilização oral, veículos comumente utilizados incluem lactose e amido de milho. Os agentes lubrificantes, tais como estearato de magnésio, são também tipicamente adicionados. Para administração oral em uma forma de cápsula, os diluentes úteis incluem lactose e amido de milho seco. Quando são necessárias suspensões aquosas para uso oral, o ingrediente ativo é combinado com emulsionantes e agentes de suspensão. Se desejado, também podem ser adicionados certos agentes edulcorantes, aromatizantes ou corantes. Em algumas modalidades, uma formulação oral, apresentada é formulada para liberação imediata ou / liberação retardada contínua. Em algumas modalidades, a composição é adequada para administração bucal ou sublingual, incluindo comprimidos e pastilhas. Um composto proporcionado pode também estar na forma microencapsulada.
[000174] Alternativamente, as composições farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser administradas na forma de supositórios para administração retal. As composições farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção também podem ser administradas topicamente, especialmente quando o alvo do tratamento inclui áreas ou órgãos facilmente acessíveis por aplicação tópica, incluindo doenças dos olhos, da pele, ou do trato intestinal inferior. As formulações tópicas apropriadas são facilmente preparadas para cada uma destas áreas ou órgãos.
[000175] A aplicação tópica para o trato intestinal inferior pode ser efetuada em uma formulação de supositório retal (ver acima) ou em uma formulação de enema adequada. Podem também ser utilizados adesivos topicamente transdérmicos.
[000176] Para utilização oftálmica, as composições farmaceuticamente aceitáveis podem ser formuladas como suspensões micronizadas ou em uma pomada, tal como petrolato.
[000177] As composições farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção também podem ser administradas por aerossol nasal ou inalação.
[000178] Em algumas modalidades, as composições farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção são formuladas para administração intraperitoneal.
[000179] A quantidade de compostos da presente invenção que pode ser combinada com os materiais de veículo para produzir uma composição em uma única forma de dosagem variará dependendo do hospedeiro tratado e do modo particular de administração. Em uma modalidade, uma composição é formulada de modo a que uma dosagem entre 0,01-100 mg / kg de peso corporal / dia do inibidor possa ser administrada a um paciente que recebe a composição. Em outra modalidade, a dosagem é de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 100 mg / kg de peso corporal, ou entre 1 mg e 1000 mg / dose, a cada 4 a 120 horas, ou de acordo com as exigências da droga particular. Tipicamente, as composições farmacêuticas desta invenção serão administradas de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 vezes por dia.
[000180] Também deve ser entendido que uma dosagem específica e um regime de tratamento para qualquer paciente em particular dependerá de uma variedade de fatores, incluindo a atividade do composto específico empregado, a idade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, horário de administração, a taxa de excreção, combinação de drogas, a decisão do médico que trata e da gravidade da doença particular a ser tratada. A quantidade de um composto da presente invenção na composição dependerá também do composto particular na composição.
[000181] Em algumas modalidades, a composição inclui ainda um ou mais agentes terapêuticos ou profiláticos adicionais. Quando as composições da presente invenção compreendem uma combinação de um composto das fórmulas aqui descritas e um ou mais agentes terapêuticos ou profiláticos adicionais, tanto o composto como o agente adicional devem estar presentes em níveis de dosagem de entre aproximadamente 1 a 100%, e mais de preferência entre aproximadamente 5 a 95% da dosagem normalmente administrada em um regime de monoterapia. Os agentes adicionais podem ser administrados separadamente, como parte de um regime de doses múltiplas, dos compostos da presente invenção. Alternativamente, os agentes adicionais podem fazer parte de uma única forma de dosagem, misturados em conjunto com um composto da presente invenção em uma única composição.
[000182] Após a melhoria da condição de um paciente, uma dose de manutenção de um composto, composição ou combinação da presente invenção pode ser administrada, se necessário. Subsequentemente, a dosagem ou frequência de administração, ou ambas, podem ser reduzidas, como uma função dos sintomas, para um nível no qual a condição melhorada é retida quando os sintomas foram aliviados até ao nível desejado. Os pacientes podem, contudo, necessitar de tratamento intermitente em uma base em longo prazo após qualquer recorrência dos sintomas da doença
Utilizações dos compostos e composições farmaceuticamente aceitáveis
[000183] Os compostos e as composições aqui descritas são geralmente úteis para a inibição de CRM1 e são, portanto, úteis para o tratamento de uma ou mais doenças associadas com a atividade de CRM1. Assim, em certas modalidades, a presente invenção proporciona um método para o tratamento de um distúrbio mediado por CRM-1 compreendendo a etapa de administrar a um paciente que necessite do mesmo, um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável ou uma composição do mesmo. Os compostos e as composições aqui descritos também podem ser administrados às células em cultura, por exemplo, in vitro ou ex vivo, ou a um sujeito, por exemplo, in vivo, para tratar, prevenir e / ou diagnosticar uma variedade de distúrbios, incluindo aqueles descritos aqui a seguir.
[000184] A atividade de um composto utilizado na presente invenção como inibidor de CRMl pode ser ensaiada in vitro, in vivo ou em uma linhagem de célula. As condições pormenorizadas para ensaiar um composto utilizado na presente invenção como inibidor de CRMl são apresentadas na Exemplificação.
[000185] Tal como aqui utilizado, o termo "distúrbio ou condição mediada por CRMl" ou "distúrbio ou condição associada com a atividade CRMl" significa qualquer doença ou outra condição prejudicial na qual CRMl desempenha um papel. Por conseguinte, outra modalidade da presente invenção relaciona-se com o tratamento ou diminuição da gravidade de uma ou mais doenças em que CRMl desempenha um papel. Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona métodos de tratamento de uma doença associada com a expressão ou a atividade das proteínas p53, p73, p21, pRb, p27, IKB, NFkB, c-Abl, proteínas FOXO, a COX-2 em um sujeito, que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto aqui descrito. Em outra modalidade, a presente invenção refere- se a um método de tratamento ou diminuição da gravidade de uma doença ou condição selecionada a partir de um distúrbio proliferativo (por exemplo, câncer), um distúrbio inflamatório, um distúrbio autoimune, uma infecção viral, um distúrbio oftalmológico ou uma doença neurodegenerativa, o método que compreende a administração a um paciente que necessite do mesmo, um composto ou composição de acordo com a presente invenção. Em uma modalidade mais específica, a presente invenção refere-se a um método de tratamento ou diminuição da gravidade do câncer. Os exemplos específicos de doenças acima são apresentados em detalhe abaixo.
[000186] Os cânceres tratáveis pelos compostos da presente invenção incluem, mas não estão limitados a, doenças malignas hematológicas (leucemias, linfomas, mielomas, síndromes mielodisplásicas e mieloproliferativas) e tumores sólidos, tais como carcinomas (próstata, mama, pulmão, cólon, pâncreas, rim, ovário bem como dos tecidos moles e osteossarcomas, e tumores estromais). O câncer de mama (BC) pode incluir, Câncer de mama semelhante a basal (BLBC), câncer da mama triplo negativo (TNBC) e câncer de mama que é BLBC e TNBC. Além disso, o câncer da mama pode incluir carcinoma de duto ou lóbulo invasivo ou não invasivo, tubular, medular, mucinoso, papilar, carcinoma cribriforme da mama, câncer da mama masculina, o câncer da mama recorrente ou metastático, phyllodes tumor da mama, doença de Paget do mamilo.
[000187] Distúrbios inflamatórios que podem ser tratados pelos compostos da presente invenção incluem, mas não são limitados a, esclerose múltipla, artrite reumatóide, doença degenerativa das articulações, lúpus sistêmico, esclerose sistémica, síndromes de vasculite (vaso pequeno, médio e grande), aterosclerose, doença inflamatória do intestino, síndrome do intestino irritável, doença de Crohn, colite mucosa, colite ulcerosa, gastrite, sepsis, psoríase e outras doenças inflamatórias dermatológicas (tais como eczema, dermatite atópica, dermatite de contato, urticária, escleroderma, psoríase e dermatoses com aguda componentes inflamatórios, pênfigo, penfigóide, dermatite alérgica), e síndromes de urticária. Em algumas modalidades, o distúrbio ou condição associada com a atividade CRM1 é a esclerose múltipla, síndrome do intestino irritável, a artrite reumatóide, psoríase ou outras doenças inflamatórias dermatológicas.
[000188] As doenças virais que podem ser tratadas pelos compostos da presente invenção incluem, mas não estão limitados a, faringite febril aguda, febre faringo conjuntival, ceratoconjuntivite epidêmica, gastroenterite infantil, infecções Coxsackie, mononucleose infecciosa, linfoma de Burkitt, hepatite aguda, hepatite crônica, cirrose hepática, carcinoma hepatocelular, a infecção primária por HSV-1 (por exemplo, gengivoestomatite, em crianças, amigdalites e faringites em adultos, ceratoconjuntivite), infecção HSV-1 latente (por exemplo, o herpes labial e feridas), infecção primária por HSV-2, infecção por HSV-2 latente, meningite asséptica, mononucleose infecciosa, doença de inclusão citomegálica, sarcoma de Kaposi, doença de Castleman multicêntrica, linfoma de efusão primário, AIDS, influenza, síndrome de Reye, sarampo, encefalomielite pós-infecciosa, caxumba, lesões hiperplásicas epiteliais (por exemplo, verrugas comuns, lisas, plantares e anogenitais, papilomas da laringe, epidermodisplasia verruciformis), carcinoma cervical, carcinoma de células escamosas, crupe, pneumonia, bronquiolite, gripe comum, poliomielite, raiva, síndrome semelhante à influenza, bronquiolite grave com pneumonia, sarampo, rubéola congênita, varicela e herpes zoster. As doenças virais que podem ser tratadas pelos compostos da presente invenção também incluem infecções virais crónicas, incluindo hepatite B e hepatite C.
[000189] Distúrbios oftalmológicos exemplares incluem, mas não estão limitados a, edema macular (Edema macular diabético e não diabético), degeneração macular relacionada à idade (formas úmida e seca), degeneração macular disciforme da idade, edema macular cistóide, edema palpebral, edema de retina, retinopatia diabética, coriorretinopatia, maculopatia neovascular, glaucoma neovascular, uveíte, irite, vasculite retiniana, endoftalmite, panoftalmite, oftalmia metastático, coroidite, epitelite de pigmento retinal, conjuntivite, ciclite, esclerite, episclerite, neurite óptica, neurite óptica retrobulbar, ceratite, blefarite, descolamento de retina exsudativa, úlcera de córnea, úlcera conjuntival, ceratite em umular crônica, oftálmica doença associada à hipóxia ou isquemia, retinopatia da prematuridade, retinopatia diabética proliferativa, vasculopatia coroidal polipoidal, proliferação angiomatosa da retina, oclusão da artéria da retina, oclusão da veia da retina, doença de Coats, vitreoretinopatia exsudativa familiar, doença sem pulso (doença de Takayasu), doença Eales, síndrome do anticorpo antifosfolípide, retinopatia leucêmica, síndrome de hiperviscosidade sanguínea, macro globulinemia, retinopatia associada à interferon, retinopatia hipertensiva, retinopatia de radiação, a deficiência de células tronco epiteliais da córnea ou catarata.
[000190] As doenças neurodegenerativas que podem ser tratadas por um composto da invenção incluem, mas não estão limitadas a, doença de Parkinson, doença de Alzheimer, e doença de Huntington e esclerose lateral amiotrófica (doença de ALS / Lou Gehrig). Em algumas modalidades, o distúrbio ou condição associada com uma atividade de CRM é ALS.
[000191] Os compostos e as composições aqui descritas também podem ser utilizados para tratar distúrbios do crescimento anormal de tecido e fibrose, incluindo cardiomiopatia dilatável, cardiomiopatia hipertrófica, cardiomiopatia restritiva, fibrose pulmonar, fibrose hepática, glomerulonefrite, e outros distúrbios renais.
[000192] Os compostos e as composições aqui descritos podem também ser utilizados para doenças relacionadas com a ingestão de alimentos, tais como obesidade e hiperfagia. Em algumas modalidades, o distúrbio ou condição associada com a atividade CRM1 é a obesidade.
[000193] Em algumas modalidades, o distúrbio ou condição associada com a atividade CRM1 é a distrofia muscular, artrite, por exemplo, a osteoartrite e artrite reumatóide, espondilite anquilosante, lesão cerebral traumática, lesão da medula espinal, sepsia, doença reumática, aterosclerose de câncer, diabetes do tipo 1, diabetes tipo 2, leptospirose doença renal, glaucoma, doenças da retina, envelhecimento, dor de cabeça, dor, síndrome da dor regional complexa, hipertrofia cardíaca, emaciação muscular, distúrbios catabólicos, obesidade, atraso de crescimento fetal, hipercolesterolemia, doença cardíaca, insuficiência cardíaca crônica, isquemia / reperfusão, acidente vascular cerebral, aneurisma cerebral, angina de peito, doença pulmonar, fibrose cística, lesão pulmonar induzida por ácido, hipertensão pulmonar, asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, síndrome de Sjogren, doença da membrana hialina, doença renal, doença glomerular, doença hepática alcoólica, doenças do intestino, a endometriose peritoneal, doenças de pele, sinusite nasal, mesotelioma, ecodermal anidrótica displasia-ID, doença de Behcet, incontinência pigmentar, tuberculose, asma, doença de Crohn, colite, alergia ocular, apendicite, doença de Paget, pancreatite, periodonite, endometriose, doença inflamatória do intestino, doença inflamatória do pulmão, doenças induzidas pela sílica, apneia do sono, AIDS, o HIV-1, doenças autoimunes, síndrome antifosfolipídico, lúpus, nefrite de lúpus, febre familiar do Mediterrâneo, síndrome de febre periódica hereditária, doenças de estresse psicossociais, doenças neuropatológicas, polineuropatia amiloidótica familiar, neuropatia inflamatória, doença de Parkinson, esclerose múltipla, doença de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica, doença de Huntington, a catarata, ou perda de audição.
[000194] Em outras modalidades, o distúrbio ou condição associada com a atividade CRM1 é traumatismo craniano, uveíte, dor inflamatória, asma induzida por alérgeno, asma não induzida por alérgeno, nefrite glomerular, colite ulcerativa, enterocolite necrotizante, hiperimunoglobulinemia D com febre recorrente (HIDS), síndrome periódica associada à TNF receptor (TRAPS), síndromes periódicas associadas à criopirina, síndrome de Muckle-Wells (amiloidose de surdez de urticária), urticária de resfriado familiar, doença inflamatória de multisistema de início neonatal (NOMID), febre periódica, estomatite aftosa, faringite e adenite (síndrome PFAPA), síndrome de Blau, artrite estéril piogênica, pioderma gangrenoso, acne (PAPA), deficiência do antagonista de receptor -1 de interleucina (DIRA), hemorragia subaracnóide, doença policística renal, transplante, transplante de órgãos, transplante de tecido, síndrome de mielodisplasia, inflamação induzida por irritante, inflamação induzida por irritante de planta, inflamação induzida por óleo de hera venenosa / urushiol, inflamação induzida por irritante químico, inflamação induzida pela picada de abelha, inflamação induzida por picada de inseto, queimaduras solares, queimaduras, dermatite, endotoxemia, lesão pulmonar, síndrome da angústia respiratória aguda, hepatite alcoólica, ou lesão de rins causada por infecções por parasitas.
[000195] Em outra modalidade, um composto ou uma composição aqui descrita pode ser usado para tratar ou prevenir as alergias e doenças respiratórias, incluindo asma, bronquite, fibrose pulmonar, rinite alérgica, a toxicidade de oxigénio, enfisema, a bronquite crónica, a síndrome da angústia respiratória aguda, e qualquer obstrutiva crónica doença pulmonar (COPD).
[000196] Outra modalidade da invenção é a utilização de um composto de fórmula I na fabricação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio ou condição associada com a atividade CRMl. Em aspectos adicionais, a presente invenção proporciona a utilização de um composto de fórmula I para o fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença associada com a expressão ou a atividade de p53, p73, p21, pRb, p27, IKB, NFKB, c- Abl, proteínas FOXO ou COX-2 em um sujeito. Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona uma utilização de um composto de fórmula I na fabricação de um medicamento para o tratamento de qualquer de câncer e / ou doenças neoplásicas, angiogênese, distúrbios autoimunes, doenças inflamatórias e / ou doenças, epigenética, distúrbios e / ou doenças hormonais, doenças virais, doenças neurodegenerativas e / ou doenças e distúrbios oftalmológicos.
[000197] Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona um método para inibir CRMl em uma amostra biológica ou em um paciente que compreende o contato da amostra biológica com, ou a administração a um paciente, de um sal farmaceuticamente aceitável de um composto de fórmula I, ou uma composição farmaceuticamente aceitável.
Distúrbios Neoplásicos
[000198] Um composto ou uma composição aqui descrita pode ser utilizado para tratar uma doença neoplásica. Um "distúrbio neoplásico" é uma doença ou distúrbio caracterizado por células que têm a capacidade de crescimento ou de replicação autônoma, por exemplo, um estado ou condição anormal caracterizado por um crescimento celular de proliferação benigna ou maligna. Distúrbios neoplásicos exemplares incluem: carcinoma, sarcoma (por exemplo, tecidos moles), osteossarcoma, distúrbios metastáticos (por exemplo, os tumores resultantes de origem na próstata, cérebro, osso, gastrointestinal, pulmão, mama, ovário, cervical, pâncreas, rim, cabeça e pescoço, e fígado), distúrbios neoplásicos hematopoiéticos (por exemplo, leucemias, linfomas, mieloma e outros distúrbios de células plasmáticas malignas) e tumores metastáticos. Em uma modalidade, o câncer a ser tratado é selecionado a partir da mama, do ovário, cervical, gastrointestinal, próstata, cólon, pulmão, renal, cérebro, fígado e câncer pancreático. O tratamento com o composto pode ser em uma quantidade eficaz para melhorar pelo menos um sintoma do distúrbio neoplásico, como por exemplo, redução da proliferação de células, a massa do tumor reduzida, etc.
[000199] Em uma modalidade, o distúrbio neoplásico é um câncer de mama semelhante a basal (BLBC). BLBCs respondem por até 15% dos cânceres de mama (BC) e são geralmente o câncer de mama triplo negativo (TNBC), caracterizado pela falta de ER, PR receptor de progesterona e amplificação de HER-2. Em uma modalidade específica, o câncer da mama é TNBC. Além disso, a maioria dos BCs associada ao BRCA1 são BLBC e TNBC, expressando citoqueratinas basais e EGFR. BLBC é caracterizada por um fenótipo agressivo, alto grau histológico, e os resultados clínicos pobres com recorrência e taxas de metástase altas.
Terapias de combinação
[000200] Em algumas modalidades, um composto aqui descrito é administrado em conjunto com um "segundo" agente terapêutico ou tratamento adicional. A escolha do segundo agente terapêutico pode ser feita a partir de qualquer agente que é tipicamente utilizado em uma monoterapia para tratar a doença ou condição indicada. Como aqui utilizado, o termo "conjuntamente administrado" e termos relacionados referem-se à administração simultânea ou sequencial de agentes terapêuticos de acordo com esta invenção. Por exemplo, um composto da presente invenção pode ser administrado com outro agente terapêutico simultânea ou sequencialmente em formas de dosagem unitárias em separado ou em conjunto na forma de dosagem unitária única. Por conseguinte, a presente invenção proporciona uma forma de unidade de dosagem única compreendendo um composto de fórmula I, um agente terapêutico adicional, e um veículo farmaceuticamente aceitável, adjuvante ou veículo.
[000201] Em uma modalidade da invenção, em que um segundo agente terapêutico é administrado a um sujeito, a quantidade eficaz do composto da presente invenção é menor do que a sua quantidade efetiva seria se o segundo agente terapêutico não fosse administrado. Em outra modalidade, a quantidade eficaz do segundo agente terapêutico é menor do que a sua quantidade efetiva seria se o composto da invenção não fosse administrado. Deste modo, os efeitos colaterais indesejáveis associados com doses elevadas de um ou outro agente podem ser minimizados. Outras vantagens potenciais (incluindo, sem limitação, os regimes de dosagem melhorados e / ou custo de drogas reduzido) serão evidentes para aqueles peritos na versados na técnica.
[000202] Tratamentos de câncer adicionais exemplificativos incluem, por exemplo: quimioterapia, terapias alvo, tais como terapias de anticorpos, inibidores da quinase, imunoterapia e terapia hormonal, terapia epigenética, inibidores de proteossoma e terapias anti- angiogênicos. Exemplos de cada um destes tratamentos são fornecidos abaixo.
[000203] Exemplos de agentes quimioterapêuticos utilizados em terapia do câncer incluem, por exemplo, anti- metabolitos (por exemplo, ácido fólico, purina e pirimidina) e agentes alquilantes (por exemplo, mostardas de nitrogênio, nitrosoureias, platina, alquilsulfonatos, hidrazinas, triazenos, aziridinas, veneno do fuso, agentes citotóxicos, inibidores da topoisomerase e outros). Agentes exemplares incluem aclarrubicina, actinomicina, alitretinoína, altretamina, aminopterina ácido aminolevulínico, amrubicin, amsacrina, anagrelide, trióxido de arsênico, asparaginase, atrasentan, belotecan, bexaroteno, bendamustin, bleomicina, bortezomibe, bussulfano, camptotecina, capecitabina, carboplatina, carboquona, carmofur, carmustina, celecoxib, clorambucil, clormetina, cisplatina, cladribina, clofarabina, crisantaspase, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, daunorubicina, decitabina, demecolcina, docetaxel, doxorrubicina, efaproxiral, elesclomol, elsamitrucina, enocitabina, epirubicina, estramustina, etoglucida, etoposido, floxuridina, fludarabina, fluorouracil (5-FU), fotemustina, gemcitabina, os implantes de gliadel, hidroxicarbamida, hidroxiureia, idarrubicina, ifosfamida, irinotecano, irofulven, ixabepilone, larotaxel, leucovorina, doxorrubicina lipossomal, daunorrubicina lipossomal, lonidamina, lomustine, lucantona, mannosulfan, masoprocol , melfalano, mercaptopurina, mesna, metotrexato, aminolevulinato de metilo, mitobronitol, mitoguazona, mitotano, mitomicina, mitoxantrona, nedaplatina, nimustina, oblimersen, omacetaxina, ortataxel, oxaliplatina, paclitaxel, pegaspargase, pemetrexede, pentostatin, pirarubicina, pixantrona, Plicamicina, porfímero de sódio, prednimustina, procarbazina, raltitrexed, ranimustina, rubitecan, sapacitabine, semustina, sitimagene ceradenovec, strataplatin, estreptozocina, talaporfin, tegafur-uracil, temoporfin, temozolomida, teniposido, tesetaxel, Testolactona, tetranitrato, tiotepa, tiazofurin, tioguanine, tipifarnib, topotecano, a trabectedina, triaziquona, trietileno melamina, triplatin, tretinoína, treosulfan, trofosfamida, uramustine, valrubicina, verteporfin, vinblastina, vincristina, vindesine, vinflunina, vinorelbina, vorinostat, zorubicina e outros agentes citostáticos ou citotóxicos aqui descritos.
[000204] Como algumas drogas funcionam melhor juntas do que sozinhas, duas ou mais drogas muitas vezes são dadas ao mesmo tempo. Frequentemente, dois ou mais agentes de quimioterapia são usados como a combinação de quimioterapia. Em algumas modalidades, os agentes de quimioterapia (incluindo a quimioterapia de combinação) podem ser usados em combinação com um composto aqui descrito.
[000205] Terapia dirigida constitui a utilização de agentes específicos para as proteínas desreguladas das células cancerosas. Drogas de terapia dirigida de molécula geralmente são inibidores de domínios enzimáticos nas proteínas mutantes, superexpressas, ou de outra forma críticas dentro de uma célula cancerosa. Exemplos proeminentes são os inibidores da tirosina quinase, como axitinibe, bosutinibe, cediranib, desatinib, erolotinib, imatinib, gefitinib, lapatinib, lestaurtinib, nilotinib, semaxanib, sorafenibe, sunitinibe e vandetanib, e inibidores da quinase também dependentes de ciclina, como alvocidib e seliciclib. A terapia de anticorpo monoclonal é outra estratégia na qual o agente terapêutico é um anticorpo que se liga especificamente a uma proteína na superfície das células cancerosas. Exemplos incluem o anticorpo trastuzumab anti-HER2/neu (Herceptin®) tipicamente usado no câncer da mama, e o anticorpo anti- CD20 rituximab e tositumomab tipicamente usados em uma variedade de malignidades de células-B. Outros anticorpos exemplares incluem cetuximab, panitumumab, trastuzumab, alemtuzumab, bevacizumab, edrecolomab e gemtuzumab. Exemplos de proteínas de fusão incluem aflibercept e denileucina diftitox. Em algumas modalidades, a terapia alvo pode ser utilizada em combinação com um composto aqui descrito, por exemplo, Gleevec (Vignari e Wang, 2001).
[000206] A terapia dirigida pode também envolver pequenos peptídeos como dispositivos de "casa", que se podem ligar aos receptores da superfície celular ou matriz extracelular afetada circundante de um tumor. Os radionuclídeos que estão ligados a estes peptídeos (por exemplo, RGDS), eventualmente, matam a célula cancerosa se o nuclídeo ficar na proximidade da célula. Um exemplo dessa terapia inclui BEXXAR®.
[000207] A terapia anti-angiogênica pode incluir inibidores da quinase que alvejam fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) tais como sunitinib, sorafenib, ou anticorpos monoclonais ou “atrativos” de receptores para VEGF ou receptor VEGF incluindo bevacizumab ou VEGF-Trap, ou talidomida ou os seus análogos (lenalidomida, Pomalidomide), ou agentes que dirigem alvos angiogênicos não-VEGF tal como o fator de crescimento de fibroblastos (FGF), angiopoietinas, angiostatina ou endostatina.
[000208] Terapias epigenéticas incluem inibidores de enzimas que controlam modificações de epigenética, especificamente DNA metiltransferases e desacetilases de histonas, que tem demonstrado efeitos antitumorais promissores para algumas doenças malignas, bem como oligonucleotídeos anti-sentido e siRNA.
[000209] A imunoterapia do câncer refere-se a um conjunto diverso de estratégias terapêuticas concebidas para induzir o sistema imune do próprio paciente a combater o tumor. Métodos contemporâneos para gerar uma resposta imune contra tumores incluem imunoterapia BCG intravesicular para câncer de bexiga superficial, a vacina contra o câncer de próstata Provenge e uso de interferons e outras citocinas para induzir uma resposta imune em pacientes com carcinoma de células renais e melanoma.
[000210] O transplante de células-tronco hematopoéticas alogênicas pode ser considerado uma forma de imunoterapia, já que células imunes do doador, muitas vezes, atacam o tumor em um efeito enxerto versus o tumor. Em algumas modalidades, os agentes de imunoterapia podem ser usados em combinação com um composto aqui descrito.
[000211] Os agentes de terapia hormonal incluem a administração de agonistas de hormônios ou antagonistas de hormônios e incluem retinóides / ácido retinóico, compostos que inibem estrogênio ou testosterona, bem como a administração de progestogênios.
[000212] A revelação acima descreve genericamente a presente invenção. Uma compreensão mais completa pode ser obtida por referência aos seguintes Exemplos específicos. Estes Exemplos são descritos unicamente para fins de ilustração e não pretendem limitar o âmbito da invenção. Alterações na forma e substituição de equivalentes são consideradas conforme as circunstâncias possam sugerir ou tornar conveniente. Embora termos específicos tenham sido aqui empregados, esses termos são destinados em um sentido descritivo e não para fins de limitação.
EXEMPLIFICAÇÃO Abreviaturas
[000213] atm Atmosfera
[000214] aq. Aquoso
[000215] BINAP 2,2'-bis(difenil fosfino)-l,1’- binaftil
[000216] Boc terc-butoxicarbonila
[000217] CDI N, N'-carbonildiimidazol
[000218] CH2CI2 Diclorometano
[000219] DCC N,N-diciclohexilcarbodiimida
[000220] DCM Diclorometano
[000221] DBU diazan(l, 3)-biciclo [5.4.0] undecano
[000222] DIC N, N'-Diisopropilcarbodiimida
[000223] DIPEA N,N-diisopropiletilamina
[000224] DMAP N,N-Dimetil-4-aminopiridina
[000225] DMF N,N-Dimetilformamida
[000226] DMSO dimetilsulfóxido
[000227] DPPF difenilfosfinoferroceno
[000228] EA acetato etílico
[000229] EDCI Cloridrato N-[3-(dimetil amino) propil]-N’-etilcarbodiimida
[000230] EDC 1-etil-3 - (3-dimetilaminopropil) carbodiimida
[000231] eq. equivalente(s)
[000232] ET20 Éter dietílico
[000233] EtOAc Acetato de etila
[000234] EtOH Etanol
[000235] ETI iodoetano
[000236] Et Etila
[000237] Fmoc 9-fluorenilmetiloxicarbonila
[000238] GC cromatografia de gás
[000239] h hora(s)
[000240] HetAr Heteroarila
[000241] HOBt N-hidroxibenzotriazol
[000242] HBTU 0 - (benzotriazol-l-il)-N, N, N', N'-hexa fluorofosfato de tetrametilurônio
[000243] HPLC Cromatografia líquida de alta eficiência
[000244] LAH hidreto de alumínio de lítio
[000245] LCMS Espectrometria de Massa de Cromatografia Líquida
[000246] MCPBA acido m-Cloroperbenzóico
[000247] MeCN acetonitrila
[000248] MeOH Metanol
[000249] Min. Minutos
[000250] MeI Iodometano
[000251] MeMgCl Cloreto de magnésio de Metila
[000252] Me Metila
[000253] NaOAc acetato de sódio
[000254] NMR Ressonância magnética nuclear
[000255] NMP N-metil pirrolidinona
[000256] O.n. Durante a noite
[000257] RT temperatura ambiente ou Tempo de Retenção
[000258] T3P anidrido propilfosfônico
[000259] TEA trietilamina
[000260] THF tetraidrofurano
[000261] TLC Cromatografia em Camada Fina
[000262] Ao longo da descrição seguinte de processos, é para ser entendido que, onde apropriado, os grupos protetores apropriados serão adicionados a, e subsequentemente removidos de, vários reagentes e intermediários de uma forma que será prontamente entendida por uma pessoa versada na técnica de síntese orgânica. Os procedimentos convencionais para utilização desses grupos protetores, bem como exemplos de grupos de proteção adequados, são descritos, por exemplo, em "Protective Groups in Organic Synthesis", T.W. Green, P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience, Nova York, (1999). É também para ser compreendido que uma transformação de um grupo ou substituinte noutro grupo ou substituinte por manipulação química pode ser realizada em qualquer intermediário ou final sobre o caminho de síntese para o produto final, em que o tipo possível de transformação é apenas limitado por incompatibilidade inerente de outras funcionalidades desenvolvidas pela molécula naquele estágio para as condições ou reagentes empregados na transformação. Tais incompatibilidades inerentes e os modos para contornar os mesmos através da realização de transformações apropriadas e etapas sintéticas em uma ordem adequada, serão prontamente entendidos por uma pessoa versada na técnica de síntese orgânica. Exemplos de transformações são dados abaixo, e deve ser entendido que as transformações descritas não são limitadas apenas aos grupos genéricos ou substituintes para os quais as transformações são exemplificadas. Referências e descrições sobre outras transformações adequadas são dadas em "Comprehensive Organic Transformations - a guide to functional group preparations" RC Larock, VHC Publishers, Inc. (1989). As referências e as descrições de outras reações adequadas são descritas em livros de texto de química orgânica, por exemplo, "Advanced Organic Chemistry", March, 4aed. McGraw Hill (1992) ou, "Organic Synthesis", Smith, McGraw Hill, (1994). As técnicas para a purificação dos intermediários e produtos finais incluem, por exemplo, cromatografia normal e de fase inversa em coluna ou placa rotativa, recristalização, destilação e extração de líquido-líquido ou sólido-líquido, o que será facilmente compreendido por uma pessoa versada na técnica. As definições de substituintes e grupos são como descritos para a fórmula I, exceto quando definido de forma diferente. Os termos "temperatura ambiente" e "temperatura ambiente"significarão, salvo indicação em contrário, uma temperatura entre 16 e 25°C. O termo "refluxo"significará, salvo  indicação em contrário, em referência a asolvente, uma temperatura igual ou acima do ponto de ebulição do solvente. Exemplo 1: Síntese do Intermediário (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4- triazol-l-il) ácido acrílico.
Figure img0058
Síntese de 3,5-bis (trifluorometil) benzotioamida
Figure img0059
[000263] Um frasco de 2-L, 3 gargalos, de fundo redondo, foi carregado com uma solução de 3,5-bis (trifluorometil) benzonitrila (200 g) em DMF (1 L). A solução foi então tratada com NaSH (123,7 g, 2,0 eq.) e MgCl 2 (186,7 g, 1,0 eq.) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura foi derramada em uma pasta de gelo-água (10 L) e o composto foi  extraído com EtOAc (3 x 1 L). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura aquosa saturada (3 x 100 mL), secas sobre Na2SO4 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para se obter 205 g do 3,5-bis (trifluorometil) benzotioamida bruto, desejado (rendimento: 90%), que foi utilizado sem purificação na etapa seguinte. Síntese - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH- l,2,4-triazol:
Figure img0060
[000264] Um frasco de 3 gargalos, 5-L, de fundo redondo foi carregado com uma solução de 3,5-bis (trifluorometil) benzotioamida (205,65 g) em DMF (1,03 L). Hidrato de hidrazina (73,2 mL, 2,0 eq.) foi adicionado gota a gota e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. HCOOH (1,03 L) foi adicionada gota a gota e a mistura da reação foi submetida a refluxo a 90°C durante 3 horas. Depois de se deixar resfriar até à temperatura ambiente, a mistura de reação foi derramada em uma solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado (7 L) e extraída com EtOAc (3 x 1 L). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura aquosa saturada (3 x 500 mL), secas sobre anidro de Na2S04, filtradas e concentradas sob pressão reduzida (35°C, 20 mmHg) para se obter 180 g de composto em bruto. Este material em bruto foi agitado com éter de petróleo (3 x 500 mL), filtrado e seco para se obter 160 g. de 3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-1,2,4-triazol obtido como um sólido amarelo pálido (rendimento: 75%). Síntese de acrilato de (Z)-isopropil 3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4- triazol-l-il):
Figure img0061
[000265] Um frasco de 2-L, de 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com uma solução de 3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol (160 g) em DMF (960 mL). A solução foi tratada com DABCO (127,74 g, 2 eq.) e agitada durante 30 min. antes da adição de (Z)-isopropil- 3 iodoacrilato (150,32 ^g, 1,1 eq.) em gotas. Após aproximadamente 1 hora, a mistura de reação foi derramada em uma pasta de gelo-água (5 L) e extraída com EtOAc (3 x 1 L). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura aquosa saturada (3 x 100 mL), secas sobre Na2S04 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida (35°C, 20 mmHg) para se obter 250 g de composto em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna (60/120 de gel de sílica), utilizando um gradiente de acetato de etila /n-hexano (a coluna foi acondicionada em hexano e o composto desejado começou a eluição a partir de 2% de EtOAc / n-hexano). As frações contendo os compostos desejados foram combinadas para se obter 138 g do composto desejado puro (rendimento: 61%). Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil) - 2,4-triazol-1-il-1 H-1) ácido acrílico:
Figure img0062
[000266] Em um frasco de 5 L, com 3 gargalos, de fundo redondo, (Z)-isopropil 3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-l-il) acrilato (130 g, 1,0 eq.) foi dissolvido em THF (1,3 L). Uma solução de LiOH (69,3 g, 5,0 eq.) em água (1,3 L) foi adicionada gota a gota à solução e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h antes de ser resfriada bruscamente com 400 mL de pasta de gelo-água e tornada ácida (pH = 2-3) com HC1 aquoso diluído. A mistura foi extraída com EtOAc (3 x 1 L) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre anidro de Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar 110 g de ácido carboxílico desejado (rendimento: 94%) (teor de cis = 90,0%, teor de trans = 8,2% por LCMS). Exemplo 2: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-1-il)- N'-(pirazin-2-il ) acriloidrazida (1-3).
Figure img0063
[000267] Uma frasco de 50 mL, de 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com uma suspensão de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol- l- il)-ácido acrílico (0,200 g) em 1: 1 CH2C12: AcOEt (25 mL). 2-Hidrazinopirazina (0,062 g) foi adicionado a -40°C, seguido de T3P (50%) (0,432 g) e DIPEA (0,147 g). A mistura de reação foi agitada durante 30 min a -40 ° C antes de ser concentrada sob pressão reduzida (35°C, 20 mmHg). O óleo bruto foi purificado por TLC preparativa usando 5% de MeOH em CH2Cl2 como fase móvel (sob atmosfera de amônia) para se obter 40 mg (rendimento: 16%) de (Z) -3 - (3 - (3 5 5 - bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-l-il)-N'-(pirazin- 2-il) acrilohidrazida. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ, 10,53 (s, 1H), 9,59 (s, 1H), 9,14 (s, 1H), 8,53 (s, 2H), 8,29 (s, 1H), 8,13 (s , 1H), 8,06-8,07 (m, 1H), 7,92-7,93 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,51-7,53 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 6,07-6,10 (d, J = 10,4 Hz, IH); LCMS para C17H12F6N7O [M+H]+ previsto: 444,31, encontrada: 444,49 (RT 2,70 min, pureza: 95,78%). Exemplo 3: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l, 2,4 - il)-N'- (piridin-2-il) cloridrato de acrilohidrazida (I4).
Figure img0064
[000268] Um frasco de 500 mL, de 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com uma suspensão de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol- . ácido l-il) acrílico (10 g, 1,0 eq) em 1: 1 CH2C12: AcOEt (200 mL). 2-hidrazinopiridina (3,1 1 g) foi adicionado a - 40°C. T3P (50% em acetato de etilo) (21,75 g) foi adicionado gota a gota, seguido de DIPEA (7,36 g) e a mistura de reação foi agitada durante 30 min a -40°C antes de ser concentrada sob pressão reduzida (35°C, 20 mm Hg) para se obter um óleo castanho em bruto que foi purificado por cromatografia em coluna (o composto eluído com 1,3% de MeOH em CH2Cl2). As frações contendo o composto desejado foram combinadas para produzir 6,0 g (rendimento: 48%) (Z) -3 - (3 - (3,5-bis-(trifluorometil) fenil)-lH-1,2,4- triazol-1 - il)-N'-(piridin-2-il) acrilohidrazida. 1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ, 10,41 (s, 1H), 9,66 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,53 (s, 2H), 8,28 (s, 1H), 8,06-8,08 ( d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,48-7,53 (m, 1H), 7,49-7,52 (d, J = 10,4, 1H), 6,71-6,75 (m, 1H), 6,66-6,68 (d, J = 8,4 Hz, LH), 6,07-6,09 (d, J = 10,4, 1H). LCMS para C18H12F6N6O [M+H]+previsto: 443,33, encontrado: 443,44 (RT 2,45 min, pureza: 100%). Síntese de cloridrato (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil) - 1 H-1 ,2,4-triazol-1- il)-N'-(piridin-2-il) de acrilohidrazida:
Figure img0065
[000269] Um frasco de 500 mL, de 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com uma solução de (Z) -3 - (3 - (3, 5-bis (trifluorometil) fenil) - 1 H-1 ,2,4-triazol - 1-il)-N'-(piridin-2-il) acrilohidrazida (5,5 g) em Et20 (250 mL). A solução foi resfriada a 5°C, tratada com HCl em 1,4-dioxano, deixada aquecer até RT e agitada até à conclusão, conforme mostrado por análise de TLC (aproximadamente 1 h). Os sólidos foram filtrados em um funil de Buchner, lavados com Et20 e secos a vácuo para se obter 5,5 g (rendimento: 92%) cloridrato de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH -l ,2,4-triazol-l-il)- N'-(piridin-2-il) acrilohidrazida. 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ, 11,26 (s, 1H), 10,89 (s, 1H), 9,55 (s, 1H), 8,52 (s,  2H), 8,28 (s, 1H), 8,03-8,07 (m, 2H), 7,62-7,59 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 7,21-7,24 (m, 1H), 7,05-7,09 (m, 1H), 6,16 6,19 (d, J = 10,4 Hz, lH ), LCMS para C18H13F6N6O [M+H]+443,33, encontrado 443,44 (RT 3,54 min, pureza: 99,0%). Exemplo 4: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il) - 1 - (4-hidroxipiperidin-1 - il) prop-2-en-1-ona (1-5).
Figure img0066
[000270] Uma frasco de 50 mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com uma solução de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol- ácido l-il) acrílico (0,20 g) em CH2C12 (l0 mL). Piperidin-4-ol (0,07 g, 1,2 eq.) foi adicionado e a solução foi resfriada a -60°C durante a adição de T3P (anidrido de propil fosfônico) (0,40 mL, 1,2 eq.) E DIPEA (0,19 mL, 2,0 eq.). A mistura de reação foi agitada durante 30 min antes de ser derramada em água (50 mL) e extraída com CH2Cl2 (2 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura aquosa saturada (50 mL), seca sobre MgS04, filtradas, e concentradas sob pressão reduzida (25°C, 20 mmHg). A purificação por cromatografia em coluna usando sílica 60/120 e MeOH: CH 2 Cl 2 como fase móvel, (composto desejado começou a eluição com 3,0% MeOH / CH2Cl2) forneceu 0,025 g (rendimento: 10%) de (Z) -3 - (3 - (3,5 -bis (trifluorometil) fenil) - 1 H-1 ,2,4-triazol-1-il) - 1 - (4-hidroxipiperidin-1-il) prop-2-en-1-ona. 1H NMR (400 MHz,  CDC13) δ, 8,75 (s, LH), 8,58 (s, 2H), 7,93 (s, IH), 7:08 - 07:11 (d, J = 10,4 Hz, IH), 6.01-6.04 (d , J = 10,4 Hz, IH), 4:02 - 4:14 (m, IH), 3,98-4,01 (m, IH), 3,78-3,85 (m, IH), 03:47-03:52 (s, IH), 3:32 - 3:38 (w, IH), 1,96 (s, IH), 1,83 (s, IH), 1,27 (s, IH), 0,90 (s, IH); LCMS para a Fórmula química: C18H17F6N4O2 [M+H]+ 435,34, encontrado 435,24 (RT 2,408 min, pureza: 89,6%). Exemplo 5: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il)- N-(pirrolidin-l-il) acrilamida (1-6).
Figure img0067
[000271] Uma solução fria (-40°C) de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il)- acrílico (0,35 g ) em 1: 1 CH 2 Cl 2 : EtOAc (200 mL) foi tratada com HC1 1-aminopirrolidina (0,134 g). A mistura foi então tratada com T3P (50%> em EtOAc;. 0,77 ml, 1,3 eq) seguido por adição lenta de DIPEA (0,51 ml, 3,0 eq.). A mistura de reação foi agitada durante 30 min a -40°C antes de ser resfriada bruscamente com água gelada, e extraída com EtOAc (3 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução salina saturada aquosa, secas com Na2SO4 anidro e concentradas sob pressão reduzida (35°C, 20 mmHg) para fornecer 0,275 g de sólido em bruto. A purificação por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (60-120 malha) usando MeOH em CH 2 C1 2 como fase móvel forneceu o (Z) -3 - (3 - (3 ,5-bis (trifluorometil) fenil) - 1 H-1 ,2,4-triazol-1-il)-N-(pirrolidin-1-il)-acrilamida desejado puro (7,0 mg rendimento: 1,7%): 1H NMR (400 MHz,  DMSO-d6) δ, 9,49 (s, IH), 8,95 (s, IH), 8,53 (s, 2H), 8,28 (s, IH), 7,4-7,38 (d, J = 7,6 Hz, IH), 5,87-5,84 (d, J = 10,4 Hz, IH ), 2,86-2,81 (m, 4H), 1,74-1,73 (m, 4H); LCMS para C17H16F6N5O [M+H]+420,33, encontrado 420,13 (RT 7,76 min, pureza: 92,4% ). Exemplo 6: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-1-il)- N'-metil-N'-( piridin-2-il) acrilohidrazida (17).
Figure img0068
Síntese de 2-(1-metil hidrazinil) piridina:
[000272] Um frasco de 25 mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com 2-bromopiridina (0,31 g) e metil-hidrazina, sob uma atmosfera de nitrogênio e a mistura foi agitada e aquecida à temperatura de refluxo em 80 (5,09 g, 34,2 eq.) - 85°C durante 1 hora. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida (40°C, 20 mmHg) para fornecer um óleo amarelo que foi tratado com 10% peso / v de solução aquosa de Na2C03 e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com uma solução salina saturada aquosa, seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada sob pressão reduzida (40°C, 20 mmHg) para fornecer um óleo amarelo (0,40 g), que foi utilizado como tal na seguinte etapa.
[000273] Um frasco de 50 mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il ) de ácido acrílico (0,43 g), 2 - (l-metil hidrazinil) piridina (0,15  g, 1,0 eq) em EtOAc (10 mL). T3P (50% em EtOAc, 1,1 g, 1,5 eq) e DIPEA (0,40 g, 2,5 eq) foram adicionados, sob atmosfera de nitrogênio à temperatura de -60°C e o progresso da reação foi monitorado por TLC (utilizando 10% de MeOH: CH2Cl2 como fase móvel e a visualização com luz UV). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida (25°C, 20 mmHg) para fornecer 0,65 g de sólido em bruto. A purificação foi realizada por cromatografia em coluna Combi-Flash em CH2C12 e MeOH (composto desejado começou a eluição a 3,3% de MeOH em CH2C12). As frações contendo o composto desejado foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida (35°C, 20 mm Hg) para proporcionar 90,0 mg (rendimento: 18%) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,89 (s, 1H), 9,79 (brs, 1H), 8,57-8,62 (d, 2H), 7,92-7,94 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 7,59- 7,64 (m, 1H), 7,19-7,25 (q, 1H), 6,75-6,89 (m, 2H), 5,85-5,88 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 3,46 (d, 3H); LCMS para C19H15F6N6O [M+H]+457,35, encontrado 456,26 (RT 2,52 min, Pureza: 100,0%).
[000274] Exemplo 7: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-1-il)-N'- metil-N'-(pirazin-2-il) acriloidrazida (1-8).
Figure img0069
Síntese de 2 - (l-metilhidrazinil) pirazina
Figure img0070
[000275] Em um frasco de 25 mL, 3 gargalos, de fundo redondo, 2-cloropirazina (0,5 g) foi dissolvido em metil-hidrazina (0,5 g, 1,5 eq.) sob atmosfera de nitrogênio à temperatura ambiente. K2C03 Sólido (0,9 g, 1,5 eq.) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada e aquecida a refluxo a 80-85°C durante 1,0 h. A mistura de reação foi então deixada resfriar até à temperatura ambiente e foi concentrada sob pressão reduzida (40°C, 20 mmHg) para se obter um resíduo oleoso amarelo que foi tratado com 10% p/v de solução aquosa de Na2C03 e extraída com EtOAc. O extrato orgânico foi lavado com salmoura, seco sobre anidro Na2S04, filtrado e concentrado sob pressão reduzida (40°C, 20 mmHg) para fornecer 0,43 g de um óleo amarelo que foi utilizado como tal na etapa seguinte.
[000276] Um frasco de 50 mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-l-il) ácido acrílico (0,3 g), 2-(l-metil hidrazinil) pirazina (0,12 g, 1,1 eq) e CH2C12 (10 mL). T3P (50% em EtOAc, 0,38 g, 1,5 eq) e DIPEA (0,50 g, 3,5 eq) foram adicionados, sob atmosfera de nitrogênio à temperatura de -60°C. monitorando o progresso da reação por TLC (utilizando 10% de MeOH: CH2C12 como fase móvel e visualização sob luz UV). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida (25° C, 20 mmHg) para fornecer 0,265 g de sólido em bruto. A purificação utilizando cromatografia em coluna Combi-Flash usando CH2C12:MeOH como eluente (composto desejado começou a eluição a 1,5% de MeOH em CH2C12) proporcionou 75,0 mg de composto puro (rendimento de 23%), (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil) - 1 H-1 ,2,4-triazol-1-il)-N'- metil-N'-(pirazin-2-il) acriloidrazida: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,77 (s, 1H), 9,40-9,36 (s largo, 1H), 8,52 (s, 2H), 8,29-8,27 (d, 2H), 8,15 (s, 1H), 7,925-7,92 ( d, 1H), 7,56-7,54 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 6,13-6,10 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,43 (d, 3H); LCMS para C18H14F6N7O [M+H]+458,34; encontrado 458,24 (RT 2,83 min; Pureza: 96.31%). Exemplo 8: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-l-il)- N'-metil-N'-(3 -metilpiridin-2-il) acriloidrazida (1-9).
Figure img0071
[000277] Um frasco de 50 mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com uma solução de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol- l-il) ácido acrílico (0,25 g) em EtOAc (20 mL). A solução foi resfriada até -70°C e tratada sucessivamente com 3-metil-2- (l-metil hidrazinil) piridina, (0,135 g, 1,0 eq), T3P (50% em EtOAc, 1,4 mL, 4 eq) e DIPEA (0,6 mL, 6 eq.). A mistura de reação clara foi agitada a -60°C durante 4 h. O progresso da reação foi seguido por análise de TLC usando MeOH a 2,5% em CH2Cl2 como fase móvel e visualização sob UV. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida (25°C, 20 mm Hg) para se obter um composto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna (60/120 malha Si02 e eluindo com um gradiente de MeOH: CH2Cl2). O composto desejado começou a eluição com 0,3-0,4% de MeOH em diclorometano. As frações contendo o material desejado foram combinadas para se obter 0,21 g (rendimento: 40%) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10,73 (s, 1H), 9,32 (s, 1H), 8,52 (s, 2H), 8,45-8,46 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,97-7,99 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,48-7,50 (d, J = 10 Hz, 1H),  7,01-7,05 (m, 1H), 5,86-5,88 (d, J = 10 Hz 3H); LCMS para C20H14F9N6O [M+H]+525,35, encontrado 525,19 (RT 3,31 min, pureza 99,40%). Exemplo 9: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-1-il)- N'-(2-5-metilpiridin -il) acriloidrazida (I-10).
Figure img0072
[000278] Um frasco de 50 mL, 3 gargalos de fundo redondo, carregado com uma solução de (Z) -3 - (3 - (3,5- bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-l-il)-acrílico (0,25 g) em EtOAc (10 mL) foi tratada com 2-hidrazinil-5- metilpiridina (0,97 g, 1,1 eq.). A mistura foi resfriada até -60 ° C e tratada com T3P (anidrido de propil fosfônico; 0,85 mL, 2,0 eq.) e DIPEA (0,5 mL, 4,0 eq.). A mistura foi agitada durante 30 min, em seguida, derramada em água (50 mL) e extraída com CH2Cl2 (2 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), seca sobre MgS04 , filtradas, e concentradas sob pressão reduzida (25°C, 20 mmHg) para se obter um composto bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (S1O2, 60 / 120 malha, MeOH: CH2Cl2 como fase móvel). O composto desejado começou a eluição com 2,5% de MeOH: CH2Cl2. As frações contendo o composto desejado foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para se obter 0,130 g (rendimento: 40%) (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-1H-l,2,4-triazol- l-il)-N'-(5-metilpiridin-2-il) acriloidrazida. 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ, 10,38 (s,  6,61-6,63 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,20-6,23 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 2,15 (s, 3H); LCMS para C19H15F6N6O [M+H]+457,35, encontrado 457,24 (RT 2,61 min, pureza: 99,13%). Exemplo 10: Síntese de (Z)-3-(3-(3-(3,5- bis(trifluorometil)fenil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)-N1-metilN’-(piridina-3-il)acrilo hidrazida (I-11).
Figure img0073
[000279] Um frasco de 50 mL, de 3 gargalos de fundo redondo carregado com uma solução de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l- il)- acrílico (0,25) em CH2Cl2 (12 mL) foi tratada com 3 - (l- metil hidrazinil) piridina (0,105 g, 1,2 eq). A mistura foi resfriada até -60 ° C e tratada com T3P (anidrido de propil fosfônico; 0,50 mL, 1,2 eq.) e DIPEA (0,24 mL, 2,0 eq.) e agitada durante l h. O progresso da reação foi seguido por análise de TLC usando 10% de MeOH: CH2Cl2 como fase móvel e visualização sob luz UV. A mistura de reação foi então derramada em água (50 mL) e extraída com CH2Cl2 (2 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas sobre MgS04, filtradas, e concentradas sob pressão reduzida (25° C, 20 mmHg) para se obter o composto impuro que foi purificado por cromatografia em coluna (Si02 , 60 / 120 malha, MeOH: CH2Cl2 como fase móvel). O composto desejado começou a  eluição a 3,0% MeOH: CH2Cl2. As frações contendo o composto foram recolhidas e concentradas sob pressão reduzida para se obter 140 mg (rendimento: 43%) (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (Trifluorometil) fenil) - 1 H-1 ,2,4-triazol-1-il)-N'- metil-N'-(piridin-3-il) acriloidrazida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ, 10,55 (s, 1H), 9,41 (s, 1H), 9,15 (s, 2H), 8,58 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,29 (s , 1H), 7:51 - 07:54 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 7:18 - 07:22 (m, 2H), 06:05-06:07 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,20 (s, 3H); LCMS para C19H15F6N6O [M+H]+ 457,35, encontrado 457,19 (RT 2,43 min, pureza: 83,48%). Exemplo 11: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-il)-N'- (6-cloropirimidin-4- il) acriloidrazida (1-12).
Figure img0074
[000280] Uma frasco de 25 mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com uma solução de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol- l-il)- ácido acrílico (0,5 g) e 4-cloro-6-hidrazinopirimidina (0,20 g, 1,0 eq.) em EtOAc (5,0 mL). A mistura foi resfriada a -40°C e tratada com T3P (2,3 mL, 2,5 eq.) e DIPEA (0,98 mL, 4,0 eq.). A análise de TLC (usando 5% de MeOH-CH2Cl2 como eluente) revelou que o material de partida tinha sido consumido após 30 min. A mistura de reação foi então diluída com CH2Cl2, lavada com água, seca sobre Na2S04 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida (25°C, 20 mmHg) para fornecer o material bruto que foi submetido à purificação de TLC preparativa utilizando 5% de  MeOH- CH2Cl2, como a fase móvel. Isto proporcionou 250 mg (rendimento: 36,74%) (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil) - 1 H-1 ,2,4-triazol-1-il)-N'- (6- cloropirimidin-4-il-) acriloidrazida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6), δ = 10,59 (br s, permutável, 1H), 9,85 (br s, permutável, 1H), 9,52 (s, 1H), 8,50 (s, 2H), 8,38 (s , 1H), 8,27 (s, 1H), 7,52-7,55 (d, 1H, J = 10,4 Hz), 6,69 (s, 1H), 6,05-6,08 (d, 1H, J = 10,4 Hz); LCMS: Calculado para C17H11ClF6N7O (M+H)+478,76, encontrado: 478,09 (RT 2,79 min, pureza: 97,51%). Exemplo 12: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-1-il)- N'-(piridin-3-il ) acriloidrazida (I-13).
Figure img0075
[000281] Um frasco de 5-mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il) de ácido acrílico (0,25 g) e 3-hidrazinopiridina (0,077 g, 1,0 eq.) em EtOAc (10 mL). T3P (50% em EtOAc, 0,52 g, 1,2 eq) e DIPEA (0,27 g, 2,0 eq) foram adicionados, sob atmosfera de nitrogênio a -55 até -60°C. O progresso da reação foi seguido por análise de TLC usando 10% de MeOH: CH2Cl2 como fase móvel e visualização sob luz UV. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida (25°C, 20 mmHg) para se obter 0,475 g de um sólido bruto. A purificação foi realizada utilizando cromatografia Combi-Flash em coluna (com MeOH: CH2Cl2). O composto desejado começou a eluição a 2,3% de MeOH em CH2Cl2. As frações contendo o composto foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida (35° C, 20 mmHg) para se obter 20,0 mg (rendimento: 6%) (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil) -lH-l ,2,4-triazol-l- il)-N'-(piridin-3-il) acriloidrazida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,35 (s, 1H), 9,66 (s, 1H), 8,53 (s, 2H), 8,28 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 7, 93-7, 95 (m, 1H) ,7.52-7 .54 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 7,09 -7,15 (m, 2H), 6,04-6,07 (d, J = 10,4 Hz, 1H), LCMS para C18H13F6N6O [M+H]+ encontrado 443.33 443.19 (RT 2,19 min, pureza: 99,60%). Exemplo 13: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-l-il)- N'-(quinoxalin-2-il ) acriloidrazida (1-14).
Figure img0076
Síntese de 2-hidrazinil quinoxalina:
Figure img0077
[000282] Em um tubo selado de 30 mL, 2- cloroquinoxalina (1,0 g) foi dissolvido em etanol (8 mL) e hidrato de hidrazina (8 mL) foi adicionado sob atmosfera de nitrogênio à temperatura ambiente. A mistura foi agitada e aquecida à temperatura de refluxo (80°C) durante 1 hora. O progresso da reação foi seguido por análise de TLC usando 10% de MeOH: CH2Cl2 como fase móvel e visualização sob luz UV e/ou com ninidrina. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida (40°C, 20 mmHg) para se obter 240 mg de um sólido branco, o qual foi utilizado como tal na etapa seguinte.
[000283] Um frasco de 50 mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com uma solução de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol- l-il)- acrílico (0,25 g) e 2-hidrazinilquinoxalina (0,14 g, 1,2 eq.) em EtOAc. T3P (50% em EtOAc, 0,83 mL, 2,0 eq) e DIPEA (0,5 mL, 4,0 eq) foram adicionados, sob atmosfera de nitrogênio a -55 até -60°C e a mistura de reação foi agitada durante 2 h antes de ser concentrada sob pressão reduzida (25°C, 20 mmHg) para fornecer 0,150 g de sólido bruto. A purificação utilizando cromatografia em coluna Combi-Flash (eluição com MeOH: CH2Cl2; composto desejado começou a eluição com 5% de MeOH em CH2Cl2) proporcionou 60 mg (rendimento: 20%) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10,851 (s, 1H), 9,89-9,87 (s, 1H), 9,67 (s, 1H), 8,49-8,54 (m, 3H), 8,26 (s, 1H) , 8,28 (s, 1H), 7,86-7,88 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,45-7,66 (m, 4H), 6,17-6,20 (d, J = 10,4 Hz, 1H); LCMS para C21H14F6N7O [M+H]+494,37, encontrado 494,19 (RT 2,88 min, pureza: 100%). Exemplo 14: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-1-il)- N'-(1, 1-dioxotetra-hidrotiofen -3-il) acriloidrazida (I-15).
Figure img0078
[000284] Um frasco de 50 mL, 3 gargalos, de fundo redondo carregado com uma solução de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-l -il)- acrílico (0,5 g) em EtOAc (20,0 mL) foi tratada com 2 - (l, l-dioxotetra-hidrotiofen-3-il) hidrazina (0,3 g, 1,2 eq). A mistura foi resfriada até -60°C e tratada simultaneamente com T3P (50% em EtOAc, 2,0 ml, 2 eq.) e DIPEA (1 ml, 4 eq.). A mistura de reação foi agitada durante 30 min a -60° C antes de ser concentrada sob pressão reduzida (35 ° C, 20 mmHg) para fornecer 0,60 g de um resíduo sólido. A purificação por cromatografia em coluna (Si02; eluição com MeOH: CH2Cl2; composto desejado eluiu com 5% de MeOH em CH2Cl2) forneceu 100 mg (rendimento = 15%) (Z) -3 - (3 - (3, 5-bis (trifluorometil) fenil) - 1 H-1,2,4-triazol-1- il)-N'-(tetra-hidrotiofeno-1 - 1-dióxido-3-il) acriloidrazida. 1H NMR (400 MHz, CD30D) δ = 9,57 (s, 1H), 8,64 (s, 2H), 8,10 (s, 1H), 7,34-7,36 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 5,89-5,92 (d , J = 10,8 Hz, 1H), 4,01 (m, 1H), 3,04-3,26 (m, 4H), 2,27-2,34 (m, 2H).LCMS para C17H15F6N5O3S [M+H]+ 484,40, encontrado 483,39 (RT 2,63 min, pureza: 66,39%). Exemplo 15: Síntese de (Z)-N-(azepan-1-il) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil) - 1,2,4- triazol-1-il) acrilamida (I-16).
Figure img0079
[000285] Um frasco de 500 mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com uma solução de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol- l- il)-acrílico (0,3 g) em CH2C12: EtOAc (1: 1, 200 mL) e a solução foi tratada com azepan-1-amina (0,137 g) em temperatura ambiente. A mistura foi resfriada até -60°C e tratada primeiro com T3P (50% em EtOAc, 0,78 ml) e, em seguida, com DIPEA (0,58 mL). A mistura de reação foi agitada durante 30 min a -60° C antes de ser resfriada bruscamente com água gelada e extraída com EtOAc (3 x 20 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida (35°C, 20 mmHg) para fornecer 0,57 g de sólido. A purificação por cromatografia em coluna (Si02, MeOH: CH2Cl2 como fase móvel; composto iniciou a eluição com 0,1% de MeOH em CH2Cl2) proporcionou 90 mg (rendimento: 24%) (Z)-N-(azepan-1-il) -3 - (3 - (3,5- bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il) acrilamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ, 9,61 (s, IH), 9,49 (s, IH), 9,14 (s, IH), 8,52 (s, 2 h), 8,28 (s, IH), 7,397,97 (d, J = 10 Hz, IH), 6,52-6,49 (d, J = 10,4 Hz, IH), 5,86-5,83 (d, J = 10,4 Hz, IH), 3,00-2,97 (m, 4H), 1,581,54 (m, 8h) LCMS para C19H19F6N5O [M+H]+448,39; Pvt encontrado em 448,30 3,22 min Pureza (96,48%). Exemplo 16: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-il)-N'- (2,6-dimetilpirimidin- 4-il) acriloidrazida (1-17).
Figure img0080
[000286] Um frasco de 50 mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com uma solução de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol- l-il) ácido acrílico (0,20 g) dissolvido em acetato de etila (15 mL). A solução foi resfriada até -40°C e tratada com 4- hidrazinil-2, 6-dimetilpirimidina (0,078 g, 1 eq.). T3P (50% em EtOAc, 0,7 g, 3,0 eq) e DIPEA (0,367 g, 4,0 eq) foram adicionados simultaneamente e a mistura de reação foi agitada durante 30 min a -40°C. A mistura de reação foi então deixada aquecer até à temperatura ambiente e foi concentrada sob pressão reduzida (35°C, 20 mmHg) para se obter 0,340 g do composto oleoso bruto que foi purificado por flash-combi utilizando MeOH: CH2Cl2 como fase móvel (o composto desejado foi eluído com 7-8% de MeOH em CH2Cl2) para se obter 50 mg (rendimento: 18%) (Z) -3 - (3 - (3 ,5- bis (trifluorometil) fenil) - 1 H-1,2,4-triazol-1-il)-N'- (2,6-dimetilpirimidin-4-il) acriloidrazida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ, 10,54 (s, IH), 9.19 (b, IH), 8,54 (s, 2H), 8,30 (s, IH), 7,52-7,55 (d, J = 10,4, IH), 6,29 (s, IH), 6,06-6,08 (d, J = 10,4, IH), 2,33 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), LCMS para C19H15F6N7O [M+H]+472,37, encontrado 472,24 (RT 2,88 min, pureza: 99,59%). Exemplo 17: Síntese de (E) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il) - N'- (pirazin-2-il) acriloidrazida
Figure img0081
Síntese de 3,5-bis (trifluorometil) benzotioamida:
Figure img0082
[000287] Um frasco de 2-L, 3 gargalos, de fundo redondo, carregado com uma solução de 3,5-bis (trifluorometil) benzonitrila (200 g) em DMF (1 L), foi tratada com NaSH (123,7 g, 2,0 eq. ) e MgCl 2 (186,7 g, 1 eq.). A mistura de reação foi agitada à RT durante 3 h antes de ser derramada em uma pasta de gelo-água (10 L) e foi extraída com EtOAc (3 x 1 L). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (3 x 100 mL), secos sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida (25°C, 20 mmHg) para se obter 205 g de composto bruto (rendimento: 90%), o qual foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional. Síntese de 3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)- lH-l ,2,4-triazol:
Figure img0083
[000288] Um frasco de 5-L, 3 gargalos, de fundo redondo, carregado com uma solução de 3,5-bis (trifluorometil) benzotioamida (205,65 g) em DMF (1,03 L) foi tratada com hidrato de hidrazina (73,16 mL, 2,0 eq.) gota a gota. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h antes de ser tratada com HCOOH (1.028 L) adicionado gota a gota. A mistura de reação foi submetida a refluxo a 90°C durante 3 h, em seguida resfriada até à temperatura ambiente e derramada em solução aquosa saturada de NaHC03 (7 L) e extraída com EtOAc (3 x 1 L). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (3 x 500 mL), secas sobre Na2S04 anidro, filtradas e concentradas sob pressão reduzida (35°C, 20 mmHg) para se obter 180 g de um sólido. O sólido foi suspenso em éter de petróleo e a suspensão foi agitada, filtrada e seca para proporcionar o triazol desejado como um sólido amarelo pálido (160 g, rendimento: 75%). Síntese de (Z)-isopropil 3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il) acrilato de metila e (E)-isopropila 3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4- triazol-l-il) acrilato:
Figure img0084
[000289] Um frasco de 2-L, 3 gargalos de fundo redondo, carregado com uma solução de 3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol (160 g) em DMF ( 0,96 L, 6V), foi tratada com DABCO (127,74 g, 2 eq.) e agitada durante 30 min. (Z)-isopropil-3 iodoacrilato (150,32 g, 1,1 eq.) Foi adicionado gota a gota à mistura de reação acima e agitada durante 1 h antes de ser derramada em uma pasta de gelo-água (5 L) e extraída com EtOAc (3 x 1 L). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (3 x 100 mL), secos sobre Na2So4 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida (35°C, 20 mmHg) para se obter 250 g de composto em bruto. A purificação por cromatografia em coluna (Si02, 60/120 malha, eluição com EtOAc: hexanos; os compostos desejados começaram a eluição em 2-2,5% de EtOAc em hexanos) proporcionaram o éster cis puro (138 g, rendimento: 61,6%) e de éster de trans puro (11,6 g, rendimento: 5,2%).
[000290] Síntese de ácido (E) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-l-il) ácido
Figure img0085
[000291] Um frasco de 500 mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com uma solução de (E)- isopropil 3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH- l,2,4-triazol -l-il) acrilato (5,0 g) em THF (50 mL). A solução foi tratada com uma solução de LiOH (2,66 g, 5,0 eq.) em água (50 ml) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. antes de ser diluída com 40 ml de água, acidificada (pH = 2-3) com HC1 aquoso diluído e extraída com EtOAc (3 x 100 mL). O extrato orgânico foi lavado com salmoura, seco sobre Na2S04 anidro, filtrado e concentrado sob pressão reduzida para se obter 2,75 g do ácido carboxílico insaturado desejado (rendimento: 61,6%, pureza: 99,0% por CL-EM). Síntese de ácido (E) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il)- N'-(pirazin-2-il) acriloidrazida:
Figure img0086
[000292] A uma solução de (E) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-l-il)-ácido acrílico (0,75 g,) em EtOAc (25 mL) e THF (12,5 ml) foi adicionada uma solução de 2-hidrazinopirazina (0,23 g) em 12 mL de THF à temperatura ambiente. T3P (50% em acetato de etila, 1,52 ml) e DIPEA (1,46 mL) foram adicionados, gota a gota e simultaneamente, e a mistura de reação foi agitada durante 30 minutos à temperatura ambiente antes de ser resfriada bruscamente com água gelada e extraída com EtOAc (3 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2S04 anidro e concentrada sob pressão reduzida (35°C, 20 mmHg), obtendo-se 0,698 g de um sólido bruto. A trituração em primeiro lugar com éter do petróleo, em seguida com Et20 forneceu 275 mg (rendimento: 29%) de (E) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil) - 1H-1,2,4-triazol- l-il)-N'-(pirazin-2-il) acriloidrazida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ, 10,3 (s, 1H), 9,15 (s, 2H), 8,59 (s, 2H), 8,30-8,26 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 8,13 (s , 1H), 8,06-8,07 (m, 1H), 6,98-6,95 (d, J = 13,4 Hz, 1H); LCMS para C17H12F6N7O [M+H]+443,31, encontrado 444,19 (RT 2,625 min, pureza: 99,06%). Exemplo 18: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol - il)- N'-(piridin-4-il) cloridrato acriloidrazida (1-19).
Figure img0087
[000293] Um frasco de 50-mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il ) ácido acrílico (0,25 g) e EtOAc (10,0 mL). Cloridrato de 4- Hidrazinilpiridina (0,16 g, 1,2 eq.) foi adicionado a -40° C, seguido pela adição simultânea de T3P (50% em EtOAc, 0,85 mL, 2,0 eq.) e DIPEA (0,49 mL, 4,0 eq.). A mistura de reação foi agitada durante 30 min a -40°C antes de ser concentrada sob pressão reduzida (35°C, 20 mmHg) para fornecer 0,35 g de material bruto. A purificação por cromatografia em coluna, utilizando MeOH: CH2Cl2 como a fase móvel (composto foi eluído com 4% de MeOH em CH2Cl2) proporcionou 80 mg (rendimento: 29,85%) (Z) -3 - (3 - (3, 5-bis (trifluorometil) fenil) - 1H-1 ,2,4-triazol-1-il)-N'- (piridin-4-il) acriloidrazida 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ, 10,53 (s largo, NH permutável, 1H), 9,58 (s, 1H), 8,88 (s largo, NH permutável, 1H), 8,84 (s, 2H), 8,29 (s, 1H), 8,09-8,11 (d, 2H ), 7,52-7,54 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 6,666,69 (m, 2H), 6,06-6,10 (d, J = 14,4 Hz, H); LCMS para C18H13F6N6O [M+H]+443,33, encontrado 443,24 (TA 2,241 min, pureza: 90,17%).
[000294] Um frasco de 25 mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com uma solução fria (0°C) de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l, 2,4- triazol-l-il)-N'-(piridin-4-il) acriloidrazida (0,08 g) em CH2Cl2 (5,0 mL) e tratado com HCl4N em dioxano (0,5 mL). A mistura de reação foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 4 h antes de ser concentrada sob pressão reduzida (35°C, 20 mmHg) para se obter 0,05 g (rendimento: 40,81%) (Z) -3 - (3 - (3 ,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-l-il)-N'-(piridin- 4-il) acriloidrazida sal HCl. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,67 (br s, permutável, 1H), 10,67 (s, permutável, 1H), 9,43 (s, 1H), 8,58 (s, 2H), 8,35-8,38 (m, 4H), 7,60-7,62 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 6,92-6,96 (m, 2H), 611-6,13 (d, J = 10,4 Hz, 1H); LCMS para C18H13F6N6O [M+H]+443,33, encontrado 443,24 (RT 3,00 min, pureza: 90,97%). Exemplo 19: Síntese de (Z)-N-(4-benzilpiperazin- l-il) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil) - 1 H-1 ,2,4-triazol-1 -il)-acrilamida (1-20).
Figure img0088
Síntese de 4-benzilpiperazina-l-amina.
Figure img0089
[000295] Um frasco de 50 mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com HC1 conc. e água, e a solução foi resfriada a 0-5°C durante a adição de NaN02 e piperazina de benzila (5,0 g) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi agitada durante 2,5 h a 0-5°C, antes de ser diluída com água e extraída com EtOAc (3 x lOO mL). Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida (40°C, 20 mmHg) para se obter 4,40 g de um sólido incolor. A purificação utilizando cromatografia flash combi (eluição com 25,5% de EtOAc: hexano) forneceu 2,0 g do composto desejado (rendimento: 34,3%).
[000296] Uma solução fria (-70°C) de 1-benzil-4- nitroso-4-piperazina (0,8 g) em THF foi tratada com LAH em excesso, sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada 1,0 h, antes de ser resfriada bruscamente com água e extraída com EtOAc (3 x lO mL). Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida (40°C, 20 mmHg) para fornecer 0,70 g de 4-benzilpiperazin-1-amina como um sólido incolor. Síntese de (Z)-N-(4-benzilpiperazin-l-il) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil) -1 H-1 ,2,4- triazol-1-il) acrilamida.
[000297] Um frasco de 50 mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-l-il) ácido acrílico (0,220 g, 1,2 eq.), 4-benzilpiperazin-1-amina (0,10 g, 1,0 eq.) e EtOAc (15 ml). T3P (50% em EtOAc 0,99  g, 3,0 eq.) e DIPEA (0,27 mg, 4,0 eq.) foram adicionados sob atmosfera de nitrogênio à solução fria (-60 ° C). O progresso da reação foi seguido por análise de TLC (Si02, 15% MeOH: CH2Cl2 como fase móvel, a visualização sob luz UV). A mistura de reação foi resfriada bruscamente em água e extraída com acetato de etila (3 x 15 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida (25°C, 20 mmHg) para fornecer 0,35 g de sólido bruto. A purificação em Combi-flash (eluindo com 10% de MeOH / CH2Cl2) proporcionou 20 mg (rendimento: 6%) 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 9,44-9,48 (t, 3H), 9,10 (s, IH), 8,51 (s, 2H), 7,23- 7,41 (m, 6H), 6,46-6,49 (d, J = 10,4 Hz, IH), 5,83-5,86 (d, J = 10,4 Hz, IH), 3,47 (s, 2H), 2,81 (s, 4H), 2,23-2,33 (d, 2H) LCMS para C24H23F6N6O [M+H]+525,47, encontrado 525,20 (RT 9,87 min, pureza: 100%). Exemplo 20: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il)- N-etilpiperazin-l-il) acrilamida (1-21).
Figure img0090
[000298] Uma solução fria (-40 ° C) de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l- il)-ácido acrílico (0,25 g) em EtOAc (20 mL) foi tratada com 4-etilpiperazin-l-amina (0,12 g). T3P (50% em EtOAc, 0,84 ml) e DIPEA (0,24 ml) foram adicionados simultaneamente e a mistura de reação foi agitada durante 30 min a -40°C antes de ser resfriada bruscamente com água gelada e extraída com EtOAc (3 x 20 mL). Os extratos  orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre Na2S04 e concentrados sob pressão reduzida (35°C, 20 mmHg) para se obter 0,280 g de composto bruto. A purificação por cromatografia flash combi (eluição com 2% de MeOH em CH2Cl2) seguida de purificação em uma placa de TLC preparativa (eluição com 10% de MeOH em CH2Cl2) proporcionou 60 mg de (Z) -3 - (3 - (3 ,5-bis (trifluorometil) fenil) - 1 H-1 ,2,4-triazol-1-il)-N-(4- etilpiperazin-1-il) acrilamida. 1H NMR (400 MHz, CF3COOD) δ: 10,75 (s, IH), 8,31-8,29 (d, J = 10,2 H), 7,98 (s, IH), 7,21-7,23 (d, IH), 6,08-6,10 (d , IH), 3,52-3,54 (m, 3H), 3,36 (s, IH), 3,11 (m, 8H), 1,19-1,22 (m, 3H); LCMS para C19H21F6N6O [M+H]+463,40, encontrado 463,23 (RT 2,43 min, pureza: 98,63%). Exemplo 21: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-1-il)-Nmorfolinoacrilamida (1-22).
Figure img0091
[000299] Um frasco de 50 mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il) ácido acrílico (0,250 g), morfolin-4-amina (0,072 g, 1,0 eq.) e EtOAc (10 mL). A solução foi resfriada até -60°C e tratada com T3P (50% em EtOAc, 0,63 mL, 1,5 eq.) e DIPEA (0,24 mL, 2,0 eq.) sob uma atmosfera de nitrogênio. O progresso da reação foi seguido por análise de TLC usando 10% MeOH: CH2Cl2 como fase móvel e visualização sob luz UV. Após a conclusão, a mistura de reação foi resfriada bruscamente com água e extraída com EtOAc (3 x 15 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida (25°C, 20 mmHg) para fornecer 0,35 g de um sólido bruto. A purificação (Combi-Flash, eluição com 3% de MeOH: CH2Cl2) forneceu 100 mg (rendimento: 33%) (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l 2,4-triazol-l-il)-N- morfolinoacrilamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9,52 (s, 8,51 (s, 2H), 8,28 (s, 1H), 7,38-7,42 (m, 1H), 6,50-6,53 (d , J = 10,4 Hz, 1H), 5,84-5,86 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,63 (s, 4H), 2,87 (s, 4H); LCMS para C17H16F6N5O2 [M+H]+436,33, encontrado 436,18 (RT 2,64 min, pureza: 100%). Exemplo 22: Síntese de (Z) -3 (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-1-il)- N'-(pirimidin-4-il) acriloidrazida (1-23).
Figure img0092
Síntese de 4-hidrazinil pirimidina:
Figure img0093
[000300] Uma solução de 2,4-dicloropirimidina (2,0 g) em EtOH (25 mL) foi resfriada a 0-20°C e tratada com hidrazina (2,8 mL). O progresso da reação foi seguido por TLC usando 10% MeOH:CH2C12 como fase móvel e visualização sob luz UV. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida para produzir 3,1 g de cloreto de 2-cloro- 4-hidrazinil-pirimidina (rendimento = 94,8%).
[000301] A uma solução de 2-cloro-4-hidrazinil- pirimidina (200 mg) dissolvido em MeOH (10 mL) foi adicionado 10% de Pd/C (200 mg) e a suspensão foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio até que mostrou estar completa por análise por TLC (utilizando 10% de MeOH: CH2Cl2 como fase móvel e visualizando sob luz UV). A mistura foi filtrada através de Celite ® e concentrada sob pressão reduzida para se obter 250 mg de 4- hidrazinilpirimidina. Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil) - 1 H-1 ,2,4-triazol-1- il)-N'-(pirimidin-4-il) acriloidrazida.
[000302] Um frasco de 50 mL,e 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-l-il) ácido acrílico (250 mg, 1,0 eq.) e AcOEt (20,0 mL). 4- Hidrazinilpirimidina (231 mg, 3 eq) foi adicionado a -60°C, seguindo-se a adição simultânea de T3P (50% em EtOAc, 0,84 mL, 2,0 eq.) e DIPEA (0,24 mL, 2,0 eq.). A mistura de reação foi agitada durante 30 min a -60°C antes de ser concentrada sob pressão reduzida (35°C, 20 mmHg) para fornecer 0,20 g de um sólido. A purificação por cromatografia em coluna (eluição com 5% de MeOH em CH2C12) produziu 75 mg de material que foi purificado por TLC preparativo (usando Me0H: CH2Cl2, como fase móvel) para fornecer 13 mg (rendimento = 5%) (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil) - 1H-1,2,4-triazol-1-il)-N'- (pirimidin-4-il) acriloidrazida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10,59 (s, 1H), 9,68 (s, NH de troca, 1H), 9,47 (s, NH de troca, 1H), 8,53-8,59 (t, 2H), 8,30 ( s, 1H), 8,19-8,20 (d, 1H), 7,53-7,56 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 6,66-6,67 (d, 1H), 6,06-6,09 (d, J = 10,4 Hz, 1H) ; LCMS para C17H12F6N7O [M+H]+ 444,31, encontrado 444,19 (RT 2,39 min, pureza: 94,97%). Exemplo 23: Síntese de (Z) -3 - (3 - (4-cloro- 3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-1 ,2,4- triazol-1-il)-N'-(pirazin -2-il) acriloidrazida (1-24).
Figure img0094
Síntese de 4-cloro-3,5-bis (trifluorometil) benzamida:
Figure img0095
[000303] Uma solução de 4-cloro-3,5-bis (trifluorometil) benzonitrila (1,0 g) em DMSO (10 mL) foi tratada com K2C03 sólido (0,55 g, 1,1 eq.) e H202 (30% v/v, 1,0 mL). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h antes de ser derramada em água gelada (20 mL). O precipitado foi filtrado e lavado com éter de petróleo para se obter 1,0 g de amida primária desejada bruta (rendimento: 90%). Síntese de 4-cloro-3 ,5-bis (trifluorometil) benzotioamida:
Figure img0096
[000304] A uma solução de 4-cloro-3,5-bis (trifluorometil) benzamida (1,2 g) em tolueno (20 mL) foi adicionado reagente de Lawesson (3,32 g, 2,0 eq.). A mistura de reação foi agitada a 90°C durante 8 h antes de ser resfriada até à temperatura ambiente e filtrada. O filtrado foi derramado em água e extraído com EtOAc (3 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (3 x 50 mL), secos sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida (25°C, 20 mmHg) para se obter 2 g de composto bruto. O composto bruto foi purificado por cromatografia flash-combi (eluindo com 7% de EtOAc: hexano) para se obter 1,0 g do composto desejado (rendimento: 79%). Síntese de 3 -(4-cloro-3,5 - bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol:
Figure img0097
[000305] Uma solução de 4-cloro-3,5-bis (trifluorometil) benzotioamida (1 g) em DMF (10 mL) foi tratada com hidrato de hidrazina (0,32 g, 2,0 eq.) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h antes da adição de ácido fórmico (3 mL). A mistura de reação foi submetida a refluxo a 90 ° C durante 3 h, em seguida resfriada até à temperatura ambiente, derramada em solução aquosa saturada de NaHC03 (lentamente, mantendo a temperatura em 25-30°C) e extraída com EtOAc (3 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (3 50 mL), secos sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida (25°C, Síntese de (Z)-isopropil 3 - (3-(4-cloro-3 ,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-1-il) acrilato:
Figure img0098
[000306] Uma solução de 3 - (4-cloro-3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol (2,1 g) em DMF (20 mL) foi tratado com DABCO (1,5 g, 2 eq.) e a mistura foi agitada durante 30 min antes da adição de (Z)-isopropil-3 iodoacrilato (1,76 g, 1,1 eq.). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h, depois derramada em água gelada (50 mL) e extraída com EtOAc (3 x 15 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (3 x 10 mL), secos sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida (25°C, 20 mmHg) para se obter 3,0 g de composto bruto. A purificação por cromatografia em coluna, utilizando (60/120 malha Si02, luição com 1-1,2% MeOH em CH2C12) proporcionou o éster desejado insaturado (1,33 g, rendimento: 52%). Síntese de (Z) -3 -(3 - (4-cloro-3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il)- ácido acrílico:
Figure img0099
[000307] Um frasco de 25 mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com uma solução de (Z)- isopropil 3 - (3 - (4-cloro-3 ,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l, 2 ,4-triazol-l-il) acrilato (1,33 g) em 1:1 THF: água (26 mL). A solução foi tratada com LiOH sólido (0,53 g, 4 eq.) e agitada à temperatura ambiente durante 4 h antes de ser diluída com 400 ml de água, acidificada a pH = 2-3 com HCl aquoso diluído, e extraída com EtOAc (3 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre Na2S04 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para se obter 0,8 g de composto em bruto (rendimento: 66%). Síntese de (Z) -3 - (3 - (4-cloro-3 ,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il)- N'-(pirazin-2- il) acriloidrazida:
Figure img0100
[000308] Em um frasco de 50 mL, de 3 gargalos, de fundo redondo carregado com uma solução de (Z) -3 - (3 - (4-cloro-3 ,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l, 2, 4- triazol-l-il)-ácido acrílico (0,8 g) em 1:1 EtOAc: THF (20 mL). A solução foi resfriada até -70 ° C e tratada sequencialmente com 2-hidrazinopirazina (0,275 g, 1,2 eq), T3P (50% em EtOAc, 2,5 ml, 2,0 eq.) e DIPEA (1,44 mL, 4,0 eq.) adicionado gota a gota. A mistura de reação clara foi agitada a -60°C durante 1 h antes de ser concentrada sob pressão reduzida (25°C, 20 mm Hg) para se obter o composto bruto. A purificação por cromatografia em coluna utilizando (60/120 malha Si02 , eluição com 3-4% de MeOH em CH2C12) proporcionou 0,30 g (rendimento: 30%) (Z) -3 - (3 - (4- cloro-3 ,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l- il)-N'-(pirazin-2-il) acriloidrazida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10,53 (s, 1H), 9,58 (s, 1H), 9,11 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 8,13 (s , 1H), 8,06 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,52-7,55 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 6,08-6,1 1 (d, J = 10,4 Hz, 1H); LCMS para C17H11ClF6N7O [M+H]+478,76 encontrado 478,1 (RT 2,64 min, pureza: 100%). Exemplo 24: Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il)- N'-ciclopropilacriloidrazida (1-25) .
Figure img0101
[000309] Um frasco de 100-mL, 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il) ácido acrílico (0,50 g.) e CH2C12 (25 ml). DCC (0,29 g, 1,0 eq.) foi adicionado e a mistura foi resfriada a 0°C durante a adição sequencial de cloridrato de ciclopropil hidrazina (0,15 g, 1,0 eq.) e DIPEA (0,24 mL, 1,0 eq.). A mistura de reação foi agitada durante lH antes de ser derramada em água (50 ml) e extraída com CH2C12 (2 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL), seca sobre MgS04 anidro , filtrados, e concentrados sob pressão reduzida (25°C, 20 mmHg) para fornecer o composto bruto. A purificação por cromatografia flash-combi (eluição com 1,5-2,5% de MeOH em CH2C12) seguida por purificação adicional sobre uma placa de TLC preparativa (eluição com 70% de EtOAc em hexano) forneceu 15 mg (rendimento: 2,6%) (Z) -3 -(3 -(3,5-bis (trifluorometil) fenil) - 1 H-1,2,4- triazol-1-il)-N'-ciclopropilacriloidrazida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ, 9,16 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,23-7,26 (d, J = 10,4 Hz, 1H) ,6.40-6 .43 (d, J = 10,4 Hz, 1H) , 4,97 (s, 1H), 4,63 (s, 1H), 3,18-3,20 (m, 1H), 0,830,87 (m, 2H), 0,65-0,69 (m, 2H); LCMS para a Fórmula química: C16H14F6N5O [M+H]+406,31 406,19 encontrado (RT 2,74 min, pureza: 98,85%). Exemplo 25: Síntese de (Z)-3-(3-(3,5- bis(trifluorometil) fenil)-1H-1,2,4-triazol-1- il)-N-(3-hidroxi azetidin-1-il) acrilamida (1- 26).
Figure img0102
Síntese de l-amino-azetidin-3-ol:
Figure img0103
[000310] Uma solução resfriada (15-20°C) de hidrocloreto de azetidin-3-ol (2,0 g) em água (20 ml) foi tratada com NaOH (0,8 g em 10 mL de água) e a mistura foi agitada a 15-20 ° C durante 1 h. A mistura de reação foi então resfriada a 0°C e sequencialmente tratada com uma solução de NaN02 (1,89 g em 10 mL de água) e ácido acético (1,3 mL). Depois de ser agitada durante 2 h a 0-5 ° C, a mistura de reação foi derramada em água (20 ml), acidificada a pH = 2-3 com HC1 aquoso diluído e extraída com EtOAc (3 x 25 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL), secos sobre Na2S04 anidro e concentrados sob pressão reduzida para se obter 0,26 g do composto desejado, o qual foi utilizado como tal na etapa seguinte (pureza de LCMS: 59,84%).
[000311] Uma solução de l-nitrosoazetidin-3-ol (0,25 g) em MeOH (15 mL) foi resfriada a -75°C e tratada com HC1 aquoso diluído (1,5 mL). Pó de zinco (1,35 g) foi então adicionado em porções e a mistura de reação foi agitada a aproximadamente -70 ° C durante 3 h antes de ser filtrada através de Celite ® e concentrada sob pressão reduzida para se obter 90 mg de 1-amino-azetidin-3-ol, o qual foi utilizado como tal na etapa seguinte. Síntese de (Z) -3 - (3 - (3, 5-bis (trifluorometil) fenil) - 1 H-1,2,4-triazol-1- il)-N-(3-hidroxi-azetidin-l-il) acrilamida.
[000312] Um frasco de 50 mL, de 3 gargalos, de fundo redondo foi carregado com (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il) de ácido acrílico (200 mg) e THF (20,0 mL). A solução foi resfriada até -60°C e tratada com uma solução de 1-amino-azetidin-3- ol (65 mg, 1,3 eq.) em THF. T3P (50% em EtOAc, 0,67 mL, 2,0 eq) e DIPEA (0,51 mL, 2,0 eq) foram adicionadas simultaneamente e a mistura de reação foi agitada durante 30 min a -60°C antes de ser deixada aquecer até à temperatura ambiente. A mistura de reação foi, em seguida, concentrada sob pressão reduzida (35°C, 20 mmHg), obtendo- se 100 mg de sólido. A purificação por cromatografia em coluna (eluição com 3% de EOH em CH2C12) proporcionou 20 mg de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil) - 1 H-1 ,2,4-triazol - 1-il)-N-(3-hidroxiazetidina-1-il) acrilamida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,60 (s, IH), 6,38 (s, IH), 8,52 (s, 2H), 8,26 (s, IH), 7,32-7,35 (d, J = 10,8 Hz, IH), 6,40 (d, permutável, IH), 5,78-5,81 (d, J = 10,8 HZ, IH), 4,14-4,15 (d, IH), 3,82 (m, 2H), 3,71 (m, 2H); LCMS para a Fórmula Química C16H14F6N5O2 [M+H]+encontrado 422,31; 422,19 (RT 2,46 min, pureza: 91,49%).
[000313] EXEMPLOS 26-31: Os Exemplos 26-31 descrevem novos métodos de síntese úteis na preparação dos compostos da invenção (por exemplo, como precursores de compostos da invenção, tais compostos descritos pela fórmula Z acima). Exemplo 26.
Figure img0104
Síntese de propiolato isopropílico:
Figure img0105
[000314] Um frasco de 20-L, com quatro gargalos, de fundo redondo, equipado com um funil de adição, soquete de termômetro e um agitador mecânico, foi carregado com ácido propiólico (1,000 g, 1 equiv.) e IPA (8 L, 8 vol.). BF3-eterato (4,54 kg, 2,0 equiv.) foi adicionado lentamente a partir de um funil de adição a 25°C durante um período de 30 minutos. A temperatura da mistura de reação foi aumentada gradualmente até 90 ° C e a massa de reação foi mantida a essa temperatura durante 3 horas. Monitoramento GC após 3 horas mostrou a conclusão da reação. A mistura de reação foi resfriada até à temperatura ambiente, resfriada bruscamente com 20 L de água DM gelada e agitada durante 30 minutos. 10L de diclorometano foram adicionados à mistura de reação e a massa de reação foi agitada por mais 30 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi re-extraída com 5 L de diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 10 L de salmoura saturada, secas sobre sulfato de sódio anidro, e concentradas a vácuo a 35°C a 40°C (produto é volátil) para produzir o produto como um líquido castanho (1,32 kg, 81,25%). Pureza 89,67% (GC), 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ: 1,22 (d, 6H, J = 6,6 Hz), 2,85 (s, 1H), 4,98-5,05 (m, 1H). Síntese de (3-isopropil-iodoacrilato):
Figure img0106
[000315] Um frasco de 20-L, de quatro gargalos, de fundo redondo, equipado com funil de adição, um soquete de termômetro e um agitador mecânico foi carregado com éster isopropílico propiólico (1,000 g, 1 equiv.) e ácido acético (3,7 L, 3,7 vol.) a 25°C e a massa de reação foi agitada durante 10 minutos.Iodeto de sódio (2,138 kg, 1,6 vol.) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada (uma cor castanho escuro foi observada). A temperatura foi aumentada para 110°C e a reação foi mantida a essa temperatura durante 1,5 horas. Monitoramento por CG mostrou a conclusão da reação, após 1,5 horas. A mistura de reação foi resfriada a temperatura ambiente, resfriada bruscamente com água DM gelada (18.75L, 18.75 V) e agitada durante 30 minutos. MTBE (5 L) foi adicionada à massa de reação e agitada durante mais 30 minutos. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi re-extraída com MTBE (5 L). A camada orgânica combinada foi lavada com NaHC03 (2 x 10 L), NaHS03 (2 x 5 L), solução salina saturada (5,2 L, 5,2 V), seca sobre sulfato de sódio e concentrada a vácuo a 35°C para fornecer (Z)-isopropil-3 iodoacrilato como um líquido castanho (1,49 kg, 70%). Pureza 87,34% (GC), 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ: 1,28 (d, 6H, J = 6,3 Hz), 5,08-5,131 (m, 1H), 6,83 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,38 (d, 1H, J = 8,7 Hz). Síntese de 3,5-bis (trifluorometil) benzotioamida:
Figure img0107
[000316] Um frasco de 20-L, de multi-gargalos equipado com um agitador aéreo, e soquete de termômetro foi carregado com bis (trifluorometil) benzonitrila (1,25 kg, 1,0 equiv.) e DMF (6,25 L, 5V), e a mistura resultante foi agitada sob nitrogênio à temperatura ambiente (28°C). A mistura de reação foi resfriada até 10°C e 0,775 g NaSH.H20 (2 equiv.) foi adicionada durante um período de 10 minutos. Depois de agitar durante 15 minutos, MgCl2.6H20 (1,169 kg, 1,1 equiv.) foi adicionado durante um período de 15 minutos e a reação foi agitada por outro período de 35 minutos.O progresso da reação (solução de cor verde) foi monitorado por HPLC, que revelou 99,6% de produto e 0,03% de benzonitrila. A mistura de reação foi resfriada a 0-5°C e 30% de HC1 dil. (3,75 L) foi adicionada gota a gota, para ajustar o pH para 2-3. A massa resultante foi extraída com MTBE (5 L x 1). As camadas foram separadas e 1 L de água DM foi adicionado à camada aquosa, a qual foi re-extraída com MTBE (2,5 L x 1). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (4,5 L x 3), secas e concentradas sob vácuo. Hexano foi adicionado ao sólido obtido, seguido e o produto foi isolado como um sólido amarelo (1,400 kg, 98,0%). Pureza: 99,28% (HPLC). 1H NMR (300 MHz, CDC13) δ: 8,27 (s, 1H), 8,53 (s, 2 h), 10,0 (s, 1H), 10,38 (s, 1H). Síntese de 3 - (3, 5-bis (trifluorometil) fenil) - 1H-1,2,4 -triazol:
Figure img0108
[000317] Um frasco de 20-L, de multi-gargalos equipado com um agitador aéreo e soquete de termómetro, foi carregado com tioamida (1,378 g, 1 equiv.) e DMF (6,89 L, 5V), e a mistura foi agitada sob nitrogênio à temperatura ambiente (28°C). A massa de reação foi resfriada até 10°C e hidrato de hidrazina (505,4 g, 2,0 equiv.) foi adicionado gota a gota durante 2 horas com agitação. A massa de reação foi resfriada a 0°C a 5°C e o ácido fórmico foi adicionado durante um período de 1 hora (6,89 L, 5 V) (reação exotérmica foi observada e a temperatura aumentou para 20°C). A mistura de reação foi então aquecida a 95 a 100°C por mais 12 horas. O progresso da reação foi monitorado por HPLC que mostrou a formação de 99,5% do produto. A massa de reação foi resfriada para 35 a 40°C, adicionada a 20,6 litros de água DM pré-resfriada (10 a 15°C) e agitada durante 30 minutos. A massa de reação foi extraída com MTBE (8,26 L). A camada aquosa foi novamente extraída com MTBE (5,512 L) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com bicarbonato de sódio a 10% (6,89 L, 2V), salmoura (6,89 L x 3), secas com sulfato de sódio e concentradas a vácuo. Diclorometano (2V) foi adicionado ao sólido amarelo obtido e agitado a 0 a 5 ° C durante 1 hora, o que, em filtração, forneceu o produto como um sólido amarelo (1,156 g, 82,2%). Pureza: 99,7% (HPLC), 1H NMR (300 MHz, DMSO) δ: 8,15 (s, 1H), 8,55 (s, 2H), 8,79 (s, 1H), 14,5 (s, 1H, NH). Síntese de (Z)-isopropil 3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il) acrilato
Figure img0109
[000318] Um frasco de 10-L, de fundo redondo de quatro gargalos, equipado com funil de adição, soquete de termómetro, agitador mecânico, rolha foi carregado com 3 - (3, 5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l, 2, 4-triazol (600 g, 1,0 eq.), DABCO (480 g, 2,0 eq) e DMF (3,0 L). A mistura de reação foi agitada durante 30 minutos. Depois de 30 minutos, uma solução de iodo-éster (1024,8 g, 2,0 eq) em DMF (1200 mL) foi adicionada gota a gota durante um período de 1 hora. O progresso da reação foi monitorado por HPLC e mostrou (Z)-isopropil 3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-l-il) acrilato: 62,36 % e 3 - (3,5- bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol: 15,1%. Após 1 hora adicional, um equivalente de DABCO (258 g) foi adicionado e a reação foi mantida durante mais uma hora. A análise de HPLC mostrou a conversão de 75,63% de (Z)- isopropil 3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH- l,2,4-triazol-l-il) acrilato e 2% 3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol. A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água DM fria (12 L), agitada durante 15 minutos, e extraída com acetato de etila (2 x 6 L). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de salmoura saturada (30% de 2 x 3 L), secas sobre sulfato de sódio anidro (100 g) e concentradas. A massa bruta (840 g) foi recebida em um frasco de fundo redondo de 10 L e metanol (1200 mL) foi adicionado. A solução foi mantida a 0-5 ° C e agitada durante 30 minutos. O sólido obtido foi filtrado e lavado com metanol (200 mL), que forneceu o produto como um sólido branco (550 g, 65,0%). Pureza: 87,34% (HPLC); 1H NMR (300 MHz, CDC1 3) δ: 1,30 (d, 6H, J = 6,0 Hz), 5,12 (m, 1H), 5,73 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 7,24 (d, 1H, J = 10,8 Hz), 7,91 (s, 1H), 8,58 (s, 2H), 9,70 (s, 1H). razão de Isômero cis: trans-isômero é 83:8. Síntese de (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-l-il) ácido acrílico
Figure img0110
[000319] Um frasco de 5L, de quatro gargalos, de fundo redondo, equipado com funil de adição, soquete de termômetro, agitador mecânico e rolha, foi carregado com THF (1,25 L) e (Z)-isopropil 3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il) acrilato (125 g, 1 eq.) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi resfriada a 0°C. À solução em agitação foi adicionada uma solução de hidróxido de lítio gelada (66,58 g em 1,25 L de água) durante um período de 30 minutos através de um funil de adição. A temperatura da reação foi lentamente aumentada para 25°C e a massa de reação foi mantida nessa temperatura durante 2 horas. Monitoração por HPLC mostrou o seguinte estado: (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il)-ácido acrílico: 87,66%, (E) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4- triazol-l-il)-ácido acrílico: 9,91%, (Z)-isopropil 3 - (3 - ( 3 ,5-bis (trifluorometil) fenil) - 1 H-1 ,2,4-triazol-1- il) acrilato 2%. A reação continuou por mais 30 minutos e submetido à monitoração por HPLC ((Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il) ácido acrílico: 88,20%, (E) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il)-ácido acrílico: 11,03% Depois de término da reação, a mistura de reação foi resfriada bruscamente com água gelada (385 ml) e agitada durante 30 minutos. O pH foi ajustado para 1-2 com ácido clorídrico diluído (30%, 400 mL) e a massa de reação foi extraída com acetato de etila (3 x 625 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina saturada (30%, 650 mL), secas sobre sulfato de sódio anidro (12,5 g) e concentradas sob pressão reduzida a 30-35°C. Adicionou-se hexano ao material bruto e agitou-se durante 30 minutos. Os sólidos obtidos foram filtrados através de um funil de Buchner e lavados com hexano (250 mL). O sólido obtido foi seco durante 30 minutos a vácuo e à temperatura ambiente durante 3-4 horas. O produto foi isolado como um pó branco (92,8 g, 84,36%). Pureza: 93% (HPLC), 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 5,98 (d, 1H, J = 10,2 Hz), 7,48 (d, 1H, J = 10,2 Hz), 8,2 (s, 1H) , 8,50-8,54 (m, 2H), 9,39 (s, 1H). Síntese de (Z) -3 - (3 - (3, 5-bis (trifluorometil) fenil) - 1H-1 ,2,4-triazol-1 il) - 1 - (3, 3-1-difluoroazetidin -il)-2-en-1-ona:
Figure img0111
[000320] A um frasco de 3-L, de quatro gargalos, de fundo redondo, equipado com entrada de nitrogênio, funil de adição, soquete de termômetro, agitador mecânico, foi adicionado (Z) -3 - (3 - (3,5-bis (trifluorometil) fenil) - lH-l ,2,4-triazol-l-il)-ácido acrílico (100 g, 1,0 eq.) em DCM (1,8 L, 18 V). A mistura de reação foi resfriada a - l0°C. À solução resfriada, adicionou-se HOBT (4,4 g, 0,1 eq.), EDC-HC1 (80,6 g, 1,5 eq.) e cloridrato de 3,3- difluoroazetidina (44 g, 1,2 eq.). À mistura resultante em -10°C, adicionou-se DIPEA (72 mL, 1,5 eq) gota a gota durante um período de 1,5 horas. O progresso da reação foi monitorado por análise por HPLC que mostrou que a conclusão da reação ao término da adição de DIPEA. A temperatura da reação foi lentamente aumentada para 15°C a 20°C (~ 2 h). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com 1 L de pasta de gelo-água. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com DCM (400 mL x 2). A camada orgânica foi lavada com solução de salmoura saturada (2 x 500 ml), seca sobre Na2S04 anidro (l0 g) e concentrada sob pressão reduzida (~ 35°C) para se obter o composto bruto. O composto bruto assim obtido foi dissolvido em 5 vol. de DIPE e agitado à temperatura ambiente durante 30 min. e, em seguida, filtrado. O Peso bruto foi de 100 g (rendimento = 82,39%) [cis-85,07% por HPLC, Trans-14,36% por HPLC].
[000321] O composto bruto assim obtido foi ainda purificado por recristalização com acetato de etila de acordo com o seguinte procedimento. A um frasco de 500 mL, de quatro gargalos, fundo redondo, equipado com agitador mecânico, soquete de termômetro e rolha foram adicionados 100 g de (Z)-3-(3-(3,5-bis(trifluorometil) fenil)-1H- 1,2,4-triazol-1-il)-1-(3,3-difluoroazetidin-1-il)prop-2-en- 1-ona. A este composto à temperatura ambiente foi adicionado acetato de etila (7 volumes), sob agitação. No entanto, o composto não foi completamente solúvel. Assim, a solução resultante foi aquecida a 60°C para obter uma solução clara e, em seguida, foi lentamente resfriada a - 30°C. A -30°C, a solução foi agitada durante 20 min. e filtrada sob sucção. O composto obtido foi seco sob vácuo a 40-45°C durante 3 h - 4 h para fornecer o produto como um sólido branco. (Cis- 98,9% por HPLC), (Z) -3 - (3 - (3,5- bis (trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-l-il)-l-(3, 3-difiuoroazetidin-l-il) prop-2-en-l-ona. 1H NMR (300 MHz, CDC1 3 ) δ 9,57 (s, 1H), 8,56 (s, 2H), 7,90 (s, 1H), 7,187,21 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 5,61-5,65 (d , J = 10,8 Hz, 1H), 4,39-4,45 (m, 4H). Exemplo 27 Síntese de (Z)-3-ácido iodoacrílico:
Figure img0112
[000322] Um frasco de 250 mL de três gargalos frasco, de fundo redondo equipado com entrada de nitrogênio adicionou-se ácido propiólico (7,0 g, 1,0 eq) dissolvido em ácido acético (70 mL, 10 V) e iodeto de sódio (29,96 g, 2,0 eq). A mistura de reação foi submetida a refluxo a 1000 C durante 2-3 h. O progresso da reação foi seguido por análise de TLC em gel de sílica com 10% MeOH: DCM como fase móvel. SM Rf = 0.3 e do produto de Rf = 0,5. A mistura de reação foi derramada em água gelada (700 ml) e neutralizada com solução saturada de bicarbonato solidum. A mistura de reação foi extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de salmoura (3 x 100 mL), secas sobre MgS04, filtradas e concentradas por evaporação rotativa (25°C, 20 mmHg) para se obter 12,0 g do composto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna usando sílica 60/120 utilizando MeOH: DCM como fase móvel. A coluna (5 x 10 cm) foi acondicionada em DCM e começou a eluição em gradiente de MeOH iniciando com a coleta de frações (frações de 50 mL) de 2% a 5% de MeOH em DCM. O composto iniciou a eluição com 2% de MeOH em DCM. As fracções contendo tal perfil TLC foram combinadas para se obter 8,0 g do composto desejado (rendimento de 40,44%). Síntese de - 1 - (3, 3-difluoroazetidin-1-il) -3- iodoprop-2-en-1-ona:
Figure img0113
[000323] Em um frasco de 25 mL, de três gargalos de fundo redondo, equipado com entrada de nitrogênio e um septo de borracha, (Z)- 3- ácido iodoacrílico (0,250 g, 1,0 eq.) foi dissolvido em DCM (10 mL, 40 V). A mistura de reação foi resfriada a 0°C, e DIPEA (0,168 g, 1,1 eq), HATU (0,494g, l,1 eq) e cloridrato de 3,3-difluoroazetidina (0,179 g, 1,1) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 2-3 horas. O progresso da reação foi seguido por análise de TLC em gel de sílica com 40% acetato de etilo em hexano. A mistura de reação foi filtrada e concentrada por evaporação rotativa (25°C, 20 mmHg) para se obter 0,3 g de composto bruto, o qual foi purificado por cromatografia em coluna usando sílica 60/120 usando 40% de acetato de etila em hexano como fase móvel. A coluna (5 10 cm) foi acondicionada em 5% de acetato de etila em hexano e começou a eluição em acetato de etila na forma de gradiente começando com a coleta das frações (frações de 50 mL) de 20% a 30% de acetato de etila em hexano. O composto iniciou a eluição com 20% de acetato de etila em hexano. As frações contendo tal perfil TLC foram combinadas para se obter 0,18 g do composto desejado (rendimento de 52,33%). Massa: [M + H]+: 273,8. Síntese de (Z) -3 - (3 - (3, 5-bis (trifluorometil) fenil) - 1H-1,2,4-triazol-1-il) - 1 - (3, 3-difluoroazetidina-1-il)prop-2-en-1- ona:
Figure img0114
[000324] Em um frasco de 25 mL, de três gargalos de fundo redondo, equipado com entrada de nitrogênio, (3,5-bis (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol (0,18 g, 1,0 eq.) foi dissolvido em DMF (5,0 mL, 27,0 V), e DABCO (0,143 g, 2,0 eq) e (Z)-l-(3,3-difluoroazetidin-l-il)-3- iodoprop-2-en-l - ona (0,192 g, 1,1 eq) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2-3 horas. O progresso da reação foi seguido por análise de TLC em gel de sílica com 80% de acetato de etilo-hexano como fase móvel, SM Rf = 0,60 e produto Rf = 0,4. A mistura de reação foi derramada em água gelada (50 mL) e extraída com EtOAc (3 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de salmoura (3 x 25 mL), secas sobre MgS04, filtradas, e concentradas por evaporação rotativa (25°C, 20 mmHg) para se obter 0,3 g de composto bruto, o qual foi purificado por cromatografia em coluna usando sílica 60/120, utilizando acetato de etila: hexano como fase móvel. A coluna (5 x 10 cm) foi acondicionada em hexano e começou eluição em acetato de etila na forma de gradiente começando com a coleta de frações (frações de 50 ml) a partir de 40% a 45%) de acetato de etila em hexano. O composto iniciou eluição com 40% de acetato de etila em hexano. As frações contendo tal perfil TLC foram combinados para obter 70 mg do composto desejado (rendimento de 25,64%). Exemplo 28. Síntese de (Z)-isopropil 3 - (3 - ((3-isopropoxi-5 trifluorometil) fenil)-lH-1,2,4- triazol-1-il) acrilato:
Figure img0115
[000325] Síntese de propiolato isopropílico. A uma mistura de ácido propiólico (500 g, 7,1 mols) em isopropanol (4000 ml) foi adicionado eterato de BF3 (2015 g, 14,2 mols) a 10°C. Depois de se agitar durante 10 minutos, a mistura de reação foi aquecida a 90°C e agitada durante 2 horas. A conclusão da reação foi monitorada por TLC. A mistura de reação foi levada até 25 a 30°C e resfriada bruscamente com gelo picado seguido por extração com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com água e depois com solução de salmoura. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e concentrada sob vácuo para fornecer o propiolato de isopropila (440 g, 55%). O produto foi confirmado por 1H NMR.
[000326] Síntese de (Z)-isopropil-3 iodoacrilato. A uma mistura de propiolato de isopropila (350g, 3,1 mols) em AcOH (1,300 mL) foi adicionado Nal (930 g, 6,2 mols) a 25°C. A mistura de reação foi aquecida a 115°C e agitada durante 1,5 horas. A mistura de reação foi resfriada a 25 a 30°C e resfriada bruscamente com água, seguida por extração com MTBE. A camada orgânica foi lavada com bicarbonato saturado, bissulfito e uma solução de salmoura. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e concentrada sob vácuo para fornecer o produto (Z)- isopropil-3 iodoacrilato (626 g; 83,5%).O produto foi confirmado por 1H NMR. Síntese de 3-isopropoxi-5 (trifluorometil) benzonitrila:
Figure img0116
[000327] A uma mistura de propan-2-ol (102,96 g 1,76 moles) em DMF (3200 mL, 8 V) a 5°C foi adicionado NaH (122 g, 5,08 mols). A mistura foi agitada durante 2 horas. A esta mistura adicionou-se 3-fluoro-5-(trifluorometil) benzonitrila (400, 2,1 mols) gota a gota. A temperatura da massa foi aumentada para 25 a 30°C e mantida à mesma temperatura durante 1 hora. A reação foi monitorada por HPLC. Depois de concluída, a mistura de reação foi resfriada bruscamente com água gelada e extraída com acetato de etila. A camada de acetato de etila foi lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio e, em seguida, concentrada sob vácuo para fornecer 530 g (2,31 mols, 110%) de 3-isopropoxi-5 (trifluorometil) benzonitrila, que foi tomada como tal para a próxima etapa sem purificação adicional. Pureza por HPLC - 96,5. % Por área (a / a). Síntese de 3-isopropoxi-5 (trifluorometil) benzotioamida:
Figure img0117
[000328] 3-Isopropoxi-5-(trifluorometil) benzonitrila (1,000 g, 4,3 mols) foi dissolvido em DMF (4000 mL) e hidrato de hidrogensulfeto de sódio (636 g, 8,6 mols) foi adicionado seguido de hexahidrato de cloreto de magnésio (960,2 g, 4,7 mols). A mistura de reação foi agitada durante 1 hora a 25 a 30°C. A conclusão da reação foi monitorada por TLC utilizando acetato de etila: hexano (2:8) como a fase móvel. A mistura de reação foi resfriada bruscamente em uma pasta de gelo-água (250 mL) e o pH foi ajustado para 5 pela adição de 10% de HC1 aquoso. A mistura de reação foi extraída com MTBE e foi lavada com solução de salmoura a 20%. A camada orgânica foi concentrada sob vácuo para fornecer 1136 g (4,3 mols, 100%) do composto do título, que foi tomado como tal para a próxima etapa. Pureza HPLC - 97,37% a / a. Síntese de 3 - (3-isopropoxi-5- (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol:
Figure img0118
[000329] 3-Isopropoxi-5-(trifluorometil) benzotioamida (646 g; 2,74 mols) foi combinado com hidrato de hidrazina (140 g, 4,4 mols) e DMF (3,200 ml; 5V). A mistura foi agitada durante 30 minutos e resfriada a 10°C. A esta mistura de reação foi adicionado ácido fórmico (3,200 mL) gota a gota. A mistura de reação foi aquecida a 90 até 100°C e mantida durante 12 horas. Após a conclusão da reação por HPLC, a massa de reação foi resfriada a 25 a 30°C e resfriada bruscamente com água gelada. A mistura foi extraída em MTBE. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seguido por bicarbonato de sódio aquoso, e concentrada sob vácuo. O resíduo foi expulso utilizando hexano, o resíduo resultante foi formado em pasta a 10°C durante 1 hora. O sólido obtido foi filtrado e seco durante 12 horas a 25 a 30°C para fornecer 550 g (2,26 mols: 82%) do produto 3 - (3-metoxi-5-(trifluorometil) fenil)-lH-l, 2 ,4-triazol. Pureza HPLC -95,24% a / a. Síntese de (Z)-isopropil 3 - (3 - ((3-isopropoxi- 5 trifluorometil) fenil)-lH-l ,2,4-triazol-1-il) acrilato:
Figure img0119
[000330] Uma mistura de 3 - (3-metoxi-5- (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol (500 g, 1,8 mols) e DABCO (417,6 g; 3,6 mols) em DMF (1200 mL) foi agitada durante 30 minutos. A esta mistura foi adicionado (Z)- isopropil-3 iodoacrilato (864 g; 3,6 mols) em DMF (1200 ml), lentamente, a 25 até 30°C e a mistura de reação foi agitada durante 1 hora. Após 1 hora, DABCO (208 g, 1 eq) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 1 hora. A análise por HPLC mostrou 3 - (3-metoxi-5- (trifluorometil) fenil) - lH-l,2,4-triazol 9,59%, (Z)- isopropil 3 - (3 - (3-isopropoxi-5-( trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol-l-il) acrilato: 73,76%, (E)- isopropil 3 - (3 - ((3-isopropoxi-5 trifluorometil) fenil) - 1 H-1,2,4-triazol-1-il) acrilato de metil: 6,66%. A massa de reação foi resfriada bruscamente com água, extraída com diclorometano e concentrada sob vácuo para fornecer o produto em bruto. O produto bruto foi submetido à cromatografia utilizando sistema de acetato de etila-hexano em 60-120 de sílica gel para fornecer 310 g (0,8 mols, 44%). Pureza por HPLC - 99% a / a. Exemplo 29. Síntese de (Z)-isopropil 3 - (3 - (3- metoxi-5-(trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4- triazol-l-il) acrilato:
Figure img0120
[000331] A uma solução de 3 - (3-metoxi-5- (trifluorometil) fenil)-lH-l,2,4-triazol (0,50 g) (preparada de acordo com o Exemplo 3) em DMF (1,5 mL) foi adicionado DABCO (2 equiv.) A mistura de reação resultante foi agitada durante 30 min à temperatura ambiente, em seguida, (Z)-isopropil-3 iodoacrilato (2,0 equiv.; preparado de acordo com o Exemplo 3) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água gelada, e extraída com acetato de etila (3 vezes). As camadas orgânicas foram separadas e a camada orgânica combinada foi seca sobre sulfato de sódio anidro. A análise de LC-MS e HPLC revelou 62% de isômero cis e 36% de trans-isômero. 1H NMR (400 MHz, CDC1 3) δ: 9,72 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,28 (d, J = 8,8 Hz, 1H ), 5,71-5,73 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 5.12-5,18 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 1,34 (d, 6 H): LCMS para C16H16F3N3O3 [M+1]+355,31 355,92 encontrado em 4,317 min (LCMS 99,82%) . Exemplo 30. Síntese de (Z)-isopropil 3 - (3 - (2- cloro-6-isopropoxipiridin-4-il) -1H-1,2,4- triazol-1-il) acrilato:
Figure img0121
[000332] A 2-cloro-6-isopropoxi-4-(lH-l,2,4- triazol-3-il) piridina (0,5 g) (preparado como no Exemplo 3) em 3 mL de DMF, adicionou-se DABCO (0.467g, 2 equiv.) e a mistura resultante foi agitada durante 30 min. Uma solução de (Z)-isopropil-3 iodoacrilato (0,990 g, 2 equiv.) (preparado como no Exemplo 3) foi adicionado à mistura de reação, e a mistura resultante foi agitada durante 3 h à temperatura ambiente. A mistura de reação foi elaborada tal como no Exemplo 3, para se obter 53% de isômero cis e 34% 34% de isômero trans. Exemplo 31. Síntese de (Z)-isopropil 3 - (3 - (3 - (ciclobutilamino) -5 - (trifluorometil) fenil) - 1H-1,2,4-triazol-1-il) acrilato:
Figure img0122
[000333] a N-ciclobutil-3-(lH-l,2,4-triazol-3- il) -5 - (trifluorometil) anilina (0,5 g) (preparado como no Exemplo 3) em 1,5 mL de DMF, adicionou-se DABCO (0,188 g) e a mistura resultante foi agitada durante 30 min. Uma solução de (Z)-isopropil-3 iodoacrilato (0,404 g) (preparado como no Exemplo 3) foi adicionado à mistura de reação, e a mistura resultante foi agitada durante 3 h à temperatura ambiente. A mistura de reação foi elaborada tal como no Exemplo 3, para se obter 44% de isômero cis e 20% de trans-isômero.
[000334] Exemplo 32: Ensaios. Compostos exemplares da invenção foram testados em paralelo com compostos Xl, X2 e X-3 (ilustrados na Tabela 2), em vários ensaios. Os resultados são expostos na Tabela 2 abaixo.
Inibição de Exportação Nuclear
[000335] A capacidade de compostos exemplares de a invenção inibir a exportação nuclear mediada por CRM-1 foi avaliada em um ensaio de RevGFP. Rev é uma proteína do tipo de vírus da imunodeficiência humana 1 (HIV-1) e contém um sinal de exportação nuclear (NES) no seu domínio do terminal C e um sinal de localização nuclear (NLS) no seu domínio N-terminal. Exportação nuclear de proteína Rev é dependente da via de NES / CRMl clássica (Neville e outros. 1997). Acumulação nuclear de Rev pode ser observada nas células tratadas com inibidores específicos de CRM1, como LMB (Kau e outros. 2003).
[000336] Neste ensaio, as células RevGFP-U20S foram semeadas em placas com 384 cavidades, de fundo claro, pretas, no dia anterior ao experimento. Os compostos foram diluídos em série 1: 2 em DMEM, iniciando a partir de 40 μM em uma placa de 384 cavidades separada, e, em seguida, transferidos para as células. As células foram incubadas com o composto durante aproximadamente 1 hora antes da fixação com formaldeído a 3,7% e coloração dos núcleos com Hoechst 33258. A quantidade de GFP no núcleo de células foi medida e a IC50 de cada composto foi determinada (Kau e outros. 2003). Os compostos da invenção são considerados ativos no ensaio Rev-GFP descrito acima, se os mesmos tiverem um IC50 inferior a aproximadamente 10 μM, com os compostos mais preferidos tendo um IC50 menor do que aproximadamente 1 μM. Os resultados do ensaio de RevGFP aparecem na Tabela 2.
Ensaio de Proliferação de Células
[000337] O ensaio de proliferação de células CellTiter® AQueous One Solution (Promega) foi usado em linhagem de células de mieloma múltipla MM.1S para estudar as propriedades citotóxicas e citostáticas dos compostos. O ensaio baseia-se na clivagem do sal de tetrazólio, MTS, na presença de um reagente de acoplamento de eléctron PES (etossulfato de fenazina). O composto de tetrazólio MTS é biorreduzido pelas células em um produto de formazano colorido, que é solúvel em meio de cultura de tecido. Essa conversão é realizada, presumivelmente por NADPH ou NADH produzido por enzimas desidrogenase em células metabolicamente ativas. Os ensaios são realizados por adição de uma pequena quantidade do reagente CellTiter® AQueous One Solution diretamente nas cavidades de cultura, incubando durante 1-4 horas e, em seguida, registrando a absorvência a 490 nm com um leitor de placas de 96 cavidades. A absorvência revelou uma correlação direta com o número de células e sua atividade metabólica.
[000338] As células foram semeadas a 5xl03a 1.5xl04células em cada cavidade de uma placa de 96 cavidades em 100 μ L de meio de cultura fresco e as células aderentes foram deixadas ligar durante a noite. As soluções de material dos compostos foram diluídas em meio de cultura de células para obter oito concentrações de cada droga, variando desde 1 nM até 30 μM e DMSO a menos de 1% v / v foi utilizado como um controle negativo. As soluções de drogas resultantes foram transferidas sobre as células. Após 72 h de tratamento, 20 μl de reagente CellTiter 96® Aqueous foram adicionados a cada cavidade das placas de ensaio de 96 cavidades e a placa foi incubada a 37°C durante 1-4 horas em uma atmosfera úmida, 5% de atmosfera de C02. Em seguida, a absorvência de cada cavidade foi registrada a 490 nm, utilizando um leitor de placas de 96 cavidades. Na maioria dos casos, o ensaio foi realizado em triplicata e os resultados foram apresentados como metade da concentração máxima inibitória (IC50). A densidade óptica versus a concentração de composto foi representada e analisada utilizando equações de regressão não-linear (IDBS XLfit) e o IC50 para cada composto foi calculado.
Ensaio de Farmacocinética (PK) e cérebro: Determinação de razão de Plasma
[000339] AUC. Foi coletado sangue de camundongos (n = 3) para contribuir para o total de 10 pontos de tempo (antes da dose, 5 min, 15 min, 30 min, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 12 horas e 24 horas após a dose). Os camundongos foram sangrados em sistema de rodízio, cada camundongo contribuindo três pontos de tempo para a coleta de sangue. Nos pontos de tempo designados, os animais foram anestesiados com isoflurano, e aproximadamente 110 μ L de sangue por ponto de tempo foram coletados através de punção retro-orbital nos tubos de K2EDTA (anti-coagulante) pré- resfriados. As amostras de sangue foram colocadas em gelo molhado e centrifugadas (2000g, 5 min a 4°C) para obter plasma em 30 minutos após a coleta da amostra. Todas as amostras foram armazenadas congeladas a aproximadamente - 80°C até à análise. Antes da análise, as amostras foram misturadas com o padrão interno (dexametasona) em acetonitrila, submetidas a vórtice, centrifugadas, e o sobrenadante foi injetado para análise. A concentração dos compostos no plasma foi determinada utilizando instrumentação LC-MS-MS (API 4000, triplo quadrupolo com ionização por electrospray; coluna de Cromatografia líquida de desempenho ultra de acuidade Cl8, com MeOH e ácido fórmico como solventes orgânicos). Valores da AUC foram calculados utilizando WinNonlin Professional pacote de software 6.2, modelo de farmacocinética não-de compartimentos NCA200.
[000340] Razão de Cérebro para Plasma (B:P). Um grupo separado de camundongos (N = 3) foi dosado (PO a 10 mg / kg) e depois sacrificado no tempo de concentração máxima de plasma (Tmax estimada em 2 horas após a dose), no qual o tecido de cérebro e plasma terminal de tempo foram coletados. Após a coleta, o tecido cerebral foi enxaguado com solução salina fria, seco em papel de filtro, pesado e congelado por colocar em gelo seco. Todas as amostras foram armazenadas congeladas a aproximadamente -80°C até à análise. No momento da análise, o tecido cerebral foi homogeneizado (solução de homogeneizar PBS, pH 7,4), misturado com padrão interno (dexametasona) em acetonitrila, agitado, centrifugado, e o sobrenadante foi injetado para análise da concentração do composto usando metodologia de LC-MS-MS (API 4000, Quádruplo Triplo com ionização por electrospray; coluna de Cromatografia líquida de ultra desempenho de Acuidade C18, com MeOH e ácido fórmico como solventes orgânicos). As amostras de plasma foram tratadas com o método idêntico (exceto a etapa de homogeneização) e a concentração do composto em cada matriz foi calculada com base em curvas padrão geradas. Os resultados do ensaio de PK e a determinação da razão B:P determinação são apresentados na Tabela 2. Tabela 2. Resultados de ensaio para compostos da formula I e comparadores dos mesmos (A = valor de IC50 de <=1 μ M; B = valor de IC50 de 1-10 μ M; C = valor de IC50 de >10 μ M; NT = não testado).
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* Dosado em camundongos a 10 mg/kg po. ** Composto 26 da US 2009/0275607. *** Composto 44 da US 2009/0275607. ‡ Valores AUCInf para o composto X-1 dosado em camundongos a 10 mg/kg po estavam abaixo do limite de quantificação. Os dados relatados para 5 mg/kg iv. † Dosado em ratos a 10 mg/kg po.
[000341] O AUCinf para o composto X-1 estava abaixo do limite de detecção quando administrado em camundongos em 10 mg / kg po. Quando administrado em doses de 5 mg / kg iv, o composto X-I mostrou exposição mínima, como indicado pelo baixo AUCinf de 209 hr*mg/ mL. A razão de cérebro para plasma para o composto X-l não foi determinada devido aos seus níveis de exposição insignificantes quando administrado po.
[000342] A AUCinf para o composto X-2 foi calculada como sendo de 68,3 hr*ng/ mL, quando administrado em ratos com doses de 10 mg / kg po. Tais níveis de exposição são extremamente baixos quando comparados com o composto X-3 e os compostos de fórmula I da presente invenção. No entanto, o composto X-2 exibe uma razão moderada de cérebro para plasma. A AUCinf baixa juntamente com uma razão de cérebro para plasma não desprezível sugere que o composto X-2 pode cruzar o BBB, apesar dos níveis de exposição baixos. Acredita-se que o Composto X-2 teria uma razão de cérebro para plasma significativamente mais elevada se AUCinf fosse aumentada.
[000343] A AUCinf para o composto X-3 foi calculada como sendo 12300 hr*ng / mL, quando administrado em ratos com 10 mg / kg po, indicando boa exposição. No entanto, o composto X-3 demonstrou uma alta razão B: P de 5,0.
[000344] Os compostos de Fórmula I são caracterizados por AUCinf superior a aproximadamente 3300 hr*ng / mL, na maioria dos casos, maior do que aproximadamente 3500 hr*ng / mL, e uma razão B: P relativamente baixa (<2,5). Em geral, maiores níveis de exposição de um agente terapêutico aumentam a probabilidade de penetração no cérebro. É, portanto, surpreendente e inesperado que os compostos de fórmula I apresentam níveis elevados de AUCinf e razões de cérebro para plasma relativamente baixas.
Atividade In vivo e in vitro de compostos da invenção contra câncer de mama
[000345] Cânceres de mama semelhantes a Basal- (BLBC) compõem até 15% de câncer de mama (BC) e são geralmente o câncer de mama triplo negativo (TNBC) e caracterizados pela falta de ER, receptor de progesterona PR e amplificação HER-2. Além disso, a maioria dos BCs associados à BRCA-1 são BLBC e TNBC, expressando citoqueratinas basais e EGFR. BLBC é caracterizada por um fenótipo agressivo, alto grau histológico, e os resultados clínicos pobres com recorrência e taxas de metástase altas. São necessárias terapias adicionais. A atividade dos compostos da invenção, por exemplo, o Composto 1-3 foi avaliada em várias linhagens de células do câncer da mama, in vitro e in vivo.
A inibição do Xenoenxerto de TNBC (Câncer de mama triplo negativo) In Vivo
[000346] As células de câncer da mama negativas triplos MDA-MB-468 (ATCC # HTB-132) foram obtidas a partir da ATCC. Estas células foram cultivadas em meio L-15 de Leibovitz suplementado com 10% de soro fetal de vitelo (FCS), 1% de penicilina e estreptomicina, e 2 mM de L- glutamina. As células foram sub-cultivadas por diluição, à razão de 1: 3. Cinqüenta (50) camundongos fêmeas SCID (Charles River Labs), com idades entre 5 a 6 semanas, com um peso corporal médio de pré-tratamento de 19,2 gramas foram usados. Camundongos SCID foram inoculados s.c. no flanco esquerdo com 5 x 106de células de MDA-MB-468. Quando os tumores atingiram um tamanho médio entre 100 e 200 mm3, os camundongos foram aleatoriamente divididos e prospectivamente em um grupo de controle de veículo de dez camundongos (10) e cinco grupos de tratamento de oito (8) camundongos por grupo de controle de veículo. Os grupos eram como se segue: Veículo (1% de Pluronic, 1% de PVP em água destilada) 5 FU 50mg/kg Composto I-3 5mg/kg segunda-feira (M), quarta- feira (W), sexta-feira (F) Composto I-3 15 mg / kg, M, W, F Composto I-3 25 mg / kg M, W, F. Composto 1-3 25 mg / kg M, quinta-feira (Th).
[000347] Todas as administrações foram por via oral. Os animais foram alimentados com ração de roedores estéril Labdiet ® 5053 (pré-esterilizada) e água estéril foi fornecido ad libitum. Os tumores foram medidos uma vez a cada dois dias, com micro-pinças, e o volume do tumor foi calculado como (comprimento x largura x largura) / 2. Todos os animais foram pesados diariamente, a fim de avaliar diferenças de peso entre os grupos de tratamento e monitorar o bem-estar dos animais. Quaisquer animais que apresentem uma perda maior do que 20% de peso inicial durante o decurso do estudo foram sacrificados. Quaisquer animais com um tumor acima de 1.500 milímetros3em volume também foram sacrificados. A sobrevivência foi registrada diariamente. Soluções de dosagem foram preparadas na hora diariamente. O Composto 1-3 foi fornecido como um pó liofilizado contendo 67,8% do produto de droga com o restante composto de Pluronic F-68 e PVP K29/32. Este foi preparado por dissolução do pó liofilizado em uma taxa de 6,64 mg/90 uL em água estéril, e diluindo como necessário no veículo (1% de Pluronic F-68 e 1% de PVP K29/32) em água estéril. Todas as soluções de dosagem do Composto 1-3 foram dosadas a 0,1 mL/10 g. As diferenças estatísticas entre os grupos de tratamento foram determinadas usando Mann-Whitney Rank Sum ou testes ANOVA com um valor crítico de 0,05.
[000348] No dia 33 após a inoculação, os tumores foram retirados. A FIG. 1 é um gráfico do volume do tumor como uma função do tempo e mostra que o Composto 1-3 exibiu a eficácia de uma forma dependente da dose, a inibição inibindo de aproximadamente 60% (5 mg / kg de segunda- feira, quarta-feira, Sexta-Feira) a aproximadamente 100% de crescimento do tumor (para 25 mg / kg de segunda-feira, quinta-feira regime) em comparação com animais tratados com veículo. Além disso, o composto 1-3 foi bem tolerado.
[000349] Após a excisão, os tumores também foram marcados para as proteínas supressoras tumorais (TSP) FOX03a, IKB, e p27, e localização nuclear do TSPs foi confirmada por imuno-histoquímica.
Inibição da proliferação e de citotoxicidade em linhagens de célula BC TNBC e Luminal
[000351] O ensaio de proliferação de célula O CellTiter 96® AQueous One Solution (Promega) foi usado para estudar as propriedades citotóxicas e citostáticas do Composto 1-3 em várias linhagens de células BC TNBC e luminal.
[000352] As células foram semeadas em 5xl03a 1.5xl04células (dependendo do tipo de células) em cada cavidade de uma placa de 96 cavidades em 100 μL, de meio de cultura fresco e as células aderentes foram deixadas ligar durante a noite. As soluções de material dos compostos foram diluídas em meio de cultura de células para obter oito concentrações de cada droga, variando desde 1 nM até 30 μM e DMSO em menos de 1% v / v foi utilizado como um controle negativo. As soluções de drogas resultantes foram transferidas para as células. Após 72 h de tratamento, 20 μl de reagente CellTiter96® Aqueous foram adicionados em cada cavidade das placas de ensaio de 96 cavidades e a placa foi incubada a 37°C por 1 - 4 horas em uma atmosfera úmida, 5% de atmosfera CO2. Em seguida, a absorvência de cada cavidade foi registrada a 490 nm utilizando um leitor de placas de 96 cavidades. Na maioria dos casos, o ensaio foi realizado em triplicata e os resultados foram apresentados como metade da concentração máxima inibitória (IC50). A densidade óptica versus a concentração de composto foi representada e analisada por meio de equações de regressão não-linear (Excel Fit) e o IC50 para cada linhagem de célula contra o Composto 1-3 foi calculado.
[000353] Os resultados do ensaio de proliferação celular são apresentados na Tabela 3. Os resultados demonstram a citotoxicidade potente de Composto 1-3 em nove de quinze linhagens de células BC testadas. O composto foi considerado potente em uma linhagem de células se tinha um valor IC50 menor do que aproximadamente 1,0 μM. As linhagens de células nas quais o Composto 1-3 tinha um valor IC50 menor do que 1,0 μM foram consideradas linhagens de células sensíveis, enquanto as linhas de células em que o Composto 1-3 tinha um valor de IC50 superior a 1,0 μM foram consideradas linhagens de células resistentes. Sete das nove linhagens de células sensíveis eram TNBC. Análises genômicas em todas as linhagens BC indicaram que p53, PI3K/AKT e BRCA1 ou status 2 não afetaram ciototoxicidade. Tabela 3. Os valores de IC50 para o Composto 1-3 em várias linhagens de células de câncer da mama.
Figure img0128
Figure img0129
Composto I-3 induz apoptose e inibe crescimento de BC de longo prazo
[000354] A capacidade do composto I-3 de induzir apoptose e inibir crescimento de longo prazo de linhagens de célula BC selecionadas foi avaliada.
[000355] Células MDA-MB-468 TNBC, DU4475 e Hs578T TNBC foram expostas a concentrações do Composto 1-3 variando entre 0 e 10 μM durante 24 horas. Após 24 horas, os extratos de células de proteína total foram processados em imunoblots e foram expostos a anticorpos contra as proteínas indicadas nas figuras 2A-2C.
[000356] As FIGS. 2A-2C são imagens de imunoblots obtidas a partir de algumas das linhagens mais resistentes e mais sensíveis de células do câncer da mama descritas anteriormente, incluindo MDA-MB-468 TNBC, DU4475 e Hs578T TNBC. O estudo mostra que o Composto 1-3 induz apoptose nas linhagens de células sensíveis BC TNBC e luminal (MDA-MB-468 e DU4475, respectivamente), após 24 horas, tal como indicado pela diminuição da PARP e da caspase 3, dois marcadores de apoptose, e o aumento da PARP clivada e caspase 3 clivada. Em contraste, observou-se apenas um aumento insignificante no PARP clivada e caspase 3 clivada, quando uma linhagem de células resistentes, Hs578T, foi tratado com o Composto 1-3.
[000357] Os ensaios de crescimento de longo prazo foram também realizados, nos quais as células Hs578T MDA-MB-468, MDA-MB-231 e foram tratadas com 1 μM do Composto 1-3 e incubadas durante 7 (Hs578T) ou 10 (MDA-MB- 468 e MDA-MB-231) dias. No final do ensaio, o meio foi removido das células e as células restantes foram coloridas com violeta de cristal. O estudo mostrou que o Composto 1-3 inibiu o crescimento em longo prazo de todos os três linhagens de células, incluindo linhagens de células BC tanto sensíveis (MDA-MB-468 e MDA-MB-231) como resistentes (Hs578T).
Composto 1-3 Aumenta FOX03a Nuclear e IKB em linhagens de células TNBC
[000358] As células basal A TNBC MDA-MB-468 e basal B TNBC BT-20 foram expostas a DMSO ou 1 μM Composto 1-3 durante 24 horas e, em seguida, coloridas para FOX03a ou IKB com ou sem corante nuclear DAPI. As células coloridas foram examinadas em relação à localização nuclear. Após o tratamento com o composto 1-3, e tanto FOX03a como IkB foram localizados no núcleo da célula, enquanto que nas células tratadas com DMSO, tanto FOX03a como IkB foram localizadas no citoplasma.
Efeito do Composto 1-3 sobre Anti-apoptose e Proteínas de Ciclo Celular em duas linhagens TNBC
[000359] O efeito de concentrações crescentes do Composto 1-3 em células MDA-MB-468 e Hs578T foi examinado. As células MDA-MB-468 e Hs578T foram expostas a concentrações crescentes do Composto 1-3 durante 24 horas e os níveis totais de proteína celular de várias proteínas foi sondado com anticorpos contra as proteínas indicadas na FIG. 3.
[000360] A FIG. 3 mostra que, apesar da diferença de aproximadamente 100 vezes no IC50 do Composto 1-3 em duas linhagens de células depois de 72 horas (lOnM contra 1.5μM), uma redução no MCL-1 é observada em ambas as linhagens celulares em resposta a concentrações crescentes do Composto 1-3.
[000361] Os experimentos descritos no Exemplo 32 indicam que a inibição de exportação nuclear mediada por CRM1 pelos compostos da invenção, incluindo o Composto 1-3, induz a localização e a ativação de proteínas de genes supressores de tumor nuclear, resultando em apoptose seletiva, a citotoxicidade das células do câncer e da inibição de crescimento tumoral.
EXEMPLO 33: ARTRITE INDUZIDA POR ANTICORPO MONOCLONAL (CAIA)
[000362] Camundongos BalbC foram divididos aleatoriamente em gaiolas no dia de chegada (-1) e cada grupo (N = 8) foi atribuído aos grupos de tratamento mostradas abaixo com o seguinte esquema: Veículo: Dia PO 4, 6, 8, 10 Dexametasona: lmg / kg IP Dias 4, 6, 8, 10 Composto 1-4: 4 mg / kg PO, dia 4, 6, 8, 10 Composto 1-4: 7,5 mg / kg PO, dia 4, 6, 8, 10 Composto 1-4: 15 mg / kg PO, dia 4, 6, 8, 10
[000363] O estado de saúde dos animais foi analisado no momento da chegada. Apenas os animais saudáveis foram aclimatados às condições do laboratório e foram utilizados no estudo. Os animais receberam ad libitum uma dieta para roedores, comercial, e livre acesso à água potável, fornecida a cada gaiola via frascos de polietileno com tubos de sugar de aço inoxidável. Condições ambientais controladas automaticamente foram definidas para manter a temperatura a 20-24°C, com umidade relativa do ar (UR) de 30-70%, um ciclo escuro:claro de 12:12 horas e 10-30 trocas de ar / h na sala de estudo. A temperatura, umidade relativa e ciclo de luz foram monitorados diariamente pelo computador de controle. Os animais receberam um único número de identificação de animais e no dia 0 do estudo cada animal recebeu uma injeção na veia da cauda de coquetel de anticorpos (200 ul de 10 mg / mL). O coquetel de anticorpos foi fornecido pela MD Biosciences (Catálogo: CIA-MAB-50). No dia 3, após a administração única de mAb, todos os animais foram submetidos à administração de LPS (200 ul de 0,5 mg / mL) de uma única injeção intraperitoneal (IP). LPS foi fornecido pela MD Biosciences (Catálogo: MDLPS.5). Os camundongos foram examinados quanto a sinais de respostas artritogênicas em articulações periféricas, no dia 0. Desde o início da doença, a resposta artritogênica será examinada em dias de estudo 3-8, 10, e 12. Reações de artrite são relatadas para cada pata de acordo com uma escala de 0-4, em ordem crescente de gravidade.
Figure img0130
[000364] Animais encontrados em estado moribundo, animais com pele rachada em uma pata com artrite, ou com uma redução maior do que 20% no peso corporal e animais que apresentem dor intensa e sinais de sofrimento intenso e continuado foram humanamente sacrificados. A dor severa ou sofrimento foi avaliado em uma base de caso a caso pelos técnicos experientes em animais. Em resumo no entanto, a avaliação procurou vocalizações anormais, isolamento de outros animais, falta de vontade de usar os membros, resposta anormal ao manuseio, tremores e postura. Os animais foram sacrificados por inalação de C02 seguido por deslocação cervical. A avaliação é baseada principalmente nos valores médios de marcação de artrite e medições da espessura da pata. A análise estatística foi também ser realizada sobre o peso corporal. Sempre que apropriado, a análise dos dados por ANOVA com análise post hoc de Tukey foi aplicada para determinar a significância dos efeitos do tratamento.
[000365] Como parte desse modelo, os animais perdem peso rapidamente durante os primeiros 5-8 dias e, lentamente, começa a ganhar / perder peso, dependendo da evolução da doença. 1-4 aumentou a taxa de ganho de peso em comparação com os grupos de veículos ou de tratamento com dexametasona. FIG. 4 é um gráfico da média do peso corporal versus tempo para os dias 0 a 12 nos camundongos BALB/c machos com artrite, induzidos por anticorpo submetidos ao modelo.
[000366] Além disso, os animais submetidos ao modelo CAIA tipicamente começam a mostrar sinais de artrite em torno do dia 4 e à medida que a doença progride marcações totais de artrite aumentam como uma função do tempo. O tratamento com o composto 1-4 diminuiu significativamente a marcação total, quando comparado com o veículo e exibiu um efeito dependente de dose. A FIG. 5 é um gráfico da média total das marcações artríticas clínicas da pata versus tempo para os dias 0-12 em camundongos Balb/c com artrite, machos, induzidos por anticorpo, submetidos ao tratamento indicado.
EXEMPLO 34: MODELO DE PSORÍASE INDUZIDA POR PMA
[000367] Camundongos BALB/c foram alojados em gaiolas ventiladas individualmente em um ambiente controlado (temperatura 22 ± 1°C, umidade de 70 ± 5%, e ciclo de 12 horas luz/12 horas no escuro) na instalação para animais. Os ratos tiveram acesso a pastilhas de ração comercialmente disponíveis e potável água tratada com UV ad libitum. 4 camundongos foram alojados por gaiola ventilada individualmente. Cada um dos animais na gaiola foi identificado por uma cauda. 8 camundongos por grupo de camundongos foram divididos aleatoriamente em diferentes grupos de tratamento de acordo com o peso corporal. Após a randomização o peso corporal médio para todos os grupos era equivalente. O desenho do estudo foi o Grupo 1: simples, 1% de veículo DMSO (10-30 ul, tópico uma vez por dia), Grupo 2: PMA, 1% de veículo DMSO (10-30 ul, tópico uma vez por dia), Grupo 3: PMA, 1-4 10 mg / kg em PvP / Pluronics (oral, MWF; Dia 1-dia 3 dia-dia 5- dia 7), Grupo 4: PMA, 0,1% de betametasona - 25 mg (padrão de referência) (tópica uma vez por dia).
[000368] 4 ug de Phorbol 12-miristato 13-acetato (PMA) em 20 uL de acetona foi aplicado diariamente nas orelhas dos camundongos. A partir do dia 2, indução de PMA de inflamação dérmica / psoríase se manifesta com o aumento do índice de atividade clínica da doença associados com o aumento da espessura da orelha, a descamação de orelha - pele, e dobra de orelha - pele. Os seguintes parâmetros avaliados foram: (i) a espessura da orelha, (ii) descamação da pele da orelha. Isto será com base no índice de marcação - 0, nenhuma descamação; 1, descamação leve, 2, descamação moderada, 3, descamação grave, (iii) dobrar sobre a pele da orelha. Isto será com base no índice de marcação - 0, nenhuma dobra, 1, dobra leve, 2, dobra moderada, 3, dobra grave, (iv) o peso da orelha (no dia do sacrifício).
[000369] A FIG. 6 é um gráfico de barras de fornecimento de marcação para a espessura da orelha, descamação da pele da orelha e dobra da pele da orelha. Os resultados mostram que a administração oral do Composto 1-4 a 10 mg / kg, reduziu a espessura média da orelha de uma forma estatisticamente significativa em comparação com veículo. A eficácia obtida com 1-4 era comparável com a betametasona de controle positivo. Além disso, o composto 1-4 foi bem tolerado.
EXEMPLO 35: reconhecimento de objetos novos
[000370] Para o teste de reconhecimento de objetos novos, ratos Zucker foram colocados em uma câmara de teste (dimensão 26" x 18" x 18"; L x W x H) Os alimentos e água não eram permitidos durante o teste. O teste teve três fases: a) fase de Familiarização: Os ratos foram individualmente colocados em câmara de teste e deixados explorar livremente por 60 min. A distância percorrida pelo animal durante esta fase foi registrada usando o software de rastreamento (sistema AnyMaze). O objetivo desta fase foi familiarizar os animais com o aparelho de teste. Essa fase de teste foi realizado no dia 1. b) fase de amostra: No dia 2, os ratos foram individualmente colocados na câmara de teste durante 3 min. e deixados explorar livremente a arena de teste, que continha duas objetos novos e idênticos (por exemplo: um cubo de metal, cilindro de plástico) posicionados em 2 cantos da câmara de teste. A distância percorrida pelos animais durante esta fase da amostra foi automaticamente registada, bem como o tempo gasto pelo animal interagindo com os objetos novos, utilizando um sistema de software de rastreamento e observação visual. A interação com o objeto foi definida como interação ativa com focinho do animal em contato ou proximidade imediata com o objeto, c) fase de teste: lH após a fase de amostra, os ratos foram individualmente retornados à câmara de teste por 3 min. e deixados explorar livremente o arena de teste que continha dois objetos, um dos quais era o objeto apresentado durante a fase de amostra, e o segundo um objeto novo que era exclusivo para a fase de teste. Os dois objetos foram posicionados nos mesmos dois cantos da câmara de ensaio como usado para a fase de amostragem. A distância percorrida pelo animal durante a fase de teste foi gravada automaticamente, bem como o tempo gasto pelo animal interagindo com os objetos familiares e novos, usando um sistema de software de rastreamento e observação visual. Marcações de interação do objeto tanto durante a fase de ensaio como de amostra foram registradas independentemente por dois observadores. A marcação final representa a marcação de diferença entre cada leitura. Marcações de preferência de objeto apresentado como Dl (isto é, tempo gasto explorando objeto novo - o tempo gasto explorando objeto familiar;, portanto, marcação positiva representa preferência pelo objeto novo) e D2 (ou seja, Dl / a + b; marcação Dl dividida pelo tempo total de exploração de objeto).
[000371] A FIG. 7 fornece um conjunto de gráficos que mostram a preferência por objeto de ratos Zucker não tratados e tratados com I-4. A partir da fig. 7 pode ver-se que o Composto 1-4 administrado oralmente em doses de 0,625, 1,25 e 2,5 mg / kg induziu tendências de reconhecimento aperfeiçoado do objeto novo em ratos Zucker e I-4 foi bem tolerado.
[000372] EXEMPLO 36: Estudo de alimentação de ratos Zucker obesos
[000373] Ratos Zucker machos (fa / fa) e ratos magros machos Zucker (ambos da Charles River) com 10 semanas de idade - um ponto no tempo em que os ratos Zucker fa / fa devem mostrar ingestão elevada de alimentos, massa de corpo e perfil de lipídeo de plasma elevado em relação a suas cópias “magras” foram individualmente alojados em gaiolas com fundo de plástico e receberam 14 dias de habituação. Durante esse período, o peso corporal do animal, ingestões de alimento e água foram registrados diariamente. Todos os animais receberam acesso ad-lib a ração de lab. Padrão e água durante todo o estudo. Após a coleta de dados de ingestão de linha de base de 14 dias, os ratos obesos Zucker foram atribuídos em grupos de tratamento com base em dados de linha de base equivalente, isto é, todos os ratos obesos Zucker tinham ingestões de água/alimento diárias equivalentes e pesos corporais. Durante essa fase os ratos também receberam duas administrações de veículo como familiarização ao procedimento de dosagem. Imediatamente após a fase de linha de base, a fase de tratamento teve início. O artigo de teste e veículo foram administrados aproximadamente 1 h antes do início do ciclo escuro. A programação de dose variou de acordo com o grupo: 5x por semana de dosagem era de segunda-feira-sexta-feira. O desenho do estudo era o seguinte: grupo A = ratos machos magros Zucker, tratamento de veículo 5x por semana, oral, n=6, grupo B = ratos machos obesos Zucker, tratamento de veículo 5x por semana, oral, n=6, grupo C= ratos machos obesos Zucker, I-4 2,5 mg/kg 5x por semana, oral, n=6.
[000374] O peso corporal, ingestão de alimento e água, diários, foram medidos aproximadamente no mesmo horário do dia. No dia -1 e dia 7 da fase de tratamento.
[000375] A figura 8A provê ingestão de alimento cumulativa e média em ratos Zucker obesos e magros (W/O indica período de washout). A administração do composto I-4 em 2,5 mg/kg 5X por semana reduziu a ingestão média e cumulativa de alimento em ratos Zucker (fa/fa) obesos. O composto I-4 foi bem tolerado.
[000376] A figura 8B provê peso corporal médio e percentual em ratos Zucker magros e obesos (W/O indica período de washout). A administração oral de I-4 em 2,5 mg/kg 5X por semana reduziu significativamente o ganho de peso em comparação com os controles de fa/fa Zucker. 2 dias de fase de washout, ganho de peso corporal ainda reduziu em comparação com os controles fa/fa Zucker. I-4 foi bem tolerado.
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[000406] Os ensinamentos relevantes de todas as patentes, pedidos publicados e referências citadas aqui são incorporados a título de referência na íntegra.
[000407] Embora a presente invenção tenha sido particularmente mostarda e descrita com referência às modalidades de exemplo da mesma, será entendido por aqueles versados na técnica que várias alterações em forma e detalhes podem ser feitas na mesma sem se afastar do escopo da invenção abrangida pelas reivindicações apensas.

Claims (36)

1. Composto da fórmula estrutural I:
Figure img0131
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste caracterizadopelo fato de que: R1é hidrogênio ou metila; R2é piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, pirazin-2-il, e quinoxalin-2-il, pirimidin-4-il, 1,1- dioxotetrahidrotiofen-3-il ou ciclopropil, em que R2é não substituído ou substituído com um ou mais substituintes independentes metila ou halogênio; ou R1e R2são tomados junto com seus átomos intermediários para formar 4-hidroxipiperidin-1-il, pirrolidin-1-il, azepan-1-il, 4-benzilpiperazin-1-il, 4- etilpiperazin-1-il, 3-hidroxiazetidin-1-il, ou morfolin-4- il; R3é hidrogênio ou halo; e '■AA representa uma ligação simples em que uma ligação dupla de carbono-carbono ligada a ela está em uma configuração (E)- ou (Z)-.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que o composto é representado pela fórmula estrutural II:
Figure img0132
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, caracterizadopelo fato de que: R1é hidrogênio ou metila; e R2é piridin-2-il, piridin-4-il, pirazin-2-il ou pirimidin-4-il, em que R2é não substituído ou substituído com um substituinte único selecionado de metila e cloro; ou R1e R2são tomados juntos para formar 4- hidroxipiperidin-1-il.
4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizadopelo fato de que R3é hidrogênio.
5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o composto é representado por qualquer uma das seguintes fórmulas estruturais:
Figure img0133
Figure img0134
I-25 ouI-26.
6. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado pelo fato de que o composto é representado por qualquer uma das seguintes fórmulas estruturais:
Figure img0135
7. Composição carcaterizadapor compreender um composto conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
8. Composição, de acordo com a reivindicação 7, carcaterizadapor compreender adicionalmente um segundo agente terapêutico útil para tratar câncer.
9. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, carcaterizadopor ser para uso no tratamento de um distúrbio associado à atividade de CRM1 em um indivíduo necessitando deste, em que o distúrbio é selecionado de um distúrbio proliferativo, um distúrbio inflamatório, um distúrbio autoimune, uma infecção viral, um distúrbio oftálmico, um distúrbio neurodegenerativo, um distúrbio de crescimento anormal de tecido, um distúrbio relacionado à ingestão de alimento, alergias, e um distúrbio respiratório
10. Composto, de acordo com a reivindicação 9, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, carcaterizado por ser para administração em conjunto com um segundo agente terapêutico útil para tratar câncer.
11. Uso de um composto conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, carcaterizadopor ser na fabricação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio associado à atividade de CRM1, em que o distúrbio é selecionado de um distúrbio proliferativo, um distúrbio inflamatório, um distúrbio autoimune, uma infecção viral, um distúrbio oftálmico, um distúrbio neurodegenerativo, um distúrbio de crescimento anormal de tecido, um distúrbio relacionado à ingestão de alimento, alergias, e um distúrbio respiratório.
12. Composto, de acordo com a reivindicação 9, carcaterizadopelo fato de que o distúrbio é um câncer hematológico que é uma leucemia, um linfoma ou um mieloma ou um câncer de tumor sólido que é de cabeça e pescoço, próstata, mama, pulmão, ovário, células escamosas, cólon ou renal.
13. Composto, de acordo com a reivindicação 12, caracterizadopelo fato de que o câncer hematológico é mieloma múltiplo.
14. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8, 12 e 13, caracterizadopelo fato de que o uso é oral.
15. Uso, de acordo com a reivindicação 11, caracterizadopelo fato de que o medicamento é para administração em conjunto com um segundo agente terapêutico útil para o tratamento de câncer.
16. Uso, de acordo com a reivindicação 11, caracterizadopelo fato de que o distúrbio é um câncer hematológico que é uma leucemia, um linfoma ou um mieloma ou um câncer de tumor sólido que é de cabeça e pescoço, próstata, mama, pulmão, ovário, células escamosas, cólon ou renal.
17. Uso, de acordo com a reivindicação 16, caracterizadopelo fato de que o câncer é mieloma múltiplo.
18. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 e 15 a 17, caracterizadopelo fato de que o medicamento é para liberação oral.
19. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopor ser representado pela seguinte fórmula estrutural:
Figure img0136
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
20. Composto, de acordo com a reivindicação 19 ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado por ser para uso no tratamento de um distúrbio associado à atividade de CRM1 em um indivíduo em necessidade do mesmo, em que o distúrbio é um distúrbio proliferativo, um distúrbio inflamatório, um distúrbio autoimune, uma infecção viral, um distúrbio oftalmológico, um distúrbio neurodegenerativo, um distúrbio do crescimento anormal de tecidos, um distúrbio relacionado à ingestão de alimentos, alergias ou distúrbio respiratório.
21. Composto, de acordo com a reivindicação 20, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado por ser para administração em conjunto com um segundo agente terapêutico útil para o tratamento de câncer.
22. Composto, de acordo com a reivindicação 20, caracterizadopelo fato de que o distúrbio é um câncer hematológico que é uma leucemia, um linfoma ou um mieloma ou um câncer de tumor sólido que é de cabeça e pescoço, próstata, mama, pulmão, ovário, células escamosas, cólon ou renal.
23. Composto, de acordo com a reivindicação 22, caracterizadopelo fato de que o câncer é mieloma múltiplo.
24. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 22, caracterizadopelo fato de que o composto é para administração oral.
25. Uso do composto conforme definido na reivindicação 21, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizadopor ser na fabricação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio associado à atividade de CRM1, em que que o distúrbio é um distúrbio proliferativo, um distúrbio inflamatório, um distúrbio autoimune, uma infecção viral, um distúrbio oftalmológico, um distúrbio neurodegenerativo, um distúrbio de crescimento anormal de tecidos, um distúrbio relacionado à ingestão de alimentos, alergias ou distúrbio respiratório.
26. Uso, de acordo com a reivindicação 25, caracterizadopelo fato de que o seu sal farmaceuticamente aceitável é para administração em conjunto com um segundo agente terapêutico útil para o tratamento de câncer.
27. Uso, de acordo com a reivindicação 25, caracterizadopelo fato de que o distúrbio é um câncer hematológico que é uma leucemia, um linfoma ou um mieloma ou um câncer de tumor sólido que é decabeça e pescoço, próstata, mama, pulmão, ovário, células escamosas, cólon ou renal.
28. Uso, de acordo com a reivindicação 27, caracterizadopelo fato de que o câncer hematológico é mieloma múltiplo.
29. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 28, caracterizadopelo fato de que o medicamento é para administração oral.
30. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopor ser representado pela seguinte fórmula estrutural:
Figure img0137
ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
31. Composto, de acordo com a reivindicação 30 ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, caracterizado por ser para uso no tratamento de câncer em um indivíduo veterinário com necessidade do mesmo.
32. Composto, de acordo com a reivindicação 31, caracterizadopelo fato de que o indivíduo veterinário é um cachorro.
33. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 e 32, caracterizadopelo fato de que o câncer é um linfoma.
34. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 e 32, caracterizadopelo fato de que o câncer é osteossarcoma, leucemia ou mieloma.
35. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 34, caracterizadopelo fato de que o tratamento é oral, intravenoso, intraperitoneal, intramuscular ou intradérmico.
36. Uso, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o individuo é um indivíduo veterinário.
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