BR102016027703A2 - produção biotecnológica de ácidos carboxílicos w-funcionalizados e ésteres dos mesmos - Google Patents

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Abstract

produção biotecnológica de ácidos carboxílicos w-funcionalizados e ésteres dos mesmos. proporciona-se uma célula microbial para produzir pelo menos um éster de ácido carboxílico ômega funcionalizado a partir de pelo menos um alcano, em que a célula é geneticamente modificada para aumentar a expressão relativa à célula do tipo selvagem de (i) enzima e1 com a capacidade para converter o alcano no 1-alcanol correspondente; (ii) enzima e2 com a capacidade para converter o 1-alcanol de (i) no 1-alcanal correspondente; (iii) enzima e3 com a capacidade para converter o 1-alcanal de (ii) no ácido alcanoico correspondente; (iv) enzima e4 com a capacidade para converter o ácido alcanoico de (iii) no éster de ácido alcanoico correspondente; e (iv) enzima e5 com a capacidade para converter o éster de ácido alcanoico de (iv) no éster de ácido ômega hidroxi alcanoicocorrespondente. e em que a célula não compreende uma modificação genética que aumenta a expressão em relação à célula do tipo selvagem de pelo menos uma de entre as seguintes enzimas e20- e24 selecionadas a partir do grupo que consiste em: - e20 acil-acp tioesterase, de ec 3.1.2.14 ou ec 3.1.2.22, - e21 acil-coa tioesterase, de ec 3.1.2.2, ec 3.1.2.18, ec 3.1.2.19, ec 3.1.2.20 ou ec 3.1.2.22, - e22 acil-coa:acp transacilase, - e23 policetídeo sintase e - e24 ácido hexanoico sintase.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção: “PRODUÇÃO BIOTECNOLÓGICA DE ÁCIDOS CARBOXÍLICOS ω-FUNCIONALIZADOS E ESTERES DOS MESMOS”.
[001] CAMPO DA INVENÇÃO
[002] A presente invenção se refere a um método biotecnológico para produzir ésteres de ácido carboxílico ω-funcionalizado. Em particular, o método pode usar alcano como um material inicial e uma célula geneticamente modificada para converter o alcano no éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado correspondente.
[003] ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[004] Os ácidos carboxílicos funcionalizados ω e o ésteres correspondentes, incluindo aminoácidos carboxílicos ω e seus lactamas correspondentes, tais como aminoácido láurico ω, aminoácido undecanoico ω, laurolactama e semelhantes, são monômeros importantes para a produção de poliamidas de alto desempenho. Parte da tecnologia química existente que foi usada para produzir esses monômeros a partir de matérias-primas petroquímicas ou renováveis inclui: i) A produção de aminoácido láurico ω é feita a partir de éster metílico de ácido láurico, uma fração de biodiesel preparada a partir de óleo de semente de palma ou de coco; ii) A produção de aminoácido undecanoico ω é feita a partir de ácido ricinoléico, preparado a partir de óleo de castor; iii) A produção de laurolactama é feita a partir de butadieno;
[005] Embora todos esses três métodos de produção permaneçam competitivos, suas competitividades em uma determinada localização e ponto no tempo depende de um número de fatores, que incluem os custos de materiais brutos e custos de energia para executar os métodos.
[006] Há diversos meios biotecnológicos de produção de ácidos carboxílicos funcionalizados ω e/ou ésteres dos mesmos que são conhecidos na técnica. Por exemplo, as células geneticamente modificadas que têm a capacidade para produzir ácidos carboxílicos funcionalizados ω a partir de ácido carboxílico usadas como um substrato foram descritas anteriormente pelo menos nos documentos W02009077461 e EP2322598. Um procedimento muito semelhante é descrito no documento WO2011008232 com o uso de células de Candida em que a trajetória de β oxidação é bloqueada nas células, e os ácidos carboxílicos funcionalizados ω foram formados a partir de ácido graxo usado como um substrato. Esses métodos têm a desvantagem de usar ácidos graxos como o material inicial. Isso se deve ao fato de que, os ácidos graxos e derivados dos mesmos usados são obtidos principal e exclusivamente a partir de óleos e gorduras vegetais e animais. Gorduras animais como materiais brutos ainda possuem pouca aceitação de clientes e óleos vegetais que contém ácidos graxos de comprimento curto e médio são difíceis de serem obtidos ou são produzidos apenas em regiões tropicais (resultado de destruição da floresta tropical). Adicionalmente, óleo vegetal e animal ou materiais brutos de gordura particulares têm perfis específicos, porém, definidos, de ácido graxo, o que resulta na produção associada.
[007] O documento WO2013024114 revela um método para produzir ácidos carboxílicos funcionalizados ω e/ou ésteres dos mesmos a partir de fontes de carbono simples tais como (glicose, sacarose, arabinose, xilose, lactose, frutose, maltose, melaço, amido, celulose e hemicelulose, porém, também glicerina ou moléculas orgânicas muito simples tais como CO2, CO ou gás sintético). Esses açúcares simples, especialmente glicose, são frequentemente mais dispendiosos de serem obtidos. O método para produzir ácidos carboxílicos funcionalizados ω e/ou ésteres dos mesmos a partir de fontes de carbono simples também pode ser considerado complicado visto que as células usadas nesse método foram modificadas geneticamente para aumentar a produção de ácidos carboxílicos a partir dessas fontes de carbono simples primeiro. Isso, desse modo, aumenta 0 custo de produção.
[008] Portanto, há uma necessidade na técnica por um método para produzir ésteres de ácidos carboxílicos funcionalizados ω a partir de outra fonte de material bruto que permite que a produção seja eficiente e eficaz.
[009] DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO
[010] A presente invenção tenta solucionar os problemas acima fornecendo-se pelo menos uma célula microbial geneticamente modificada que tem a capacidade para produzir pelo menos um éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado a partir de pelo menos um alcano. O éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado pode ser selecionado do grupo que consiste em ésteres de hidroxiácido ω, oxiácido ω carboxiácido ω e animoácido carboxílico. O uso dessas células geneticamente modificadas em um método para produzir ésteres de ácido carboxílico ω-funcionalizado pode adicionar flexibilidade a uma produção desses compostos permitindo-se o uso de um material bruto petroquímico alternativo prontamente disponível para sua produção. Adicionalmente, o uso de biocatalisadores de célula inteira com a capacidade para integrar todos os meios de conversão de alcanos em ésteres de ácido graxo e seus derivados funcionalizados ω correspondentes dentro dos mesmos, torna o processo de conversão mais simples visto que apenas um pequeno número de etapas de processo é envolvido na conversão. A dependência de ácidos graxos e de fontes de carbono simples como um substrato de carbono também é eliminada.
[011] De acordo com um primeiro aspecto da presente invenção, uma célula microbial é fornecida para produzir pelo menos um éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado a partir de pelo menos um alcano, em que a célula compreende uma modificação genética para aumentar a expressão em relação à célula do tipo selvagem de; (i) Enzima Ei com a capacidade para converter o alcano no 1-alcanol correspondente; (ii) Enzima E2com a capacidade para converter o 1-alcanol de (i) no 1-alcanal correspondente; (iii) Enzima E3 com a capacidade para converter o 1-alcanal de (ii) no ácido alcanoico correspondente; (iv) Enzima E4 com a capacidade para converter o ácido alcanoico de (iii) no éster de ácido alcanoico correspondente; e (v) Enzima E5 com a capacidade para converter o éster de ácido alcanoico de (iv) no éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico correspondente.
[012] A célula microbial, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, se refere a uma célula que não teve modificação prévia/anterior para aumentar a formação de ácido carboxílico ou éster de carboxilato a partir de pelo menos uma fonte de carbono simples. O termo “fonte de carbono simples” é entendido como fontes de carbono em que no esqueleto de carbono pelo menos uma união C-C foi quebrada. Em particular, a fonte de carbono simples pode ser pelo menos um carboidrato tal como, por exemplo, glicose, sacarose, arabinose, xilose, lactose, frutose, maltose, melaço, amido, celulose e hemicelulose, porém, as fontes de carbono também podem incluir glicerina ou moléculas orgânicas muito simples tais como CO2, CO ou gás sintético. Mais particularmente, a célula microbial, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, pode não ser geneticamente modificada para aumentar a expressão em relação à célula do tipo selvagem de pelo menos uma dentre as seguintes enzimas: - Tioesterase de E2oAcil-ACP, de EC 3.1.2.14 ou EC 3.1.2.22, - Tioesterase de E21 Acil-CoA, de EC 3.1.2.2, EC 3.1.2.18, EC 3.1.2.19, EC 3.1.2.20 ou EC 3.1.2.22, - Transacilase de E22 Acil-CoA:ACP, - Sintase de Poliquetida de E23, que catalisa uma reação que é envolvida na síntese de ácidos carboxílicos e de ésteres carboxilatos, e - Sintase de ácido hexanoico de E24.
[013] Em um exemplo, a célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, pode compreender uma modificação genética adicional para aumentar a expressão em relação à célula do tipo selvagem de: (vi) Enzima E6 com a capacidade para converter o éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico de (v) no éster de ácido ω-οχο alcanoico correspondente; e (vii) Enzima E7 com a capacidade para converter o éster de ácido ω-oxo alcanoico de (vi) no éster de ácido ω-amino alcanoico correspondente.
[014] Em outro exemplo, a célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, pode compreender uma modificação genética adicional para aumentar a expressão em relação à célula do tipo selvagem de: (vi) Enzima E6 com a capacidade para converter éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico de (v) no éster de ácido ω-οχο alcanoico correspondente; (vii) Enzima E13 com a capacidade para converter o éster de ácido ω-οχο alcanoico de (vi) no éster de ácido ω-carboxi alcanoico correspondente, e (viii) Enzima Eh com a capacidade para converter o éster de ácido ω-carboxi alcanoico de (vi) no diéster de ácido ω-carboxi alcanoico correspondente;
[015] As células, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, podem ser usadas para produzir éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado a partir de todos os alcanos com alto rendimento de espaço-tempo, alto rendimento de carbono e alta concentração no sobrenadante de cultura. Como resultado dessas vantagens, um trabalho eficaz é facilitado.
[016] A expressão “tipo selvagem” conforme usada no presente documento em conjunto com uma célula ou micro-organismo pode denotar uma célula com uma constituição de genoma que está em uma forma conforme visto na natureza. O termo pode ser aplicável tanto a célula inteira quanto a genes individuais. O termo "tipo selvagem" pode, desse modo, também incluir células que foram modificadas geneticamente em outros aspectos (isto é, com relação a um ou mais genes) porém, não em relação aos genes de interesse. O termo “tipo selvagem”, portanto, não inclui tais células em que as sequências de genes dos genes específicos de interesse foram alteradas pelo menos parcialmente pelo homem com o uso de métodos recombinantes. A célula do tipo selvagem, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, desse modo, se refere a uma célula que não tem mutação genética com relação ao genoma inteiro e/ou um gene particular. Portanto, em um exemplo, uma célula do tipo selvagem com relação a enzima Ei pode se referir a uma célula que não tem expressão natural/não alterada da enzima Ei na célula. A célula do tipo selvagem com relação a enzima E2, E3, E4, E5, E6, E7, E8, E9, E10> Eu, E12> E13> E14, E15, etc. pode ser interpretada da mesma forma e pode se referir a uma célula que não tem expressão natural/não alterada da enzima E2, E3, E4, E5, E6, E7, E8j E9, E10, Eu, Ei2, Ei3, E14i E15i etc. respectivamente na célula.
[017] Quaisquer das enzimas usadas de acordo com qualquer aspecto da presente invenção pode ser uma enzima isolada. Em particular, as enzimas usadas de acordo com qualquer aspecto da presente invenção podem ser usadas em um estado ativo e na presença de todos os cofatores, substratos, polipeptídios auxiliares e/ou de ativação ou fatores essenciais para suas atividades. O termo “isolado”, conforme usado no presente documento, significa que a enzima de interesse é enriquecida em comparação à célula na qual a mesma ocorre naturalmente. A enzima pode ser enriquecida por testes de eletroforese de poliacrilamida de SDS e/ou de atividade. Por exemplo, a enzima de interesse pode constituir mais que 5, 10, 20, 50, 75, 80, 85, 90, 95 ou 99 por cento de todos os polipeptídios presentes na preparação conforme julgado pela inspeção visual de um gel de poliacrilamida após o tingimento com corante azul Coomassie.
[018] A enzima usada de acordo com qualquer aspecto da presente invenção pode ser recombinante. O termo “recombinante”, conforme usado no presente documento, se refere a uma molécula ou é codificado por tal uma molécula, particularmente um polipeptídio ou ácido nucleico que, desse modo, não ocorre naturalmente, porém, é o resultado de engenharia genética ou se refere a uma célula que compreende uma molécula recombinante. Por exemplo, uma molécula de ácido nucleico é recombinante se compreender um promotor funcionalmente ligado a uma sequência que codifica um polipeptídio de modo catalítico ativo e o promotor foi projetado de modo que o polipeptídio de modo catalítico ativo seja sobre expresso em relação ao nível do polipeptídio na célula do tipo selvagem correspondente que compreende a molécula de ácido nucleico não alterada original.
[019] Uma pessoa versada na técnica teria a capacidade para usar qualquer método conhecido na técnica para modificar geneticamente uma célula ou micro-organismo. De acordo com qualquer aspecto da presente invenção, a célula geneticamente modificada pode ser geneticamente modificara de modo que em um intervalo de tempo definido, dentro de 2 horas, em particular dentro de 8 horas ou de 24 horas, a mesma forma pelo menos uma vez ou duas vezes, especialmente pelo menos 10 vezes, pelo menos 100 vezes, pelo menos 1000 vezes ou pelo menos 10000 vezes mais éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado que a célula do tipo selvagem. O aumento na formação de produto pode ser determinado, por exemplo, cultivando-se a célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, e a célula do tipo selvagem separadamente sob as mesmas condições (mesma densidade celular, mesmo meio de nutriente, mesmas condições de cultura) por um intervalo de tempo específico em um meio de nutriente adequado e, então, determinar a quantidade de produto-alvo (éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado) no meio de nutriente.
[020] A célula geneticamente modificada ou o micro-organismo podem ser geneticamente diferentes da célula do tipo selvagem ou do micro-organismo. A diferença genética entre o micro-organismo geneticamente modificado, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, e o micro-organismo do tipo selvagem pode estar na presença de um gene completo, um aminoácido, um nucleotídeo etc. no micro-organismo geneticamente modificado que pode ser ausente no micro-organismo do tipo selvagem. Em um exemplo, o microorganismo geneticamente modificado, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, pode compreender enzimas que permitem que o microorganismo produza mais 1-alcanóis, 1-alcanais, ácidos alcanoicos, ésteres de ácido alcanoico, ésteres de hidroxiácido alcanoico omega etc. em comparação às células do tipo selvagem. O micro-organismo do tipo selvagem relativo ao micro-organismo geneticamente modificado da presente invenção pode ter nenhuma atividade ou nenhuma atividade detectável das enzimas que permite que o micro-organismo geneticamente modificado produza 1-alcanóis, 1-alcanais, ácidos alcanoicos, ésteres de ácido alcanoico, ésteres de hidroxiácido alcanoico omega, etc. Conforme usado no presente documento, o termo “micro-organismo geneticamente modificado” pode ser usado de modo intercambiável com o termo “célula geneticamente modificada”. A modificação genética, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, é executada na célula do micro-organismo.
[021] As células, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, são transformadas geneticamente de acordo com qualquer método conhecido na técnica. Em particular, as células podem ser produzidas de acordo com o método revelado no documento WO2013024114.
[022] A frase “a célula geneticamente modificada tem uma atividade aumentada, em comparação a seu tipo selvagem, nas enzimas” conforme usada no presente documento se refere à atividade da respectiva enzima que é aumentada por um fator de pelo menos 2, em particular, de pelo menos 10, mais particularmente de pelo menos 100, ainda mais particularmente de pelo menos 1000 e ainda mais particularmente de pelo menos 10000.
[023] A frase "atividade aumentada de uma enzima", conforme usada no presente documento deve ser entendida como atividade intracelular aumentada. Basicamente, um aumento na atividade enzimática pode ser alcançado aumentando-se o número de cópia da sequência de genes ou das sequências de genes que codificam uma enzima, com o uso de um promotor forte ou empregando-se um gene ou alelo que codifica uma enzima correspondente com a atividade aumentada, alterando-se a utilização de códon do gene, aumentando-se a meia vida do mRNA ou da enzima em diversas formas, modificando-se a regulação de uma expressão do gene e, opcionalmente, combinando-se essas medições. As células geneticamente modificadas usadas de acordo com qualquer aspecto da presente invenção são, por exemplo, produzidas pela transformação, transdução, conjugação ou uma combinação desses métodos com um vetor que contém o gene desejado, um alelo desse gene ou partes do mesmo e um vetor que torna a expressão do gene possível. A expressão heteróloga é alcançada, em particular, pela integração do gene ou dos alelos no cromossomo da célula ou um vetor replicante extracromossomicamente.
[024] No mesmo contexto, a frase “atividade diminuída de uma enzima Ex” usada com referência a qualquer aspecto da presente invenção pode ser entendida como uma atividade diminuída por um fator de pelo menos 0,5, particularmente de pelo menos 0,1, mais particularmente de pelo menos 0,01, ainda mais particularmente de pelo menos 0,001 e mais particularmente de pelo menos 0,0001. A frase “atividade diminuída” também compreende nenhuma atividade detectável (“atividade de zero”). A diminuição na atividade de uma determinada enzima pode ser afetada, por exemplo, pela mutação seletiva ou por outras medições conhecidas pela pessoa versada na técnica para diminuir a atividade de uma determinada enzima. Em particular, a pessoa versada na técnica encontra instruções para a modificação e diminuição de expressão de proteína e redução simultânea da atividade enzimática através da interrupção de genes específicos, por exemplo, pelo menos em Dubeau et al. 2009: Singh & Rohm. 2008, Lee et a!., 2009 e semelhantes. O aumento na atividade enzimática em uma célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, pode ser alcançado pela modificação de um gene que compreende uma das sequências de ácido nucleico, em que a modificação é selecionada a partir do grupo que compreende, consiste em, inserir DNA estranho no gene, excluir pelo menos partes do gene, indicar mutações na sequência de gene, interferência de RNA (siRNA), RNA antisense ou modificação (inserção, exclusão ou indicação de mutações) de sequências regulatórias, tais como, por exemplo, promotores e terminadores ou locais de união de ribossomo, que estão próximo do gene.
[025] O termo DNA estranho deve ser entendido nessa conexão como qualquer sequência de DNA que é "estranha" ao gene (e não ao organismo), isto é, as sequências de DNA endógenas também pode funcionar nessa conexão como “DNA estranho”. Nessa conexão, pse refere, particularmente, que o gene seja interrompido pela inserção de um gene marcador de seleção, desse modo, o DNA estranho é um gene marcador de seleção, em que preferencialmente a inserção foi afetada pela recombinação homologa no local do gene.
[026] A expressão das enzimas e dos genes mencionada acima e todas as mencionadas abaixo são determináveis por meio de separação de gel de proteína unidimensional e bidimensional seguida pela identificação óptica da concentração de proteína no gel com o software de avaliação adequado.
[027] Se o aumento de uma atividade enzimática tiver como base exclusivamente o aumento da expressão do gene correspondente, então, a quantificação do aumento da atividade enzimática pode ser determinada simplesmente por uma comparação da separação de proteína unidimensional ou bidimensional entre a célula do tipo selvagem e célula geneticamente modificada. Um método comum para a preparação dos géis de proteína com bactéria e para a identificação das proteínas é o procedimento descrito por Hermann et al. (Electrophoresis, 22: páginas 1712 a 1723 (2001). A concentração de proteína também pode ser analisada pela hibridação Western blot com um anticorpo específico para a proteína a ser determinada (Sambrook et al., Molecular Cloning: a laboratory manual, 2o Edição Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. EUA, 1989) seguida pela avaliação óptica com software adequado para a determinação de concentração (Lohaus e Meyer (1989) Biospektrum, 5: páginas 32 a 39; Lottspeich (1999), Angewandte Chemie 111: página 2630 (a 2647). Esse método também é sempre uma opção quando produtos possíveis da reação a ser catalisada pela atividade enzimática a ser determinada podem ser metabolizados rapidamente no micro-organismo ou, caso contrário, a atividade no tipo selvagem é muito baixa para ser possível determinar adequadamente a atividade enzimática a ser determinada com base na formação de produção.
[028] Em particular, - a Enzima Ei pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilase P450 (Ea) e alcano hidroxilase AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3; - a Enzima E2 pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilase P450 (Ea), alcano hidroxilase AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3, álcool oxidase (Ec) de EC 1.1.3.20 e álcool desidrogenase (Ed); - a Enzima E3 é selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilase P450 (Ea) de EC 1.14.15.3-, alcano hidroxilase AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3, aldeído desidrogenase (Ee), álcool oxidase bifuncional (Ec) de EC 1.1.3.20, álcool desidrogenase AlkJ bifuncional (Edi) e álcool desidrogenase bifuncional (Edii) de EC 1.1.1.1 ou EC 1.1.1.2, em que Ec, Edi, e Edii têm capacidade para oxidar um 1-alcanol por meio de um 1-alcanal diretamente para o ácido alcanoico correspondente; - a Enzima E4 pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em Sintase de éster de cera (Ef) e álcool O-acil transferase (Eg); - a Enzima E5 pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilase P450 (Ea) e alcano hidroxilase AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3; - a Enzima E6 pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilase P450 (Ea), alcano hidroxilase AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3, álcool oxidase (Ec) e álcool desidrogenase (Ed); - a Enzima E7 pode ser uma ω-transaminase (Eh).
[029] Em um exemplo, as enzimas Ei, E2, E3 e E5 podem, cada uma, ser enzimas diferentes que podem ter a capacidade para executar suas atividades. Por exemplo, E-\ pode ser alcano hidroxilase AlkB (Eb), E2 pode ser álcool oxidase (Ec), E3 pode ser álcool desidrogenase AlkJ bifuncional, e E5 pode ser alcano hidroxilase AlkB (Eb). Em outro exemplo, Ei pode ser alcano hidroxilase P450 (Ea), E2 pode ser álcool desidrogenase (Ec), E3 pode ser aldeído desidrogenase (Ee), e E5 pode alcano hidroxilase P450. Em particular, qualquer combinação de enzimas de E1f E2, E3 e E5 pode ser usada para executar suas funções específicas. Em um exemplo adicional, Ei, E2, E3 e E5 pode ser a mesma enzima. Nesse exemplo, Ei, E2> E3 e E5 pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilase P450 (Ea) e alcano hidroxilase AlkB (Eb). Em um exemplo, E^ E2i E3 e E5 pode ser alcano hidroxilase P450 (Ea). Nesse exemplo, a célula, de acordo com qualquer aspecto, da presente invenção compreende uma expressão aumentada em relação à célula do tipo selvagem de alcano hidroxilase P450 (Ea) que satisfaz a função de enzimas Ei, E2, E3 e E5. Em outro exemplo, Ei, E2, E3 e E5 pode ser alcano hidroxilase AlkB (Eb). Nesse exemplo, a célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, compreende uma expressão aumentada em relação à célula do tipo selvagem de alcano hidroxilase AlkB (Eb) que satisfaz a função das enzimas Ei, E2, E3 e E5.
[030] As enzimas Ea a Eh podem compreender uma sequência de polipeptídios em que até 60 %, preferencialmente até 25 %, particularmente até 15 %, em particular até 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ou 1 % dos resíduos de aminoácido são modificados em comparação às sequências de referência abaixo (números de acessão por exclusão, inserção, substituição ou uma combinação dos mesmos e que ainda possuem pelo menos 50 %, preferencialmente 65 %, particularmente, preferencialmente 80 %, em particular mais que 90 % da atividade do proteína com a sequência de referência correspondente abaixo, em que 100 % atividade da proteína de referência é entendida como o aumento da atividade das células usadas como um biocatalisador, isto é, a quantidade de substância convertida por tempo de unidade com base na quantidade de célula usada (unidades por peso seco de célula de grama [U/g CDW]) em comparação com a atividade do biocatalisador na ausência da proteína de referência.
[031] Modificações de resíduos de aminoácido de uma determinada sequência de polipeptídios que resultam em nenhuma modificação significativa das propriedades e funções do determinado polipeptídio são conhecidas por aqueles versados na técnica. Desse modo, por exemplo, quaisquer aminoácidos podem, frequentemente, ser trocados por um outro sem problemas; os exemplos de tais substituições de aminoácido adequadas são: Ala por Ser; Arg por Lys; Asn por Gin ou His; Asp por Glu; Cys por Ser; Gin por Asn; Glu por Asp; Gly por Pro; His por Asn ou Gin; lie por Leu ou Vai; Leu por Met ou Vai; Lys por Arg ou Gin ou Glu; Met por Leu ou lie; Phe por Met ou Leu ou Tyr; Ser por Thr; Thr por Ser; Trp por Tyr; Tyr por Trp ou Phe; Vai por lie ou Leu. Sabe-se também que as modificações, particularmente, nas terminações N- ou C- de um polipeptídio na forma de, por exemplo, inserções ou exclusões de aminoácido, frequentemente não exercem influência significativa sobre a função do polipeptídio.
[032] Os números e acessão declarados em conexão com a presente invenção mencionados ao longo deste relatório descritivo correspondem às entradas de banco de dados NCBI ProteinBank com a data de 26/07/2011; como uma regra, ó número de versão da entrada é identificado aqui por "numerais", tais como, por exemplo, Ί”.
[033] Todas porcentagens declaradas (%) são, salvo declarado de outra maneira, por cento de massa.
[034] De acordo com qualquer aspecto da presente invenção, a célula microbial pode ser selecionada a partir da espécie de bactéria do grupo que consiste em, Abiotrophia, Acaryochloris, Accumulibacter, Acetivibrío, Acetobacter, Acetohalobium, Acetonema, Achromobacter, Acidaminococcus, Acidimicrobium, Acidiphilium, Acidithiobacillus, Acidobacterium, Acidothermus, Acidovorax, Acinetobacter, Actinobacillus, Actinomyces, Actinosynnema, Aerococcus, Aeromicrobium, Aeromonas, Afipia, Aggregatibacter, Agrobacterium, Ahrensia, Akkermansia, Alcanivorax, Alicycliphilus, Alicyclobacillus, Aliivibrio, Alkalilimnicola, Alkaliphilus, Allochromatium, Alteromonadales, Alteromonas, Aminobacterium, Aminomonas, Ammonifex, Amycolatopsis, Amycolicicoccus, Anabaena, Anaerobaculum, Anaerococcus, Anaerofustis, Anaerolinea, Anaeromyxobacter, Anaerostipes, Anaerotruncus, Anaplasma, Anoxybacillus, Aquifex, Arcanobacterium, Arcobacter, Aromatoleum, Arthrobacter, Arthrospira, Asticcacaulis, Atopobium, Aurantimonas, Azoarcus, Azorhizobium, Azospirillum, Azotobacter, Bacillus, Bartonella, Basfia, Baumannia, Bdellovibrio, Beggiatoa, Beijerinckia, Bermanella, Beutenbergia, Bifidobacterium, Bilophila, Blastopirellula, Blautia, Blochmannia, Bordetella, Borrelia, Brachybacterium, Brachyspira, Bradyrhizobium, Brevibacillus, Brevibacterium, Brevundimonas, Brucella, Buchnera, Bulleidia, Burkholderia, Butyrivibrio, Caldalkalibacillus, Caldanaerobacter, Caldicellulosiruptor, Calditerrivibrio, Caminibacter, Campylobacter, Carboxydibrachium, Carboxydothermus, Cardiobacterium, Carnobacterium, Carsonella, Catenibacterium, Catenulispora, Catonella, Caulobacter, Cellulomonas, Cellvibrio, Centipeda, Chelativorans, Chloroflexus, Chromobacterium, Chromohalobacter, Chthoniobacter, Citreicella, Citrobacter, Citromicrobium, Clavibacter, Cloacamonas, Clostridium, Collinsella, Colwellia, Comamonas, Conexibacter, Congregibacter, Coprobacillus, Coprococcus, Coprothermobacter, Coraliomargarita, Coriobacterium, corrodens, Corynebacterium, Coxiella, Crocosphaera, Cronobacter, Cryptobacterium, Cupriavidus, Cyanobium, Cyanothece, Cylindrospermopsis, Dechloromonas, Deferribacter, Dehalococcoides, Dehalogenimonas, Deinococcus, Delftia, Denitrovibrio, Dermacoccus, Desmospora, Desulfarculus, Desulphateibacillum, Desulfitobacterium, Desulfobacca, Desulfobacterium, Desulfobulbus, Desulfococcus, Desulfohalobium, Desulfomicrobium, Desulfonatronospira, Desulforudis, Desulfotalea, Desulfotomaculum, Desulfovibrio, Desulfurispirillum, Desulfurobacterium, Desulfuromonas, Dethiobacter, Dethiosulfovibrio, Dialister, Dichelobacter, Dickeya, Dictyoglomus, Dietzia, Dinoroseobacter, Dorea, Edwardsiella, Ehrlichia, Eikenella, Elusimicrobium, Endoriftia, Enhydrobacter, Enterobacter, Enterococcus, Epulopiscium, Erwinia, Erysipelothrix, Erythrobacter, Escherichia, Ethanoligenens, Eubacterium, Eubacterium, Exiguobacterium, Faecalibacterium, Ferrímonas, Fervidobacterium, Fibrobacter, Finegoldia, Flexistipes, Francisella, Frankia, Fructobacillus, Fulvimarina, Fusobacterium, Gallibacterium, Gallionella, Gardnerella, Gemella, Gemmata, Gemmatimonas, Geobacillus, Geobacter, Geodermatophilus, Glaciecola, Gloeobacter, Glossina, Gluconacetobacter, Gordortia, Granulibacter, Granulicatella, Grimontia, Haemophilus, Hahella, Halanaerobiumns, Haliangium, Halomonas, Halorhodospira, Halothermothrix, Halothiobacillus, Hamiltonella, Helicobacter, Heliobacterium, Herbaspirillum, Herminiimonas, Herpetosiphon, Hippea, Hirschia, Histophilus, Hodgkinia, Hoeflea, Holdemania, Hydrogenivirga, Hydrogenobaculum, Hylemonella, Hyphomicrobium, Hyphomonas, Idiomarina, llyobacter, Intrasporangium, Isoptericola, Isosphaera, Janibacter, Janthinobacterium, Jonesia, Jonquetella, Kangiella, Ketogulonicigenium, Kineococcus, Kingella, Klebsiella, Kocuria, Koribacter, Kosmotoga, Kribbella, Ktedonobacter, Kytococcus, Labrenzia, Lactobacillus, Lactococcus, Laribacter, Lautropia, Lawsonia, Legionella, Leifsonia, Lentisphaera, Leptolyngbya, Leptospira, Leptothrix, Leptotrichia, Leuconostoc, Liberibacter, Limnobacter, Listeria, Loktanella, Lutiella, Lyngbya, Lysinibacillus, Macrococcus, Magnetococcus, Magnetospirillum, Mahella, Mannheimia, Maricaulis, Marinithermus, Marinobacter, Marinomonas, Mariprofundus, Maritimibacter, Marvinbryantia, Megasphaera, Meiothermus, Melissococcus, Mesorhizobium, Methylacidiphilum, Methylibium, Methylobacillus, Methylobacter, Methylobacterium, Methylococcus, Methylocystis, Methylomicrobium, Methylophaga, Methylophilales, Methylosinus, Methyloversatilis, Methylovorus, Microbacterium, Micrococcus, Microcoleus, Microcystis, Microlunatus, Micromonospora, Mitsuokella, Mobiluncus, Moorella, Moraxella, Moritella, Mycobacterium, Myxococcus, Nakamurella, Natranaerobius, Neisseria, Neorickettsia, Neptuniibacter, Nitratifractor, Nitratiruptor, Nitrobacter, Nitrococcus, Nitrosomonas, Nitrosospira, Nitrospira, Nocardia, Nocardioides, Nocardiopsis, Nodularia, Nostoc, Novosphingobium, Oceanibulbus, Oceanicaulis, Oceanicola, Oceanithermus, Oceanobacillus, Ochrobactrum, Octadecabacter, Odyssella, Oligotropha, Olsenella, Opitutus, Oribacterium, Orientia, Ornithinibacillus, Oscillatoria, Oscillochloris, Oxalobacter, Paenibacillus, Pantoea, Paracoccus, Parascardovia, Parasutterella, Parvibaculum, Parvimonas, Parvularcula, Pasteurella, Pasteuria, Pectobacterium, Pediococcus, Pedosphaera, Pelagibaca, Pelagibacter, Pelobacter, Pelotomaculum, Peptoniphilus, Peptostreptococcus, Persephonella, Petrotoga, Phaeobacter, Phascolarctobacterium, Phenylobacterium, Photobacterium, Pirellula, Planctomyces, Planococcus, Plesiocystis, Polaromonas, Polaromonas, Polymorphum, Polynucleobacter, Poribacteria, Prochlorococcus, Propionibacteríum, Proteus, Providencia, Pseudoalteromonas, Pseudoflavonifractor, Pseudomonas, Pseudonocardia, Pseudoramibacter, Pseudovibrio, Pseudoxanthomonas, Psychrobacter, Psychromonas, Puniceispirillum, Pusillimonas, Pyramidobacter, Rahnella, Ralstonia, Raphidiopsis, Regiella, Reinekea, Renibacterium, Rhizobium, Rhodobacter, Rhodococcus, Rhodoferax, Rhodomicrobium, Rhodopirellula, Rhodopseudomonas, Rhodospirillum, Rickettsia, Rickettsiella, Riesia, Roseburia, Roseibium, Roseiflexus, Roseobacter, Roseomonas, Roseovarius, Rothia, Rubrivivax, Rubrobacter, Ruegeria, Ruminococcus, Ruthia, Saccharomonospora, Saccharophagus, Saccharopolyspora, Sagittula, Salinispora, Salmonella, Sanguibacte, Scardovia, Sebaldella, Segniliparus, Selenomonas, Serratia, Shewanella, Shigella, Shuttleworthia, Sideroxydans, Silicibacter, Simonsiella, Sinorhizobium, Slackia, Sodalis, Solibacter, Solobacterium, Sorangium, Sphaerobacter, Sphingobium, Sphingomonas, Sphingopyxis, Spirochaeta, Sporosarcina, Stackebrandtia, Staphylococcus, Starkeya, Stenotrophomonas, Stigmatella, Streptobacillus, Streptococcus, Streptomyces, Streptosporangium, Subdoligranulum, subvibrioides, Succinatimonas, Sulfitobacter, Sulfobacillus, Sulfuricurvum, Sulfurihydrogenibium, Sulfurimonas, Sulfurospirillum, Sulfurovum, Sutterella, Symbiobacterium, Synechocystis, Syntrophobacter, Syntrophobotulus, Syntrophomonas, Syntrophothermus, Syntrophus, taiwanensis, Taylorella, Teredinibacter, Terríglobus, Thalassiobium, Thauera, Thermaerobacter, Thermanaerovibrio, Thermincola, Thermoanaerobacter, Thermoanaerobacteríum, Thermobaculum, Thermobifida, Thermobispora, Thermocrinis, Thermodesulphateator, Thermodesulfobacterium, Thermodesulfobium, Thermodesulfovibrio, Thermomicrobium, Thermomonospora, Thermosediminibacter, Thermosinus, Thermosipho, Thermosynechococcus, Thermotoga, Thermovibrio, Thermus, Thioalkalimicrobium, Thioalkalivibrio, Thiobacillus, Thiomicrospira, Thiomonas, Tolumonas, Treponema, tribocorum, Trichodesmium, Tropheryma, Truepera, Tsukamurella, Turicibacter, Variovorax, Veillonella, Verminephrobacter, Verrucomicrobium, Verrucosispora, Vesicomyosocius, Vibrio, Vibrionales, Victivallis, Weissella, Wigglesworthia, Wolbachia, Wolinella, Xanthobacter, Xanthomonas, Xenorhabdus, Xylanimonas, Xylella, Yersinia, Zinderia e Zymomonas, [035] Em particular, a célula microbial pode ser a partir de E. coli, Pseudomonas sp., Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida, Pseudomonas stutzeri, Acinetobacter sp., Burkholderia sp., Burkholderia thailandensis, Cyanobakterien, Klebsiella sp., Klebsiella oxytoca, Salmonella sp., Rhizobium sp. e Fthizobium meliloti, Bacillus sp., Bacillus subtilis, Clostridium sp., Corynebacterium sp., Corynebacterium glutamicum, Brevibacterium sp., Chlorella sp. e Nostoc sp.. Mais particularmente, a célula microbial pode ser a partir de E. coli.
[036] Os alcanos são hidrocarbonetos saturados que têm diversas aplicações dependendo do número de átomos de carbono e da estrutura do alcano (isto é, ramificada, linear, cíclica, etc.). Os alcanos (tecnicamente, sempre compostos acíclicos ou de cadeia aberta) têm, no geral, a fórmula química CnH2n+2· Um alcano usado de acordo com qualquer aspecto da presente invenção pode compreender pelo menos 6 átomos de C.
[037] Em particular, o alcano usado de acordo com qualquer aspecto da presente invenção pode compreender 6 a 22, 6 a 20, 6 a 18, 6 a 17, 6 a 16, 6 a 15, 6 a 14, 6 a 13, 6 a 12, 6 a 11,6 a 10, 8 a 20, 8 a 19, 8 a 18, 8 a 16, 8 a 15, 8 a 12, 8 a 10 átomos de carbono (inclusive). Os alcanos podem ser selecionados a partir do grupo que consiste em hexano, heptano, octano, nonano, decano, undecano, dodecano, tridecano, tetradecano, pentadecano, hexadecano e icosano. Em particular, o alcano usado pode ser decano, undecano ou dodecano.
[038] Enzima Ei [039] A enzima Ei pode ter a capacidade para converter pelo menos um alcano no 1-alcanol correspondente. Em particular, Ei pode ser pelo menos um alcano hidroxilase P450 (Ea) de EC 1.14.15.1 ou alcano hidroxilase AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3. O alcano hidroxilase P450 (Ea) é um componente de um sistema de reação que compreende: - dois componentes de enzima citocromo alcano hidroxilase P450 e NAD(P)H citocromo P450 oxidorredutase de EC 1.6.2.4 ou - três componentes de enzima citocromo alcano hidroxilase P450 do tipo CYP153, ferredoxina NAD(P)+ redutase de EC 1.18.1.2 ou EC 1.18.1.3 e ferredoxina.
[040] O alcano hidroxilase AlkB (Eib) é um componente de um sistema de reação que compreende: - alcano hidroxilase AlkB de EC 1.14.15.3 que é um componente de um sistema de reação que compreende três componentes de enzima alcano hidroxilase AlkB de EC 1.14.15.3, rubredoxina NAD(P) AlkT+ redutase de EC 1.18.1.1 ou de EC 1.18.1.4 e rubredoxina AlkG.
[041] Em particular, E-\ pode ser um alcano hidroxilase AlkB (Eb) também conhecido como um alcano monooxigenase. Mais particularmente, E-\ pode compreender identidade de sequência de pelo menos 50 % para o alcano monooxigenase a partir de Pseudomonas putida GPo1 codificado por alkBGT. Ainda mais particularmente, E-\ pode compreender a identidade de sequência de pelo menos 50 % para o polipeptídeo YP_001185946.1. Mais particularmente, Ei pode compreender um polipeptídeo com identidade de sequência de pelo menos 50, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 94, 95, 98 ou 100 % para um polipeptídeo YP_001185946.1.
[042] Enzima Ea [043] Em particular, a enzima Ei pode ser pelo menos um alcano hidroxilase P450 (Ea) selecionada a partir do grupo que consiste em: [044] AA073954.1, AA073953.1, ΧΡ_002546279.1, AAA34353.2, P30607.1, XP_002421627.1, XP_718670.1, CAA39366.1, XP_001527524.1, AA073955.1, AA073956.1, XP_002546278.1, EEQ43157.1, XP_718669.1, AAA34354.1, P10615.3, XP_002421628.1, 226487, P16141.3, CAA39367.1, Q9Y757.2, XP_001485567.1, AA073958.1, XP_001383506.2, XP_460111.2, AA073959.1, Q12586.1, XP_460112.2, AAO73960.1, Q12589.1, AA073961.1, XP_460110.2, EEQ43763.1, XP_710174.1, EDK41572.2, XP_001482650.1, CAA75058.1, XP_002548818.1, Q12588.1, XP_002422222.1, XP_001383636.2, XPJ301525381.1, XP_002548823.1, P30610.1, AA073952.1, XP_002548428.1, CAA36197.1, XP_002421126.1, AAA34320.1, P16496.3, P30608.1, P24458.1, XP_717999.1, XP_001383817.1, Q9Y758.1, XP_001482092.1, XP_001383710.2, P30609.1, AAB24479.1, XP_457792.1, XP_001524144.1, XP_457727.2, XP_001525578.1, XP_002616743.1, XP_002614836.1, XP_001525577.1, AA073957.1, Q12585.1, XP_001386440.2, XP_002616857.1, XP_001483276.1, XP_500402.1, EDK39907.2, XP_500560.1, XP_001211376.1, XP_002560027.1, XP_504857.1, XP_500855.1, XP_504406.1, BAA31433.1, XP_500856.1, XP_501148.1, XP 746567.1, XP_001262425.1, XP_001274843.1, XP_002840588.1, XP_002377641.1, XP_001825995.1, XP_001400739.1, XP_718066.1, CAA35593.1, XP_664735.1, XP_002150795.1, XP_500097.1, XP_002483325.1, XP_504311.1, XP_500273.1, XP_002548817.1, EDP54484.1, XP_755288.1, XP_001260447.1, EFY97851.1, ACD75398.1, ADK36660.1, XP_001213081.1, XP_002377989.1, XP_001826299.1, XP_001554811.1, XP_501667.1, XP_002148942.1, ADK36662.1, XP 002565827.1, P30611.1, XP_001267871.1, XP_002372373.1, EFY84686.1, P43083.1, XP_001263094.1, XP_002148355.1, XP_002568429.1, XPJ30181 731 4.1, Q12587.1, XPJ301396435.1, ΧΡ_001938589.1, ΧΡ_001388497.2, ΧΡ_663661.1, ΧΡ_003295335.1, ΧΡ_002152088.1, ΧΡ_001212071.1, Q12573.1, ΧΡ_002379858.1, ΧΡ_001821592.1, ΧΡ_002844341.1, ΧΡ_001394678.1, ACD75400.1, ΒΑΚ03594.1, ΧΡ_003170343.1, ΧΡ_001265480.1, ΧΡ_002550661.1, EDP55514.1, ΧΡ_001528842.1, ΧΡ_749919.1, ΧΡ_001593058.1, Ρ30612.1, EGC48494.1, ΕΕΗ04429.1, ΧΡ_001585586.1, ΧΡ_003236182.1, ΧΡ_001400199.1, EEQ46951.1, ΧΡ_721410.1, EGP87864.1, ΧΡ_002380808.1, ΧΡ_001792771.1, ΧΡ_001208515.1, ΧΡ__001216161.1, ΧΡ_003071804.1, EFW16963.1, ΧΡ_002542118.1, ΧΡ_001936677.1, EGD95268.1, ΧΡ_003015678.1, ΧΡ_501748.1, XPJ503169562.1, EFY96492.1, ΧΡ_682653.1, ΧΡ_002421356.1, CAK43439.1, EFY93677.1, ΧΡ_747767.1, ΧΡ_001244958.1, ΧΡ_003019635.1, ΧΡ_002847463.1, EGP83273.1, EGR52487.1, XPJ302622526.1, ΧΡ_002563618.1, CBX99718.1, ΧΡ_001552081.1, ΧΡ_003066638.1, ΧΡ_003176049.1, ACD75402.1, ΒΑΑ05145.1, ΧΡ_002482834.1, ΧΡ_001257501.1, ΧΡ_001934574.1, ΧΡ_001269972.1, XPJ301587438.1, ΧΡ_001215856.1, XPJ302149824.1, ΧΡ_001550556.1, XPJ303011982.1, ΧΡ__001827121.1, ΧΡ_003233566.1, ΧΡ_003022481.1, EGR47044.1, EFQ34695.1, ΧΡ_003170005.1, BAG09241.1, ΧΡ_002796370.1, ΧΡ_003019300.1, ΧΡ_002563873.1, CAK40654.1, ΕΕΗ19741.1, ΧΡ_003012518.1, EGD95716.1, ΧΡ_003239409.1, BAJ04363.1, ΧΡ_001537012.1, ΒΑΕ66393.1, EGP85214.1, ΧΡ_002487227.1, AAV66104.1, EGE07669.1, ΧΡ_362943.2, ΧΡ_003016806.1, EFQ27388.1, ΧΡ_002384360.1, ΧΡ_002836323.1, ΧΡ_001274959.1, EFZ03093.1, ΧΡ_661521.1, ΧΡ_002849803.1, ΧΡ_001589398.1, AAR99474.1, ΧΡ_003189427.1, ΧΡ_001823699.1, ΧΡ_364111.1, ΧΡ_001262753.1, EFY86805.1, ΧΡ_001390153.2, ΧΡ_002384738.1, ΧΡ__001941811.1, ΧΡ_001220831.1, ΧΡ_003296981.1, ΧΡ_002480829.1, BAD83681.1, ΧΡ_001827526.2, ΧΡ_369556.1, CAK38224.1, EFQ26532.1, ΧΡ_002562328.1, ΧΡ_001904540.1, EG052476.1, ΧΡ_002382002.1, ΧΡ_001225874.1, ΧΡ_958030.2, ΧΡ_002540883.1, ΧΡ_001908957.1, ΧΡ_001559255.1, XPJ364102.1, EDP48064.1, ΧΡ_365075.1, ΧΡ_381460.1, CBX95930.1, ΧΡ_003054099.1, ΧΡ_361347.2, ΧΡ_002846867.1, ΧΡ_001214985.1, EFQ35175.1, ΧΡ 002479062.1, ΧΡ_001908613.1, ΧΡ_003345380.1, EGR50567.1, ΧΡ 002479350.1, ΧΡ_001394417.2, ΧΡ_001394159.2, ΧΡ_002146776.1, EGP86783.1, EFX02953.1, CAK45889.1, ΧΡ_003006887.1, ΧΡ_002541427.1, ΧΡ_750735.1, ΧΡ_001257962.1, EG051720.1, ΧΡ_003005336.1, EGP83197.1, ΧΡ_002149832.1, ΧΡ_003052680.1, XPJ365851.1, ΧΡ_001799910.1, ΧΡ_003347175.1, ΧΡ_002565258.1, EGR48918.1, EGR52524.1, ΧΡ_964653.2, ΧΡ_002147083.1, ΧΡ_002843935.1, ΕΕΗ19393.1, CAC10088.1, ΕΕΗ47609.1, EEQ92528.1, ΧΡ_001246560.1, ΧΡ_002626168.1, ΧΡ_003024880.1, ΧΡ_003169255.1, ΧΡ_003013780.1, ΧΡ_003235691.1, ΧΡ_746816.1, EGD98483.1, ΧΡ_001389925.2, ΧΡ 002842817.1, ΧΡ_002797278.1, ADK36666.1, ΧΡ_003305469.1, ΧΡ_001548471.1, ΧΡ_001806478.1, EFQ34989.1, ΧΡ_001552987.1, CAC24473.1, ΧΡ_002541530.1, EEQ89262.1, ΧΡ_001247332.1, ΧΡ_003066043.1, EDP47672.1, ΧΡ_002628451.1, ΧΡ_001910644.1, EGR44510.1, EFQ36733.1, ΧΡ_003052472.1, ΧΡ_001393445.2, ΧΡ_001522438.1, EGO04179.1, ΧΡ_001397944.2, CAK49049.1, EFQ30109.1, ΧΡ_001585052.1, EGO30123.1, ΧΡ_388496.1, ΧΡ_003173913.1, CBF76609.1, ΧΡ_003028593.1, EG004180.1, CAK46976.1, ΧΡ_370476.1, ΧΡ_002145942.1, ΧΡ_003004457.1, ADK36663.1, ΧΡ_003040708.1, ΧΡ_003351473.1, EFY84692.1, ΧΡ_748328.2, ΧΡ_003190325.1, ΧΡ_002378813.1, EGR46513.1, XPJ303033448.1, ΧΡ_002145326.1, ΧΡ_662462.1, ΧΡ_747469.1, ΧΡ_001935085.1, EGR45892.1, EGO01601.1, EGP89995.1, ΧΡ_001222615.1, XPJD01224356.1, EGN93507.1, ΧΡ_001934479.1, ΒΑΚ09464.1, EGO30124.1, ΧΡ_001267956.1, ADK36661.1, EFY97845.1, ΧΡ_001834501.1, EG003790.1, ΧΡ_001884320.1, ΧΡ_003028899.1, ΑΑΡ79879.1, EFY84206.1, ΒΑΚ09467.1, ΧΡ_003030469.1, ΧΡ_001412594.1, ΧΡ_001834508.1, ΧΡ_001839436.2, ΧΡ_002583529.1, ΧΡ_001886288.1, ΧΡ_002843371.1, XPJ301 587730.1, ΒΑΚ09418.1, ΒΑΚ09442.1, EGO28830.1, EGE03365.1, EFZ01428.1, EG003065.1, ΧΡ_001558890.1, ΧΡ_002487181.1, EG029652.1, ΑΑΧ49400.1, EFY92529.1, ΧΡ 002380252.1, ΧΡ_001884460.1, ΒΑΚ09387.1, ΧΡ_001839366.2, ΧΡ_003031835.1, EFY99978.1, AAL67906.1, BAG09240.1, ΧΡ_002381768.1, ΧΡ_001800031.1, ΧΡ_001825073.2, ΒΑΕ63940.1, ΧΡ_003028894.1, AAL67905.1, ΧΡ_002910303.1, EG022856.1, ΧΡ_003028896.1, ΧΡ_681680.1, ΧΡ_002486603.1, ΧΡ_001838945.2, EGR50064.1, ΧΡ_001884349.1, ΧΡ_001883816.1, CAK37996.1, CA091865.1, 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ΒΑΕ47478.1, YPJ301681656.1, ZPJ51618281.1, ΖΡ_01627262.1, ΥΡ_001413057.1, ΥΡ_760740.1, ΥΡ_001242466.1, ΥΡ_001203574.1, CAH61454.1, ΥΡ_002129656.1, ΥΡ_001672075.1, ACP39709.1, ΥΡ_001990805.1, ΝΡ_946959.1, ΥΡ_001203575.1, ΥΡ_783213.1, ΥΡ_003059227.1, ΥΡ_004110202.1, ACP39645.1, ΥΡ 487538.1, CAH61451.1, ΥΡ_570816.1, ΥΡ_534107.1, ΥΡ_001413223.1, ΥΡ_001242465.1, ΥΡ_557448.1, ΖΡ_08631162.1, ΝΡ_773883.1, ΖΡ 00997728.1, ACP39683.1, ΝΡ_768493.1, ΝΡ_773882.1, ΖΡ_08271781.1, CAH61449.1, ΥΡ_003883668.1, ΥΡ_003332953.1, ΥΡ_004535688.1, ΥΡ 495502.1, ΥΡ_459378.1, ΖΡ_08700267.1, ΖΡ_01863452.1, ΖΡ 06860085.1, ΒΑΕ47487.1, ΥΡ_617903.1, ΖΡ_08207422.1, ΒΑΕ47486.1, ΖΡ_01041003.1, ΒΑΕ47484.1, ACR78197.1, CAH61456.1, ΖΡ_01858113.1, ACP39681.1, ΒΑΕ47485.1, ACP39673.1, ΒΑΕ47483.1, ACP39669.1, ΒΑΕ47482.1, ACP39674.1, ACP39704.1, ACP39703.1, ΥΡ_497095.1, ACP39672.1, ACP39702.1, ACP39670.1, ACP39666.1, ΥΡ_458852.1, ACP39687.1, ACP39688.1, ACP39634.1, ACP39686.1, ACP39660.1, ACP39700.1, ΥΡ_001411309.1, ΖΡ_01465241.1, ACP39701.1, ACP39679.1, ACP39657.1, ACP39694.1, ACP39659.1, ACP39671.1, ACP39693.1 e ΥΡ_003342921.1.
[045] Enzima Eb [046] Em outro exemplo, a enzima Ei pode ser pelo menos uma alcano hidroxilase AlkB (Eib) selecionada a partir do grupo que consiste em: [047] YP_001185946.1, Q9WWW6.1, YP_957898.1, YP_957728.1, YP 694427.1, BAC98365.1, ZP_00957064.1, CAC86944.1, YP_001672212.1, CAB59525.1, ACH99213.1, ACH99215.1, ACH99216.1, AAK56792.1, ACH99229.1, ACS91348.1, AAP41820.1, ZP_05128075.1, CAM58121.1, CAM58085.1, ACQ44675.1, ACZ62808.1, ZP_01738706.1, ZP_01916228.1, ZP_01225325.1, YP_001023605.1, ACJ22747.1, ACT91140.1, AAT91722.2, CBA27418.1, YP_001889129.1, EGC97932.1, ACT91201.1, ZP_05083049.1, YP 554098.1, ZP_01900149.1, ADG26619.1, ADG26657.1, ADG26640.1, ZP 06838771.1, ADG26649.1, ADG26651.1, ZP_02374120.1, YP_368326.1, ZP 02380481.1, ADG26643.1, ADG26628.1, YP_442346.1, ADG26620.1, ADG26647.1, ZP_07673680.1, ADG26638.1, YP_002232139.1, YP_001118743.1, ZP_01764629.1, YP_108945.1, YP_334185.1, ZP 04897834.1, ZPJD2889567.1, YP_620386.1, YP_002897546.1, ZP_02166109.1, ZP_02904755.1, ADG26639.1, YP_001892637.1, ADG26642.1, ZP_04939380.1, ZP_02464124.1, YP_102417.1, CAC36356.1, ACJ22727.1, YP_001764240.1, YP_002765609.1, YP_001945311.1, ZP 03586616.1, ACJ22665.1, ZP_03574223.1, CAC37038.1, ZP_02456517.1, YP_001807560.1, YP_002779449.1, AAK97454.1, YP_002912304.1, ACR55689.1, ΥΡ_003397515.1, ΥΡ_004361423.1, YPJ772734.1, ACJ65014.1, ACT31523.1, ACJ22750.1, ΖΡ_07375042.1, ΥΡ_002776786.1, ACB11552.1, ΖΡ 02363472.1, ADG26653.1, ΖΡ_04383196.1, ΖΡ_02356342.1, ACJ22751.1, ΥΡ 952571.1, ACU43494.1, ΥΡ_001135977.1, ΥΡ_002764193.1, ΥΡ_003855036.1, ΥΡ_004078475.1, ΑΑΚ97448.1, ΖΡ_04388098.1, ACX30747.1, ADG26632.1, ACJ22719.1, AD021492.1, ΖΡ_05061580.1, ADR72654.1, ACZ65961.1, ACX30755.1, ΥΡ_001849604.1, AAV64895.1, ΥΡ 004495037.1, ΥΡ_702497.1, ΥΡ_001069662.1, ΖΡ_06850622.1, BAF34299.1, CAB51024.2, YPJXM008018.1, ΥΡ_003768535.1, ACJ65013.1, ΖΡ 07282765.1, ΥΡ_886209.1, ACJ22725.1, ΖΡ_08155372.1, ΥΡ 004493362.1, ΖΡ_05228000.1, ΖΡ_07717360.1, BAD67020.1, ΥΡ_004524245.1, 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ΥΡ_001188029.1, ACD63080.1, ΥΡ_166583.1, AAV41375.1, ΖΡ_00998265.1, ACJ22757.1, ΑΒΒ13506.2, ΑΒΙ13999.1, ΑΒΙ14004.1, ΑΒΒ13509.1, ΥΡ_371980.1, ΖΡ_01755711.1, ΖΡ_05065835.1, ΖΡ_00959368.1, ΧΡ_001020063.1, ABJ16481.1, ΑΒΙ14006.1, ΖΡ__05101918.1, ΖΡ_01913733.1, ΑΒΙ14001.1, ΑΒΜ92270.1, ΑΒΙ14003.1, CAH03132.1, ΥΡ_973211.1, ΑΒΑ55797.1, ΥΡ_003578527.1, ABJ16483.1, ABJ16482.1, CBY78068.1, ACT91260.1, ΥΡ_509155.1, ΑΒΒ13508.1, ABJ16485.1, ΑΒ061779.1, ΑΒ114005.1, ACM63042.1, ADC29543.1, ΖΡ_02153440.1, YPJ709335.1, ΑΒ113998.1, ΑΒΙ14002.1, ΑΑΒ70825.1, ACX30751.1, ΑΒΙ14000.1, ΥΡ 003617173.1, ΖΡ_01155421.1, ACX30752.1, ΝΡ_542887.1, ADC29546.1, AAC38359.1, ADC29541.1, ΧΡ_001020064.1, ΖΡ_01442436.1, ΖΡ_05103090.1, ADC29544.1, ΑΒ061809.1, ΑΑΥ89939.1, ACH99235.1, CAH55830.1, ΑΒΟ26095.1, ΥΡ_004011670.1, ΑΒΟ26084.1, ADA71083.1, ΑΒΟ26087.1, ΑΒ061806.1, ADC29531.1, ΑΒΟ26109.1, ACJ22753.1, ΑΒΟ26089.1, ΑΒΟ26093.1, ΑΒΟ26092.1, ΑΒ061827.1, ΑΒΟ26105.1, ΑΒ026112.1, ΑΑΤ91721.1, ΑΒΟ26120.1, ΑΒ026090.1, ΑΒΟ26088.1, ΑΒ061811.1, ΑΒ061783.1, CAH55827.1, ACH99232.1, ΑΒ061828.1, ADC29530.1, ACH99234.1, AAQ88276.1, CAH55823.1, ΑΒΟ26103.1, ACH99233.1, ΑΒ061836.1, ΑΒΟ26094.1, ΑΒ061840.1, YPJXM534277.1, ΖΡ 05845010.1, ΑΒ061821.1, ACH99231.1, AAV68403.1, ΑΒ061839.1, CAH56098.1, ΑΒΟ26085.1, ΑΒ061826.1, ΑΒ061822.1, ΑΒΟ26110.1, ΑΒΟ61810.1, ΑΒ061844.1, ΑΒ061825.1, ΑΒΟ26099.1, ACJ22767.1, ΑΒΟ26102.1, YPJ304535707.1, ACJ22762.1, ΑΒΟ26097.1, BAC65444.1, ΑΒ061829.1, YPJ 14083.1, CAH55828.1, ΑΒΟ26106.1, ΥΡ_552229.1, ΝΡ 049190.1, ΑΒ026116.1, CAH56107.1, CAM32407.1, ΑΒΟ26101.1, ΑΒ061841.1, ΑΒΜ79805.1, ΖΡ_05075249.1, AAC27438.2, ΥΡ_003754872.1, ADC29532.1, ADA71139.1, ADA71107.1, ADA71095.1, ΥΡ_001268217.1, ADA71126.1, ADA71094.1, CAH56108.1, ADC29533.1, ADA71085.1, ΖΡ 05054453.1, ADA71097.1, ADA71086.1, ADA71114.1, ADC29548.1, ADA71101.1, ADC29547.1, ADA71138.1, ADC29542.1, ADA71098.1, ADA71128.1, ADA71105.1, ADA71093.1, ADA71135.1, ADA71100.1, ΥΡ 557479.1, ADA71113.1, ADA71091.1, ADC29537.1, ADA71084.1, ADA71090.1, CAH56094.1, ΧΡ_002945767.1, ADA71137.1, ADA71103.1, ADA71118.1, ADA71133.1, ADA71102.1, ADC29536.1, CAH56100.1, CAH56101.1, ACI15225.1, ACI15225.1, ΑΒΟ26091.1, CAH55826.1, CAH55824.1, ΖΡ_08484419.1, ADA71111.1, ACJ22759.1, CAH55825.1, CAH56106.1, CAH56099.1, CAC40957.1, ΖΡ_05075037.1, CAH56102.1, ΖΡ 06846296.1, ABJ16491.1, ΖΡ_05067177.1, ΧΡ_001698107.1, ΒΑΗ10789.1, ΒΑΗ10791.1, ΒΑΗ10793.1, ΒΑΗ10788.1, ABJ16490.1, ΒΑΗ10800.1, ΒΑΗ10790.1, ΒΑΗ10792.1, ΖΡ_05075214.1, ΒΑΗ10799.1, ΒΑΗ10795.1, ΒΑΗ10787.1, ΒΑΗ10798.1, ΒΑΗ10794.1, ΒΑΗ10801.1, ΒΑΗ10796.1, ΒΑΗ10797.1, ΒΑΗ10802.1, CAH56095.1, CAH56096.1, ADC29538.1, ΑΒΧ76425.1, ΖΡ_06727686.1, ΖΡ_07774883.1 e ΥΡ_001615042.1.
[048] Enzima Ε2 [049] A Enzima Ε2 pode ter a capacidade para converter a 1-alcanol no 1-alcanal correspondente. Em particular, E2 pode ser pelo menos um alcano hidroxilase P450 (Ea) de EC 1.14.15.3, alcano hidroxilase AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3, álcool oxidase (Ec) de EC 1.1.3.20 ou álcool desidrogenase (Ed) de EC 1.1.1.1 ou EC 1.1.1.2. Mais particularmente, E2 pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilase P450 (Ea), alcano hidroxilase AlkB (Eb), álcool oxidase (Ec) de EC 1.1.3.20, álcool desidrogenase AlkJ (Edi), e álcool desidrogenase (Edü) de EC 1.1.1.1 ou EC 1.1.1.2.
[050] Em particular, E2 pode ser um alcano hidroxilase AlkB (Eb) também conhecido como um alcano monooxigenase. Mais particularmente, E2 pode compreender identidade de sequência de pelo menos 50 % para o alcano monooxigenase a partir de Pseudomonas putida GPo1 codificado por alkBGT. Ainda mais particularmente, E2 pode compreender a identidade de sequência de pelo menos 50 % para o polipeptídeo YP_001185946.1. Mais particularmente, E2 pode compreender um polipeptídeo com identidade de sequência de pelo menos 50, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 94, 95, 98 ou 100 % para um polipeptídeo YP_001185946.1.
[051] Enzima Ec [052] O álcool oxidase (Ec) pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em: [053] AAS46878.1, ACX81419.1, AAS46879.1, CAB75353.1, AAS46880.1, ΧΡ_712350.1, ΧΡ_002422236.1, ΧΡ_712386.1, EEQ43775.1, ΧΡ_001525361.1, ΧΡ_001386087.1, ΧΡ_459506.2, CAB75351.1, CAB75352.1, ΧΡ_001385255.2, EDK39369.2, ΧΡ_001484086.1, ΧΡ_002618046.1, ΧΡ 002548766.1, ΧΡ_002548765.1, ΧΡ_003041566.1, ΧΡ_003328562.1, ΧΡ_001214264.1, ΧΡ_001904377.1, ΧΡ_658227.1, ΧΡ_001591990.1, XPJ753079.1, ΧΡ_002569337.1, ΧΡ_001268562.1, XPJ503348911.1, EGP90120.1, ΧΡ_001389382.1, EER37923.1, ΧΡ_001264046.1, EG058212.1, ΧΡ_001554225.1, ΧΡ_003298648.1, ΧΡ_959005.1, ΧΡ_002841296.1, ΧΡ_001940486.1, EGR52262.1, EEG89581.1, EGD99881.1, EFQ33355.1, ΧΡ_001821106.1, ΧΡ_002622231.1, EGG03784.1, EGC44059.1, ΧΡ_003018036.1, ΧΡ_003011696.1, EFY90752.1, ΧΡ_001227812.1, ΧΡ_758170.1, ΧΡ_001243546.1, ΧΡ_002479333.1, ΧΡ_003344707.1, EFW14100.1, ΧΡ_003071927.1, ΧΡ_003171263.1, ΧΡ_003051757.1, XPJ302147053.1, ΕΕΗ19591.1, ΕΕΗ50473.1, ΧΡ_001792978.1, ΧΡ_387094.1, EFY98644.1, ΧΡ_002788971.1, ΧΡ_002842592.1, EFX04185.1, ΧΡ_003231449.1, ΧΡ_001729067.1, CBX94189.1, ΧΡ_001413535.1, ACF22878.1, B5WWZ9.1, ΧΡ_002994642.1, ΧΡ_002269629.1, ΧΡ_002519938.1, ΧΡ_002982582.1, ΝΡ_001047464.1, EEC73620.1, ΧΡ_002981110.1, ΧΡ_002960521.1, ΝΡ_566729.1, ΧΡ_001541970.1, ΧΡ_002967201.1, ΒΑΚ00483.1, ΧΡ_002182547.1, ΒΑΚ02336.1, ΧΡ_002454190.1, ΧΡ_002328753.1, ΧΡ_002867943.1, ΧΡ_002285334.1, CAC87643.1, CAN71289.1, XPJD02454188.1, AAL31049.1, ΧΡ_002464494.1, AAL31021.1, ΥΡ_117187.1, ΧΡ_002543430.1, CAA18625.1, ΧΡ_002883430.1, ΝΡ_193673.2, ΧΡ_002529832.1, XPJ301753124.1, ΝΡ_001142399.1, ACN27562.1, XPJ302464495.1, ACR36691.1, BAJ86655.1, B5WWZ8.1, ΝΡ_001148058.1, ABR17814.1, ΕΑΥ78905.1, ΝΡ_194586.1, ΑΑΜ63097.1, ΑΑΚ64154.1, ΝΡ_001064839.2, ΧΡ_002869492.1, XPJ302314488.1, AAL31024.1, ΖΡ_06967355.1, ΑΑΡ54248.2, ΧΡ_002311685.1, ACF87929.1, ΥΡ_907078.1, EGE07035.1, ΥΡ_001849908.1, ΧΡ 002464496.1, EEC67160.1, AAL31027.1, ΧΡ_001761391.1, XPJD02961172.1, ΧΡ_002528823.1, ΧΡ_002966834.1, ΝΡ_001176205.1, ΧΡ_001763007.1, ΧΡ_002272123.1, ΧΡ 002889487.1, ΧΡ_003003157.1, ΝΡ_285451.1, EGG23219.1, ΝΡ_171895.2, ΥΡ_003395677.1, Q9ZWB9.1, ACF88407.1, ΖΡ_06413771.1, ΕΕΕ51131.1, ΥΡ_003835264.1, ΥΡ_003397164.1, ΥΡ_004081922.1, ΧΡ_003294587.1, ΕΕΕ51130.1, ΥΡ_003647529.1, ΥΡ_003647985.1, CBI29206.3, ΧΡ_629786.1, ΖΡ_07964664.1, ΕΕΕ57396.1, ΕΕΗ09589.1, ΥΡ_003265796.1, ΥΡ_001840752.1, ΖΡ_08620775.1, ACR36076.1, ΖΡ_05043749.1, ΥΡ_980677.1, ΖΡ_05043728.1, ΥΡ_692894.1, ΝΡ_710223.1, EEC67159.1, ΑΑΡ03110.1, EFA85697.1, ΥΡ_691805.1, ΥΡ_551012.1, ΥΡ_001174466.1, ΥΡ_002796294.1, ΥΡ_004716331.1, ΥΡ_001019547.1, ΥΡ_585737.1, ΑΕΑ86007.1, ΥΡ_960830.1, ΥΡ_004743970.1, ΖΡ_03431349.1, ΖΡ 06448642.1, ΖΡ_07430351.1, ΝΡ_215006.2, ΖΡ_03535393.1, ΖΡ_06801690.1, ΥΡ_001849132.1, ΝΡ_854165.1, ΖΡ_03427234.1, CBJ27378.1, ΝΡ_334920.1, ΖΡ_08571383.1, YPJ728161.1, ΖΡ_01896040.1, ΖΡ 03530923.1, ΥΡ_551306.1, ΥΡ_003167456.1, ΥΡ_606070.1, ΖΡ 06850167.1, ADP99095.1, ΥΡ_907986.1, ZPJM924166.1, ΖΡ_08139923.1, YPJ301270300.1, ΥΡ_521830.1, ΥΡ_003147410.1, ΥΡ_002007173.1, ADR62464.1, ΥΡ_004382294.1, NPJ747223.1, ΥΡ_004687462.1, ΝΡ_902159.1, ZPJM936784.1, ΥΡ_003914667.1, ΖΡ_01306356.1, ZPJM750553.1, ΥΡ_002875279.1, ΥΡ_004704374.1, ΥΡ_001671392.1, ΝΡ_249055.1, ΖΡ_06876360.1, ΥΡ_001345853.1, ΥΡ_002437969.1, ΥΡ_004356853.1, ΥΡ_351075.1, CBI23676.3, ΥΡ_001189668.1, ΥΡ_001528881.1, ΥΡ_001613612.1, ΥΡ_001747218.1, ΥΡ_003393002.1, ΥΡ_001365074.1, ΖΡ_07778129.1, ΖΡ_07392715.1, ΥΡ_001553329.1, ΥΡ_262925.1, ΥΡ_751961.1, ΥΡ_564183.1, ΥΡ_003811876.1, YPJD02356821.1, YPJ301051828.1, ΥΡ_001837525.1, ΝΡ716513.1, ΖΡ_01915079.1, ΖΡ_02156621.1, ΥΡ_001184631.1, ΥΡ_001475595.1, ΖΡ_05042393.1, ΥΡ_962228.1, ΥΡ_001612275.1, ADV55625.1, ΥΡ_001675797.1, ΥΡ_003555260.1, ΖΡ_01075039.1, ΥΡ_003812822.1, ΥΡ_001503351.1, EFN52938.1, ΥΡ_001759063.1, ΖΡ 06503577.1, ΥΡ_871025.1, ΖΡ_08564919.1, ΥΡ_002310162.1, ΥΡ 732875.1, ΥΡ_001092722.1, YPJ739324.1, ΧΡ_002333995.1, ΝΡ 085596.1, ΥΡ_928870.1, EGD05748.1, ΝΡ_443993.1, ΖΡ_08138057.1, ΖΡ_05041587.1, ΖΡ_07011380.1, ΥΡ_001612684.1, ΖΡ_07669342.1, ΖΡ 06508361.1, ΖΡ_03423639.1, ΥΡ_923293.1, ΖΡ_05061865.1, ΖΡ_08181496.1, ΥΡ_559605.1, ΖΡ_06841320.1, ΖΡ_01620712.1, ΥΡ_001896340.1, ΖΡ_03276650.1, YPJXM303194.1, ΖΡ_08180715.1, ΖΡ_06382740.1, ΖΡ_01034555.1, YPJXM604560.1, ΥΡ_001020142.1, ΥΡ_935375.1, ΖΡ_01546137.1, ΖΡ_07661079.1, ΥΡ_001860640.1, ΖΡ 06052841.1, ΖΡ_01881170.1, ΖΡ_05781455.1, ΥΡ_932732.1, ΖΡ_08119300.1, YPJXM715268.1, ΖΡ_03697402.1, YPJXM126957.1, ΖΡ_06703136.1, ΝΡ_642445.1, ΖΡ_08273900.1, ΥΡ_004524313.1, ΖΡ_01902993.1, ΥΡ_001900094.1, ΑΕΑ84888.1, ΥΡ_004690289.1, ΝΡ 714358.1, ΥΡ_682471.1, ΥΡ_003239.1, ΥΡ_997465.1, ΥΡ_003452130.1, ΖΡ_01739153.1, ΥΡ_004219483.1, ΥΡ_001761298.1, ΖΡ_01438251.1, CBI37146.3, ΖΡ_04748383.1, ΥΡ_004362245.1, ΖΡ_05912795.1, ΥΡ_003390234.1, ΥΡ_003122799.1, CCB77579.1, EGB06416.1, ΖΡ 08389346.1, YPJ 91496.1, ZPJ35224727.1, ΖΡ_01125614.1, ΥΡ 466287.1, ΥΡ_001368620.1, ΥΡ_001380256.1, ΥΡ_002361951.1, ΥΡ_002756103.1, ΥΡ_001801399.1, ΖΡ_06847140.1, ΥΡ_003200069.1, ΥΡ_001940247.1, ΥΡ_001584322.1, ZPJM679227.1, ΥΡ_002493674.1, ΥΡ_002135530.1, ΥΡ_004290424.1, ΥΡ_001772011.1, ΖΡ_08189046.1, ΖΡ 03423640.1, ΥΡ_001834251.1, ΖΡ_01041752.1, ΥΡ_001533410.1, ΥΡ 269751.1, ΥΡ_002432994.1, ΥΡ_003694653.1, CAD47896.1, ΝΡ 769359.1, YPJ304239460.1, ΥΡ_004605221.1, ΥΡ_001961214.1, ΥΡ_001837513.1, ΥΡ_004335962.1, YPJ304358600.1, ΖΡ_05050026.1, ΥΡ_003202983.1, BAD03777.1, ΖΡ_02165013.1, ΝΡ_774131.1, ΥΡ_432169.1, ΖΡ 05000547.1, ΥΡ_001261233.1, ΧΡ_002593969.1, ΧΡ_002603265.1, ΥΡ_003342435.1, ΖΡ_01253183.1, EG036831.1, ΥΡ_001866737.1, ΥΡ_001523879.1, ΥΡ_133594.1, ΥΡ_003768990.1, ΥΡ_001237820.1, ΥΡ_003133224.1, ΖΡ_01896771.1, ΖΡ_01865125.1, ΝΡ_960319.1, ΥΡ_826958.1, ΥΡ_003326608.1, ΥΡ_002219515.1, ΝΡ_217926.1, ΖΡ 07441899.2, ΥΡ_001208178.1, ADM42038.1, ΥΡ_002433510.1, ΖΡ 08274313.1, EG038668.1, ΖΡ_03393221.1, ΝΡ_356358.1, ΖΡ 06055780.1, ΥΡ_001684562.1, ΖΡ_08528157.1, BAD03162.1, ΥΡ_001800712.1, ACL37106.1, ΥΡ_883489.1, ΖΡ_01075202.1, ΝΡ_969446.1, ΖΡ_01129577.1, ΥΡ_001530285.1, ΖΡ_04746501.1, ΥΡ_001341980.1, ΥΡ_905003.1, ΖΡ_05218299.1, e ΖΡ_08665577.1.
[054] Em particular, ο álcool oxidase (Ec) pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em AAS46878.1, ACX81419.1, AAS46879.1, CAB75353.1, AAS46880.1, XP_712350.1, XP_002422236.1, XP_712386.1, EEQ43775.1, CAB75351.1, CAB75352.1, XP_002548766.1, e XP_002548765.1.
[055] Enzima Edi [056] Em particular, a álcool desidrogenase AlkJ (Edi), pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em: [057] Q00593.1, Q9WWW2.1, ZP_00957061.1, YP_957894.1, CAC38030.1, YP_694430.1, YP_957725.1, YP_001672216.1, YP_552061.1, YP_130410.1, ZP_06155535.1, ZP_01222730.1, YP_691907.1, YP_002297804.1, YP_004283522.1, YP_001234383.1, YP 004435031.1, ZP_05110316.1, ZP_05042898.1, YP_004466324.1, ZP_08553549.1, YP_004125220.1, ADI22536.1, ADI18461.1, YPJD03810975.1, YP_662346.1, YP 004427557.1, YP_692606.1, ZP_05043291.1, YP_440752.1, ZP 02386160.1, ZP_04763547.1, ZP_02361232.1, YP_003376674.1, ZP 02354055.1, ZP_05085930.1, ADQ00130.1, YP_003643016.1, ZP 05040520.1, YP_691922.1, AAX23098.1, BAD07371.1, NP_104379.1, YP_002551960.1, YP_003908558.1, YP_987903.1, ZP_05785860.1, YP_004145612.1, YP_004140926.1, CAZ88300.1, ZP_05041901.1, YP 533645.1, ZP_01754259.1, CBA31223.1, YP_587542.1, YP_106852.1, ZP 08402506.1, ZP_05055020.1, ZP_02400829.1, YPJ04747.1, ZP 02409412.1, YP_001057269.1, YP_004229837.1, YP_294429.1, ΥΡ_001028112.1, ZPJ32479747.1, ΥΡ_002874799.1, ΖΡ_03541051.1, ΥΡ_003606536.1, ΖΡ_02887167.1, ΥΡ_001795572.1, ΥΡ 487451.1, ACZ62814.1, ΥΡ_560809.1, ΖΡ_02167462.1, ΥΡ_004482869.1, ΥΡ_001581248.1, ΖΡ_07374066.1, ΥΡ_001203981.1, ΖΡ_06840259.1, ΖΡ_01915145.1, NPJ774525.1, ΖΡ_03561080.1, ΥΡ_001208258.1, YPJJ01897374.1, ΥΡ_001413909.1, ΥΡ_366469.1, ΥΡ_521854.1, ΥΡ 004490642.1, ΥΡ_003280349.1, ΖΡ_03588744.1, ΥΡ_001562229.1, ΥΡ_001120981.1, ΖΡ_03574970.1, ΥΡ_004234225.1, ΖΡ_02377531.1, ΖΡ_02149954.1, ΥΡ_001237360.1, ΖΡ_03266156.1, ΥΡ_782821.1, ΥΡ_004754039.1, ΒΑΒ61732.1, ΖΡ_07046388.1, ΖΡ_02145452.1, BAF45123.1, ΥΡ_002129953.1, ΥΡ_003812439.1, ΖΡ_01055291.1, BAF45124.1, EGH71399.1, ΖΡ_05060389.1, ΖΡ_05090872.1, BAF45126.1, ΒΑΒ07804.1, ΖΡ_06053464.1, ΥΡ_001238278.1, ΖΡ_04944469.1, ΥΡ_001171160.1, ΥΡ_002984373.1, ΥΡ_002237649.1, ΖΡ_08276443.1, BAF98451.1, ΖΡ_05124197.1, ΥΡ_568640.1, ΖΡ_05785341.1, ΝΡ_769037.1, ΥΡ_370657.1, ΥΡ_775005.1, ΖΡ_02911119.1, ΥΡ_165460.1, ΖΡ_02891796.1, ΥΡ 622328.1, ΖΡ_07675057.1, YPJ301901188.1, ΥΡ_003592183.1, ΖΡ_02361040.1, ΝΡ_518244.1, ΥΡ_001809673.1, ΝΡ_947032.1, ΥΡ_001766369.1, ΥΡ_002255997.1, ΖΡ_04940241.1, ΥΡ_004012032.1, ΥΡ 841049.1, ΥΡ_002983249.1, ΥΡ_003643276.1, ΥΡ_003855487.1, ΥΡ_003778137.1, ΖΡ_02361104.1, CBA30511.1, ΖΡ_05781295.1, ΥΡ_756865.1, ΖΡ_02461782.1, ΥΡ_002007988.1, YPJXM110133.1, ΥΡ_002229680.1, ΖΡ_02386040.1, ΥΡ_004684069.1, YPJ373268.1, ΥΡ 440614.1, ΝΡ_421441.1, ΥΡ_264896.1, ΥΡ_004362617.1, ΖΡ 06053847.1, YPJ366538.1, ΥΡ_003812285.1, ΥΡ_004154520.1, ΖΡ_01901081.1, ΖΡ 02372179.1, ΖΡ_02453559.1, ADP98564.1, ΥΡ_003747084.1, ΖΡ_02487888.1, ΖΡ_01768075.1, ΖΡ_02400664.1, ΥΡ_106680.1, ΥΡ 724753.1, ΥΡ_002907583.1, ΥΡ_004482470.1, ΥΡ_167582.1, ΥΡ_270109.1, ΥΡ_004362333.1, ΖΡ_02504034.1, ΥΡ_003189363.1, ΥΡ_973212.1, ΖΡ_00952746.1, ΥΡ_459665.1, ΥΡ 777218.1, ΥΡ_581107.1, ΖΡ_01878091.1, ΖΡ_01057973.1, ΥΡ_002913124.1, ΖΡ_01035570.1, ΥΡ_001777560.1, ΥΡ_552627.1, ΖΡ 02890876.1, ΥΡ_587146.1, ΥΡ_004141814.1, ΥΡ_001685369.1, ΖΡ 05343380.1, ΝΡ_886000.1, ΖΡ_04942359.1, ΖΡ_01913732.1, ΖΡ 08244266.1, YPJ302233254.1, ΖΡ_01816670.1, ΥΡ_837233.1, ΖΡ 07478008.1, ΖΡ_01985205.1, ΖΡ_07473972.1, ΖΡ_01067090.1, ΖΡ_01867788.1, ΖΡ_01754024.1, EGM19144.1, ΖΡ_07741283.1, ΖΡ_06876839.1, ΥΡ_002395287.1, ΖΡ_07795498.1, NPJ02692.1, ΝΡ 252789.1, YPJXM451100.1, ΖΡ_01305514.1, ΥΡ_002438481.1, ΖΡ 04930310.1, ΥΡ__001810189.1, ΥΡ 104187.1, ΖΡ_01367534.1, ΥΡ_001346382.1, ΖΡ_01878466.1, ΥΡ_789017.1, ΥΡ_001115422.1, ΖΡ_05067451.1, ΖΡ_05842072.1, ΥΡ_001682976.1, ΥΡ_761348.1, ΥΡ_004611600.1, ΥΡ_004188241.1, ΝΡ_419761.1, EFV85163.1, ΥΡ_684227.1, ΖΡ_06177455.1, ΝΡ_935088.1, YPJXM614491.1, ΖΡ 08697916.1, YPJXM689366.1, ΖΡ_05052326.1, ΥΡ_267420.1, ΥΡ_728575.1, ΥΡ_001759584.1, ΥΡ_557446.1, ΖΡ_06844897.1, ΖΡ 06079799.1, YPJ303771143.1, ΖΡ_05094472.1, ΥΡ_511622.1, ACF98205.1, ΥΡ_582314.1, ZPJ37660450.1, YPJX34065269.1, ΥΡ_003979606.1, ΥΡ_002520401.1, ΥΡ_003579281.1, ΖΡ_01749397.1, ΖΡ 03265018.1, ΖΡ_07283393.1, ΥΡ_001532150.1, ΥΡ_298941.1, ΖΡ 06688181.1, ΖΡ_01611660.1, ΖΡ_02367747.1, EGP42870.1, ΖΡ 00993245.1, ΑΒΥ65992.1, ΥΡ_354800.1, ZPJD1747277.1, ΥΡ_561728.1, ΖΡ_02190947.1, ΥΡ_605824.1, ΥΡ_001991873.1, ΖΡ_00955792.1, ΥΡ_003594401.1, YPJXM156101.1, ΥΡ_001472858.1, ΥΡ_001746950.1, ZPJD8410042.1, ΖΡ_01116604.1, ADP99912.1, ΖΡ_01692203.1, ΥΡ_001328534.1, ΥΡ_999236.1, YPJD02278452.1, ΖΡ_01306234.1, YPJ302871776.1, ΖΡ_02369920.1, ΖΡ_01896942.1, ΥΡ_002289724.1, AEG07584.1, ΥΡ_999005.1, ΥΡ_003552461.1, ΥΡ_270668.1, ZPJ36862917.1, ΥΡ_001811327.1, ΥΡ_001166036.1, ABW06653.1, ΖΡ_01548976.1, ΖΡ_07774606.1, ΖΡ_05888080.1, ΥΡ_003301477.1, ΥΡ_341748.1, ΖΡ_05100248.1, ΥΡ_918038.1, ΥΡ_001500869.1, YPJ304305296.1, ΥΡ_003342584.1, ΝΡ_947961.1, ΖΡ_05124765.1, ΖΡ_01904700.1, ΥΡ 003696207.1, ΥΡ_004156699.1, ΥΡ_001241858.1, ΝΡ_104253.1, ΥΡ_676241.1, ΖΡ_01736903.1, ΖΡ_00960121.1, ΝΡ_436019.1, ΥΡ 002945716.1, ΥΡ_259594.1, EFV86615.1, ΑΑΥ87334.1, ΝΡ_900970.1, AEG07409.1, ΥΡ_349087.1, ΥΡ_004141055.1, ΥΡ_001169476.1, ΥΡ_001566960.1, ΥΡ_260472.1, ΖΡ_07028078.1, ΥΡ_004610468.1, ΥΡ_003066461.1, ΥΡ_961096.1, ΖΡ_08666573.1, ΖΡ_02187363.1, ΥΡ__001631518.1, ΖΡ_08141293.1, ΥΡ_001666324.1, ΝΡ_387083.1, ΥΡ_001526184.1, ΥΡ_165213.1, ΥΡ_003694923.1, ΥΡ_004433897.1, ΥΡ_001265431.1, ΖΡ_05068964.1, ΥΡ_002313077.1, ΖΡ_02372305.1, ΥΡ 004486039.1, ΥΡ_341901.1, ΥΡ_001862312.1, ΥΡ_004681983.1, ΥΡ_617373.1, EFV86570.1, ΥΡ_001673285.1, ΒΑΚ39604.1, ΥΡ_001669327.1, ΥΡ 004353150.1, ΥΡ_001888124.1, ΖΡ_08645365.1, ΥΡ_003410784.1, ΥΡ_841363.1, EGP44033.1, ΥΡ_001633470.1, EGP42855.1, ΖΡ_01115125.1, ADR57794.1, ΥΡ_784649.1, ΥΡ_373898.1, Q47944.1, ΥΡ_001117950.1, ΖΡ 02380339.1, ΖΡ_03697092.1, ΥΡ_003187112.1, ΥΡ_004065439.1, ΝΡ 742226.1, ΥΡ_002429878.1, YPJ303556403.1, ΑΕΗ81535.1, ΥΡ_001887935.1, ΥΡ_554605.1, ΖΡ_07333059.1, ΥΡ_001991668.1, ΥΡ_003694210.1, ΥΡ_222680.1, ΥΡ_002232672.1, ΥΡ_001763402.1, ΥΡ_001806802.1, ΥΡ_662156.1, ΖΡ_05153429.1, ΖΡ_01893457.1, ΖΡ 04595387.1, ADP99389.1, ΖΡ_02890074.1, ΥΡ_001313582.1, ΝΡ 387401.1, ΖΡ_01863693.1, ΥΡ_750630.1, ΖΡ_04939997.1, ΥΡ_268077.1, ΖΡ_05169265.1, ΝΡ_888994.1, ΖΡ_08408421.1, ΥΡ_001155137.1, ΝΡ 699017.1, ΥΡ_002008190.1, ΥΡ_004493716.1, ΥΡ_266277.1, ΥΡ_004654190.1, ΥΡ_943422.1, ΖΡ_05162503.1, ΖΡ_02905080.1, ΖΡ 02905080.1, ΖΡ_03784461.1, ΥΡ_001601784.1, ΥΡ_002233786.1, ΥΡ 622842.1, ΥΡ_002822679.1, ZPJM944312.1, ΖΡ_05179897.1, ΥΡ 004483124.1, ΥΡ_003390414.1, ΥΡ_771968.1, ΥΡ_001628465.1, ΥΡ_004311599.1, ΖΡ_01037150.1, ΖΡ_01611812.1, ΖΡ_03575238.1, ΥΡ_002278603.1, ΥΡ_001593845.1, EGD01613.1, ΥΡ_297574.1, YPJ367509.1, ΥΡ_998315.1, ΖΡ_08664883.1, ΖΡ_05114787.1, ΖΡ 05450190.1, ΥΡ_298028.1, ΖΡ_01034678.1, ΥΡ_002827796.1, ΥΡ_372762.1, ΥΡ_004466723.1, ΖΡ_01012072.1, ΥΡ_320380.1, ΖΡ_01075202.1, ΥΡ_001312358.1, ΥΡ_681895.1, ΖΡ_07718189.1, EGP55868.1, ΥΡ_003750799.1, ΥΡ_002984725.1, ΥΡ_002543360.1, ΖΡ_01040714.1, ΖΡ_04717111.1, ΥΡ_002422932.1, ΥΡ_003506115.1, ΖΡ_01444019.1, ΖΡ_03587285.1, ΥΡ_771439.1, ΥΡ_001947593.1, ΥΡ_001049712.1, ΥΡ_003979888.1, ΥΡ_001553786.1, ΥΡ_003980878.1, ΥΡ_001578274.1, ΥΡ_472442.1, ΥΡ_778292.1, EGE56670.1, ΥΡ_002779312.1, ΥΡ_432169.1, ΥΡ_560963.1, ΥΡ_001265285.1, ΥΡ_002822699.1, ΥΡ_002278091.1, ΖΡ_08632361.1, ΥΡ_002229178.1, ΖΡ 06840392.1, ΖΡ_05069105.1, ΖΡ_00998644.1, ΥΡ_004487901.1, ΥΡ_680905.1, ΥΡ 728088.1, ΥΡ_001985833.1, ΥΡ_002007099.1, ΖΡ 05066777.1, ΖΡ_01551182.1, ΥΡ_002973332.1, ΖΡ_04681414.1, ΖΡ 07675148.1, ΑΕΗ83964.1, ΥΡ_004692042.1, CBJ36337.1, EGP48473.1, ΖΡ 03585612.1, ΥΡ_001369428.1, ΥΡ_001897527.1, AEG08472.1, ΥΡ_001166065.1, ΝΡ_437018.1, ΝΡ_294689.1, ΥΡ_002541437.1, ΥΡ_004692953.1, ΝΡ_107484.1, ΥΡ_995681.1, ΥΡ_765267.1, ΥΡ_166223.1, ΖΡ_01740635.1, ΥΡ_001234127.1, ΖΡ_02186681.1, ΥΡ_004140839.1, ΥΡ_001584499.1, ADI17244.1, ΖΡ_08698744.1, ΥΡ_001022991.1, EFV84582.1, ΖΡ_01743515.1, ΥΡ_001816113.1, ΥΡ_004688050.1, ΥΡ_001342912.1, ΖΡ_01125614.1, EGD05029.1, ΖΡ_03569823.1, ΖΡ 05089337.1, ΥΡ_001901091.1, ΝΡ_886663.1, ΖΡ_07718907.1, ΥΡ_004687387.1, ΝΡ_521464.1, ΖΡ_06688394.1, ΖΡ_08099738.1, ΖΡ 02885452.1, ΥΡ_003744085.1, YPJD01328823.1, ΖΡ_02488044.1, ΖΡ_01015005.1, ΥΡ_002983153.1, ΖΡ_06898725.1, ΖΡ_05886707.1, ΖΡ_08101209.1, ΖΡ_03319462.1, ΥΡ_003134969.1, YPJ301188857.1, ΥΡ_004557767.1, ΥΡ_004675666.1, ΥΡ_004358728.1, ΥΡ_002252541.1, ΥΡ 684009.1, ΖΡ 05085667.1, ΖΡ_02144674.1, ΥΡ_004127560.1, ΖΡ_01901604.1, ΥΡ_004280074.1, AEG67402.1, ΥΡ_001416516.1, ΖΡ_01054720.1, ΖΡ_08197897.1, ΝΡ_107235.1, YPJ302909966.1, ΖΡ_01545876.1, ΖΡ_02147729.1, ΖΡ_00946537.1, ΖΡ_01903844.1, ΖΡ 05085589.1, ACV84069.1, ΥΡ_367172.1, ΖΡ_02165272.1, ΥΡ_701696.1, ΖΡ 04935724.1, ΖΡ_02191362.1, ΖΡ_01740154.1, ΖΡ_07662819.1, ΝΡ_103908.1, ΥΡ_003159313.1, ΥΡ_003197010.1, ΖΡ_02152342.1, ΥΡ_001907189.1, ΥΡ_004387414.1, ΥΡ_001413869.1, ΖΡ_01916549.1, ΖΡ_03264661.1, ΑΑΥ82840.1, ΥΡ_003277969.1, ΥΡ_767433.1, ΖΡ_01226234.1, EGE55950.1, ΝΡ_882474.1, ΖΡ_04680938.1, ΥΡ 004417965.1, ΖΡ_01367142.1, EGM13684.1, ΥΡ_001262083.1, ΖΡ_01881606.1, ΖΡ_01002680.1, ΥΡ_003606679.1, ΥΡ_001868359.1, ΖΡ_01446736.1, ΥΡ_004141411.1, ΥΡ_002438878.1, ΥΡ_002500414.1, EGP55675.1, ΖΡ_08405873.1, ΥΡ_002975318.1, ΥΡ_002823637.1, ΖΡ_02188786.1, ΥΡ_004617386.1, ABL61001.1, ΥΡ_004190679.1, ΥΡ 004418710.1, ΥΡ_001264994.1, ΝΡ_252399.1, ACA21517.1, ΥΡ_002541208.1, ΥΡ_001369943.1, ΥΡ_789454.1, ΥΡ_004688060.1, ΥΡ_611623.1, ΖΡ 07795086.1, ΖΡ_04929943.1, ΥΡ 004444316.1, ΖΡ_01866687.1, ΖΡ_05973466.1, ΥΡ_004353327.1, ZPJ35780591.1, ΖΡ 05784784.1, ΝΡ_936564.1, ΖΡ_05739211.1, ΖΡ_05113045.1, ΖΡ 06689273.1, ΖΡ_06972168.1, ΖΡ_01616404.1, ΖΡ_07659253.1, ΖΡ_05117914.1, ΥΡ_585662.1, ΥΡ_004230016.1, ΝΡ_763554.1, ΝΡ 744101.1, ΖΡ 02465308.1, ACN56476.1, ΥΡ_004689565.1, ΥΡ_001600608.1, ΖΡ_06792595.1, ΥΡ_001258553.1, ΖΡ_05165722.1, ΖΡ 03785098.1, ΥΡ_002276744.1, YPJ302524856.1, ADP98420.1, ΥΡ_001669248.1, ΖΡ_04764988.1, ΖΡ_08528163.1, ΖΡ_08529409.1, ΖΡ 05944625.1, ΥΡ_676267.1, CBA26630.1, ΥΡ_001592413.1, ΥΡ_003486465.1, ΖΡ_02187562.1, ΖΡ_03702891.1, ΥΡ_760283.1, ΖΡ 05450850.1, ΥΡ_004533595.1, ΖΡ_02153313.1, YPJ301859265.1, ΥΡ_001524099.1, ΖΡ_06126913.1, ΖΡ_07374926.1, ΖΡ_05050787.1, ΖΡ_01035411.1, Q8YFY2.2, ΥΡ_002280903.1, EGM21512.1, YP_004603010.1, ZPJ3508 8 581.1, ΥΡ_004302488.1, ΥΡ_004141219.1, ΝΡ 697569.1, ΥΡ_003908705.1, ΥΡ_915505.1, ΥΡ_001789228.1, ΥΡ_001042739.1, ΥΡ_133405.1, ΖΡ_05180516.1, ΖΡ_05174702.1, ΖΡ_01438051.1, ΖΡ_04590345.1, ΖΡ_08411937.1, ΝΡ_356519.2, ΖΡ 00964019.1, ΖΡ_00998343.1, ΖΡ_05181994.1, ΥΡ_004107969.1, ΖΡ_02168070.1, ΖΡ_01750865.1, ΥΡ_574504.1, ΥΡ_004579902.1, ΥΡ_104440.1, ΖΡ_05452167.1, ΖΡ_05342702.1, ΥΡ_001862883.1, ΥΡ_004538242.1, ΖΡ_07471513.1, ΖΡ_05169558.1, ΖΡ_00956995.1, ΖΡ 05096699.1, ΥΡ_004610916.1, ΖΡ_01218118.1, AAU95210.1, ΖΡ 02405087.1, ΖΡ_04890639.1, ΥΡ_352237.1, ΖΡ_02413594.1, ΖΡ_07474023.1, ΝΡ_541317.1, ΥΡ_001993222.1, ΖΡ_08199001.1, ΥΡ_471839.1, ΖΡ_02492080.1, ZPJM901176.1, ΖΡ_06915396.1, ΖΡ_07474845.1, ΖΡ_07477743.1, YPJXM152647.1, ΥΡ_004755056.1, ΖΡ 05086419.1, ΥΡ_004577547.1, ACD99850.1, ΥΡ_980426.1, ΖΡ 05457072.1, ΖΡ_05936041.1, ΝΡ_700124.1, ADT85599.1, ΥΡ_110012.1, ΖΡ 05076113.1, ΥΡ_001068288.1, ΖΡ_02457871.1, ΖΡ_01014169.1, EGE60620.1, YPJ301346810.1, ΥΡ_003408795.1, YPJ303769675.1, ΥΡ_001257876.1, EGH93583.1, ΖΡ_01442222.1, ΥΡ_331617.1, ΖΡ 05636703.1, ΥΡ_001594896.1, ΥΡ_002822967.1, ΥΡ_118823.1, ΖΡ_01878717.1, ΖΡ_07375284.1, ΥΡ_001371250.1, ΖΡ_07658682.1, ΥΡ_002898825.1, ΖΡ_01547199.1, ΥΡ_223070.1, ΖΡ_05161482.1, ΖΡ_04679742.1, ΥΡ_002778618.1, ΖΡ_01626756.1, ΖΡ_05101564.1, ΥΡ_002947374.1, ΝΡ_385053.1, ΥΡ_001328117.1, ΥΡ_004493948.1, ΥΡ_003339515.1, ΥΡ_004699488.1, ΖΡ_05101969.1, ΥΡ_485352.1, ΖΡ_01746033.1, ΖΡ_06712293.1, ΖΡ_01158125.1, ΖΡ_01058616.1, ΖΡ_05739755.1, ΝΡ_949067.1, ΖΡ_02364657.1, ΥΡ_570690.1, ΥΡ_001208663.1, ΖΡ_02357557.1, ΖΡ_04751682.1, ΥΡ_001326253.1, ΥΡ 487666.1, ΖΡ_05167919.1, ADI18237.1, ΥΡ_002825245.1, ΖΡ_02144858.1, ΖΡ_02188790.1, ΖΡ_06794586.1, ΥΡ_001809828.1, ΥΡ_997974.1, ΥΡ_001476791.1, ΖΡ_08635286.1, ΥΡ_676287.1, ΖΡ 07308228.1, ΖΡ_04596242.1, ΥΡ_001622726.1, ΝΡ_699590.1, ΖΡ_01446884.1, ΥΡ_001168504.1, ΖΡ_01616388.1, ΖΡ_05117189.1, ΖΡ 05876432.1, ADT64694.1, ΖΡ_01754911.1, ΖΡ_05880498.1, ΖΡ 02360829.1, ΖΡ_06052433.1, ΖΡ_08663540.1, ΥΡ_003768966.1, ΖΡ_02165422.1, ΖΡ_00960985.1, ΖΡ_07026655.1, ΥΡ_001753039.1, ΥΡ 371288.1, ΥΡ_002974725.1, YPJ776880.1, ZPJ55784963.1, ΖΡ_05124380.1, ΥΡ_459030.1, ΖΡ_05090690.1, ΖΡ_05064893.1, ΖΡ_02367982.1, ΖΡ_01890564.1, ΝΡ_541848.1, ΖΡ_00960263.1, ΖΡ__02961617.1, ΥΡ 001242097.1, e ΖΡ_05838258.1, [058] Em particular Edi pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em Q00593.1, Q9WWW2.1, ZP_00957061.1, YP_957894.1, CAC38030.1, YP 694430.1, YP_957725.1, e YP_001672216.1.
[059] Enzima Edii [060] O álcool desidrogenase (Edü) pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em AdhE, AdhP, YjgB, YqhD, GldA, EutG, YiaY, AdhE, AdhP, YhhX, YahK, HdhA, HisD, SerA, Tdh, Ugd, Udg, Gmd, YefA, YbiC, YdfG, YeaU, TtuC, YeiQ, YgbJ, YgcU, YgcT, YgcV, YggP, YgjR, Ylil, YqiB, YzzH, LdhA, GapA, Epd, Dld, GatD, Gcd, GlpA, GlpB, GlpC, GlpD, GpsA e YphC da bactéria, em particular E. coli.
[061] Enzima E3 [062] Enzima E3 pode ter a capacidade para converter pelo menos um 1-alcanal no ácido alcanoico correspondente. Em particular, E3 pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilase P450 (Ea) de EC 1.14.15.3-, alcano hidroxilase AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3, álcool oxidase bifuncional (Ec) de EC 1.1.3.20, álcool desidrogenase AlkJ bifuncional (Edi) ou álcool desidrogenase bifuncional (Edii) de EC 1.1.1.1 ou EC 1.1.1.2, com a capacidade para oxidar um 1-alcanol por meio de um 1-alcanal diretamente para 0 ácido alcanoico correspondente e aldeído desidrogenase (Ee).
[063] Enzima Ee [064] A Enzima Ee, um aldeído desidrogenase, pode ter a capacidade para catalisar a conversão de ácido oxoalcanoico ω (éster) = ácido carboalcanoico ω (éster).
[065] A fim de catalisar a reação acima, Ee pode ser um aldeído desidrogenase de EC 1.2.1.3, EC 1.2.1.4 ou EC 1.2.1.5, um álcool oxidase graxo de EC 1.1.3.20, álcool desidrogenase AlkJ de EC 1.1.99.- e álcool desidrogenase de EC 1.1.1.1 ou EC 1.1.1.2 [066] Em um exemplo, Ee pode ter a capacidade para, especificamente, catalisar a seguinte reação: ácido oxoalcanoico ω (éster) + NAD(P)+ = ácido carboalcanoico ω (éster) + NAD(P)H + H+ [067] Nesse caso, a enzima Ee pode ser um aldeído desidrogenase de EC 1.2.1.3, EC 1.2.1.4 ou EC 1.2.1.5, e pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em Prr, Usg, MhpF, AstD, GdhA, FrmA, Feab, Asd, Sad, PuuE, GabT, YgaW, BetB, PutA, PuuC, FeaB, AldA, Prr, EutA, GabD, AldB, TynA e Ynel da bactéria, em particular, E. coli.
[068] Em outro exemplo, enzima Ee pode ter a capacidade para catalisar a seguinte reação: ácido oxoalcanoico ω (éster) + O2 = ácido carboalcanoico ω (éster) + FI2O2 [069] Nesse caso, Ee pode ser a álcool oxidase graxo de EC 1.1.3.20 e pode ser selecionada a partir da lista conforme fornecido cp,p a enzima Ec acima.
[070] Em outro exemplo, Ee pode ser pelo menos um álcool desidrogenase AlkJ de EC 1.1.99 e pode ser selecionada a partir da lista fornecida acima como Edi.
[071] Em um exemplo adicional, Ee pode ser um álcool desidrogenase de EC 1.1.1.1 ou EC 1.1.1.2 selecionado a partir da lista fornecida como enzima Edil· [072] Enzima E4 [073] Enzima E4 pode ter a capacidade para converter pelo menos um ácido alcanoico no éster de ácido alcanoico correspondente. Em particular, E4 pode ser pelo menos uma sintase de éster de cera, também conhecida como um álcool O-acil transferase (EC 2.3.1.20, EC 2.3.1.75) (Ef), ou um álcool O-acetil transferase (Eg) (EC 2.3.1.20, EC 2.3.1.75 ou EC 2.3.1.84).
[074] Em um exemplo, E4 pode ser pelo menos uma sintase de éster de cera (Ef). Mais particularmente, E4 pode compreender identidade de sequência de pelo menos 50 % para a Acinetobacter calcoaceticus ADP1, ou O-acetiltransferase de Hahella chejuensis. Ainda mais particularmente, E4 pode compreender identidade de sequência de pelo menos 50 % para o polipeptídeo YPJM5555.1, WP_011398768.1 ou NP_808414.2. Mais particularmente, E4 pode compreender um polipeptídeo com identidade de sequência de pelo menos 50, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 94, 95, 98 ou 100 % para um polipeptídeo selecionado a partir do grupo que consiste em polipeptídeo YPJM5555.1, WP_011398768.1 e NP_808414.2. Em um exemplo, E4 pode compreender um polipeptídeo com identidade de sequência de pelo menos 50, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91,94, 95, 98 ou 100 % para SEQ ID NO: 2.
[075] Enzima Ef [076] Em particular, a Enzima Ef, pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em: [077] WP_011398768.1, NP_808414.2, NP_001178653.1, XP_003272721.1, XP_002720111.1, NP_001002254.1, XP_529027.1, XP_002831804.1, BAC28882.1, XP_549056.2, XP_002918053.1, XP_001085075.1, XP_002763005.1, XP_002700092.1, XP_599558.4, EDL95940.1, XP_001496780.1, CAD89267.1, EFB28125.1, YPJXM747160.1, YP_004746900.1, YPJXM746665.1, YPJXM746558.1, YPJXM746531.1, YP_004746530.1, YPJ304745948.1, YPJ304745222.1, YP_004744358.1, YP_004743710.1, YP_002492297.1, AEK40846.1, YP_001847685.1, YP_001712672.1, YP_001706290.1, YP_004724737.1, YP_004723134.1, AEJ51098.1, AEJ48174.1, AEJ47480.1, YP_004392630.1, YP_004099725.1, YP_003912033.1, YP_003652731.1, YP_003301387.1, YP_003298139.1, YP_001509672.1, YP_001505948.1, YP_001432486.1, YP_001432432.1, ΥΡ 924893.1, ΥΡ_923981.1, ΥΡ_922869.1, ΥΡ_922597.1, ΥΡ_922419.1, ΖΡ 08629145.1, ΖΡ_08628906.1, ΥΡ_001380027.1, ΥΡ_001280731.1, ΥΡ_001280730.1, ΥΡ_888966.1, ΥΡ_890540.1, ΥΡ_888236.1, ΥΡ_888223.1, ΥΡ 888574.1, ΥΡ_884705.1, ΥΡ_889488.1, ΥΡ_886248.1, ΥΡ_882534.1, ΥΡ 881069.1, ΥΡ 881444.1, ΥΡ_883472.1, ΥΡ_879642.1, ΥΡ_884073.1, ΥΡ_880917.1, ΥΡ 882201.1, ΥΡ_879422.1, ΥΡ_707862.1, ΥΡ_707847.1, ΥΡ_707633.1, ΥΡ_707572.1, ΥΡ_707571.1, ΥΡ_706785.1, ΥΡ_706267.1, ΥΡ_705586.1, ΥΡ_705294.1, ΥΡ_702929.1, ΥΡ_701572.1, ΥΡ_700576.1, ΥΡ_700081.1, ΥΡ_700033.1, YPJ700018.1, ΥΡ_700017.1, ΥΡ_699999.1, CCB78299.1, CCB78283.1, CCB72233.1, ΥΡ_004663601.1, ΥΡ_004525283.1, ΥΡ_004524901.1, ΥΡ_004524237.1, ΥΡ_004524223.1, ΥΡ_004523752.1, ΥΡ_004522677.1, ΥΡ_004521797.1, ΥΡ_004521441.1, YPJXM020500.1, ΥΡ_004014348.1, EGO40684.1, EG038684.1, EG038655.1, EG037244.1, EGO36970.1, EGO36701.1, ΥΡ_003951335.1, ΥΡ_003812176.1, ΥΡ_003811992.1, ΥΡ_003810691.1, ΥΡ_003810418.1, ΥΡ_003809501.1, ΖΡ 08574204.1, CCA19760.1, ΧΡ_002900672.1, ΖΡ_06414567.1, ΖΡ_06413635.1, ΖΡ_06411773.1, ΖΡ_06411772.1, ΖΡ_06271823.1, ΖΡ 05620754.1, ΖΡ_05360001.1, ΖΡ_04752019.1, ΖΡ_04751943.1, ΖΡ 04750965.1, ΖΡ_04750465.1, ΖΡ_04750453.1, ΖΡ_04750228.1, ΖΡ 04750091.1, ΖΡ_04749363.1, ΖΡ_04749348.1, ΖΡ_04749293.1, ΖΡ_04749287.1, ΖΡ_04749022.1, ΖΡ_04748677.1, ΖΡ_04747379.1, ΖΡ_04747377.1, ΖΡ_04747348.1, ΖΡ_04747282.1, ΖΡ_04747159.1, ΖΡ 04747093.1, ΖΡ_04746958.1, ΖΡ_04717323.1, ΖΡ_04684258.1, ΖΡ 04386203.1, ZPJM385082.1, ΖΡ_04384030.1, ΖΡ_04384029.1, ΖΡ 03534755.1, ΖΡ_01115502.1, ΖΡ_01102322.1, ΥΡ_004583872.1, ΥΡ_004583323.1, ΥΡ_004573656.1, ΥΡ_004571392.1, ΥΡ_003513699.1, ΖΡ 08553011.1, ΖΡ_08552672.1, ΥΡ_003467054.1, YPJ303572597.1, ΥΡ 579515.1, ΥΡ_001136465.1, ΥΡ_001136231.1, ΥΡ_001135959.1, ΥΡ_001135349.1, ΥΡ_001133828.1, ΥΡ_001133806.1, ΥΡ_001133693.1, ΥΡ_001133270.1, ΥΡ_001132329.1, ΥΡ_001131721.1, ΥΡ_001131631.1, ΥΡ_001073715.1, ΥΡ_001073143.1, ΥΡ_001072388.1, ΥΡ_001072036.1, ΥΡ_001071893.1, ΥΡ__001071814.1, ΥΡ_001071689.1, ΥΡ_001070856.1, ΥΡ_001069682.1, ΥΡ_001069164.1, ΥΡ_001068496.1, ΥΡ_939377.1, ΥΡ 642242.1, ΥΡ_641664.1, ΥΡ_641419.1, ΥΡ_640919.1, ΥΡ_640783.1, ΥΡ 640704.1, ΥΡ 640572.1, ΥΡ_640571.1, ΥΡ_640494.1, ΥΡ_639709.1, ΥΡ_639198.1, ΥΡ_638523.1, ΥΡ_638030.1, ΥΡ_637968.1, ΥΡ_637380.1, ΥΡ 446603.1, ΝΡ_001185377.1, ΝΡ_200151.2, ΝΡ_568547.1, ΝΡ_197641.1, ΝΡ_200150.1, ΝΡ_197139.1, ΝΡ_190490.1, ΝΡ_190488.1, ΝΡ_177356.1, ΥΡ 004495408.1, ΥΡ_004495023.1, ΥΡ_004494197.1, ΥΡ 004494168.1, ΥΡ 004493973.1, ΥΡ_004493936.1, ΥΡ 004493628.1, ΥΡ 004493589.1, ΥΡ 004493509.1, ΥΡ 004493477.1, ΥΡ_004493462.1, ΥΡ 004492352.1, ΥΡ 004492155.1, ΥΡ 004492039.1, ΥΡ 004491716.1, ΥΡ 004491715.1, ΥΡ 004491501.1, ΥΡ_003375642.1, ΥΡ_003411203.1, ΥΡ_003410436.1, ΥΡ 003395271.1, ΥΡ_003395089.1, ΥΡ_003393635.1, ΥΡ_003384208.1, ΥΡ_003379551.1, ZPJM388235.1, ΥΡ_002134168.1, ΖΡ_01900421.1, ΖΡ_01900085.1, ΖΡ_01899829.1, ΖΡ_01898741.1, ΒΑΚ05274.1, BAJ93623.1, BAJ97841.1, ΒΑΚ08349.1, BAJ93204.1, BAJ92722.1, ΒΑΚ06983.1, BAJ86545.1, ΒΑΚ02325.1, BAJ85619.1, BAJ84892.1, ΖΡ_05218281.1, ΖΡ 05218149.1, ΖΡ_05217310.1, ΖΡ_05216978.1, ΖΡ_05216447.1, ΖΡ_05216446.1, ΖΡ_05216025.1, ΖΡ_05214687.1, ΖΡ_08476543.1, ΖΡ 04749239.1, ΥΡ_823060.1, ADP99639.1, ADP98951.1, ADP98855.1, ADP98710.1, ADP96265.1, ΖΡ_08461736.1, ZPJ38461735.1, ΖΡ_07608690.1, ΥΡ 045555.1, ΥΡ_872243.1, ΥΡ_004009106.1, ΥΡ_004008736.1, ΥΡ_004008003.1, ΥΡ_004007600.1, ΥΡ_004006799.1, YPJXM006436.1, ΥΡ_004006072.1, ΥΡ_004005008.1, YPJD03486913.1, ΝΡ_301898.1, ΖΡ_08434757.1, ΥΡ_004079491.1, YPJD04078785.1, ΥΡ_004077880.1, YPJ304076486.1, ΥΡ_004076464.1, ΥΡ_004076350.1, ΥΡ_004075391.1, ΥΡ_004074864.1, ΖΡ_01103855.1, ΥΡ_465274.1, ΖΡ_08403393.1, ΖΡ 08402717.1, ΖΡ_08402716.1, ΥΡ 004427559.1, ΥΡ_001277083.1, ΥΡ_001276783.1, ΥΡ_524767.1, ΥΡ_522739.1, ΥΡ_521788.1, ΥΡ_004335162.1, ΥΡ_004333708.1, ΥΡ_004332973.1, ΥΡ_004332349.1, ΥΡ_004157731.1, ΥΡ_004224204.1, ΥΡ_003275673.1, ΥΡ_003275371.1, ΥΡ 003274979.1, ΥΡ_003274924.1, ΥΡ_003274705.1, ΥΡ_956544.1, ΥΡ 955502.1, ΥΡ_955007.1, ΥΡ_954887.1, ΥΡ_954886.1, ΥΡ_954859.1, ΥΡ_954399.1, ΥΡ_953715.1, ΥΡ_953073.1, ΥΡ_952592.1, ΥΡ_951909.1, ΥΡ_951298.1, ΥΡ_951083.1, ΖΡ_08287899.1, ΖΡ_08272356.1, ΖΡ_08270967.1, CCA60099.1, CCA56737.1, ΥΡ_983728.1, ΥΡ_550833.1, ΥΡ_549124.1, ΥΡ_121795.1, ΥΡ_120815.1, ΥΡ_118589.1, ΥΡ_117783.1, ΥΡ_117375.1, ΥΡ_003646883.1, ΥΡ_003646055.1, ΥΡ_003645661.1, EGE49469.1, ΖΡ_08234310.1, CBZ53121.1, ΥΡ_004010866.1, EGE24961.1, EGE18726.1, EGE15701.1, EGE12950.1, EGE10026.1, EGB03968.1, ΖΡ_08206563.1, ΖΡ_08205089.1, ΖΡ_08204958.1, ΖΡ_08204416.1, ΖΡ 08203326.1, ΥΡ_714381.1, ΥΡ_713817.1, ΥΡ_694462.1, ΥΡ_693524.1, YPJJ03341775.1, ΥΡ_003339587.1, ΖΡ_08197177.1, ADW01905.1, ΥΡ_004242683.1, ΖΡ_07484742.2, ΖΡ_07441979.2, ΖΡ_07441978.2, ΖΡ 07437333.2, ΖΡ_06960424.1, ΖΡ_06801236.1, ΖΡ_06799517.1, ΖΡ 05769718.1, ZPJ35768326.1, ΖΡ_05767970.1, ΖΡ_05766272.1, ΖΡ 05763839.1, ΥΡ_003204265.1, YPJ303203570.1, ΥΡ_003200768.1, ΥΡ_003134884.1, ΥΡ_003134608.1, ΖΡ_05140320.1, ΝΡ_001140997.1, ΕΕΕ64643.1, ΕΕΕ55448.1, ΕΕΕ32548.1, ΖΡ_03534756.1, ΖΡ_03533653.1, ΖΡ_03531929.1, EEC71274.1, ΕΑΥ98969.1, ΕΑΥ75974.1, ΕΑΥ75973.1, ADZ24988.1, ZPJD8157247.1, ZPJD8156660.1, ΖΡ_08156249.1, ΖΡ_08153292.1, ΖΡ_08152876.1, ΖΡ_08152662.1, ΥΡ_002946672.1, ΥΡ_960669.1, ΥΡ_960629.1, ΥΡ_960328.1, ΥΡ_958134.1, ΥΡ_957462.1, ΥΡ_001022272.1, ΖΡ_08123690.1, ZPJ38120547.1, ΖΡ_08119498.1, EGB29195.1, EGB27143.1, ΥΡ_003770089.1, ΥΡ_003769971.1, ΥΡ_003764703.1, ΥΡ_003764513.1, ΥΡ_003103950.1, ΥΡ_003168536.1, ΥΡ_003168331.1, ΥΡ_003166844.1, CAJ88696.1, ΝΡ_769520.1, ΥΡ_001141853.1, ΥΡ_001108534.1, YPJD01106516.1, ΥΡ_907824.1, ΥΡ_907344.1, ΥΡ_906945.1, ΥΡ_906856.1, ΥΡ_906855.1, ΥΡ_906831.1, ΥΡ_906494.1, ΥΡ_906243.1, ΥΡ_905962.1, ΥΡ_905765.1, ΥΡ_905343.1, ΥΡ_905239.1, ΥΡ_325796.1, ΥΡ_130413.1, ΝΡ_625255.1, ΝΡ_624462.1, ΝΡ 338129.1, ΝΡ_338004.1, ΝΡ_337859.1, ΝΡ_337740.1, ΝΡ_337694.1, ΝΡ 336266.1, ΝΡ_335919.1, ΝΡ_335351.1, ΝΡ_334638.1, ΝΡ_218257.1, ΝΡ_218251.1, ΝΡ_217997.1, ΝΡ_217888.1, ΝΡ_217751.1, ΝΡ_217750.1, ΝΡ_217646.1, ΝΡ_217604.1, ΝΡ_217603.1, ΝΡ_217000.1, ΝΡ_216801.1, ΝΡ_216276.1, ΝΡ_215941.1, ΝΡ_215410.1, ΝΡ_214735.1, ΖΡ_04661667.1, EFW44815.1, EFW44455.1, ΖΡ_08024634.1, ΖΡ_08024620.1, ΖΡ 08023777.1, ΖΡ_08023597.1, ΥΡ_002784032.1, ΥΡ_002783585.1, ΥΡ_002782904.1, ΥΡ_002782647.1, ΥΡ_002780099.1, ΥΡ_002779887.1, ΥΡ_002778497.1, ΥΡ_002777657.1, ΥΡ_002777402.1, ΖΡ_07966321.1, ΖΡ_07944768.1, CBI21867.3, CBI40547.3, CBI40544.3, CBI40540.3, CBI40536.3, CBI40534.3, CBI40533.3, CBI32385.3, ΖΡ_05765756.1, ΖΡ 05765643.1, ΖΡ_05765597.1, ΖΡ_05765596.1, ΥΡ_001705267.1, ΥΡ_001704692.1, ΥΡ_001704281.1, ΥΡ_001702654.1, ΥΡ_001701260.1, ΖΡ_05770434.1, ΖΡ_05766274.1, ΖΡ_05762133.1, ΖΡ_05762130.1, ΖΡ_01101223.1, ΥΡ_481580.1, ΥΡ_979623.1, ΥΡ_979196.1, ΖΡ_07414300.2, ΖΡ 03537340.1, ΖΡ_03537339.1, ZPJ33536772.1, ΖΡ_03536404.1, ΖΡ 03433478.1, ΖΡ_03430367.1, ΖΡ_03430260.1, ΖΡ_03429345.1, ΖΡ 03428583.1, ΖΡ_03426905.1, ΖΡ_03426458.1, ΖΡ_03426456.1, ΖΡ 03426455.1, ΖΡ_03425014.1, ΖΡ_03424082.1, ΖΡ_03421649.1, ΖΡ_03419291.1, ΖΡ_03418394.1, ΖΡ_03417976.1, ΖΡ_03414875.1, ΖΡ 06952098.1, ZPJ35528769.1, ΖΡ_05527907.1, ΖΡ_05227984.1, ΖΡ 05227897.1, ΖΡ_05227653.1, 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YPJ301851684.1, ΥΡ_001851611.1, ΥΡ_001851610.1, ΥΡ_001851579.1, ΥΡ_001850950.1, ΥΡ_001850935.1, ΥΡ_001850900.1, ΥΡ_001850899.1, ΥΡ_001850378.1, ΥΡ_001849911.1, ΥΡ_001849825.1, ΥΡ_001849624.1, ΥΡ_001849470.1, ΥΡ_001848848.1, ΥΡ_001848784.1, ΥΡ_001822237.1, ΥΡ_001289190.1, ΥΡ_001289078.1, ΥΡ_001288434.1, ΥΡ_001287727.1, ΥΡ_001286168.1, ΥΡ_001085790.1, ΥΡ_856793.1, ΥΡ_629387.1, ΥΡ 615587.1, ΥΡ_615252.1, ΥΡ_457389.1, ΥΡ_263530.1, ΝΡ_962591.1, ΝΡ 962411.1, ΝΡ_962281.1, ΝΡ_961234.1, ΝΡ_960903.1, ΝΡ_960387.1, ΝΡ 960090.1, ΝΡ 959281.1, ΝΡ_959065.1, ΝΡ_857403.1, ΝΡ_857149.1, ΝΡ 857148.1, ΝΡ_857047.1, ΝΡ_856907.1, ΝΡ_856759.1, ΝΡ_856156.1, ΝΡ_855443.1, ΝΡ_855112.1, ΝΡ_853892.1, ΝΡ_828432.1, ΝΡ_603766.1, ΧΡ_003081224.1, ΥΡ_003778608.1, ΥΡ_003730939.1, ΧΡ_003059244.1, ADI13131.1, ΧΡ 002992800.1, ΧΡ_002963877.1, ΧΡ_001419779.1, ΧΡ_002988280.1, ΧΡ_002987493.1, CBH32551.1, CBH32550.1, CBH19575.1, CBH 19574.1, ΥΡ_003627553.1, ΧΡ_002879777.1, ΧΡ_002877657.1, ΧΡ_002877655.1, ΧΡ_002873570.1, ΧΡ_002871716.1, ΧΡ_002870738.1, ΧΡ_002868506.1, ΧΡ_002865972.1, ΧΡ_002864239.1, ΧΡ_002862308.1, ΖΡ 05823139.1, ΝΡ_001043877.1, ΖΡ_06693274.1, ΖΡ_06058985.1, ΝΡ_001044374.1, ΧΡ_002835451.1, ΧΡ_002787542.1, ΧΡ_002785958.1, ΧΡ_002785645.1, ΧΡ_002783220.1, ΧΡ_002774061.1, ΧΡ_002767852.1, ΧΡ_002766051.1, ΧΡ_002765456.1, ΧΡ_002765455.1, XPJ302677788.1, ΧΡ_002671612.1, XPJ302736281.1, CBA31373.1, ΧΡ_002184474.1, ΧΡ_002325936.1, ΧΡ_002323705.1, ΧΡ_002325937.1, ΧΡ_002323911.1, ΧΡ_002323706.1, ΧΡ_002328965.1, ΧΡ_002318416.1, ΧΡ_002310400.1, ACY38597.1, ACY38596.1, ACY38595.1, ACY38594.1, ACY38593.1, ACY38592.1, ACY38591.1, ACY38590.1, ACX81315.1, ACX81314.1, ΧΡ_001868729.1, ΧΡ_001847517.1, ΧΡ_001847515.1, ΧΡ_002502575.1, ACU20370.1, ACU 18073.1, ΧΡ_002523348.1, ΧΡ_002516707.1, ΧΡ_002429016.1, ΒΑΗ89673.1, ΧΡ_002440221.1, ΧΡ_002459294.1, ΧΡ 002458560.1, ΧΡ_320167.4, ΧΡ_001780431.1, ΧΡ_002364905.1, ΧΡ_002263196.1, ΧΡ_002263137.1, ΧΡ_002263409.1, ΧΡ_002263252.1, ΧΡ_002268615.1, ΧΡ_002278404.1, ΧΡ_002274522.1, ΧΡ_002282418.1, ΧΡ_001633379.1, ΧΡ_001632267.1, ΧΡ_001632004.1, ΧΡ_001622638.1, ΧΡ_002155609.1, ΧΡ_759225.1, ΧΡ_002152406.1, ΧΡ__001914129.1, ΧΡ_001738032.1, ΧΡ_001731626.1, ΧΡ_001209859.1, CAN79451.1, CAN78449.1, CAN72806.1, CAN71951.1, CAN71950.1, CAN76656.1, CAN62907.1, ΑΑΖ08051.1, ΑΒ021022.1, ΑΒ021021.1, ΑΒ021020.1, ABJ96321.1, BAF01088.1, ΧΡ_758106.1, BAC42871.1, ΒΑΒ09801.1 e ΒΑΒ09102.1.
[078] Em outro exemplo, a Enzima Ef, pode ser selecionada a partir do grupo que consiste nos seguintes identificadores de gene NCBI: [079] 6647910, 13882037, 13883719, 50084045, 83635736, 118163591, 118569740, 118570272, 119538589, 119959533, 126237252, 126567232, 126629771, 148572721, 148572722, 149823553, 149825234, 169147806, 196196001, 214037899, 219677786, 257447091, 262316603, 283813570, 301796553, 301796826, 311312714, 311696766, 325556018, 332970561, 333482117, 333482229, 333482837, 333484048, 334890574, 334890744, 353189260, 358244577, 359308666, 359732244, 359818908, 363993190, 365814880, 374845325, 377531673, 378802538, 384523048, 391857871, 391858262, 391861199, 396932954, 396935129, 399235093, 400203587, 407372801, 407812577, 432156225, 433296179, 442581482, 443888426, 444755700, 449424446, 464803513, 479864102, 479886236, 479966651, 480005669, 480024154, 480028610, 490485999, 498274456, 500625946, 515076064, 516264416, 516277644, 516906883, 516908681, 516909557, 516913828, 516945324, 517143888, 517432433, 517516200, 518350146, 518501601, 518568414, 518644062, 518944419, 518947555, 521014811, 521056034, 521076792, 521077398, 521090665, 521712969, 521812448, 521986522,522129827, 522136843, 522139413 e 522139737.
[080] Enzima Eg [081] Em particular, a Enzima Eg, pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em EGA72844.1, NP_015022.1, S69991, AAP72991.1, EDN63695.1, BAA05552.1, AAP72992.1, S69992, AAP72995.1, XP_002552712.1, XP_001646876.1, XP_002551954.1, EGA82692.1, EDN61766.1, EGA86689.1, EGA74966.1, AAU09735.1, NP_011693.1, ΧΡ 445666.1, ΒΑΑ13067.1, ΑΑΡ72993.1, EGA62172.1, XP_455762.1, e EGA58658.1.
[082] Enzima E5 [083] Enzima E5 pode ter a capacidade para converter pelo menos um éster de ácido alcanoico do éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico correspondente. Em particular, E5 pode ser qualquer enzima listada como E^ Em particular, E5 pode ser pelo menos uma alcano hidroxilase P450 (Ea) DE EC 1.14.15.3 ou alcano hidroxilase AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3.
[084] Enzima E6 [085] Enzima E6 pode ter a capacidade para converter pelo menos um éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico no éster de ácido ω-οχο alcanoico correspondente. Em particular, E6 pode ser qualquer enzima listada como E2. Em particular, E6 pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilase P450 (Ea) de EC 1.14.15.3-, alcano hidroxilase AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3, álcool oxidase (Ec) de EC 1.1.3.20 e álcool desidrogenase (Ed) de EC 1.1.1.1 ou EC 1.1.1.2.
[086] A frase “quando presente” usada em relação à Enzima E6, se refere às células que foram geneticamente modificadas para produzir éster de ácido ω-οχο alcanoico. As células, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, podem compreender uma expressão aumentada de Enzima E6 em relação à célula do tipo selvagem, desse modo, tendo a capacidade para produzir éster de ácido ω-οχο alcanoico. Em outro exemplo, as células, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, também podem compreender nenhuma expressão aumentada de Enzima E6 em relação à célula do tipo selvagem, desse modo, não tendo a capacidade para produzir éster de ácido ω-οχο alcanoico. Essas células podem, desse modo, produzir, principalmente, éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico. Portanto, quando a célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, compreender a expressão aumentada de Enzima E6 (isto é, quando estiver presente), então, o éster de ácido ω-οχο alcanoico pode ser produzido.
[087] Enzima E7 [088] Enzima E7 pode ter a capacidade para converter pelo menos um ácido ω-οχο alcanoico no éster de ácido ω-amino alcanoico correspondente. Em particular, E7 pode ser um ω-transaminase de EC 2.6.1 (Eh).
[089] Em particular, a Enzima E7, pode ser uma aminotransferase (Eh) selecionada a partir do grupo que consiste em Pseudomonas putida (WP_016502144; WP_016500675.1), Chromobacterium violaceum (NP_901695.1), Rhodobacter sphaeroides 2.4.1(YP_353455.1) e 3HMU_A, AAD41041.1, AAK15486.1, ABE03917.1, ADR60699.1, ADR61066.1, ADR62525.1, AEL07495.1, CAZ86955.1, EFW82310.1, EFW87681.1, EGC99983.1, EGD03176.1, EGE58369.1, EGH06681.1, EGH08331.1, EGH24301.1, EGH32343.1, EGH46412.1, EGH55033.1, EGH62152.1, EGH67339.1, EGH70821.1, EGH71404.1, EGH78772.1, EGH85312.1, EGH97105.1, EGP57596.1, NP_102850.1, NP _106560.1, NP_248912.1, NP 248990.1, NPJ354026.2, NP_421926.1, NP_637699.1, NP_642792.1, NP 744329.1, NP_744732,1, NP_747283.1, NP_795039.1, XP_002943905.1, YPJ301021095.1, YP_001059677.1, YP_001061726.1, YP_001066961.1, YP_001074671.1, YP_001120907.1, YP_001140117.1, YP_001170616.1, YP_001185848.1, YP_001188121.1, YP_001233688.1, YP_001268866.1, YP_001270391.1, YP_001345703.1, YP_001412573.1, YP_001417624.1, YP_001526058.1, YP_001579295.1, YP_001581170.1, YP_001668026.1, YP_001669478.1, YP_001671460.1, YP_001685569.1, YP_001747156.1, YP_001749732.1, YP_001765463.1, YP_001766294.1, YP_001790770.1, YP_001808775.1, YP_001809596.1, YP_001859758.1, YP_001888405.1, YP_001903233.1, YP_001977571.1, YP_002229759.1, YP_002231363.1, YP_002280472.1, YP_002297678.1, YP_002543874.1, YP_002549011.1, YP_002796201.1, YP_002801960.1, YP_002875335.1, YP_002897523.1, YP_002912290.1, YP_002974935.1, YP_003060891.1, YP_003264235.1, YP_003552364.1, YP_003578319.1, YP_003591946.1, YP_003607814.1, YP_003641922.1, YP_003674025.1, YP_003692877.1, YP_003755112.1, ΥΡ_003896973.1, ΥΡ_003907026.1, ΥΡ_003912421.1, ΥΡ_004086766.1, ΥΡ_004142571.1, ΥΡ_004147141.1, ΥΡ_004228105.1, ΥΡ_004278247.1, ΥΡ 004305252.1, ΥΡ_004356916.1, ΥΡ_004361407.1, ΥΡ_004378186.1, ΥΡ 004379856.1, ΥΡ_004390782.1, ΥΡ 004472442.1, ΥΡ_004590892.1, ΥΡ 004612414.1, ΥΡ_004676537.1, ΥΡ_004693233.1, ΥΡ_004701580.1, YPJJ04701637.1, ΥΡ_004704442.1, ΥΡ_108931.1, ΥΡ_110490.1, ΥΡ_168667.1, ΥΡ_237931.1, ΥΡ_260624.1, ΥΡ_262985.1, ΥΡ_271307.1, ΥΡ_276987.1, ΥΡ_334171.1, ΥΡ_337172.1, ΥΡ_350660.1, ΥΡ_351134.1, ΥΡ 364386.1, ΥΡ_366340.1, ΥΡ_369710.1, ΥΡ_370582.1, ΥΡ_426342.1, γρ 440141.1, ΥΡ 442361.1, ΥΡ_468848.1, ΥΡ_521636.1, ΥΡ_554363.1, ΥΡ_608454.1, ΥΡ_610700.1, ΥΡ_614980.1, ΥΡ_622254.1, ΥΡ_625753.1, ΥΡ_680590.1, ΥΡ_751687.1, ΥΡ_767071.1, ΥΡ_774090.1, ΥΡ_774932.1, ΥΡ_788372.1, ΥΡ_858562.1, ΥΡ_928515.1, ΥΡ_983084.1, ΥΡ_995622.1, ΖΡ 00948889.1, ZPJ30954344.1, ΖΡ_00959736.1, ΖΡ_00998881.1, ΖΡ_01011725.1, ΖΡ_01037109.1, ΖΡ_01058030.1, ΖΡ_01076707.1, ΖΡ_01103959.1, ΖΡ_01167926.1, ΖΡ_01224713.1, ΖΡ_01442907.1, ΖΡ 01446892.1, ΖΡ_01550953.1, ΖΡ_01625518.1, ΖΡ_01745731.1, ΖΡ_01750280.1, ΖΡ_01754305.1, ΖΡ_01763880.1, ΖΡ_01769626.1, ΖΡ_01865961.1, ΖΡ_01881393.1, ΖΡ_01901558.1, ΖΡ_02145337.1, ΖΡ_02151268.1, ΖΡ_02152332.1, ΖΡ_02167267.1, ΖΡ_02190082.1, ΖΡ 02242934.1, ΖΡ_02360937.1, ΖΡ_02367056.1, ΖΡ_02385477.1, ΖΡ 02456487.1, ΖΡ_02883670.1, ΖΡ_03263915.1, ΖΡ_03263990.1, ΖΡ 03400081.1, ΖΡ_03452573.1, ΖΡ_03456092.1, ΖΡ_03517291.1, ΖΡ 03529055.1, ΖΡ_03571515.1, ΖΡ_03572809.1, ΖΡ_03587785.1, ΖΡ 03588560.1, ΖΡ_03697266.1, ΖΡ_03697962.1, ΖΡ_04521092.1, ΖΡ 04590693.1, ΖΡ_04890914.1, ΖΡ_04891982.1, ΖΡ_04893793.1, ΖΡ 04902131.1, ΖΡ_04905327.1, ΖΡ_04941068.1, ΖΡ_04944536.1, ΖΡ 04945255.1, ΖΡ_04959332.1, ΖΡ_04964181.1, ΖΡ_05053721.1, ΖΡ 05063588.1, ΖΡ_05073059.1, ΖΡ_05077806.1, ΖΡ_05082750.1, ΖΡ_05091128.1, ΖΡ_05095488.1, ΖΡ_05101701.1, ΖΡ_05116783.1, ΖΡ_05121836.1, ZPJ35127 756.1, ΖΡ_05637806.1, ΖΡ_05742087.1, ΖΡ 05783548.1, ΖΡ_05786246.1, ΖΡ_05843149.1, ΖΡ_05945960.1, ΖΡ 06459045.1, ΖΡ_06487195.1, ΖΡ_06492453.1, ΖΡ_06493162.1, ΖΡ 06703644.1, ΖΡ_06731146.1, ΖΡ_06839371.1, ΖΡ_07007312.1, ΖΡ 07266194.1, ΖΡ_07374050.1, ΖΡ_07662787.1, ΖΡ_07778196.1, ΖΡ 07797983.1, ΖΡ_08099459.1, ΖΡ_08138203.1, ΖΡ_08141719.1, ΖΡ_08142973.1, ΖΡ_08177102.1, ΖΡ_08185821.1, ΖΡ_08186468.1, ΖΡ_08208888.1, ΖΡ_08266590.1, ΖΡ_08402041.1, ΖΡ_08406891.1, ΖΡ 08522175.1, ΖΡ 08527488.1, ΖΡ 08631252.1, ΖΡ 08636687.1, [090] Em particular, a Enzima E7, pode ser uma aminotransferase (Eh) selecionada a partir do grupo que consiste em NP_901695.1, ZP_03697266.1, AAD41041.1, YP_002796201.1, ZP_03697962.1, YP_001859758.1, YP_002229759.1, YP_001120907.1, YP_110490.1, ZP_04964181.1, YP 774932.1, YP_001766294.1, YP_001581170.1, YP_622254.1, ZP 03588560.1, YP_001809596.1, YP_370582.1, ZP_03572809.1, NP 248990.1, YP_001888405.1, ZP_04905327.1, YP_001061726.1, YP_001668026.1, ZP_01750280.1, ZP_07778196.1, EGH71404.1, NP 744329.1, YP_004147141.1, ADR61066.1, ZP_05783548.1, YP_004701637.1, YP_366340.1, YP_003264235.1, EGD03176.1, YP_001268866.1, ZP_01901558.1, ZP_05121836.1, YP_003692877.1, ZP_03517291.1, YP_002974935.1, YP_001668026.1, ADR61066.1, NP 744329.1, YP_001268866.1, YP_004701637.1, ZP_08142973.1, ADR62525.1, YP_610700.1, NP_747283.1, ADR62525.1, YP_001270391.1, YP_004704442.1, YP_610700.1, YP_001747156.1, ZP_08138203.1, ZP 07266194.1, EGH70821.1, YP_351134.1, EGH32343.1, EGH08331.1, EGH67339.1, YP_001668026.1, YP_004701637.1, YP_237931.1, ZP 03400081.1, ZP_05116783.1, ZP_01550953.1, ZP_07662787.1, YP 928515.1, YP_788372.1, YP_001021095.1, ZP_07797983.1, YP_003578319.1, YP_004305252.1, NP_248912.1, ZP_08636687.1, YP_003912421.1, YP_751687.1, ZP_08142973.1, YP_271307.1, ΖΡ 05082750.1, ΥΡ_001417624.1, e ΥΡ_353455.1.
[091] Α frase “quando presente” usada em relação à Enzima E7, se refere às células que foram geneticamente modificadas para produzir éster de ácido ω-amino alcanoico. As células, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, podem compreender uma expressão aumentada de Enzima E7 em relação à célula do tipo selvagem, desse modo, tendo a capacidade para produzir éster de ácido ω-amino alcanoico. Em outro exemplo, as células, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, também podem compreender nenhuma expressão aumentada de Enzima E7 em relação à célula do tipo selvagem, desse modo, não tendo a capacidade para produzir éster de ácido ω-amino alcanoico. Essas células podem, desse modo, produzir, principalmente, éster de ácido ω-οχο alcanoico. Em um exemplo, a célula que compreende a expressão aumentada de Enzima E6 e não E7 em relação à célula do tipo selvagem pode ter a capacidade para produzir éster de ácido ω-οχο alcanoico. Em outro exemplo, em que a célula não é geneticamente modificada para aumentar a expressão de E6 e não E7, a célula pode produzir éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico.
[092] Enzima Eh [093] Em particular, a Enzima Eh, pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em: [094] 3HMU_A, AAD41041.1, AAK15486.1, ABE03917.1, ADR60699.1, ADR61066.1, ADR62525.1, AEL07495.1, CAZ86955.1, EFW82310.1, EFW87681.1, EGC99983.1, EGD03176.1, EGE58369.1, EGH06681.1, EGH08331.1, EGH24301.1, EGH32343.1, EGH46412.1, EGH55033.1, EGH62152.1, EGH67339.1, EGH70821.1, EGH71404.1, EGH78772.1, EGH85312.1, EGH97105.1, EGP57596.1, NP_102850.1, NP_106560.1, NP 248912.1, NP_248990.1, NP_354026.2, NP_421926.1, NP_637699.1, NP 642792.1, NPJ744329.1, NPJ744732.1, NPJ747283.1, NPJ795039.1, NP_901695.1, XP_002943905.1, YP_001021095.1, YP_001059677.1, YP_001061726.1, YP_001066961.1, YP_001074671.1, YP_001120907.1, ΥΡ_001140117.1, ΥΡ_001170616.1, ΥΡ_001185848.1, ΥΡ_001188121.1, ΥΡ_001233688.1, ΥΡ_001268866.1, ΥΡ_001270391.1, ΥΡ_001345703.1, ΥΡ_001412573.1, ΥΡ_001417624.1, ΥΡ_001526058.1, ΥΡ_001579295.1, ΥΡ_001581170.1, ΥΡ_001668026.1, ΥΡ_001669478.1, ΥΡ_001671460.1, ΥΡ_001685569.1, ΥΡ_001747156.1, ΥΡ_001749732.1, ΥΡ_001765463.1, ΥΡ_001766294.1, ΥΡ_001790770.1, ΥΡ_001808775.1, ΥΡ_001809596.1, ΥΡ_001859758.1, ΥΡ_001888405.1, ΥΡ_001903233.1, ΥΡ_001977571.1, ΥΡ_002229759.1, ΥΡ_002231363.1, ΥΡ_002280472.1, ΥΡ_002297678.1, ΥΡ_002543874.1, ΥΡ_002549011.1, ΥΡ_002796201.1, ΥΡ_002801960.1, ΥΡ_002875335.1, ΥΡ_002897523.1, ΥΡ_002912290.1, ΥΡ_002974935.1, ΥΡ_003060891.1, ΥΡ_003264235.1, ΥΡ_003552364.1, ΥΡ_003578319.1, ΥΡ_003591946.1, ΥΡ_003607814.1, ΥΡ_003641922.1, ΥΡ_003674025.1, ΥΡ_003692877.1, ΥΡ_003755112.1, ΥΡ_003896973.1, ΥΡ_003907026.1, ΥΡ_003912421.1, ΥΡ_004086766.1, ΥΡ_004142571.1, ΥΡ_004147141.1, YPJXM228105.1, ΥΡ_004278247.1, ΥΡ_004305252.1, YPJXM356916.1, YPJXM361407.1, ΥΡ_004378186.1, ΥΡ_004379856.1, YPJXM390782.1, ΥΡ 004472442.1, YPJ304590892.1, ΥΡ_004612414.1, YPJ304676537.1, ΥΡ_004693233.1, YPJ304701580.1, YPJ304701637.1, YPJ304704442.1, ΥΡ_108931.1, ΥΡ_110490.1, ΥΡ_168667.1, ΥΡ_237931.1, ΥΡ_260624.1, ΥΡ_262985.1, ΥΡ_271307.1, ΥΡ_276987.1, YPJ334171.1, YPJ337172.1, ΥΡ_350660.1, ΥΡ_351134.1, ΥΡ_364386.1, YPJ366340.1, ΥΡ_369710.1, ΥΡ_370582.1, ΥΡ_426342.1, ΥΡ 440141.1, ΥΡ_442361.1, ΥΡ_468848.1, ΥΡ_521636.1, ΥΡ_554363.1, ΥΡ_608454.1, ΥΡ_610700.1, ΥΡ_614980.1, ΥΡ 622254.1, ΥΡ_625753.1, ΥΡ_680590.1, ΥΡ_751687.1, ΥΡ_767071.1, ΥΡ 774090.1, ΥΡ_774932,1, ΥΡ_788372.1, ΥΡ_858562.1, ΥΡ_928515.1, ΥΡ_983084.1, ΥΡ_995622.1, ZPJ30948889.1, ZPJD0954344.1, ΖΡ 00959736.1, ΖΡ_00998881.1, ΖΡ_01011725.1, ΖΡ_01037109.1, ΖΡ_01058030.1, ΖΡ_01076707.1, ΖΡ_01103959.1, ΖΡ_01167926.1, ZPJD1224713.1, ΖΡ_01442907.1, ΖΡ_01446892.1, ΖΡ_01550953.1, ΖΡ_01625518.1, ΖΡ_01745731.1, ΖΡ_01750280.1, ΖΡ_01754305.1, ΖΡ_01763880.1, ΖΡ_01769626.1, ΖΡ_01865961.1, ΖΡ_01881393.1, ΖΡ_01901558.1, ΖΡ_02145337.1, ΖΡ_02151268.1, ΖΡ_02152332.1, ΖΡ_02167267.1, ΖΡ_02190082.1, ΖΡ_02242934.1, ΖΡ_02360937.1, ΖΡ 02367056.1, ΖΡ_02385477.1, ΖΡ_02456487.1, ΖΡ_02883670.1, ΖΡ 03263915.1, ZPJ33263990.1, ΖΡ_03400081.1, ΖΡ_03452573.1, ΖΡ 03456092.1, ΖΡ_03517291.1, ΖΡ_03529055.1, ΖΡ_03571515.1, ΖΡ_03572809.1, ΖΡ_03587785.1, ΖΡ_03588560.1, ΖΡ_03697266.1, ΖΡ_03697962.1, ZPJM521092.1, ZPJM590693.1, ZPJM890914.1, ZPJM891982.1, ZPJM893793.1, ΖΡ_04902131.1, ΖΡ_04905327.1, ZPJM941068.1, ZPJM944536.1, ΖΡ_04945255.1, ΖΡ_04959332.1, ZPJM964181.1, ΖΡ_05053721.1, ΖΡ_05063588.1, ΖΡ_05073059.1, ΖΡ_05077806.1, ΖΡ_05082750.1, ΖΡ_05091128.1, ΖΡ_05095488.1, ΖΡ_05101701.1, ZPJ35116783.1, ΖΡ_05121836.1, ΖΡ_05127756.1, ΖΡ 05637806.1, ZPJ35742087.1, ΖΡ_05783548.1, ΖΡ_05786246.1, ΖΡ 05843149.1, ΖΡ_05945960.1, ΖΡ_06459045.1, ΖΡ_06487195.1, ΖΡ 06492453.1, ΖΡ_06493162.1, ΖΡ_06703644.1, ΖΡ_06731146.1, ΖΡ 06839371.1, ΖΡ_07007312.1, ΖΡ_07266194.1, ΖΡ_07374050.1, ΖΡ 07662787.1, ΖΡ_07778196.1, ZPJ37797983.1, ΖΡ_08099459.1, ΖΡ_08138203.1, ΖΡ_08141719.1, ΖΡ_08142973.1, ΖΡ_08177102.1, ΖΡ_08185821.1, ΖΡ_08186468.1, ΖΡ_08208888.1, ΖΡ_08266590.1, ΖΡ 08402041.1, ΖΡ_08406891.1, ΖΡ_08522175.1, ΖΡ_08527488.1, ΖΡ_08631252.1, e ΖΡ_08636687.1.
[095] A célula de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, pode ser geneticamente modificada para aumentar a expressão em relação às células do tipo selvagem das enzimas Ei a E5. A célula pode, adicionalmente, ser geneticamente modificada para aumentar a expressão pelo menos das enzimas E6 e/ou E7. Em um exemplo, as enzimas Ei, E2, E3, E5 e E6, podem ser pelo menos um alcano hidroxilase AlkB (Eb) e a Enzima E4 pode ser uma sintase de éster de cera (Ef). Em particular, - o alcano hidroxilase AlkB (Eb) compreende pelo menos 60 % de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1; e - a sintase de éster de cera (Ef) compreende pelo menos 60 % de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 2.
[096] Em outro exemplo, quando a célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, for geneticamente modificada para produzir pelo menos um éster de ácido ω-amino alcanoico, a célula pode ser modificada para expressar pelo menos uma ω-transaminase (Eh) que pode compreender pelo menos 60 % de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 3.
[097] Enzima Es [098] A célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, pode ser geneticamente modificada, adicionalmente, para diminuir a expressão de pelo menos uma enzima E8 que quebra pelo menos um dentre os intermediários no processo de conversão de alcanos em éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado. Em particular, a enzima E8 pode ser uma enzima com a capacidade para realizar uma parte na capacidade de degradação de ácido graxo da célula. Em particular, Es pode ser selecionado a partir da lista que consiste em acil-CoA desidrogenase (Ej) (FadE), enoil CoA hidratase (Ej) (FadB), 3-hidroxiacil-CoA desidrogenase (Ek) (FadB) e β-cetotiolase também conhecido como 3-cetoacil-CoA tiolase (FadA) (E|).
[099] Ácidos graxos são coletados e translocados através da membrana de célula por meio um mecanismo de transporte/ativação de acila. A primeira etapa intracelular envolve a conversão de acil-CoA em enoil-CoA através de acil-CoA desidrogenase (Ej), sendo que o último é referido como FadE no caso de E. coli. A atividade de um acil-CoA desidrogenase pode ser testada conforme descrito no estado da técnica, por exemplo, monitorando-se a concentração de NADFI de modo espectrofotométrico a 340 nm em 100 mM MOPS, pH de 7,4, 0,2 mM Enoil-CoA, 0,4 mM NADH. O enoil-CoA resultante é convertido em 3-cetoacil-CoA por meio de 3-hidroxiacil-CoA através de hidratação e oxidação, catalisado por enoil-CoA hidratase/(fí)-3-hidroxiacil-CoA desidrogenase (E/Ek), chamado de FadB e FadJ em E. coli. A atividade de enoil-CoA hidratase/3-hidroxiacil-CoA desidrogenase, more especificamente, formação do produto NADH pode ser testada de modo espectrofotométrico, conforme descrito no estado do técnica, por exemplo, conforme destacado para FadE. Finalmente, 3-cetoacil-CoA tiolase (E|), FadA e Fadl em £. coli, catalisa o divagem de 3-cetoacil-CoA, para gerar acetil-CoA e a entrada de acil-CoA é encurtada em dois átomos de carbono. A atividade de cetoacil-CoA tiolase pode ser testada, conforme descrito no estado do técnica, por exemplo, em Antonenkov, V., et al, 1997.
[100] Em um exemplo, o termo “acil-CoA desidrogenase”, conforme usado no presente documento, pode ser um polipeptídeo com a capacidade para catalisara conversão de um acil-CoA para enoil-CoA, como parte da trajetória de β oxidação. Por exemplo, o polipeptídeo FadE em £ coli (número de acessão: BAA77891.2) pode ser um acil-CoA desidrogenase. O termo “enoil-CoA hidratase”, conforme usado no presente documento, também chamado de 3-hidroxiacil-CoA desidrogenase, se refere a um polipeptídeo com a capacidade para catalisar a conversão de enoil-CoA em 3-cetoacil-CoA através de hidratação e oxidação, como parte da trajetória de β oxidação. Por exemplo, os polipeptídeos FadB e FadJ em £ coli (números de acessão: BAE77457.1 e P77399.1, respectivamente) são enoil-CoA hidratase. O termo “cetoacil-CoA tiolase”, conforme usado no presente documento, pode se referir a um polipeptídeo com a capacidade para catalisar a divagem de 3-cetoacil-CoA, que resulta em um acil-CoA encurtado por dois átomos de carbono e acetil-CoA, como a final etapa do trajetória de β oxidação. Por exemplo, os polipeptídeos FadA e Fadl em £. coli (número de acessão: YP_491599.1 e P76503.1, respectivamente) são cetoacil-CoA tiolase.
[101] Enzimas E9 E E10 [102] A célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, pode ser geneticamente modificada adicionalmente para aumentar a expressão em relação à célula do tipo selvagem de: - a Enzima Eg é um graxo de acil-Coenzima A éster metílico esterase BioH (Em); e/ou - a Enzima E10 é um graxo de acil-Coenzima A tioesterase (En) selecionada a partir do grupo que consiste em TesA, TesB, YciA, FadM, YbfF e YbgC, [103] Em particular, Em pode ter a capacidade para hidrolisar ésteres de ácido graxo em ácidos graxos livres e no respectivo álcool; e/ou En pode ter a capacidade para hidrolisar graxo de acil-Coenzima A em ácidos graxos livres e Coenzima A.
[104] Enzima Eu [105] A célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, pode compreender uma mutação genética adicional que aumenta a expressão de pelo menos uma proteína transportadora em relação à célula do tipo selvagem. Essa mutação adicional permite que a célula para aumentar o aceitação de pelo menos um ácido graxo. Em particular, a proteína transportadora pode ser AlkL (SEQ ID NO: 4 ou 5) e/ou FadL (SEQ ID NO: 6). AlkL e/ou FadL podem funcionar pelo menos como uma proteína transportadora em comparação à célula do tipo selvagem. Em um exemplo, a célula pode ser geneticamente modificada para sobre expressar tanto o gene fadL quanto o gene alkL. A célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, pode ser geneticamente modificada adicionalmente para aumentar a expressão em relação à célula do tipo selvagem de AlkL e/ou FadL.
[106] Em um exemplo, a enzima En pode ser FadL ou BAA16205.1 [107] Enzima E12 [108] A célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, pode compreender uma mutação genética adicional que aumenta a expressão em relação à célula do tipo selvagem de uma sintetase de acil-CoA (Enzima E12) de EC 6.2.1.3, EC 2.3.1.86. A Enzima E12 pode catalisar a conversão de um ácido graxo no CoA éster de um ácido graxo, isto é, em uma molécula, em que o grupo funcional -OH do grupo carbóxi é substituído por -S-CoA. Por exemplo, os polipeptídeos FadD e FadK em E. coli (número de acessão: ΒΑΑ15609.1 e NP_416216.4, respectivamente) são sintetases de acil-CoA. Em outro exemplo, E12 pode ser uma ligação de ácido graxo CoA de longa cadeia de YP_001724804.1.
[109] Enzima Ei3 [110] A Enzima E-|3 pode ter a capacidade para converter éster de ácido ω-οχο alcanoico no éster de ácido ω-carboxi alcanoico correspondente, em particular, a Enzima E13 pode ser qualquer enzima E3 definida acima. Mais particularmente, E13 pode ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilase P450 (Ea) de EC 1.14.15.3-, alcano hidroxilase AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3, álcool oxidase bifuncional (Ec) de EC 1.1.3.20, álcool desidrogenase AlkJ bifuncional (Edi) ou álcool desidrogenase bifuncional (Edü) de EC 1.1.1.1 ou EC 1.1.1.2, com a capacidade para oxidar um éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico por meio de um éster de ácido ω-οχο alcanoico diretamente para 0 éster de ácido ω-carboxi alcanoico correspondente; e aldeído desidrogenase (Ee).
[111] Enzima E14 [112] A Enzima E14 pode ter a capacidade para converter éster de ácido ω-carboxi alcanoico no diéster de ácido ω-carboxi alcanoico correspondente. Em particular, a Enzima E14 pode ser qualquer enzima E4 definida acima. Mais particularmente, Eu pode ser pelo menos uma sintase de éster de cera (Ef) ou um álcool O-acíl transferase (Eg) (EC 2.3.1.20, EC 2.3.1.75 ou EC 2.3.1.84).
[113] A célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, não compreende uma modificação genética que aumenta a expressão em relação à célula do tipo selvagem de pelo menos uma dentre as seguintes enzimas E2o- E24 selecionada a partir do grupo que consiste em: - Tioesterase de E20 Acil-ACP, de EC 3.1.2.14 ou EC 3.1.2.22, - Tioesterase de E21 Acil-CoA, de EC 3.1.2.2, EC 3.1.2.18, EC 3.1.2.19, EC 3.1.2.20 ou EC 3.1.2.22, - Transacilase de E22 Acil-CoA:ACP, - Sintase de Poliquetida de E23i e - Sintase de ácido hexanoico de E24.
[114] Em particular, a célula de acordo com qualquer aspecto da presente invenção tem uma expressão do tipo selvagem de enzimas E2o- E24. As Enzimas E2o- E24 não são, desse modo, sobre expressadas nem removidas das células de acordo com o método da presente invenção. Mais particularmente, a expressão de qualquer uma dentre as enzimas E2o- E24, isto é, a enzima E20, E2i, E22, E23 ou E24 todas as enzimas E20, E2i, E22, E23 e E24 não é geneticamente modificada na célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção. Ainda mais particularmente, a célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, pode compreender a expressão do tipo selvagem natural de quaisquer uma dentre as enzimas E20-E24 que pode estar naturalmente presente na célula, a princípio. As células, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, podem, desse modo, serem consideradas por compreender nenhuma expressão recombinante de qualquer uma dentre as enzimas E20- E24. Isso é, especialmente, vantajoso visto que as células sem expressão aumentada de qualquer uma dentre as enzimas E20- E24 (isto é, com expressão do tipo selvagem de qualquer uma dentre as enzimas E20- E24) pode, então, selecionar prontamente o uso de um alcano como uma fonte de carbono para a formação de éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado. Em particular, qualquer célula com a expressão aumentada de qualquer uma dentre as enzimas E20- E24 pode resultar na produção aumentada de ácidos graxos que pode ser usada como a fonte de carbono para a formação de ácidos carboxílicos funcionalizados ω e/ou ésteres dos mesmos pela célula com a expressão aumentada de qualquer uma dentre as enzimas E20- E24. As células com expressão aumentada de qualquer uma dentre as enzimas E20- E24 pode, desse modo, favorecer o uso da alta concentração de ácidos graxos como um substrato para a produção de ésteres de ácido carboxílico ω-funcionalizado e os alcanos, desse modo, não serão usados para a formação de éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado pela célula. O uso de outras fontes de carbono diferentes de alcanos para a formação de éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado pode aumentar os custos de produção drasticamente como para produzir mais ácidos graxos, as células exigiríam outras fontes de carbono tais como glicose. Consequentemente, o uso de células, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, que não compreende uma modificação genética que aumenta a expressão em relação à célula do tipo selvagem de pelo menos uma dentre as seguintes enzimas E20- E24 é usado de acordo com qualquer aspecto da presente invenção para a produção de pelo menos um éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado a partir de pelo menos um alcano.
[115] Enzimas E20-E24 [116] As Enzimas E20-E24 são explicadas em maiores detalhes no documento WO2013024114 como enzimas E, a Eiv respectivamente nas páginas 60 a 79 do documento WO2013024114.
[117] De acordo com outro aspecto da presente invenção, um método para produzir pelo menos um éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado é fornecido, sendo que 0 método compreende uma etapa para colocar pelo menos com uma célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, em contato com pelo menos um alcano. Em particular, 0 éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado formado pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em ácido ω-hidroxi-alcanoico, ácido ω-οχο alcanoico, ácido ω-carboxi alcanoico, ésteres de ácido ω-amino alcanoico. Em particular, 0 éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado pode ser éster metílico de ácido 12-amino láurico, éster metílico de ácido 12-hidroxi láurico, (di)éster metílico de ácido 12-carboxi láurico e/ou éster metílico de ácido láurico e 0 alcano dodecano. Em outro exemplo, 0 éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado produzido pode ser éster metílico de ácido 11-amino undecanoico, éster metílico de ácido 11 -hidroxi undecanoico, (di)éster metílico deácido 11-carboxi undecanoico e/ou éster metílico de ácido undecanoico do alcano undecano. Em pelo menos um exemplo adicional, álcoois e/ou aldeídos monofuncionais podem ser formados como um subproduto.
[118] O termo “colocar em contato”, conforme usado no presente documento, significa realizar diretamente o contato entre o alcano e/ou a célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, em uma solução aquosa. Por exemplo, a célula e o alcano pode não estar em compartimentos diferentes separados por uma barreira como uma membrana inorgânica. Se o alcano for solúvel e puder ser tomado pela célula ou puder se difundir através de membranas biológicas, o mesmo pode ser simplesmente adicionado à célula, de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, em uma solução aquosa. Caso o mesmo seja insuficientemente solúvel, o mesmo pode ser solvido em um solvente orgânico adequado antes da adição à solução aquosa. A pessoa versada na técnica tem a capacidade para preparar soluções aquosas de alcanos que têm solubilidade insuficiente adicionando-se solventes orgânicos e/ou polares adequados. Tais solventes podem ser fornecidos na forma de uma fase orgânica que compreende solvente orgânico líquido. Em um exemplo, o solvente orgânico ou a fase orgânica podem ser considerados líquidos quando o líquido estiver a 25 °C e em pressão atmosférica padrão. Em outro exemplo, um ácido graxo pode ser fornecido na forma de um éster de ácido graxo tal como o éster metílico ou etílico respectivo. Em outro exemplo, os compostos e catalisadores podem entrar em contato in vitro, isto é, em um estado mais ou menos enriquecido ou purificado igualmente, ou pode entrar em contato in situ, isto é, feitos como parte do metabolismo de uma célula e, subsequentemente, reagem dentro da célula.
[119] O termo “uma solução aquosa” é usada de modo intercambiável com o termo ‘meio aquoso” e se refere a qualquer solução que compreende água, principalmente água como solvente que pode ser usado para manter a célula de acordo com qualquer aspecto da presente invenção, pelo menos temporariamente, em um estado ativo e/ou viável metabolicamente e compreende, se for necessário, quaisquer substratos adicionais. A pessoa versada na técnica é familiarizada com a preparação de numerosas soluções aquosas, normalmente chamadas de meios que podem ser usados para manter as células inovadoras, por exemplo, meio de LB, no caso de E. coli. É vantajoso usar como uma solução aquosa um meio mínimo, isto é, um meio de composição razoavelmente simples que compreende apenas a configuração mínima de sais e nutrientes indispensáveis para manter a célula em um estado ativo e/ou viável metabolicamente, em contraste com meios complexos, para evitar a contaminação dispensável dos produtos com produtos secundários indesejados. Por exemplo, o meio M9 pode ser usado como um meio mínimo.
[120] De acordo com outro aspecto da presente invenção, um método para produzir pelo menos um éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado a partir de um alcano é fornecido, em que o método compreende: (A) colocar as seguintes enzimas em contato com o alcano: (i) Enzima Ei com a capacidade para converter o alcano no 1-alcanol correspondente; (ii) Enzima E2com a capacidade para converter o 1-alcanol de (i) no 1-alcanal correspondente; (iii) Enzima E3com a capacidade para converter o 1-alcanal de (ii) no ácido alcanoico correspondente; (iv) Enzima E4 com a capacidade para converter o ácido alcanoico de (iii) no éster de ácido alcanoico correspondente; e (v) Enzima E5 com a capacidade para converter o éster de ácido alcanoico de (iv) no éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico correspondente.
[121] O método de acordo com qualquer aspecto da presente invenção pode compreender uma etapa para (B) colocar as seguintes enzimas em contato com o éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico: (vi) Enzima E6 com a capacidade para converter o éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico correspondente de (v) no éster de ácido ω-οχο alcanoico correspondente; ou (vii) Enzima E6 com a capacidade para converter o éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico correspondente de (v) no éster de ácido ω-οχο alcanoico correspondente e Enzima E7com a capacidade para converter o éster de ácido ω-οχο alcanoico no éster de ácido ω-amino alcanoico correspondente; ou (viii) Enzima E6 com a capacidade para converter o éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico correspondente de (v) no éster de ácido ω-οχο alcanoico correspondente e Enzima E13 com a capacidade para converter o éster de ácido ω-οχο alcanoico no éster de ácido ω-carboxi alcanoico correspondente e Enzima Eu com a capacidade para converter o éster de ácido ω-carboxi alcanoico no diéster de ácido ω-carboxi alcanoico correspondente.
[122] As enzimas usadas de acordo com qualquer aspecto da presente invenção podem ser as mesmas que as enzimas reveladas no contexto da célula, de acordo com a presente invenção.
[123] EXEMPLOS
[124] O anterior descreve as modalidades preferidas, que, conforme será entendido por aqueles versados na técnica, podem ser submetidas à variações ou modificações no projeto, interpretação ou operação sem se afastar do escopo das reivindicações. Essas variações, por exemplo, se destinam a serem abrangidas pelo escopo das reivindicações.
[125] Exemplo 1;
[126] A produção de ácido láurico (éster metílico) e ácido undecanoico (éster metílico) a partir de dodecano e undecano (bem como de metanol no caso dos ésteres metílicos) é feita, respectivamente, com um biocatalisador de célula inteira que possui um alcano monooxigenase e uma sintase de éster de cera e atenuado em uma degradação catalizadora de enzimas de ácidos graxos e uma enzima que hidrolisa ésteres de ácido graxo em ácidos graxos livres e o respectivo álcool.
[127] Exemplo 2 [128] A produção de éster metílico de ácido 12-amino láurico e éster metílico de ácido 11-amino undecanoico a partir de dodecano e undecano é feita, respectivamente, com um biocatalisador de célula inteira que possui um alcano monooxigenase, uma sintase de éster de cera e uma ω-transaminase e atenuada em uma degradação catalizadora de enzimas de ácidos graxos e uma enzima que hidrolisa ésteres de ácido graxo em ácidos graxos livres e o respectivo álcool.
[129] Exemplo 3: [130] CONSTRUÇÃO DE UM VETOR DE EXPRESSÃO PARA SOBRE-EXPRESSÃO DO GENE E. COLI FADD E UM GENE HAHELLA CHEJUENSIS QUE CODIFICA UMA SINTASE DE ÉSTER DE CERA
[131] O vetor pCDF-fadD_Ec-wes_Hche (SEQ ID NO: 7) possui os genes fadD da E. coli (que codificam uma sintase de acil-CoA) e um gene de sintase de éster de cera gene do Hahella chejuensis (SEQ ID NO:2), códon otimizado para a expressão em E. coli. Embora a sintase de acil-CoA seja responsável pela ativação de ácidos graxos para os tioésteres de CoA correspondentes, a sintase de éster de cera é exigida para a formação de éster entre um acil-CoA graxo e um álcool, mais especificamente, metanol. O vetor tem como base em plasmídeo pCDFDuet-1 (Merck Biosciences; Nottingham, GB) e possui o gene fadD sob controle do promotor tac e do gene de codificação de Sintase de éster de cera de Hahella chejuensis sob controle do promotor T5. E. coli fadD, bem como os cassetes de promotor tace T5 foram amplificados por PCR a partir de DNA genômico de E. coli W3110, respectivamente, o gene que codifica sintase de éster de cera de Hahella chejuensis foi obtido pela síntese de DNA. A estrutura de vetor e os quatro fragmentos de DNA que representam E. coli fadD, os cassetes de promotor tac e T5 e o gene que codifica sintase de éster de cera de Hahella chejuensis Sintase foram fundidos com o uso de um kit disponível comercialmente para a recombinação in vitro (NEBuilder HiFi DNA Assembly Cloning Kit; NEB; Frankfurt/ Main, Alemanha) para gerar o vetor pCDF-fadD_Ec-wes_Hche (SEQ ID NO: 7).
[132] Exemplo 4: [133] CONSTRUÇÃO DE LINHAGENS DE E. COLI COM A CAPACIDADE PARA CONVERTER ALCANOS NOS ÉSTERES METÍLICOS DE ÁCIDO GRAXO Ω-FUNCIONALIZADO CORRESPONDENTES
[134] O vetor de expressão pBT10_alkL (consultar o Exemplo 1 do documento WO/2011/131420 quanto a detalhes de construção e a ID de SEQ listada n9: 8) contém os genes alkB, alkG, alkT, alkS e alkL do operão alk de Pseudomonas oleovorans. Os produtos de gene correspondentes catalisaram oxidação de alcanos nos alcanóis, alcanais e ácidos graxos (AlkBGT) correspondentes, bem como a aceitação dos substratos (AlkL). Além disso, os produtos de gene de AlkBGT também catalisaram a oxidação de ésteres metílicos de ácido graxo, uma vez formados pela ação de sintetase de acil-CoA e sintase de éster de cera de enzimas dos ácidos graxos e do metanol (consultar Exemplo 1). O vetor pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) (consultar Exemplo 1 do documento WO/2013/024114 para a construção de detalhes e a ID de SEQ listada ns: 17) possui os genes ald do Bacillus subtilis (que codificam uma alanina desidrogenase) e Cv_2505 do Chromobacterium violaceum (que codificam uma ω-transaminase). Embora a ω-transaminase seja responsável pela conversão de OLAME e OUAME para as aminas ALAME e AUAME correspondentes, a alanina desidrogenase foi exigida para o fornecimento de alanina de doador de amina a partir de piruvato e amônia inorgânica.
[135] Os plasmídeos pBT10_alkL e pCDF-fadD_Ec-wes_Hche mais, quando adequado, pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) foram transformados por meio de eletroporação em E. coli W3110 AbioH AfadE, folheados em placas de ágar LB com canamicina (50 pg/ml), ampicilina (100 pg/ml) e espectinomicina (100 pg/ml), conforme aplicável. Os transformantes foram testado quanto a presença e autenticidade dos plasmídeos pela preparação de plasmídeo e restrição de análise de digestão. As seguintes linhagens foram geradas: [136] E.coli W3110 AbioH AfadE pBT10_alkL / pCDF-fadD_Ec-wes_Hche [137] E.coli W3110 AbioH AfadE pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pCDF-fadD_Ec-wes_Hche [138] Exemplo 5: [139] BIOTRANSFORMAÇÃO PARA CONVERSÃO DE ALCANOS NOS ésteres metílicos de ácido graxo ω-funcionalizado correspondentes [140] As linhagens E. coli W3110 AbioH AfadE pBT10_alkL / pCDF-fadD_Ec-wes_Hche e E. coli W3110 AbioH AfadE pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pCDF-fadD_Ec-wes_Hche foram submetidas à fermentação descontínua seguida pela biotransformação a fim de investigar suas habilidades para produzir éster metílico de ácido hidroxiláurico omega (HLAME), éster metílico de ácido oxoláurico omega (OLAME), éster metílico de ácido aminoláurico omega (ALAME), éster monometílico de ácido dodecanedioico (DDAME) e éster dimetílico de ácido dodecanedioico (DDADME) do dodecano. As linhagens também foram submetidas a uma fermentação descontínua seguida pela biotransformação a fim de investigar suas habilidades para produzir éster metílico de ácido hidroxiundecanoico ômega (FIUAME), éster metílico de ácido oxiundecanoico ômega (OUAME), éster metílico de ácido aminoundecanoico ômega (AUAME), éster monometílico de ácido undecanedioico (UDAME) e éster dimetílico de ácido undecanedioico (UDADME) do undecano. Isso foi executado em um sistema de fermentação paralelo de 8 vezes da DASGIP.
[141] Para a fermentação, reatores de 1 I foram usados, os quais foram equipados com agitadores suspensos e turbinas impulsoras. Para monitorar o processo, o pH e o p02 foram medidos na rede. As medições de OTR/CTR serviram, entre outros, para estimar a atividade metabólica e adequação das células.
[142] As sondas de pH foram calibradas através de uma calibragem de duas pontas com soluções e medição de pH 4,0 e pH 7,0, de acordo com as referências técnicas fornecidas por DASGIP. Os reatores foram preparados, de acordo com as referências técnicas, fornecidas por DASGIP com os sensores e conexões exigidos e o eixo de agitador foi instalado. Os reatores foram, então, preenchidos com 300 ml de água e autoclivados por 20 minutos a 121 °C a fim de garantir a esterilidade. As sondas de p02 foram polarizadas durante a noite (pelo menos 6 horas) após a conexão ao amplificador de medição. A água foi, então, removida sob a bancada limpa e substituída por meio de alta densidade celular que consiste em (NH4)2S04 de 1,76 g/l, K2HP04 de 19,08 g/l, KH2P04 de 12,5 g/l, extratos de fermento de 6,66 g/l, di-idrato de citrato de trissódio de 11,2 g/l, 17 ml/l de uma solução de citrato de ferro de amônia de força a 1 % esterilizado por filtro, e 5 ml/l de uma solução de estoque de elemento de traço esterilizada por filtro (que consiste em HCI (37 %) 36,50 g/l, MnCI2*4 H20 1,91 g/l, ZnS04*7 H20 1,87 g/l, di-idrato de ácido etilenodiaminotetracético de 0,84 g/l, H3BO3 de 0,30 g/l, Na2Mo04*2 H20 de 0,25 g/l, CaCI2*2 H20 de 4,70 g/l, FeS04*7 H20 de 17,80 g/l, CuCI2*2 H20 de 0,15 g/l) com glicose de 15 g/l como fonte de carbono adicionada por adição medida de 30 ml/l de uma solução alimentação estéril que consiste em 500 g/l de glicose, MgS04*7 H20 a 1 % (peso por volume) e NH4CI a 2,2 % (peso por volume)) com 50 mg/l de canamicina.
[143] Subsequentemente, as sondas de p02 foram calibradas com o uso de uma calibragem de ponta única (agitador: 600 rpm / gaseamento: 10 sl/h de ar) a 100 % e as extensões de alimentação, de agente de correção e de agente de indução foram limpas por meio de limpeza no local, de acordo com as referências técnicas fornecidas por DASGIP. Para isso, os tubos foram, primeiramente, enxaguados com etanol a 70 %, então, com 1 M NaOH, subsequentemente, com água desmineralizada estéril e, finalmente, carregados com 0 meio respectivo.
[144] Todas as linhas de E. coli mencionadas anteriormente foram cultivadas primeiramente a partir de uma criocultura em meio de LB (25 ml em um frasco de mistura com saliências de 100 ml) com canamicina de 50 mg/l durante a noite a 37 °C e 200 rpm por cerca de 18 horas. Então, 2 ml dessa cultura foram transferidos para um segundo estágio de pré-cultura em 25 ml de meio de alta densidade celular que consiste em (NH4)2S04 de 1,76 g/L, K2HP04 de 19,08 g/l, KH2P04 de 12,5 g/l, extrato de fermento de 6,66 g/l, di-idrato de citrato de trissódio de 11,2 g/l, 17 ml/l de uma solução de citrato de ferro de amônia de força de 1 % esterilizado por filtro, e 5 ml/l de uma solução de estoque de elemento de traço esterilizada por filtro (que consiste em HCI (37 %) de 36, 50 g/l, MnCI2*4 H20 de 1,91 g/l, ZnS04*7 H20 de 1,87 g/l, di-idrato de ácido etilenodiaminotetracético de 0,84 g/l, H3B03 de 0,30 g/l. Na2Mo04*2 H20 de 0,25 g/l, CaCI2*2 H20 de 4,70 g/l, FeS04*7 H20 de 17,80 g/l, CuCI2*2 H20 de 0,15 g/l) com glicose a 15 g/l como fonte de carbono (adicionada por adição medida de 30 ml/l de uma solução de alimentação estéril que consiste em glicose a 500 g/l, 1 % (peso por volume) MgS04*7 de H20 e NH4CI a 2,2 % (peso por volume)) com os antibióticos já descritos em um frasco de mistura de 100 ml e incubados a 37 °C/200 rpm por mais 6 horas.
[145] A fim de inocular os reatores com uma densidade óptica de 0,1, o OD6oo do segundo estágio de pré-cultura foi medido e a quantidade de cultura exigida para a inoculação foi calculada. A quantidade exigida de cultura foi adicionada com a ajuda de uma seringa de 5 ml através de um septo no reator trato por calor e arejado.
[146] O seguinte programa padrão foi usado: [147] Ο ρΗ foi regulado a pH de 6,8 em um lado com solução de amônia de força de 12,5 %. Durante o cultivo e a biotransformação, o oxigênio dissolvido (pC>2 ou DO) na cultura foi regulado a pelo menos 30 % por meio da alimentação de agitador e taxa de gaseamento. Após a inoculação, o DO caiu de 100 % para 30 %, em que o mesmo foi mantido estável pelo restante da fermentação.
[148] A fermentação foi executada de modo descontínuo, em que o início da alimentação foi disparada como distribuição para a fase de alimentação com glicose a 5 g/Ph alimentada, que consiste em glicose a 500 g/l, MgS04*7 H20 a 1 % (peso por volume) e NH4CI a 2,2 % (peso por volume), por meio do pico de DO que induz o fim da fase de lote. Com o início da alimentação, a temperatura de 37 °C foi diminuída para 30 °C. 10 hora após o início da alimentação, a expressão dos genes de oxidação foi induzida com DCPK a 0,025 % (volume por volume). O início da produção (= início da biotransformação) foi executado 14 horas após o início da alimentação. Para esse propósito, 150 ml de dodecano ou de undecano foram adicionados como lote ao caldo de fermentação.
[149] Para quantificar LSME e HLS nas amostras de fermentação, as amostras foram retiradas 1/2/4/20/22 horas após o início da biotransformação. Essas amostras foram preparadas para análise conforme fornecido no Exemplo 6.
[150] Exemplo 6: [151] QUANTIFICAÇÃO COM BASE EM LC-ESI/MS2 DE PRODUTOS
[152] A quantificação de HLAME, OLAME, ALAME, DDAME e DDADME, bem como de HUAME, OUAME, AUAME, UDAME e UDADME nas amostras de fermentação foi executada através de LC-ESI/MS2 em referência a uma calibragem externa para todos os analitos (0,1 a 50 mg/l) e com o uso do ácido aminoundecanoico padrão interno (AUA para HLSME), e d3-LSME (para LSME).
[153] Os seguintes instrumentos foram usados aqui: • Sistema HPLC 1260 (Agilent; Bõblingen) com auto mostrador (G1367E), bomba binária (G1312B) e estufa de coluna (G1316A) • Espectrômetro de massa TripelQuad 6410 (Agilent; Bõblingen) com fonte de ESI • Coluna de HPLC: Kinetex C18, 100 x 2,1 mm, tamanho de partícula: 2,6 pm, tamanho de poro 100 Á (Phenomenex; Aschaffenburg) • Pré-coluna: KrudKatcher Ultra HPLC In-Line Filter; 0,5 pm de profundidade de filtro e 0,004 mm de diâmetro interno (Phenomenex; Aschaffenburg) [154] As amostras foram preparadas pipetando-se 1.900 pl de solvente (acetonitrila a 80 % (v/v), H20 (volume por volume) a 20 % de destilagem dupla, + 0,1 % de ácido fórmico) e 100 pl de amostra em um vaso de reação de 2 ml. A mistura foi agitada por cerca de 10 segundos e, então, centrifugada por cerca de 13.000 rpm por 5 minutos. O supernadante claro foi removido com o uso de uma pipeta e, após a diluição adequada, analisado com diluentes (80 % (volume por volume) ACN, H20 (volume por volume) a 20 % de destilagem dupla destilagem dupla, + ácido fórmico a 0,1 %). 100 pL de ISTD foram pipetados em cada amostra de 900 pL (10 pL para um volume de amostra de 90 pL).
[155] A separação de HPLC foi executada com a coluna e a pré-coluna mencionadas anteriormente. O volume de injeção foi de 0,7 μΙ_, a temperatura de coluna foi de 50 °C, a taxa de fluxo foi de 0,6 ml/minuto. A fase móvel consistiu de eluente A (ácido fórmico aquoso a 0,1 % (v/v)) e eluente B (acetonitrila com ácido fórmico a 0,1 % (v/v)). O seguinte perfil de gradiente foi usado: Tempo [minuto] Eluente A [%] Eluente B [%] 0 77 23 0,3 77 23 0,4 40 60 2.5 40 60 2.6 2 98 5.5 2 98 5.6 77 23 9 77 23 [156] A análise de ESI-MS2 foi realizada no modo de ionização positiva com os seguintes parâmetros da fonte de ESI: • Temperatura de gás de 280 °C • Taxa de fluxo de gás 11 l/minuto • Pressão de nebulização 344 Pa (50 psi) • Tensão capilar 4.000 V
[157] A detecção e a quantificação dos compostos HLAME, OLAME, ALAME, DDAME, DDADME, HUAME, OUAME, AUAME, UDAME e UDADME foram executadas com os seguintes parâmetros de MRM, em cada caso com um íon de produto sendo usado como qualificador e um como quantificador. íon íon Tempo de precursor produto retenção Energia de Analito [m/z] [m/z] [ms] colisão [eV] DDSME 245,2 167,1 25 6 DDSME 245,2 149,1 50 8 HLSME 231,3 181,2 15 2 HLSME 231,3 163,2 25 5 DDS 231,2 213,2 50 0 DDS 231,2 149,1 25 9 ALSME 230,3 198,1 25 10 ALSME 230,3 163,2 15 10 OLSME 229,2 197,2 50 0 OLSME 229,2 161,1 25 5 HLS 217,2 181,2 35 0 HLS 217,2 163,1 20 4 OLS 215,2 161,2 25 0 OLS 215,2 95,2 60 13 [158] Tabela 1. OS ANALITOS LA E LAME FORAM DETECTADOS NO MODO SIM (m/z 201 e215).
[159] Exemplo 7: [160] Conversão de alcanos nos ésteres metílicos de ácido graxo ω-funcionalizado correspondentes por E. coli W3110 AbioH AfadE pBT10_alkL / pCDF-fadD_Ec-wes_Hche e. coli W3110 AbioH AfadE pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._ TA_C. v.(Ct) /pCDF-fadD_Ec-wes_Hche [161] Com o uso dos protocolos descritos acima E. coli W3110 AbioH AfadE pBT10_alkL / pCDF-fadD_Ec-wes_Hche pode ser mostrado produzindo DDAME e DDADME a partir de dodecano, bem como UDAME e UDADME a partir de undecano (consultar Tabelas 1 e 2). Além disso, E. coli W3110 AbioH AfadE pBT10_alkL / pJ294_alaDHJ3.s._TA_C.v.(Ct) / pCDF-fadD_Ec-wes_Hche pode ser mostrado produzindo HLAME e ALAME a partir de dodecano bem como HUAME e AUAME a partir de undecano (consultar Tabelas 2 e 3).
[162] Tabela 2. Concentração de ésteres de metil de ácido graxo ω- funcionalizado formados a partir de dodecano com linhagens E. coli W3110 AbioH AfadE pBT10_alkL / pCDF-fadD_Ec-wes_Hche (Linhagem 1) e E. coli W3110 AbioH AfadE pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pCDF-fadD_Ec-wes_Hche (Linhagem 2).
[163] Tabela 3. Concentração de ésteres de metil de ácido graxo ω-funcionalizado formados a partir de undecano com linhagens E. coli W3110 AbioH AfadE pBT10_alkL / pCDF-fadD_Ec-wes_Hche (Linhagem 1) e E. coli W3110 AbioH AfadE pBT10_alkL / pJ294_alaDH_B.s._TA_C.v.(Ct) / pCDF-fadD_Ec-wes_Hche (Linhagem 2).
REIVINDICAÇÕES

Claims (15)

1. Célula microbial para produzir pelo menos um éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado a partir de pelo menos um alcano, sendo que a célula é caracterizada por ser geneticamente modificada para aumentar a expressão relativa à célula do tipo selvagem de: (i) Enzima Ei com a capacidade para converter o alcano no 1-alcanol correspondente; (ii) Enzima E2Com a capacidade para converter o 1-alcanol de (i) no 1-alcanal correspondente; (iii) Enzima E3 com a capacidade para converter o 1 -alcanal de (ii) no ácido alcanoico correspondente; (iv) Enzima E4 com a capacidade para converter 0 ácido alcanoico de (iii) no éster de ácido alcanoico correspondente; e (v) Enzima Es com a capacidade para converter 0 éster de ácido alcanoico de (iv) no éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico correspondente. e em que a célula não compreende uma modificação genética que aumenta a expressão relativa à célula do tipo selvagem de pelo menos uma de entre as seguinte enzimas E20- E24 selecionadas a partir do grupo que consiste em: - E20ACÍI-ACP tioesterase, de EC 3.1.2.14 ou EC 3.1.2.22, - E21 Acil-CoA tioesterase, de EC 3.1.2.2, EC 3.1.2.18, EC 3.1.2.19, EC 3.1.2.20 ou EC 3.1.2.22, - E22 Acil-CoA :ACP transacilase, - E23 Policetídeo sintase, e - E24 Ácido hexanoico sintase.
2. Célula, de acordo com a reivindicação 1, sendo que a célula é caracterizada por ser geneticamente modificada adicionalmente para aumentar a expressão relativa à célula do tipo selvagem de (vi) Enzima Εβ com a capacidade para converter 0 éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico correspondente de (v) no éster de ácido ω-oxo-alcanoico correspondente; ou (vii) Enzima Εβ com a capacidade para converter o éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico correspondente de (v) no éster de ácido ω-oxo-alcanoico correspondente e Enzima E7Com a capacidade para converter o éster de ácido ω-oxo-alcanoico no éster de ácido ω-amino-alcanoico correspondente; ou (viii) Enzima Εβ com a capacidade para converter o éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico correspondente de (v) no éster de ácido ω-oxo-alcanoico correspondente e Enzima Ei3Com a capacidade para converter o éster de ácido ω-oxo-alcanoico no éster de ácido ω-carboxi-alcanoico correspondente e Enzima Eu com a capacidade para converter o éster de ácido ω-carboxi-alcanoico no diéster de ácido ω-carboxi-alcanoico correspondente.
3. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizada por - a Enzima Ei ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilases P450 (Ea) de EC 1.14.15.3- e alcano hidroxilases AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3; - a Enzima E2 ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilases P450 (Ea) de EC 1.14.15.3-, alcano hidroxilases AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3, álcool oxidase (Ec) de EC 1.1.3.20 e álcool desidrogenase (Ed) de EC 1.1.1.1 ou EC 1.1.1.2; - a Enzima E3 ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilases P450 (Ea) de EC 1.14.15.3-, alcano hidroxilases AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3, aldeído desidrogenases (Ee), álcool oxidases bifuncionais (Ec) de EC 1.1.3.20, álcool desidrogenases bifuncionais AlkJ (Edi) e álcool desidrogenases bifuncionais (Edn) de EC 1.1.1.1 ou EC 1.1.1.2, em que Ec, Edi, e Edn têm a capacidade para oxidar um éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico diretamente para 0 éster de ácido ω-carboxi-alcanoico correspondente; - a Enzima E4 ser selecionada a partir do grupo que consiste nas éster de cera sintases (Et) de EC 2.3.1.75 ou álcool O-acil transferases (Eg) de EC 2.3.1.84; - a Enzima Es ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilases P450 (Ea) de EC 1.14.15.3- e alcano hidroxilases AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3; - a Enzima Ee ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilases P450 (Ea) de EC 1.14.15.3-, alcano hidroxilases AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3, álcool oxidases (Ec) de EC 1.1.3.20, aldeído desidrogenases (Ee) e álcool desidrogenases (Ed) de EC 1.1.1.1 ou EC 1.1.1.2; - quando presente, a Enzima E7 ser uma ω-transaminase (Eh) EC 2.6.1; - quando presente a Enzima E13 ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilases P450 (Ea) de EC 1.14.15.3-, alcano hidroxilases AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3, aldeído desidrogenases (Ee), álcool oxidases bifuncionais (Ec) de EC 1.1.3.20, álcool desidrogenases bifuncionais AlkJ (Edi) e álcool desidrogenases bifuncionais (Edü) de EC 1.1.1.1 ou EC 1.1.1.2, em que Ec, Edi, e Edü têm a capacidade para oxidar um éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico diretamente no éster de ácido ω-carboxi-alcanoico correspondente, via um éster de ácido ω-oxo-alcanoico; e - quando presente, a Enzima E14 ser selecionada a partir do grupo que consiste em éster de cera sintases (Et) de EC 2.3.1.75 ou álcool O-acil transferases (Eg) de EC 2.3.1.84.
4. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada por as Enzimas E1, E2, E3, Es e Ee, serem pelo menos uma alcano hidroxilase AlkB (Eb) e a Enzima E4 ser uma éster de cera sintase (Et).
5. Célula, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada por - a alcano hidroxilase AlkB (Eb) compreender pelo menos 60 % de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 1; - a éster de cera sintase (Et) compreender pelo menos 60 % de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO: 2; e - quando presente, a ω-transaminase (Eh) compreender pelo menos 60 % de identidade de sequência em relação à SEQ ID NO:3.
6. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada por a célula ser geneticamente modificada adicionalmente para aumentar a expressão em relação à célula do tipo selvagem de pelo menos uma acil-CoA sintetase (E12) de EC 6.2.1.3 ou EC 2.3.1.86.
7. Método para produzir pelo menos um éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado, sendo que 0 método é caracterizado por compreender uma etapa para colocar pelo menos uma célula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em contato com pelo menos um alcano.
8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado por - 0 éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado ser éster metílico de ácido 12-amino-láurico, éster metílico de ácido 12-hidroxi-láurico, (di)éster metílico de ácido 12-carboxi-láurico e/ou éster metílico de ácido láurico a partir do alcano dodecano; e/ou - 0 éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado ser éster metílico de ácido 11-amino-undecanoico, éster metílico de ácido 11-hidroxi-undecanoico, (di)éster metílico deácido 11-carboxi-undecanoico e/ou éster metílico de ácido undecanoico a partir do alcano undecano.
9. Método para produzir pelo menos um éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado a partir de um alcano, sendo que 0 método é caracterizado por compreender: (a)colocar as seguintes enzimas em contato com 0 alcano: (i) Enzima E1 com a capacidade para converter 0 alcano no 1-alcanol correspondente; (ii) Enzima E2Com a capacidade para converter 0 1-alcanol de (i) no 1-alcanal correspondente; (iii) Enzima Escom a capacidade para converter o 1-alcanal de (ii) no ácido alcanoico correspondente; (iv) Enzima E4Com a capacidade para converter 0 ácido alcanoico de (iii) no éster de ácido alcanoico correspondente; e (vi) Enzima Es com a capacidade para converter o éster de ácido alcanoico de (iv) no éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico correspondente.
10. Método, de acordo com a reivindicação 9, sendo que o método é caracterizado por compreender: (b) colocar as seguintes enzimas em contato com o éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico: (vi) Enzima Εβ com a capacidade para converter o éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico correspondente de (v) no éster de ácido ω-oxo-alcanoico correspondente; ou (vii) Enzima Εβ com a capacidade para converter o éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico correspondente de (v) no éster de ácido ω-oxo-alcanoico correspondente e Enzima Ezcom a capacidade para converter o éster de ácido ω-oxo-alcanoico no éster de ácido ω-amino-alcanoico correspondente; ou (viii) Enzima Εβ com a capacidade para converter o éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico correspondente de (v) no éster de ácido ω-oxo-alcanoico correspondente e Enzima Escorrí a capacidade para converter o éster de ácido ω-oxo-alcanoico no éster de ácido ω-carboxi-alcanoico correspondente e Enzima Eu com a capacidade para converter o éster de ácido ω-carboxi-alcanoico de (vi) no diéster de ácido ω-carboxi-alcanoico correspondente.
11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 ou 10, caracterizado por - a Enzima Ei ser selecionada a partir do grupo que consiste de alcano hidroxilases P450 (Ea) e alcano hidroxilases AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3; - a Enzima E2 ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilases P450 (Ea), alcano hidroxilases AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3, álcool oxidases (Ec) e álcool desidrogenases (Ed); - a Enzima E3 ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilases P450 (Ea) de EC 1.14.15.3-, alcano hidroxilases AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3, aldeído desidrogenases (Ee), álcool oxidases bifuncionais (Ec) de EC 1.1.3.20, álcool desidrogenases bifuncionais AlkJ (Edi) e álcool desidrogenases bifuncionais (Edn) de EC 1.1.1.1 ou EC 1.1.1.2, em que Ec, Edi, e Edü têm capacidade para oxidar um 1 -alcanol diretamente para o ácido alcanoico correspondente, via um 1-alcanal; - a Enzima E4 ser selecionada a partir do grupo que consiste em éster de cera sintases (Ef) e álcool O-acil transferases (Eg); - a Enzima Es ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilases P450 (Ea) e alcano hidroxilases AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3; - e, quando presente, a Enzima Εβ ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilases P450 (Ea), alcano hidroxilases AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3, álcool oxidases (Ec) e álcool desidrogenases (Ed); - quando presente, a Enzima E7 ser uma ω-transaminase (Eh); - quando presente, a Enzima E13 ser selecionada a partir do grupo que consiste em alcano hidroxilases P450 (Ea) de EC 1.14.15.3-, alcano hidroxilases AlkB (Eb) de EC 1.14.15.3, aldeído desidrogenases (Ee), álcool oxidases bifuncionais (Ec) de EC 1.1.3.20, álcool desidrogenases bifuncionais AlkJ (Edi) e álcool desidrogenases bifuncionais (Edü) de EC 1.1.1.1 ou EC 1.1.1.2, em que Ec, Edi, e Edü têm a capacidade para oxidar um éster de ácido ω-hidroxi-alcanoico diretamente no éster de ácido ω-carboxi alcanoico correspondente, via um éster de ácido ω-οχο alcanoico; e - quando presente, a Enzima Eu ser selecionada a partir do grupo que consiste em éster de cera sintases (Ef) e álcool O-acil transferases (Eg);
12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 11, caracterizado por as Enzimas E1, E2, E3, e Es serem pelo menos uma alcano hidroxilase AlkB (Eb) e, quando presente, Εβ ser pelo menos uma alcano hidroxilase AlkB (Eb) e a Enzima E4 ser uma éster de cera sintase (Et).
13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 12, caracterizado por as enzimas serem levadas ao contato com o alcano na forma de uma célula geneticamente modificada para aumentar a expressão em relação à célula do tipo selvagem de enzimas E1 a Es e, opcionalmente, Εβ e E7.
14. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado por a célula ser selecionada a partir do grupo que consiste em E. coli, Pseudomonas sp., Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida, Pseudomonas stutzerí, Acinetobacter sp., Burkholderia sp., Burkholderia thailandensis, Cyanobacteria, Klebsiella sp., Klebsiella oxytoca, Salmonella sp., Rhizobium sp. e Fthizobium meliloti, Bacillus sp., Bacillus subtil is, Clostridium sp., Corynebacterium sp., Corynebacterium glutamicum, Brevibacterium sp., Chlorella sp. e Nostoc sp..
15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a14, caracterizado por - o éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado ser éster metílico de ácido 12-amino-láurico, éster metílico de ácido 12-hidroxi-láurico, (di)éster metílico de ácido 12-carboxi-láurico e/ou éster metílico de ácido láurico a partir do alcano dodecano; e/ou - o éster de ácido carboxílico ω-funcionalizado ser éster metílico de ácido 11-amino-undecanoico, éster metílico de ácido 11-hidroxi-undecanoico, (di)éster metílico de ácido 11-carboxi-undecanoico e/ou éster metílico de ácido undecanoico a partir do alcano undecano. Resumo da Patente de Invenção: “PRODUÇÃO BIOTECNOLÓGICA DE ÁCIDOS CARBOXÍLICOS ω-FUNCIONALIZADOS E ESTERES DOS MESMOS”. Proporciona-se uma célula microbial para produzir pelo menos um éster de ácido carboxílico ômega-funcionalizado a partir de pelo menos um alcano, em que a célula é geneticamente modificada para aumentar a expressão relativa à célula do tipo selvagem de (i) Enzima Ei com a capacidade para converter o alcano no 1-alcanol correspondente; (ii) Enzima E2Com a capacidade para converter o 1-alcanol de (i) no 1-alcanal correspondente; (iii) Enzima E3 com a capacidade para converter 0 1 -alcanal de (ii) no ácido alcanoico correspondente; (iv) Enzima E4 com a capacidade para converter 0 ácido alcanoico de (iii) no éster de ácido alcanoico correspondente; e (iv) Enzima Es com a capacidade para converter 0 éster de ácido alcanoico de (iv) no éster de ácido ômega-hidroxi-alcanoicocorrespondente. E em que a célula não compreende uma modificação genética que aumenta a expressão em relação à célula do tipo selvagem de pelo menos uma de entre as seguintes enzimas E20- E24 selecionadas a partir do grupo que consiste em: - E20 Acil-ACP tioesterase, de EC 3.1.2.14 ou EC 3.1.2.22, - E21 Acil-CoA tioesterase, de EC 3.1.2.2, EC 3.1.2.18, EC 3.1.2.19, EC 3.1.2.20 ou EC 3.1.2.22, - E22 Acil-CoA:ACP transacilase, - E23 Policetídeo sintase e- E24 Ácido hexanoico sintase.
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