BG107898A - ПОДОБР...НА ВАК'ИНА 'Р...(tm)" MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE БАК'...РИН - Google Patents

ПОДОБР...НА ВАК'ИНА 'Р...(tm)" MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE БАК'...РИН Download PDF

Info

Publication number
BG107898A
BG107898A BG107898A BG10789803A BG107898A BG 107898 A BG107898 A BG 107898A BG 107898 A BG107898 A BG 107898A BG 10789803 A BG10789803 A BG 10789803A BG 107898 A BG107898 A BG 107898A
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
mycoplasma hyopneumoniae
pigs
vaccine
mixture
use according
Prior art date
Application number
BG107898A
Other languages
English (en)
Other versions
BG66213B1 (bg
Inventor
Hsien-Jue Chu (Steve)
Wumin Li
Zhichang Xu
Original Assignee
Wyeth
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22972978&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=BG107898(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Wyeth filed Critical Wyeth
Publication of BG107898A publication Critical patent/BG107898A/bg
Publication of BG66213B1 publication Critical patent/BG66213B1/bg

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02Bacterial antigens
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02Bacterial antigens
    • A61K39/0241Mollicutes, e.g. Mycoplasma, Erysipelothrix
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04Antibacterial agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • A61P37/04Immunostimulants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/52Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
    • A61K2039/521Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552Veterinary vaccine
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511Organic adjuvants
    • A61K2039/55555Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511Organic adjuvants
    • A61K2039/55566Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/825Bacterial vaccine for porcine species, e.g. swine

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

ПОДОБРЕНА ВАКСИНА СРЕЩУ MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE БАКГИРИН
Настоящата заявка претендира за приоритет на временна заявка в процедура с входящ номер 60/256,637, подаден на 19.12.2000., чието цяло описание е включено в настоящото, за литературна справка.
Настоящото изобретение се отнася до подобрени методи за индуциране на защитет имунитет срещу Mycoplasma hyopneumoniae, по-специално чрез използуване на инактивиран Mycoplasma hyopneumoniae бактерии в количество, ефективно да имунизира животно реципиент срещу инфекция чрез Mycoplasma hyopneumoniae в единчна доза.
ПРЕДШЕСТВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА
Mycoplasma hyopneumoniae е етиологичен агент на микоплазмената пневмония при свинете.заболяването е основна причина за икономически загуби в свинепроизводството, дължащи се на намалено добив на тегло и слаба ефиктивност на храненето. Болестта причинява хронична кашлица, козината загубва лъсксавината си, забавен растеж и умърлушен вид, оставащи няколко седмици. Наблюдават се характерни лезии от пурпурни до сиви зони на уплътняване, по-специално в коремните апикални и кардиални лобове при инфектирани животни. Въпреки че болестта причинавя малка смъртност, засегнатите свине често са предразположени на вторични инфекции от опортюнистични патогени, водощи до смърт или стрес. Сами по себе си, икономическите загуби са изчислени от между 200 до 250 милиона долара годишно.
Mycoplasma hyopneumoniae е бавно растяща, деликатна бактерия, на която липсва клетъчна стена. Често е трудно да се изолира от респираторния тракт, поради Mycoplasma hyopneumoniae, обикновен вторичен агент, също локализиран в респираторния тракт. Заболяването се разпространява по въздушно капков път, аерозол продуциран от кашлица, и чрез директен контакт с засегнат или оздравяло прасе носител. Смес от инфектирани животни и неинфектирани животни води до ранно и често повторно инфектиране. Често инфекцията започва с инфектиране на малки прасенца от носител прасящи свине. Дължащо се на техниките на управлуние стадата, инфекцията може да не се прояви до по-късно в живота.обикновено се наблюдава допълнителна инфекция след отбиване, когато прасетата са съберат. Ясно заболяване нормално се наблюдава при прасета на шест седмична възраст или по-възрастни. Темповете на растеж и темповете на конверсията на храната са маркирано намалени при засегнатите животни. Лечение при прилагане на анаболи е скъпо и се нуждае от продължително използеване. Повторно инфектиране е, също така, проблем. Ваксините са понастоящем най-ефективния метод за избягване на инфекции и последствията от тях.
Fort Dodge Animal Healt (FDAH) продава Mycoplasma hyopneumoniae бактерии под името Suvaxyne® Respifend® за използуване н аваксината за предпазване на здрави свине от ф клинични прояви, причинени от Mycoplasma hyopneumoniae.
Ваксината съдържа Carbopol, като помощно средство и се препоръчва при двойна доза ваксина за прасета, при наймалко едно-седмична възраст, при втора доза две до три седмици след първата ваксинация. Въпреки това, двойната доза ваксина има един очевиден недостатък, защото изисква повторно третиране на жовотното с цел да се предостави пълно предпазване от заболяването.
Следователно, цел на настоящото изобретение е да се 0 предостави ефективна ваксина срещу, Mycoplasma hyopneumoniae, която да предизвиква защитен имунитет и да предпазва от болести, причинени от този организъм при прилагане на единична доза от ваксината.
Друга цел нанастоящото изобретение е да се предостави състав на ваксина, подходящ за използуване при свине срещу инфекция и болест, причинена от Mycoplasma hyopneumoniae, и която да може да се използува в комбинация с други бактерини и/или токсиди.
Друга цел нанастоящото изобретение е да се предостави метод за предпазване или подобряване на заболяването, където организмът причинител е Mycoplasma hyopneumoniae, чрез използуване на приведеното във лекарствена форма помощно средство, което засилва имуногенноста на бакгерина, така че да предизвика предпазващ имунитет след една единична доза от ваксината.
Други цели и особености на настоящото изобретение ще станат явни от подробното описание, което следва.
КРАТКО ОПИСАНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Настоящото изобретение се отнася до състав за имунизиране на животни срещу инфекция от Mycoplasma hyopneumoniae, който включва едно имунизиращо количество енактивиран Mycoplasma hyopneumoniae бактерии; смес от помощни средства, която включва полимер на акриловата киселина и смес от способни да метаболизират масла и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер; и фармацевтично приемлив носител, която смес на ваксина, след единично прилагане, предизвиква имунитет срещу Mycoplasma hyopneumoniae.
При един друг аспект, настоящото изобретение предоставя имуногенен състав за имунизиране на животно срещу инфекция с Mycoplasma hyopneumoniae, който включва енактивиран Mycoplasma hyopneumoniae бактерин в комбинация с горе-посочената смес от помощни средства и фармацевтично приембиви стабилизатори, носители или разредители. Помощното средство, обикновено присъства в състава за ваксина при кройна концентрация от приблизително 1-25% (v/v), и за предпочитане приблизително
5-12% (v/v). Съставът може да включва, също така, други компоненти на ваксината, включително инакгивирани бактерини или пречистени токсоиди, от един или повече патогени, като Harmonphilus parasuis, Pasteurella multiocida, Streptococcum suis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Bordatella bronchiseptica, Salmonella choleraesuis и лептоспира и могат да се прилагат по интрамускулни, подкожни, орални, аерозолни или интраназални пътища.
При един друг аспакт на настоящото изобретение се предоставя метод за предпазване на животно от заболяване, причинено от Mycoplasma hyopneumoniae чрез прилагане на единична доза от горе-посочената ваксина, която включва инактивиран Mycoplasma hyopneumoniae бактерин.
ПОДРОБНО ОПИСАНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Всички патентни, заявки за патенти и друг вид литература, цитирани в настоящото са включени в настоящото описание, като литературна справка в тяхната цялост. В случай на противоречие преобладава настоящото описание.
Както се използува в настоящото, “бактерин” е получена бактерия, която е енактивирана, и която, в комбинация с някои помощни вещества може да предизвика предпазващ имунитет за предпазване срещу заболявания или инфекции, когато се прилага на животни.
“Помощни вещества” означава състав, който включва едно или повече вещества, който засилва имуногенноста и ефикастноста на Mycoplasma hyopneumoniae бактерин в състав на ваксина.
Както се използува в заявката и патентните претенции, терминът MHDCE означава Mycoplasma hyopneumoniae ДНК клетъчен еквивалент.
“Имунизиращо количество” е това количество, което предоставя имунитет срещу Mycoplasma hyopneumoniae. “Имунизиращото количество” зависи от вида, отглеждането, възраста, размера, здравословния статус и дали животното е било преди това ваксинирано срещу същия организъм.
Настоящото изобретение предоставя ваксина срещу Mycoplasma hyopneumoniae, която е подходяща за имунизиране с единична доза. Ваксината от настоящото изобретение включва смес от помощни вещества, която засилва имуногенноста на бакгерина, като по този начин предоставя възможност за прилагане на единична доза за предизвикване на предпазващ имунитет.
Ваксината може да се приготви от свежо получени култури по методи, които са стандартни за предшестващото състояние на техниката (виж например, U.S. Patent 5,338,543 или U.S. Patent 5,565,205, както и пример 2, по-долу). Организмът може да се развива в културална среда, като PPLO (Pleuropneumonia-like organism) пълна среда [Difco]. Laboratories]. Прорастването на организма се следи чрез стандартни техники, като определяне на изменението цветните единици (CCU), и събиране, когато се достигне достатъчно висок титър. След това, суровият продукт може да се концентрира или да се лиофилизира по конвенционални методи преди въвеждането в ваксиналната форма. Могат да се използуват други методи, като тези описани в Thomas et al., Agri-Practice, Vol. 7 No. 5, pp. 26-30.
Ваксината от настоящото изобретение включва инактивиран Mycoplasma hyopneumoniae бактерии, в комбинация със смес от помощни вещества и един или повече фармацевтично приемливи носители. Подходящи за използуване носители включват водна среда, например, физиологичен разтвор, физиологичен разтвор с фосфатен буфер, Минимална Есенциална Среда (МЕМ), или HEPES буфер.
Сместта от помощни вещества, за използуване в съставите на ваксината от настоящото изобретение засилват имунния отговор и съдържа смес от полимер на акриловата киселина със смес от способни да метаболизират масла, например ненаситени въглеводороди на терпен или негови хидрогенирани продукти, за предпочитане сквалан (2,3,10,15,19,23-хексаметилтетракозан) или сквален и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер. Един такъв полимер на акриловата киселина може да е хомополимер или съполимер. Полимерът на акриловата киселина е, за предпочитане, карбомер. Карбомерите са достъпни на пазара под търговското наименование Carbopol. Полимерите на акриловата киселина, както е описано, например, в U.S. Patent 2,909,462 и U.S. Patent 3,790,665, чиито описания са включени в настоящото, като литературна справка. Полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимерите са повърхностно активни вещества, за предпочитане течни сурфактанти, които спомагат при суспендирането на твърди или течни съставни части. Сурфактантите са достъпни на пазара, като полимери под търговското наименование Pluronic®. Предпочитан сурфактант е полоксамер 401, който е достъпен на пазара под търговското наименование Pluronic® L121.
Имуногенно стимулераната смес от помощни вещества е характерно присъства в състава на ваксината от изобратанието в v/v от приблизително 1-25% (v/v), и за попредпочитано приблизително 5-12% (v/v). Количеството на използуваната смес от помощни вещества и съотношението на двата компонента от помощни вещества може да варира според прибавянето на други бакгерини или пречистени токсоиди. Сместта от помощни вещества включва обикновено способни да метаболизират масла, полимер на акриловата киселина и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер, приведени в лекарствена форма, като емулсия във водна среда.
В тази смес от помощни вещества, способните да метаболизират масла и полимера на акриловата киселина могат да присъстват в количества в граници от приблизително 10 до 150 ml/L и от приблизително 0,5 до 10 g/L, съответно. При един предпочитан вариант за изпълнание на сместа от помощни вещества, компопентьт на сместта от способни да метаболизират масла и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер е смес от скварен и Pluronic® L121 (полоксамер 401), който може да присъства в количество от приблизително 50 до 100 ml/L и карбоксиметиленов полимер е Carbopol 934Р (Carbamer 934Р), който може да присъства в количество от приблизително 2 ml/L. Характерно, сместта от помощни вещества съдържа приблизително съотношение 1:23 до 1:50 от полимера на акриловата киселина към способни да метаболизират масла/полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер смес.
Предпочитани полимери на акриловата киселина са тези, отбелязани от B.F. Goodrich, като Carbopol 934 Р NF и 941 NF, които са полимери на акриловата киселина, омрежена с полиалилзахароза и, които са с химична формула (СН2СНОООН)п. Тези полимери образуват телове, подходящи за формулиране с водни носители. Предпочитан полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимери са Q нейонните сурфактанти, отбелязани от BASF като Pluronic®
L121, L61, L81 или L101.
Ваксината от настоящото изобретение може да се прилага интрамускулно, подкожно, интраназално, интраперитонеално или орално, за предпочитане интремускулно или подкожно.
Ваксината от изобретението обикновено включва инактивиран Mycoplasma hyopneumoniae, способни да метаболизират масла, полиоксиетилен-полиоксипропилен 0 блок съполимер и полимер на акриловата киселина, под формата на мастно водна емулсия. Ваксината за предпочитане съдържа полимер на акриловата киселина в концентрация в граници от 0,5 до 10 g/L. за предпочитане ваксината съдържа способни да метаболизират масла в концентрация в граници от 2 до 6 ml/L. Ваксината, за предпочитане, съдържа полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер в концентрация в гланици от 1 до 3 ml/.
За прилагане в единични дози, ваксината трялва, за предпочитане, да съдържа едно количество Mycoplasma hyopneumoniae бактерии, съответстващо на приблизително
1x108 до 3x1011 MHDCE/mL, за предпочитане прибилизително 1х109 MHDCE/mL. Приблизително един до пет mL, за предпочитане 2 mL, могат да се приложат на животно интрамускулно, подкожно или интраперитонеално. Един до десет mL, за предпочитане 2 до 5 mL могат да се приложат орално или интраназално.
Следните примери за изпълнение се счита, че по-пълно илюстрират изобретението, без да ограничават неговия обхват.
ПРИМЕРИ ЗА ИЗПЪЛНЕНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
ПРИМЕР 1
Препарат на Mycoplasma hyopneumoniae бактерии за състава на ваксината
Описание на вирусния суров продукт
Mycoplasma hyopneumoniae може да се получи да се получи от който и да е от лесно достъпните източници. При един вариант за изпълнение на изобретението може да се използува Mycoplasma hyopneumoniae щам Р-5722-3. културата се получава от С. Armstrong, Purdue University, West Lafayette, India. Като следва рецептурата за култивиране на Mycoplasma hyopneumoniae, те се пасират седемкратно в Mycoplasma hyopneumoniae бульон, за да се установи Master Seed.
Клетъчна култура
Mycoplasma hyopneumoniae се култивира в среда, съдържаща Bacto PPLO Powder, дрождев екстракт, глюкоза, Lцистеин хидрохлорид, ампицилин, талиев ацетат, фенол-рот, противопенител, нормален стерилен свински серум и вода за един период от време в граници от 18-144 часа. За инактивиране се прибавя бинарен етиленимин (BEI) към продуктната култура във ферментационния съд. pH се довежда до 7,4 и след това се събира, съгласно конвенционални процедури, за да се осигури Mycoplasma hyopneumoniae бактерии.
ИЗГОТВЯНЕ НА СЪСТАВ НА ВАКСИНА
Състав на Консерваните и Използувани Пропорции
Полученият бактерин се консервира чрез прибавяне на тимерозал и етилен диаминин тетра-оцетна киселин, тетранатриева сол (EDTA) при не повече от 0,01% и 0,07%, съответно. Ампицилин U.S.P. присъства в растежната хранителна среда при 0,250 g/L. Концентрацията на остатъчния ампицилин варира в крайния продукт според обема на получените течности, при концентрация на остатъчния ампицилин в получения краен продукт не повече от 30 ug/ml.
СТАНДАРТИЗИРАНЕ НА ПРОДУКТА
Концентратът на Mycoplasma се определя количествено чрез ДНК Флуорометрично Изследване.
Смес от способни да метаболизират масла, която съдържа един или повече въглеводороди на терпен и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер, например сквалан/Pluronic® L121 смес, се приготвя чрез разтваряне на 10 g натриев хлорид, 0,25 g калиев хлорид, 2,72 дибазичен натриев фосфат, 0,25 монобазичен калиев фосфат, 20 mL Pluronic® L121 (BASF Corporation) 40 ml Squalane (Kodak),
3,2 mL Tween 80 в 900 ml пречистена вода, допълване до 1000 ml. След размесване, съставките могат да се автоклавират. След това сместта се хомогинизира до образуване на стабилна емулсия. Може да се добави формалин до крайна концентрация от 0,2% или да се добави тимерозол до крайна концентрация от 1:10,000.
СГЛОБЯВАНЕ НА ЕДИНИЦИТЕ, ЗА ПОЛУЧАВАНЕ НА СЕРИЯ Задоволителни концентрати. на Mycoplasma Q hyopneumoniae са асептично комбинирани с помощни вещества, консерванти и разредители, в стерилни контейнери с бъркалка и се смесват за неповече от 30 минути.
Количества за 1,000,000 дози (2 ml всяка)
Концентрат на Mycoplasma (>1,0х101° MHDCE/ml) 400,000ml 20,0
сквалан/Pluronic® L121 смес 100,000.ml 5,0
Carbopol (2% w/v във вода) 200,000 ml 10,0
Разтвор на Тимерозал 1 % w/v във вода и EDTA (тетранатриева сол) 7 w/v% 18,000 ml 0,9
Стерилен физиологичен разтвор 1,282,000 ml 64,1
pH на серията се довежда до 7,0 + 0,2.
MHDCE=Mycoplasma hyopneumoniae ДНК Клетъчен
Еквилалент
МЕТОД И ТЕХНИКИ ЗА ПЪЛНЕНЕ И ЗАПЕЧАТВАНЕ НА
КРАЙНИТЕ КОНТЕЙНЕРИ
Продуктът може да се филтрира грубо през стерилен елемент 200-500 микронен филтър и се пълни при условия, определени в 9 CFR 114,6 в стерилни крайни контейнери в определено помещение за операцията пълнене. Стъклените или пластамосови контейнери се затварят с гумени стопери и се гофрират с алуминева тапа. Всяка 2 ml-ова доза съдържа не по-малко от 1х109 Mycoplasma hyopneumoniae ДНК клетъчни еквиваленти.
ТЕСТВАНЕ ЗА СИЛА
Маси или проби от краен контейнер от завършения продукт може да се тестват за сила както следва: метод на Изследване за Тестване на Сила: използузват се ICR женски мишки, на възраст от шест до седем седмици, доставени от Harlan Sprague Daweley или друг приемлив доставчик. Необходим е минимум от 20 мишки за имунизиране с Неизвестен и Контролен бактерии. Минимум от пет мишки се задържат като неинокулирани контроли. Тест и контролните бактерини се смесват индивидуално съвсем. Стерилни, оставени на разположение спринцовки, пригоден с 25-ти размер на 5/8 инча игли се използуват за инокулиране на мишките подкожно в ингвиналната зона с 1/10-та от доза на животно гостоприемник (0,2 ml). Всяка група мишки се подслонява като индивидуална единица и й се дава свободон достъп до храна и вода в продължение на 14 дни. След това, всяка мишка се анестизира и се поставя на гръб. При използуване на една ръка, главата се навежда и един преден крак се отдалечава от тялото. Използува се скалпел за срязване на кожата на прииблизително инч между отдалечения крак и торакса, като се прекъсва брахиалната (мишнична) артерия. Използува се спринцовка от 3 ml без игла, кръвтта която изтича от среза се събира. Кръвтта се Q излива в белязана епруветка и се отставя да се съсири.
Съсирените епруветки се центрофугират при 1,000 х д, за да се отдели серума от съсирека. Индивидуалните серуми се съхраняват при -20°С или при по-студено, до използуването им.
СЕРОЛОГИЧНО ТЕСТВАНЕ:
Използва се ELISA процедура, за да се измери отговора на антитялото на мишка към Контролен и/или Неизвестен 0 бактерии. ELISA процедулата се провежда при използуване на на Immulon II Плоскодънни Микротитърни блюдана разположение от Dynatech или друг еквивалент и четящо устройство за ELISA блюда.
РЕАГЕНТИ ЗА ТЕСТА: Физиологичен разтвор, буфериран с фосфатен буферTween (PBST) (pH доведено до 7,2 -7,4 с 5 N NaOH или с 5 N HCL).
Количество на литър
Съставки Литър
NaCI 8,50 грама
Na2PO4 0,22 грама
Na2HPO4 1,19 грама
Tween-20 0,50 ml
Допълва се c дейонизирана вода 1,000,00 ml
© Буфериран с глицин физиологичен разтвор (GBS) ( pH доведено да 9,5-9,7 с 5N NaOH или с 5N HCL).
Съставки Количество на литър
Глицин 0,75 грама
NaCI 8,50 грама
Допълва се с дейонизирана вода 1,000,00 ml
Положителен контролен серум: Положителният С контролен серум е сбор от серуми от мишки, ваксинирани с
Mycoplasma hyopneumoniae бактерии.
Помощни средства и субстрати:
От Kirkegaard and Perry Laboratories, Inc. (Caralog No.
074-1802) се получава Афинитетно Пречистен Анти-Миши IgG маркиран с Пероксидаза. Процедурата да определяне на оптималното разреждане на помощното средство е описано подробно по-долу. Пероксидазните Субстратни Разтвори (ABTS) се получават от Kirkegaard and Perry Laboratories, Inc.
Титруване на помощните средства: Immulon II Плоскодънно Микротитърно блюдо се покрива с 100 ul на ямка от 20 ug на mL Mycoplasma hyopneumoniae Антиген на Цяла Клетка, разтворен в 10 mM GBS. Блюдото се инкубира за не по-малко от един час при 37°С+2°С и се прехвърля на 2-7°С за не по-малко от една седмица. Преди да се използва, блюдото се промива трикратно с PBST, при една минута време за напояване между всяко промиване, й се изцежда до сухо. Приготвя се Положителен Контролен Серум в PBST при разреждане от 1:40, а разреденият Положителен контролен серум (100 ul/блюдо) се прибавя към половината от ямките на блюдата. Към останалата половина от ямките се прибавя РВБТблюдото се инкубира един час при стайна температура, след което блюдото се промива трикратно. Серумът с помощното средство се разрежда серийно с PBST два пъти, като се забочва от 1:100 разреждане и се завършва с 1:10,240 разреждане. 100 ul от всяко разреждане на помощното средство се прибавят към четири ямки на Положителения серум и към четири ямки с PBST и се остават в продължение на половин час да реагират на стайна температура. Блюдата се промиват четири пъти и се добавят 100 ul Пероксидазен Субстратен Разтвор (abts) на ямка. Блюдото се отчита при настройване на двойна дължина на вълната от Τλ=450. Избира се разреждане на Помощното средство, което позволява отчитане от 0,850 до 1,050 за Положителния Контролен Серум, когато стойността на PBST Конотрола се извади от стойноста на Положителния Контролен Серум.
ТЕСТ АНТИГЕН
Mycoplasma hyopneumoniae антиген е препарат от цели клетки и се доставя от Fort Dodge Animal Health.
ELISA се провежда както следва: Използват се Dynatech Immulon II Плоскодънни Микротитърни блюда. Една ампула с лиофилизиран Mycoplasma hyopneumoniae антиген от цели клетки се възстановява от десет ml Буфериран с глицин физиологичен разтвор (GBS). Концентрацията на възстановения протеин от Mycoplasma е 20 pg/ml. 100 μΙ © (2 pg) от разредения антиген се прибавят, след това, към всички ямки на блюдото. Блюдото се инкубира при 37°С ± 2°С за не по-малко от един час, след което се прехвърля на 2-7°С за минимум 18 часа и максимум от едена седмица. Блюдата се промиват трикратно с PBST, напояват се една минута между всяко промиване, след което се изцеждат до сухо. Серумите се разреждат до 1:40 в PBST. Положителният контролен серум се включва в четворен размер при всяко блюдо. Обема на пробата на ямка е 100 pl. Серийните Тестови С Серумни Проби и Контролните Серумни Проби се тестват в две повоторения на същото блюдо. Блюдата се инкубират един час при стайна температура и се промиват трикратно с PBST. 100 pl помощно средство на Анти-Миши IgG маркиран с Пероксидаза (Kirkegaard and Perry ), разредено в PBST се прибавят към всички ямки, а те се инкубират 30 минути при стайна температура. Блюдата се промиват четирикратно с PBST. 100 pl Пероксидазен Субстратен Разтвор (ABTS) се прибавят към всички ямки и блюдата се инкубират докато Позитивната Серумна Контрола не достигне OD405 (450) от
0,850 до 1,050, когато устройството е празно срещу PBST Контролни ямки. Блюдата се отчитат и празни срещу PBST ямките. За да бъде валиден теста, серумите от мишки инкубирани с Конотролен бактерин трябва да продуцират минимална средна стояност от 0,5000, а серумите от неваксинираните конторлни мишки не трябва да надвишават максималната средна стойност от 0,1000. Иначе казано, разликата между средените стойности на серумите на мишки инокулирани с Конотролен бактерин и на серумите от Q неваксинираните конторлни мишки трябва да надвишава или да е равен на 0,400.
Средните стойности за Серийните Ваксинирани, за Конролните Ваксинирани и за Контролите са изчислени и определени както следва: за да се счита за задоволителен, Тестовият бактерин трябва да проявява средна стойност на Оптическа Плътност равана на или по-голяма от Конотролата. Или, при използуване на One-Tailed Student’s Test, Тестовият бактерин не трябва да е значително по-нисък (р<0,05 q дверителен интервал) от Контролния бактерин. Която и да е изчислена Т-стойност равана на или по-голяма от 1,686 би означавала значителна разлика между Контролния и Тестовия бактерин, и би била причина Тест бактеринът да се отхвърли. . Която и да е изчислена Т-стойност по-ниска от 1,686 би означавала задоволителна серия. Който и да е тестов бактерин, определен чрез Теста за незадоволителен поради каквато и да е причина, несвързана с ефикастноста на продукта, се тесетва отново, а първоначалният тест се счита за невалиден.
ПРИМЕР 2
ТЕСТ ВАКСИНА:
Ваксината за тестване се приготвя съгласно процедурата, разглеждана в детайли в пример 1, при използване на 5% от смес от способни да метаболизират масла, която включва един или повече въглеводороди на терпен и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер (сквален/Pluronic® L121 смес) и 0,2% полимер на акриловата киселина (Carbopol), като помощно средство, и 2x109 © Mycoplasma hyopneumoniae ДНК клетъчен еквивалент (MHDCE) на доза.
ПРИМЕР 3
Това изследване се определя за демонстриране на четири месечна продължителностн на имунитета (DOI) при прасета, индуцирани чрез едно-дозово ваксиниране с ваксината от пример 2, при три седмична възраст.
При това изследване се провеждат два отделни опита с 0 животни. Всички прасета при двата опита са серо-отрицателни (тигър на антитяло <10) по времето на ваксинирането, което означава, че животните са чувствителни на Mycoplasma hyopneumoniae. Всички прасета в контролната група остават серо-отрицателни преди заразяването. Това означава, че имунният отговор при ваксинираните прасета се дължи на ваксината, а не на каквото и да е влияние на средата.
При първия опит, ваксината от пример 2 се развива заедно с продукт от търговската мрежа, Ingelvac М. hyo® производство на Boehringer Ingelheim (Bl), чрез висока степен на заразяване с вирулентен М. hyopneumoniae (4x105 организми). Двадесет и две (22) прасета на възраст от 18-21 дни се ваксинират с ваксината от пример2 интрамускулно (IM), а осем (8) прасета с Ingelvac М. hyo® [серия 271 032]. Двадесе и две (22) прасета служат като контроли за заразяването, а десет (10) като контроли без заразяване. Прасетата във ваксинираните и заразените контролни групи се заразяват с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae четири месеца след ваксинирането. Прасетата, ваксинирани с ваксината от пример 2 имат средни лезии на белите дробове © от 15,9%, а заразените контролни животни имат средни лезии на белите дробове от 19,6%. Средни лезии на белите дробове в групата, ваксинирана с ваксината от пример2 са по-малко от контролите, въпреки че прасутата са били заразени с повисока доза, отколкото препоръчаната от Iowa State University (ISU), въпреки че разликата не е значителна (р=0,19).подобно, когато търговският продукт, Ingelvac М. hyo® се определя в същата група от животни със същата доза на заразяване се наблюдава подобно ниво на средни лезии на белите дробове © (14,6%). Няма знечими разлики, също така, между групата, ваксинирана с Ingelvac М. hyo® и контролната група (р=0,27) и между групата, ваксинирана с Ingelvac М. hyo® игрупата, ваксинирана с ваксината от пример 2.
При втория опит, вааксината от пример 2 се определя чрез заразяване с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae при степен, препоръчана от ISU (1,0х106 организми) четири месеца след ваксинирането. Двадесет и три (23) прасета се ваксинират с едена доза от ваксината на възраст от 21 дни, 25 прасета служат за контрола на заразяване, а 7 прасета за кантрола без заразяване. Прасетата в контролната група и заразената група се заразяват с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae четири месеца след ваксинирането. Конотролната група има средни лезии на белите дробове от 10,4%, а ваксинираната група има средни лезии на белите дробове от 5,5%. Има значителна разлика между ваксинираната група и контролната група (р=0,031).това означава, че ваксината от пример 2 е ефикасна и стимулираща предпазния имунитет, която може да трае найО малко четири месеца след ваксинирането с единична доза при прасета на възраст от три седмици.
Когато данните, имащи връзка с ваксината от пример 2 от двата опита, се комбинират и анализират, средните лезии на белите дробове на вексиниранат група са значително нониски от контролната група.
В заключение, ваксината от пример2 индуцира предпазен имунитет срещу заразяване с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae четири месеца след ваксиниране q с единична доза при прасета на възраст от три седмици.
ЕКСПЕРИМЕНТАЛНИ ДАННИ
За това изследване се Ппровеждат два отделни опита.
При първия опит, шестдесет и седем (67) прасета се разпределят в четири групи, ато се използува Microsoft Excel рандомизирана програма. Двадесет и четири (24) прасета се ваксинират с единчна доза от ваксина, приготвена съгласно пример 2 интрамускулно (IM) на възраст от 18-21 дни. Двадесет и четири (24) прасета служат като контроли за заразяването, а десет (10) като контроли без заразяване.
Девет прасета се ваксинират IM с търговския продукт Ingelvac М. hyo® [серия 271 032, производство на Boehringer Ingelheim (Bl)], съгласно инструкциите за експроатация. Пет прасета (две прасета ваксинирани с ваксината от пример 2, едно ваксинирано BI ваксина и две контролни) умират по време на ваксинационния период на задържане, поради причини несвързани с ваксинирането. Осотаналите прасета във ваксинираната група и заразената контролна група се заразяват с 14 ml вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae (1,4x105 организми) четири месеца след ваксинирането. На прасетата от всичките четири групи се прилага евтаназия 30 дни след заразяването и се установяват лезиите на белите дробове при всяко прасе от опита.
При втория опит, двадесет и пет (25) прасета се ваксинират ΙΜ с единична доза ваксина, изготвена съгласно пример 2, при възраст от 21 дни. Двадесет и пет (25) прасета служат за контроли за заразяване, а десет (10) сбужат за контроли без заразяване. Две прасета умират поради причини не свързани с ваксинирането, а едно прасе по погрешка се продава по време на периодана задържане на ваксинирането. Останалите прасета в заразената и ваксинираната контролни групи се заразяват с 10 ml вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae (1,0x106 организми) четири месеца сле д ваксинирането. Две прасета умират през наблюдателния период след заразяването , пореди причини не свързани с ваксинирането/заразяването. Останалите прасета във всички групи се подлагат на евтанизия 30 дни след заразяването се установяват лезиите на белите дробове за всяко прасе от опита.
ВАКСИНИРАНЕ
На всяко прасе от ваксинираната група се дават 2 ml-ова доза от тестваната ваксина IM отстрани на врата.
ЗАРАЗЯВАНЕ И АУТОПСИЯ:
Вирулентният суров продукт от Mycoplasma hyopneumoniae за заразяване, замразен (-70°С) хомогенат от бял дроб, се изготвят от Dr. Eileen Thacker от Iowa State University (ISU). Потвърждава се, че суровият продукт за Q заразяване и съдържа приблизително 107 Mycoplasma hyopneumoniae организми на ml. Препоръчителната доза за заразяване е 10 ml от 1:100 разреден суров продукт (т.е., 1,0 х 106 организми).
Прасетата във ваксинираните и заразените контролни групи при първия опит се заразяват с 14 ml от 1:100 разреден суров продукт (т.е., 1,4 х 106 организми). Прасетата при втория опит се заразяват с 10 ml от 1:100 разреден суров продукт (т.е., 1,0x106 организми)., както се препоръчва.
ОВ деня на заразяването, хомогенатът се размразява бързо под гореща вода и се разрежда съгласно препоръките от ISU, при използуване на стерилна растежна среда за Mycoplasma hyopneumoniae. Прасетата се успокояват със смес от Xylazine-Ketamine-Telazol™, състояща се от 50 mg/ml Xylazine, 50 mg/ml Ketamine и 100 mg/ml Telazol™ . анестетичната смес се прилага IM при 0,01-0,02 ml/lb телесно тегло. На всяко прасе му се дава единична 14 ml (парви опит) или 10 ml доза (втори опит) от продукта за заразяване, интратрахеално. За да се подсигури правилното разполагане на иглата се пропуска въздух в спринцовката преди прилагането на заразяващата доза. Не ваксинираните не заразени контролни прасета се държат в отделни помещения и не се заразяват.
дни след заразяването (DPC) всички прасета се подлагат на евтаназия. Отстраняват се белите дробаве и се преброяват големите белодробни лезии за всяко, с придобитите знания от тестовите групи.
С СЪБИРАНЕ НА ПРОБИ И ТЕСТВАНЕ:
Събират се кръвни проби от всички прасета в деня на ваксинирането (0 DPV), един месец след ваксинирането (1 MPV), 4 MPV/0 DPC и 30 DPC за серумни антитела срещу Mycoplasma hyopneumoniae, както се откриват с компетитивна ELISA комплект (произведен от DAKO Co.), серумните проби се съхраняват при -20°С преди началото на теста.
АНАЛИЗ НА ДАННИТЕ:
Броят на белодробните лезии се сравнява между вакасинираните и не ваксинираните групи чрез анализ на варианса (ANOVA). Броят на белодробните лезии се транформира с arcsine, за подобряване на разпределението на остатъците.
РЕЗУЛТАТИ И КОМЕНТАРИ:
СЕРОЛОГИЯ: Всички прасета от двата опита се тестват за серумни антитела срещу Mycoplasma hyopneumoniae чрез търговски ELISA тест комплект, при използуване на 1:10 разреждане на всички тестове. Всички прасета са серонегативни (титър на антитяло<10) по време на ваксинирането, което означава, че животните са чувствителни към Mycoplasma hyopneumoniae. Всички прасета в контролните групи остават серонегативни преди заразяването. Това означава, че имунният отговор при ваксинираните прасета се дължи на ваксината, а не на външни фактори.всички прасета във ваксинираните групи и повечето прасета в заразените контролни групи (18 от 22 прасета при първия опит и 15 от 25 при втория опит) серо-конвертирани на С Mycoplasma hyopneumoniae след заразяването, докато всички не заразени животни остават серонегативни. Това означава, че заразяването е специфично за Mycoplasma hyopneumoniae. Серологичният статус на тези животни е обобщен в таблица 1.
ТЕСТВАНЕ НА ИМУНОГЕННОСТ ПРИ ПЪРВИЯ ОПИТ: Първият опит се провежда за определяне дали ваксината от пример 2 би могла да стимулира силен имунитет, който да предпазва от по-високи степени на заразяване, отколкото препоръчителните от ISU четири месеца след q ваксинирането. Този опит сравнява, също така, ваксината от пример 2 с намиращата се в търговската мрежа, Ingelvac М. hyo®, за нейната способност да стимулира предпазния имунитет четири седмици след ваксинирането.
Двадесет и две прасета, ваксинирани с FDAH Suvaxyn МН-One и осем прасета с лицензиран продукт, Ingelvac М. hyo® серия 271 032, се заразяват с 10 ml от 1,4 х 106 организми на прасе, от материала за заразяване (1,0х106 организми на прасе се препоръчва от ISU, виж раздел
5.5).двадесет и две прасета служат като контроли за заразяване, а 10 прасета, като не заразени контроли.
Процентът на белодробни лезии са обобщени в таблица 2. прасетата, ваксинирани с ваксината от пример 2 имат среден размер на белодробни лезии от 15,9%, а заразените контролни прасета имат среден размер на белодробни лезии от 19,6%. Белодробните лезии в групата, ваксинирана с ваксината от пример 2 са по-малко от контролната група, даже когато прасетата са били заразени с по-висока доза Mycoplasma hyopneumoniae. Въпреки това, разликата е незначителна (р=0,19). Подобно, когато продуктът от търговската мрежа, Ingelvac М. hyo® се определя в същата група животни със същата доза на заразяване, се наблюдава подобна степен на белодробни лезии (14,6%). Няма значима разлика между групата ваксинирана с Ingelvac М. hyo® и контролната група (р=0,27) и между групата ваксинирана с Ingelvac М. hyo® и групата ваксинирана с ваксината от пример 2 (р=0,88).
Въпреки че, се регистрира незначително намаление на бройката на лезиите в групата, получаваща ваксината от пример 2, данните, получени при този опит предполагат, че по-високата доза на заразяване (1,4 х 106 организми), използувана при този опит, е най-вероятно поразителна, даже и за имунитета на прасета, стимулирани с продукта Ingelvac М. hyo® от търговската мрежа. Степента на заразяване е, найвероятно, не подходяща за изследването за определяне размерите на ваксиниране/заразяване на 20-25 животни, въпреки че с по-големи групи е възможно да се докаже тази значимост.
ТЕСТВАНЕ НА ИМУНОГЕННОСТ ПРИ ВТОРИЯ ОПИТ:
Прасетата при ваксинираните и заразените контролни групи при втория опит се определят с доза на заразяване (1,0 х 106 организми), както се препоръчва от ISU, четоро месеца след ваксинирането, за да се покаже четири месечно DOI. Процентът на белодробни лезии се обобщава в таблица 3. контролната група има среден брой белодробни лезии от 10,4%. Ваксинираната група е със среден брой белодробни лезии от 5,5%.съществува една значителна разлика между ваксинираните и контролните групи (р=0,031). Това означава, че ваксината от пример 2 е ефикасна при стимулиране предпазния имунитет, което може да се запази поне четири месеца след прилагане на единична доза , при прасета на възраст от три седмици.
ОЦЕНЯВАНЕ НА КОМБИНИРАНИТЕ РЕЗУЛТАТИ ОТ ДВАТА ОПИТА:
Докато двата опита се различават значително, действието от опитите върху групите не е знечителен. размерът на ефекта от група е подобен между двата опита. Следователно, ефектът върху групите би могъл да се оцени без да се взима предвид опита. Щом анализът на целия модел показва, че взаимовръзката между група и опит е незначителна, това поддържа схващането, че ефектът на група е същия при двата опита и оправдава комбинирането на данните от двата опита в един единствен анализ. В такъв случай, когато данните отнасящи се до ваксината от пример 2 от двата опита се комбинират и arcsine трансформирайте променливи за белодробни лезии се анализират с група и опит, като независими променливи (редуциран модел), групата е статистически значима (р=0,013).
ТАБЛИЦА 1
Обобщение на серологичния статус за Mycoplasma hyopneumoniae при контролни и ваксинирани прасета
Първи опит положителен/отрицателен (1:10) при
ГРУПА Брой прасета ODPV -1DPC 30DPC
FDAH ваксина 22 0/22 0/22 22/22
BI ваксина 8 0/8 4/8 8/8
Контрола заразяване 22 0/22 0/22 18/22
Незаразена контрола 10 0/10 0/10 0/10
Втори опит положителен/отрицателен (1:10) при
ГРУПА Брой прасета ODPV -1DPC 30DPC
FDAH ваксина 23 0/23 6/23 23/23
Контрола 25 0/25 0/25 14/25
Незаразена контрола 7 0/7 0/7 0/7
ТАБЛИЦА 2
Обобщение на процента на белодробни лезии при първия опит (свръхдоза*)
ГРУПА Брой прасета Среден брой белодробни лезии Р-стойност
FDAH ваксина 22 15,90% 0,19**
BI ваксина 8 14,60% 0,27***
Контрола 22 19,60%
Незаразена контрола 10 0% 0,88****
* Прасетата се заразяват с 1,4 х 106 организми на прасе (ISL препоръчителна доза 1,0 х 106 организми на прасе) ** Сравнение между група ваксинирана с FDAH и контролна група *** Сравнение между група ваксинирана с BI и контролна група **** Сравнение между група ваксинирана с BI и група ваксинирана с FDAH
ТАБЛИЦА 3
Обобщение на процента на белодробни лезии при втория опит (препоръчителна доза)
ГРУПА Брой прасета Среден брой белодробни лезии Р-стойност
FDAH ваксина 23 5,50% 0,031**
Контрола 25 10,40%
Незаразена контрола 7 0,77%
* Прасета заразени с препоръчаната от ISU доза (1,0 х 106 организми на прасе) ** Сравнение между група ваксинирана с FDAH и контролна група
ПРИМЕР 3
Оценяване на дълготрайния имунитет индуциран от състав на ваксината от изобретението срещу вирулентно заразяване шест месеца след прилагане на единчна © доза
При използуване на, по същество същата процедура, описана в примери 1 и 2 и при използуване на количествата, посочени по-долу, се приготвя тест ваксина А.
Тест ваксна А
Количества за 1,000,000 дози (2 ml всяка)
Концентрат на Mycoplasma (>1,Ox1O10 MHDCE/ml) 1,200,000 ml 60,0
сквалан/Pluronic L121 смес 200,000 ml 10,0
Carbopol (2% w/v във вода) 200,000 ml 10,0
Разтвор на Тимерозал 1% w/v във вода и EDTA (тетранатриева сол) 7 w/v% 18,000 ml 0,9
Стерилен физиологичен разтвор 382,000 ml 19,1
pH на серията се довежда до 7,0 ± 0,2.
MHDCE = Mycoplasma hyopneumoniae ДНК клетъчни еквиваленти
ОБОБЩАВАНЕ
Трийсет и три 21-дневни прасета се приемат за настоящото оценяване. Двадесет прасета се ваксинират с езна доза от ваксина А интрамускулно (IM) на възраст от три седмици, десет прасета служат за не ваксинирани контроли, а три прасета служат за не заразени от околната среда контроли.
Всички прасета са серонегативни (титър на антитела <10) по времето на ваксинирането, което означава, че животните са чувствителни на Mycoplasma hyopneumoniae. Всички животни в контролната група остават серонегативни прези заразяването. Това означава, че имунният отговор във ваксинираните прасета се дължи на ваксината, а не на каквото и да е излагане на заобикалящата среда.
Шест месеца след ваксинирането, 20 вакасинирани прасета и 10 не ваксинирани контролни прасета се заразяват с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae (1,0 х 106 организми на прасе). Три прасета служат за не заразени контроли. Ваксинираните прасета имат среден брой белодробни лезии от 3,6%, а заразените контролни прасета имат среден брой белодробни лезии от 14,6%. Броят на белодробни лезии във ваксинираната група е значително по-малък от този в контролните групи (р=0,0215).
Данните, получени при оценяването показват, че тест ваксина А индуцира дълготраен предпазен имунитет срещу заразяване с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae шест месеца след прилагане на единична доза на ваксиниране.
ПРОЕКТИРАНЕ НА ЕКСПЕРИМЕНТА
Трийсет и три 21-дневни прасета се определят рандомизирано в три групи (ваксинирана група, заразена контролна група и не заразена от околната среда група), при използуване на Microsoft Excel рандомизирана програма на литър. Двадесет (20) прасета се ваксинират с единчна доза от ваксина А, интрамускулно (IM) на възраст от 3 седмици. Десет (10) прасета служат като контроли за заразяването, а три прасета за незаразени от околната среда контроли. Прасетата от ваксинираната контролна група и от заразената контролна група се заразяват с 10 ml вирулентна култура на Mycoplasma hyopneumoniae (1,0 х 106 организми) на прасе, шест месеца след ваксинирането. Три не ваксинирани прасета се използват за не заразени контроли. Заразените прасета и не заразените контроли са подлагат на евтаназия 25 дни след заразяването и се преброяват белодробните лезии за всяко прасе.
На всяко прасе от ваксинираните групи се прилагат 2 mlдоза от тест ваксината IM отстрани на врата.
ЗАРАЗЯВАНЕ И АУТОПСИЯ:
Вирулентният Mycoplasma hyopneumoniae суров продукт за заразяване, замразен (<-70°С) хомогенат от бял дроб, се изготвят от Dr. Eileen Thacker от Iowa State University (ISU). Потвърждава се, че суровият продукт за заразяване е чист и съдържа приблизително 107 Mycoplasma hyopneumoniae организми на ml.
Прасетата се заразяват с 10 ml от 1:100 разреден суров продукт (т.е., 1,0 х 106 организми).
*
В деня на заразяването, хомогенатът се размразява бързо под гореща вода и се разрежда съгласно препоръките на ISU, при използуване на стерилна растежна среда за Mycoplasma hyopneumoniae. Прасетата се успокояват със смес от Xylazine-Ketamine-Telazol™, състояща се от 50 mg/ml Xylazine, 50 mg/ml Ketamine и 100 mg/ml Telazol™. Анестетичната смес се прилага IM при 0,01-0,02 ml/lb телесно тегло. На всяко прасе му се прилага единична 10 ml доза от продукта за заразяване (1,0 х 106 организми), © интратрахейално. За да се подсигури правилното разполагане на иглата се пропуска въздух в спринцовката преди прилагането на заразяващата доза. Не ваксинираните не заразени контролни прасета се държат в отделни помещуния и не се заразяват.
дни след заразяването (DPC) всички прасета се подлагат на евтаназия. Отстраняват се белите дробаве и се оценяват големите белодробни лезии, както е описано в пример 3..
СЪБИРАНЕ НА ПРОБИ И ТЕСТВАНЕ:
Събират се кръвни проби от всички прасета в деня на ваксинирането (0 DPV), 35 DPV, -1 DPC и 26 DPC за да се определят серумните антитела срещу Mycoplasma hyopneumoniae, както се откриват чрез компетитивен ELISA комплект (произведен от DAKO Co.). Серумните проби се съхраняват при <-20°С преди началото на теста.
АНАЛИЗ НА ДАННИТЕ:
Броят на белодробните лезии се сравнява между вакасинираните и контролните групи чрез еднопосочен ANOVA. Броят на белодробните лезии се транформира с arc sine, за подобряване на разпределението на остатъците. При положение, че приемането на нормално броя белодробни лезии се поставя под въпрос, и двете, броя на белодробни лезии и броя на arc sine трансформираните лезии се анализира чрез Wilcoxon Rank Sum тест. Степента на значимост се усутановява на р<0,05. резултатите от непараметричния Wilcoxon Rank Sum тест се използват за цели на докладване.
РЕЗУЛТАТИ И КОМЕНТАРИ:
СЕРОЛОГИЯ: Всички прасета се тестват за серумни антитела срещу Mycoplasma hyopneumoniae чрез търговски ELISA тест комплект, при използуване на 1:10 разреждане на всички тестове. Пробите с резултатите от тестовете подчинени на инструкциите от комплекта се третират като положителни при анализа на данните. Всички прасета са серонегативни (титър на антитяло<10) по време на ваксинирането, което означава, че животните са чувствителни към Mycoplasma hyopneumoniae. Всички прасета в контролните групи остават серонегативни преди заразяването. След заразяването, петнайсет от двайсет ваксинирани (15/20) стават сароположителни към Mycoplasma hyopneumoniae поне веднъж (проби, събрани при 35 DPV и -1DPC). Това означава, че имунният отговор при ваксинираните прасета се дължи на ваксината, а не на външни фактори. Всички ваксинирани
4.
прасета и четири от десет прасета в заразените контролни групи стават сероположителни към Mycoplasma hyopneumoniae след заразяването, докато всички не заразени животни остават серонегативни. Серологичният статус на тези животни е обобщен в таблица 4.
БРОЙ БЕЛОДРОБНИ ЛЕЗИИ
Двайсет прасета, ваксинирани с Тест Ваксина А и десет невааксинирани контролни прасета се заразяват с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae (1,0 χ 106 организми на прасе). Шест месеца след ваксинирането. Три прасета служат за незаразени контроли. Осем от двайсет и две ваксинирани (40%) не развиват белодробни лезии след заразяване, докато в контролната група само едно от 10 прасета (10%) не развива белодробни лезии. Процентите на белодробни лезии са обобщени в таблица 5. Ваксинираните прасета имат среден брой на белодробни лезии от 3,6%, а заразените контролни прасета имат среден брой белодробни лезии от 14,6%. Белодробните лезии при ваксинираната група са значително по-малко от контролите (р=0,0215).
ТАБЛИЦА 4
Серологичен статус към Mycoplasma hyopneumoniae на прасетата при изследването*
Брой позитивни (1:10)/общия брой
Група Лечение Брой прасета 0DPV** 35DPV -1DPC*** 26DPC
1 Ваксина/ заразяване 20 0/20 9/20 12/20 20/20
2 Кантрола/ Заразяване 10 0/10 0/10 0/10 4/10
3 Контрола/ заразяване 3 0/3 0/3 0/3 0/3
* Серумните проби се тестват за серумни антитела към Mycoplasma hyopneumoniae чрез ELISA, при използуване на търговски комплект.
Всички проби се тестват при серумно разреждане от 1:10. резултатите се интерпретират според инструкциите на комплекта.
Съмнителните резултати от пробите при 1:10 се приемат за положителни.
** DPV = дни след ваксиниране ***DPC = дни след заразяване.
ТАБЛИЦА 5
Обобщение на броя на белодробни лезии (%) при прасета, заразени с Mycoplasma hyopneumoniae и незаразени контроли
Среден %
Група Лечение Брой прасета Брой белодроб ни лезии Станда ртно отклоне ние Най-ниски 95% CL* за средни Найвисоки 95% CL за средни Р стойност**
1 Ваксин а/ заразя ване 20 3,6 7,6 0,07 7,19 0,0215
2 Кантро ла/ Заразя ване 10 14,6 20,0 0,33 28,94
3 Контро ла/ заразя ване 3 1,8 1,8 -2,67 6,27
* CL ** Р стойността се образува от сравнението на групи 1 и 2.
Както може да се види от данните, показани на таблици 4 и 5, Тест Ваксина А индуцира предпазен имунитет срещу залазяване с вирулентен Mycoplasma hyopneumoniae шест месеца след прилагане на единчна доза на прасета, ваксинирани на възраст от три седмици.

Claims (18)

  1. ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ
    1. Използуване на Mycoplasma hyopneumoniae бактеририн при метод за производство на състав на ваксина срещу заболяване причинено от Mycoplasma hyopneumoniae, в което се използва имунизиращо количество Mycoplasma hyopneumoniae бактерии;
    помощно средство, включващо полимер на акриловата киселина и смес от способни да метаболизират масла и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер; и фармацевтично приемлив носител, който при прилагане на единчна доза от състава на ваксината предизвиква предпазен имунитет от Mycoplasma hyopneumoniae.
  2. 2. Използуване съгласно претенция 1, при което сместта на помощно средство се състои от полимер на акриловата киселина и смес от способни да метаболизират масла, включваща един или повече въглеводороди на терпен и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер в съотношение 1:25 до 1:50 на полимера на акриловата киселина към метаболизиращите масла/смес на полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер.
  3. 3. Използуване съгласно претенция 1, на смес на помощно средство, включващо приблизително 1-25% v/v състав на ваксината.
  4. 4. Използуване съгласно претенция 3, където полимерът на акриловата киселина присъства в крайна концентрация от приблизително 1% v/v и въглеводородите на терпена/смес от полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер присъства в крайна концентрация от приблизително 5% до 10% v/v.
  5. 5. Използуване съгласно претенция 3, където сместта на помощно средство включва приблизително 2%-15% от състава на ваксината.
  6. 6. Използуване съгласно претенция 5, където сместта на помощно средство включва приблизително 5%-12% от състава на ваксината.
  7. 7. Използуване съгласно претенция 1, където способното да метаболизира масло е сквален.
  8. 8. Използуване съгласно претенция 6 или 7, където полимерът на акриловата киселина е Carbopol.
  9. 9. Използуване съгласно коя да е претенция от 1-8, включващо освен това бактерии, избран от група състояща се от бактериите Harmonphilus parasuis, Pasteurella multiocida, Streptococcum suis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Bordatella bronchiseptica, Salmonella choleraesuis и лептоспира.
  10. 10. Използуване на състав на ваксинва срещу заболяване, причинено от Mycoplasma hyopneumoniae върху животно при метод за производство на състав на ваксина срещу заболяване причинено от Mycoplasma hyopneumoniae, при което се прилага върху посоченото животно състав на ваксина включващ имунизиращо количество Mycoplasma hyopneumoniae бактерии;
    помощно средство, включващо полимер на акриловата киселина и смес от способни да метаболизират масла и полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер; и фармацевтично приемлив носител, който при прилагане на единчна доза от състава на ваксината предизвиква предпазен имунитет от инфекция с Mycoplasma hyopneumoniae.
  11. 11. Използуване съгласно претенция 10, където имунизиращото количество от посочената бактерия е приблизително 1х108 до 3x1011 MHDCEL/mL.
  12. 12. Използуване съгласно претенция 11, където имунизиращото количество от посочената бактерия е © приблизително 1 х109 до 3x109 MHDCEL/mL.
  13. 13. Използуване съгласно претенция 10, където начинът на прилагане на посоченото прилагане е интрамускулно, подкожно, интраперитонеално аерозолно, орално или интраназално.
  14. 14. Използуване съгласно претенция 10, където сместта на помощното средство включва полимер на акриловата киселина и смес от способни да метаболизират масла, които съдържат един или повече въглеводороди на терпена и ф полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер, присъстващ в крайна концентрация приблизително 1-25% v/v.
  15. 15. Използуване съгласно претенция 14, където полимерът на акриловата киселина е Carbopol
  16. 16. Използуване съгласно претенция 14, където способното да метаболизира масло на сместа на помощното средство е въглеводород на терпена, избран измежду група от сквален и сквалан.
  17. 17. Използуване съгласно коя да е претенция от 10-16, включващо освен това съвместно прилагане на поне един допълнителен бактерии, избран от група състояща се от бактериите Haemonphilus parasuis, Pasteurella multiocida, Streptococcum suis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Bordatella bronchiseptica, Salmonella choleraesuis и лептоспира.
  18. 18. Използуване на инактивиран Mycoplasma hyopneumoniae, на способни да метаболизират масла, полиоксиетилен-полиоксипропилен блок съполимер и полимер на акриловата киселина под формата на масло във вода емулсия.
BG107898A 2000-12-19 2003-06-11 Ваксина срещу mycoplasma hyopneumoniae бактерин BG66213B1 (bg)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US25663700P 2000-12-19 2000-12-19
PCT/US2001/047865 WO2002049666A2 (en) 2000-12-19 2001-12-11 Mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BG107898A true BG107898A (bg) 2004-08-31
BG66213B1 BG66213B1 (bg) 2012-05-31

Family

ID=22972978

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG107898A BG66213B1 (bg) 2000-12-19 2003-06-11 Ваксина срещу mycoplasma hyopneumoniae бактерин

Country Status (28)

Country Link
US (4) US20020131980A1 (bg)
EP (1) EP1343525B1 (bg)
JP (2) JP5074656B2 (bg)
KR (1) KR100874119B1 (bg)
CN (1) CN1296095C (bg)
AR (1) AR033410A1 (bg)
AT (1) ATE359813T1 (bg)
AU (2) AU2899302A (bg)
BG (1) BG66213B1 (bg)
BR (1) BRPI0116249B1 (bg)
CY (1) CY1106669T1 (bg)
CZ (1) CZ307075B6 (bg)
DE (1) DE60127994T2 (bg)
DK (1) DK1343525T3 (bg)
ES (1) ES2283452T3 (bg)
HK (1) HK1056513A1 (bg)
HR (1) HRP20030585B1 (bg)
HU (1) HU227431B1 (bg)
ME (1) ME00570A (bg)
MX (1) MXPA03005357A (bg)
MY (1) MY129765A (bg)
NZ (1) NZ526904A (bg)
PL (1) PL211174B1 (bg)
PT (1) PT1343525E (bg)
RS (1) RS51536B (bg)
TW (1) TWI308872B (bg)
WO (1) WO2002049666A2 (bg)
ZA (1) ZA200305545B (bg)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7018638B2 (en) * 2000-12-19 2006-03-28 Wyeth Mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine
MY129765A (en) * 2000-12-19 2007-04-30 Wyeth Corp Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine
GB0400264D0 (en) * 2004-01-07 2004-02-11 Polytherics Ltd Complexes
UA95602C2 (ru) 2004-12-30 2011-08-25 Берингер Ингельхейм Ветмедика, Инк. Иммуногенная композиция цвс2 и способы приготовления такой композиции
US7700285B1 (en) 2005-12-29 2010-04-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. PCV2 immunogenic compositions and methods of producing such compositions
US7833707B2 (en) 2004-12-30 2010-11-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Methods of overexpression and recovery of porcine circovirus type 2 ORF2
US8834891B2 (en) 2005-03-14 2014-09-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Immunogenic compositions comprising Lawsonia intracellularis
PL2275132T3 (pl) 2005-12-29 2021-09-13 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Multiwalentne immunogenne kompozycje PCV2 i sposoby ich wytwarzania
CN109125721A (zh) 2005-12-29 2019-01-04 贝林格尔.英格海姆维特梅迪卡有限公司 Pcv2免疫原性组合物用于减轻猪临床症状的用途
EP2859900A1 (en) 2006-12-11 2015-04-15 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Effective method of treatment of porcine circovirus and lawsonia intracellularis infections
CN107412761A (zh) 2006-12-15 2017-12-01 贝林格尔.英格海姆维特梅迪卡有限公司 以pcv2抗原治疗猪
EP1941903A1 (en) 2007-01-03 2008-07-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prophylaxis and treatment of PRDC
EP1958644A1 (en) 2007-02-13 2008-08-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prevention and treatment of sub-clinical pcvd
US7829274B2 (en) 2007-09-04 2010-11-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Reduction of concomitant infections in pigs by the use of PCV2 antigen
ME01000B (me) 2007-11-06 2012-10-20 Zoetis Services Llc Živa vakcina avirulentne mycoplasma hyopneumoniae sa adjuvansom
EP2242511A4 (en) 2008-01-23 2012-10-24 Boehringer Ingelheim Vetmed IMMUNOGENIC COMPOSITIONS OF MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE PCV2, AND METHODS FOR PRODUCING SUCH COMPOSITIONS
US8444989B1 (en) 2008-04-18 2013-05-21 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh One dose vaccination against mycoplasma infections of pigs
RU2519051C2 (ru) * 2008-06-25 2014-06-10 Брааш Биотех Ллк Композиции и способы для улучшенной иммуногенности соматостатина в лечении дефицита гормона роста и инсулиноподобного фактора роста
EA021102B1 (ru) * 2009-05-19 2015-04-30 Байопропертис Пти Лтд. Температурочувствительный вакцинный штамм mycoplasma hyopneumoniae и его применения
JP5968622B2 (ja) 2009-06-04 2016-08-10 国立感染症研究所長 マイコプラズマ感染症用ワクチン
TWI627281B (zh) 2009-09-02 2018-06-21 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 降低pcv-2組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之pcv-2組合物
US9107859B2 (en) * 2009-09-10 2015-08-18 Merial, Inc. Vaccine formulations comprising saponin-containing adjuvants
JP5815676B2 (ja) 2010-04-30 2015-11-17 テマセック・ライフ・サイエンシズ・ラボラトリー・リミテッド H5n1系列に対する汎用ワクチン
WO2013149017A1 (en) * 2012-03-28 2013-10-03 Kansas State University Research Foundation Vaccine adjuvant
UA114503C2 (uk) 2012-04-04 2017-06-26 Зоетіс Сервісіз Ллс Комбінована вакцина pcv та mycoplasma hyopneumoniae
US9120859B2 (en) 2012-04-04 2015-09-01 Zoetis Services Llc Mycoplasma hyopneumoniae vaccine
UA114504C2 (uk) 2012-04-04 2017-06-26 Зоетіс Сервісіз Ллс Комбінована вакцина pcv, mycoplasma hyopneumoniae та prrs
CN103623400B (zh) * 2012-08-24 2016-08-17 普莱柯生物工程股份有限公司 抗猪支原体肺炎、传染性胸膜肺炎疫苗组合物及制备方法
MY173223A (en) 2012-12-28 2020-01-07 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Method of making a mycoplasma vaccine
KR102355614B1 (ko) * 2012-12-28 2022-01-27 베링거잉겔하임베트메디카게엠베하 마이코플라스마 항원을 포함하는 면역원성 조성물
CN104338128B (zh) * 2013-07-31 2017-09-05 普莱柯生物工程股份有限公司 一种疫苗组合物及其制备方法和应用
WO2015051099A1 (en) 2013-10-02 2015-04-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Pcv2 orf2 protein variant and virus like particles composed thereof
JP2021505560A (ja) * 2017-12-04 2021-02-18 インターベット インターナショナル ベー. フェー. イヌライム病ワクチン
CN108324941A (zh) * 2018-04-03 2018-07-27 林淑卿 猪疾病疫苗用佐剂及其制备方法
CN117100851A (zh) * 2023-10-23 2023-11-24 成都依思康生物科技有限公司 一种佐剂、疫苗组合物及其制备方法和应用

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2909462A (en) * 1955-12-08 1959-10-20 Bristol Myers Co Acrylic acid polymer laxative compositions
US3790665A (en) * 1968-02-23 1974-02-05 Haver Lockhart Labor Inc Injectable adjuvant,method of preparing same and compositions including such adjuvant
US4606918A (en) * 1983-08-22 1986-08-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants
CA1267087A (en) * 1985-02-14 1990-03-27 Nicolaas Visser Synthetic immunogen
DE3875762T2 (de) 1987-03-17 1993-05-13 Akzo Nv Adjuvanzienmischung.
EP0513861B1 (en) * 1987-11-03 1997-02-26 Syntex (U.S.A.) Inc. Vaccine adjuvant comprising a tetra-polyol
US5240706A (en) * 1989-04-07 1993-08-31 Ml Technology Ventures, L.P. Intranasal administration of Mycoplasma hyopneumoniae antigen
WO1991018627A1 (en) 1990-05-29 1991-12-12 Smithkline Beecham Corporation Swine pneumonia vaccine and method for the preparation thereof
US6113916A (en) * 1990-05-29 2000-09-05 American Cyanamid Company Method of enhancing cell mediated immune responses
US5695769A (en) * 1990-06-13 1997-12-09 Pfizer Inc. Pasteurella multocida toxoid vaccines
US5565205A (en) 1990-08-16 1996-10-15 Solvay Animal Health, Inc. Inactivated Mycoplasma hypopneumoniae bacterin and method of use thereof
ATE234916T1 (de) 1991-11-15 2003-04-15 Pfizer Methode zur herstellung von gram-negativen bakteriellen vakzinen
US5338543A (en) * 1992-02-27 1994-08-16 Ambico, Inc. Thimerosal inactivated mycoplasma hyopneumoniae vaccine
US5534256A (en) * 1992-07-02 1996-07-09 University Of Saskatchewan Haemophilus somnus outer membrane protein extract enriched with iron-regulated proteins
JP3265095B2 (ja) * 1993-11-19 2002-03-11 本田技研工業株式会社 キャニスタ
MY111829A (en) * 1994-05-10 2001-01-31 Zoetis W Llc Modified live brsv vaccine
US5820869A (en) * 1995-06-07 1998-10-13 American Home Products Corporation Recombinant raccoon pox viruses and their use as an effective vaccine against feline immunodeficiency virus infection
DE19601754A1 (de) * 1996-01-19 1997-07-24 Hoechst Ag Dictyocaulus viviparus Antigen zur Diagnose des Lungenwurmbefalls und zur Vakzinierung
US5846735A (en) * 1996-04-18 1998-12-08 University Of Iowa Research Foundation Hepatitis C virus Fc-binding function
ATE497004T1 (de) * 1996-12-20 2011-02-15 Univ Texas Moraxella catarrhalis antigene uspa1 und uspa2
FR2775601B1 (fr) * 1998-03-03 2001-09-21 Merial Sas Vaccins vivants recombines et adjuves
US6342231B1 (en) * 1998-07-01 2002-01-29 Akzo Nobel N.V. Haemophilus parasuis vaccine and diagnostic
US6632439B2 (en) * 1999-09-29 2003-10-14 Novartis Animal Health, Inc. Fusobacterium necrophorum vaccine and method for making such vaccine
US6585981B1 (en) 2000-07-27 2003-07-01 Regents Of The University Of Minnesota Temperature-sensitive live vaccine for Mycoplasma hyopneumoniae
MY129765A (en) * 2000-12-19 2007-04-30 Wyeth Corp Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine
US7018638B2 (en) * 2000-12-19 2006-03-28 Wyeth Mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine
JP2005515162A (ja) * 2001-07-02 2005-05-26 ファイザー・プロダクツ・インク マイコプラズマ・ハイオニューモニエ(Mycoplasmahyopneumoniae)を用いた単回ワクチン接種
WO2003074026A1 (en) * 2002-03-07 2003-09-12 Biocompatibles Uk Limited Drug carriers comprising amphiphilic block copolymers
ITMI20030269A1 (it) * 2003-02-14 2004-08-15 Advance Holdings Ltd Sale di cetilpiridino di un agente antiinfiammatorio
US8052762B1 (en) * 2010-09-02 2011-11-08 Kelly Van Gogh, LLC Compositions for dyeing keratin-containing fibers

Also Published As

Publication number Publication date
DE60127994T2 (de) 2008-01-17
US20070020296A1 (en) 2007-01-25
US20100119471A1 (en) 2010-05-13
CN1296095C (zh) 2007-01-24
ATE359813T1 (de) 2007-05-15
ME00570B (me) 2011-12-20
HRP20030585A2 (en) 2005-06-30
US7666439B2 (en) 2010-02-23
ZA200305545B (en) 2004-10-18
BR0116249A (pt) 2004-03-02
HUP0400687A3 (en) 2004-10-28
HUP0400687A2 (hu) 2004-06-28
EP1343525A2 (en) 2003-09-17
AR033410A1 (es) 2003-12-17
KR20030065556A (ko) 2003-08-06
CY1106669T1 (el) 2012-05-23
US20020131980A1 (en) 2002-09-19
EP1343525B1 (en) 2007-04-18
PL363220A1 (en) 2004-11-15
DE60127994D1 (de) 2007-05-31
AU2002228993B2 (en) 2006-06-29
CZ307075B6 (cs) 2018-01-03
BG66213B1 (bg) 2012-05-31
BRPI0116249B1 (pt) 2016-06-14
US8187588B2 (en) 2012-05-29
AU2899302A (en) 2002-07-01
HK1056513A1 (en) 2004-02-20
CN1489472A (zh) 2004-04-14
MY129765A (en) 2007-04-30
RS51536B (sr) 2011-06-30
ME00570A (en) 2011-12-20
YU49303A (sh) 2006-08-17
JP2004518655A (ja) 2004-06-24
KR100874119B1 (ko) 2008-12-15
WO2002049666A2 (en) 2002-06-27
JP5074656B2 (ja) 2012-11-14
MXPA03005357A (es) 2003-10-06
US20120213816A1 (en) 2012-08-23
PT1343525E (pt) 2007-07-12
DK1343525T3 (da) 2007-06-04
US9238065B2 (en) 2016-01-19
NZ526904A (en) 2005-07-29
WO2002049666A3 (en) 2003-02-06
TWI308872B (en) 2009-04-21
JP2009073855A (ja) 2009-04-09
HU227431B1 (en) 2011-06-28
ES2283452T3 (es) 2007-11-01
HRP20030585B1 (en) 2008-03-31
CZ20031721A3 (cs) 2004-04-14
PL211174B1 (pl) 2012-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BG107898A (bg) ПОДОБР...НА ВАК&#39;ИНА &#39;Р...(tm)&#34; MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE БАК&#39;...РИН
JP5700861B2 (ja) 改良されたマイコプラズマ・ハイオニューモニエバクテリンワクチン
SK288010B6 (sk) Use of Mycoplasma hyopneumoniae for the manufacture of a medicament