CN108324941A - 猪疾病疫苗用佐剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种猪疾病疫苗用佐剂,其包括:1.0重量份至10.0重量份的高分子聚合物;0.1重量份至30重量份的分散剂;0.1重量份至30重量份的界面活性剂;及50重量份至98重量份的溶剂;其中所述高分子聚合物为卡波姆934、卡波姆940、卡波姆941、卡波姆971、卡波姆974、卡波姆980、卡波姆981中的一种以上;所述分散剂为PEG‑9、PEG‑32、PEG‑100、PEG‑200、PEG‑400、PEG‑600、PEG‑800中的一种以上。
Description
技术领域
本发明涉及一种家畜疫苗用佐剂,特别是关于一种猪疾病疫苗用佐剂及其制备方法。
背景技术
近年来,复杂的猪呼吸道病给许多猪场造成了严重的损失,造成猪群生长速度缓慢、饲料报酬降低、死亡率上升,推迟上市以及管理上恶性循环等严重的经济损失。按目前疾病发展的形势估计,呼吸道疾病仍将是影响养猪生产的主要疾病。猪场复杂的呼吸道病主要是病毒、细菌、支原体,以及饲养管理不良引起的混合感染和继发感染,如猪繁殖与呼吸综合征、猪环状病毒、支原体及其它病毒、细菌,以饲养管理不良引起的仔猪断奶后多系统衰竭综合征、猪呼吸疾病综合征等,抗生素药物虽然对病毒无效,但可控制或治疗细菌和支原体的危害,从而防止或减少猪只发生继发感染。因此,对于复杂的猪呼吸道疾病,应坚持预防为主,采取综合性防制措施,除了改善饲养管理条件、环境控制、加强免疫接种、卫生消毒等方面做好工作外,有针对性的选择适当的药物进行预防,是猪场呼吸道疾病防治工作中一项重要而且有效的技术措施。
疫苗接种被认为是用来预防病毒感染动物之最有效且最具效率的方式。然而,至今仍有许多病毒性或细菌性疾病尚无可利用的疫苗,或还未能达到足够的免疫作用。此外,许多疫苗因为其抗原效能太低或使用劣质佐剂、会产生严重副作用、稳定性低或是价格昂贵而不适用。因此,亟需研发出更有效的疫苗或相关佐剂产品。
很多传染病控制计划的基础是通过用活的微生物或经灭活的微生物或其产物进行疫苗接种来诱导专一性免疫。有效的疫苗接种程序容许在动物中形成针对专一抗原的免疫记忆能力,从而在日后与抗原接触时在动物中引起快速且强烈的免疫反应。然而,有些抗原仅具有弱免疫原性。所述抗原可能无力诱导在日后攻毒时足以为动物提供有效保护的免疫反应,或可能需要与助增免疫原性以提供有效保护的其他药剂一起投加。
将抗原与称为佐剂的物质混合后,一起注射于动物体内可增强免疫系统对抗原的免疫抗性,所述称为佐剂的物质是通过直接作用于免疫系统或通过修改抗原的药物动力学特征,来增强动物体对野外病毒的抵御反应且藉此增加抗原与免疫系统的相互作用时间。
常见的油包水(W/O)型油质疫苗是由抗原液、界面活性剂及矿物质油混合后,在高剪切力作用下制备而成。其免疫机理是在接种部位贮存一段时间,局部产生肉芽肿和炎症反应,吸引巨噬细胞、淋巴细胞等聚集以识别抗原,产生抗体。同时,缓慢扩散的油质佐剂使抗原输送到二级淋巴器官的时间延长,不断刺激机体的免疫系统,从而产生续期长、抗体水准高的免疫效力。虽然国内外疫苗生产厂家的生产工艺不断改进,用油品质也不断提高,但由于这种制剂的连续油相在注射部位有驻留的倾向,在不少的情形中,这种W/O型油质疫苗在接种部位附近产生大量肉芽肿,保护性抗体产生速度慢、易对动物屠体品质造成不良影响,并且在接种期间可能引起剧烈的疼痛。
另外,水包油(O/W)型佐剂疫苗具有注射部位显现局部反应小且稳定性高的优势,然而包含或者暴露在连续相中的抗原很快在注射部位分散和被体液酶分解,难以提供长期的保护性抗体,常常需要特殊的免疫刺激剂和多次加强免疫,制备成本高,不被广泛使用。
因此,各界殷切期盼开发出一种能够增加免疫反应及效果、且能具有免疫反应持续力等解决传统技术的问题点的佐剂。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种猪疾病疫苗用佐剂及其制备方法。本发明的佐剂可以减少现有疫苗的用油量,加快被免疫动物相应抗体的产生速度,减少疫苗制备成本。
本发明的目的具体通过下述技术方案实现:
一种猪疾病疫苗用佐剂,其包括:1.0重量份至30.0重量份的高分子聚合物;0.1重量份至30.0重量份的分散剂;0.1重量份至30.0重量份的界面活性剂;及50.0重量份至98.0重量份的溶剂。
本发明的猪疾病疫苗用佐剂中的所述高分子聚合物并未特别加以限定,举例来说,例如可以是卡波姆934、卡波姆940、卡波姆941、卡波姆971、卡波姆974、卡波姆980、卡波姆981中的一种以上;较佳可以是卡波姆934、卡波姆940、卡波姆941、卡波姆971、卡波姆974中的一种以上;更佳可以是卡波姆934、卡波姆940、卡波姆941中的一种以上;最佳可以是卡波姆934、卡波姆940中的一种以上。
本发明的猪疾病疫苗用佐剂中的所述分散剂并未特别加以限定,举例来说,例如可以是PEG-9、PEG-32、PEG-100、PEG-200、PEG-400、PEG-600、PEG-800中的一种以上;较佳可以是PEG-100、PEG-200、PEG-400、PEG-600、PEG-800中的一种以上;更佳可以是PEG-200、PEG-400、PEG-600中的一种以上;最佳可以是PEG-400、PEG-600中的一种以上。
又,在本发明的猪疾病疫苗用佐剂中,高分子聚合物、分散剂、界面活性剂、及溶剂的含量比例并未特别加以限定的,只要是在不违反本发明的观点或不脱离本发明的精神的前提下,可以视需要而加以调整。
举例来说,高分子聚合物的总含量一般是1.0重量份至30.0重量份;较佳为1.0重量份至25.0重量份,更佳为1.0重量份至20.0重量份,更理想为1.0重量份至15.0重量份,特佳为1.0重量份至10.0重量份;最佳为2.0重量份至8.0重量份。
又,分散剂的总含量一般是0.1重量份至30.0重量份;较佳为0.1重量份至20.0重量份,更佳为0.1重量份至10.0重量份,特佳为0.5重量份至5.0重量份;最佳为0.5重量份至3.0重量份。
再者,界面活性剂的总含量一般是0.1重量份至30.0重量份;较佳为0.1重量份至20.0重量份,更佳为0.1重量份至10.0重量份,特佳为0.5重量份至5.0重量份;最佳为0.5重量份至3.0重量份。
在本发明的猪疾病疫苗用佐剂中,为了提高防止猪呼吸道疾病的感染或增加疫苗稳定性及效能而达到防疫的效果,可以使产品达到良好的功效。在实际应用时,所述猪疾病疫苗用佐剂(Adj)与猪呼吸道疾病抗原液(Vat)的掺混比(Adg:Vat)为1:10(v/v)~1:1(v/v)。例如,在本发明的所述猪疾病疫苗用佐剂(Adj)与猪呼吸道疾病抗原液(Vat)的掺混比的比例可以是1:10(v/v)~1:1(v/v);在某些具体实施例中,较佳为1:8(v/v)~1:1(v/v);更佳为1:6(v/v)~1:1(v/v);特佳为1:4(v/v)~1:1(v/v);最好的为1:3(v/v)~1:1(v/v)。
本发明的猪疾病疫苗用佐剂中的所述界面活性剂并未特别加以限定,举例来说,例如可以是聚氧乙烯脂肪醇、辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol)、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、吐温81、吐温85、聚氧乙烯氢化蓖麻油、普朗尼克F-68、聚氧乙烯月桂醇醚等。根据本发明的某些具体实施例,所述界面活性剂例如可以是自、聚氧乙烯脂肪醇、辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol)、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、吐温81、吐温85、聚氧乙烯氢化蓖麻油、普朗尼克F-68、聚氧乙烯月桂醇醚中的至少一种;适用于本发明的界面活性剂较佳为聚氧乙烯脂肪醇、辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol)、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、吐温81、吐温85、聚氧乙烯氢化蓖麻油、普朗尼克F-68或聚氧乙烯月桂醇醚;更佳为聚氧乙烯脂肪醇、辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol)、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、吐温81或吐温85;特佳为辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol)、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、吐温81或吐温85。
上述的猪疾病疫苗用佐剂可进一步包含0.1重量份至5.0重量份的离子调节剂;较佳为0.1重量份至4.0重量份的离子调节剂;更佳为0.1重量份至3.0重量份的离子调节剂;最佳为0.1重量份至2.0重量份的离子调节剂。
本发明的猪疾病疫苗用佐剂中的所述离子调节剂可以为氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾中的至少一种。
所述猪疾病可以是由猪生殖与呼吸症候群病毒(PRRSV)、猪流行性感冒病毒(SIV)、假性狂犬病病毒(PRV)、第二型猪环状病毒(PCV II)、及猪呼吸道冠状病毒(PRCV)中的至少一种所引起。
与本发明的猪疾病疫苗用佐剂配合使用的抗原液并未特别加以限定,举例来说,例如可以是死毒抗原、次单位抗原、核酸抗原。根据本发明的某些具体实施例,所述抗原液来源例如可以是自死毒抗原、次单位抗原、核酸抗原、上述抗原的衍生物中的至少一种;适用于本发明的抗原液较佳使用来源为死毒抗原、次单位抗原或核酸抗原;更佳使用来源为次单位抗原。
上述猪疾病疫苗用佐剂可以进一步含有缓冲剂;所述缓冲剂并未特别加以限定,举例来说,例如可以是磷酸钠缓冲剂、磷酸钾缓冲剂或Tris-HCl缓冲剂。根据本发明的某些具体实施例,所述缓冲剂来源例如可以是自磷酸钠缓冲剂、磷酸钾缓冲剂、Tris-HCl缓冲剂、柠檬酸钠-磷酸盐缓冲剂、两性离子缓冲剂、Hepes缓冲剂、马来酸盐缓冲剂、上述缓冲剂的衍生物中的至少一种;适用于本发明的缓冲剂较佳使用来源为磷酸钠缓冲剂、磷酸钾缓冲剂、Tris-HCl缓冲剂、柠檬酸钠-磷酸盐缓冲剂、两性离子缓冲剂、Hepes缓冲剂或马来酸盐缓冲剂;更佳使用来源为磷酸钠缓冲剂、磷酸钾缓冲剂、Tris-HCl缓冲剂、柠檬酸钠-磷酸盐缓冲剂或两性离子缓冲剂;特佳使用来源为磷酸钠缓冲剂、磷酸钾缓冲剂、柠檬酸钠-磷酸盐缓冲剂或两性离子缓冲剂。
所述猪疾病疫苗用佐剂的制备方法,包括以下步骤:
(a)将3.0重量份至10.0重量份的高分子聚合物、0.5重量份至5.0重量份的分散剂、及85.0重量份至95.0重量份的溶剂,以第一反应条件予以充分混合而形成分散液;
(b)将0.5重量份至5.0重量份的界面活性剂加入由上述(a)所得的所述分散液中充分混合并于第二反应条件下形成猪疾病疫苗用佐剂。
所述第一反应条件包括于65℃~80℃的温度下,搅拌转速1200rpm~2400rpm,进行反应1~3小时后。
所述第二反应条件包括于55℃~65℃的温度下,搅拌转速800rpm~1200rpm,进行反应2~3小时。
由上述制备方法所制得的佐剂的粘度为0.5CP至2CP;较佳为0.5CP至1.8CP;更佳为0.5CP至1.5CP;最佳为0.5CP至1.2CP。
由上述制备方法所制得的佐剂的粒径大小为0.5至5.0μm;较佳为0.5至4.0μm;更佳为0.5至3.0μm;特佳为0.5至2.0μm;最佳为0.5至1.0μm。
附图说明
图1为显示本发明中的疫苗抗体水平试验的比较示意图。
具体实施方式
以下,针对本发明的实施态样列举不同的具体实施例而更加详尽地叙述与说明,以便使本发明的精神与内容更为完备而易于了解;然而,本领域技术人员应当明了本发明当然不受限于此等实例而已,亦可利用其他相同或均等的功能与步骤顺序来达成本发明。
此外,通过下述具体实施例,可进一步证明本发明可实际应用的范围,但不意欲以任何形式限制本发明的范围。
首先,对于本说明书中所使用的特定用语或名词进行描述性的说明;然而,下列说明仅为例示性说明,非作为限制本发明说明书及申请专利范围。除非本说明书另有定义以外,在本文中所用的科学与技术词汇的含义与本发明所属技术领域中具有通常知识者所理解与惯用的意义相同。
如本文中所使用,"疫苗"为可用于在接受者中诱发保护性免疫的组合物。因此,在受检者已接种抗原之后,疫苗可预防、延缓或减轻曝露于相同或相关抗原的受检者的疾病发展的严重程度(相对于未接种疫苗的受检者)。通过疫苗所提供的保护性免疫可为体液(抗体介导)免疫或细胞免疫,或两者。例如,疫苗接种可消除或降低病原体或受感染细胞的负荷,或产生任何其他可量测的感染减轻。疫苗接种亦可降低已免疫(已接种疫苗)的受检者的肿瘤负荷。
如本文中所使用,术语"保护性免疫"是指当受检者已曝露于抗原,从而在受检者中引起免疫反应(主动/后天或被动/先天,或两者)时抵御抗原所获得的免疫力,从而使抗原失活及/或降低抗原负荷且形成免疫记忆(例如记忆T细胞或B细胞)。
通过疫苗接种所提供的保护性免疫可能为部分的或仅在一部分已接种疫苗的受检者中提供。因此,疫苗可在一部分免疫群体中诱发保护性免疫,因为有些个体可能无力建立强免疫反应或保护性免疫反应或(在有些情况下)任何免疫反应。此能力不够可能归因于个体的遗传背景或归因于免疫缺乏病状(后天或先天性)或免疫抑制(例如,由于经化学疗法治疗或使用免疫抑制药物以例如预防器官排斥反应或抑制自体免疫病状)。向一部分免疫群体提供保护的疫苗仍然适用且视为有效。
如本文中所使用,术语"佐剂"是指当连同抗原一并投加时,使受检者对彼抗原的免疫反应增强的化合物。
接着,以下结合具体实施例对本发明做进一步说明。
在以下实施例及实验中所使用的主要材料说明如下:猪呼吸道疾病抗原为采用台湾国年实业有限公司所制作的猪第二型环状病毒(PCV2)的ORF2蛋白;高分子聚合物为采用为采用Lubrizol公司生产的Carbopol 934P、Carbopol 940;分散剂为采用BASF公司生产的PEG400;介面活性剂为采用SIGMA公司生产的吐温80;其他未提及的材料皆为市售可得的。
实施例1
首先,将90.0wt%的清水、5.0wt%的Carbopol 934P、1.0wt%的PEG-400、PEG-600、1.0wt%的磷酸钠、0.5wt%的氯化钠及0.5wt%的氯化钾一起加入调配瓶中,利用搅拌机在无菌环境下,温度65℃下,振幅20mm,搅拌转速1200rpm,持续搅拌60分钟,充分混合后得分散液M1。
接着,如表1所示,将2.0wt%的吐温80加入分散液M1中,在无菌环境下于室温下先行均匀搅拌2小时;继续利用超高速均质机以800rpm,振幅14mm、55℃均质搅拌1小时,测得pH值为7.25,然后经由冷凝降温而得到本发明的猪疾病疫苗用佐剂(S1)。
实施例2
首先,将92.0wt的清水、2.5wt%的Carbopol 934P、2.5wt%的Carbopol 940、1.0wt%的PEG-400、0.5wt%的PEG-600及0.5wt%的氯化钠一起加入调配瓶中,利用搅拌机在无菌环境下,温度70℃下,振幅22mm,搅拌转速1600rpm,反应进行80分钟,充分混合后得分散液M2。
接着,如表1所示,将1.0wt%的吐温80加入分散液M2中,在无菌环境下于室温下先行均匀搅拌2.2小时;继续利用超高速均质机以900rpm,振幅16mm、60℃均质搅拌1.2小时,测得pH值调整为6.92,然后经由冷凝降温而得到本发明的猪疾病疫苗用佐剂(S2)。
实施例3
首先,将93.0wt%的清水、4.5wt%的Carbopol 934P及1.0wt%的PEG-400一起加入调配瓶中,利用搅拌机在无菌环境下,温度75℃下,振幅23mm,搅拌转速2000rpm,反应进行120分钟,充分混合后得分散液M3。
接着,如表1所示,将1.5wt%的吐温80加入分散液M3,在无菌环境下于室温下先行均匀搅拌2小时;继续利用超高速均质机以1000rpm,振幅17mm、62℃均质搅拌1小时,测得pH值为6.8,然后经由冷凝降温而得到本发明的猪疾病疫苗用佐剂(S3)。
实施例4
首先,将88.5wt%的清水、5.5wt%的Carbopol 940、1.0wt%的PEG-400、1.0wt%的PEG-600、0.5wt%的磷酸钠、1.0wt%的氯化钠及1.0wt%的氯化钾一起加入调配瓶中,利用搅拌机在无菌环境下,温度80℃下,振幅25mm,搅拌转速2400rpm,反应进行180分钟,充分混合后得分散液M4。
接着,如表1所示,将1.5wt%的吐温80加入分散液M4中,在无菌环境下于室温下先行均匀搅拌1小时;继续利用超高速均质机以1200rpm,振幅18mm、65℃均质搅拌2小时,测得pH值为7.27,然后经由冷凝降温而得到本发明的猪疾病疫苗用佐剂S4。
表1
将猪疾病疫苗用佐剂S1~S4如表2所示的比例放于2000毫升烧杯中,再来将乳化均质机放入烧杯中,让猪呼吸道疾病病疫苗用佐剂S1~S4覆盖乳化均质机的搅拌棒达2/3(约15公分),转动乳化均质机的高速剪切力至3000rpm缓缓将病毒抗原悬浮液加入转动中的佐剂S1~佐剂S4中;最后,当抗原都加完时可将转速调成5000rpm,在进行最后搅拌时间五至十分钟,进而制得含本发明的猪疾病疫苗用佐剂的疫苗V1至V4,其中疫苗V1至V4中的ORF2蛋白的浓度为50μg/2ml。
表2
接着,将含有本发明的猪疾病疫苗用佐剂的疫苗V1至V4分别进行疫苗稳定性试验、疫苗抗体水平试验、及疫苗安全性试验,并与含有市售佐剂的疫苗进行比较;其中对比例1为使用以市售白油佐剂配制而成的疫苗P1、对比例2为使用以市售水包油包水剂型佐剂配制而成的疫苗P2。
疫苗稳定性试验
将实施例1-4所制得的含本发明的猪疾病疫苗用佐剂的疫苗V1至V4、以市售白油佐剂配制而成的疫苗P1和以市售水包油包水剂型佐剂配制而成的疫苗P2分别放置在4℃、20℃及37℃的环境中,观察放置到90天后的疫苗的外观变化,并将结果分别记载于表3中。其中○表示疫苗液外观正常,△表示疫苗液有少量析出,×表示疫苗液有大量析出并有分层现象。
表3
由上述表3的结果可知,含有本发明的猪疾病疫苗用佐剂的疫苗V1至V4,不论是在4℃、20℃、或是37℃的环境中存放达到90天都可以维持稳定的状态,反观以市售佐剂制备的P1、及P2,在长时间存放时容易受到温度的影响而使得有析出或分层等不稳定的现象发生。
疫苗抗体水平试验
在本试验中,将35头21-25日龄的无特定病原猪只(specific pathogen free,SPF)随机平均分为空白组、对比例1、对比例2、实施例1、实施例2、实施例3及实施例4,共七组,并于猪只的颈部肌肉接种2ml的样品,其中空白组使用PBS,对比例1使用以市售白油佐剂配制而成的疫苗P1、对比例2使用以市售水包油包水剂型佐剂配制而成的疫苗P2、实施例1至4则是使用含本发明的猪疾病疫苗用佐剂的疫苗V1至V4。
在接种前和接种后的第2、4、6、8、12及16周对每组猪只采血,并分离出血清后使用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测抗体水平。在ELISA Reader上测定各孔的OD630nm值,并将各组的平均数值记录于表4中。
表4
由上述表4的结果可知,实施例1至4的OD630nm值在第2周后皆能达到0.85以上,明显高于对比例1及对比例2的OD630nm值,显示含有本发明的猪疾病疫苗用佐剂的疫苗V1至V4在猪只体内产生抗体的速度优于含有市售佐剂的疫苗P1及P2。再者,比较各组OD630nm最大值,实施例1至4的OD630nm最大值依序分别为1.9938、1.8425、1.8842、及1.8158,而比较例1及比较2的OD630nm最大值则分别为1.4411及1.3681,显示含有本发明的猪疾病疫苗用佐剂的疫苗V1至V4在猪只体内产生的最高抗体水平可较含有市售佐剂的疫苗提升至少26%以上。
另外,接种后第12周实施例1至4的OD630nm值仍维持在接近最大值的数值,且在接种后第16周亦皆维持在1.5以上,反观比较例1及比较例2的OD630nm值到第12周时已大幅下降,到第16周时更已分别降至0.9124及0.8978,显示含有本发明的猪疾病疫苗用佐剂的疫苗V1至V4在猪只体内具有缓释的效果,能够延长抗体在猪只体内的时间,进而提升疫苗的有效性。
再者,比较各组平均数值的标准差值可知,比较例1及比较例2各组在接种疫苗后的OD630nm值的标准差值皆在0.15以上,而实施例1至4各组在接种疫苗后的OD630nm值的标准差值皆在0.1以下;显示相较于含有市售佐剂的疫苗P1及P2,含有本发明的猪疾病疫苗用佐剂的疫苗V1至V4在不同猪只体内所产生的抗体水平较为平均,产生抗体的效果不会因为猪只个体改变而受到影响。
《疫苗安全性试验》
将上述空白组、比较例1、比较例2、实施例1、实施例2、实施例3、及实施例4中的各猪只接种样品后,量测7天内各组猪只的体温并将平均数值记录于表5;另外,观察7天内各组猪只的局部反应、精神变化、食欲,及生长状况,并将结果纪录于表5。
表5
由上述表5所示的结果可知,实施例1至4的猪只不论是在接种后体温、局部反应、精神变化、食欲、或是生长状况皆维持在正常的状态,并没有出现任何由疫苗免疫而引起的不良反应,显示使用本发明的猪疾病疫苗用佐剂所制成的疫苗具有优良的安全性,不会影响猪只的健康。
从而,可以确认经施打使用本发明的猪疾病疫苗用佐剂的疫苗的猪只能够增加免疫保护能力,进而具有对抗猪呼吸道疾病感染的优异的效果。所以,本发明的猪疾病疫苗用佐剂能够明显地提高猪只的免疫力及免疫细胞增殖,增强疫苗对猪只在疾病上诱发保护性免疫反应。
综上所述,本发明的内容已经以如上的实施例举例说明了,然而本发明并非仅限定于此等实施方式而已。本领域技术人员在不脱离本发明的精神和范围内,当可再进行各种的更动与修饰;例如,将前述实施例中所例示的各技术内容加以组合或变更而成为新的实施方式,此等实施方式也当然视为本发明所属内容。因此,本案所欲保护的范围也包括权利要求书及其所界定的范围。
Claims (10)
1.一种猪疾病疫苗用佐剂,其特征在于,包括:
1重量份至30重量份的高分子聚合物;
0.1重量份至30重量份的分散剂;
0.1重量份至30重量份的界面活性剂;及
50重量份至98重量份的溶剂;
其中所述高分子聚合物为卡波姆934、卡波姆940、卡波姆941、卡波姆971、卡波姆974、卡波姆980、卡波姆981中的一种以上;
所述分散剂为PEG‐9、PEG‐32、PEG‐100、PEG‐200、PEG‐400、PEG‐600、PEG‐800中的一种以上。
2.根据权利要求1所述的猪疾病疫苗用佐剂,其特征在于,其中所述界面活性剂选自聚氧乙烯脂肪醇、辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol)、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、吐温81、吐温85、聚氧乙烯氢化蓖麻油、普朗尼克F‐68、聚氧乙烯月桂醇醚中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的猪疾病疫苗用佐剂,其特征在于,其中进一步包含0.1重量份至3重量份的离子调节剂。
4.根据权利要求3所述的猪疾病疫苗用佐剂,其特征在于,其中所述离子调节剂为氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸铝中的至少一种。
5.一种猪疾病疫苗用佐剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(a)将1.0重量份至30.0重量份的高分子聚合物、1.0重量份至30重量份的分散剂及50.0重量份至98.0重量份的溶剂,以第一反应条件予以充分混合而形成分散液;
(b)将0.1重量份至30重量份的界面活性剂加入由上述(a)所得的所述分散液中充分混合并于第二反应条件下形成猪疾病疫苗用佐剂;
其中所述高分子聚合物为卡波姆(Carbomer)934、卡波姆(Carbomer)940、卡波姆(Carbomer)941、卡波姆(Carbomer)971、卡波姆(Carbomer)974、卡波姆(Carbomer)980、卡波姆(Carbomer)981中的一种以上;
所述分散剂为PEG‐9、PEG‐32、PEG‐100、PEG‐200、PEG‐400、PEG‐600、PEG‐800中的一种以上。
6.根据权利要求5所述的猪疾病疫苗用佐剂的制备方法,其特征在于,所述第一反应条件包括于65℃~80℃的温度下,搅拌转速1200rpm~2400rpm,进行反应1~3小时。
7.根据权利要求5所述的猪疾病疫苗用佐剂的制备方法,其特征在于,所述第二反应条件包括于55℃~65℃的温度下,搅拌转速800rpm~1200rpm,进行反应2~3小时。
8.根据权利要求5所述的猪疾病疫苗用佐剂的制备方法,其特征在于,其中步骤(a)进一步包含加入0.1重量份至5.0重量份的离子调节剂。
9.根据权利要求5所述的猪疾病疫苗用佐剂的制备方法,其特征在于,其中所述猪疾病疫苗用佐剂的粘度为0.5CP至2.0CP。
10.根据权利要求5所述的猪疾病疫苗用佐剂的制备方法,其特征在于,其中所述猪疾病疫苗用佐剂的粒径大小为0.5至5.0μm。
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Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1343525A2 (en) * | 2000-12-19 | 2003-09-17 | Wyeth | IMPROVED i MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE /i BACTERIN VACCINE |
CN1852735A (zh) * | 2003-07-24 | 2006-10-25 | 梅瑞尔有限公司 | 包含水包油乳液的疫苗制剂 |
CN103071153A (zh) * | 2013-01-21 | 2013-05-01 | 江苏省农业科学院 | 一种兽用疫苗的即用型佐剂、制备及其应用 |
CN103127497A (zh) * | 2011-11-25 | 2013-06-05 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 猪圆环病毒2型、肺炎支原体二联灭活疫苗及其制备方法 |
CN104324370A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-02-04 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 疫苗组合物及其制备方法和应用 |
CN104487085A (zh) * | 2012-07-05 | 2015-04-01 | 希格默伊德药业有限公司 | 水凝胶疫苗制剂 |
CN104524563A (zh) * | 2014-12-12 | 2015-04-22 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 疫苗组合物及其制备方法和应用 |
CN106659803A (zh) * | 2014-04-23 | 2017-05-10 | 摩登纳特斯有限公司 | 核酸疫苗 |
CN107375922A (zh) * | 2017-07-20 | 2017-11-24 | 南京农业大学 | 一种新的水溶性复合免疫佐剂及猪圆环病毒病疫苗 |
-
2018
- 2018-04-03 CN CN201810289852.5A patent/CN108324941A/zh active Pending
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1343525A2 (en) * | 2000-12-19 | 2003-09-17 | Wyeth | IMPROVED i MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE /i BACTERIN VACCINE |
CN1852735A (zh) * | 2003-07-24 | 2006-10-25 | 梅瑞尔有限公司 | 包含水包油乳液的疫苗制剂 |
CN103127497A (zh) * | 2011-11-25 | 2013-06-05 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 猪圆环病毒2型、肺炎支原体二联灭活疫苗及其制备方法 |
CN104487085A (zh) * | 2012-07-05 | 2015-04-01 | 希格默伊德药业有限公司 | 水凝胶疫苗制剂 |
CN103071153A (zh) * | 2013-01-21 | 2013-05-01 | 江苏省农业科学院 | 一种兽用疫苗的即用型佐剂、制备及其应用 |
CN106659803A (zh) * | 2014-04-23 | 2017-05-10 | 摩登纳特斯有限公司 | 核酸疫苗 |
CN104324370A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-02-04 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 疫苗组合物及其制备方法和应用 |
CN104524563A (zh) * | 2014-12-12 | 2015-04-22 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 疫苗组合物及其制备方法和应用 |
CN107375922A (zh) * | 2017-07-20 | 2017-11-24 | 南京农业大学 | 一种新的水溶性复合免疫佐剂及猪圆环病毒病疫苗 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
乔宏兴 等: "《动物生物制品安全应用关键技术》", 31 March 2017, 中原农民出版社 * |
张怡轩 等: "《生物药物分析》", 31 December 2015, 中国医药科技出版社 * |
梁孔贤: "猪瘟活疫苗佐剂的制备及其增强疫苗免疫效果评价", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》 * |
翟路峰 等: "猪圆环病毒2型-肺炎支原体二联灭活疫苗佐剂的筛选", 《黑龙江畜牧兽医》 * |
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