BG107121A - Нови lhrh-антагонисти, тяхното получаване и използване като лекарственo средствo - Google Patents

Нови lhrh-антагонисти, тяхното получаване и използване като лекарственo средствo Download PDF

Info

Publication number
BG107121A
BG107121A BG107121A BG10712102A BG107121A BG 107121 A BG107121 A BG 107121A BG 107121 A BG107121 A BG 107121A BG 10712102 A BG10712102 A BG 10712102A BG 107121 A BG107121 A BG 107121A
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
xxx
liz
hfa
nle
nal
Prior art date
Application number
BG107121A
Other languages
English (en)
Inventor
Michael Bernd
Bernhard Kutscher
Eckhard Gunther
Peter Romeis
Thomas Reissmann
Thomas Beckers
Original Assignee
Zentaris Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US09/525,007 external-priority patent/US6627609B1/en
Application filed by Zentaris Gmbh filed Critical Zentaris Gmbh
Publication of BG107121A publication Critical patent/BG107121A/bg

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
    • A61P5/04—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin for decreasing, blocking or antagonising the activity of the hypothalamic hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Изобретението се отнася до пептиди, които включват N-метилиран аминокиселинен компонент и са с подобрена разтворимост във вода. Лекарствените средства, съдържащи посочените пептиди, могат да се използват за лечение на хормонозависими тумори и повлияващи се от хормони незлокачествени болестни състояния.

Description

НОВИ LHRH-АНТАГОНИСТИ, тяхното получаване и ИЗПОЛЗВАНЕ КАТО ЛЕКАРСТВЕНО СРЕДСТВО ОБЛАСТ НА ТЕХНИКАТА
Изобретението се отнася до нови LHRH-антагонисти, до тяхното получаване и използване като лекарствено средство. По-точно то се отнася до LHRH-антагонисти с подобрена разтворимост, до методи за получаването на тези съединения, до лекарствени средства, които ги съдържат, както и до приложение на лекарствените средства за лечение на хормонозависими тумори и на повлияващи се от хормони незлокачествени заболявания, като доброкачествена хиперплазия на простатата и ендометриоза. ПРЕДШЕСТВУВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА
Номенклатурата, използвана за дефиниране на пептиди, съвпада с тази, използвана от комисията на IUPAC-IUB (Международен съюз по чиста и приложна химия - Международен съюз по биохимия) и обяснена чрез биохимичната номенклатура, в която, съгласно традиционното предста вяне, аминогрупата в N-края се намира отляво, а карбоксилната група в Скрая - отдясно. LHRH-антагонистите, както пептидите съгласно изобретението, включват природни и синтетични аминокиселини, при което първите обхващат Ала, Вал, Лев, Иле, Сер, Тре, Лиз, Apr, Асп, Асн, Глу, Глн, Цис, Мет, фал, Тир, Про, Три и Хис. Съкращенията за отделните аминокиселинни остатъци са на базата на тривиалните имена на аминокиселините и са:
*
Ала=аланин, Арг=аргинин, Гли=глицин, Лев=левцин, Лиз=лизин, Пал(3) = 3-(3-пиридил)аланин, Нал(2)=3-(2-нафтил)аланин, фал=фенилаланин, Хфа =4-хлорфенилаланин, Про=пролин, Сер=серин, Тре=треонин, Три=триптофан, Тир=тирозин и Сар=саркозин. Всички споменати тук аминокиселини притежават L-конфигурация, освен ако не е посочено по друг начин. Например, D-Han(2) е съкращение за 3-(2-нафтил)-О-аланин и Сер е съкращение за L-серин. Заместителите в ε-аминогрупата на страничната верига на лизина са означени с поставено в скоба обозначение след Лиз, евентуално, под формата на съкращение.
Други използвани съкращения са:
Ас Ац=ацетил
В 4-(4-амидинофенил)амино-1,4-диоксобутил
Вос трет.бутоксикарбонил
Вор бензотриазол-1-окси-трис(диметиламино)фосфониев
хексафлуорфосфат
DCC дициклохексилкарбодиимид
DCM ДХМ =дихлорметан
Ddz диметоксифенилдиметилметиленоксикарбонил (диметокси-
диметил-Z)
DIC ДИК=диизопропилкарбодиимид
DIPEA ДИПЕА=М,М-диизопропилетиламин
DMF ДМф=диметилформамид
Fmoc флуоренилметилоксикарбонил
HF флуороводородна киселина
HOBT 1 -хидроксибензотриазол
HPLC ТХВН=течна хроматография под високо налягане
Me метил
TFA ТфК=трифлуороцетна киселина
Z бензилоксикарбонил
Пептидите съгласно изобретението представляват аналози на лутеинизиращ хормон-освобождаващ хормон (LH-RH), който притежава следната структура: р-Глу-Хис-Три-Сер-Тир-Гли-Лев-Арг-Про-Гли-Г\1Н2 [LHRH, гонадорелин].
В продължение на повече от 20 години изследователите търсят мощни селективни антагонисти на LH-RH-декапептида [М. Karten und J.Е. Rivier, Endocrine Reviews 7, 44-66 (1986)]. Големият интерес към такива антагонисти се основава на ползата от тях в ендокринологията, гинекологията, предпазването от забременяване и раковите заболявания. Получени са голям брой съединения като мощни LH-RH-антагонисти. Най-интересните съединения, открити до днес, са всички съединения, чиито структури представляват модификация на LH-RH-структурата.
Първата серия мощни антагонисти е получена чрез въвеждане на радикали от ароматни аминокиселини в местата 1, 2, 3 и 6 или в 2, 3 и 6. Приетият начин на изписване на съединенията изглежда така: първо се дават аминокиселините, които са представени в пептидната верига на LHRH на мястото на първоначално намиращите се там аминокиселини, при което местата, където е извършен обмена са обозначени с повдигнати цифри. По-нататък, чрез последващо обозначение „LH-RH,, се показва, че се отнася до аналози на LH-RH, в които е извършен обмена.
Известни са следните антагонисти:
[Ац-О-Хфа1,2, D-Tpn3,6]LH-RH (D.H.Coy et al., Gross, E. and Meienhofer, J. (Eds) Peptides; Proceedings of the 6th American Peptide Symposium, S. 775-779,
Pierce Chem. Co. Rockville III. (1979);
[Ац-Про1, D-Хфа2, D-Han(2)3,6]LH-RH (Патент на САЩ № 4.419.374) и [Ац-Про1, D-Хфа2, D-Tpn3,6]LH-RH (J.L. Pineda et al., J. Clin. Endocrinol. Metab.
56, 420,1983).
За да се подобри действието на антагонистите, по-късно, на 6-то място се въвеждат основни аминокиселини, напр. D-Apr. Например, [Ац-DХфа1’2, D-Три3, D-Арг6, D-Ana10]LH-RH Ац-Про1, D-Хфа2, D-Han(2)3'6]LH-RH (D.H.Coy et al. Endocrinology 100,1445,1982) и
Ац-0-Нал(2)1, D-Oan(4-F)2, D-Три3, D-Apr6]LH-RH (ORF 18260) (J. E. Rivier et al, във Vickery B.H. Nestor, Jr.J.J., Hafez, E.S.E. (Eds). LHRH and ist Analogs,
S.11-22 MTP Press, Lancaster, Uk 1984).
Други мощни LH-RH-антагонисти са описани в WO 92/19651, WO 94/19370, WO 92/17025, WO 94/14841, WO 94/13313, US-A 5,300,492, US-A 5,140,009, EP O 413 209 A1 и в DE 195 44 212 A1.
Последните публикувани съединения са тези с модифициран орнитинов или лизинов радикал на 6-то място и отговарят на следната формула: Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-Тир5-О-Ххх6-Лев7-Арг8-Про9-О-Ала10-МН2, в която D-Xxx означава аминокиселинна група с обща формула (IV):
-HN-CH-COI (СН2)П
NH
CO-R
Други известни LH-RH-антагонисти са Антареликс (Antarelix), Ганиреликс (Ganirelix) и Цетрореликс (Cetrorelix).
Антареликс® (генерично наименование: Тевереликс (Teverelix)): Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-Тир5-0-Хци6-Лев7-Лиз(изопропил)8-Про9D-Ana10-NH2,
Ганиреликс:
Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-Тир5-0-хАрг(Е1:)26-Лев7-хАрг(етил)28-Про9D-Ana10-NH2,
Цетрореликс: Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-Тир5-О-Цит6-Лев7-Арг8-Про9-О-Апа10-НН2,
Цел на изобретението е да даде нови LH-RH-антагоцисти, притежаващи повишена ензимна стабилност и значително подобрена водоразтворимост.
Тази задача е решена чрез съединенията с дадената по-долу обща формула (I):
A-Xxx1-Xxx2-Xxx3-Xxx4-Xxx5-Xxx6-Xxx7-Xxx8-Xxx9-Xxx10-NH2, (I) в която:
А означава ацетилна група
Ххх1 - D-Han(2)
Ххх2 D-Хфа
Ххх3 - О-Пал(З)
Ххх4 - Сер
Ххх5 - N-Ме-Тир
Ххх6 - D-Цит, D-Хци или О-[8-1\Г-4-(4-амидинофенил)амино-1,4-диоксо-
бутил]-Лиз (или съкратено: О-Лиз(Б)),
Ххх7 - Лев или Нле
Ххх8 - Apr или Лиз(изопропил),
Ххх9 - Про и
Ххх10 - D-Ала или Cap,
при условие, че
когато Ххх6 означава О-Лиз(Б), тогава Ххх7 е Нле, когато Ххх6 означава D-Цит, тогава Ххх7 е Нле и Ххх10 е D-Ала или когато Ххх6 означава D-Хци, тогава Ххх7 е Лев и Ххх10 е D-Ала, както и техните соли с фармацевтично приемливи киселини, по-специално, техните ацетати, ембонати и трифлуорацетати.
Съгласно друг аспект на изобретението, особено предпочетени са следните съединения, както и техните соли с фармацевтично приемливи киселини: Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-1\1-Ме-Тир5-0-Лиз(Б)6-Нле7-Арг8-Про9Сар10-1\1Н2;
Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-О-Лиз(Б)6-Нле7-Арг8-Про9-ОAna10-NH2;
Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-1\1-Ме-Тир5-0-Лиз(Б)6-Нле7-Лиз(изопропил)8-Про9-Сар10-МН2;
Ац-0-Нал(2)1-0-фал(4-С1)2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Лиз(Б)6-Нле7-Лиз(изопропил)8-Про9-О-Ала 10-NH2;
Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-О-Цит6-Нле7-Арг8-Про9-ОАла10-1МН2;
Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-1\1-Ме-Тир5-0-Хци6-Лев7-Арг8-Про9-0Ana10-NH2;
Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пап(3)3-Сер4-Г\1-Ме-Тир5-О-Цит6-Нле7-Лиз(изопропил)8npo9-D-Ana10-NH2;
Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-О-Хци6-Лев7-Лиз(изопропил)8ч ripo9-D-Ana10-NH2.
Съгласно друг аспект на изобретението, съединенията съгласно изобретението са под формата на ацетатна, трифлуорацетатна или ембонатна сол.
Съгласно друг аспект на изобретението, съединенията на представеното изобретение могат да се използват като лекарствени средства, респ. като фармацевтични състави.
Съгласно друг аспект на изобретението, фармацевтичните състави, включват най-малко едно от съединенията на изобретението и традиционните носители и помощни вещества.
Съгласно друг аспект на изобретението, даден е метод за получаване на съединенията на изобретението с обща формула I, при който фрагменти от градивни единици с обща формула Хххт, в която m е цяло число от 1 до 10 и с подходящи защитни групи и при положение, че Ххх1 е ацетилиран, при което споменатите фрагменти са доведени по традиционните методи в твърда фаза или разтвор, след това се присъединяват последователно един с друг и след присъединяването, съединенията с обща формула I, по познати методи и с амидиране на елемента Ххх10, се отделят от твърдата фаза.
Съгласно друг аспект на изобретението, то се отнася до приложение на съединенията на изобретението за изработване на лекарствени средства за лечение на хормонозависими тумори, по-специално на карцином на простатата или на рак на гърдата, както и на доброкачествени индикации, чието лечение изисква подтискане на LH-RH-хормона.
Съгласно друг аспект на изобретението, даден е метод за получаване на фармацевтични състави, при който най-малко едно съединение, съгласно претенции от 1 до 10, се смесва с традиционни носители и помощни материали, за да се създаде лекарствено средство.
Съгласно друг аспект на изобретението, даден е метод за лечение на хормонозависими тумори, по-специално на карцином на простатата, на рак на гърдата или на миома на матката, както и на не-злокачествени индикации, чието лечение изисква подтискане на LH-RH-хормона, като ендометриоза, доброкачествена хиперплазия на простатата, както и за лечение на нарушения във фертилитета при жените и мъжете, при бозайниците, по-специално при хората, характеризиращ се с това, че се дава ефективна доза от най-малко едно от съединенията на изобретението.
Съединенията, съгласно изобретението могат да се използват за лечение на хормонозависими тумори, по-специално на карцином на простатата, на рак на гърдата или на миома на матката, както и на не злокачествени индикации, чието лечение изисква подтискане на LH-RHхормона, като ендометриоза, доброкачествена хиперплазия на простатата. Освен това те могат да се използват и за лечение на нарушения във фертилитета при жените и мъжете, напр. за контрол на овариалното суперстимулиране в рамките на изкуственото оплождане (оплождане „ин витро,,). За тази цел съединенията се смесват по обичайни и познати методи с традиционни носители и помощни материали за получаване на лекарствени средства.
Синтезът на съединенията с формула (I) може да се извърши както чрез класическа фрагментна кондензация така и чрез синтез в твърда фаза по Merrifield, с последователно изграждане с използване на D-лизин, чиято странична верига вече е ацилирана с карбоксилна киселина с обща формула Rt-COOH, а също така и чрез реакция на декапептидна основа със съответни карбоксилни киселини посредством амидно присъединяване към страничната верига на D-лизин0. След това може да се предприеме въвеждането на групата R^CO- в три разрични етапа от синтеза: преди кондензирането на отделните съставни елементи до пептид, след въвеждането на лизин или орнитин в пептидната верига, но преди кондензацията на следващите елементи или след кондензацията на всички съставни части.
Съединенията с формула (I) се синтезират по познати методи, напр. чрез техника на чист синтез в твърда фаза, на частичен твърдофазен синтез (т.н. фрагментна кондензация) или чрез класически присъединявания в разтвор (вижте М. Bodanszky, „Principles of Peptide Synthesis,, Springer Verlag 1884).
Методите за синтез в твърда фаза са описани, например в учебника „Solid Phase Peptide Synthesis,, J.M. Steward and J.D. Young, Pierce Chem. Company, Rockford, III, 1984 и в G. Barany and R.B. Merrifield „The Peptides,,, Ch. 1, S. 1-285, Academic Press Inc. Класическите методи на синтез в
разтвор са описани подробно в наръчника „Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl), Synthese von Peptiden,, E. Wuensch (Herausgeber) 1974, Georg Thieme Verlag, Stuttgart.
Последователното (стъпаловидно) изграждане се извършва, напр. като първоначално аминокиселината в карбокси-края, чиято а-аминогрупа е защитена, се свързва ковалентно към обичаен неразтворим носител; отцепва се α-аминозащитната група; към така получената свободна аминогрупа се свързва следващата защитена аминокиселина чрез карбоксигрупата си и така, стъпка по стъпка се присъединяват следващите аминокиселини към синтезирания пептид в правилната последователност и след присъединяване на всички аминокиселини, полученият пептид се отделя от носителя и, евентуално се отстраняват други налични защитни групи на странични функционални групи. Стъпаловидната кондензация се извършва чрез традиционен синтез от подходящи защитени по обичаен начин аминокиселини.
Присъединяването на отделните аминокиселини една към друга става по обичайните за това методи, по-специално следните:
метод на симетрични анхидриди в присъствие на дициклохексилкарбодиимид или на диизопропилкарбодиимид (DCC, DIC);
общ метод с карбодиимид метод с карбодиимид-хидроксибензотриазол (вижте The Peptides, Volume 2, Ed. E. Gross and J. Meienhofer).
При свързване на фрагменти, за предпочитане е да се използва азидно свързване, протичащо без рацемизиране или метода с DCC-1-хидроксибензотриазол, респ. с ОСС-3-хидрокси-4-оксо-3,4-дихидро-1,2,3-бензотриазин. Може да се използват също така и активирани естери на фрагментите.
За стъпаловидната кондензация на аминокиселини особено подходящи са активирани естери на N-защитени аминокиселини, напр. N-хидрокси-
сукцинимиден естер или 2,4,5-трихлорфенилов естер. Аминолизата се катализира много добре от N-хидроксисъединения, които притежават в определена степен киселинността на оцетната киселина, напр. 1-хидроксибензотриазол.
Като междинни аминозащитни групи могат да се използват групи, отделящи се с хидриране, напр. бензилоксикарбонилов радикал (=Z-paflHкал) или групи, отцепващи се в слабокисели условия. Като защитни групи за аминогрупите на α-място могат да се използват следните:
третични бутилоксикарбонилни групи, флуоренилметоксикарбонилни групи (евентуално също така с р-бром- или р-нитробензилови радикали), трифлуорацетилна група, фталилов радикал, о-нитрофеноксиацетилна група, тритилна група, р-толуенсулфонилна група, бензилна група, бензинови радикали, заместени в бензеновото ядро (р-бром- или р-нитробензилов радикал) и α-фенилетилов радикал. Тук може да се препоръча следната литература: Jesse Р. Greenstein und Milton Winitz, Chemistry of Amino Acids, New York 1961, John Wiley and Sons, Inc., Vol. 2, напр. страници 883 и следващите, „Principles of Peptide Synthesis,,, Springer Verlag 1984, „Solid Phase Peptide Synthesis,, J.M. Steward and J.D. Young, Pierce Chem. Company, Rockford, III, 1984, G. Barany and R.B. Merrifield „The Peptides,,, Ch. 1, S. 1-285, 1979 Academic Press Inc., както и The Peptides, Volume 2, Ed. E. Gross and J. Meienhofer Academic Press, New York. Тези защитни групи се използват по принцип и за защита на други функционални групи в страничните вериги (ОН-групи, NH2-rpynn) на съответните разглеждани аминокиселини.
Наличните хидроксигрупи (серин, треонин) е за предпочитане да бъдат защитени с бензилови и подобни на тях групи. Другите, намиращи се не на α-място аминогрупи (напр. аминогрупите на ω-място, гуанидиногрупата на аргинина) е препоръчително да се защитят ортогонално.
Отделните аминокиселини за изграждане на съединенията, с изключение на лизина, модифициран с ЯтСО-група, се намират на пазара.
Една възможна схема на метода за получаване на лизин, модифициран с RpCO-група, е следната:
1. α-групата на карбоксилната киселина се защитава по подходящ начин, например чрез естерифициране.
2. ε-аминогрупата се защитава например, със Z-rpyna,
3. α-аминогрупата се защитава по такъв начин (напр. с Вос-група), че да се получи селективност спрямо последващото отцепване на аминозащитните групи.
4. Z-групата на ε-аминогрупата се отцепва,
5. Към ε-аминогрупата се въвежда желаната група F^-CO-,
6. Отцепва се защитната група на а-аминогрупата
7. Евентуално, α-аминогрупата се дериватизира, напр. със Z-rpyna.
За въвеждане на F^-CO-rpyna чрез реакция на аминогрупата на лизина с подходяща аминокиселина, реел, с аминокиселинно производно, по принцип се използва същия метод, както описания по-горе за присъединяване на описаните аминокиселини. Особено препоръчителна е кондензацията с използване на карбодиимид, напр. на 1-етил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид и на 1-хидроксибензотриазол.
Реакцията на присъединяване на аминокиселини се извършва в традиционните за тази цел неутрални разтворители или суспендиращи агенти (напр. дихлорметан), при което, евентуално може да се прибави и диметилформамид за подобряване на разтворимостта.
Като синтетичен материал за носител са подходящи неразтворими полимери, напр. набъбваща в органичен разтворител полистиролна смола под формата на перли (напр. съполимеризат от полистирол и 1% дивинилбензен). Изграждането на защитен декапептидамид върху метилбензхидриламинна смола (МБХА-смола, т.е. полистиролна смола с метилбензхидриламинни групи), чийто С-крайща проявяват амидната функция на пеп тид, след отцепване с HF от носителя, може да се извърши съгласно следната технологична схема:
Технологична схема
Протокол за синтез на пептид с използване на Вос-защитени аминокиселини
Етап Действие Разтворител/реагент (об.) Време
1 Промиване Метанол 2x2 мин
2 Промиване Дихлорметан (ДХМ) 3x3 мин
3 Отцепване ДХМ/ТФК (1:1) 1 х 30 мин
4 Промиване Изопропанол 2x2 мин
5 Промиване Метанол 2x2 мин
6 Промиване ДХМ 2x3 мин
7 Неутрализиране ДХМ/ДИПЕА (9:1) 3x5 мин
8 Промиване Метанол 2x2 мин
9 Промиване ДХМ 3x3 мин
10 СТОП Прибавяне на Вос-АК в ДХМ + ДИК + НОВТ
11 Присъединяване ДХМ, евент. ДХМ/ДЦф ок. 90 мин
12 Промиване Метанол Зх2>мин
13 Промиване ДХМ 2x3 мин
Να-Вос-защитените аминокиселини, в трикратен молен излишък се свързват по обичайния метод, в присъствие на диизопропилкарбодиимид (ДИК) и 1-хидроксибензотриазол (НОВТ) в СН2С12/ДМф в продължение на 90 минути. Защитната Вос-група се отцепва с половинчасова обработка с 50% трифлуороцетна киселина (ТфК) в СН2С12. За контрол на пълното превръщане може да се използва хлоранилтест по Кристенсен (Christensen) и на нинхидринов тест на Кайзер (Kaiser). Остатъци от свободни аминофункционални групи се блокират чрез ацетилиране в петкратен
излишък от ацетилимидазол в СН2С12. Последователността на реакциите за изграждане на пептида върху смолата се вижда от технологичната схема. За отделяне на пептида свързан към смолата, полученият до този момент краен продукт от синтеза в твърдата фаза, се суши под вакуум над Р2О2 и се обработва в 500 кратен излишък от HF/анизол 10:1 (об.) за 60 мин при 0°С.
След отстраняване на HF и анизола под вакуум, пептидите се получават чрез стриване с безводен етилетер под формата на бял твърд продукт, като разделянето от полимерния носител се извършва, чрез промиване с 50% воден разтвор на оцетна киселина. Чрез концентриране на оцетнокиселите разтвори под вакуум, получените пептиди могат да се изолират като силновискозни масла, които, след прибавяне на абсолютен етер на студено, се превръщат в бели твърди субстанции.
По-нататъшното пречистване се извършва по рутинните методи на п pen арати в н ата те»'на хроматография под високо налягане (ТХВН).
Превръщането на пептидите в техните киселинни присъединителни соли може да се извърши при взаимодействие на същите с киселини по известни от практиката методи. Обратно, свободни пептиди могат да се получат при взаимодействие на техните киселинни присъединителни соли с бази. Пептидни ембонати (памоати) могат да се получат чрез взаимодействие на соли на трифлуороцетната киселина (ТфК-соли) на пептида със свободна ембонова (памоева) киселина или със съответната двунатриева сол на ембоновата киселина. За тази цел воден разтвор на пептидната ТфК-сол се смесва с разтвор на двунатриев ембонат в полярен непротонен разтворител, за предпочитане диметилацетамид, след което образуваната светложълта утайка се изолира от разтвора.
Дадените по-долу примери служат за обяснение на изобретението, без да го ограничават.
ПРИМЕРИ ЗА ИЗПЪЛНЕНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Пример 1 (D-68968): Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-1\1-Ме-Тир5-0-Лиз(Б)6-Нле7-Арг8-Про9Cap10-NH2;
Синтезът на декапептидът се извършва върху полимерен носител с плътност на зареждане 0.55 ммол/г (аминометил-заместена смола, Fmocзащита, тип D-1675 от фирма Bachem). Лизинът се свързва под формата на Fmoc-D-Tln3(Boc)-OH, като защитните групи Fmoc се отстраняват с 20% пиперидин/ДМф. След едновременното отстраняване на всички защитни групи от страничната верига и освобождаване от полимерния носител, изолираният суров пептид се пречиства с ТХВН. След сублимационно сушене се получава 98.5% декапептид.
Заместването при ε-азота на D-лизин с 4-(4-аминофенил)амино-1,4диоксомаслена киселина се извършва с РуВор (пиридин-Вор) в ДМф с прибавяне на ДИПЕА. Пречистването на изолирания суров пептид се извършва с препаративна ТХВН. Крайното сублимационно сушене дава около 99% продукт (трифлуорацетат) със сумарна формула C82H1o6CIN19015 с коригиран МС-(бомбардировка с бързи атоми) 1633 (М+Н) (изчислен 1631.78096).
ч
Пример 2 (D-68969) Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-Г\1-Ме-Тир5-О-Лиз(Б)6-Нле7-Арг8-Про9-ОAna10-NH2;
Синтезът на декапептидът се извършва върху полимерен носител с плътност на зареждане 0.55 ммол/г (аминометил-заместена смола, Fmocзащита, тип D-1675 от фирма Bachem). Лизинът се свързва под формата на Етос-0-Лиз(Вос)-ОН, като защитните групи Fmoc се отстраняват с 20% пиперидин/ДМф. След едновременното отстраняване на всички защитни групи от страничната верига и освобождаване от полимерния носител, изолираният суров пептид със съдържание около 71% (ТХВН) се използва в следващия етап без допълнително пречистване.
Заместването в страничната верига на D-лизин с 4-(4-аминофенил)амино-1,4-диоксомаслена киселина се извършва с пиридин-Вор в ДМф с прибавяне на ДИПЕА. Изолираният суров пептид се пречиства с препаративна ТХВН. След крайното сублимационно сушене се получава 98%-ен продукт (трифлуорацетат) със сумарна формула С82Н106С11\119О15 с коригиран МС-(бомбардировка с бързи атоми) 1633 (М + Н) (изчисл. 1631.78096). Пример 3 (D-68971) Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-Н-Ме-Тир5-О-Лиз(Б)6-Нле7-Лиз(из6пропил)8-Про9-Сар10-МН2;
Синтезът на декапептидът се извършва върху полимерен носител с плътност на зареждане 0.55 ммол/г (аминометил-заместена смола, Fmocзащита, тип D-1675 от фирма Bachem). Лизинът се свързва под формата на Fmoc-D41n3(Boc)-OH, като защитните групи Fmoc се отстраняват с 20% пиперидин/ДМф. След едновременното отстраняване на всички защитни групи от страничната верига и освобождаване от полимерния носител, изолираният суров пептид (съдържание около 59%, ТХВН) се пречиства с препаративна ТХВН. След сублимационно сушене се получава 95%-ен декапептид.
Ч
Заместването в страничната верига на D-лизин с 4-(4-аминофенил)амино-1,4-диоксомаслена киселина се извършва с пиридин-Вор в ДМф с прибавяне на ДИПЕА. Изолираният суров пептид се пречиства с препаративна ТХВН. След крайното сублимационно сушене се получава 96.6%-ен продукт (трифлуорацетат) със сумарна формула θ854ΐ12θΙΝ17Ο15 C коригиран МС-(бомбардировка с бързи атоми) 1648 (М+Н) (изчисл. 1645.8218).
Пример 4 (D-68987) Ац-0-Нал(2)1-0-фал(4-С1)2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Лиз(Б)6-Нле7-Лиз(изоnponnn)8-npo9-D-Ana10-NH2,·
Синтезът на D-Лиз-б-незаместен декапептид се извършва върху 9.09 г полимерен носител с плътност на зареждане 0.55 ммол/г. Лиз6 се свързва под формата на Fmoc-DJln3(Boc)-OH.
След отделяне от смолата, се изолират 8.15 г суров пептид. Пречистването на суровия пептид се извършва с препаративна ТХВН.
Заместването в страничната верига на D-лизин с 4-(4-аминофенил)амино-1,4-диоксомаслена киселина се извършва с пиридин-Вор в ДМф с прибавяне на ДИПЕА. Изолираният суров пептид се пречиства с препаративна ТХВН. След крайното сублимационно сушене се получава 94.6%-ен продукт (трифлуорацетат) със сумарна формула θ85Ηΐΐ2θΙΝ17Ο15 ** със съответния МС-(бомбардировка с бързи атоми) 1646.8 (М+Н, изчисл.
1645.82).
Пример 5: Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Цит6-Нле7-Арг8-Про9-0Ana10-NH2.
Пример 6: Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-1М-Ме-Тир5-0-Хци6-Лев7-Арг8-Про9-0Ала10-ИН2.
Пример 7: Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Цит6-Нле7-Лиз(изопропил)8-Про9-О-Ала10-МН2.
Пример 8: Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Хци6-Лев7-Лиз(изоnponnn)8-npo9-D-Ana10-NH2.
Обши правила за работа за получаване на пептидите съгласно примери от 5 до 8:
Декапептидите могат да се получат както по метода на Мерифийлд, чрез синтез в твърда фаза, така и съгласно клаческата фрагментна кондензация в разтвор. Изграждането на пептидната последователност върху полимерен носител е за предпочитане от икономическа гледна точка и принципно може да се извърши по избор с (1) Вос- или с (2) Fmocстратегия, като съответно може да се извърши или с метилбензхидриламинна смола (за пр. 1) или с Е-тос-2,4-диметокси-4’-(карбоксиметилокси)бензхидриламинна смола (за пр. 2) за свързване на D-Ала в С-края.
Синтез в твърда фаза, метод на Мерифийлд:
Декапептидите се синтезират при стандартизирани условия на реакция (технологична схема, Таблица I) за синтез в твърда фаза по технологията Fmoc с използване на 5 грама от полимерния носител Fmoc-
2,4-диметокси-4’-(карбоксиметилокси)бензхидриламинна смола от фирма Bachem D 1675, плътност на зареждане около 0.55 ммол/г, размер на зърната 200-400 меша.
Последователното създаване на последователността върху смолата с помоща на Na-Fmoc-защитени аминокиселини, протича по следната технологична схема:
Таблица I:
Етап Действие Разтворител Време Повтаряне
1 Промиване ДМФ 2 мин х2
2 Отцепване 20% пиперидин в ДМФ 5 мин ' х 2
3 Промиване ДМФ 2 мин х2
4 Промиване изопропанол 2 мин х1
5 Промиване ДМФ 2 мин х2
6 Промиване изопропанол 2 мин х1
7 Промиване ДМФ 2 мин х2
8 Присъединяване Вос-АК-ОН, НОВТ, ДИК в ДМФ 90 мин х1
9 Промиване дмф 2 мин х1
10 Промиване изопропанол 2 мин х1
11 Промиване ДМФ 2 мин х1
12 Промиване изопропанол 2 мин х 1
13 Промиване ДМФ 2 мин х1
14 Промиване изопропанол 2 мин х1
15 Доказване Хлоранил-оцветяващ тест*
(* по Т. Christensen, Acta Chem. Scand. B 33, 763-766, 1979)
Типични за метода (повтаряеми) параметри на реакцията за синтез в твърда фаза на декапептиди съгласно горната схема са:
• Отцепване на защитната група Fmoc с 20% пиперидин в ДМф, 2x5 мин при стайна температура (етап 2).
• Присъединяването се извършва в трикратен молен излишък на Fmoc-
С аминокиселините с диизопропилкарбодиимид (ДИК) в присъствие на хидроксибензотриазол (НОВТ) (етап 8).
• Отцепване на С-края от полимерния носител включително и отстраняването на защитните групи от страничните вериги на аминокиселините с трифлуороцетна киселина (ТфК).
След отцепване от полимерния носител, с използване на 5 грама смола, се получават около 5-6 г сурова пептидна смес с 70-80% съдържание на желаните компоненти; последните се получават при последващата препаративна ТХВН.
W Пречистване на декапептиди с препаративна ТХВН: хроматографски условия
Препаративна ТХВН, фирма Shimadzu, колона Dynamax RP18, 12 мкм, 300а L = 250 мм, вътр. диам. = 41.1 мм
Градиентна система с програма за време, 40% В 90% В, 50 мин Елеунт А: 970 мл Н2О + 30 мл CH3CN + 1 мл CF3COOH Елуент В: 300 мл Н2О + 700 мл CH3CN + 1 мл CF3COOH УВ-детекция, λ = 220 нм, дебит 60 мл/мин
Получените фракции се концентрират под вакуум и лиофилизират. Декапептидите се получават под формата на лек, безцветен материал.
Превръщането в ацетатна сол, която е необходима за фармакологични цели, се извършва накрая чрез хроматографски йонообмен. Тестово за биологичното действие:
Съединенията на изобретението с формула I се тестват за рецепторно свързване. Методът следва описания от Beckers et al., Eur. J. Biochem. 231, 535-543 (1995). След извършване на публикувания по-горе синтез, полученият Цетрореликс се йодира с [125l] (Amersham, специфична активност 80.5 Bq/фмол) с използване на реагенти lodoGen (Pierce). Реакционната смес се пречиства с високоефективна течна хроматография (ВЕТХ) с обратна фаза, при което се получава монойодиран Цетрореликс без немаркиран пептид. Само около 80% [1251]-цетрореликс и от немаркираното съединение, съгласно изобретението са годни за специфично рецепторно свързване.
Съединенията съгласно съединението, могат да бъдат тествани за in vitro-активността им по дадените по-долу методи: (1) и (2), с които се определят афинитетите на свързване в теста за свързване с [1251]-цетрореликс (метод 1) и функционалните активности с трипторелин като стимулиращ агонист (метод 2).
Метод 1 (определяне на KD в пример с цетрореликс):
Тестът за рецепторно свързване е по Beckers, Т., Marheineke, К., Reilaender, Н., Hilgard Р. (1995) „Selection and characterization of mammalian cell lines with stable overexpression of human pituarity receptors for gonadoliberin (GnRH),„ Eur. J. Biochem. 231,535-543.
За изследване на рецепторното свързване, цетрореликс се йодира с [125l] (Amersham; 80.5 Bq/фмол специфична активност) с реактиви lodo-Gen (Pierce). Реакционната смес се пречиства с високоефективна течна хроматография с разменени фази, при което се получава монойодиран цетрореликс без немаркиран пептид. Около 80% от [1251]-цетрореликс е годен за специфично рецепторно свързване.
Тестът за рецепторно свързване се извършва с интактни клетки при физиологични условия, както описаните (Beckers et al. 1995). Субконфлуентни култури от стабилно транфицирани LTK'-клетки, експримиращи човешки LHRH-рецептор се отделят чрез инкубиране в NaCI/P; (137 ммола NaCI, 2.7 ммола KCI, 8.1 ммола Na2HPO4, 11.47 ммола КН2РО4)/1 ммол EDTA и се събират с центрофугиране. Утайката от клетки се ресуспендира в свързващ буфер (DMEM без Н2СО3 с 4.5 г/л глюкоза, 10 ммола Hepes, pH
7.5, 0.5% (маса/обем) BSA (говежди серумен албумин), 1 г/л бацитрацин, 0.1 г/л SBTI (соев трипсин инхибитор), 0.1% (маса/обем) NaN3). За теста на изместване се инкубират 0.25 х 106 клетки/100 мкл с около 225 пмола (пикомола) от [1251]-цетрореликс (специфична активнност 5-10x105 разп. за мин/ пмол с различни концентрации от немаркирано съединение на изобретението като конкурент. Клетъчната суспензия в 100 мкл свързваща среда се нанася в 400 мкл-ови тестови тръбички върху 200 мкл 84 об.% силиконово масло (тип 550 от фирма Merck) / 16 об.% парафиново масло. След инкубиране в продължение на 1 час при 37°С и с бавно, непрекъснато разклащане, клетките се отделят от инкубационната среда с центрофугиране в продължение на 2 минути при 9000 об/мин (роторен тип НТА 13.8; Heraeus Sepatec, Osterode/Germany). Връхчетата на тръбичките, съдържащи клетъчната утайка се отрязват. Клетъчната утайка и супранатантата се анализират чрез отчитане на γ-лъченето. Количеството на неспецифичното свързване се определя чрез включване не намаркиран цетрореликс при крайна концентрация 1 микромол и в типичния случай представлява < 10% от общия свързан материал. Анализът на данните от свързването се извършва с EBDA/лиганд-аналитична програма (Biosoft V 3.0). Цетрореликс показва стойност за KD равна на 170 пикомола на литър (пмол) (брой на проведените независими експеримента: 21).
Метод 2 (функционален тест за определяне на антагонистичното действие (стойности на 1С50)
Тестът трябва да бъде предвиден с дадените по-долу видоизменения, иначе се извършва по метода описан от Beckers, Т., Reilaender, Н., Hilgard, Р. (1997) „Characterization of gonadotropin-releasing hormone analogs based on a sensitive cellular luciferasa reporter gene assay,,, Analyt. Biochem. 251,1723 (beckers et al. 1997). 10 000 клетки/гнездо, които експримират човешки LHRH-рецептор и луцифераза-репортен ген, се култивират 24 часа в плака за микротитруване с DMEM с добавки и 1% (об.) фетален телешки серум. Накрая, клетките се стимулират 6 часа с 1 наномол [D-Tpn6]LHRH. Антагонистично действуващите съединения на изобретението се прибавят преди стимулирането и накрая клетките се лизират за количествено определяне на Лф-активността. Определянето на стойностите 1С50 се извършва от кривите доза-действие чрез нелинеен регресивен анализ с използване на модели на Hill (програма EDX 2.0 С. Grunwald, Arzneimittel-werk Dresden).
Количественото определяне на Лф-активността по същество се извършва както е описано в литературата (Promega Technical Bulletins # 101/161) с използване на съответните луцифераза-есей системи (Promega Е4030) като опитите се дублират. Чрез прибавяне на коензим А (КоА), се извършва окисление на луциферил-КоА, чията кинетика е предпочетена. След отстраняване на културалната среда от плаката за микротитруване, клетките се лизират с прибавяне на 100 мкл лизиращ буфер (25 ммола Трие -фосфат, pH 7.8, 2 ммола дитиотрейтол, 2 ммола 1,2-диаминоциклохексанΝ,Ν,Ν’,Ν’-тетраоцетна киселина, 10% (об) глицерин, 1% (об.) Тритон Х-100). След 15 минутно инкубиране при стайна температура, 10 мкл от клетъчния лизат се прехвърлят в бяла плака за микротитруване (Dynatech), пригодена за луминометрична детекция.
Ензимната реакция се инициира с прибавяне на 50 мкл есей-буфер (20 ммола Трицин pH 7.8, 1.07 ммола (MgCO3)4Mg(OH)2, 2.67 ммола MgSO4, 0.1 ммол етилендиаминтетраоцетна киселина (ЕДТА), 33.3 ммола дитиотрейтол, 270 микромола коензим А, 470 микромола луциферин от светещ червей (Photinus pyralis), 530 микромола pAT0Na2). След 1 минута, се определя луминисценцията за общо време от една секунда със сигнално полувреме от 5 минути с EG&G Berthold Micro-Lumat LB 96 Р.
На Таблица 2 са представени физико-химичните и in vitro-данните на съединенията на изобретението. 1С50 е показател за функционалната активност и рМ означава пикомол/литър. Разтворимостта във вода е определена по метода, описан в забележка (2).
Таблица 2
Съединение Водоразтворимост2 [мг/мл] 1С50 [рМ]
Цетрореликс 0.002 198 (5)'
Пример 1 (D-68968) 1.03 1300 (1)1
Пример 2 (D-68969) 1.11 1400(1)1
Пример 3 (D-68971) 1.36 4700 (1)1
Пример 4 (D-68987) 1.18 700 (1)1
Забележки:
1) Намиращата се в скоби цифра означава броя на независимите едни от друг експерименти
2) Водоразтворимостта се определя съгласно описания по-долу метод: w Разтворимост по метода на Амтсблат в разтвор на Рингер (Ringer)
За определяне на водоразтворимостта по метода на Амтсблат, тестваната субстанция, която е в излишък, се смесва с инертен носител, напр. пясък и се поставя в стъклена колона (с обем около 10 мл). Преди това на дъното на колоната се поставя сито от памук и филтър от стъкловлакна. Сместа субстанция-пясък се оставя да престои 1 час в 1.0 мл разтворител, в който ще трябва да се определя разтворимостта. След това в стъклената колона се наливат 10 мл от разтворителя. С помоща на помпа с маркуч разтворителят се изпомпва циклично. Този експеримент се извършва при стайна температура (около 20°С). Разтворимостта се определя, когато масовата концентрация на вземаните една след друга фракции е постоянна. Масовата концентрация се определя с помоща на дадения по по-долу метод с ТХВН.
Метод сТХВН:
Апаратура: Система за ТХВН:
Packard DAD серия 1100
Колона: материал размер на частиците размери на колоната производител:
Параметри на апаратурата: инжекционен обем поток температура на пеща дължина на вълната време на спиране
Hewlett Packard 1100; детектор: Hewlett
Нуклеосил Nucleosil® 120-3 С18 микрометра
125x4 мм
Macherey & Nagel
15микролитра
1.0мл/мин
45°С
226 нансметра мин
55% подвижна фаза А: Смесват се 970 мл Milli-Q-H2O, 30 мл ацетонитрил и 1 мл трифлуороцетна киселина. Полученото pH 1 около 1.9.
45% подвижна фаза В: Смесват се 300 мл Milli-Q-H2O, 700 мл ацетонитрил и 1 мл трифлуороцетна киселина. Полученото pH 1 около 1.8.
Даването на съединенията съгласно изобретението може да се извърши под най-различна, подходяща за пептидната активна съставка форма. Подходящите лекарствени форми са добре познати на специалиста. Даването може да се осъществи, например, чрез инжекция. Може да се извърши и парентерално. Предпочетените форми са подкожна, мускулна, венозна, букална (напр. подезична) или ректална. Особено предпочетени са венозната и интраспиналните.
Съединенията, съгласно изобретението са пригодни за изработване на най-различни форми за приемане, напр. лиофилизати, разтвори или суспензии. Подходящите форми за приемане и тяхното получаване са добре известни на специалиста. Като подходящи помощни вещества или носители са пригодни напр. следните субстанции: хексит, като манит, поспециално D-манит, L-манит или D.L-манит, сорбит, като D-сорбит, D- или Lалтрит, идит, глуцит и дулцит. Изработката се извършва по известни методи, напр. смесване, суспендиране или лиофилизиране.
Пример А: Лиофилизат за получаване на инжекционен разтвор за подкожни инжекции мг от съединението на пример 1 (отговарящ на 0.26-0.27 мг ацетатна сол); 0.16.9 тегловни части D-манитол, за предпочитане, 0.1-7 тегловни части, отнесени спрямо пример 1 и вода за инжекции (за получаване на инжекционен разтвор от лиофилизата).
Поручаване: 1.62 г от съединението на пример 1 се разтварят в 30% оцетна киселина (около 1.5 л вода за инжекции и 91.17 г оцетна киселина). Разтворът се разрежда с 1.5 л вода. Прибавят се 82.2 г манитол, филтрува се стерилно и с него се напълват, при асептични условия, 2 мл-ови стерилни флакони за инжекция и се подлагат на сублимационно сушене. Получава се 1 мг лиофилизат от съединението, съгласно пример 1.
Съединенията съгласно изобретението са подходящи за лечение на злокачествени или незлокачествени, хормонозависими заболявания, например за лечение на карцином на гърдата, на простатата, на ендометриоза, на миоми на матката, на доброкачествена хиперплазия на простатата, както и за лечение на нарушения във фертилитета при жените и мъжете, напр. за предотвратяване на преждевременно отделяне на яйцеклетката при пациентки, които са се подложили на контролирано овариално стимулиране, което ще бъде последвано от изваждане на яйцеклетка и подлагането й на техниките на изкуствено оплождане. Споменатите лечения могат да се провеждат при млекопитаещи, по-специално при човека.

Claims (16)

  1. ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ
    1. Съединения с обща формула I:
    A-Ххх1 -Ххх2-Ххх3-Ххх4-Ххх5-Хххб-Ххх7-Ххх8-Ххх9-Ххх1 °-N Н2, (I) в която: А означава ацетилна група Ххх1 - D-Han(2) Ххх2 D-Хфа Ххх3 - D-Flan(3) Ххх4 - Cep Ххх5 - N-Ме-Тир Ххх6 - D-Цит, D-Хци или 0-[8-1\Г-4-(4-амидинофенил)амино-1,4-диоксо- бутил]-Лиз (или съкратено: О-Лиз(Б)), Ххх7 - Лев или Нле Ххх8 - Apr или Лиз(изопропил), Ххх9 - Про и Ххх10 - D-Ала или Cap,
    при условие, че когато Ххх6 означава О-Лиз(Б), тогава Ххх7 е Нле, когато Ххх6 означава D-Цит, тогава Ххх7 е Нле и Ххх10 е D-Ала или когато Ххх6 означава D-Хци, тогава Ххх7 е Лев и Ххх10 е D-Ала, както и техните соли с фармацевтично приемливи киселини.
  2. 2. Съединение, съгласно претенция 1, с формула: Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Лиз(Б)6-Нле7-Арг8-Про9Cap10-NH2 или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
  3. 3. Съединение, съгласно претенция 1, с формула:
    Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Лиз(Б)6-Нле7-Арг8-Про9D‘Ana10-NH2 или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
  4. 4. Съединение, съгласно претенция 1, с формула:
    Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-О-Лиз(Б)6-Нле7-Лиз(изопроnnn)8-ilpo9-Cap10-NH2 или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
  5. 5. Съединение, съгласно претенция 1, с формула:
    Ац-О-Нал(2)1-В-фал(4-С1)2-О-Пал(3)3-Сер4-1\1-Ме-Тир5-О-Лиз(Б)6-Нле7-Лиз(изопропил)8-Про9-О-Ала 10-NH2;
    или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
  6. 6. Съединение, съгласно претенция 1, с формула: Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-О-Цит6-Нле7-Арг8-Про9-ОAna10-NH2;
    или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
  7. 7. Съединение, съгласно претенция 1, с формула: Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4Х-Ме-Тир5-0-Хци6-Лев7-Арг8-Про9-0Ana10-NH2;
    или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
  8. 8. Съединение, съгласно претенция 1, с формула:
    Ац-0-Нал(2)1-0-Хфа2-0-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-0-Цит6-Нле7-Лиз(изопропил)8ripo9-D-Ana10-NH2;
    или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
  9. 9. Съединение, съгласно претенция 1, с формула: Ац-О-Нал(2)1-О-Хфа2-О-Пал(3)3-Сер4-М-Ме-Тир5-О-Хци6-Лев7-Лиз(изопропил)8ripo9-D-Ana10-NH2;
    или негова сол с фармацевтично приемливи киселини.
  10. 10. Съединения, съгласно една от претенциите от 1 до 9, при които солта може да бъде ацетат, трифлуорацетат или ембонат (памоат).
  11. 11. Съединения, съгласно една от претенциите от 1 до 10 с приложение като лекарствени средства.
  12. 12. фармацевтичен състав, фарактеризиращ се с това, че включва наймалко едно съединение, съгласно една от претенциите от 1 до 10, както и традиционни носители и помощни вещества.
  13. 13. Метод за получаване на съединения с обща формула I, съгласно претенция 1, както и на претенциите от 2 до 9, характеризиращ се с това, че фрагменти от градивни единици, защитени с подходящи групи, с обща формула Хххт, в която m е цяло число от 1 до 10 и от които Ххх1 е ацетилиран, при което споменатите фрагменти са включени по познати методи в твърда фаза или разтвор, накрая се присъединяват един с друг и след присъединяването, съединенията с обща формула I, по познати методи и при амидиране на фрагмента Ххх10, се отделят от твърдата фаза.
  14. 14. Приложение на съединенията съгласно претенции от 1 до 10 за получаване на лекарствени средства за лечение на хормонозависими томори, по-специално на карцином на простатата, рак на гърдата или миома на матката, както и на незлокачествени индикации, чието лечение налага подтискане на LH-RH-хормона, като ендометриоза, доброкачествена хиперплазия на простатата или за лечение на нарушения във фертилитета при жената и мъжа, при млекопитаещи, по-специално, при човека.
    S
  15. 15. Метод за получаване на фармацевтични лекарствени състави, съгласно претенция 12, характеризиращ се с това, че най-малко от едно съединение, съгласно една от претенциите от 1 до 10 се получава лекарствена форма, чрез смесване с познатите носители и помощни вещества.
  16. 16. Метод за лечение на хормонозависими тумори, по-специално на карцином на простатата, рак на гърдата или миома на матката, както и на незлокачествени заболявания, чието лечение налага подтискане на LH-RHхормона, като ендометриоза, доброкачествена хиперплазия на простатата, както и за лечение на нарушения във фертилитета при млекопитаещи, по специално при при човека, характеризиращ се с това, че се дава активна доза от най-малко едно от съединенията съгласно претенции от 1 до 10.
BG107121A 2000-03-14 2002-09-18 Нови lhrh-антагонисти, тяхното получаване и използване като лекарственo средствo BG107121A (bg)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US09/525,007 US6627609B1 (en) 1999-03-17 2000-03-14 LHRH antagonists having improved solubility properties
PCT/EP2001/002719 WO2001068676A2 (de) 2000-03-14 2001-03-12 Lh-rh-antagonisten, deren herstellung und verwendung als arzeimittel

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BG107121A true BG107121A (bg) 2003-05-30

Family

ID=24091545

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG107121A BG107121A (bg) 2000-03-14 2002-09-18 Нови lhrh-антагонисти, тяхното получаване и използване като лекарственo средствo

Country Status (25)

Country Link
EP (1) EP1268522B1 (bg)
JP (1) JP3805679B2 (bg)
KR (1) KR100607396B1 (bg)
CN (2) CN100500692C (bg)
AT (1) ATE408619T1 (bg)
AU (2) AU2001260110B2 (bg)
BG (1) BG107121A (bg)
BR (1) BR0109279A (bg)
CA (1) CA2402193C (bg)
DE (1) DE50114335D1 (bg)
DK (1) DK1268522T3 (bg)
ES (1) ES2312435T3 (bg)
HR (1) HRP20020810A2 (bg)
HU (1) HUP0300222A3 (bg)
IL (1) IL151647A0 (bg)
MX (1) MXPA02008870A (bg)
NO (1) NO20024363L (bg)
NZ (1) NZ521273A (bg)
PL (1) PL357999A1 (bg)
PT (1) PT1268522E (bg)
RU (1) RU2248982C9 (bg)
SK (1) SK14332002A3 (bg)
UA (1) UA79070C2 (bg)
WO (1) WO2001068676A2 (bg)
ZA (1) ZA200207248B (bg)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100340572C (zh) * 2004-12-01 2007-10-03 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 新的lhrh拮抗剂
CN101037472B (zh) * 2006-03-14 2013-03-27 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 具有低组胺释放作用的促黄体生成素释放激素拮抗剂
BRPI0906404B8 (pt) 2008-01-24 2021-05-25 Univ Louisiana State construção de fusão com domínio lítico, seus usos, composição farmacêutica, bem como processo para reduzir ou inibir seletivamente a proliferação de uma célula que expressa um receptor, ligante ou antígeno
CN101597321B (zh) * 2008-06-03 2013-04-24 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 长效低组胺释放副作用的lhrh拮抗剂
WO2010142060A1 (zh) * 2009-06-11 2010-12-16 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 长效低组胺释放副作用的lhrh拮抗剂
EP4035685A1 (en) 2012-10-30 2022-08-03 Esperance Pharmaceuticals, Inc. Antibody/drug conjugates and methods of use
CN104418936B (zh) * 2013-08-20 2018-06-05 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 Lhrh拮抗剂衍生物及其药物用途
FR3024612B1 (fr) * 2014-08-04 2018-03-09 Alstom Transp Tech Module d'alimentation electrique d'un bloc moteur, systeme de traction et vehicule electrique associe
RU2585367C1 (ru) * 2014-11-05 2016-05-27 Наталья Владимировна Спиридонова Способ лечения бесплодия у женщин с миомой матки

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5300492A (en) 1988-02-10 1994-04-05 Tap Pharmaceuticals LHRH analogs
US5110904A (en) * 1989-08-07 1992-05-05 Abbott Laboratories Lhrh analogs
US5140009A (en) 1988-02-10 1992-08-18 Tap Pharmaceuticals, Inc. Octapeptide LHRH antagonists
IL101074A (en) 1991-03-14 1997-09-30 Salk Inst For Biological Studi GnRH ANALOGS AND THEIR PREPARATION
DE593491T1 (de) 1991-04-25 1994-11-17 Romano Deghenghi LHRH-Antagonisten.
JPH08504209A (ja) 1992-12-04 1996-05-07 アボツト・ラボラトリーズ ６位修飾デカペプチドｌｈｒｈ拮抗薬
DK0683792T3 (da) 1992-12-18 2002-01-14 Abbott Lab LHRH-antagonister med modificerede aminoacylrester i stilling 5 og 6
IL108509A0 (en) 1993-02-22 1994-05-30 Salk Inst For Biological Studi GnRH antagonist peptides
DE4320201A1 (de) * 1993-06-18 1995-01-12 Asta Medica Ag Verwendung von Cetrorelix und weiteren Nona- und Dekapeptiden zur Herstellung eines Arzneimittels zur Bekämpfung von Aids und zur Wachstumsstimulation
DE19544212A1 (de) * 1995-11-28 1997-06-05 Asta Medica Ag Neue LH-RH-Antagonisten mit verbesserter Wirkung
DE19911771B4 (de) * 1999-03-17 2006-03-30 Zentaris Gmbh LHRH-Antagonist, Verfahren zu seiner Herstellung und seiner Verwendung

Also Published As

Publication number Publication date
NO20024363L (no) 2002-11-13
CN100500692C (zh) 2009-06-17
CA2402193A1 (en) 2002-09-09
UA79070C2 (en) 2007-05-25
RU2248982C9 (ru) 2005-06-10
PT1268522E (pt) 2008-12-22
EP1268522B1 (de) 2008-09-17
NZ521273A (en) 2005-01-28
CN1443195A (zh) 2003-09-17
DK1268522T3 (da) 2009-01-12
BR0109279A (pt) 2002-12-17
HUP0300222A3 (en) 2004-08-30
HUP0300222A2 (hu) 2003-07-28
SK14332002A3 (sk) 2003-09-11
MXPA02008870A (es) 2003-06-24
PL357999A1 (en) 2004-08-09
DE50114335D1 (de) 2008-10-30
JP3805679B2 (ja) 2006-08-02
WO2001068676A2 (de) 2001-09-20
ES2312435T3 (es) 2009-03-01
AU2001260110B2 (en) 2005-05-05
EP1268522A2 (de) 2003-01-02
ZA200207248B (en) 2003-02-21
KR20020083179A (ko) 2002-11-01
WO2001068676A3 (de) 2002-10-24
AU6011001A (en) 2001-09-24
IL151647A0 (en) 2003-04-10
CN1876677A (zh) 2006-12-13
NO20024363D0 (no) 2002-09-12
HRP20020810A2 (en) 2004-12-31
KR100607396B1 (ko) 2006-08-02
JP2003535044A (ja) 2003-11-25
RU2248982C2 (ru) 2005-03-27
CA2402193C (en) 2010-05-18
ATE408619T1 (de) 2008-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2944669B2 (ja) ペプチド、その製造法、該ペプチドを含有する、ｌｈｒｈ拮抗剤
KR930008095B1 (ko) Lhrh 길항제로서 유용한 lhrh의 노나펩타이드 및 데카펩타이드 동족체
DK171483B1 (da) Aminosyrederivater
US20060281685A1 (en) Methods of treatment using novel lhrh antagonists having improved solubility properties
JPS61122297A (ja) 新規ハロ低級アルキルグアニジノ置換アミノ酸化合物およびその製法
WO1995004540A1 (en) N-terminus modified analogs of lhrh
BG107121A (bg) Нови lhrh-антагонисти, тяхното получаване и използване като лекарственo средствo
HU208159B (en) Process for producing 1h-rh analogs and pharmaceutical compositions comprising same
EP0738154A1 (en) N-terminus modified analogs of lhrh
BG64386B1 (bg) Нови lн-rн-антагонисти с подобрено действие
JPS63303999A (ja) バソプレシン拮抗剤