KR20020083179A - 신규한 ｌｈｒｈ 길항제, 이의 제조 방법 및 약제로서의이의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 N-메틸화된 아미노산 성분을 포함하고 수용해도가 개선된 펩타이드에 관한 것이다. 본 발명에 따라 당해 펩타이드를 함유하는 약물이 호르몬 의존성 종양 및 호르몬 영향의 비악성 질환 증상을 치료하는데 사용될 수 있다.

Description

신규한 ＬＨＲＨ 길항제, 이의 제조 방법 및 약제로서의 이의 용도{Novel LHRH antagonists, production and use thereof as medicament}
본 발명은 용해도 특성이 개선된 LHRH 길항제, 이들 화합물의 제조 방법, 이들 화합물을 함유하는 약제 및 호르몬 의존성 종양 및 호르몬 영향 비악성 장애[예: 양성 전립선 과형성(BPH) 및 자궁내막증]를 치료하기 위한 약제의 용도에 관한 것이다.
펩타이드의 정의를 위해 사용된 명명법은 생화학 명명법[참조문헌: European J. Biochem. 1984, 138, 9 - 37]에 대해 IUPAC-IUB 위원회가 밝힌 명명법을 준수하고 협정에 따라 N 말단의 아미노 그룹을 좌측에 나타내고 C 말단의 카복실 그룹을 우측에 나타낸다. 본 발명에 따른 펩타이드와 같은 LH-RH 길항제는 천연적으로 존재하는 아미노산 및 합성 아미노산을 포함하고 천연 아미노산은 Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gln, Cys, Met, Phe, Tyr, Pro, Trp 및 His를 포함한다. 각각의 아미노산 잔기에 대한 약자는 아미노산의 3개 문자의 통칭명을 기준으로 하고 다음과 같다: Ala = 알라닌, Arg = 아르기닌, Gly = 글라이신, Leu = 류신, Lys = 라이신, Pal(3) = 3-(3-피리딜)알라닌, Nal(2) = 3-(2-나프틸)알라닌, Phe = 페닐알라닌, Cpa = 4-클로로페닐알라닌, Pro = 프롤린, Ser = 세린, Thr = 트레오닌, Trp = 트립토판, Try = 타이로신 및 Sar = 사르코신. 여기에기재된 모든 아미노산은 특별한 언급이 없는 경우 L-계열로부터 유래하는 것이다. 예를 들어, D-Nal(2)는 3-(2-나프틸)-D-알라닌에 대한 약자이고 Ser은 L-세린에 대한 약자이다. 라이신 측쇄의 ε-아미노 그룹에 대한 치환체는 Lys의 뒤에 괄호안에 위치한 용어, 적절한 경우 약자의 형태로 나타낸다.
사용되는 또 다른 약자는 다음과 같다:
Ac = 아세틸,
B = 4-(4-아미디노페닐)아미노-1,4-디옥소부틸,
Boc = 3급-부틸옥시카보닐,
Bop = 벤조트리아졸-1-옥시-트리스(디메틸아미노)-포스포늄 헥사플루오로포스페이트,
DCC = 디사이클로헥실카보디이미드,
DCM = 디클로로메탄,
Ddz = 디메톡시페닐-디메틸메틸렌옥시-카보닐(디메톡시-디메틸-Z),
DIC = 디이소프로필카보디이미드,
DIPEA = N,N-디이소프로필에틸아민,
DMF = 디메틸포름아미드,
Fmoc = 플루오레닐메틸옥시카보닐,
HF = 하이드로플루오르산,
HOBt = 1-하이드록시벤조트리아졸,
HPLC = 고압 액체 크로마토그래피,
Me = 메틸,
TFA = 트리플루오로아세트산,
Z = 벤질옥시카보닐.
본 발명에 따른 펩타이드는 황체형성-호르몬-방출 호르몬(LH-RH)의 유사체이고 하기의 구조를 갖는다:
p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2, [LH-RH, 고나도렐린].
20년 이상동안, 연구자들은 LH-RH 데카펩타이드에 대한 선택적이고 효능적인 길항제를 모색하고자 노력해왔다[문헌참조: M. Karten and J.E. Rivier, Endocrine Reviews 7, 44-66(1986)]. 이러한 길항제가 크게 관심이 되는 것은 내분비학, 부인과학, 피임법 및 암 분야에서의 이의 유용성 때문이다. 많은 화합물들이 잠재적인 LH-RH 길항제로서 제조되었다. 지금까지 밝혀진 가장 흥미로운 화합물은 이의 구조가 LH-RH 구조의 변형체인 화합물이다.
제1 계열의 효능적인 길항제는 방향족 아미노산 잔기를 1, 2, 3 및 6 또는 2, 3 및 6위치에 도입함으로써 수득된다. 화합물을 기술하는 통상적인 방법은 다음과 같다: 처음에 LH-RH의 펩타이드 쇄에 본래 존재하는 아미노산의 위치를 차지하고 있는 아미노산을 표기하고 치환이 일어난 위치를 윗첨자로 표기한다. 추가로 그 다음 위치에 "LH-RH"를 표기하여 이들이 치환된 LH-RH 유사체임을 표현한다.
공지된 길항제는 다음과 같다:
[Ac-D-Cpa1,2, D-Trp3,6] LH-RH[문헌참조: D.H. Coy et al., In: Gross, E. and Meienhofer, J.(Eds) Peptides; Proceedings of the 6th American Peptide Symposium, pp. 775-779, Pierce Chem. Co., Rockville III.(1979)]; [Ac-Pro1, D-Cpa2, D-Nal(2)3,6] LH-RH[참조문헌: 미국 특허 제4,419,347호] 및 [Ac-Pro1, D-Cpa2, D-Trp3,6] LH-RH[문헌참조: J. L. Pineda, et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, 420, 1983].
이후에 길항제의 작용을 개선시키기 위해 염기성 아미노산, 예를 들어, D-Arg를 6 위치에 도입한다: 예를 들어, [Ac-D-Cpa1,2, D-Trp3, D-Arg6, D-Ala10] LH-RH(ORG-30276)[문헌참조: D.H. Coy, et al., Endocrinology 100, 1445, 1982)] 및 [Ac-D-Nal(2)1, D-Phe(4-F)2, D-Trp3, D-Arg6] LH-RH(ORF 18260)[문헌참조: J.E. Rivier et al., in: Vickery B.H. Nestor, Jr. J.J., Hafez, E.S.E(Eds). LHRH and its Analogs, pp. 11-22 MTP Press, Lancaster, UK 1984]가 있다.
추가로 효능적인 LH-RH 길항제는 문헌[참조: WO 92/19651, WO 94/19370, WO 92/17025, WO 94/14841, WO 94/13313, US-A 5,300,492, US-A 5,140,009, EP 0 413 209 A1 및 DE 195 44 212 A1]에 기술되어 있다.
후자는 6 위치에 변형된 오르니틴 또는 라이신 단위체를 갖고 하기 화학식에 상응하는 화합물을 기술하고 있다:
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-Tyr5-D-Xxx6-Leu7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2(여기서, D-Xxx는 하기 화학식 VI의 아미노산 그룹이다).
추가로 공지된 LH-RH 길항제는 안타렐릭스, 가니렐릭스 및 세트로렐릭스이다.
안타렐릭스R(INN: 테베렐릭스):
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-Tyr5-D-Hci6-Leu7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala10-NH2
가니렐릭스:
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-Tyr5-D-hArg(Et)2 6-Leu7-hArg(Et)2 8-Pro9-D-Ala10-NH2
세트로렐릭스:
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-Pal(3)3-Ser4-Tyr5-D-Cit6-Leu7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2
본 발명의 목적은 효소 안정성이 증진되고 수용해도가 상당히 개선된 신규 LH-RH 길항제를 제조하는 것이다.
상기 목적은 하기 화학식 I의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 산과의 염, 특히, 아세테이트, 엠보네이트 및 트리플루오로아세테이트에 의해 성취된다.
A-Xxx1-Xxx2-Xxx3-Xxx4-Xxx5-Xxx6-Xxx7-Xxx8-Xxx9-Xxx10-NH2
상기식에서,
A는 아세틸 그룹이고,
Xxx1은 D-Nal(2)이고,
Xxx2는 D-Cpa이고,
Xxx3은 D-Pal(3)이고,
Xxx4는 Ser이고,
Xxx5는 N-Me-Tyr이고,
Xxx6은 D-Cit, D-Hci 또는 D-[ㆍ-N'-4-(4-아미디노페닐)-아미노-1,4-디옥소부틸]Lys(약자: D-Lys(B)]이고,
Xxx7은 Leu 또는 Nle이고,
Xxx8은 Arg 또는 Lys(iPr)이고,
Xxx9은 Pro이고,
Xxx10은 D-Ala 또는 Sar이고,
단, Xxx6이 D-Lys(B)인 경우, Xxx7은 Nle이고, Xxx6이 D-Cit인 경우 Xxx7은 Nle이고 Xxx10은 D-Ala 이거나,
Xxx6이 D-Hci인 경우, Xxx7은 Leu이고 Xxx10은 D-Ala이다.
본 발명의 추가의 측면에 따라, 하기의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 산과의 염이 특히 바람직하다:
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7-Arg8-Pro9-Sar10-NH2,
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2,
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7-Lys(iPr)8-Pro9-Sar10-NH2,
Ac-D-Nal(2)1-D-Phe(4-Cl)2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala10-NH2,
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Cit6-Nle7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2,
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-Leu7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2,
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Cit6-Nle7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala10-NH2및
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-Leu7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala10-NH2.
본 발명의 추가의 측면에 따라, 본 발명의 화합물은 아세테이트, 트리플루오로아세테이트 또는 엠보네이트 염으로서 존재한다.
본 발명의 추가의 측면에 따라, 본 발명의 화합물은 약물 또는 약제로서 사용될 수 있다.
본 발명의 추가의 측면에 따라, 본 발명에 따른 하나 이상의 화합물, 통상적인 비히클 및 부형제를 함유하는 약제가 제공된다.
본 발명의 추가의 측면에 따라, 적합한 보호 그룹이 제공된 Xxxm(여기서, m은 1 내지 10의 정수이고 Xxx1은 아세틸화된다)단위체로 부터의 단편을 통상적인 방법에 따라 고체상 또는 용액중에서 합성하고 이어서 단편을 절편 커플링에 의해 고체상에 결합시킨 후, 커플링 시킨후 화학식 I의 화합물을 Xxx10단위체를 아미드화시키면서 통상적인 방법을 사용하여 고체상으로부터 제거하는, 본 발명의 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법이 제공된다. 본 발명의 추가의 측면에 따라, 호르몬 의존성 종양, 특히, 전립선 암 또는 유방암 및 치료하는데 LH-RH 호르몬을 억제시킬 필요가 있는 비-악성 증후 치료용 약물을 제조하기 위한 본 발명의 화합물의 용도가 제공된다. 본 발명의 추가의 측면에 따라, 특허청구범위 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 하나 이상의 화합물을 통상적인 비히클 및 부형제와 혼합하고 약제로서 제형화시키는 약제의 제조 방법이 제공된다. 본 발명의 추가의 측면에 따라, 본 발명에 따른 하나 이상의 화합물의 유효량을 투여하여 포유동물, 특히 사람에게 있어서 호르몬 의존성 종양, 특히, 전립선 암, 유방암 또는 자궁 근종, 및 치료를 위해 LH-RH 호르몬을 억제시킬 필요가 있는 비악성 증후, 예를 들어, 자궁내막증, 양성 전립선 과형성(BPH) 및 남성 또는 여성의 불임증을 치료하기 위한 방법이 제공된다.
본 발명에 따른 화합물은 호르몬 의존성 종양, 특히, 전립선 암, 유방암 또는 자궁 근종, 및 치료를 위해 LH-RH 호르몬을 억제시킬 필요가 있는 비악성 증후,예를 들어, 자궁내막증, 양성 전립선 과형성(BPH)을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 추가로, 이들은 예를 들어, 시험관 수정 과정동안에 난소 과자극을 조절함으로써 남성 또는 여성의 불임증을 치료하는데 사용될 수 있다. 이러한 목적을 위해 이들은 통상적인 비히클 및 부형제와 통상적으로 혼합되고 공지된 방법 대로 약물로서 제형화된다. 화학식 I에 따른 화합물은 통상적인 단편 축합 또는 화학식 R1-COOH의 카복실산으로 측쇄내에 이미 아실화된 D-라이신을 사용하거나 데카펩타이드 단위체를 D-라이신6의 측쇄내 아미드 결합에 의해 적합한 카복실산과 반응시킴으로써 순차적으로 합성시키는 메리필드의 고체상 합성법에 의해 합성될 수 있다. 따라서, R1-CO 그룹을 상기 방법의 3개의 상이한 과정에서, 즉, 펩타이드를 수득하기 위해 각각의 단위체를 축합시키기 전에, 펩타이드 쇄에 라이신 또는 오르니틴을 도입한후, 또는 다음 단위체를 축합시키기 전 또는 모든 단위체를 축합시킨후에 도입시킬 수 있다. 화학식 I의 화합물은 공지된 방법, 예를 들어, 순수한 고체상 기술, 부분적인 고체상 기술(소위, 단편 축합) 또는 통상적인 용액 커플링 방법[문헌참조: M. Bodanszky, "Principles of Peptide Synthesis", Springer Verlag 1984]에 따라 합성된다. 예를 들어, 고체상 합성 방법은 교재["Solid Phase Peptide Synthesis", J.M. Stewart and J.D. Young, Pierce Chem. Company, Rockfield, III, 1984 and in G. Barany and R.B. Merrifield "The Peptides", Ch. 1, pp. 1-285, 1979, Academic Press Inc.]에 기술되어 있다. 통상적인 용액 합성법은 문헌[참조: the treatment "Methoden der Organischen Chemie(Methods of OrganicChemistry)(Houben-Weyl), Synthese von Peptiden"(Synthesis of Peptides] E. Wunsch (Editor)1974, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, FRG]에 상세하게 기술되어 있다. 예를 들어, 우선 α-아미노 그룹이 보호된 카복시 말단 아미노산을 통상적인 불용성 지지체에 결합시키고 당해 아미노산의 α-아미노 보호 그룹을 제거하고, 이어서 수득된 유리된 아미노 그룹을 보호된 다음 아미노산의 카복실 그룹에 결합시키고 이러한 방식으로 펩타이드의 통상적인 아미노산이 단계별로 정확한 순서로 합성되도록 연결시키고 모든 아미노산이 연결된 후 지지체로부터 최종 펩타이드를 제거하고 임의로 존재할 수 있는 추가의 측쇄 작용 보호 그룹을 제거하는 단계적 합성법을 수행한다. 단계적 축합은 통상적으로 보호된 상응하는 아미노산으로부터 합성시키는 통상적인 방식으로 수행된다.
각각의 아미노산은 서로 통상적인 방법에 따라 연결되고 적합한 방법은 다음과 같다:
ㆍ디사이클로헥실카보디이미드 또는 디이소프로필카보디이미드(DCC, DIC)의 존재하에 대칭적 무수물 방법,
ㆍ일반적인 카보디이미드 방법,
ㆍ카보디이미드/하이드록시벤조트리아졸 방법[문헌참조: The Peptides, Volume 2, Ed. E. Gross and J. Meienhofer]
단편 커플링에서, 라세미화 없이 진행되는 아지드 커플링 방법, DCC-1-하이드록시벤조트리아졸 또는 DCC-3-하이드록시-4-옥소-3,4-디하이드로-1,2,3-벤조트리아진 방법이 바람직하게 사용된다. 단편의 활성화된 에스테르가 또한 사용될 수있다.
N-보호된 아미노산의 에스테르, 예를 들어, N-하이드록시숙신이미드 에스테르 또는 2,4,5-트리클로로페닐 에스테르가 특히 아미노산의 단계적 축합을 위해 매우 적합하다. 아미노 가수분해는 대략적으로 아세트산의 산도를 갖는 N-하이드록시 화합물, 예를 들어, 1-하이드록시벤조트리아졸에 의해 매우 양호하게 촉매될 수 있다.
존재하는 중간체 아미노 보호 그룹 자체는 수소화에 의해 제거되는 그룹, 예를 들어, 벤질옥시카보닐 라디칼( = Z 라디칼) 또는 약산에 의해 제거될 수 있는 그룹이다. α-아미노 그룹에 대해 적합한 보호 그룹은 예를 들어, 3급 부틸옥시카보닐 그룹, 플루오레닐메틸-옥시카보닐 그룹, 카보벤족시 그룹 또는 카보벤조티오 그룹(각각의 경우 임의로 p-브로모-[상기한 바와 같음] 또는 p-니트로벤질 라디칼을 가짐), 트리플루오로아세틸 그룹, 프탈릴 라디칼, o-니트로페녹시아세틸 그룹, 트리틸 그룹, p-톨루엔설포닐 그룹, 벤질 그룹, 벤젠 핵에서 치환된 벤질 라디칼(p-브로모- 또는 p-니트로벤질 라디칼) 및 α-페닐에틸 라디칼이다. 본원에서 인용되는 참조문헌은 다음과 같다: P. Greenstein and Milton Winitz, Chemistry of Amino Acids, New York 1961, John Wiley and Sons, Inc., Volume 2, for example page 883 et seq., "Principles of Peptide Synthesis", Springer Verlag 1984, "Solid Phase Peptide Synthesis", J.M. Stewart and J.D. Young, Pierce Chem. Company, Rockford, III, 1984, G. Barany and R.B. Merrifield "The Peptides", Ch. 1, pp. 1-285, 1979, Academic Press Inc., and also ThePeptides, Volume 2, Ed. E. Gross and J. Maienhofer, Academic Press, New York. 이들 보호 그룹은 또한 기본적으로 상응하는 아미노산의 추가의 작용성 측쇄 그룹(OH 그룹, NH2그룹)의 보호를 위해 적합하다.
존재하는 하이드록실 그룹(세린, 트레오닌)은 바람직하게 벤질 그룹 및 유사 그룹에 의해 보호된다. α-위치에 없는 추가의 아미노 그룹(예를 들어, ω- 위치의 아미노 그룹, 아르기닌의 구아니디노 그룹)은 바람직하게 직각으로 보호된다.
R1-CO-그룹에 의해 변형된 라이신[생략]을 제외하고는 각각의 아미노산 단위체를 상업적으로 구입할 수 있다.
R1-CO-그룹에 의해 변형된 라이신을 제조하기 위한 가능한 방법은 다음과 같다:
1. α-카복실산 그룹을 적합하게, 예를 들어, 에스테르화시켜 보호한다.
2. ε-아미노 그룹을 예를 들어, Z 그룹으로 보호한다.
3. α-아미노 그룹을 예를 들어, Boc 그룹으로 보호하여 아미노 보호 그룹을 선택적으로 제거할 수 있게 한다.
4. ε-아미노 그룹상의 Z 그룹을 제거한다.
5. 목적하는 그룹 R1-CO-를 ε-아미노 그룹상에 도입한다.
6. α-아미노 그룹상의 보호 그룹을 제거한다.
7. α-아미노 그룹을 임의로 예를 들어, Z 그룹을 사용하여 가역적으로 유도화한다.
R1-CO-그룹을 도입하기 위해 라이신의 아미노 그룹을 적절한 카복실산 또는 카복실산 유도체와 반응시키는 적합한 방법은 상기한 바와 같이 아미노산을 연결하기 위한 방법과 기본적으로 동일하다. 그러나, 카보디이미드, 예를 들어, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드 및 1-하이드록시벤조트리아졸을 사용하여 축합시키는 것이 특히 바람직하다.
아미노산을 연결시키기 위한 반응은 통상적인 불활성 용매(예를 들어, 디클로로메탄) 또는 현탁제중에서 수행하고 용해도를 개선하기 위해 경우에 따라 디메틸포름아미드를 첨가할 수 있다.
적합한 합성 지지체는 유기 용매(예를 들어, 폴리스티렌 및 1% 디비닐벤젠의 공중합체)중에서 팽윤될 수 있는 불용성 중합체, 예를 들어, 비드 형태의 폴리스티렌 수지이다. 지지체로부터 HF 절단시킨 후에 펩타이드의 목적하는 C-말단 아미드 작용기를 제공하는 메틸벤즈하이드릴아민 수지(MBHA 수지, 즉, 메틸벤즈하이드릴아민 그룹이 제공된 폴리스티렌 수지)상에 보호된 데카펩타이드 아미드를 하기 표의 단계에 따라 합성할 수 있다:
표
Boc-보호된 아미노산을 사용한 펩타이드 합성 프로토콜
단계 작용 용매/시약(v/v) 시간
1 세척 메탄올 2 x 2 분
2 세척 DCM 3 x 3 분
3 제거 DCM/TFA(1:1) 1 x 30분
4 세척 이소프로판올 2 x 2 분
5 세척 메탄올 2 x 2 분
6 세척 DCM 2 x 3 분
7 중성화 DCM/DIPEA(9:1) 3 x 5 분
8 세척 메탄올 2 x 2 분
9 세척 DCM 3 x 3 분
10 종료 DCM + DIC + HOBt중에 Boc-As의 첨가
11 커플링 DCM, 임의로 DCM/DCF 약 90분
12 세척 메탄올 3 x 2 분
13 세척 DCM 2 x 3 분
Nα-Boc-보호된 아미노산은 90분동안 CH2Cl2/DMF중의 디이소프로필카보디이미드(DIC) 및 1-하이드록시벤조트리아졸(HOBt)의 존재하에 3배 몰 과량으로 커플링시키고 30분동안 CH2Cl2중의 50%의 트리플루오로아세트산(TFA)을 작용시켜 Boc-보호 그룹을 제거한다.
완전히 전환되었는지를 확인하기 위해, 크리스텐슨(Christensen) 및 카이저(Kaiser)의 닌하이드린 시험에 따라 클로라닐 시험을 사용할 수 있다. 유리된 아미노 작용기의 라디칼을 CH2Cl2중에서 5배 과량의 아세틸이미다졸로 아세틸화시켜 차단한다. 표 1의 일련의 반응 단계에 따라 수지상에서 펩타이드를 합성한다. 수지 결합 펩타이드를 제거하기 위해, 고체상 합성의 각각의 최종 생성물을 P2O5를 사용하여 진공건조시키고 500배 과량의 HF/아니졸 10:1/v:v에서 60분동안 0℃에서 처리한다.
진공하에 HF 및 아니졸을 증류시킨후에 교반과 함께 무수 에틸 에테르로 세척하여 펩타이드 아미드를 백색 고체로서 수득하고 부가적으로 수득된 중합 지지체를 50% 농도의 아세트산 용액으로 세척하여 제거한다. 아세트산 용액을 주의깊게 진공 농축시킴에 의해 냉각 용액중에 에테르를 첨가한 후에 백색 고체로 전환되는 고도의 점성 오일로서 각각의 펩타이드를 수득할 수 있다.
프렙용 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)의 통상적인 방법을 사용하여 추가로 정제한다.
펩타이드를 산과 반응시켜 공지된 방법대로 이의 산 부가염으로 전환시킬 수 있다. 역으로, 이의 산 부가염을 염기와 반응시켜 유리 펩타이드를 수득할 수 있다. 펩타이드 엠보네이트는 펩타이드의 트리플루오로아세트산 염(TFA 염)을 유리된 엠본산(파모산) 또는 엠본산의 상응하는 이나트륨 염과 반응시켜 제조할 수 있다. 이를 위해, 펩타이드 TFA 염을 수용액중에서 극성 비양성자성 매질, 바람직하게는 디메틸아세트아미드중의 이나트륨 엠보네이트로 처리하고 형성된 담황색 침전물을 분리한다.
하기의 실시예는 본 발명을 설명하기 위해 제공될 뿐 이를 제한하지 않는다.
실시예 1(D-68968)
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7-Arg8-Pro9-Sar10-NH2
로딩 밀도가 0.55mmol/g인 중합 지지체(아미노메틸-치환된 수지, Fmoc 보호, D-1675형, Bachem)상에서 데카펩타이드를 합성한다. 라이신을 Fmoc-D-Lys(Boc)-OH로서 커플링시키고 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF를 사용하여 제거한다. 모든 측쇄 보호 그룹을 동시에 제거하고 중합 지지체로부터 탈리시켜 분리된 조 펩타이드를 프렙용 HPLC를 사용하여 정제한다. 동결 건조시킨후에, 98.5% 농도의 데카펩타이드를 수득한다.
D-라이신의 ·질소- 를 DIPEA의 첨가와 함께 DMF중에서 PyBop를 사용하여 4-(4-아미노페닐)아미노-1,4-디옥소부티르산으로 치환시킨다. 분리된 조 펩타이드를 프렙용 HPLC를 사용하여 정제한다. 이어서 동결건조시켜 정확한 FAB-MS 1633(M + H)(계산치: 1631.78096)을 갖는 실험식 C82H106ClN19O15의 약 99% 농도의 생성물(트리플루오로아세테이트)을 수득한다.
실시예 2(D-68969)
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2
로딩 밀도가 0.55mmol/g인 중합 지지체(아미노메틸-치환된 수지, Fmoc 보호, D-1675형, Bachem)상에서 데카펩타이드를 합성한다. 라이신을 Fmoc-D-Lys(Boc)-OH로서 커플링시키고 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF를 사용하여 제거한다. 모든 측쇄 보호 그룹을 동시에 제거하고 중합 지지체로부터 탈리시켜 함량이 약 71%(HPLC)인 분리된 조 펩타이드를 추가의 정제없이 반응시킨다.
D-라이신의 측쇄를 DIPEA의 첨가와 함께 DMF중에서 PyBop를 사용하여 4-(4-아미노페닐)아미노-1,4-디옥소부티르산으로 치환시킨다. 분리된 조 펩타이드를 프렙용 HPLC를 사용하여 정제한다. 이어서 동결건조시켜 정확한 FAB-MS 1633(M + H)(계산치: 1631.78096)을 갖는 실험식 C82H106ClN19O15의 약 98.8% 농도의 생성물(트리플루오로아세테이트)을 수득한다.
실시예 3(D-68971)
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7-Lys(iPr)8-Pro9-Sar10-NH2
로딩 밀도가 0.55mmol/g인 중합 지지체(아미노메틸-치환된 수지, Fmoc 보호, D-1675형, Bachem)상에서 데카펩타이드를 합성한다. 라이신을 Fmoc-D-Lys(Boc)-OH로서 커플링시키고 Fmoc 보호 그룹을 20% 피페리딘/DMF를 사용하여 제거한다. 모든 측쇄 보호 그룹을 동시에 제거하고 중합 지지체로부터 탈리시켜 함량이 약 59%(HPLC)인 분리된 조 펩타이드를 프렙용 HPLC를 사용하여 정제한다. 동결건조시킨 후 95% 농도의 데카펩타이드를 수득한다.
D-라이신의 측쇄를 DIPEA의 첨가와 함께 DMF중에서 PyBop를 사용하여 4-(4-아미노페닐)아미노-1,4-디옥소부티르산으로 치환시킨다. 분리된 조 펩타이드를 프렙용 HPLC를 사용하여 정제한다. 이어서 동결건조시켜 정확한 FAB-MS 1648(M + H)(계산치: 1645.8218)을 갖는 실험식 C85H112ClN17O15의 약 96.6% 농도의 생성물(트리플루오로아세테이트)을 수득한다.
실시예 4(D-68987)
Ac-D-Nal(2)1-D-Phe(4-Cl)2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala10-NH2
로딩 밀도가 0.55mmol/g인 중합 지지체 9.09g상에서 D-Lys-6-비치환된 데카펩타이드를 합성하고 라이신6을 Fmoc-D-Lys(Boc)-OH로서 커플링시킨다.
수지로부터 제거한후에 조 펩타이드 8.15g을 분리한다. 조 펩타이드를 프렙용 HPLC로 정제한다. D-라이신의 측쇄를 DIPEA의 첨가와 함께 DMF중에서 PyBop를 사용하여 4-(4-아미노페닐)아미노-1,4-디옥소부티르산으로 치환시킨다. 분리된 조 펩타이드를 프렙용 HPLC를 사용하여 정제한다. 이어서 동결건조시킨후에 상응하는 FAB-MS 1646.8(M + H)(계산치: 1645.82)을 갖는 실험식 C85H112ClN17O15의 약 94.6% 농도의 생성물(트리플루오로아세테이트)을 수득한다.
실시예 5
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Cit6-Nle7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2
실시예 6:
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-Leu7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2
실시예 7
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Cit6-Nle7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala10-NH2
실시예 8
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-Leu7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala10-NH2
실시예 5 내지 8에 따른 펩타이드를 제조하기 위한 일반적인 후처리 공정
데카펩타이드를 메리필드 고체상 합성 방법(SPPS)[상기한 바와 같음] 및 용액중에서의 통상적인 단편 축합 방법 모두에 의해 제조할 수 있다. 펩타이드를 중합 지지체상에서 순차적으로 합성하는 것이 경제적인 이유 때문에 바람직하고 원칙적으로 (1) Boc 또는 (2) Fmoc 방법에 따라 합성할 수 있다. 상응하게 각각의 경우, 메틸벤즈하이드릴아민 수지(1에 대해) 또는 Fmoc-2,4-디메톡시-4'-(카복시메틸옥시)벤즈하이드릴아민 수지(2에 대해)를 D-알라닌의 C-말단 결합을 위해 사용할 수 있다.
고체상 합성, 메리필드 방법
데카펩타이드를 고체상 합성을 위한 표준 반응 조건(표 I의 단계)하에서 로딩 밀도가 약 0.55mmol/g이고 입자 크기가 200 내지 400 메쉬인 중합 지지체 Fmoc-2,4-디메톡시-4'-(카복시메틸옥시)벤즈하이드릴아민 수지(Bachem D1675)를 사용하는 Fmoc 방법에 따라 합성한다.
하기의 표 I의 단계에 따라 NㆍFmoc-보호 아미노산을 사용하여 수지상에서 순차적인 단계로 합성을 수행한다.
단계 작용 용매 시간 반복 횟수
1 세척 DMF 2분 2 x
2 제거 DMF 중의 20% 피페리딘 5분 2 x
3 세척 DMF 2분 2 x
4 세척 이소프로판올 2분 1 x
5 세척 DMF 2분 2 x
6 세척 이소프로판올 2분 1 x
7 세척 DMF 2분 2 x
8 커플링 Boc-AS-OH, HOBT, DMF중의 DIC 90분 1 x
9 세척 DMF 2분 1 x
10 세척 이소프로판올 2분 1 x
11 세척 DMF 2분 1 x
12 세척 이소프로판올 2분 1 x
13 세척 DMF 2분 1 x
14 세척 이소프로판올 2분 1 x
15 확인 클로라닐 색상 시험* 2분 1 x
*문헌[참조: T. Christensen, Acta Chem. Scand. B 33, 763-766, 1979]에 준함
상기 표 I의 단계에 따른 데카펩타이드의 고체상 합성에 있어서 방법에 전형적인 (반복적인) 반응 계수
- 실온에서 2 x 5 분동안 DMF중에서 20% 피페리딘을 사용한 Fmoc 보호 그룹의 제거(단계 2).
- 하이드록시벤조트리아졸(HoBt)중에서 디이소프로필카보디이미드(DIC)를 사용한 3배 몰과량의 Fmoc 아미노산에서 각각의 커플링(단계 8).
- 트리플루오로아세트산(TFA)을 사용한 아미노산 측쇄 보호 그룹을 제거시킴을 포함하는 중합 지지체로부터 C 말단의 제거.
중합 지지체로부터 제거한 후에, 수지 5g을 사용하는 경우, 목적하는 성분의 함량이 약 70 내지 80%인 조 펩타이드 혼합물 약 5 내지 6g이 형성된다. 이것은 후속적인 프렙용 HPLC 크로마토그래피로 회수한다.
데카펩타이드의 프렙용 HPLC 정제
크로마토그래피 조건
프렙용 HPLC, 시마쯔(Shimadzu), 다이나맥스(Dynamax) 칼럼 RP18, 12㎛, 300Å, L= 250mm, ID = 41.4mm,
시간 프로그램을 사용한 농도 구배 시스템, 40% B ㆍ90% B, 50분,
용출제 A: H2O 970ml + CH3CN 30ml + CF3COOH 1ml,
용출제 B: H2O 300ml + CH3CN 700ml + CF3COOH 1ml,
UV 검출, ㆍ=220nm, 유속 60ml/분.
수득한 분획을 진공 농축시키고 동결건조시킨다. 데카펩타이드를 밝은 무색 물질로서 형성한다.
이어서 크로마토그래픽 이온 교환을 사용하여 약리학적 개발을 위해 바람직한 아세테이트 염 형태로 2회 분해한다.
생리학적 작용의 조사
본 발명의 화학식 I에 따른 화합물을 이의 수용체 결합에 대해 조사한다. 당해 방법은 문헌[참조:Beckers et al., Eur. J. Biochem. 231, 535-543(1995)]에 기술된 방법과 유사하다. 상기된 합성에 따라 수득한 세트로렐릭스는 요오도겐(IodoGen) 시약(Pierce)을 사용하는 [125I][아머샴(Amersham); 비활성 80.5 Bq/fmol]로 요오드화시킨다. 반응 혼합물을 역상 고성능 액체 크로마토그래피로정제하여 표지되지 않은 펩타이드 없이 단일 요오드화된 세트로렐릭스를 수득한다. 각각의 경우, [125I]-세트로렐릭스 약 80% 및 본 발명의 표지되지 않은 화합물이 특이적 수용체 결합을 위해 적합하다.
본 발명의 화합물은 하기 방법 1 및 2를 사용하여 이들의 시험관내 작용에 대해 시험될 수 있다: 방법 1의 결합 분석에서 결합 친화성을 [125I]-세트로렐릭스로 측정하고 방법 2에서 효능 자극제로서 트리프토렐린을 사용하여 작용 활성을 측정한다.
방법 1(세트로렐릭스를 사용한 KD의 측정)
문헌[참조: Beckers, T., Marheineke, K., Reilander, H., Hilgard P.(1995) "Selection and characterization of mammalian cell lines with stable overexpression of human pituitary receptors for gonadoliberin(GnRH)" Eur. J. Biochem. 231, 535-543]에 따른 수용체 결합 분석.
수용체 결합을 조사하기 위해, 세트로렐릭스를 요오도겐 시약(Pierce)를 사용하여 [125I](아머샴; 80.5Bq/fmol 비활성)로 요오드화시킨다. 반응 혼합물을 상을 대체하면서 고성능 액체 크로마토그래피를 정제하고 단일 요오드화된 세트로렐릭스를 표지되지 않은 펩타이드 없이 수득한다. [125I] 세트로렐릭스 약 80%는 특이적으로 수용체와 결합할 수 있다.
수용체 결합 분석은 온전한 세포를 사용하여 문헌[참조: Beckers et al., 1995]에 기술된 바와 같은 생리학적 조건하에 수행한다. 안정하게 형질감염되어 사람 LHRH 수용체를 발현하는 LTK-세포의 서브컨플루언트 배양물을 NaCl/Pi(137mM NaCl, 2.7mM KCl, 8.1mM Na2HPO4, 11.47mM KH2PO4)/1mM EDTA에서 항온처리하여 분리해내고 원심분리하여 수거한다. 세포 펠렛을 결합 완충액[H2CO3없는 DMEM, 글루코스 4.5g/l, 10mM 헤페스 pH 7.5, 0.5%(질량/부피) BSA, 1g/l 바시트라신, 0.1 g/l SBTI, 0.1%(질량/부피) NaN3포함]중에 재현탁시킨다. 치환 분석을 위해, 100㎕당 0.25 x 106세포를 [125I]-세트로렐릭스(비활성 5 내지 10 x 105dpm/pmol) 약 225pM 및 경쟁자로서 본 발명의 표지되지 않은 다양한 농도의 화합물을 사용하여 항온처리한다. 결합 매질 100㎕중의 세포 현탁액을 실리콘 오일(Merck Type 550) 84용량%/파라핀 오일 16용량% 200㎕에 대해 400㎕ 분석 튜브중에 적층시킨다. 서서히 계속적으로 진탕시키면서 37℃에서 1시간동안 항온처리한 후 세포를 9000rpm에서 2분동안 원심분리(로터 타입 HTA13.8; Heraeus Sepatec, Osterode/Germany)하여 항온처리 매질로부터 분리한다. 세포 펠렛을 함유한 튜브의 가장자리를 절단한다. 이어서 세포 펠렛 및 상등액을 γ 방사선을 계수하여 분석한다. 비특이적으로 결합된 물질의 양을 표지되지 않은 세트로렐릭스를 첨가하여 최종 농도 1μM에서 측정하고 총 결합된 물질은 통상적으로 10% 이하이다. 결합 데이타를 EBDA/리간드 분석 프로그램(Biosoft V3.0)을 사용하여 분석한다.
세트로렐릭스의 KD값은 ℓ당 170picomol(pM)이다(독립적으로 수행된 실험 횟수: 21).
방법 2(길항 활성(IC50값)을 측정하기 위한 작용 분석)
문헌[참조:T., Reilander, H., Hilgard, P.(1997) "Characterization of gonadotropin-releasing hormone analogs based on a sensitive cellular luciferase reporter gene assay", Analyt. Biochem. 251, 17-23(Beckers et al., 1997)]에 기술된 바와 같이 하기 언급된 변법을 사용하여 분석을 수행한다. 사람 LHRH 수용체 및 루시페라제 수용체 유전자를 발현하는 웰당 10,000개 세포를 부가제및 1% (v:v) FCSi와 함께 DMEM을 사용하여 미세역가 플레이트에서 24시간동안 항온처리한다. 이어서, 세포를 6시간동안 1nM[D-Trp6] LHRH를 사용하여 자극시킨다. 본 발명의 길항작용 화합물을 자극시키기 전에 첨가하고 세포 Luc 활성을 정량하기 위해 말기에 세포를 용해시킨다. 유효 투여량 곡선으로부터 IC50값을 힐 모델[씨. 그룬왈트의 프로그램 EDX 2.0, Arzneimittelwerk Dresden]을 사용하는 비선형 회귀 분석에 의해 계산한다.
Luc 활성을 각각의 루시페라제 분석 시스템(Promega E4030)을 사용하여 문헌[참조: Promega Technical Bulletins #101/161]에 기술된 바와 같이 필수적으로 2회 정량한다. 조효소 A(CoA)를 첨가함에 의해 유리한 동역학으로 루시페릴-CoA가 산화된다. 미세역가 플레이트로부터 배양 배지를 제거한 후에, 용해완충액(트리스-포스페이트 25mM pH 7.8, 디티오트레이톨 2mM , 1,2-디아미노사이클로헥산-N,N,N',N'-테트라아세트산(CDTA) 2mM, 글리세롤 10%(v:v), 트리톤 X-100 1%(v:v)) 100㎕를 첨가하여 용해시킨다. 실온에서 15분동안 항온처리한 후, 세포 용해물 10㎕를 발광 검출을 위해 적합한 백색 미세역가 플레이트(Dynatech)으로 이동시킨다. 분석 완충액(트리신 20mM pH7.8, (MgCO3)4Mg(OH)21.07mM, MgSO42.67mM, 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 0.1mM, 디티오트레이톨 33.3mM, 조효소 A 270μM, 글로우-웜(glow-worm) 루시페린 470μM, rATPNa2530μM) 50㎕를 첨가하여 효소 반응을 개시한다. 1분후에, EG&G Berthold MicroLumat LB 96 P를 사용하여 시그날 반감기가 5분인 발광을 총 1초 동안 측정한다.
본 발명의 화합물의 생리화학적 데이타 및 시험관내 데이타를 표 2에 요약한다. IC50은 작용 활성을 나타내고 pM은 ℓ당 picomoles를 나타낸다. 주해 2)에 기술된 방법에 따라 수용해도를 측정한다.
화합물 수용해도2[mg/ml] IC50[pM]
세트로렐릭스 0.002 198(5)1
실시예 1(D-68968) 1.03 1300(1)1
실시예 2(D-68969) 1.11 1400(1)1
실시예 3(D-68971) 1.36 4700(1)1
실시예 4(D-68987) 1.18 700(1)1
주해1) 괄호안의 숫자는 서로 독립적인 실험 횟수를 나타낸다.2) 수용해도는 하기에 기술된 방법에 따라 측정한다.
링거 용액중에서 공인 가제트 방법에 따른 용해도
공인 가제트 방법에 따라 용해도를 측정하기 위해, 시험물질을 예를 들어, 모래와 같은 불활성 담체 물질과 과량으로 혼합하고 유리 칼럼(용량 크기 약 10ml)에 충진시킨다. 탈지면 및 유리 섬유 필터로 이루어진 체를 미리 칼럼 바닥에 삽입한다. 용해도가 측정되는 용매 1.0ml중에서 1시간동안 물질-모래 혼합물을 팽윤시킨다. 이어서, 용매 10ml을 유리 칼럼에 붓는다. 용액을 연동 펌프를 사용하여 순환시킨다. 실온(약 20℃)에서 측정한다. 채취된 연속 분획물의 질량 농도가 일정할때 용해도를 측정한다. 질량 농도는 상기된 바와 같이 하기에 기술된 HPLC 방법을 사용하여 측정한다.
HPLC 방법:
장치
HPLC 시스템: 휴렛 팩커드 1100; 검출기: 휴렛 팩카드 DAD 시리즈 1100
칼럼:칼럼 물질: 뉴클레오실R120-3 C18
입자 크기: 3㎛
칼럼 크기: 125 x 4mm
제조 업체: Macherey & Nagel
장치 계수: 주입 용량: 15㎕
유속: 1.0ml/분
오븐 온도: 45℃
파장: 226nm
종료 시간: 15분
55% 이동상 A: 밀리-Q-H20 970ml, 아세토니트릴 30ml 및 트리플루오로아세트산 1ml을 혼합한다. 수득한 pH는 약 1.9이다.
45% 이동상 B: 밀리-Q-H20 300ml, 아세토니트릴 700ml 및 트리플루오로아세트산 1ml을 혼합한다. 수득한 pH는 약 1.8이다.
본 발명의 화합물은 펩타이드 활성 화합물을 위해 적합한 상이한 형태로 투여할 수 있다. 당해 기술 분야의 기술자에게 널리 공지된 투여방법이 적합하다. 예를 들어, 주사에 의해 투여할 수 있다. 예를 들어, 비경구적으로 투여할 수 있다. 피하내(s.c.), 근육내(i.m.), 정맥내(i.v.), 협측내(예를 들어, 구강내) 또는 직장 투여가 바람직하다. 척수내 및 근육내 투여가 특히 바람직하다. 본 발명의 화합물은 상이한 투여형태(예를 들어, 동결건조물, 액제 또는 현탁제)를 제조하는데 적합하다. 적합한 투여 형태 및 이의 제조 방법은 당해 분야의 기술자에게 공지되어 있다. 적합한 부형제 및 벌크 제제는 예를 들어, 헥시톨, 예를 들어, 만니톨, 특히, D-만니톨, L-만니톨 또는 D,L-만니톨, 소르비톨, 예를 들어, D-소르비톨, D- 또는 L-알트리톨, 이디톨, 글루시톨 및 둘시톨이다. 공지된 방법 대로, 예를 들어, 혼합, 현탁 또는 동결건조 방법에 따라 제조한다.
실시예 A: 피하내 주사 액제를 제조하기 위한 동결건조물
실시예 1에 따른 화합물 1mg(아세테이트 염 0.26 내지 0.27mg에 상응함); D-만니톨 0 내지 16.9 중량부, 바람직하게는 각각의 경우 실시예 1을 기준으로 0.1 내지 7중량부 및 주사용수(동결건조물로부터 주사 용액을 제조하기 위한).
제조: 30% 농도의 아세트산(주사용수 약 1.5ℓ 및 아세트산 91.17g)중에 실시예 1의 화합물 1.62g을 용해시킨다. 용액을 1.5ℓ의 물로 희석한다. 멸균 필터를 통해 만니톨 82.2g을 첨가하고 무균 조건하에 멸균된 2ml 주사 바이엘에 분배하고 동결건조시킨다. 실시예 1의 화합물의 동결건조물 1mg을 수득한다.
본 발명의 화합물은 예를 들어, 악성 또는 비악성 호르몬-의존성 장애, 예를 들어, 유방암, 전립선암, 자궁내막증, 자궁근종, 양성 전립선 과형성(BPH) 및 남성 또는 여성 불임증의 치료를 위해 적합하고 또한 예를 들어, 난세포 제거 및 생식작용 보조 기술에 따르는 난소 자극을 조절받는 환자의 미성숙한 배란을 예방하는데 적합하다. 상기된 바와 같은 치료는 포유동물, 특히 사람에게서 수행될 수 있다.

Claims (16)

  1. 화학식 I의 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 산과의 염.
    화학식 I
    A-Xxx1-Xxx2-Xxx3-Xxx4-Xxx5-Xxx6-Xxx7-Xxx8-Xxx9-Xxx10-NH2
    상기식에서,
    A는 아세틸 그룹이고,
    Xxx1은 D-Nal(2)이고,
    Xxx2는 D-Cpa이고,
    Xxx3은 D-Pal(3)이고,
    Xxx4는 Ser이고,
    Xxx5는 N-Me-Tyr이고,
    Xxx6은 D-Cit, D-Hci 또는 D-[ㆍ-N'-4-(4-아미디노페닐)-아미노-1,4-디옥소부틸]Lys(약자: D-Lys(B)]이고,
    Xxx7은 Leu 또는 Nle이고,
    Xxx8은 Arg 또는 Lys(iPr)이고,
    Xxx9은 Pro이고,
    Xxx10은 D-Ala 또는 Sar이고,
    단, Xxx6이 D-Lys(B)인 경우, Xxx7은 Nle이고, Xxx6이 D-Cit인 경우, Xxx7은 Nle이고 Xxx10은 D-Ala 이거나,
    Xxx6이 D-Hci인 경우, Xxx7은 Leu이고 Xxx10은 D-Ala이다.
  2. 제1항에 있어서, 화학식 Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7-Arg8-Pro9-Sar10-NH2의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 산과의 염.
  3. 제1항에 있어서, 화학식 Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 산과의 염.
  4. 제1항에 있어서, 화학식 Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7-Lys(iPr)8-Pro9-Sar10-NH2의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 산과의 염.
  5. 제1항에 있어서, 화학식 Ac-D-Nal(2)1-D-Phe(4-Cl)2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala10-NH2의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 산과의 염.
  6. 제1항에 있어서, 화학식 Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Cit6-Nle7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 산과의 염.
  7. 제1항에 있어서, 화학식 Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-Leu7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 산과의 염.
  8. 제1항에 있어서, 화학식 Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Cit6-Nle7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala10-NH2의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 산과의 염.
  9. 제1항에 있어서, 화학식 Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-Leu7-Lys(iPr)8-Pro9-D-Ala10-NH2의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 산과의 염.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 염이 아세테이트, 트리플루오로아세테이트 또는 엠보네이트인 화합물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 약물로서 사용하기 위한 화합물.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 하나 이상의 화합물 및 통상의 비히클 및 부형제를 포함하는 약제.
  13. 적합한 보호 그룹이 제공된 Xxxm(여기서, m은 1 내지 10의 정수이고 Xxx1은 아세틸화된다) 단위체로 부터의 단편을 통상적인 방법에 따라 고체상 또는 용액중에서 합성하고 이어서 단편을 절편 커플링에 의해 고체상에 연결시키고 커플링 시킨후 화학식 I의 화합물을, Xxx10단위체를 아미드화시키는 통상적인 방법을 사용하여 고체상으로부터 제거함을 포함하여, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법.
  14. 포유동물, 특히 사람에서 호르몬 의존성 종양, 특히, 전립선 암, 유방암 또는 자궁 근종, 및 치료를 위해 LH-RH 호르몬을 억제시킬 필요가 있는 비악성 증후, 예를 들어, 자궁내막증, 양성 전립선 과형성(BPH) 또는 남성 또는 여성의 불임증을 치료하기 위한 약물을 제조하기 위한 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
  15. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 하나 이상의 화합물을 통상적인 비히클 및 부형제와 혼합하고 약물로서 제형화시킴을 포함하여, 제12항에 따른 약제를 제조하는 방법.
  16. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 하나 이상의 화합물의 유효량을 투여함에 의해 포유동물, 특히 사람에서 호르몬 의존성 종양, 특히, 전립선 암, 유방암 또는 자궁 근종, 및 치료를 위해 LH-RH 호르몬을 억제시킬 필요가 있는 비악성 장애, 예를 들어, 자궁내막증, 양성 전립선 과형성(BPH) 및 남성 또는 여성의 불임증을 치료하는 방법.
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