SK14332002A3 - Antagonisty LHRH, ich výroba a použitie ako liečiv - Google Patents
Antagonisty LHRH, ich výroba a použitie ako liečiv Download PDFInfo
- Publication number
- SK14332002A3 SK14332002A3 SK1433-2002A SK14332002A SK14332002A3 SK 14332002 A3 SK14332002 A3 SK 14332002A3 SK 14332002 A SK14332002 A SK 14332002A SK 14332002 A3 SK14332002 A3 SK 14332002A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- xxx
- lys
- nal
- tyr
- pal
- Prior art date
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 8
- 229940124041 Luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) antagonist Drugs 0.000 title description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 47
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 38
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 20
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 claims description 19
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 17
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 16
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 15
- -1 4-amidinophenyl Chemical group 0.000 claims description 13
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 13
- 206010004446 Benign prostatic hyperplasia Diseases 0.000 claims description 11
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 11
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 11
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 10
- 208000004403 Prostatic Hyperplasia Diseases 0.000 claims description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 8
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 7
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 6
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 claims description 6
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 6
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 6
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims description 6
- 206010046798 Uterine leiomyoma Diseases 0.000 claims description 5
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 claims description 5
- 208000021267 infertility disease Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 4
- 201000010260 leiomyoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000010579 uterine corpus leiomyoma Diseases 0.000 claims description 4
- 201000007954 uterine fibroid Diseases 0.000 claims description 4
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 claims description 3
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- AXDLCFOOGCNDST-VIFPVBQESA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-(methylamino)propanoic acid Chemical compound CN[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 AXDLCFOOGCNDST-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical group CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 230000009435 amidation Effects 0.000 claims description 2
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- 238000005304 joining Methods 0.000 claims description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 2
- 101000904177 Clupea pallasii Gonadoliberin-1 Proteins 0.000 claims 2
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 claims 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 36
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 23
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 24
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 22
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 19
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 108700012941 GNRH1 Proteins 0.000 description 18
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical class OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- SBNPWPIBESPSIF-MHWMIDJBSA-N cetrorelix Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CCCNC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@H](C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C=NC=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC(Cl)=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 SBNPWPIBESPSIF-MHWMIDJBSA-N 0.000 description 10
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 10
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 10
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 10
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 9
- 229960003230 cetrorelix Drugs 0.000 description 9
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 9
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 9
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 9
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 9
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 9
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 8
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 8
- 108700008462 cetrorelix Proteins 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WSNDAYQNZRJGMJ-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoroethanone Chemical compound FC(F)(F)[C]=O WSNDAYQNZRJGMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UKJLNMAFNRKWGR-UHFFFAOYSA-N cyclohexatrienamine Chemical group NC1=CC=C=C[CH]1 UKJLNMAFNRKWGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 4
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- NOENHWMKHNSHGX-IZOOSHNJSA-N (2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-acetamido-3-naphthalen-2-ylpropanoyl]amino]-3-(4-chlorophenyl)propanoyl]amino]-3-pyridin-3-ylpropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-6-(ca Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CCCCNC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@H](C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C=NC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(Cl)=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 NOENHWMKHNSHGX-IZOOSHNJSA-N 0.000 description 3
- RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N CoASH Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- 108010070670 antarelix Proteins 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 3
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N coenzime A Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005516 coenzyme A Substances 0.000 description 3
- 229940093530 coenzyme a Drugs 0.000 description 3
- KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N dephosphocoenzyme A Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000001525 receptor binding assay Methods 0.000 description 3
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- MVDPNTCYCFVFOX-SZENRQNHSA-N (2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-acetamido-3-naphthalen-2-ylpropanoyl]amino]-3-(4-iodanylphenyl)propanoyl]amino]-3-pyridin-3-ylpropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-5-(c Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CCCNC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@H](C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C=NC=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC([125I])=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 MVDPNTCYCFVFOX-SZENRQNHSA-N 0.000 description 2
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FJQZXCPWAGYPSD-UHFFFAOYSA-N 1,3,4,6-tetrachloro-3a,6a-diphenylimidazo[4,5-d]imidazole-2,5-dione Chemical compound ClN1C(=O)N(Cl)C2(C=3C=CC=CC=3)N(Cl)C(=O)N(Cl)C12C1=CC=CC=C1 FJQZXCPWAGYPSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- FCKYPQBAHLOOJQ-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane-1,2-diaminetetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)C1CCCCC1N(CC(O)=O)CC(O)=O FCKYPQBAHLOOJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101100229685 Homo sapiens GNRH1 gene Proteins 0.000 description 2
- 101000904173 Homo sapiens Progonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 2
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical class NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 102000008238 LHRH Receptors Human genes 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100024028 Progonadoliberin-1 Human genes 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000996723 Sus scrofa Gonadotropin-releasing hormone receptor Proteins 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 159000000021 acetate salts Chemical group 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 108700032141 ganirelix Proteins 0.000 description 2
- GJNXBNATEDXMAK-PFLSVRRQSA-N ganirelix Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CCCCN=C(NCC)NCC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN=C(NCC)NCC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@H](C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C=NC=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC(Cl)=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 GJNXBNATEDXMAK-PFLSVRRQSA-N 0.000 description 2
- 229960003794 ganirelix Drugs 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N gonadorelin Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- SHDMMLFAFLZUEV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1,1-diphenylmethanamine Chemical group C=1C=CC=CC=1C(NC)C1=CC=CC=C1 SHDMMLFAFLZUEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical group C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- UGNWTBMOAKPKBL-UHFFFAOYSA-N tetrachloro-1,4-benzoquinone Chemical compound ClC1=C(Cl)C(=O)C(Cl)=C(Cl)C1=O UGNWTBMOAKPKBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- UMRUUWFGLGNQLI-JOCHJYFZSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-JOCHJYFZSA-N 0.000 description 1
- PHOQLWOIWDIYFR-WUCXBFDXSA-N (2r)-2-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-acetamido-3-(4-chlorophenyl)propanoyl]amino]-3-(4-chlorophenyl)propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC(Cl)=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC(Cl)=CC=1)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 PHOQLWOIWDIYFR-WUCXBFDXSA-N 0.000 description 1
- DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JPZXHKDZASGCLU-GFCCVEGCSA-N 3-(2-Naphthyl)-D-Alanine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC=C21 JPZXHKDZASGCLU-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- 125000003349 3-pyridyl group Chemical group N1=C([H])C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- UPMLOUAZCHDJJD-UHFFFAOYSA-N 4,4'-Diphenylmethane Diisocyanate Chemical compound C1=CC(N=C=O)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UPMLOUAZCHDJJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004042 4-aminobutyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 125000000030 D-alanine group Chemical group [H]N([H])[C@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-ZXXMMSQZSA-N D-iditol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical compound [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N Fenclonine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(Cl)C=C1 NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N GnRH Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108050000048 Gonadoliberin Proteins 0.000 description 1
- 102000009165 Gonadoliberin Human genes 0.000 description 1
- 102400000932 Gonadoliberin-1 Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101500026183 Homo sapiens Gonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000610640 Homo sapiens U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-OMMKOOBNSA-N L-altritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-OMMKOOBNSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-BXKVDMCESA-N L-mannitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-BXKVDMCESA-N 0.000 description 1
- 229930182842 L-mannitol Natural products 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700024471 N-acetyl-(4-chlorophenylalanyl)(1)-(4-chlorophenylalanyl)(2)-tryptophyl(3)-arginyl(6)-alanine(10)- LHRH Proteins 0.000 description 1
- VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N N-acetylimidazole Chemical compound CC(=O)N1C=CN=C1 VIHYIVKEECZGOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 241000254064 Photinus pyralis Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001110823 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-A Proteins 0.000 description 1
- 101000712176 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-B Proteins 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 108010050144 Triptorelin Pamoate Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100040374 U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Human genes 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 108700023965 acetyl-2-(2-naphthyl)-Ala(1)-4-F-Phe(2)-Trp(3)-Arg(6)- LHRH Proteins 0.000 description 1
- CQJZXVCPROCGRM-OYDHUGEGSA-N acetyl-2-(2-naphthyl)-ala(1)-4-f-phe(2)-trp(3)-arg(6)-lhrh Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=CC(F)=CC=1)NC(=O)[C@@H](CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 CQJZXVCPROCGRM-OYDHUGEGSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007098 aminolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 description 1
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 description 1
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 125000004744 butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- BJDCWCLMFKKGEE-CMDXXVQNSA-N chembl252518 Chemical compound C([C@@](OO1)(C)O2)C[C@H]3[C@H](C)CC[C@@H]4[C@@]31[C@@H]2O[C@H](O)[C@@H]4C BJDCWCLMFKKGEE-CMDXXVQNSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N dcm dichloromethane Chemical compound ClCCl.ClCCl DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006356 dehydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YGLLICRFEVEWOZ-UHFFFAOYSA-L disodium;3-carboxy-1-[(3-carboxy-2-oxidonaphthalen-1-yl)methyl]naphthalen-2-olate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=C2C(CC3=C4C=CC=CC4=CC(=C3O)C([O-])=O)=C(O)C(C([O-])=O)=CC2=C1 YGLLICRFEVEWOZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960001442 gonadorelin Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N guanidine group Chemical group NC(=N)N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-UHFFFAOYSA-N hexane-1,2,3,4,5,6-hexol Chemical compound OCC(O)C(O)C(O)C(O)CO FBPFZTCFMRRESA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 238000003468 luciferase reporter gene assay Methods 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- WOOWBQQQJXZGIE-UHFFFAOYSA-N n-ethyl-n-propan-2-ylpropan-2-amine Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C.CCN(C(C)C)C(C)C WOOWBQQQJXZGIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 125000006503 p-nitrobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1[N+]([O-])=O)C([H])([H])* 0.000 description 1
- WLJNZVDCPSBLRP-UHFFFAOYSA-N pamoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC=3C4=CC=CC=C4C=C(C=3O)C(=O)O)=C(O)C(C(O)=O)=CC2=C1 WLJNZVDCPSBLRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229950011372 teverelix Drugs 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- VXKHXGOKWPXYNA-PGBVPBMZSA-N triptorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 VXKHXGOKWPXYNA-PGBVPBMZSA-N 0.000 description 1
- 229960004824 triptorelin Drugs 0.000 description 1
- JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N tris phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.OCC(N)(CO)CO JLEXUIVKURIPFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N β-(2-naphthyl)-alanine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C21 JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
- A61P5/04—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin for decreasing, blocking or antagonising the activity of the hypothalamic hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Oblasť techniky
Vynález sa týka antagonistov LHRH so zlepšeným správaním pri rozpúšťaní, spôsobu výroby týchto zlúčenín, liečiv, v ktorých sa tieto zlúčeniny nachádzajú, a použitia týchto liečiv na liečenie hormonálne závislých nádorov a nemalígnych chorôb ovplyvnených hormónmi, ako je napríklad benígna hyperplázia prostaty (BPH) a endometrióza.
Doterajší stav techniky
Nomenklatúra používaná na definovanie peptidov sa zhoduje s nomenklatúrou vysvetlenou komisiou IUPAC-IUB pre biochemickú nomenklatúru (European J. Biochem. 1984, 138, 937), v ktorej sa v súlade s obvyklým opisom aminoskupiny na N-konci uvádzajú vlavo a karboxylová skupina na C-konci vpravo. Antagonisty LH-RH, ako peptidy podlá vynálezu,_ obsahujú v prírode sa vyskytujúce a syntetické aminokyseliny, pričom tie prvé obsahujú Ala, Val, Leu, íle, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gin, Cys, Met, Phe, Tyr, Pro, Trp a His. Tieto skratky pre jednotlivé aminokyseliny sú založené na triviálnych názvoch aminokyselín a sú: Ala = alanín, Arg = arginín, Gly - glycín, Leu = leucín, Lys = lyzín, Pal (3) = (3-pyridyl)alanín, Nal(3) = 3-(2-naftyl)alanín, Phe = fenylalanín, Cpa = 4-chlórfenylalanín, Pro = prolin, Ser = serín, Thr = treonín, Trp = tryptofán, Tyr = tyrozín a Sar = sarkozín. Všetky tu uvedené aminokyseliny pochádzajú z L-radu, ak nie je uvedené inak. Napríklad D-Nal(2) je skratka pre 3-(2-naftyl)-D-alanín a Ser je skratka pre L-serín.
Substitúcie na ε-aminoskupine v bočnom reťazci lyzínu sú uvádzané prostredníctvom výrazu v zátvorkách za Lys, poprípade vo forme skratky.
Iné použité skratky:
Ac acetyl·
B 4-(4-amidinofenyl)amino-1,4-dioxobutyl
Boe terc-butyloxykarbonyl
Bop benzotriazol-l-oxy-tris(dimetylamino)fosfóniumhexafluorofosfát
DCC dicyklohexylkarbodiimid
DCM dichlórmetán
Ddz dimetoxyfenyl-dimetylmetylenoxykarbonyl (dimetoxydimetyl-Z)
DIC diizopropylkarbodiimid
DIPEA N,N-diizopropyletylamín
DMF dimetylformamid
Fmoc fluorenylmetoxykarbonyl
HF . kyselina fluorovodíková
Hobt 1-hydroxybenzotriazol
HPLC vysokotlaková kvapalinová chromatografia
Me me tyl__________
TFA kyselina trifluóroctová
Z benzyloxykarbonyl.
Peptidy podľa vynálezu predstavujú analógy hormónu uvoľňujúceho luteinizačný hormón (LH-RH), ktorý má nasledujúcu štruktúru:
p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2, [LH-RH, gonadorelín].
Viac ako 20 rokov vyhľadávali výskumníci selektívne účinné antagonisty dekapeptidu LH-RH [M. Karten und E. Riviér, Endocrine Reviews 7, 44-66 (1986)]. Veľký záujem o také antagonisty je založený na ich užitočnosti v oblasti endokrinológie, gynekológie, antikoncepcie a rakoviny. Vyrobil sa veľký počet zlúčenín ako potenciálnych antagonistov LH-RH. Najzaujímavejšími zlúčeninami, ktoré sa doteraz objavili, sú tie zlúčeniny, ktorých štruktúra predstavuje modifikáciu štruktúry LH-RH.
Prvý rad účinných antagonistov sa získal zavedením zvyškov aromatických aminokyselín do polôh 1, 2, 3 a 6 alebo 2, 3 a 6. Obvyklé písomné vyjadrenie týchto zlúčenín vyzerá nasledovne: Najskôr sa uvádzajú aminokyseliny, ktoré do peptidovéhoho reťazca LH-RH vstúpili na miesto pôvodne sa vyskytujúcich aminokyselín, pričom polohy, v ktorých sa uskutočnila zámena, sa označujú hornými číslicami. Ďalej sa pomocou nasledujúceho označenia „LH-RH vyjadrí, že sa jedná o analógy LH-RH, v ktorých sa uskutočnila zámena.
Známymi antagonistami sú:
[Ac-D-Cpa1,2, D-Trp3'6]LH-RH (D. H. Coy et al. , In: Gross, E. and Meienhofer, J. (Eds) Peptides; Proceedings of the 6th American Peptide Symposium, str. 775-779, Pierce Chem. Co., Rockville III. (1979):
[Ac-Pro1, D-Cpa2, D-Nal (2) 3'6]LH-RH (US patent č. 4.419.347) a
ÍAc-Pro1, D-Cpa2.,_D-Trp3'-6]LH-RH—(-J-.—L·:—Pineda et al~ Tľ Olin.
Endocrinol. Metab. 56, 420, 1983).
Aby sa zlepšil účinok antagonistov, zavádzali sa neskôr zásadité aminokyseliny, napríklad D-Arg, do polohy 6, príkladom je [Ac-D-Cpa1'2, D-Trp3, D-Arg6, D-Ala10]LH-RH (ORG30276) (D. H. Coy et al., Endocrinology 100, 1445, 1982) a [ÄC-D-Nal (2) 1, D-Phe(4-F)2, D-Trp3, D-Arg6]LH-RH (ORF 18260) (J. E. Riviér et in: Vickery B. H. Nestor, Jr. J. J., Hafez, E. S. E. (Eds). LHRH and its Analogs, str. 11-22 MTP Press, Lancaster, UK 1984).
Ďalšie účinné antagonisty LH-RH sú opísané vo WO 92/19651, WO 94/19370, WO 92/17025, WO 94/14841, WO 94/13313
US-A 5,300,492, US-A 5,140,009, EP 0 413 209 Al a DE 195 44 212 Al.
Posledný dokument zverejňuje zlúčeniny s modifikovanou ornitínovou alebo lyzínovou stavebnou zložkou v polohe 6, ktoré majú nasledujúci vzorec:
Ac-D-Nal (2) 1-D-Cpa2-D-Pal (3) 3-Ser4-Tyr5-D-Xxx6-Leu7-Arg8-Pro9-DAla10-NH2, kde D-Xxx predstavuje aminokyselinovú skupinu všeobecného vzorca VI:
-NH-CH-COI (CH2)„
I
NH
I
CO-R
Ďalšími známymi antagonistami LH-RH sú antarelix, ganirelix a cetrorelix.
Antarelix® (INN: Teverelix):
Ac-D-Nal (2) 1-D-Cpa2-D-Pal (3) 3-Ser4-Tyr5-D-Hci6-Leu7-Lys (iPr) 8Pro9-D-Ala10-NH2;_____
Ganirelix:
Ac-D-Nal (2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-Tyr5-D-hArg (Et) 26-Leu7hArg (Et) 28-Pro9-D-Ala10-NH2;
Cetrorelix:
Ac-D-Nal (2)1-D-Cpa2-D-Pal (3)3-Ser4-Tyr5-D-Cit6-Leu7-Arg8-Pro9-DAla10-NH2.
Cieľom predloženého vynálezu je poskytnúť nové antagonisty LH-RH, ktoré majú zvýšenú enzymatickú stabilitu a výrazne zlepšenú rozpustnosť vo vode.
Podstata vynálezu
Táto úloha sa rieši prostredníctvom zlúčenín nasledujúceho všeobecného vzorca I
Α-Χχχ1-Χχχ2-Χχχ3-Χχχ4-Χχχ5-Χχχ6-Χχχ7-Χχχ8-Χχχ9-Χχχ1θ-ΝΗ2 (I) v ktorom
A | znamená | acetylovú skupinu, |
Xxx1 | znamená | D-Nal(2), |
Xxx2 | znamená | D-Cpa, |
Xxx3 | znamená | D-Pal (3), |
Xxx4 | znamená | Ser, |
Xxx5 | znamená | N-Me-Tyr, |
Xxx6 | znamená | D-Cit, D-Hci alebo D-[e-N'-4-(4-amidinofenyl) - |
amino-1,4-dioxobutyl]-Lys (skratka: D-Lys(B)),
Xxx7 znamená Leu alebo Nie,
Xxx8 znamená Arg alebo Lys(iPr),
Xxx9 znamená Pro a
Xxx10 znamená D-Ala alebo Sar, s tým pravidlom,.----že keď Xxx6 znamená D-Lys (B), potom Xxx7 je Nie, keď Xxx6 znamená D-Cit, potom Xxx7 je Nie a Xxx10 je DAla alebo keď Xxx6 znamená D-Hci, potom Xxx7 je Leu a Xxx10 je D-Ala, a ich solí s farmaceutický prijateľnými kyselinami, najmä acetátov, pamoátov (embonátov, t.j. solí kyseliny l,l'-metylénbis-(2-hydroxy-3-naftoovej))a trifluóracetátov.
Podľa ďalšieho aspektu vynálezu sú obzvlášť prednostné nasledujúce zlúčeniny a taktiež ich soli s farmaceutický prijateľnými kyselinami:
Ac-D-Nal (2)1-D-Cpa2-D-Pal (3) 3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys (B) 6-Nle7Arg8-Pro9-Sar10-NH2;
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal (3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2;
Ac-D-Nal (2)1-D-Cpa2-D-Pal (3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys (B) 6-Nle7Lys (iPr) 8-Pro9-Sar10-NH2;
Ac-D-Nal (2) '‘-D-Phe (4-CI) 2-D-Pal (3) 3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys (B) 6Nle7-Lys (iPr) 8-Pro9-D-Ala10-NH2;
Ac-D-Nal (2) X-D-Cpa2-D-Pal (3) 3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Cit6-Nle7-Arg8Pro9-D-Ala10-NH2;
Ac-D-Nal (2)1-D-Cpa2-D-Pal (3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-Leu7-Arg8Pro9-D-Ala10-NH2;
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal (3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Cit6-Nle7Lys (iPr) 8-Pro9-D-Ala10-NH2;
Ac-D-Nal(2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-Leu7Lys (iPr) 8-Pro9-D-Ala10-NH2.
Podlá ďalšieho aspektu vynálezu sa poskytujú zlúčeniny podlá vynálezu vo forme acetátových, trifluóracetátových alebo pamoátových solí.
Podlá ďalšieho aspektu vynálezu sa zlúčeniny podlá vynálezu môžu používať ako liečivá alebo farmaceutické prípravky.
Podlá ďalšieho aspektu vynálezu sa poskytujú farmaceutické prípravky obsahujúce aspoň jednu zo zlúčenín podlá vynálezu a obvyklé nosiče a pomocné látky.
Podľa ďalšieho aspektu vynálezu sa poskytuje spôsob výroby zlúčenín všeobecného vzorca I podľa vynálezu, pri ktorom sa vytvárajú fragmenty zo stavebných zložiek Xxxm s vhodnými chrániacimi skupinami, kde m znamená celé číslo 1 až 10 a Xxx1 je acetylovaný, na tuhom (nerozpustnom) nosiči alebo v roztoku obvyklým spôsobom, potom sa fragmenty na tuhom nosiči zlučujú spájaním segmentov a po ukončení spájania sa zlúčeniny všeobecného vzorca I oddeľujú od nerozpustného nosiča obvyklým spôsobom za amidácie na stavebnej zložke Xxx10.
Podľa ďalšieho aspektu vynálezu sa poskytuje použitie zlúčenín podľa vynálezu na výrobu liečiv na liečenie hormonálne závislých nádorov, najmä rakoviny prostaty alebo rakoviny prsníka, a taktiež na liečenie nemalígnych indikácií, ktorých liečenie si vyžaduje hormonálnu supresiu LH-RH.
Podľa ďalšieho aspektu vynálezu sa poskytuje spôsob výroby farmaceutických prípravkov, pri ktorom sa aspoň jedna zlúčenina podľa jedného z nárokov 1 až 10 zmieša s obvyklými nosičmi a pomocnými látkami a upraví do formy liečiva.
Podľa ďalšieho aspektu vynálezu sa poskytuje spôsob liečenia hormonálne závislých nádorov, najmä rakoviny prostaty, rakoviny prsníka alebo myómu maternice, a taktiež nemalígnych indikácií, ktorých liečenie si vyžaduje hormonálnu supresiu LH-RH, ako je napríklad endometrióza, benígna hyperplázia prostaty (BPH), a taktiež sa poskytuje spôsob liečenia porúch plodnosti u samíc alebo samcov cicavcov, najmä u ľudí, prostredníctvom podávania účinnej dávky aspoň jednej zlúčeniny podľa vynálezu.
Zlúčeniny podlá vynálezu sa môžu použiť na liečenie hormonálne závislých nádorov, najmä rakoviny prostaty, rakoviny prsníka alebo myómu maternice, a taktiež na liečenie nemalígnych indikácií, ktorých liečenie si vyžaduje hormonálnu supresiu LH-RH, ako je napríklad endometrióza, benígna hyperplázia prostaty (BPH). Ďalej sa môžu použiť na liečenie porúch plodnosti žien alebo mužov, napríklad na riadenú ovariálnu superstimuláciu v rámci umelého oplodnenia (in vitro fertilizácia). Na to sa obvykle zmiešajú o sebe známym spôsobom s obvyklými nosičmi a pomocnými látkami a upravia do formy liečiva.
Syntéza zlúčenín vzorca I sa môže uskutočňovať nielen klasickou kondenzáciou fragmentov alebo syntézou na tuhom nosiči podľa Merrifielda s navzájom za sebou nasledujúcim spájaním použitím D-lyzínu už acylovaného karboxylovou kyselinou všeobecného vzorca R* 1 * * *-COOH v bočnom reťazci, ale aj reakciou stavebnej zložky dekapeptidu s príslušnými karboxylovými kyselinami amidovým zlučovaním v bočnom reťazci D-lyzínu6. Teda zavedenie skupiny R1-CO- sa môže uskutočňovať v troch rôznych bodoch spôsobu; pred kondenzáciou jednotlivých stavebných zložiek na peptid, po zabudovaní lyzínu alebo ornitínu do peptidového reťazca, ale aj pred kondenzáciou nasledujúcej stavebnej zložky alebo po kondenzácii všetkých stavebných zložiek.
Zlúčeniny vzorca I sa syntetizujú známymi metódami, ako je napríklad technika na tuhom nosiči, čiastočná technika na tuhom nosiči (takzvaná kondenzácia fragmentov) alebo klasickým spájaním v roztoku (viď M. Bodanszky, „Principles of Peptide Synthesis, Springer Verlag 1984).
Metódy syntézy na tuhom nosiči sú opísané napríklad v učebnici „Solid Phase Peptide Synthesis, J. M. Stewart and J. D. Young, Pierce Chem. Company, Rockford, III, 1984, a v práci G. Barany and R. B. Merrifield „The Peptides, kap.
1, str. 1-285, 1979, Academic Press Inc. Klasické syntézy v roztoku sú podrobne opísané v rozprave „Methoden der
Organischen Chemie (Houben-Weyl), Synthese von Peptiden. E.
Wunsch (vydavateľ) 1974, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, SRN.
Postupná tvorba sa uskutočňuje napríklad tak, že sa najskôr aminokyselina s karboxy-koncom, ktorej a-aminoskupina je chránená, kovalentne viaže na bežný nerozpustný nosič určený nezávisle tento účel, chrániaca skupina a-aminoskupiny tejto aminokyseliny sa odštiepi, na takto získanú voľnú aminoskupinu sa cez svoju karboxylovú skupinu naviaže ďalšia chránená aminokyselina a týmto spôsobom sa postupne v správnom slede zlučujú ostatné aminokyseliny syntetizovaného peptidu a po zlúčení všetkýchaminokyselín sa vytvorený peptid oddelí od nosiča a poprípade sa oddelia ďalšie existujúce chrániace skupiny vedľajších funkčných skupín. Postupná kondenzácia sa uskutočňuje syntézou príslušných, obvyklým spôsobom chránených aminokyselín bežným postupom.
Vzájomné naviazanie jednotlivých aminokyselín sa uskutočňuje obvyklými metódami určenými na tento účel.
Do úvahy prichádzajú najmä:
• metóda symetrických anhydridov v prítomnosti dicyklohexylkarbodiimidu alebo diizopropylkarbodiimidu (DCC), DIC);
• karbodiimidová metóda všeobecne;
-· karbodiimid-hydroxybenzotriazolová metóda (viď The
Peptides, zv. 2, Ed. E. Gross and J. Meienhofer).
Pri spájaní fragmentov sa využíva prednostne azidové zlučovanie prebiehajúce bez racemizácie alebo DCC-l-hydroxybenzotriazolová, poprípade DCC-3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro1,2,3-benzotriazínová metóda. Môžu sa použiť aj aktivované estery fragmentov.
Na postupnú kondenzáciu aminokyselín sú vhodné najmä aktivované estery N-chránených aminokyselín, ako je napríklad N-hydroxysukcínimidester alebo 2,4,5-trichlórfenylester. Aminolýza sa dá veľmi dobre katalyzovať N-hydroxyzlúčeninami, ktoré majú približne kyslosť kyseliny octovej, ako je napríklad 1-hydroxybenzotriazol.
Ako intermediárne chrániace skupiny aminoskupiny sú vhodné dehydrogenačné skupiny, ako je napríklad benzyloxykarbonylový zvyšok (= zvyšok Z) alebo slabo kyslé odštiepitelné skupiny. Ako chrániace skupiny pre a-aminoskupiny prichádzajú do úvahy napríklad: terciárne butyloxykarbonylové skupiny, fluorenylmetyloxykarbonylové skupiny, karboxybenzoxyskupiny, poprípade karbobenztioskupiny (poprípade s p-bróm- alebo p-nitrobenzylovým zvyškom), trifluóracetylová skupina, ftalylový zvyšok, o-nitrofenoxyacetylová skupina, tritylová skupina, p-toluénsulfonylskupina, benzylskupina, benzylové zvyšky substituované na benzénovom jadre (p-bróm- alebo p-nitrobenzylový zvyšok) a α-fenyletylový zvyšok. Za týmto účelom sa taktiež odkazuje na práce Jesse P. Greenstein and Milton Winitz, Chemistry of Amino Acids, New York 1961, John Wiley and Sons, Inc., zväzok 2, napríklad strana 883 a ďalšie, „Principles of Peptide Synthesis, Springer Verlag 1984, „Solid Phase Peptide Synthesis, J. M. Stewart and J. D. Young, Pierce Chem. Company, Rockford, III, 1984, G. Barany and R. B. Merrifield „The Peptides, kap. 1, str. 1-285, 1979, Academic Press Inc.
_a taktiež The Peptides. zväzok 2f Ed._EL._Gross and-ÓLMaienhofer, Academic Press, New York. Tieto chrániace skupiny prichádzajú do úvahy principiálne taktiež na ochranu ďalších funkčných vedľajších skupín (skupín OH, skupín NH2) príslušných aminokyselín.
Existujúce hydroxyskupiny (serín, treonín) sa chránia prednostne pomocou benzylových a podobných skupín. Ďalšie aminoskupiny, ktoré nie sú v polohe α (napríklad aminoskupiny v polohe ω, guanidínová skupina arginínu) sa prednostne chránia ortogonálne.
Jednotlivé stavebné zložky aminokyselín sú s výnimkou lyzínu modifikovaného skupinou R1-CO- komerčne dostupné.
Možný priebeh spôsobu výroby lyzínu modifikovaného skupinou R1-CO- je nasledujúci:
1. α-Karboxylová skupina sa vhodne chráni, napríklad esterifikáciou.
2. ε-Aminoskupina sa chráni, napríklad skupinou Z.
3. α-Aminoskupina sa chráni tak (napríklad skupina Boe), že sa poskytne selektivita vzhľadom na neskoršie odštiepenie chrániacich skupín aminoskupiny.
4. Skupina Z na ε-aminoskupine sa odštiepi.
5. Na ε-aminoskupinu sa naviaže požadovaná skupina R1-CO-.
6. Chrániaca skupina na α-aminoskupine sa odštiepi.
7. α-Aminoskupina sa poprípade reverzibilne derivatizuje, napríklad skupinou Z.
Na zavedenie skupiny R1-CO- reakciou aminoskupiny lyzínu s príslušnou karboxylovou kyselinou, poprípade derivátom karboxylovej kyseliny, prichádzajú do úvahy principiálne rovnaké spôsoby, ako sa opisujú vyššie pre zlučovanie aminokyselín. Obzvlášť prednostná je však kondenzácia použitím karbodiimidu, napríklad l-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimidu a 1-hydroxybenzotriazolu.
Reakcia zlučovania aminokyselín sa uskutočňuje v obvyklom indiferentnom rozpúšťadle alebo suspendačnom prostredí určenom na tento účel (napríklad v dichlórmetáne), pričom sa poprípade na zlepšenie rozpustnosti môže pridať dimetylformamid.
Ako syntetické nosné materiály prichádzajú do úvahy nerozpustné polyméry, ako je napríklad v organickom rozpúšťadle napučiavajúca polystyrénová živica v granulovanej forme (napríklad kopolymér polystyrénu a 1% divinylbenzénu). Vytváranie chráneného dekapeptidamidu na metylbenzhydryl12 amínovej živici (živica MBHA, t.j. polystyrénová živica s metylbenzhydrylamínovými skupinami), ktorá poskytuje požadovanú C-koncovú amidovú funkčnú skupinu peptidu po H.Fodštiepení od nosiča, sa môže uskutočňovať podlá nasledujúcej blokovej schémy:
Bloková schéma
Protokol syntézy peptidov použitím aminokyselín chránených Boe
Stupeň | Funkcia | Rozpúšťadlo/činidlo (v/v) | Čas |
1 | Premývanie | Metanol | 2x2 min |
2 | Premývanie | DCM | 3x3 min |
3 | Odštiepenie | DCM/TFA (1:1) | 1 x 30 min |
4 | Premývanie | Izopropylalkohol | 2x2 min |
5 | Premývanie | Metanol | 2x2 min |
6 | Premývanie | DCM | 2x3 min |
7 | Neutralizácia | DCM/DIPEA (9:1) | 3x5 min |
8 | Premývanie | Metanol | 2x2 min |
9 | Premývanie | DCM | 3x3 min |
10 | STOP | Pri Havnk Rn<5-zxt4K_v-—DCM —l- | |
DIC + HOBt | |||
11 | Zlučovanie | DCM alebo DCM/DCF | asi 90 min |
12 | Premývanie | Metanol | 3x2 min |
13 | Premývanie | DCM | 2x3 min |
Να-Boc-chránené aminokyseliny sa zlučujú obvyklým spôsobom v trojnásobnom molovom nadbytku v prítomnosti diizopropylkarbodiimidu (DIC) a 1-hydroxybenzotriazolu (HOBt) v CH2CI2/DMF v priebehu 90 minút a chrániaca skupina Boe sa odštiepi polhodinovým pôsobením 50% kyseliny trifluóroctovej (TFA) v CH2CI2. Na kontrolu úplného zreagovania môže slúžiť chloranilový test podľa Christensena a Kaiserov ninhydrínový test. Zvyšky volných funkčných aminoskupín sa blokujú acetyláciou v päťnásobnom nadbytku acetylimidazolu v CH2C12. Sled reakčných stupňov výstavby peptidu na živici vyplýva z blokovej schémy. Za účelom odštiepenia peptidov naviazaných na živici sa daný konečný produkt syntézy na tuhom nosiči vysuší vo vákuu nad P2O5 a spracuje v 500-násobnom nadbytku HF/anizolu (10:1, objem:objem) pri 0 °C v priebehu 60 minút.
Po oddestilovaní HF a anizolu vo vákuu vzniknú peptidy vo forme bielych tuhých látok zmiešaním s bezvodým etyléterom. Oddelenie od polymérneho nosiča sa uskutočňuje premývaním 50% vodným roztokom kyseliny octovej. Opatrným zahustením roztokov obsahujúcich kyselinu octovú vo vákuu sa môžu získať peptidy vo forme vysoko viskóznych olejov, ktoré sa po pridaní absolútneho éteru za chladu menia na biele tuhé látky.
Ďalšie čistenie sa uskutočňuje rutinnými metódami preparatívnej vysokotlakovej kvapalinovej chromatografie (HPLC).
Premena peptidov na ich adičné soli s kyselinami sa môže uskutočniť ich reakciou s kyselinami o sebe známym spôsobom. Voľné peptidy sa zasa môžu získať reakciou svojich adičných solí s kyselinami so zásadami. Pamoáty peptidov sa môžu vytvoriť reakciou solí kyseliny trifluóroctovej (TFA-solí) peptidu s voľnou kyselinou pamoovou (embónovou, l,l'-metylénbis-(2-hydroxy-3-naftoovou)) alebo s príslušnou disodnou soľou kyseliny pamoovej. Na to sa TFA-soľ peptidu zmieša vo vodnom roztoku s roztokom pamoátu disodného v polárnom aprotónovom prostredí, prednostne v dimetylacetamide, a vzniknutá svetložltá zrazenina sa izoluje.
Nasledujúce príklady slúžia na objasnenie vynálezu bez toho, aby ho obmedzovali.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1 (D-68968):
Ac-D-Nal (2) 1-D-Cpa2-D-Pal (3) 3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys (B) 6-Nle7Arg8-Pro9-Sar10-NH2
Syntéza dekapeptidu sa uskutočňovala na polymérnom nosiči s hustotou nasýtenia 0,55 mmol/g (aminometylsubstituovaná živica, chrániaca skupina Fmoc, typ D-1675, firma Bachem). Lyzín sa naviazal vo forme Fmoc-D-Lys(Boe)OH, chrániace skupiny Fmoc sa odštiepili pomocou 20% piperidínu v DMF. Po súčasnom odštiepení všetkých chrániacich skupín v bočnom reťazci a uvoľnení od polymérneho nosiča sa izolovaný surový peptid čistil prostredníctvom preparatívnej HPLC. Po lyofilizácii sa získal 98,5% dekapeptid.
Substitúcia na ε-dusíku D-lyzínu pôsobením kyseliny 4—(4— -aminofenyl)amino-1,4-dioxobutánovej sa uskutočnila pomocou PyBop v DMF za prídavku DIPEA. Čistenie izolovaného surového peptidu sa uskutočňovalo prostredníctvom preparatívnej HPLC. Následná lyofilizácia poskytla približne 99% produkt (trifluóracetát) sumárneho vzorca C82H106C1NÍ9O15 s príslušným FAB-MS 1633 (M+H) (vypoč. 1631,78096).
Príklad 2 (D-68969):
Ac-D-Nal (2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2
Syntéza dekapeptidu sa uskutočňovala na polymérnom nosiči s hustotou nasýtenia 0,55 mmol/g (aminometylsubstituovaná živica, chrániaca skupina Fmoc, typ D-1675, firma Bachem). Lyzín sa naviazal vo forme Fmoc-D-Lys(Boe)-OH, chrániace skupiny Fmoc sa odštiepili pomocou 20% piperidínu v
DMF. Po súčasnom odštiepení všetkých chrániacich skupín v bočnom reťazci a uvoľnení od polymérneho nosiča izolovaný surový peptid s obsahom približne 71 % (HPLC) bez čistenia ďalej reagoval.
Substitúcia v bočnom reťazci D-lyzínu pôsobením kyseliny 4-(4-aminofenyl)amino-1,4-dioxobutánovej sa uskutočnila pomocou PyBop v DMF za prídavku DIPEA. Izolovaný surový peptid sa čistil prostredníctvom preparátívnej HPLC. Po následnej lyofilizácii sa získal 98,8% produkt (trifluóracetát) sumárneho vzorca C82H106CIN19O15 s príslušným FAB-MS 1633 (M+H) (vypoč. 1631,78096).
Príklad 3 (D-68971):
Ac-D-Nal (2) 1-D-Cpa2-D-Pal (3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7Lys (iPr) 8-Pro9-Sar10-NH2
Syntéza dekapeptidu sa uskutočňovala na polymérnom nosiči s hustotou nasýtenia 0,55 mmol/g (aminometylsubstituovaná živica, chrániaca skupina Fmoc, typ D-1675, firma Bachem). Lyzín sa naviazal vo forme Fmoc-D-Lys(Boe)-OH,_ chrániace skupiny Fmoc sa odštiepili pomocou 20% piperidínu v DMF. Po súčasnom odštiepení všetkých chrániacich skupín v bočnom reťazci a uvoľnení od polymérneho nosiča sa izolovaný surový peptid (obsah približne 59 %, HPLC) čistil prostredníctvom preparatívnej HPLC. Po lyofilizácii sa získal 95% dekapeptid.
Substitúcia D-lyzínu v bočnom reťazci pôsobením kyseliny 4-(4-aminofenyl)amino-1,4-dioxobutánovej sa uskutočnila pomocou PyBop v DMF za prídavku DIPEA. Čistenie izolovaného surového peptidu sa uskutočňovalo prostredníctvom preparatívnej HPLC. Po následnej lyofilizácii sa získal 96,6% produkt (trifluóracetát) sumárneho vzorca C85Hi12ClNi70i5 s príslušným FAB-MS 1648 (M+H) (vypoč. 1645,8218).
Príklad 4 (D-68987)
Ac-D-Nal (2)1-D-Phe(4-CI)2-D-Pal(3) 3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys (B) 6Nle7-Lys (iPr) 8-Pro9-D-Ala10-NH2
Syntéza D-Lys-6-nesubsitutovaného dekapeptidu sa uskutočňovala na 9,09 g polymérneho nosiča s hustotou nasýtenia 0,55 mmol/g. Lyzín6 sa naviazal vo forme Fmoc-DLys(Boc)-OH. Po odštiepení živice sa izolovalo 8,15 g surového peptidu. Čistenie surového peptidu sa uskutočňovalo prostredníctvom preparatívnej HPLC.
Substitúcia D-lyzínu v bočnom reťazci pôsobením kyseliny 4-(4-aminofenyl)amino-1,4-dioxobutánovej sa uskutočnila pomocou PyBop v DMF za prídavku DIPEA. Izolovaný surový peptid sa čistil prostredníctvom preparatívnej HPLC. Po následnej lyofilizácii sa získal 94,6% produkt (trifluóracetát) sumárneho vzorca C85Hii2ClN170i5 s príslušným FAB-MS 1646,8 (M+H); (vypoč. 1645,82).
Príklad 5:
Ac-D-Nal (2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Cit6-Nle7-Arg8Pro9-D-Ala10-NH2
Príklad 6:
Ac-D-Nal (2)1-D-Cpa2-D-Pal(3) 3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-Leu7-Arg8Pro9-D-Ala10-NH2
Príklad 7:
Ac-D-Nal (2) ^D-Cpa^D-Pal (3) 3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Cit6-Nle7Lys (iPr) 8-Pro9-D-Ala10-NH2
Príklad 8:
Ac-D-Nal (2) 1-D-Cpa2-D-Pal (3) 3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-Leu7Lys (iPr) 8-Pro9-D-Ala10-NH2
Všeobecné pracovné postupy výroby peptidov podlá príkladov 5 až 8:
Dekapeptidy sa môžu vytvárať Merrifieldovou syntézou na tuhom nosiči (SPPS) a taktiež klasickou kondenzáciou fragmentov v roztoku. Vytváranie peptidovej sekvencie na polymérnom nosiči je z ekonomických dôvodov prednostné a môže sa uskutočniť principiálne voliteľne podľa 1) Boe- alebo 2) Fmoc-stratégie; podlá toho sa môže na C-koncové naviazanie D-alanínu použiť buď metylbenzhydrylamínová živica (pri 1) alebo Fmoc-2,4-dimetoxy-4'-(karboxymetyloxy)benzhydrylamínová živica (pri 2).
Syntéza na tuhom nosiči, Merrifieldov spôsob:
Dekapeptidy sa syntetizujú za štandardizovaných reakčných podmienok (bloková schéma, tabulka 1) na syntézu na tuhom nosiči podľa Fmoc-stratégie použitím 5 gramov polymérneho nosiča Fmoc-2,4-dimetoxy-4'-(karboxymetyloxy)benzhydrylamínovej živice od firmy Bachem D1675, hustota nasýtenia približne 0,55 mmol/g, veľkosť zŕn 200 až 400 mesh.
Postupné vytváranie sekvencie na živici sa uskutočňuje pomocou Να-Fmoc-chránených aminokyselín, podlá nasledujúcej blokovej schémy:
Tabulka 1
Stupeň | Funkcia | Rozpúšťadlo | Čas | Opakovanie n |
1 | Premývanie | DMF | 2 min | 2 x |
2 | Odštiepenie | 20% piperidín v DMF | 5 min | 2 x |
3 | Premývanie | DMF | 2 min | 2 x |
4 | Premývanie | Izopropylalkohol | 2 min | 1 x |
5 | Premývanie | DMF | 2 min | 2 x |
6 | Premývanie | Izopropylalkohol | 2 min | 1 x |
7 | Premývanie | DMF | 2 min | 2 x |
8 | Zlučovanie | Boc-AS-OH, HOBT, DIC v DMF | 90 min | 1 x |
9 | Premývanie | DMF | 2 min | 1 x |
10 | Premývanie | Izopropylalkohol | 2 min | 1 x |
11 | Premývanie | DMF | 2 min | 1 x |
12 | Premývanie | Izopropylalkohol | 2 min | 1 x |
13 | Premývanie | DMF | 2 min | 1 x |
14 | Premývanie | Izopropylalkohol | 2 min | 1 x |
15 | Overenie | Test farbenia chloranilom* |
(* podlá T. Christensena, Acta Chem. Scand. B 33, 163-166, 1313)
Reakčné parametre typické pre postup (opakovanej) syntézy dekapeptidov na tuhom nosiči podlá vyššie uvedenej schémy:
- odštiepenie chrániacej skupiny Fmoc pomocou 20% piperidínu v DMF, 2x5 min pri teplote miestnosti (stupeň 2);
- zlučovanie v trojnásobnom molovom nadbytku Fmocaminokyselín pomocou diizopropylkarbodiimidu (DIC) v prítomnosti hydroxybenzotriazolu (HOBt) (stupeň 8);
- C-koncové odštiepenie polymérneho nosiča vrátane odstránenia chrániacich skupín v bočnom reťazci aminokyselín pomocou kyseliny trifluóroctovej (TFA).
Po odštiepení polymérneho nosiča vzniká pri použití 5 gramov živice približne 5 až 6 gramov surovej zmesi peptidov s obsahom približne 70 až 80 % požadovanej zložky. Táto sa získa následnou preparatívnou chromatografiou HPLC. Prepara.tívne čistenie dekapeptidov pomocou HPLC; podmienky chromatografie :
Preparatívna HPLC, firma Shimadzu, kolóna Dynamax RP18, 12 μπι, 30 nm, L = 250 mm, ID = 41,4 mm
Gradientový systém s časovým programom, 40 % B -> 90 % B, 50 min
Eluent A: 970 ml H2O + 30 ml CH3CN + 1 ml CF3COOH
Eluent B: 300 ml H2O + 700 ml CH3CN + 1 ml CF3COOH
UV-detekcia, λ = 220 nm, prietoková rýchlosť 60 ml/min.
Získané frakcie sa zahustia vo vákuu a lyofilizujú. Dekapeptidy vznikajú vo forme ľahkého bezfarebného materiálu. Premena na acetátovú soľnú formu požadovanú pre farmakologický vývoj sa nslaitočňn jo nánlodno pm'strprinir.tvnni chromatografickej iónovej výmeny.
Skúšky biologickej účinnosti:
Zlúčeniny vzorca I podľa vynálezu sa skúmali z hľadiska ich väzby k receptoru. Tento spôsob sa úzko opiera o spôsob opísaný v práci Beckers et al., Eur. J. Biochem. 231, 535-543 (1995). Podľa vyššie zverejnenej syntézy získaný cetrorelix sa j ódu j e. pôsobením [125I] (Amersham; špecifická aktivita 80,5 Bq/fmol) použitím činidla IodoGen (Pierce). Reakčná zmes sa čistí vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou s obrátenými fázami, pričom sa získa monojódovaný cetrorelix bez neoznačeného peptidu. Približne 80 % [125I]-cetrorelixu a neoznačenej zlúčeniny podľa vynálezu je vhodných na . špecifickú väzbu s receptorom.
Zlúčeniny podlá vynálezu sa môžu testovať nasledujúcimi metódami 1 a 2 na svoju účinnosť in vitro, pričom sa stanovia väzbové afinity pri väzbovej skúške s [125I]-cetrorelixom (metóda 1) a funkčné aktivity s triptorelínom ako agonistickým stimulom (metóda 2) .
Metóda 1 (stanovenie KD na príklade cetrorelixu):
Skúška väzby k receptoru podľa práce Beckers, T., Marheineke, K., Reiländer, H., Hilgard P. (1995) „Selection and characterization of mamalian celí lines with stable overexpression of human pituitary receptors for gonadoliberin (GnRH) Eur. J. Biochem. 231, 535 - 543.
Pri skúške naviazania k receptoru sa cetrorelix jóduje použitím činidla IodoGen (Pierce) s [125I] (Amersham; špecifická aktivita 80,5 Bq/fmol). Reakčná zmes sa čistí vysokoúčinnou kvapalinovou chromatografiou s obrátenými fázami, pričom sa získa monojódovaný cetrorelix bez neoznačeného ppptidn·—Približne 8Q—%-[125I]-cetrorelixu bolo' schopných špecificky sa viazať na receptor.
Skúška naviazania na receptor sa uskutočňuje s neporušenými bunkami za fyziologických podmienok tak, ako boli opísané (Beckers et al., 1995). Subkonfluentné kultúry stabilne transfekovaných LTK-buniek, ktoré exprimujú humánny receptor LHRH, sa oddelia inkubáciou v NaCl/Pi (137 mM NaCl, 2,7 mM KC1, 8,1 mM Na2HPO4, 11,47 mM KH2PO4)/1 mM EDTA a zhromaždia centrifugovaním. Bunková peleta sa resuspenduje vo väzbovom tlmivom roztoku (DMEM bez Η2003, so 4,5 g/1 glukózy, 10 mM HEPES, pH 7,5, 0,5 % (hmotnosť/objem) BSA, 1 g/1 bacitracínu, 0,1 g/1 SBTI, 0,1 % (hmotnosť/objem) NaN3) . Na skúšku potlačenia sa inkubuje 0,25 x 106 buniek/100 μΐ s približne 225 pM [125I]-cetrorelixu (špecifická aktivita 5 až 10 x 105 dpm/pmol) a rozličnými koncentráciami neoznačenej ' zlúčeniny podľa vynálezu ako konkurentmi. Bunková suspenzia v 100 μΐ väzbového média sa v 400 μΐ skúšobnej rúrke potiahne 200 μΐ 84 % (objem) silikónového oleja (Merck, typ 550)/16 % (objem) parafínového oleja. Po inkubácii počas 1 hodiny pri 37 °C za pomalého, kontinuálneho pretrepávania sa bunky oddelia centrifugovaním v priebehu 2 minút pri 9000 ot./min (Rotortyp HTA13,8; Heraeus Sepatec, Osterode/Nemecko) od inkubačného média. Špičky rúrky, ktoré obsahujú bunkovú peletu, sa odrežú. Bunková peleta a supernatant sa potom analyzujú počítaním žiarenia γ. Množstvo nešpecifických naviazaní sa stanoví za vloženia neoznačeného cetrorelixu pri 1 μΜ konečnej koncentrácii a typicky je > 10 % z celkových naviazaní. Analýza údajov o väzbách sa uskutočňuje pomocou programu pre.analýzu ligandov EBDA (Biosoft V3,0).
Cetrorelix má hodnotu KD 170 pikomol na liter (pM) (počet nezávislých uskutočnených pokusov: 21).
Metóda 2 (funkčná skúška na stanovenie antagonistickej účinnosti—(hodno-ty IC50) ) :Skúška sa uskutočňuje s nižšie uvedenými modifikáciami tak, ako sa opisuje v práci Beckers, T., Reiländer, H.,
Hilgard P. (1997) „Characterization of gonadotropin-releasing hormone analogs based on a sensitive cellular luciferase reportér gene assay, Analyt. Biochem. 251, 17 - 23 (Beckers et ab 1997). 10 000 buniek na jamku, ktoré exprimujú humánny receptor LHRH a oznamujúci gén pre luciferázu, sa kultivujú 24 hodín na mikrotitračných platniach použitím DMEM s prísadami a 1 % (objem/objem) FCSi. Bunky sa potom 6 hodín stimulujú pomocou 1 nM [D-Trp6]LHRH. Antagonistické zlúčeniny podľa vynálezu sa pridajú pred stimuláciou a bunky sa nakoniec lyžujú za účelom kvantifikácie bunkovej Luc-aktivity. Výpočet hodnôt IC50 z kriviek závislosti účinnosti od dávky sa uskutočňuje nelineárnou regresnou analýzou použitím Hillovho modelu (program EDX 2.0 od C. Grunwalda, Arzneimittelwerk, Drážďany).
Kvantifikácia Luc-aktivity sa uskutočňuje v podstate tak, ako sa opisuje (Promega Technical Bulletins #101/161) použitím skúšobného systému pre luciferázu (Promega E4030) dvojito. Pridaním koenzýmu A (CoA) sa uskutoční oxidácia lyciferyl-CoA s výhodnou kinetikou. Po odstránení kultivačného média z mikrotitračnej platne sa bunky lyžujú pridaním 100 μί lyzačného tlmivého roztoku (25 mM Trisfosfátu pH 7,8, 2 mM ditiotreitolu, 2 mM kyseliny 1,2-diaminocyklohexán-N,N,N',N'-tetraoctovej (CDTA), 10 % (objem/objem) glycerolu, 1% (objem/objem) tritónu X-100. Po 15-minútovej inkubácii pri teplote miestnosti sa 10 μΐ bunkové lyzáty prenesú na bielu mikrotitračnú platňu (Dynatech) vhodnú na luminometrickú detekciu. Enzymatická reakcia sa iniciuje pridaním 50 μί skúšobného tlmivého roztoku (20 mM tricínu pH —1,07- mM—(MgCO3)4Mg (OH)2,—2, 67
MgSOí, 0,1 mM kyseliny etylendiamíntetraoctovej (EDTA), 33,3 mM ditiotreitolu, 270 μΜ koenzýmu A, 470 μΜ luciferínu zo svätojánskej mušky (Photinus pyralis), 530 μΜ rATPNa2) . Po 1 minúte sa stanoví pre celkový čas jednej sekundy luminiscencia so signálnou polovičnou hodnotou času 5 minút použitím zariadenia EG&G Berthold MicroLumat LB 96 P.
V tabuľke 2 sú zhrnuté fyzikálno-chemické a in vitro údaje zlúčenín podľa vynálezu. IC50 platí pre funkčnú aktivitu a pM znamená pikomol na liter. Rozpustnosť vo vode sa stanovila podľa spôsobu opísaného pod poznámkou 2):
Tabulka 2
Zlúčenina | Rozpustnosť vo vode [mg/ml] | IC50 [pM] |
Cetrorelix | 0, 002 | 198 (5)1 |
Príklad 1 (D-68968) | 1,03 | 1300 (l)1 |
Príklad 2 (D-68969) | 1,11 | 1400 (l)1 |
Príklad 3 (D-68971) | 1,36 | 4700 (l)1 |
Príklad 4 (D-68987) | 1,18 | 700 (l)1 |
Poznámky:
1) Čislo v zátvorke udáva počet navzájom nezávislých pokusov.
2) Rozpustnosť vo vode sa stanovila podlá ďalej opísanej metódy:
Rozpustnosť podľa metódy uvedenej vo vestníku v Ringerovom roztoku:
Na stanovenie rozpustnosti podľa metódy uvedenej vo vestníku sa testovaná látka v nadbytku zmieša s inertným nosným materiálom, ako je napríklad piesok, a naplní do sklenej kolóny (objem približne 10 ml). Na dno kolóny sa predtým vložilo sito Z vaty a filter zn.Bklňných vlhkí m-Zmes látky a piesku sa nechá 1 hodinu napučiavať v 1,0 ml rozpúšťadla, v ktorom sa má stanoviť rozpustnosť. Potom sa 10 ml rozpúšťadla naplní do sklenej kolóny. Pomocou hadicového čerpadla sa roztok čerpá v okruhu. Toto stanovenie sa uskutočňuje pri teplote miestnosti (približne 20 °C). Rozpustnosť sa stanoví, keď hmotnostné koncentrácia navzájom za sebou odoberaných frakcií je konštantná.. Stanovenie hmotnostnej koncentrácie sa uskutočňuje prostredníctvom nižšie opísanej metódy HPLC.
Metóda HPLC
Zariadenie:
Systém HPLC: Hewlett Packard 1100; detektor: Hewlett Packard DAD Šerieš 110
Kolóna: materiál kolóny: Nucleosil® 120-3 Cis veľkosť častíc: 3 pm rozmery kolóny: 125 x 4 mm výrobca: Macherey & Na-gel
Parametre zariadenia: vstrekovací objem: 15 μΐ prietok: 1,0 ml/min teplota pece: 45 °C vlnová dĺžka: 226 nm čas zastavenia: 15 min
55% mobilná fáza A: Zmieša sa 970 ml MÍ11Í-Q-H2O, 30 ml acetonitrilu a 1 ml kyseliny trifluóroctovej. Výsledné pH je približne 1,9.
45% mobilná fáza B: Zmieša sa 300 ml Milli-Q-H2O, 700 ml acetonitrilu a 1 ml kyseliny trifluóroctovej. Výsledné pH je približne 1,8.
Podávanie zlúčenín podlá vynálezu sa môže uskutočňovať rôznymi formami vhodnými pre peptidové účinné látky. Vhodné ap1i kác ie sú odborníkom dobre známe. Aplikácia sa môže__ uskutočňovať napríklad injekciou. Aplikácia sa môže uskutočňovať napríklad parenterálne. Prednostné je pri tom subkutánne (s.c.), intramuskulárne (i.m.), intravenózne (i.v.), bukálne (napríklad sublingválne) alebo rektálne podávanie. Podávanie i.s. a i.m. je obzvlášť prednostné.
Zlúčeniny podlá vynálezu sú vhodné na výrobu rôznych aplikačných foriem, napríklad lyofilizátov, roztokov alebo suspenzií. Vhodné aplikačné formy a ich výroba sú odborníkom známe. Ako vhodné pomocné látky a látky tvoriace skelet liečivého prípravku sú napríklad hexitoly, ako je napríklad manitol, najmä D-manitol, L-manitol alebo D,L-manitol, sorbitol, ako je napríklad D-sorbitol, D- alebo L-altritol, iditol, glucitol a dulcitol. Výroba sa uskutočňuje o sebe známymi spôsobmi, napríklad zmiešaním, suspendovaním alebo lyofilizáciou.
Príklad A: Lyofilizát na výrobu s.c. injekčného roztoku mg zlúčeniny z príkladu 1 (zodpovedajúc 0,26 až 0,27 mg acetátovej soli); 0 až 16,9 hmotnostných dielov D-manitolu, prednostne 0,1 až 7 hmotnostných dielov vzhladom na príklad 1 a voda na injekčné účely (na výrobu injekčného roztoku z lyofilizátu).
Príprava: 1,62 g z príkladu 1 sa rozpustí v 30% kyseline octovej (približne 1,5 1 vody na injekčné účely a 91,17 g kyseliny octovej). Roztok sa zriedi 1,5 1 vody, pridá sa 82,2 g manitolu, uskutoční sa sterilná filtrácia, zmes sa plní do ml injekčných flaštičiek za aseptických podmienok a lyofilizuje. Získa sa 1 mg lyofilizátu zlúčeniny podlá príkladu 1.
Zlúčeniny podľa vynálezu sú vhodné napríklad na liečenie hormonálne závislých malígnych alebo nemalígnych chorôb, napríklad na liečenie rakoviny prsníka, rakoviny prostaty, endometriózy, myómu maternice, benígnej hyperplázie prostaty (BPH), a taktiež na liečenie porúch plodnosti žien alebo_ mužov, napríklad na zabránenie predčasnej ovulácii u pacientiek, ktoré sa podrobujú riadenej ovariálnej stimulácii nasledovanej odňatím vaječnej bunky a technikami asistovanej reprodukcie. Uvedené liečenia sa môžu uskutočňovať u cicavcov, najmä u ľudí.
Claims (16)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Zlúčeniny všeobecného vzorca IA-Xxx1-Xxx2-Xxx3-Xxx4-Xxx5-Xxx6-Xxx7-Xxx8-Xxx9-Xxx10-NH2 (I) v ktoromXxxXxx2 znamená acetylovú skupinu, znamená D-Nal(2), znamená D-Cpa,Xxx3 znamená D-Pal(3),Xxx4 znamená Ser,Xxx5 znamená N-Me-Tyr,Xxx6 znamená D-Cit, D-Hci alebo ϋ-[ε-Ν'-4-(4-amidinofenyl)amino-1,4-dioxobutyl]-Lys (skratka: D-Lys(B)),Xxx7 znamená Leu alebo Nie,Xxx8 znamená Arg alebo Lys(iPr),ΛXxx9 znamená Pro aXxx10 znamená D-Ala alebo Sar, s tým pravidlom, že keď Xxx6 znamená D-Lys(B), potom Xxx7 je Nie,_ keď Xxx6 znamená D-Cit, potom Xxx7 je Nie a Xxx10 je D-Ala alebo keď Xxx6 znamená D-Hci, potom Xxx7 je Leu a Xxx10 je D-Ala, a ich soli s farmaceutický prijateľnými kyselinami.
- 2. Zlúčenina podľa nároku 1 vzorca Ac-D-Nal (2)1-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys(B)6-Nle7Arg8-Pro9-Sar10-NH2 alebo jej soľ s farmaceutický prijateľnými kyselinami.
- 3. Zlúčenina podľa nároku 1 vzorcaAc-D-Nal (2) 1-D-Cpa2-D-Pal (3) 3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys (B) 6-Nle7Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2 alebo jej sol s farmaceutický prijateľnými kyselinami.
- 4. Zlúčenina podľa nároku 1 vzorcaAc-D-Nal (2) 1-D-Cpa2-D-Pal (3) 3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys (B) 6-Nle7Lys (iPr) 8-Pro9-Sar10-NH2 alebo jej sol s farmaceutický prijateľnými kyselinami.
- 5. Zlúčenina podlá nároku 1 vzorcaAc-D-Nal (2) 1-D-Phe (4-CI) 2-D-Pal (3) 3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Lys (B)' Nle7-Lys (iPr) 8-Pro9-D-Ala10-NH2 alebo jej soľ s farmaceutický prijateľnými kyselinami.
- 6. Zlúčenina podľa nároku 1 vzorcaAc-D-Nal (2) 1-D-Cpa2-D-Pal (3) 3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Cit6-Nle7-Arg Pro9-D-Ala10-NH2 alebo jej sol s farmaceutický prijateľnými kyselinami.
- 7. Zlúčenina podlá nároku 1 vzorcaAc-D-Nal (2) 1-D-Cpa2-D-Pal (3) 3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-Leu7-ArgPro9-D-Ala10-NH2 alebo jej sol s farmaceutický prijateľnými kyselinami.
- 8. Zlúčenina podľa nároku 1 vzorcaAc-D-Nal (2) 1-D-Cpa2-D-Pal (3) 3-Se.r4-N-Me-Tyr5-D-Cit6-Nle7Lys (iPr) 8-Pro9-D-Ala10-NH2 alebo jej sol s farmaceutický prijateľnými kyselinami.
- 9. Zlúčenina podľa nároku 1 vzorcaAc-D-Nal (2)X-D-Cpa2-D-Pal(3)3-Ser4-N-Me-Tyr5-D-Hci6-Leu7Lys (iPr) 8-Pro9-D-Ala10-NH2 alebo jej sol s farmaceutický prijateľnými kyselinami.
- 10. Zlúčeniny podľa jedného z nárokov 1 až 9, kde touto soľou je acetát, trifluóracetát alebo pamoát.
- 11. Zlúčeniny podľa jedného z nárokov 1 až 10 na použitie ako liečivo.
- 12. Farmaceutický prípravok obsahujúci aspoň jednu zlúčeninu podľa jedného z nárokov 1 až 10 a obvyklé nosiče a pomocné látky.
- 13. Spôsob výroby zlúčenín všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a taktiež podľa jedného z nárokov 2 až 9, pri ktorom sa vytvárajú fragmenty zo stavebných zložiek Xxxm s vhodnými chrániacimi skupinami, kde m znamená celé číslo 1 až 10 a Xxx1 je acetylovaný, na tuhom nosiči alebo v roztoku obvyklým spôsobom, potom sa fragmenty na tuhom nosiči zlučujú spájaním segmentov a po ukončení spájania sa zlúčeniny všeobecného vzorca I oddeľujú od tuhého nosiča obvyklým spôsobom za amidácie na stavebnej zložke Xxx10.
- 14. Použitie zlúčenín podľa nárokov 1 až 10 na výrobu___ liečiv na liečenie hormonálne závislých nádorov, najmä rakoviny prostaty, rakoviny prsníka alebo myómu maternice, a taktiež nemalígnych indikácií, ktorých liečenie si vyžaduje hormonálnu supresiu LH-RH, ako je napríklad endometrióza, benígna hyperplázia prostaty (BPH), alebo na liečenie porúch plodnosti samíc alebo samcov cicavcov, najmä ľudí.
- 15. Spôsob výroby farmaceutických prípravkov podľa nároku 12, vyznačujúci sa tým, že sa aspoň jedna zlúčenina podľa jedného z nárokov 1 až 10 zmieša s obvyklými nosičmi a pomocnými látkami a upraví do formy liečiva..
- 16. Spôsob liečenia hormonálne závislých nádorov, najmä rakoviny prostaty, rakoviny prsníka alebo myómu maternice, a taktiež nemalígnych chorôb, ktorých liečenie si vyžaduje hormonálnu supresiu LH-RH, ako je napríklad endometrióza, benígna hyperplázia prostaty (BPH) , a liečenie porúch plodnosti samíc alebo samcov cicavcov, najmä ludí, prostredníctvom podávania účinnej dávky aspoň jednej zlúčeniny podlá nárokov 1 až 10.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US09/525,007 US6627609B1 (en) | 1999-03-17 | 2000-03-14 | LHRH antagonists having improved solubility properties |
PCT/EP2001/002719 WO2001068676A2 (de) | 2000-03-14 | 2001-03-12 | Lh-rh-antagonisten, deren herstellung und verwendung als arzeimittel |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SK14332002A3 true SK14332002A3 (sk) | 2003-09-11 |
Family
ID=24091545
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SK1433-2002A SK14332002A3 (sk) | 2000-03-14 | 2001-03-12 | Antagonisty LHRH, ich výroba a použitie ako liečiv |
Country Status (25)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1268522B1 (sk) |
JP (1) | JP3805679B2 (sk) |
KR (1) | KR100607396B1 (sk) |
CN (2) | CN1443195A (sk) |
AT (1) | ATE408619T1 (sk) |
AU (2) | AU6011001A (sk) |
BG (1) | BG107121A (sk) |
BR (1) | BR0109279A (sk) |
CA (1) | CA2402193C (sk) |
DE (1) | DE50114335D1 (sk) |
DK (1) | DK1268522T3 (sk) |
ES (1) | ES2312435T3 (sk) |
HR (1) | HRP20020810A2 (sk) |
HU (1) | HUP0300222A3 (sk) |
IL (1) | IL151647A0 (sk) |
MX (1) | MXPA02008870A (sk) |
NO (1) | NO20024363L (sk) |
NZ (1) | NZ521273A (sk) |
PL (1) | PL357999A1 (sk) |
PT (1) | PT1268522E (sk) |
RU (1) | RU2248982C9 (sk) |
SK (1) | SK14332002A3 (sk) |
UA (1) | UA79070C2 (sk) |
WO (1) | WO2001068676A2 (sk) |
ZA (1) | ZA200207248B (sk) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN100340572C (zh) * | 2004-12-01 | 2007-10-03 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 新的lhrh拮抗剂 |
CN101037472B (zh) * | 2006-03-14 | 2013-03-27 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 具有低组胺释放作用的促黄体生成素释放激素拮抗剂 |
DK2252627T3 (en) | 2008-01-24 | 2017-08-14 | Esperance Pharmaceuticals | MERGER CONSTRUCTION WITH LYTIC DOMAIN AND METHOD FOR PRODUCING AND USING SAME. |
CN101597321B (zh) * | 2008-06-03 | 2013-04-24 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 长效低组胺释放副作用的lhrh拮抗剂 |
WO2010142060A1 (zh) * | 2009-06-11 | 2010-12-16 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 长效低组胺释放副作用的lhrh拮抗剂 |
CA2889475A1 (en) | 2012-10-30 | 2014-05-08 | Esperance Pharmaceuticals, Inc. | Antibody/drug conjugates and methods of use |
CN104418936B (zh) * | 2013-08-20 | 2018-06-05 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | Lhrh拮抗剂衍生物及其药物用途 |
FR3024612B1 (fr) * | 2014-08-04 | 2018-03-09 | Alstom Transp Tech | Module d'alimentation electrique d'un bloc moteur, systeme de traction et vehicule electrique associe |
RU2585367C1 (ru) * | 2014-11-05 | 2016-05-27 | Наталья Владимировна Спиридонова | Способ лечения бесплодия у женщин с миомой матки |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5300492A (en) | 1988-02-10 | 1994-04-05 | Tap Pharmaceuticals | LHRH analogs |
US5110904A (en) * | 1989-08-07 | 1992-05-05 | Abbott Laboratories | Lhrh analogs |
US5140009A (en) | 1988-02-10 | 1992-08-18 | Tap Pharmaceuticals, Inc. | Octapeptide LHRH antagonists |
IL101074A (en) | 1991-03-14 | 1997-09-30 | Salk Inst For Biological Studi | GnRH ANALOGS AND THEIR PREPARATION |
ES2052488T3 (es) | 1991-04-25 | 1997-01-01 | Romano Deghenghi | Peptidos antagonistas de la hormona de liberacion de la hormona luteinizante. |
EP0673254A4 (en) | 1992-12-04 | 1998-11-18 | Abbott Lab | HORMONE ANTAGONISTS RELEASING LUTEINIZING HORMONE (LHRH) OF MODIFIED DECAPEPTIDES IN POSITION 6. |
WO1994014841A1 (en) | 1992-12-18 | 1994-07-07 | Abbott Laboratories | Lhrh antagonists having modified aminoacyl residues at postions 5 and 6 |
IL108509A0 (en) | 1993-02-22 | 1994-05-30 | Salk Inst For Biological Studi | GnRH antagonist peptides |
DE4320201A1 (de) * | 1993-06-18 | 1995-01-12 | Asta Medica Ag | Verwendung von Cetrorelix und weiteren Nona- und Dekapeptiden zur Herstellung eines Arzneimittels zur Bekämpfung von Aids und zur Wachstumsstimulation |
DE19544212A1 (de) * | 1995-11-28 | 1997-06-05 | Asta Medica Ag | Neue LH-RH-Antagonisten mit verbesserter Wirkung |
DE19911771B4 (de) * | 1999-03-17 | 2006-03-30 | Zentaris Gmbh | LHRH-Antagonist, Verfahren zu seiner Herstellung und seiner Verwendung |
-
2001
- 2001-03-12 BR BR0109279-0A patent/BR0109279A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-03-12 NZ NZ521273A patent/NZ521273A/en unknown
- 2001-03-12 CN CN01807543A patent/CN1443195A/zh active Pending
- 2001-03-12 PT PT01933682T patent/PT1268522E/pt unknown
- 2001-03-12 AU AU6011001A patent/AU6011001A/xx active Pending
- 2001-03-12 CA CA2402193A patent/CA2402193C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-12 AT AT01933682T patent/ATE408619T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-03-12 JP JP2001567766A patent/JP3805679B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-12 IL IL15164701A patent/IL151647A0/xx unknown
- 2001-03-12 SK SK1433-2002A patent/SK14332002A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2001-03-12 ES ES01933682T patent/ES2312435T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-03-12 WO PCT/EP2001/002719 patent/WO2001068676A2/de active IP Right Grant
- 2001-03-12 DK DK01933682T patent/DK1268522T3/da active
- 2001-03-12 PL PL01357999A patent/PL357999A1/xx unknown
- 2001-03-12 RU RU2002127786/04A patent/RU2248982C9/ru active
- 2001-03-12 HU HU0300222A patent/HUP0300222A3/hu unknown
- 2001-03-12 KR KR1020027012059A patent/KR100607396B1/ko active IP Right Grant
- 2001-03-12 MX MXPA02008870A patent/MXPA02008870A/es active IP Right Grant
- 2001-03-12 AU AU2001260110A patent/AU2001260110B2/en not_active Ceased
- 2001-03-12 CN CNB2006100817821A patent/CN100500692C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-03-12 DE DE50114335T patent/DE50114335D1/de not_active Expired - Fee Related
- 2001-03-12 EP EP01933682A patent/EP1268522B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-03 UA UA2002108075A patent/UA79070C2/uk unknown
-
2002
- 2002-09-10 ZA ZA200207248A patent/ZA200207248B/en unknown
- 2002-09-12 NO NO20024363A patent/NO20024363L/no not_active Application Discontinuation
- 2002-09-18 BG BG107121A patent/BG107121A/bg unknown
- 2002-10-10 HR HRP20020810 patent/HRP20020810A2/hr not_active Application Discontinuation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7732412B2 (en) | Methods of treatment using novel LHRH antagonists having improved solubility properties | |
JPH05505630A (ja) | Lhrh拮抗薬 | |
US5413990A (en) | N-terminus modified analogs of LHRH | |
US5502035A (en) | N-terminus modified analogs of LHRH | |
KR100607396B1 (ko) | 신규한 lhrh 길항제 | |
US5698522A (en) | 6-position modified decapeptide LHRH antagonists | |
EP0738154A1 (en) | N-terminus modified analogs of lhrh | |
BG64386B1 (bg) | Нови lн-rн-антагонисти с подобрено действие |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FC9A | Refused patent application |