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Verfahren zur Gewinnung von Tetracyclin
Die vorliegende Erfindung betrifft die Gewinnung von Tetracyclin durch Kultur von chlortetracyclin- bildenden Streptomycetenstämmen in Gegenwart von Chlorierungsinhibitoren, wodurch hohe Tetracyclin- ausbeuten erhalten werden.
Vor einiger Zeit wurde gefunden, dass Streptomyceten, die Chlortetracyclin bilden, auch Tetracyclin erzeugen, insbesondere dann, wenn der Chlorionengehalt des Fermentationsmediums niedrig gehalten wird. Dies kann durch Verwendung eines möglichst chloridfreien Fermentationsmediums erreicht werden, entweder indem man das Fermentationsmedium mit chlorfreien Bestandteilen zubereitet oder mit Agentien behandelt, die die Chlorionen entfernen oder komplex binden, so dass sie zur Bildung von Chlortetracyclin nicht mehr zur Verfugung stehen.
UngUnstigerweise enthalten einige der für die Gewinnung von Antibiotics der Tetracyclinreihe wirk- samsten Nährlösungsbestandteile, wie Maisquellwasser, eine beträchtliche Menge an Chlorionen, so dass zur Unterdrückung der Chlortetracyclinbildung eine Herabsetzung des Chlorionengehaltes dieser Materialien unbedingt erforderlich ist. Zu diesem Zwecke wurden bereits verschiedene Massnahmen vorgeschlagen. So stellt die Fällung der Chlorionen als Silberchlorid wohl ein wirksames Mittel zur Verminderung des Chlorionengehaltes dar, jedoch sind teurere Rohmaterialien und für die Rückgewinnung des Silbers eine besondere Anlage und ein verhältnismässig giftiges Gas, Schwefelwasserstoff, erforderlich.
Auch Ionenaustauscherharze wurden schon zur Verminderung des Chlorionengehaltes der Nährlösungen vorgeschlagen, doch werden dabei auch wichtige Salze und Bildungsstimulatoren entfernt, wodurch geringere Gesamtausbeuten an Antibiotikum erzielt werden. Ausserdem können bei diesem Verfahren nur solche Rohstoffe verwendet werden, aus denen sich die Chlorionen leicht entfernen lassen oder die von Natur aus einen geringen Chlorionengehalt aufweisen.
Ferner wurde vorgeschlagen, das Gleichgewicht bei der Bildung von Tetracyclin und Chlortetracyclin durch Zusatz von Bromden zur Nährlösung so zu verschieben, dass die Chlortetracyclinbildung bis zu einem gewissen Mass unterdrückt wird.
Die vorliegende Erfindung betrifft nun ein Verfahren, bei dem hohe Ausbeuten an Tetracyclin erzielt werden können, ohne dass die mit vielen Nachteilen verbundene Entfernung von Chlorionen aus dem System erforderlich ist. Es wurde nämlich gefunden, dass es gelingt, Tetracyclin durch Kultur von chlortetracyclinbildenden Streptomycetenstämmen in Gegenwart von Chlorierungsinhibitoren in hoher Ausbeute zu gewinnen, wenn die Fermentation in einem üblichen, Chloridionen enthaltenden Nährmedium unter Zusatz einer Verbindung der allgemeinen Formel :
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durchgeführt wird, in der X Wasserstoff oder einen Alkylrest mit 1 - 6 Kohlenstoffatomen.
Y Wasserstoff.
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<tb>
<tb> oder <SEP> AlkylrestMaismehl <SEP> 14, <SEP> 5 <SEP> g/l
<tb> Stärke <SEP> 47 <SEP> g/l
<tb> Maisquellwasser <SEP> 25 <SEP> g/1
<tb> CACAOS <SEP> 9 <SEP> g/l
<tb> (NH") <SEP> 2S0" <SEP> 5, <SEP> 6 <SEP> g/1 <SEP>
<tb> MATS04 <SEP> (70go) <SEP> 80 <SEP> mg/l
<tb> CoC. <SEP> 6 <SEP> H20 <SEP> 5 <SEP> mg/l
<tb> Schmalzöl <SEP> 3 <SEP> Vol.-%
<tb> Ammoniumchlorid <SEP> 1, <SEP> 7 <SEP> g/l
<tb>
wird auf eine entsprechende Anzahl von Kolben verteilt, worauf die einzelnen Kolben mit verschiedenen
Mengen der in der folgenden Tabelle aufgeführten Chlorierungsinhibitoren versetzt, sterilisiert, danach mit einer Impfkultur von S.
aureofaciens beimpft und auf einer Rundschüttelvorrichtung 96 Stunden bei
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5 geschütteltcyclin untersucht. Die erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengefasst.
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<tb>
<tb>
Verbindung <SEP> Teile <SEP> je <SEP> Million <SEP> Chlortetracyclin <SEP> Tetracyclin <SEP> Tetracyclin
<tb> Nährlösung <SEP> γ/ml <SEP> γ/ml <SEP> %
<tb> N-Benzoy1-dithio-0 <SEP> 4900 <SEP> 685 <SEP> 12, <SEP> 3 <SEP>
<tb> carbaminsäure- <SEP> 50 <SEP> 4950 <SEP> 850 <SEP> 14, <SEP> 6
<tb> äthylester <SEP> 100 <SEP> 4075 <SEP> 1175 <SEP> 22, <SEP> 3
<tb> 200 <SEP> 3025 <SEP> 1560 <SEP> 23, <SEP> 0
<tb> Dithioxamid <SEP> 0 <SEP> 7800 <SEP> 725 <SEP> 8, <SEP> 5 <SEP>
<tb> 50 <SEP> 6400 <SEP> 917 <SEP> 12, <SEP> 5 <SEP>
<tb> 100 <SEP> 4400 <SEP> 947 <SEP> 17, <SEP> 7 <SEP>
<tb> 200 <SEP> 1800 <SEP> 342 <SEP> 15,9
<tb> Tetramethyl- <SEP> 0 <SEP> 7800 <SEP> 725 <SEP> 8, <SEP> 5
<tb> thiurammonosulfid <SEP> 50 <SEP> 5750 <SEP> 1950 <SEP> 25,3
<tb> 100 <SEP> 4700 <SEP> 2840 <SEP> 37,4
<tb> 200 <SEP> 1925 <SEP> 3820 <SEP> 66,
<SEP> 4 <SEP>
<tb> Tetramethyl- <SEP> 0 <SEP> 7800 <SEP> 725 <SEP> 8, <SEP> 5 <SEP>
<tb> thiuramdisulfid <SEP> 50 <SEP> 6950 <SEP> 957 <SEP> 12,1
<tb> 100 <SEP> 6400 <SEP> 1225 <SEP> 16, <SEP> 0 <SEP>
<tb> 200 <SEP> 5700 <SEP> 1750 <SEP> 23, <SEP> 4
<tb> Thiuramdisulfid <SEP> 0 <SEP> 7000 <SEP> 725 <SEP> 9,3
<tb> 50 <SEP> 5150 <SEP> 1635 <SEP> 24, <SEP> 0
<tb> 100 <SEP> 4600 <SEP> 2150 <SEP> 31, <SEP> 8 <SEP>
<tb> 200 <SEP> 2475 <SEP> 2245 <SEP> 47,5
<tb> Bis- <SEP> (äthylmethyl)- <SEP> 0 <SEP> 7100 <SEP> 845 <SEP> 10,6
<tb> thiuramdisulfid <SEP> 50 <SEP> 6500 <SEP> 1195 <SEP> 15,5
<tb> 100 <SEP> 4600 <SEP> 1145 <SEP> 19, <SEP> 9 <SEP>
<tb> 200 <SEP> 1590 <SEP> 442 <SEP> 21,7
<tb> N.
<SEP> N-Dimethyl-dithio- <SEP> 0 <SEP> 7100 <SEP> 845 <SEP> 10, <SEP> 6 <SEP>
<tb> carbaminsäuremethylester <SEP> 50 <SEP> 6225 <SEP> 775 <SEP> 11, <SEP> 0
<tb> 100 <SEP> 5075 <SEP> 815 <SEP> 13, <SEP> 8
<tb> 200 <SEP> 4050 <SEP> 800 <SEP> 16,4
<tb> N-Acetyldithio- <SEP> 0 <SEP> 6550 <SEP> 925 <SEP> 12, <SEP> 3
<tb> carbaminsäurebenzylester <SEP> 50 <SEP> 5800 <SEP> 1215 <SEP> 17,3
<tb> 100 <SEP> 5300 <SEP> 1500 <SEP> 22, <SEP> 0
<tb> 200 <SEP> 4800 <SEP> 1425 <SEP> 22,8
<tb>
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<tb>
<tb> Verbindung <SEP> Teile <SEP> je <SEP> Million <SEP> Chlortetracyclin <SEP> Tetracyclin <SEP> Tetracyclin
<tb> Nährlösung <SEP> γ/ml <SEP> γ
/ml <SEP> %
<tb> N <SEP> -Acetyldithio- <SEP> 0 <SEP> 6550 <SEP> 925 <SEP> 12, <SEP> 3 <SEP>
<tb> carbaminsäure- <SEP> 50 <SEP> 6300 <SEP> 1245 <SEP> 16, <SEP> 5 <SEP>
<tb> -tert-butylester <SEP> 100 <SEP> 5750 <SEP> 1615 <SEP> 21, <SEP> 9 <SEP>
<tb> 200 <SEP> 5050 <SEP> 2195 <SEP> 30, <SEP> 3
<tb> N, <SEP> N-Dimethyldithio- <SEP> 0 <SEP> 6550 <SEP> 925 <SEP> 12, <SEP> 3 <SEP>
<tb> carbaminylessigsäure <SEP> 50 <SEP> 6000 <SEP> 970 <SEP> 13, <SEP> 9 <SEP>
<tb> 100 <SEP> 5450 <SEP> 1345 <SEP> 19, <SEP> 8 <SEP>
<tb> 200 <SEP> 5000 <SEP> 1385 <SEP> 21, <SEP> 7 <SEP>
<tb> N, <SEP> N-Dimethyldithio- <SEP> 0 <SEP> 6550 <SEP> 925 <SEP> 12, <SEP> 3 <SEP>
<tb> carbaminsäure- <SEP> 50 <SEP> 2800 <SEP> 2285 <SEP> 44, <SEP> 9 <SEP>
<tb> p-chlorbenzylester <SEP> 100 <SEP> 5050 <SEP> 1410 <SEP> 21, <SEP> 8 <SEP>
<tb> 200 <SEP> 5100 <SEP> 1225 <SEP> 19,
<SEP> 3 <SEP>
<tb> Benzoyldithio- <SEP> 0 <SEP> 6550 <SEP> 925 <SEP> 12, <SEP> 3 <SEP>
<tb> carbaminsäuremethylester <SEP> 50 <SEP> 6300 <SEP> 1185 <SEP> 15, <SEP> 8 <SEP>
<tb> 100 <SEP> 5800 <SEP> 1380 <SEP> 19, <SEP> 2 <SEP>
<tb> 200 <SEP> 3850 <SEP> 1965 <SEP> 33. <SEP> 7 <SEP>
<tb> Dithiocarbazinsäure- <SEP> 0, <SEP> 6250 <SEP> 860 <SEP> 12,0
<tb> benzylester <SEP> 5 <SEP> 6250 <SEP> 980 <SEP> 13, <SEP> 5 <SEP>
<tb> 10 <SEP> 5950 <SEP> 1165 <SEP> 16,3
<tb> 25 <SEP> 4500 <SEP> 2575 <SEP> 36, <SEP> 3 <SEP>
<tb> N <SEP> -Formyldithio- <SEP> 0 <SEP> 6250 <SEP> 860 <SEP> 12, <SEP> 0 <SEP>
<tb> carbazinsäurebenzy <SEP> lester <SEP> 5 <SEP> 480 <SEP> 5840 <SEP> 92, <SEP> 4 <SEP>
<tb> 10 <SEP> 1600 <SEP> 4870 <SEP> 75, <SEP> 2 <SEP>
<tb> 25 <SEP> 4525 <SEP> 2360 <SEP> 34, <SEP> 2 <SEP>
<tb> N-Acetyldithio- <SEP> 0 <SEP> 6750 <SEP> 835 <SEP> 11,
<SEP> 0 <SEP>
<tb> carba <SEP> zinsäurebenzylester <SEP> 5 <SEP> 1150 <SEP> 4880 <SEP> 80, <SEP> 9 <SEP>
<tb> 10 <SEP> 520 <SEP> 5100 <SEP> 90, <SEP> 7 <SEP>
<tb> 25 <SEP> 280 <SEP> 5260 <SEP> 94, <SEP> 9 <SEP>
<tb> N-Benzoyldithio-0 <SEP> 6750 <SEP> 835 <SEP> 11, <SEP> 0 <SEP>
<tb> carbazinsäurebenzylester <SEP> 5 <SEP> 530 <SEP> 5280 <SEP> 90, <SEP> 8 <SEP>
<tb> 10 <SEP> 190 <SEP> 5120 <SEP> 96, <SEP> 9 <SEP>
<tb> 25 <SEP> 45 <SEP> 1890 <SEP> 97, <SEP> 6 <SEP>
<tb>
PATENTANSPRÜCHE ;
1.
Verfahren zur Gewinnung von Tetracyclin durch Kultur von chlortetracyclinbildenden Streptomycetenstämmen in Gegenwart von Chlorierungsinhibitoren, dadurch gekennzeichnet, dass die Fermentation in einem üblichen, Chloridionen enthaltenden Nährmedium unter Zusatz einer Verbindung der allgemeinen Formel :
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**WARNUNG** Ende DESC Feld kannt Anfang CLMS uberlappen**.