AR122916A1 - Glutamato deshidrogenasa modificada y uso de la misma - Google Patents
Glutamato deshidrogenasa modificada y uso de la mismaInfo
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Abstract
La presente invención se refiere a una glutamato deshidrogenasa (GluDH) modificada. En particular la GluDH modificada de la presente invención tiene una actividad aumentada para catalizar la reacción del ácido 4-(hidroximetilfosfinil)-2-oxobutanoico (PPO) y un donante de amino para generar L-glufosinato y/o una mejorada propiedad dinámica. La presente invención también se refiere al polinucleótido que codifica la GluDH modificada de la presente invención, al vector y a la célula huésped para expresar la GluDH modificada de la presente invención y al método para producir L-glufosinato con la GluDH modificada y la célula huésped de la presente invención. Reivindicación 1: Una glutamato deshidrogenasa (GluDH) modificada que comprende, en comparación con la GluDH inicial, una combinación de sustituciones de aminoácidos seleccionada a partir de: el aminoácido en la posición 104 está sustituido con C, y el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G; el aminoácido en la posición 132 está sustituido con L, y el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G; el aminoácido en la posición 133 está sustituido con V, y el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G; el aminoácido en la posición 173 está sustituido con G o S, y el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G; el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G, y el aminoácido en la posición 181 está sustituido con K o R; el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G, y el aminoácido en la posición 182 está sustituido con R; el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G, y el aminoácido en la posición 203 está sustituido con I; el aminoácido en la posición 132 está sustituido con L, y el aminoácido en la posición 133 está sustituido con V; y el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G; el aminoácido en la posición 132 está sustituido con L, y el aminoácido en la posición 173 está sustituido con S; y el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G, el aminoácido en la posición 132 está sustituido con L, y el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G; el aminoácido en la posición 182 está sustituido con R, el aminoácido en la posición 133 está sustituido con V, y el aminoácido en la posición 173 está sustituido con G o S; y el aminoácido en la posición 182 está sustituido con R, el aminoácido en la posición 133 está sustituido con V, y el aminoácido en la posición 173 está sustituido con G o S; y el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G, el aminoácido en la posición 133 está sustituido con V, y el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G; y el aminoácido en la posición 182 está sustituido con R, el aminoácido en la posición 173 está sustituido con G, y el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G; el aminoácido en la posición 182 está sustituido con R, el aminoácido en la posición 173 está sustituido con G, y el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G; y el aminoácido en la posición 182 está sustituido con R, el aminoácido en la posición 132 está sustituido con L, y el aminoácido en la posición 133 está sustituido con V; el aminoácido en la posición 173 está sustituido con S, y el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G; el aminoácido en la posición 132 está sustituido con L, el aminoácido en la posición 133 está sustituido con V; el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G, y el aminoácido en la posición 182 está sustituido con R; el aminoácido en la posición 132 está sustituido con L, el aminoácido en la posición 173 está sustituido con S; el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G, y el aminoácido en la posición 182 está sustituido con R; el aminoácido en la posición 133 está sustituido con V, y el aminoácido en la posición 173 está sustituido con G o S; el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G, y el aminoácido en la posición 182 está sustituido con R; y el aminoácido en la posición 132 está sustituido con L, el aminoácido en la posición 133 está sustituido con V; el aminoácido en la posición 173 está sustituido con G o S, el aminoácido en la posición 175 está sustituido con G; y el aminoácido en la posición 182 está sustituido con R, en donde las posiciones están numeradas en referencia a SEQ ID Nº 1, y en donde la GluDH modificada tiene una aumentada actividad para catalizar la reacción de ácido 4-(hidroximetilfosfinil)-2-oxobutanoico (PPO) y un dador de amino para generar L-glufosinato, y/o una aumentada Vₘₐˣ, una disminuida Kₘ o una aumentada Vₘₐˣ/Kₘ, en comparación con la GluDH inicial. Reivindicación 14: Un polinucleótido que codifica la GluDH modificada de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13. Reivindicación 17: Un método para producir L-glufosinato que comprende poner en contacto la GluDH modificada de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, o la célula huésped de la reivindicación 16 con PPO.
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