KR20230031956A - 변형된 글루타메이트 탈수소효소 및 이의 용도 - Google Patents

변형된 글루타메이트 탈수소효소 및 이의 용도 Download PDF

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후난 라이어 바이오테크날러지 씨오., 엘티디.
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Abstract

본 발명은 변형된 글루타메이트 탈수소효소(GluDH)에 관한 것이다. 특히, 본 발명의 변형된 GluDH는 L-글루포시네이트를 생성하기 위한 4-(히드록시메틸포스피닐)-2-옥소부탄산(PPO) 및 아미노 공여체의 반응을 촉매화하기 위한 증가된 활성 및/또는 개선된 동적 특성을 갖는다. 본 발명은 또한 본 발명의 변형된 GluDH를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 본 발명의 변형된 GluDH를 발현하기 위한 벡터 및 숙주 세포, 및 본 발명의 변형된 GluDH 및 숙주 세포로 L-글루포시네이트를 생산하는 방법에 관한 것이다.

Description

변형된 글루타메이트 탈수소효소 및 이의 용도
본 발명은 효소 공학 분야에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 변형된 글루타메이트 데하이드로게나제(glutamate dehydrogenase) (GluDH) 및 글루포시네이트(glufosinate) 생산에서의 그의 용도에 관한 것이다.
글루포시네이트(Glufosinate) (4-[하이드록시(메틸)포스포노]-D,L-호모알라닌(4-[Hydroxy(methyl)phosphono]-D,L-homoalanine)이라고도 함)는 세계 판매 순위 2위의 제초제로 형질 전환 작물이 내성이 있다. 글루포시네이트는 L-글루타민 합성효소의 활성을 억제하여 식물의 질소 대사를 교란시켜 최종적으로 식물을 죽이는 광범위한 접촉-살상 제초제이다. 글루포시네이트는 글리포세이트(glyphosate)에 비해 광범위한 적용, 빠른 효과, 긴 지속 시간, 낮은 독성, 안전성 등과 같은 상당한 이점을 가지고 있다. 따라서, 글루포시네이트의 판매가 빠르게 증가하고 있으며, 다음 시기에 수요가 매우 많고 전망이 매우 밝다.
그러나, 글루포시네이트의 제조 공정이 복잡하여 제조 난이도가 높다. 높은 가격으로 인해 글리포세이트를 빠르게 대체할 수 없다. 현재, 상업적인 글루포시네이트는 2개의 광학 이성질체(D,L-글루포시네이트)를 동량으로 포함하는 라세미 혼합물이며, 여기서는 L-글루포시네이트만이 생물학적 활성을 띤다. 따라서, D,L-글루포시네이트의 탈라세미화에 의한 키랄성 순수 L-글루포시네이트(chiral pure L-glufosinate)의 제조는 실질적으로 중요하며 최근 L-글루포시네이트의 합성에서 대중화되고 있다.
최근에, D,L-글루포시네이트로부터 L-글루포시네이트를 제조하는 많은 방법이 보고되었다. 화학적 변형에 의한 전통적인 분리 방법은 높은 비용과 D-글루포시네이트를 사용할 수 없다는 사실 때문에 경쟁력이 없다. 현재 보고된 D-글루포시네이트-암모늄(D-glufosinate-ammonium)을 L-글루포시네이트로 전환시키는 주요하고 대표적인 기술적 경로는 다음과 같다.
D,L-글루포시네이트는 N-아세틸 글루포시네이트로 전환된 후, L-N-아세틸 글루포시네이트의 선택적 가수분해에 의해 L-글루포시네이트가 얻어지며, 이것은 카르복시펩티다아제에 의해 촉매되는 반면, D-N-아세틸 글루포시네이트는 가수분해될 수 없으며, 화학적 또는 효소적 라세미화 후 가수분해 단계로 재활용될 수 있습니다 (예를 들어, CN108690854A 참조). 이 방법의 단점은 반응의 여러 단계와 N-아세틸화 기질로부터, 가수분해로부터 얻어지는, L-글루포시네이트의 분리 필요성을 포함한다.
D-글루포시네이트는 2-카르보닐-4-(하이드록시메틸소프소노)부틸 산(2-carbonyl-4-(hydroxymethylphosphono)butyric acid) (PPO)으로 산화되고, PPO는 환원되거나 트랜스아미노화되어 L-글루포시네이트-암모늄을 생성한다. 대부분의 참고 문헌에서, D-아미노산 산화효소(DAAO)는 D-글루포시네이트의 PPO로의 산화를 촉매하는 데 사용된다. PPO는 D,L-글루포시네이트를 생성하기 위해 탄소 상의 팔라듐의 촉매 작용 하에서 포름산에 의해 환원될 수 있으므로, D,L-글루포시네이트는 DAAO의 입체선택성으로 인해 점차적으로 L-글루포시네이트로 전환될 수 있다(예를 들어, CN105567780A 참조). 이 솔루션의 단점은 많은 양의 팔라듐-탄소 촉매가 필요하고 반응을 위한 원료(예컨대, 산소 및 포름산암모늄(ammonium formate))가 낭비된다는 점이다.
PPO는 또한 L-아미노산 트랜스아미나제 (amino acid transaminase) (L-TA)에 의해 촉매되는 입체선택적 트랜스아미네이션 반응에 의해 L-글루포시네이트로 전환될 수 있다 (예를 들어, US20180030487A1 참조). 이 용액은 트랜스아미네이션(transamination) 단계가 균형잡힌 반응이라는 단점이 있으며, 높은 전환율을 달성하기 위해서는 아미노 공여체(아미노산 또는 유기 아민)를 과량 공급(예를 들어, 아미노 공여체 3당량 제공 시 전환율 90%)해야 하며, 과도한 양의 아미노 공여체 및 해당 부산물은 후속 분리 및 정제 단계에 심각한 영향을 미친다.
또한, PPO는 L-아미노산 탈수소효소(L-AADH)에 의해 촉매되는 입체선택적 환원 반응을 통해 L-글루포시네이트로 전환될 수 있으며, NAD(P)H 사이클 컨슈밍 포르메이트(NAD(P)H cycle consuming formate), 포도당 또는 단순 알코올의 도움으로 아미노 공여체로서 무기 암모늄 염을 사용한다. L-AADH에 의해 촉매되는 반응은 과도한 수소 공여체를 많이 필요로 하지 않으며 높은 전환율을 달성할 수 있다.
L-글루포시네이트를 제조하기 위해 PPO의 비대칭 환원적 아미네이션을 촉매하기 위해 천연 또는 변형된 글루타메이트 탈수소효소(GluDH)를 이용하는 것으로 보고되었다 (예를 들어, CN107630052B, CN106978453B, CN108588045B 및 CN109609474A 참조).
그러나, PPO와 아미노 공여체의 반응을 촉매화하여 L-글루포시네이트를 생성하기 위한 증가된 활성 및/또는 개선된 동적 특성을 갖는 GluDH를 제공하는 것이 당업계에서 여전히 요구된다 (예를 들어, 증가된 Vmax 값, 감소된 Km 값 또는 증가된 Vmax/Km).
제1 양태에서, 본 발명은 개시 GluDH와 비교하여 2개 이상의 위치에서 아미노산의 치환을 포함하는 변형된 글루타메이트 탈수소효소를 제공하고, 상기 변형된 GluDH는 PPO와 아미노 공여체의 반응을 촉매화하여 L-글루포시네이트를 생성하기 위한 증가된 활성을 갖고/하거나 개선된 동적 특성(예를 들어, 증가된 Vmax, 감소된 Km 또는 증가된 Vmax/Km)을 갖는다.
일부 실시양태에서, 상기 변형된 GluDH는 개시 GluDH와 비교하여 하기로부터 선택된 아미노산 치환의 조합을 포함한다:
제104 부위의 아미노산이 C로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제181 부위의 아미노산이 K 또는 R로 치환되고;
제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제203 부위의 아미노산이 I로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 175 아미노산이 G로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제173 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되는 것으로부터 선택된 아미노산의 치환의 조합을 포함하며;
여기서, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다.
일부 실시양태에서, 상기 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제173, 175 및 182 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 일부 실시양태에서, 제173 부위의 아미노산은 G로 치환된다. 바람직하게는 제175 부위의 아미노산이 G로 치환된다.바람직하게는 제182 부위의 아미노산이 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 상기 변형된 GluDH는 제9, 22, 23, 25, 31, 56, 124, 143, 199, 216, 242, 263, 339, 420, 431 및 437 부위로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 아미노산의 치환을 추가로 포함한다. 바람직하게는, 제9 부위의 아미노산은 S, L 또는 Y로 치환된다. 바람직하게는 제22 부위의 아미노산이 W 또는 E로 치환된다. 바람직하게는 제23 부위의 아미노산이 M으로 치환된다. 바람직하게는 제25 부위의 아미노산이 D로 치환된다. 바람직하게는 제31 부위의 아미노산이 H로 치환된다. 바람직하게는 제56 부위의 아미노산이 Q로 치환된다. 바람직하게는 제124 부위의 아미노산이 L로 치환된다. 바람직하게는 제143 부위의 아미노산이 E로 치환된다. 바람직하게는 제199 부위의 아미노산이 W 또는 Y로 치환된다. 바람직하게는 제216 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 바람직하게는 제263 부위의 아미노산이 S로 치환되고, 제339 부위의 아미노산이 Q로 치환된다. 바람직하게는 제420 부위의 아미노산이 R로 치환된다. 바람직하게는 제431 부위의 아미노산이 S로 치환된다. 바람직하게는 제437 부위의 아미노산이 K로 치환된다.
일부 실시양태에서, 상기 변형된 GluDH는 제22, 56, 173, 175, 182, 199 및 420 부위에서 아미노산의 치환을 포함한다. 바람직하게는 제22 부위의 아미노산이 E로 치환된다. 바람직하게는 제56 부위의 아미노산이 Q로 치환된다. 바람직하게는 제173 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 바람직하게는 제175 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 바람직하게는 제182 부위의 아미노산이 R로 치환된다. 바람직하게는 제199 부위의 아미노산이 Y로 치환된다. 바람직하게는 제420 부위의 아미노산이 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 상기 변형된 GluDH는 제31, 124 및 216 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 아미노산의 치환을 추가로 포함한다. 바람직하게는 제31 부위의 아미노산이 H로 치환된다. 바람직하게는 제124 부위의 아미노산이 L로 치환된다. 바람직하게는 제216 부위의 아미노산이 G로 치환된다.
일부 실시양태에서, 개시 GluDH는 야생형 GluDH이다. 일부 실시양태에서, 상기 개시 GluDH는 바실러스과(Bacillaceae)의 미생물, 바람직하게는 리시니바실러스(Lysinibacillus) 또는 바실러스(Bacillus) 속의 미생물, 보다 바람직하게는 리시니바실러스 스파에리쿠스(Lysinibacillus sphaericus)) 또는 바실러스 벨레젠시스(Bacillus velezensis)로부터 유래된다. 바람직한 실시양태에서, 상기 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 변형된 GluDH는 서열번호 4-14, 16-19, 21, 22, 24, 25, 27-30, 32-48, 50, 51 및 53-72 중 하나의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, L-글루포시네이트를 생성하기 위한 PPO 및 아미노 공여체의 반응을 촉매화하기 위한 변형된 GluDH의 활성은 반응을 촉매화하기 위한 서열번호 3의 활성의 적어도 100%, 105%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 160%, 170%, 180%, 190%, 200% 이상이다.
제2 양태에서, 본 발명은 본 발명의 변형된 GluDH를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다.
제3 양태에서, 본 발명은 본 발명의 변형된 GluDH, 이의 코딩 폴리뉴클레오티드 또는 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
제4 양태에서, 본 발명은 본 발명의 변형된 GluDH 또는 본 발명의 숙주 세포를 PPO와 접촉시키는 단계 포함하는 L-글루포시네이트의 생산 방법을 제공한다.
본 발명은 주로 PPO와 아미노 공여체의 반응을 촉매하여 L-글루포시네이트를 생성하기 위한 변형된 GluDH에 관한 것이다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에서 사용된 용어는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 갖는다.
I. 변형된 글루타메이트 탈수소효소(glutamate dehydrogenase)
본원에서 사용되는 바와 같이, 상기 용어 "글루타메이트 탈수소효소(glutamate dehydrogenase)" 및 "GluDH"는 글루타메이트의 탈수소화를 촉매하여 α-케토글루타레이트를 생성하는 효소를 의미한다. 게다가, GluDH는 PPO와 아미노 공여체의 반응을 촉매하여 L-글루포시네이트를 생성하는 활성을 갖는다. 본 발명은 PPO와 아미노 공여체의 반응을 촉매화하여 L-글루포시네이트를 생성하기 위한 증가된 활성 및/또는 증가된 Vmax 값, 감소된 Km 값 또는 증가된 Vmax/Km을 포함하지만 이에 제한되지 않는 개선된 동적 특성을 갖는 변형된 GluDH 폴리펩티드를 제공한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 상기 용어 "펩티드(peptide)"는 펩티드 결합에 의해 연결된 적어도 2개 이상의 아미노산을 포함하는 사슬을 의미한다. 상기 용어 "폴리펩티드(polypeptide)"는 "단백질(protein)"로 교환될 수 있고, 10개 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 사슬을 의미한다. 본원의 모든 펩티드 및 폴리펩티드의 화학식 또는 서열은 아미노 말단에서 카르복실 말단으로의 방향을 나타내는 왼쪽에서 오른쪽 순서로 기록된다.
상기 용어 "아미노산(amino acid)"은 단백질에서 자연적으로 발생하는 아미노산과 비-천연 아미노산을 포함한다. 단백질에서 자연적으로 발생하는 아미노산의 통상적인 명명법(한 글자 및 세 글자)이 사용되며, 이는 Sambrook, et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd, ed. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989)에서 볼 수 있다.
Amino acid One-letter Three-letter
알라닌(Alanine) A Ala
아르기닌(Arginine) R Arg
아스파라긴(Asparagine) N Asn
아스파르트산(Aspartic acid) D Asp
시스테인(Cysteine) C Cys
글루타민(Glutamine) Q Gln
글루탐산(Glutamic acid) E Glu
글리신(Glycine) G Gly
히스티딘(Histidine) H His
이소류신(Isoleucine) I Ile
류신(Leucine) L Leu
리신(Lysine) K Lys
메티오닌(Methionine) M Met
페닐알라닌(Phenylalanine) F Phe
프롤린(Proline) P Pro
세린(Serine) S Ser
트레오닌(Threonine) T Thr
트립토판(Tryptophan) W Trp
티로신(Tyrosine) Y Tyr
발린(Valine) V Val
본원에서 사용되는 바와 같이, 상기 용어 "변형(modification)"은 폴리펩티드에 대한 임의의 변형, 예를 들어 아미노산(들)의 치환, 결실, 삽입 및/또는 첨가를 의미한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 2개 이상의 부위에서 아미노산의 치환을 포함하고, 여기서 변형된 GluDH는 L-글루포시네이트를 생성하기 위해 PPO와 아미노 공여체의 반응을 촉매화하기 위한 증가된 활성 및/또는 증가된 Vmax 값, 감소된 Km 값 또는 증가된 Vmax/km를 포함하지만 이에 제한되지 않는 개선된 동적 특성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 상기 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 다음과 같은 아미노산 치환 조합을 갖는다:
제104 부위의 아미노산이 C로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제181 부위의 아미노산이 K 또는 R로 치환되고;
제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제203 부위의 아미노산이 I로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제173 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되며,
상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제132 및 175 부위의 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 133, 173, 181 및 182 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제133 부위의 아미노산은 V로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제173 부위의 아미노산은 G 또는 S로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제182 부위 아미노산은 R로 치환된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제133 및 175 부위의 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 132, 173, 181 및 182 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제132 부위의 아미노산은 L로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제173 부위의 아미노산은 G 또는 S로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제182 부위의 아미노산은 R로 치환된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제173 및 175 부위의 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 132, 133, 181 및 182 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제132 부위의 아미노산은 L로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제133 부위의 아미노산은 V로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제182 부위의 아미노산은 R로 치환된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제175 및 182 부위의 치환을 포함하며, 여기서 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 132, 133, 173 및 181 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제132 부위의 아미노산은 L로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제133 부위의 아미노산은 V로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제173 부위의 아미노산은 G 또는 S로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제132, 133 및 175 부위의 치환을 포함하며, 여기서 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는, 제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 173, 181 및 182 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제173 부위의 아미노산은 G 또는 S로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제182 부위의 아미노산은 R로 치환된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제132, 173 및 175 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 133, 181 및 182 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제133 부위의 아미노산은 V로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제182 부위의 아미노산은 R로 치환된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제133, 173 및 175 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 132, 181 및 182 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제132 부위의 아미노산은 L로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제182 부위의 아미노산은 R로 치환된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제132, 175 및 182 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 133, 173 및 181 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제133 부위의 아미노산은 V로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제173 부위의 아미노산은 G 또는 S로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제133, 175 및 182 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 132, 173 및 181 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제132 부위의 아미노산은 L로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제173 부위의 아미노산은 G 또는 S로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제173, 175 및 182 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 132, 133 및 181 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제132 부위의 아미노산은 L로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제133 부위의 아미노산은 V로 치환된다. 일부 실시양태에서, 181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다.
아미노산의 변형이 수행되는 기초가 되는 GluDH 폴리펩티드는 본원에서 개시 GluDH를 의미한다. 상기 개시 GluDH는 야생형 GluDH일 수 있고, 또한 야생형 GluDH의 변형일 수 있다. 예를 들어, 서열번호 1의 폴리펩티드에 기초하여 변형이 개시된다면, 서열번호 1의 폴리펩티드는 변형된 GluDH에 대해 "개시 GluDH(initiate GluDH)"이고; 상기 변형이 서열번호 1의 변이체 폴리펩티드(예를 들어, 서열번호 3-30)에 기초하여 개시된다면, 상기 변이체 폴리펩티드는 변형된 GluDH에 대해 "개시 GluDH(initiate GluDH)"이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "야생형 GluDH(wild-type GluDH)"는 천연 발생 GluDH를 의미한다. 일부 실시양태에서, 상기 개시 GluDH는 바실러스과(Bacillaceae)의 미생물로부터 유래된 GluDH이다. 일부 실시양태에서, 상기 야생형 GluDH는 리시니바실러스(Lysinibacillus) 또는 바실러스(Bacillus) 속의 미생물로부터의 GluDH이다. 바람직하게는, 야생형 GluDH는 리시니바실러스 스파에리쿠스(Lysinibacillus sphaericus)로부터의 GLuDH(서열번호 2) 또는 바실러스 벨레젠시스(Bacillus velezensis)로부터의 GluDH(서열번호 1)이다.
본 발명의 경우, 2개의 아미노산 서열 또는 2개의 핵산 서열 사이의 동일성 백분율을 결정하기 위해, 최적의 비교를 위해 서열을 정렬한다 (예를 들어, 갭(gap)은 제2 아미노산 또는 핵산 서열과의 최적 정렬을 위해 제1 아미노산 또는 핵산 서열에 도입될 수 있다). 그런 다음 상응하는 아미노산 부위 또는 뉴클레오티드 부위의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 비교한다. 첫 번째 서열의 부위가 두 번째 서열의 상응하는 부위에서 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드에 의해 점유될 때, 이들 분자는 이 부위에서 동일하다. 2개의 서열 사이의 백분율 동일성은 서열이 공유하는 동일한 부위의 수의 함수이다 (즉, 백분율 동일성(percentage identity) = 동일한 부위의 수(number of identical positions)/전체 부위의 수(total number of positions) (즉, 중첩 부위(overlapping positions))×100) 바람직하게는, 상기 2개의 서열은 길이가 동일하다.
당업자는 다양한 컴퓨터 프로그램을 사용하여 2개의 서열 간의 동일성을 결정할 수 있음을 알고 있다.
"아미노산 동일성 백분율(Amino acid identity percentage)" 또는 "아미노산 서열 동일성 백분율(amino acid sequence identity percentage)"은 두 폴리펩티드의 아미노산 사이의 비교를 의미하며, 최적으로 정렬되었을 때, 상기 두 개의 폴리펩티드는 대략적으로 지정된 백분율의 동일한 아미노산을 갖는다. 예를 들어, "95% 아미노산 동일성(95% amino acid identity)"은 두 폴리펩티드의 아미노산 사이의 비교를 의미하며, 최적으로 정렬되었을 때, 두 폴리펩티드의 아미노산 중 95%가 동일하다.
일부 실시양태에서, 상기 야생형 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 79% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상, 및 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 상기 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 다음과 같은 아미노산 치환 조합을 갖는다:
제104 부위의 아미노산이 C로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제181 부위의 아미노산이 K 또는 R로 치환되고;
제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제203 부위의 아미노산이 I로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제173 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고; 및
제132 부위의 아미노산이 L로 치환, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고,
상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는, 상기 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 70% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상이며, 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제132 및 175 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 133, 173, 181 및 182 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제133 부위의 아미노산은 V로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제173 부위의 아미노산은 G 또는 S로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제182 부위의 아미노산은 R로 치환된다. 바람직하게는, 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 70% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상, 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이상의 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제133 및 175 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 132, 173, 181 및 제182 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제132 부위의 아미노산은 L로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제173 부위의 아미노산은 G 또는 S로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제182 부위의 아미노산은 R로 치환된다. 바람직하게는, 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 70% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상, 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이상의 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제173 및 175 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 132, 133, 181 및 182 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제132 부위의 아미노산은 L로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제133 부위의 아미노산은 V로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제182 부위의 아미노산은 R로 치환된다. 바람직하게는, 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 70% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상, 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이상의 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제175 및 182 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 182 부위의 아미노산이 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 132, 133, 173 및 181 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제132 부위의 아미노산은 L로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제133 부위의 아미노산은 V로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제173 부위의 아미노산은 G 또는 S로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 바람직하게는, 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 70% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상, 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이상의 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제132, 133 및 175 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 173, 181 및 182 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제173 부위의 아미노산은 G 또는 S로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제182 부위의 아미노산은 R로 치환된다. 바람직하게는, 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 70% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상, 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이상의 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제132, 173 및 175 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 133, 181 및 182 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제133 부위의 아미노산은 V로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제182 부위의 아미노산은 R로 치환된다. 바람직하게는, 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 70% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상, 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이상의 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제133, 173 및 175 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 132, 181 및 182 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제132 부위의 아미노산은 L로 치환된다. 일부 실시양태에서, 181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제182 부위의 아미노산은 R로 치환된다. 바람직하게는, 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 70% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상, 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이상의 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제132, 175 및 182 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 133, 173 및 181 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제133 부위의 아미노산은 V로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제173 부위의 아미노산은 G 또는 S로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 바람직하게는, 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 70% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상, 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이상의 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제133, 175 및 182 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 132, 173 및 181 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제132 부위의 아미노산은 L로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제173 부위의 아미노산은 G 또는 S로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 바람직하게는, 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 70% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상, 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이상의 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제173, 175 및 182 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제104, 132, 133 및 181 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제104 부위의 아미노산은 C로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제132 부위의 아미노산은 L로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제133 부위의 아미노산은 V로 치환된다. 일부 실시양태에서, 제181 부위의 아미노산은 K 또는 R로 치환된다. 바람직하게는, 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 70% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상, 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이상의 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 변형된 GluDH는 그의 개시 GluDH와 비교하여 제173, 175 및 182 부위에서 치환을 포함하며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨진다. 바람직하게는 제173 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위 아미노산이 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 변형된 GluDH는 제9, 22, 23, 25, 31, 56, 124, 143, 199, 216, 242, 263, 339, 420, 431 및 437 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 아미노산의 치환을 추가로 포함한다. 바람직하게는, 제9 부위의 아미노산은 S, L 또는 Y로 치환된다. 바람직하게는 제22 부위의 아미노산이 W 또는 E로 치환된다. 바람직하게는 제23 부위의 아미노산이 M으로 치환된다. 바람직하게는 제25 부위의 아미노산이 D로 치환된다. 바람직하게는 제31 부위의 아미노산이 H로 치환된다. 바람직하게는 제56 부위의 아미노산이 Q로 치환된다. 바람직하게는 제124 부위의 아미노산이 L로 치환된다. 바람직하게는 제143 부위의 아미노산이 E로 치환된다. 바람직하게는 제199 부위의 아미노산이 W 또는 Y로 치환된다. 바람직하게는 제216 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 바람직하게는 제263 부위의 아미노산이 S로 치환되고, 제339 부위의 아미노산이 Q로 치환된다. 바람직하게는 제420 부위의 아미노산이 R로 치환된다. 바람직하게는 제431 부위의 아미노산이 S로 치환된다. 바람직하게는 제437 부위의 아미노산이 K로 치환된다. 바람직하게는, 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 70% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상, 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이상의 서열 동일성을 갖는다. 예를 들어, 상기 개시 GluDH는 서열번호 1을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 변형된 GluDH는 제22, 56, 173, 175, 182, 199 및 420 부위에서 아미노산의 치환을 포함한다. 바람직하게는 제22 부위의 아미노산이 E로 치환된다. 바람직하게는 제56 부위의 아미노산이 Q로 치환된다. 바람직하게는 제173 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 바람직하게는 제175 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 바람직하게는 제182 부위의 아미노산이 R로 치환된다. 바람직하게는 제199 부위의 아미노산이 Y로 치환된다. 바람직하게는 제420 부위의 아미노산이 R로 치환된다. 일부 실시양태에서, 변형된 GluDH는 제31, 124 및 216 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 아미노산의 치환을 추가로 포함한다. 바람직하게는 제31 부위의 아미노산이 H로 치환된다. 바람직하게는 제124 부위의 아미노산이 L로 치환된다. 바람직하게는 제216 부위의 아미노산이 G로 치환된다. 바람직하게는, 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 70% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상, 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이상의 서열 동일성을 갖는다. 예를 들어, 상기 개시 GluDH는 서열번호 1을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 70% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상, 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 개시 GluDH는 하나 이상의 아미노산의 치환, 결실, 삽입 및/또는 추가를 포함한다는 점에서 서열번호 1 또는 2와 상이하다. 일부 실시양태에서, 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 비교하여 하나 이상의 아미노산의 보존된 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 비교하여 하나 이상의 아미노산의 삽입 또는 결실을 포함한다.
상기 용어 "보존된 치환(conserved substitution)"은 또한 "상동성(homologous)" 아미노산 잔기에 의한 치환을 의미하며, 이는 아미노산이 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기, 예를 들어, 염기성 측쇄가 있는 아미노산(예를 들어, 라이신(lysine), 아르기닌(arginine) 및 히스티딘(histidine)), 산성 측쇄가 있는 아미노산(예를 들어, 아스파르트산(aspartic acid), 글루탐산(glutamic acid)), 비-전하 극성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 글리신(glycine), 아스파라긴(asparagine), 글루타민(glutamine), 세린(serine), 트레오닌(threonine), 티로신(tyrosine), 시스테인(cysteine)), 비-극성 측쇄가 있는 아미노산(예를 들어, 알라닌(alanine), 발린(valine), 류신(leucine), 이소류신(isoleucine), 프롤린(proline), 페닐알라닌(phenylalanine), 메티오닌(methionine), 트립토판(tryptophan)), 베타-분지된 측쇄가 있는 아미노산(예를 들어, 트레오닌(threonine), 발린(valine), 이소류신(isoleucine)) 및 방향족 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 티로신(tyrosine), 페닐알라닌(phenylalanine), 트립토판(tryptophan), 히스티딘(histidine))으로 대체되는 치환을 의미한다.
일반적으로, 아미노산의 보존된 치환은 얻어진 단백질의 활성에 최소한의 영향을 미친다. 이러한 대체는 하기에 설명되어 있다. 보존적 치환은 아미노산을 크기, 소수성, 전하, 극성, 공간적 특성 및 방향성이 유사한 아미노산으로 대체하는 것이다. 단백질의 특성을 정확하게 조절하려는 경우 일반적으로 치환이 보존된다.
본원에서 사용되는 "상동성(homologous)" 아미노산 잔기는 소수성, 전하, 극성, 입체적 특성, 방향족 특성 등과 관련된 유사한 화학적 특성을 갖는 아미노산 잔기를 의미한다.
서로 상동인 아미노산의 예로는 라이신, 아르기닌 및 히스티딘, 양전하를 띄는 아미노산; 글루탐산과 아스파르트산, 음전하를 띄는 아미노산. 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린 및 페닐알라닌, 소수성인 아미노산; 세린, 트레오닌, 시스테인, 메티오닌, 트립토판, 티로신, 아스파라긴, 글루타민, 극성인 아미노산; 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 방향족인 아미노산; 세린과 트레오닌, 또는 글루타민과 아스파라긴, 또는 류신과 이소류신이 있으며, 이는 화학적으로 유사한 측쇄 그룹을 가지고 있다.
단백질에서 보존적 아미노산 치환의 실시예는 다음과 같다: Ala는 Ser로 치환되고, Arg는 Lys로 치환되고, Asn은 Gln 또는 His로 치환되고, Asp는 Glu로 치환되고, Cys는 Ser로 치환되고, Gln은 Asn으로 치환되고, Glu는 Asp로 치환되고, Gly는 Pro로 대체되고, His는 Asn 또는 Gln으로 치환되고,Ile은 Leu 또는 Val로 치환되고, Leu는 Ile 또는 Val로 치환되고, Lys는 Arg 또는 Gln으로 치환되고, Met는 Leu 또는 Ile로 치환되고, Phe는 Met, Leu 또는 Tyr으로 치환되고, Ser은 Thr로 치환되고, Thr은 Ser로 치환되고, Trp는 Tyr으로 치환되고, Tyr는 Trp 또는 Phe로 치환되고, Val은 Ile 또는 Leu로 치환된다.
일부 실시양태에서, 상기 변형된 GluDH는 서열번호 4-14, 16-19, 21, 22, 24, 25, 27-30, 32-48, 50, 51 및 53-72 중 하나를 포함하거나 이로 이루어지거나, 또는 상기 변형된 GluDH는 서열번호 4-14, 16-19, 21, 22, 24, 25, 27-30, 32-48, 50, 51 및 53-72 중 하나와 비교하여 1-10개 아미노산의 치환(예를 들어, 보존된 치환)을 포함하며, 상기 치환은 제9, 22, 23, 25, 31, 56, 104, 124, 132, 133, 143, 173, 175, 181, 182, 199, 203, 216, 242, 263, 339, 420, 431 및 437 부위 이외의 부위에 있으며, 상기 변형된 GluDH는 그것의 개시 GluDH와 비교하여, L-글루포시네이트를 생성하기 위해 PPO와 아미노 공여체의 반응을 촉매화하기 위한 증가된 활성을 갖고/갖거나 향상된 동적 특성, 예를 들어 증가된 Vmax, 감소된 Km 또는 증가된 Vmax/Km을 갖는다. 일부 실시양태에서, 상기 변형된 GluDH는 서열번호 4-14, 16-19, 21, 22, 24, 25, 27-30, 32-48, 50, 51 및 53-72 중 하나와 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산의 치환(예를 들어, 보존된 치환)을 포함하며, 상기 치환은 제9, 22, 23, 25, 31, 56, 104, 124, 132, 133, 143, 173, 175, 181, 182, 199, 203, 216, 242, 263, 339, 420, 431 및 437 부위 이외의 부위에 있다. 일부 실시양태에서, 상기 변형된 GluDH는 서열번호 1 또는 2와 적어도 65% 또는 70% 이상, 바람직하게는 적어도 75% 또는 80% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 85% 또는 90% 이상, 특히 바람직하게는 적어도 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%이상의 서열 동일성을 갖는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 효소의 활성은 특정 조건 하에서 단위 질량의 효소에 의해 촉매되는 화학 반응에서 기질의 감소 또는 단위 시간당 생성물의 증가를 의미한다. 예를 들어, 본 발명의 변형된 GluDH의 활성은 특정 조건 하에서 변형된 GluDH의 단위 질량의 촉매작용 하에 단위 시간당 PPO의 감소 또는 L-글루포시네이트의 증가량으로 표현될 수 있다.
본원에서 효소의 활성은 또한 동일한 반응을 촉매하는 주어진 효소의 활성에 대한 관심 있는 효소의 활성의 비율, 예컨대 백분율 상대 활성으로 표현되는 효소의 상대적 활성을 나타낼 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH의 활성은 서열번호 3과 비교하여 백분율 상대 활성으로 표현된다. 일부 실시양태에서, L-글루포시네이트를 생성하기 위한 PPO와 아미노 공여체의 반응을 촉매화하는 변형된 GluDH의 활성은 반응을 촉매화하는 서열번호 3의 활성의 적어도 100%, 105%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 160%, 170%, 180%, 190%, 200% 이상이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 변형된 GluDH의 활성은 서열번호 31과 비교하여 백분율 상대 활성으로 표현된다. 일부 실시양태에서, L-글루포시네이트를 생성하기 위한 PPO와 아미노 공여체의 반응을 촉매화하는 변형된 GluDH의 활성은 반응을 촉매화하는 서열번호 31의 활성의 적어도 100%, 105%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 160%, 170%, 180%, 190%, 200% 이상이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "아미노 공여체(amino donor)"는 무기 화합물 및 유기 화합물을 포함하는 아미노기를 제공하는 화합물을 의미한다. "아미노 공여체(amino donor)"는 암모늄 염(예를 들어, NH4Cl, NH4NO3, (NH4)2SO4, 암모늄 아세테이트(ammonium acetate) 등), 아미노산 또는 유기 아민을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 상기 아미노 공여체는 암모늄 염, 예를 들어 NH4Cl이다.
효소의 활성 외에도 생산 시 동적 특성을 고려해야 한다. 본원에서 효소의 동적 특성은, 상기 효소의 Vmax, Km 및 Vmax/Km을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본원에서 향상된 동적 특성은 증가된 Vmax, 감소된 Km 및 증가된 Vmax/Km을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "Vmax"는 특정 농도의 효소로 달성될 수 있는 반응을 촉매하는 최대 속도를 의미한다. 특히, 효소의 농도가 일정한 조건 하에서 기질의 농도가 일정 범위 내에 있을 때 일반적으로 기질의 농도가 증가함에 따라 반응 속도가 증가하지만; 반응 속도는 기질의 농도가 특정 값에 도달하면 최대 값에 도달하고 기질 농도가 증가해도 반응 속도는 증가하지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "Km"은 특정 농도의 효소에 의해 반응 속도가 촉매 작용 최대 속도의 절반, 즉 Vmax에 도달하는 기질의 농도를 의미한다.
II. 변형된 GluDH를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드
본원에서 사용되는 바와 같이, 상기 용어 "폴리뉴클레오티드(polynucleotide)" 또는 "핵산 분자(nucleic acid molecule)"는 DNA 분자(예를 들어, cDNA 또는 게놈 DNA) 및 RNA 분자(예를 들어, mRNA) 및 뉴클레오티드 유사체를 사용하여 생산된 DNA 또는 RNA의 유사체를 포함한다. 상기 핵산 분자는 단일 가닥 또는 이중 가닥, 바람직하게는 이중 가닥 DNA일 수 있다. 상기 핵산의 합성은 뉴클레오티드 유사체 또는 유도체(예를 들어, 이노신(inosine) 또는 포스포로티오에이트 뉴클레오티드(phosphorothioate nucleotides))를 사용할 수 있다. 이러한 뉴클레오티드는, 예를 들어 변경된 염기쌍 형성 능력 또는 증가된 뉴클레아제 저항성을 갖는 핵산을 제조하는 데 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 변형된 GluDH를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 따라서, 본 발명에서, 상기 용어 변형(modification)은 본 발명의 GluDH 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 유전적 조작도 포함한다. 상기 변형은 하나 이상의 뉴클레오티드의 치환, 결실, 삽입 및/또는 첨가일 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 상기 용어 "인코딩(encoding)"은 폴리뉴클레오티드가 그 단백질 생성물의 아미노산 서열을 직접 지정한다는 것을 의미한다. 상기 코딩 서열의 경계는 일반적으로 오픈 리딩 프레임(open reading frame)에 의해 결정되며, 이는 일반적으로 ATG 시작 코돈 또는 GTG 및 TTG와 같은 다른 시작 코돈으로 시작하고 TAA, TAG 및 TGA와 같은 정지 코돈으로 끝난다. 상기 코딩 서열은 DNA, cDNA 또는 재조합 뉴클레오티드 서열일 수 있다.
또한, 본 발명의 핵산 서열의 전부 또는 일부를 덮고 있는 핵산 분자는 상기 서열에 포함된 서열 정보에 기초하여 설계되고 합성된 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하여 PCR(Polymerase Chain Reaction)에 의해 분리될 수 있다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 표준 PCR 증폭 기술에 따라 주형 및 적합한 올리고뉴클레오티드 프라이머로서 cDNA, mRNA 또는 게놈 DNA로 증폭될 수 있다. 상기와 같이 증폭된 핵산은 적합한 벡터로 클로닝되고 DNA 서열 분석에 의해 특성화될 수 있다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 표준 합성 기술, 예를 들어 자동 DNA 합성기를 사용하여 제조할 수 있다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 핵산 분자의 상보적 가닥에 관한 것이다. 다른 뉴클레오티드 서열에 상보적인 핵산 분자는 다른 뉴클레오티드 서열과 혼성화하여 안정한 듀플렉스(duplex)를 형성할 수 있도록 뉴클레오티드 서열에 충분히 상보적인 분자이다.
본원에서 사용되된 바와 같이, 상기 용어 "혼성화(hybridization)"는 서로 적어도 90% 이상, 바람직하게는 적어도 95% 이상, 보다 바람직하게는 적어도 96% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상 상동성인 뉴클레오티드 서이며, 전형적으로 주어진 엄격한 혼성화 및 세척 조건 하에서 서로 혼성화를 유지한다.
당업자는 엄격한 혼성화 조건 및 매우 엄격한 혼성화 조건과 같은 다양한 혼성화 조건을 알고 있다. 예를 들어, Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, N.Y.; and Ausubel et al. (eds.), 1995, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y.를 참조한다.
물론, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 폴리 A 서열(예를 들어, mRNA의 3' 말단 폴리(A)) 또는 폴리 T(또는 U) 잔기의 상보적 스트레치(stretch)에만 혼성화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하지 않는다.
III. 변형된 GluDH의 발현 및 생산
본 발명의 변형된 GluDH를 발현하기 위해, 또한 발현 벡터와 같은 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 구조물 및 벡터가 제공된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 상기 용어 "발현(expression)"은 전사, 전사-후 변형, 번역, 번역-후 변형 및 분비를 포함하나 이에 제한되지 않는 폴리펩티드의 생성에 관여하는 임의의 단계를 포함한다.
상기 용어 "핵산 구조(nucleic acid construct)"는 자연적으로 발생한 유전자로부터 분리되거나 자연적으로 발생하지 않는 핵산 세그먼트를 포함하도록 변형된 단일 가닥 또는 이중 가닥 핵산 분자를 의미한다. 상기 핵산 구조가 본 발명의 코딩 서열을 발현하는데 필요한 제어 서열(control sequence)을 포함하는 경우, 상기 용어 핵산 구조는 상기 용어 "발현 카세트(expression cassette)"와 동의어이다.
상기 용어 "발현 벡터(expression vector)"는 본원에서 폴리뉴클레오티드의 발현을 위해 제공된 추가 뉴클레오티드, 예를 들어 제어 서열에 작동가능하게 연결된 본 발명의 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 선형 또는 원형 DNA 분자를 의미한다. 상기 발현 벡터는 바이러스 벡터 또는 플라스미드 벡터를 포함한다.
본원에서 상디 용어 "제어 서열(control sequence)"은 본 발명의 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현에 필요하거나 유익한 모든 요소를 포함한다. 각각의 제어 서열은 폴리펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열에 대해 천연 또는 외래이거나, 또는 서로에 대해 천연 또는 외래일 수 있다. 이러한 제어 서열은 리더 서열(leader sequence), 폴리아데닐화 서열(polyadenylation sequence), 프로펩티드 서열(propeptide sequence), 프로모터(promoter), 신호 펩티드 서열(signal peptide sequence) 및 전사 터미네이터(transcription terminator)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 제어 서열은 최소한 전사 및 번역 종료를 위한 프로모터 및 신호를 포함한다.
예를 들어, 상기 제어 서열은 적합한 프로모터 서열, 숙주 세포에 의해 인식되어 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 발현하는 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 상기 프로모터 서열은 폴리펩티드의 발현을 매개하는 전사 제어 서열을 함유한다. 상기 프로모터는 선택된 숙주 세포에서 전사 활성을 나타내는 임의의 뉴클레오티드 서열, 예를 들어 대장균(E. coli)의 lac 오페론(operon)일 수 있다. 상기 프로모터는 또한 돌연변이, 절단 및 혼성 프로모터를 포함하고, 숙주 세포에 동종 또는 이종인 세포외 또는 세포내 폴리펩티드를 인코딩하는 유전자로부터 수득될 수 있다.
본원에서 상기 용어 "작동 가능하게 연결된(operably linked)"은 제어 서열이 폴리뉴클레오티드 서열의 코딩 서열에 대해 적절한 부위에 배치된 구성을 의미하며, 상기 제어 서열은 폴리펩티드 코딩 서열의 발현을 지시한다.
본 발명의 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 폴리펩티드의 발현을 허용하기 위해 다양한 조작에 적용될 수 있다. 벡터에 삽입하기 전에, 발현 벡터에 따른 폴리뉴클레오티드의 조작이 바람직하거나 필요하다. 재조합 DNA 방법으로 폴리뉴클레오티드 서열을 변형시키는 기술은 당업계에 잘 알려져 있다.
본 발명의 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 확인 및 선택하기 위하여, 본 발명의 벡터는 바람직하게는 형질전환, 형질감염, 형질도입 등의 세포를 간단하게 선택할 수 있는 하나 이상의 선택가능한 마커를 포함한다. 선택 가능한 마커는 제품이 살생물제(biocide) 또는 바이러스 내성, 중금속 내성, 보조 영양요구체 등을 제공하는 유전자이다. 예를 들어, 상기 박테리아 선별 마커는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 또는 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis)의 dal 유전자, 또는 암피실린(ampicillin), 카나마이신(kanamycin), 클로람페니콜(chloramphenicol) 또는 테트라사이클린(tetracycline) 내성과 같은 항생제 내성을 부여하는 마커이다.
본 발명의 벡터는 숙주 세포의 게놈에 통합되거나 상기 게놈과 독립적인 세포 내에서 자율적으로 복제될 수 있다. 상기 숙주 세포의 게놈으로의 통합 또는 자가 복제에 필요한 요소는 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 앞서 언급한 Sambrook et al., 1989 참조).
벡터 DNA는 통상적인 형질전환 또는 형질감염 기술에 의해 원핵 또는 진핵 세포에 도입될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "형질전환(transformation)" 및 "형질감염(transfection)"은 외래 핵산(예컨대, DNA)을 숙주 세포에 도입하기 위한 다양한 기술을 의미하며, 이는 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 앞서 언급한 Sambrook et al., 1989; Davis et al., Basic Methods in Molecular Biology (1986) and other laboratory manuals에서 찾을 수 있다.
본 발명은 또한 GluDH 폴리펩티드의 재조합 생산에 유리하게 사용되는 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 숙주 세포에 관한 것이다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터는 숙주 세포 내로 도입되며, 이로써 상기 벡터는 염색체 통합체 또는 자가-복제 염색체외 벡터로서 유지된다. 당업자는 단백질 발현을 위한 통상적인 벡터 및 숙주 세포를 알고 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 숙주 세포는 대장균(E. coli) BL21(DE3)과 같은 대장균(E. coli) 세포이다. 일부 실시양태에서, 상기 발현 벡터는 pET-30a(+)이다.
본 발명의 변형된 GluDH는 비-GluDH 폴리펩티드(예를 들어, 이종 아미노산 서열)에 작동가능하게 연결되어 융합 단백질을 형성할 수 있다. 예를 들어, 하나의 실시양태에서, 상기 융합 단백질은 GST-GluDH 융합 단백질이고, 상기 GluDH 서열은 GST 서열의 C-말단에 융합된다. 이 융합 단백질은 재조합 GluDH의 정제를 촉진할 수 있다. 다른 실시양태에서, 상기 융합 단백질은 N-말단에 이종 신호 서열을 포함하는 GluDH 단백질이다. 특정 숙주 세포(예를 들어, 포유동물 및 효모 숙주 세포)에서, GluDH의 발현 및/또는 분비는 이종 신호 서열의 사용에 의해 증가될 수 있다.
IV. L-글루포시네이트(L-glufosinate)의 생산
게다가, 본 발명은 변형된 GluDH 또는 본 발명의 숙주세포를 PPO와 접촉시키는 단계를 포함하는 L-글루포시네이트의 제조방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 L-글루포시네이트-암모늄(L-glufosinate-ammonium)을 제조하는 방법은 다음 단계를 포함한다:
(a) 본 발명의 변형된 GluDH의 활성을 PPO 및 아미노 공여체를 포함하는 반응 배지(reaction medium)에 제공하며, 상기 반응 배지는 NADPH/NADP 순환 시스템을 포함하는 단계, 및
(b) 상기 반응 배지를 배양하여 L-글루포시네이트를 생성하는 단계.
일부 실시양태에서, L-글루포시네이트를 생산하기 위해 무-세포 촉매 방법이 사용되며, 본 발명의 변형된 GluDH는 (a) 단계에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 자유 또는 고정화된 본 발명의 변형된 GluDH가 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 상기 아미노 공여체는 암모늄 염, 예를 들어, NH4Cl이다.
일부 실시양태에서, 상기 반응 배지는 NADPH/NADP를 포함한다. 본 발명에 적합한 NADPH/NADP 순환 시스템은 당업계에 공지되어 있으며, 이는 알코올 탈수소효소(alcohol dehydrogenase), 포도당 탈수소효소(glucose dehydrogenase) (GDH) 또는 포도당-6-인산 탈수소효소(glucose-6-phosphate dehydrogenase) (G6PD)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 상기 NADPH/NADP 순환 시스템은 알코올 탈수소효소를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 알코올 탈수소효소는 또한 고정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 상기 배양은 20-50℃, 바람직하게는 25-40℃, 보다 바람직하게는 28-35℃, 예를 들어 30℃에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 상기 배지는 PBS 및 Tris-HCl 완충액과 같은 완충액이다. 하나의 실시양태에서, 상기 배지는 100mM의 PBS 완충액과 같은 PBS 완충액이다. 일부 실시양태에서, 상기 반응 배지의 pH는 7.5-8이다.
일부 실시양태에서, 상기 반응 배지는 부분적으로 또는 전체적으로 세포 배양 배지로 구성된 배지이고, 본 발명의 변형된 GluDH의 활성은 반응 배지에서 배양되는, 본 발명의 숙주 세포에 의해 제공된다.
일부 실시양태에서, 상기 반응 배지는 부분적으로 또는 전체적으로 세포 배양 배지로 구성된 배지이고, 알코올 탈수소효소 활성과 같은 NADPH/NADP 순환 시스템은 본 발명의 숙주 세포 또는 제2 숙주 세포에 의해 제공되며, 이는 반응 배지에서 배양된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 숙주 세포 및/또는 제2 숙주 세포는 세포 배양 배지에서 배양되고 확장되며, 그런 다음, 상기 확장된 숙주 세포를 세포 배양 배지에서 분리하고 완충액 또는 물을 사용하여 바이오매스(biomass)를 재현탁한다. PPO는 확장된 숙주 세포의 첨가 전, 도중 또는 후에 완충액 또는 물에 제공된다.
일부 실시양태에서, 대장균 세포와 같은 박테리아 세포가 사용될 수 있다.
본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 명확하게 이해할 수 있을 것이다. 상기 실시예는 본 발명의 범위를 제한하는 것이 아니라 예시를 위한 것임을 이해해야 한다.
실시예 1: 물질 및 방법
달리 명시하지 않는 한, 본 발명에 사용된 실험 방법은 모두 통상적인 방법이다. 특정 유전자 클로닝 작업은 앞서 언급한 Sambrook et al., 1989에서 볼 수 있습니다.
i) 시약:
DNA 중합효소(PrimeSTAR Max DNA 중합효소) 및 DpnI 엔도뉴클레아제는(endonuclease) TaKaRa에서 구입하였고; 플라스미드 분리 키트는 Axygen에서 구입하였고; PPO는 선행 기술(J. Org. Chem. 1991, 56, 1783-1788 참조)에 따라 출원인에 의해 합성되었으며; NH4Cl은 베이징의 Sinopharm Chemical Reagent Co. Ltd.에서 구입하였고; NADP+/NADPH는 알라딘에서 구입하였고; 알코올 탈수소효소(alcohol dehydrogenase)는 대장균(E. coli)에서 재조합적으로 발현되는 락토바실러스 케피리(Lactobacillus kefiri) (NCBI 수탁 번호 WP_054768785.1)의 탈수소효소이다.
ii) 벡터 및 균주:
사용된 발현 벡터는 pET-30a(+)이고, 플라스미드는 Novagen에서 구입하였고; 사용된 숙주 세포는 E. coli BL21(DE3)이었고, Tiangen BioTech(Beijing) Co., Ltd.에서 구입하였다.
iii) 시퀀싱 및 프라이머 합성은 Synbio Technologies Co., Ltd.에서 수행하였다.
iv) 사이트-지정 돌연변이(Site-directed mutation):
특정 프라이머 쌍은 돌연변이가 필요한 아미노산 부위에 상응하는 염기에서 원하는 치환을 도입하도록 설계되었다. 분리된 돌연변이-전 플라스미드(pre-mutation plasmid) (야생형 GluDH 및 pET-30a(+) 백본에 대한 코딩 서열 포함)를 주형으로 사용하고, Quickchange 기술(Nucleic Acids Research, 2004, 32). (14):e115)을 사용하여 PCR에 의해 돌연변이를 도입하였다. PCR 증폭 후, 증폭된 생성물을 DpnI로 4시간 동안 분해하여 주형 플라스미드를 제거하였다. 분해된 생성물을 대장균 BL21(DE3) 컴피턴트 세포로 형질전환시킨 후, 세포를 LB 한천(agar) (50 mg/L 카나마이신 함유)에 도말하고, 단일 콜로니를 LB 배지(broth) (50 mg/L 카나마이신 함유)에 접종하여 배양하고, 시퀀싱하여 정확한 돌연변이를 확인하였다. 상기 검증된 클론은 향후 사용을 위해 -80℃에 보관된다.
v) 단백질 발현 및 조 효소 용액의 제조:
저장된 클론은 LB 한천에서 활성화되었다. 그런 다음, 단일 콜로니를 LB 배지(50 mg/L 카나마이신 함유)에 접종하고 37℃에서 12시간 동안 진탕하면서 배양하였다. 1mL 배양액을 50mL 신선한 LB 배지(50 mg/L 카나마이신 함유)에 옮기고 OD600이 약 0.6에 도달할 때까지 37℃에서 진탕 배양하고 IPTG(0.4mM의 최종 농도)를 첨가한 후 단백질 발현을 유도하기 위해 25℃에서 16시간 동안 배양하였다.
배양 후, 상기 배양물을 4,000g에서 10분 동안 4℃에서 원심분리하고 상등액을 버리고 대장균 세포를 수집하였다. 상기 수집된 대장균 세포를 50mM, pH 7.0의 15mL 사전 냉각 PBS에 재현탁하고, 파쇄를 위해 4℃에서 초음파 처리하였다. 세포파쇄용액을 6,000g, 4℃에서 15분간 원심분리하여 침전물을 제거하고 얻은 상등액은 재조합효소가 포함된 조효소액이었다.
vi) 효소 활성 측정
NH4Cl 및 NADP+를 PPO의 PBS(100mM) 용액에 첨가하고 용액의 암모니아 수용액으로 pH를 8로 조정하였다. 상기 용액은 100mM의 최종 농도에서 PPO, 50mM의 최종 농도에서 NH4Cl 및 0.2g/L의 최종 농도에서 NADP+를 포함한다. v)에서 기재된 바와 같이 수득된 조효소 용액 및 알코올 탈수소효소를 상기 용액에 첨가하였다. GluDH의 최종 농도는 0.02g/L이고 알코올 탈수소 효소의 최종 농도는 0.2g/L이다. 상기 용액을 30℃의 진탕기에서 2시간 동안 진탕(400rpm)한 후, 생성된 L-글루타민(L-glutamine)의 양을 OPA pre-column derivating HPLC로 샘플링하여 촉매 반응의 초기 속도를 결정하였다.
vii) 효소의 동적 특성 결정
100mM pH 7.5의 PBS(pH는 수성 암모니아 용액으로 조정됨), 0.15mM의 NADPH(환원성), 50mM의 NH4Cl, 10% 부피의 희석된(500배) 조효소 용액 및 다양한 농도(5-100mM)의 기질 PPO를 포함하는 복수의 반응 시스템(200uL)을 96-웰 플레이트에 제형화하였다. 340nm에서의 UV 흡수 강도는 30℃에서 검출되었고, 시간 경과에 따른 흡수 변화율(mA/min)을 기록하였다. 상기 얻은 매개 변수는 Michaelis-Menten 방정식에 연결되었으며, 반응 속도는 흡수 변화율로 계산되었다.
실시예 2. 바실러스 베레젠시스(Bacillus velezensis)(BvGluDH)로부터의 GluDH 돌연변이체의 제조 및 검출
BvGluDH(서열번호 1)의 코딩 핵산을 주형으로 하여 변이체를 제조하고, 실시예 1의 방법에 따라 효소 활성 및 동적 파라미터 Vmax 및 Km을 측정하였다. 상기 생성된 변이체와 이의 효소 활성 및 동적 파라미터를 표 1에 나타내었고, 상대적 효소 활성(relative enzyme activity)은 서열번호 3의 변이체의 효소 활성에 대한 변이체의 효소 활성의 백분율을 의미한다.
변이체에 도입된 치환체
(Substitutions introduced in the mutant)		 서열번호 상대적 효소 활성
(Relative enzyme activity)		 Vmax (mA/min) Km (mM)
A175G 3 100% 60 73
A175G-L104C 4 90% 60 34
A175G-P132L 5 131% 56 32
A175G-I133V 6 113% 59 43
A175G-V173S 7 111% 79 52
A175G-V173G 8 123% 80 53
A175G-G181K 9 93% 70 80
A175G-G181R 10 100% 77 84
A175G-A182R 11 111% 61 46
A175G-V203I 12 72% 53 62
A175G-P132L-I133V 13 131% 34 41
A175G-P132L-V173S 14 132% 53 26
A175G-P132L-V173G 15 61% 22 36
A175G-P132L- A182R 16 115% 36 29
A175G-I133V-V173S 17 178% 78 51
A175G-I133V-V173G 18 164% 54 71
A175G-I133V-A182R 19 112% 49 26
A175G-V173S-A182R 20 35% 10 56
A175G-V173G-A182R 21 160% 71 23
A175G-P132L-I133V-V173S 22 95% 46 32
A175G-P132L-I133V-V173G 23 53% 14 47
A175G-P132L-I133V-A182R 24 97% 39 35
A175G-P132L-V173S-A182R 25 79% 40 14
A175G-P132L-V173G-A182R 26 34% 19 22
A175G-I133V-V173S-A182R 27 139% 65 28
A175G-I133V-V173G-A182R 28 139% 73 26
A175G-P132L-I133V-V173S-A182R 29 70% 37 24
A175G-P132L-I133V-V173G-A182R 30 138% 71 53
실시예 3. 리시니바실러스 스파에리쿠스(Lysinibacillus sphaericus) (LsGluDH)로부터의 GluDH 돌연변이체의 제조 및 검출
LsGluDH(서열번호 2)의 코딩 핵산을 주형으로 하여 변이체를 준비하고, 실시예 1의 방법에 따라 효소 활성 및 역학 파라미터 Vmax 및 Km을 측정하였다. 상기 생성된 변이체와 이의 효소 활성 및 동적 파라미터를 표 2에 나타내었고, 상대적 효소 활성은 서열번호 31의 변이체의 효소 활성에 대한 변이체의 효소 활성의 백분율을 의미한다.
변이체에 도입된 치환체
(Substitutions introduced in the mutant)		 서열번호 상대적 효소 활성
(Relative enzyme activity)		 Vmax (mA/min) Km (mM)
A175G 31 100% 39 49
A175G-P132L 32 127% 45 35
A175G-I133V 33 106% 39 35
A175G-V173S 34 185% 106 62
A175G-V173G 35 132% 64 49
A175G-A182R 36 102% 46 38
A175G-V173G-A182R 37 169% 58 31
A175G-I133V-V173S-A182R 38 131% 38 26
실시예 4. BvGluDH 돌연변이체의 제조 및 검출
서열번호 21의 변이체를 기반으로 추가 변이체를 도입하여 변이체를 제조하였고, 실시예 1의 방법에 따라 효소 활성을 측정하였다. 상기 생성된 변이체 및 이의 효소 활성을 표 3에 나타내었고, 초기 상대적 효소 활성은 열-처리하지 않은 서열번호 21의 변이체의 효소 활성에 대한 변이체의 효소 활성의 백분율을 의미하고; 열-처리 후 상대적 효소 활성은 45℃에서 30분 동안 배양한 후 서열번호 21의 돌연변이체의 효소 활성에 대한 돌연변이체의 효소 활성의 백분율을 의미한다.
변이체에 도입된 치환체
(Substitutions introduced in the mutant)		 서열번호 초기 상대적 효소 활성
(Initial relative enzyme activity)		 열처리 후 상대적 효소 활성
(Relative enzyme activity after thermo-treatment)
A175G-V173G-A182R 21 100% 100%
A175G-V173G-A182R-Q22W 39 106% 143%
A175G-V173G-A182R-Q22E 40 114% 140%
A175G-V173G-A182R-L23M 41 153% 158%
A175G-V173G-A182R-K56Q 42 104% 145%
A175G-V173G-A182R-D9S 43 113% 95%
A175G-V173G-A182R-D9L 44 108% 122%
A175G-V173G-A182R-D9Y 45 86% 82%
A175G-V173G-A182R-N25D 46 105% 117%
A175G-V173G-A182R-N199W 47 142% 201%
A175G-V173G-A182R-N199Y 48 133% 197%
A175G-V173G-A182R-D242G 49 57% 88%
A175G-V173G-A182R-N143E 50 90% 111%
A175G-V173G-A182R-A263S 51 103% 87%
A175G-V173G-A182R-A263K 52 65% 77%
A175G-V173G-A182R-D339Q 53 119% 81%
A175G-V173G-A182R-A420R 54 139% 170%
A175G-V173G-A182R-Y431S 55 142% 156%
A175G-V173G-A182R-V437K 56 156% 132%
A175G-V173G-A182R-K56Q-N199W 57 160% 171%
A175G-V173G-A182R-Q22E-N199W 58 166% 185%
A175G-V173G-A182R-K56Q-N199Y 59 167% 182%
A175G-V173G-A182R-Q22E-N199Y 60 176% 182%
A175G-V173G-A182R-K56Q-N199Y-A420R 61 159% 175%
A175G-V173G-A182R-Q22E-N199Y-A420R 62 175% 193%
A175G-V173G-A182R-Q22E-K56Q-N199Y 63 172% 195%
A175G-V173G-A182R-Q22E-K56Q-N199W 64 161% 172%
A175G-V173G-A182R-Q22E-K56Q-N199Y-A420R 65 184% 189%
실시예 5. BvGluDH 돌연변이체의 제조 및 검출
서열번호 65의 변이체를 기반으로 추가 변이체를 도입하여 변이체를 제조하였고, 실시예 1의 방법에 따라 효소 활성을 측정하였다. 상기 얻어진 변이체 및 효소활성을 표 4에 나타내었으며, 상대적 효소 활성은 서열번호 65의 변이체의 효소 활성에 대한 변이체의 효소 활성의 백분율을 의미한다.
변이체에 도입된 치환체
(Substitutions introduced in the mutant)		 서열번호 상대적 효소 활성
(Relative enzyme activity)
A175G-V173G-A182R-Q22E-K56Q-N199Y-A420R 65 100%
A175G-V173G-A182R-Q22E-K56Q-N199Y-A420R-A31H 66 165%
A175G-V173G-A182R-Q22E-K56Q-N199Y-A420R-F124L 67 106%
A175G-V173G-A182R-Q22E-K56Q-N199Y-A420R-A216G 68 117%
A175G-V173G-A182R-Q22E-K56Q-N199Y-A420R-A31H-F124L 69 143%
A175G-V173G-A182R-Q22E-K56Q-N199Y-A420R-A31H-A216G 70 132%
A175G-V173G-A182R-Q22E-K56Q-N199Y-A420R-F124L-A216G 71 97%
A175G-V173G-A182R-Q22E-K56Q-N199Y-A420R-A31H-F124L-A216G 72 103%
<110> HUNAN LIER BIOTECHNOLOGY CO., LTD. <120> MODIFIED GLUTAMATE DEHYDROGENASE AND USE THEREOF <130> IP22-0044 <150> CN 202010659106.8 <151> 2020-07-09 <150> PCT/CN 2021/105179 <151> 2021-07-08 <160> 72 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 457 <212> PRT <213> Bacillus vedderi <400> 1 Met Thr Thr Thr Thr Val Ser Asn Asp Gln Leu Ala Lys Glu Tyr Val 1 5 10 15 Asp Gly Val Phe Glu Gln Leu Lys Asn Gln Asn Ser His Gln Ala Glu 20 25 30 Phe Leu Gln Ala Ala Glu Glu Ile Phe Ile Ser Leu Val Pro Val Phe 35 40 45 Ala Gln His Pro Glu Tyr Ile Lys Ala Asn Ile Leu Ser Arg Ile Val 50 55 60 Glu Pro Asp Arg Ile Ile Ser Phe Arg Val Ala Trp Gln Asp Asp Asn 65 70 75 80 Asn Gln Val Gln Val Asn Arg Gly Tyr Arg Val Gln Tyr Ser Asn Val 85 90 95 Met Gly Pro Tyr Lys Gly Gly Leu Arg Phe His Pro Ser Val Asn Glu 100 105 110 Ser Ile Ile Lys Phe Leu Gly Phe Glu Gln Ile Phe Lys Asn Ala Leu 115 120 125 Thr Gly Gln Pro Ile Gly Gly Gly Lys Gly Gly Ser Asn Phe Asn Pro 130 135 140 Lys Gly Lys Ser Asp Ser Glu Ile Met Arg 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Ala Asp Lys Tyr Gly Tyr Pro 420 425 430 Gly Asn Leu Val Val Gly Ala Asn Ile Ala Gly Phe Ile Lys Val Ala 435 440 445 Asp Gly Met Leu Ala Glu Gly Ile Tyr 450 455 <210> 67 <211> 457 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutant <400> 67 Met Thr Thr Thr Thr Val Ser Asn Asp Gln Leu Ala Lys Glu Tyr Val 1 5 10 15 Asp Gly Val Phe Glu Glu Leu Lys Asn Gln Asn Ser His Gln Ala Glu 20 25 30 Phe Leu Gln Ala Ala Glu Glu Ile Phe Ile Ser Leu Val Pro Val Phe 35 40 45 Ala Gln His Pro Glu Tyr Ile Gln Ala Asn Ile Leu Ser Arg Ile Val 50 55 60 Glu Pro Asp Arg Ile Ile Ser Phe Arg Val Ala Trp Gln Asp Asp Asn 65 70 75 80 Asn Gln Val Gln Val Asn Arg Gly Tyr Arg Val Gln Tyr Ser Asn Val 85 90 95 Met Gly Pro Tyr Lys Gly Gly Leu Arg Phe His Pro Ser Val Asn Glu 100 105 110 Ser Ile Ile Lys Phe Leu Gly Phe Glu Gln Ile Leu Lys Asn Ala Leu 115 120 125 Thr Gly Gln Pro Ile Gly Gly Gly Lys Gly Gly Ser Asn Phe Asn Pro 130 135 140 Lys Gly Lys Ser Asp Ser Glu Ile Met Arg Phe Cys Gln Ala Phe Met 145 150 155 160 Thr Glu Leu Tyr Arg His Ile Gly Pro Asp Val Asp Gly Pro Gly Gly 165 170 175 Asp Ile Gly Val Gly Ala Arg Glu Val Gly Tyr Leu Trp Gly Gln Tyr 180 185 190 Lys Arg Ile Thr Lys Ala Tyr Glu Ser Gly Val Leu Thr Gly Lys Thr 195 200 205 Pro Gly Tyr Gly Gly Ser Leu Ala Arg Lys Glu Ala Thr Gly Tyr Gly 210 215 220 Thr Val Tyr Phe Val Glu Glu Met Leu Lys Glu Val Asn Asp Ser Phe 225 230 235 240 Glu Asp Lys Thr Val Val Val Ser Gly Ser Gly Asn Val Ser Thr Tyr 245 250 255 Ala Ile Glu Lys Ala Gln Ala Tyr Gly Ala Lys Val Val Ala Cys Ser 260 265 270 Asp Ser Ser Gly Tyr Ile Tyr Asp Ala Glu Gly Leu Asp Leu Asp Val 275 280 285 Ile Lys Glu Ile Lys Glu Val Lys Gly Asp Arg Ile Ser Thr Tyr Val 290 295 300 Asp Tyr Arg Pro Asn Ala Thr Phe Thr Glu Gly Cys Thr Gly Ile Trp 305 310 315 320 Ser Ile Pro Cys Asp Ile Ala Leu Pro Cys Ala Thr Gln Asn Glu Ile 325 330 335 Asn Gly Asp Ala Ala Arg Thr Leu Ile Ser Asn Gly Val Lys Ala Ile 340 345 350 Gly Glu Gly Ala Asn Met Pro Ser Asp Leu Glu Ala Ile Asn Glu Phe 355 360 365 Leu Asn Ala Gly Val Leu Phe Gly Pro Ala Lys Ala Ala Asn Ala Gly 370 375 380 Gly Val Ala Val Ser Ala Leu Glu Met Ala Gln Asp Ser Ser Arg Val 385 390 395 400 Phe Trp Thr Phe Glu Glu Val Asp Ala Lys Leu His Gln Ile Met Lys 405 410 415 Asn Ile Tyr Arg Asp Ser Lys Ala Ala Ala Asp Lys Tyr Gly Tyr Pro 420 425 430 Gly Asn Leu Val Val Gly Ala Asn Ile Ala Gly Phe Ile Lys Val Ala 435 440 445 Asp Gly Met Leu Ala Glu Gly Ile Tyr 450 455 <210> 68 <211> 457 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutant <400> 68 Met Thr Thr Thr Thr Val Ser Asn Asp Gln Leu Ala Lys Glu Tyr Val 1 5 10 15 Asp Gly Val Phe Glu Glu Leu Lys Asn Gln Asn Ser His Gln Ala Glu 20 25 30 Phe Leu Gln Ala Ala Glu Glu Ile Phe Ile Ser Leu Val Pro Val Phe 35 40 45 Ala Gln His Pro Glu Tyr Ile Gln Ala Asn Ile Leu Ser Arg Ile Val 50 55 60 Glu Pro Asp Arg Ile Ile Ser Phe Arg Val Ala Trp Gln Asp Asp Asn 65 70 75 80 Asn Gln Val Gln Val Asn Arg Gly Tyr Arg Val Gln Tyr Ser Asn Val 85 90 95 Met Gly Pro Tyr Lys Gly Gly Leu Arg Phe His Pro Ser Val Asn Glu 100 105 110 Ser Ile Ile Lys Phe Leu Gly Phe Glu Gln Ile Phe Lys Asn Ala Leu 115 120 125 Thr Gly Gln Pro Ile Gly Gly Gly Lys Gly Gly Ser Asn Phe Asn Pro 130 135 140 Lys Gly Lys Ser Asp Ser Glu Ile Met Arg Phe Cys Gln Ala Phe Met 145 150 155 160 Thr Glu Leu Tyr Arg His Ile Gly Pro Asp Val Asp Gly Pro Gly Gly 165 170 175 Asp Ile Gly Val Gly Ala Arg Glu Val Gly Tyr Leu Trp Gly Gln Tyr 180 185 190 Lys Arg Ile Thr Lys Ala Tyr Glu Ser Gly Val Leu Thr Gly Lys Thr 195 200 205 Pro Gly Tyr Gly Gly Ser Leu Gly Arg Lys Glu Ala Thr Gly Tyr Gly 210 215 220 Thr Val Tyr Phe Val Glu Glu Met Leu Lys Glu Val Asn Asp Ser Phe 225 230 235 240 Glu Asp Lys Thr Val Val Val Ser Gly Ser Gly Asn Val Ser Thr Tyr 245 250 255 Ala Ile Glu Lys Ala Gln Ala Tyr Gly Ala Lys Val Val Ala Cys Ser 260 265 270 Asp Ser Ser Gly Tyr Ile Tyr Asp Ala Glu Gly Leu Asp Leu Asp Val 275 280 285 Ile Lys Glu Ile Lys Glu Val Lys Gly Asp Arg Ile Ser Thr Tyr Val 290 295 300 Asp Tyr Arg Pro Asn Ala Thr Phe Thr Glu Gly Cys Thr Gly Ile Trp 305 310 315 320 Ser Ile Pro Cys Asp Ile Ala Leu Pro Cys Ala Thr Gln Asn Glu Ile 325 330 335 Asn Gly Asp Ala Ala Arg Thr Leu Ile Ser Asn Gly Val Lys Ala Ile 340 345 350 Gly Glu Gly Ala Asn Met Pro Ser Asp Leu Glu Ala Ile Asn Glu Phe 355 360 365 Leu Asn Ala Gly Val Leu Phe Gly Pro Ala Lys Ala Ala Asn Ala Gly 370 375 380 Gly Val Ala Val Ser Ala Leu Glu Met Ala Gln Asp Ser Ser Arg Val 385 390 395 400 Phe Trp Thr Phe Glu Glu Val Asp Ala Lys Leu His Gln Ile Met Lys 405 410 415 Asn Ile Tyr Arg Asp Ser Lys Ala Ala Ala Asp Lys Tyr Gly Tyr Pro 420 425 430 Gly Asn Leu Val Val Gly Ala Asn Ile Ala Gly Phe Ile Lys Val Ala 435 440 445 Asp Gly Met Leu Ala Glu Gly Ile Tyr 450 455 <210> 69 <211> 457 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutant <400> 69 Met Thr Thr Thr Thr Val Ser Asn Asp Gln Leu Ala Lys Glu Tyr Val 1 5 10 15 Asp Gly Val Phe Glu Glu Leu Lys Asn Gln Asn Ser His Gln His Glu 20 25 30 Phe Leu Gln Ala Ala Glu Glu Ile Phe Ile Ser Leu Val Pro Val Phe 35 40 45 Ala Gln His Pro Glu Tyr Ile Gln Ala Asn Ile Leu Ser Arg Ile Val 50 55 60 Glu Pro Asp Arg Ile Ile Ser Phe Arg Val Ala Trp Gln Asp Asp Asn 65 70 75 80 Asn Gln Val Gln Val Asn Arg Gly Tyr Arg Val Gln Tyr Ser Asn Val 85 90 95 Met Gly Pro Tyr Lys Gly Gly Leu Arg Phe His Pro Ser Val Asn Glu 100 105 110 Ser Ile Ile Lys Phe Leu Gly Phe Glu Gln Ile Leu Lys Asn Ala Leu 115 120 125 Thr Gly Gln Pro Ile Gly Gly Gly Lys Gly Gly Ser Asn Phe Asn Pro 130 135 140 Lys Gly Lys Ser Asp Ser Glu Ile Met Arg Phe Cys Gln Ala Phe Met 145 150 155 160 Thr Glu Leu Tyr Arg His Ile Gly Pro Asp Val Asp Gly Pro Gly Gly 165 170 175 Asp Ile Gly Val Gly Ala Arg Glu Val Gly Tyr Leu Trp Gly Gln Tyr 180 185 190 Lys Arg Ile Thr Lys Ala Tyr Glu Ser Gly Val Leu Thr Gly Lys Thr 195 200 205 Pro Gly Tyr Gly Gly Ser Leu Ala Arg Lys Glu Ala Thr Gly Tyr Gly 210 215 220 Thr Val Tyr Phe Val Glu Glu Met Leu Lys Glu Val Asn Asp Ser Phe 225 230 235 240 Glu Asp Lys Thr Val Val Val Ser Gly Ser Gly Asn Val Ser Thr Tyr 245 250 255 Ala Ile Glu Lys Ala Gln Ala Tyr Gly Ala Lys Val Val Ala Cys Ser 260 265 270 Asp Ser Ser Gly Tyr Ile Tyr Asp Ala Glu Gly Leu Asp Leu Asp Val 275 280 285 Ile Lys Glu Ile Lys Glu Val Lys Gly Asp Arg Ile Ser Thr Tyr Val 290 295 300 Asp Tyr Arg Pro Asn Ala Thr Phe Thr Glu Gly Cys Thr Gly Ile Trp 305 310 315 320 Ser Ile Pro Cys Asp Ile Ala Leu Pro Cys Ala Thr Gln Asn Glu Ile 325 330 335 Asn Gly Asp Ala Ala Arg Thr Leu Ile Ser Asn Gly Val Lys Ala Ile 340 345 350 Gly Glu Gly Ala Asn Met Pro Ser Asp Leu Glu Ala Ile Asn Glu Phe 355 360 365 Leu Asn Ala Gly Val Leu Phe Gly Pro Ala Lys Ala Ala Asn Ala Gly 370 375 380 Gly Val Ala Val Ser Ala Leu Glu Met Ala Gln Asp Ser Ser Arg Val 385 390 395 400 Phe Trp Thr Phe Glu Glu Val Asp Ala Lys Leu His Gln Ile Met Lys 405 410 415 Asn Ile Tyr Arg Asp Ser Lys Ala Ala Ala Asp Lys Tyr Gly Tyr Pro 420 425 430 Gly Asn Leu Val Val Gly Ala Asn Ile Ala Gly Phe Ile Lys Val Ala 435 440 445 Asp Gly Met Leu Ala Glu Gly Ile Tyr 450 455 <210> 70 <211> 457 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutant <400> 70 Met Thr Thr Thr Thr Val Ser Asn Asp Gln Leu Ala Lys Glu Tyr Val 1 5 10 15 Asp Gly Val Phe Glu Glu Leu Lys Asn Gln Asn Ser His Gln His Glu 20 25 30 Phe Leu Gln Ala Ala Glu Glu Ile Phe Ile Ser Leu Val Pro Val Phe 35 40 45 Ala Gln His Pro Glu Tyr Ile Gln Ala Asn Ile Leu Ser Arg Ile Val 50 55 60 Glu Pro Asp Arg Ile Ile Ser Phe Arg Val Ala Trp Gln Asp Asp Asn 65 70 75 80 Asn Gln Val Gln Val Asn Arg Gly Tyr Arg Val Gln Tyr Ser Asn Val 85 90 95 Met Gly Pro Tyr Lys Gly Gly Leu Arg Phe His Pro Ser Val Asn Glu 100 105 110 Ser Ile Ile Lys Phe Leu Gly Phe Glu Gln Ile Phe Lys Asn Ala Leu 115 120 125 Thr Gly Gln Pro Ile Gly Gly Gly Lys Gly Gly Ser Asn Phe Asn Pro 130 135 140 Lys Gly Lys Ser Asp Ser Glu Ile Met Arg Phe Cys Gln Ala Phe Met 145 150 155 160 Thr Glu Leu Tyr Arg His Ile Gly Pro Asp Val Asp Gly Pro Gly Gly 165 170 175 Asp Ile Gly Val Gly Ala Arg Glu Val Gly Tyr Leu Trp Gly Gln Tyr 180 185 190 Lys Arg Ile Thr Lys Ala Tyr Glu Ser Gly Val Leu Thr Gly Lys Thr 195 200 205 Pro Gly Tyr Gly Gly Ser Leu Gly Arg Lys Glu Ala Thr Gly Tyr Gly 210 215 220 Thr Val Tyr Phe Val Glu Glu Met Leu Lys Glu Val Asn Asp Ser Phe 225 230 235 240 Glu Asp Lys Thr Val Val Val Ser Gly Ser Gly Asn Val Ser Thr Tyr 245 250 255 Ala Ile Glu Lys Ala Gln Ala Tyr Gly Ala Lys Val Val Ala Cys Ser 260 265 270 Asp Ser Ser Gly Tyr Ile Tyr Asp Ala Glu Gly Leu Asp Leu Asp Val 275 280 285 Ile Lys Glu Ile Lys Glu Val Lys Gly Asp Arg Ile Ser Thr Tyr Val 290 295 300 Asp Tyr Arg Pro Asn Ala Thr Phe Thr Glu Gly Cys Thr Gly Ile Trp 305 310 315 320 Ser Ile Pro Cys Asp Ile Ala Leu Pro Cys Ala Thr Gln Asn Glu Ile 325 330 335 Asn Gly Asp Ala Ala Arg Thr Leu Ile Ser Asn Gly Val Lys Ala Ile 340 345 350 Gly Glu Gly Ala Asn Met Pro Ser Asp Leu Glu Ala Ile Asn Glu Phe 355 360 365 Leu Asn Ala Gly Val Leu Phe Gly Pro Ala Lys Ala Ala Asn Ala Gly 370 375 380 Gly Val Ala Val Ser Ala Leu Glu Met Ala Gln Asp Ser Ser Arg Val 385 390 395 400 Phe Trp Thr Phe Glu Glu Val Asp Ala Lys Leu His Gln Ile Met Lys 405 410 415 Asn Ile Tyr Arg Asp Ser Lys Ala Ala Ala Asp Lys Tyr Gly Tyr Pro 420 425 430 Gly Asn Leu Val Val Gly Ala Asn Ile Ala Gly Phe Ile Lys Val Ala 435 440 445 Asp Gly Met Leu Ala Glu Gly Ile Tyr 450 455 <210> 71 <211> 457 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutant <400> 71 Met Thr Thr Thr Thr Val Ser Asn Asp Gln Leu Ala Lys Glu Tyr Val 1 5 10 15 Asp Gly Val Phe Glu Glu Leu Lys Asn Gln Asn Ser His Gln Ala Glu 20 25 30 Phe Leu Gln Ala Ala Glu Glu Ile Phe Ile Ser Leu Val Pro Val Phe 35 40 45 Ala Gln His Pro Glu Tyr Ile Gln Ala Asn Ile Leu Ser Arg Ile Val 50 55 60 Glu Pro Asp Arg Ile Ile Ser Phe Arg Val Ala Trp Gln Asp Asp Asn 65 70 75 80 Asn Gln Val Gln Val Asn Arg Gly Tyr Arg Val Gln Tyr Ser Asn Val 85 90 95 Met Gly Pro Tyr Lys Gly Gly Leu Arg Phe His Pro Ser Val Asn Glu 100 105 110 Ser Ile Ile Lys Phe Leu Gly Phe Glu Gln Ile Leu Lys Asn Ala Leu 115 120 125 Thr Gly Gln Pro Ile Gly Gly Gly Lys Gly Gly Ser Asn Phe Asn Pro 130 135 140 Lys Gly Lys Ser Asp Ser Glu Ile Met Arg Phe Cys Gln Ala Phe Met 145 150 155 160 Thr Glu Leu Tyr Arg His Ile Gly Pro Asp Val Asp Gly Pro Gly Gly 165 170 175 Asp Ile Gly Val Gly Ala Arg Glu Val Gly Tyr Leu Trp Gly Gln Tyr 180 185 190 Lys Arg Ile Thr Lys Ala Tyr Glu Ser Gly Val Leu Thr Gly Lys Thr 195 200 205 Pro Gly Tyr Gly Gly Ser Leu Gly Arg Lys Glu Ala Thr Gly Tyr Gly 210 215 220 Thr Val Tyr Phe Val Glu Glu Met Leu Lys Glu Val Asn Asp Ser Phe 225 230 235 240 Glu Asp Lys Thr Val Val Val Ser Gly Ser Gly Asn Val Ser Thr Tyr 245 250 255 Ala Ile Glu Lys Ala Gln Ala Tyr Gly Ala Lys Val Val Ala Cys Ser 260 265 270 Asp Ser Ser Gly Tyr Ile Tyr Asp Ala Glu Gly Leu Asp Leu Asp Val 275 280 285 Ile Lys Glu Ile Lys Glu Val Lys Gly Asp Arg Ile Ser Thr Tyr Val 290 295 300 Asp Tyr Arg Pro Asn Ala Thr Phe Thr Glu Gly Cys Thr Gly Ile Trp 305 310 315 320 Ser Ile Pro Cys Asp Ile Ala Leu Pro Cys Ala Thr Gln Asn Glu Ile 325 330 335 Asn Gly Asp Ala Ala Arg Thr Leu Ile Ser Asn Gly Val Lys Ala Ile 340 345 350 Gly Glu Gly Ala Asn Met Pro Ser Asp Leu Glu Ala Ile Asn Glu Phe 355 360 365 Leu Asn Ala Gly Val Leu Phe Gly Pro Ala Lys Ala Ala Asn Ala Gly 370 375 380 Gly Val Ala Val Ser Ala Leu Glu Met Ala Gln Asp Ser Ser Arg Val 385 390 395 400 Phe Trp Thr Phe Glu Glu Val Asp Ala Lys Leu His Gln Ile Met Lys 405 410 415 Asn Ile Tyr Arg Asp Ser Lys Ala Ala Ala Asp Lys Tyr Gly Tyr Pro 420 425 430 Gly Asn Leu Val Val Gly Ala Asn Ile Ala Gly Phe Ile Lys Val Ala 435 440 445 Asp Gly Met Leu Ala Glu Gly Ile Tyr 450 455 <210> 72 <211> 457 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutant <400> 72 Met Thr Thr Thr Thr Val Ser Asn Asp Gln Leu Ala Lys Glu Tyr Val 1 5 10 15 Asp Gly Val Phe Glu Glu Leu Lys Asn Gln Asn Ser His Gln His Glu 20 25 30 Phe Leu Gln Ala Ala Glu Glu Ile Phe Ile Ser Leu Val Pro Val Phe 35 40 45 Ala Gln His Pro Glu Tyr Ile Gln Ala Asn Ile Leu Ser Arg Ile Val 50 55 60 Glu Pro Asp Arg Ile Ile Ser Phe Arg Val Ala Trp Gln Asp Asp Asn 65 70 75 80 Asn Gln Val Gln Val Asn Arg Gly Tyr Arg Val Gln Tyr Ser Asn Val 85 90 95 Met Gly Pro Tyr Lys Gly Gly Leu Arg Phe His Pro Ser Val Asn Glu 100 105 110 Ser Ile Ile Lys Phe Leu Gly Phe Glu Gln Ile Leu Lys Asn Ala Leu 115 120 125 Thr Gly Gln Pro Ile Gly Gly Gly Lys Gly Gly Ser Asn Phe Asn Pro 130 135 140 Lys Gly Lys Ser Asp Ser Glu Ile Met Arg Phe Cys Gln Ala Phe Met 145 150 155 160 Thr Glu Leu Tyr Arg His Ile Gly Pro Asp Val Asp Gly Pro Gly Gly 165 170 175 Asp Ile Gly Val Gly Ala Arg Glu Val Gly Tyr Leu Trp Gly Gln Tyr 180 185 190 Lys Arg Ile Thr Lys Ala Tyr Glu Ser Gly Val Leu Thr Gly Lys Thr 195 200 205 Pro Gly Tyr Gly Gly Ser Leu Gly Arg Lys Glu Ala Thr Gly Tyr Gly 210 215 220 Thr Val Tyr Phe Val Glu Glu Met Leu Lys Glu Val Asn Asp Ser Phe 225 230 235 240 Glu Asp Lys Thr Val Val Val Ser Gly Ser Gly Asn Val Ser Thr Tyr 245 250 255 Ala Ile Glu Lys Ala Gln Ala Tyr Gly Ala Lys Val Val Ala Cys Ser 260 265 270 Asp Ser Ser Gly Tyr Ile Tyr Asp Ala Glu Gly Leu Asp Leu Asp Val 275 280 285 Ile Lys Glu Ile Lys Glu Val Lys Gly Asp Arg Ile Ser Thr Tyr Val 290 295 300 Asp Tyr Arg Pro Asn Ala Thr Phe Thr Glu Gly Cys Thr Gly Ile Trp 305 310 315 320 Ser Ile Pro Cys Asp Ile Ala Leu Pro Cys Ala Thr Gln Asn Glu Ile 325 330 335 Asn Gly Asp Ala Ala Arg Thr Leu Ile Ser Asn Gly Val Lys Ala Ile 340 345 350 Gly Glu Gly Ala Asn Met Pro Ser Asp Leu Glu Ala Ile Asn Glu Phe 355 360 365 Leu Asn Ala Gly Val Leu Phe Gly Pro Ala Lys Ala Ala Asn Ala Gly 370 375 380 Gly Val Ala Val Ser Ala Leu Glu Met Ala Gln Asp Ser Ser Arg Val 385 390 395 400 Phe Trp Thr Phe Glu Glu Val Asp Ala Lys Leu His Gln Ile Met Lys 405 410 415 Asn Ile Tyr Arg Asp Ser Lys Ala Ala Ala Asp Lys Tyr Gly Tyr Pro 420 425 430 Gly Asn Leu Val Val Gly Ala Asn Ile Ala Gly Phe Ile Lys Val Ala 435 440 445 Asp Gly Met Leu Ala Glu Gly Ile Tyr 450 455

Claims (17)

  1. 변형된 글루타메이트 탈수소효소 (glutamate dehydrogenase) (GluDH)는 개시 GluDH와 비교하여,
    제104 부위의 아미노산이 C로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
    제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
    제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
    제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
    제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제181 부위의 아미노산이 K 또는 R로 치환되고;
    제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
    제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제203 부위의 아미노산이 I로 치환되고;
    제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 175 아미노산이 G로 치환되고;
    제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
    제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
    제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
    제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
    제173 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
    제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고;
    제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
    제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
    제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되고;
    제132 부위의 아미노산이 L로 치환되고, 제133 부위의 아미노산이 V로 치환되고, 제173 부위의 아미노산이 G 또는 S로 치환되고, 제175 부위의 아미노산이 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산이 R로 치환되는 것으로부터 선택된 아미노산의 치환의 조합을 포함하며;
    상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨지고, 상기 변형된 GluDH는, 개시 GluDH와 비교하여 L-글루포시네이트(L-glufosinate)를 생성하는 4-(하이드록시메틸포스피닐)-2-옥소부탄산 (4-(hydroxymethylphosphinyl)-2-oxobutanoic acid) (PPO) 및 아미노 공여체(amino donor)의 반응을 촉매하는 증가된 활성 및/또는 증가된 Vmax, 감소된 Km 또는 증가된 Vmax/Km을 갖는 것인 변형된 글루타메이트 탈수소효소 (glutamate dehydrogenase) (GluDH).
  2. 제1항에 있어서, 상기 개시 GluDH는 야생형(wildetype) GluDH인 것을 특징으로 하는 변형된 GluDH.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 개시 GluDH는 바실러스과(Bacillaceae)의 미생물, 바람직하게는 리시니바실러스(Lysinibacillus) 또는 바실러스(Bacillus)의 미생물로부터 유래될 수 있고, 보다 바람직하게는 리시니바실러스 스파에리쿠스(Lysinibacillus sphaericus) 또는 바실러스 벨레젠시스(Bacillus velezensis)로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 변형된 GluDH.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개시 GluDH는 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 변형된 GluDH.
  5. 서열번호 4-14, 16-19, 21, 22, 24, 25, 27-30, 32-48, 50, 51 및 53-72중 하나의 아미노산 서열을 포함하는 변형된 GluDH.
  6. 개시 GluDH와 비교하여 제173, 175 및 182 부위에서 치환을 포함하는 변형된 GluDH로서, 상기 제173 부위의 아미노산은 G로 치환되고, 제175 부위의 아미노산은 G로 치환되고, 제182 부위의 아미노산은 R로 치환되며, 상기 부위는 서열번호 1을 참조하여 번호가 매겨지며, 변형된 GluDH는 개시 GluDH와 비교하여 L-글루포시네이트를 생성하는 PPO 및 아미노 공여체의 반응을 촉매화하는 증가된 활성을 갖는 것인 변형된 GluDH.
  7. 제6항에 있어서, 상기 개시 GluDH는 야생형 GluDH인 것을 특징으로 하는 변형된 GluDH.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서, 상기 개시 GluDH는 바실러스과(Bacillaceae)의 미생물, 바람직하게는 리시니바실러스(Lysinibacillus) 또는 바실러스(Bacillus)의 미생물로부터 유래될 수 있고, 보다 바람직하게는 리시니바실러스 스파에리쿠스(Lysinibacillus sphaericus) 또는 바실러스 벨레젠시스(Bacillus velezensis)로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 변형된 GluDH.
  9. 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제9, 22, 23, 25, 31, 56, 124, 143, 199, 216, 242, 263, 339, 420, 431 및 437 부위로부터 선택된 하나 이상의 부위에서 아미노산의 치환을 추가로 포함하며, 상기 제9 부위의 아미노산은 S, L 또는 Y로 치환되고, 제22 부위의 아미노산은 W 또는 E로 치환되고, 제23 부위의 아미노산은 M으로 치환되고, 제25 부위의 아미노산은 D로 치환되고, 제31 부위의 아미노산은 H로 치환되고, 제56 부위의 아미노산은 Q로 치환되고, 제124 부위의 아미노산은 L로 치환되고, 제143 부위의 아미노산은 E로 치환되고, 제199 부위의 아미노산은 W 또는 Y로 치환되고, 제216 부위의 아미노산은 G로 치환되고, 제263 부위의 아미노산은 S로 치환되고, 제339 부위의 아미노산은 Q로 치환되고, 제420 부위의 아미노산은 R로 치환되고, 제431 부위의 아미노산은 S로 치환되고, 제437 부위의 아미노산은 K로 치환되는 것을 특징으로 하는 변형된 GluDH.
  10. 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제22, 56, 199 및 420 부위에서 아미노산의 치환을 추가로 포함하며, 제22 부위의 아미노산은 E로 치환되고, 제56 부위의 아미노산은 Q로 치환되고, 제199 부위의 아미노산은 Y로 치환되고, 제420 부위의 아미노산은 R로 치환되는 것을 특징으로 하는 변형된 GluDH.
  11. 제10항에 있어서, 제31, 124 및 216 부위로부터 선택되는 하나 이상의 부위에서 아미노산의 치환을 추가로 포함하며, 상기 제31 부위의 아미노산은 H로 치환되고, 제124 부위의 아미노산은 L로 치환되고, 제216 부위의 아미노산은 G로 치환되는 것을 특징으로 하는 변형된 GluDH.
  12. 제6항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개시 GluDH가 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 변형된 GluDH.
  13. 제12항에 있어서, L-글루포시네이트를 생성하기 위한 PPO 및 아미노 공여체의 반응을 촉매화하기 위해 상기 변형된 GluDH의 활성은 반응을 촉매화하기 위해 적어도 130% 이상의 서열번호 3의 활성인 것을 특징으로 하는 변형된 GluDH.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 변형된 GluDH를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  15. 제14항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터.
  16. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 변형된 GluDH, 제14항의 폴리뉴클레오티드 또는 제15항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  17. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 변형된 GluDH, 또는 제16항의 숙주 세포를 PPO와 접촉시키는 단계를 포함하는 L-글루포시네이트 생산 방법.
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WO2006015885A1 (en) * 2004-08-13 2006-02-16 University College Dublin, National University Of Ireland, Dublin Amino acid dehydrogenase-derived biocatalysts
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CN111057687B (zh) * 2019-05-23 2020-10-27 弈柯莱生物科技(上海)股份有限公司 一种l-谷氨酸脱氢酶突变体及其应用

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