WO2023058885A1 - 암 진단용 바이오마커 및 이의 용도 - Google Patents

암 진단용 바이오마커 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
WO2023058885A1
WO2023058885A1 PCT/KR2022/011996 KR2022011996W WO2023058885A1 WO 2023058885 A1 WO2023058885 A1 WO 2023058885A1 KR 2022011996 W KR2022011996 W KR 2022011996W WO 2023058885 A1 WO2023058885 A1 WO 2023058885A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
concentration
opn
lpc
hrg
ratio
Prior art date
Application number
PCT/KR2022/011996
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
김승구
김기태
Original Assignee
(주)이노베이션바이오
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by (주)이노베이션바이오 filed Critical (주)이노베이션바이오
Publication of WO2023058885A1 publication Critical patent/WO2023058885A1/ko

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/82—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving vitamins or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors

Definitions

  • the present invention relates to a biomarker for cancer diagnosis and its use, and more particularly, to complement component 7 (C7) in blood, dodecanoyl-L-carnitine (Dodecanoyl-L-carnitine, DC), rhizophosphatidylcholine (A composition for diagnosing or predicting cancer including a substance measuring the levels of two or more markers selected from the group consisting of Lysophosphatidylcholine (LPC), Histidine-Rich Glycoprotein (HRG), and Osteopontin, and cancer diagnosis or prognosis using the same It is about how to provide information about.
  • LPC Lysophosphatidylcholine
  • HRG Histidine-Rich Glycoprotein
  • Osteopontin Osteopontin
  • Cancer is a disease in which cells proliferate indefinitely and interfere with normal cell functions. Representative examples include liver cancer, lung cancer, stomach cancer, breast cancer, colon cancer, and ovarian cancer, but can occur in virtually any tissue.
  • cancer diagnosis was based on external changes in biological tissue due to the growth of cancer cells, but in recent years, detection of trace amounts of biomolecules present in tissues or cells of organisms such as blood, glyco chain, and DNA has been used. Diagnosis is being attempted. However, the most commonly used cancer diagnosis method is diagnosis using a tissue sample obtained through biopsy or imaging.
  • the biopsy causes great pain to the patient, is expensive, and takes a long time to diagnose.
  • the patient actually has cancer there is a risk that cancer metastasis may be induced during the biopsy process, and in the case of areas where a tissue sample cannot be obtained through biopsy, a suspected tissue may be surgically performed.
  • a disadvantage in that it is impossible to diagnose the disease before the extraction of the disease.
  • liver cancer is diagnosed when AFP is increased to 20 ng/mL or more, but the diagnosis using AFP has a disadvantage in that the sensitivity is as low as 40%. That is, since AFP-negative liver cancer accounts for 40% or more of all liver cancers, an additional marker that can more accurately and effectively increase the liver cancer diagnosis rate is needed.
  • AFP alpha-Fetoprotein
  • DCP Descarboxyprothrombin
  • PIVKA-II Prothrombin Induced by Vitamin K Absence II
  • glycosylated AFP versus total AFP (L3 fraction) distribution AFU (alpha fucosidase)
  • glypican 3 HSP-70.
  • DCP Descarboxyprothrombin
  • PIVKA-II Prothrombin Induced by Vitamin K Absence II
  • glycosylated AFP versus total AFP (L3 fraction) distribution glycosylated AFP versus total AFP (L3 fraction) distribution
  • AFU alpha fucosidase
  • glypican 3 HSP-70
  • lung cancer is one of the cancers with a high mortality rate worldwide, and currently, lung cancer is highly dependent on imaging methods (X-ray, CT, MRI, etc.).
  • imaging methods X-ray, CT, MRI, etc.
  • more than half of lung cancer patients are already inoperable at the time of discovery, and even if surgery is performed because it is judged that surgery is possible, complete resection is impossible in many of them. Therefore, in order to increase the cure rate of lung cancer, early diagnosis and treatment of lung cancer is most important, but detailed diagnosis of lung cancer is difficult because useful markers for diagnosis are limited. Therefore, there is a demand for the development of cancer-specific markers present in biological samples and methods for diagnosing cancer with high accuracy and precision using these markers.
  • C7 complement component 7
  • LPC Lysophosphatidylcholine
  • HRG Histidine-Rich Glycoprotein
  • OPN Osteopontin
  • an object of the present invention is to treat complement component 7 (C7), dodecanoyl-L-carnitine (DC), lysophosphatidylcholine (LPC), HRG (Complement Component 7, C7) in blood, plasma or serum.
  • a composition for diagnosing cancer containing a substance for measuring the levels of two or more markers selected from the group consisting of Histidine-Rich Glycoprotein) and Osteopontin (OPN), a kit for diagnosing cancer using the same, and providing information for diagnosing cancer to provide a way
  • Another object of the present invention is to treat complement component 7 (C7), dodecanoyl-L-carnitine (DC), lysophosphatidylcholine (LPC), and histidine (HRG) in blood, plasma or serum.
  • C7 complement component 7
  • DC dodecanoyl-L-carnitine
  • LPC lysophosphatidylcholine
  • HRG histidine
  • C7 complement component 7
  • DC dodecanoyl-L-carnitine
  • LPC lysophosphatidylcholine
  • HRG histidine
  • Osteopontin Osteopontin
  • a composition for predicting cancer prognosis containing a substance measuring the level of two or more markers selected from the group consisting of, a kit for diagnosing cancer prognosis using the same, and information for predicting cancer prognosis It is to provide a way to provide.
  • the present invention relates to Complement Component 7 (C7), Dodecanoyl-L-carnitine (DC), Lysophosphatidylcholine (LPC), Histidine-Rich Glycoprotein (HRG) and Osteopontin ( Includes two or more biomarkers selected from the group consisting of Osteopontin, OPN),
  • the biomarker is extracted from blood,
  • the blood may be whole blood, plasma or serum.
  • the cancer may be lung cancer, pancreatic cancer, biliary tract cancer, colon cancer, breast cancer, stomach cancer, brain tumor, kidney cancer, liver cancer or cervical cancer.
  • the lysophosphatidylcholine may be Lysophosphatidylcholine 16:0 (LPC16) or Lysophosphatidylcholine 18:0 (LPC18).
  • cancer when the cancer is lung cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration (DC + HRG + LPC) is 180 to 210, and if the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration in blood is less than the cutoff value It is lung cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration (HRG + LPC) is 170 to 220, and if the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration in the blood is less than the cutoff value, it is lung cancer,
  • the cutoff value for the product of the C7 concentration and the OPN concentration is 8200 to 9000, and if the ratio of the product of the C7 concentration and the OPN concentration in the blood is greater than the cutoff value, it is lung cancer,
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is 55 to 140, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is greater than the cutoff value, it is lung cancer,
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + LPC)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is 95 to 270, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is greater than the cutoff value, it is lung cancer;
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG + LPC)) of (the product of the C7 concentration and the OPN concentration): (the sum of the DC concentration, the HRG concentration, and the LPC concentration) is between 40 and 40. 101, and if the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration, HRG concentration, and LPC concentration) in the blood is greater than the cutoff value, it can be regarded as lung cancer.
  • the cancer when the cancer is liver cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration (DC + HRG + LPC) is 158 to 195, and if the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration in blood is less than the cutoff value It is liver cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration (HRG + LPC) is 140 to 175, and if the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration in blood is less than the cutoff value, it is liver cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the product of the C7 concentration and the OPN concentration is 11700 to 17900, and if the ratio of the product of the C7 concentration and the OPN concentration in blood is greater than the cutoff value, it is liver cancer,
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is 55 to 140, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is greater than the cutoff value, it is liver cancer.
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + LPC)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is 150 to 265, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is above the cutoff value, it is liver cancer,
  • the present invention provides a composition for diagnosing cancer comprising an agent for measuring the blood level of the biomarker composition for diagnosing cancer.
  • the agent for measuring the level of the C7, HRG or OPN marker is an agent for measuring the protein level, an antibody that specifically binds to a protein or peptide fragment of each marker, an interaction It may include proteins, ligands, nanoparticles or aptamers.
  • the preparation for measuring the level of the DC marker or LPC marker may be a preparation for mass spectrometry.
  • the present invention provides a kit for diagnosing cancer comprising an agent for measuring the blood level of the biomarker composition for diagnosing cancer.
  • the kit may be an enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) kit, a protein chip kit, a rapid kit, or a multiple reaction monitoring (MRM) kit.
  • ELISA enzyme linked immunosorbent assay
  • MRM multiple reaction monitoring
  • the present invention (a) Complement Component 7 (C7), dodecanoyl-L-carnitine (DC), lysophosphatidylcholine (LPC), HRG (Histidine) from the patient's blood Measuring the level of two or more biomarkers selected from the group consisting of -Rich Glycoprotein) and Osteopontin (OPN); and
  • the cancer may be lung cancer, pancreatic cancer, biliary tract cancer, colon cancer, breast cancer, stomach cancer, brain tumor, kidney cancer, liver cancer, or cervical cancer.
  • the blood in step (a) may be whole blood, plasma or serum.
  • the lysophosphatidylcholine may be Lysophosphatidylcholine 16:0 (LPC16) or Lysophosphatidylcholine 18:0 (LPC18).
  • cancer when the cancer is lung cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration (DC + HRG + LPC) is 180 to 210, and if the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration in blood is less than the cutoff value It is lung cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration (HRG + LPC) is 170 to 220, and if the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration in the blood is less than the cutoff value, it is lung cancer,
  • the cutoff value for the product of the C7 concentration and the OPN concentration is 8200 to 9000, and if the ratio of the product of the C7 concentration and the OPN concentration in the blood is greater than the cutoff value, it is lung cancer,
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is 55 to 140, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is greater than the cutoff value, it is lung cancer,
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + LPC)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is 95 to 270, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is greater than the cutoff value, it is lung cancer;
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG + LPC)) of (the product of the C7 concentration and the OPN concentration): (the sum of the DC concentration, the HRG concentration, and the LPC concentration) is between 40 and 40. 101, and if the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration, HRG concentration, and LPC concentration) in the blood is greater than or equal to the cut-off value, it can provide information that lung cancer is present.
  • the cancer when the cancer is liver cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration (DC + HRG + LPC) is 158 to 195, and if the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration in blood is less than the cutoff value It is liver cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration (HRG + LPC) is 140 to 175, and if the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration in blood is less than the cutoff value, it is liver cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the product of the C7 concentration and the OPN concentration is 11700 to 17900, and if the ratio of the product of the C7 concentration and the OPN concentration in blood is greater than the cutoff value, it is liver cancer,
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is 55 to 140, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is greater than the cutoff value, it is liver cancer.
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + LPC)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is 150 to 265, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is above the cutoff value, it is liver cancer,
  • the level of C7, HRG or OPN biomarkers measured in step (a) is protein chip analysis, immunoassay, ligand binding assay, MALDI-TOF (Matrix Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) analysis, SELDI-TOF (Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) analysis, radiation immunoassay, radioimmunodiffusion method, Oukteroni immunodiffusion method, rocket immunoelectrophoresis, tissue immunostaining, Complement immobilization assay, two-dimensional electrophoretic analysis, liquid chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS), LC-MS/MS (liquid chromatography-Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry), Western blot and ELISA (enzyme linked immunosorbent assay).
  • MALDI-TOF Microx Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry
  • SELDI-TOF Surface Enhanced Laser Desorption/I
  • the measurement of the level of the DC or LPC biomarker in step (a) can be obtained by mass spectrometry of a sample in blood, plasma or serum with a mass peak area, specifically, It is obtained through liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS), and the mass spectrometer may be any one of Triple TOF, Triple Quadrupole, and MALDI TOF capable of quantitative measurement.
  • mass spectrometry of a sample in blood, plasma or serum with a mass peak area
  • LC-MS liquid chromatography-mass spectrometry
  • the mass spectrometer may be any one of Triple TOF, Triple Quadrupole, and MALDI TOF capable of quantitative measurement.
  • the present invention relates to Complement Component 7 (C7), Dodecanoyl-L-carnitine (DC), Lysophosphatidylcholine (LPC), Histidine-Rich Glycoprotein (HRG) and Osteopontin (A biomarker composition for predicting cancer prognosis is provided, comprising two or more biomarkers selected from the group consisting of osteopontin (OPN), wherein the biomarkers are extracted from blood.
  • C7 Complement Component 7
  • DC Dodecanoyl-L-carnitine
  • LPC Lysophosphatidylcholine
  • HRG Histidine-Rich Glycoprotein
  • Osteopontin A biomarker composition for predicting cancer prognosis is provided, comprising two or more biomarkers selected from the group consisting of osteopontin (OPN), wherein the biomarkers are extracted from blood.
  • OPN osteopontin
  • the present invention provides a composition for predicting cancer prognosis comprising a substance for measuring the level of the biomarker for predicting cancer prognosis.
  • the present invention provides a kit for diagnosing cancer prognosis including a substance for measuring the level of the biomarker for predicting cancer prognosis.
  • the present invention provides a method for providing information for predicting cancer prognosis, comprising measuring the level of the biomarker for predicting cancer prognosis.
  • complement component 7 C7
  • DC dodecanoyl-L-carnitine
  • LPC lysophosphatidylcholine
  • HRG Histidine-Rich
  • 1(A) is data confirming the concentration of C7 in blood obtained from a lung cancer patient group (LC) and a normal control group (Nor). Numerical values in the figure are shown as mean ⁇ standard error of the mean (SEM) value, and N means the number of patients. Also, Specificity means specificity, and Sensitivity means sensitivity.
  • 1(B) is data confirming the concentration of DC in blood obtained from a lung cancer patient group and a normal control group.
  • 1(C) is data confirming the concentration of HRG in blood obtained from a lung cancer patient group and a normal control group.
  • Figure 1 (D) is data confirming the concentration of LPC in the blood obtained from lung cancer patient group and normal control group.
  • 2(A) is data showing DC concentration, HRG concentration, and LPC concentration in blood obtained from a lung cancer patient group and a normal control group as the sum of the DC concentration, HRG concentration, and LPC concentration (DC + HRG + LPC).
  • 2(B) is data showing the HRG concentration and LPC concentration in blood obtained from lung cancer patients and normal controls as the sum of the HRG concentration and LPC concentration (HRG + LPC).
  • 2(C) is data showing the C7 concentration and OPN concentration in the blood obtained from lung cancer patients and normal controls as the product of the C7 concentration and the OPN concentration (C7 ⁇ OPN).
  • 2(D) is data showing the C7 concentration, OPN concentration, and DC concentration in blood obtained from a lung cancer patient group and a normal control group as (C7 ⁇ OPN)/DC concentration ratio.
  • 2(E) is data showing the C7 concentration, OPN concentration, and HRG concentration in blood obtained from a lung cancer patient group and a normal control group as (C7 ⁇ OPN)/HRG concentration ratio.
  • 2(F) is data showing the concentration of C7, OPN, and LPC in blood obtained from lung cancer patients and normal controls as a (C7 ⁇ OPN)/LPC concentration ratio.
  • 3(A) is data showing concentration ratio of C7, OPN, DC, and HRG in blood obtained from a lung cancer patient group and a normal control group as (C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG) concentration ratio.
  • 3(B) is data showing concentrations of C7, OPN, DC, and LPC in blood obtained from a lung cancer patient group and a normal control group as (C7 ⁇ OPN)/(DC + LPC) concentration ratio.
  • FIG. 3(C) is data showing the C7 concentration, OPN concentration, HRG concentration, and LPC concentration in the blood obtained from lung cancer patients and normal controls as (C7 ⁇ OPN)/(HRG + LPC) concentration ratio.
  • 3(D) is data showing the C7 concentration, OPN concentration, DC concentration, HRG concentration, and LPC concentration in the blood obtained from lung cancer patients and normal controls as (C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG + LPC) concentration ratio.
  • 4(A) is data confirming the concentration of C7 in blood obtained from a liver cancer patient group (HC) and a normal control group (Nor).
  • 4(B) is data confirming the concentration of DC in blood obtained from a liver cancer patient group and a normal control group.
  • 4(C) is data confirming the concentration of HRG in blood obtained from a liver cancer patient group and a normal control group.
  • 4(D) is data confirming the concentration of OPN in blood obtained from a liver cancer patient group and a normal control group.
  • 4(E) is data confirming the concentration of LPC in blood obtained from a liver cancer patient group and a normal control group.
  • 5(A) is data showing DC concentration, HRG concentration, and LPC concentration in blood obtained from a liver cancer patient group and a normal control group as the sum of the DC concentration, HRG concentration, and LPC concentration (DC + HRG + LPC).
  • 5(B) is data showing the HRG concentration and LPC concentration in blood obtained from a liver cancer patient group and a normal control group as the sum of the HRG concentration and LPC concentration (HRG + LPC).
  • 5(C) is data showing the concentration of C7 and OPN in blood obtained from a liver cancer patient group and a normal control group as the product of the C7 concentration and the OPN concentration (C7 ⁇ OPN).
  • 5(D) is data showing the concentration of C7, OPN, and DC in blood obtained from a liver cancer patient group and a normal control group as a (C7 ⁇ OPN)/DC concentration ratio.
  • 5(E) is data showing the concentration of C7, OPN, and HRG in blood obtained from a liver cancer patient group and a normal control group in terms of (C7 ⁇ OPN)/HRG concentration ratio.
  • 5(F) is data showing concentrations of C7, OPN, and LPC in blood obtained from a liver cancer patient group and a normal control group as a (C7 ⁇ OPN)/LPC concentration ratio.
  • 6(A) is data showing concentrations of C7, OPN, DC, and HRG in blood obtained from a liver cancer patient group and a normal control group as (C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG) concentration ratio.
  • 6(B) is data showing concentrations of C7, OPN, DC, and LPC in blood obtained from a liver cancer patient group and a normal control group in terms of (C7 ⁇ OPN)/(DC + LPC) concentration ratio.
  • 6(C) is data showing concentrations of C7, OPN, HRG, and LPC in blood obtained from liver cancer patients and normal controls as a (C7 ⁇ OPN)/(HRG + LPC) concentration ratio.
  • 6(D) is data showing concentrations of C7, OPN, DC, HRG, and LPC in blood obtained from a liver cancer patient group and a normal control group as (C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG + LPC) concentration ratio.
  • complement C7 (Complement Component 7, C7)
  • dodecanoyl-L-carnitine Dodecanoyl-L-carnitine, DC
  • lysophosphatidylcholine LPC
  • HRG Histidine-Rich Glycoprotein
  • the biomarker is extracted from blood,
  • the blood may be whole blood, plasma or serum.
  • the cancer may be lung cancer, pancreatic cancer, biliary tract cancer, colon cancer, breast cancer, stomach cancer, brain tumor, kidney cancer, liver cancer, or cervical cancer, preferably liver cancer or lung cancer.
  • the lysophosphatidylcholine may be Lysophosphatidylcholine 16:0 (LPC16) or Lysophosphatidylcholine 18:0 (Lysophosphatidylcholine 18:0, LPC18).
  • the composition can diagnose cancer using one marker selected from the group consisting of C7, DC, LPC, HRG and OPN, preferably combining 2 to 5 markers, more preferably 'Combination of DC, HRG and LPC markers', 'Combination of HRG and LPC markers', 'Combination of C7 and OPN markers', 'Combination of C7, OPN and DC markers', 'Combination of C7, OPN and HRG markers' ', 'Combination of markers C7, OPN and LPC', 'Combination of markers C7, OPN, DC and HRG', 'Combination of markers C7, OPN, DC and LPC', 'Combination of markers C7, OPN, HRG and LPC' ', or 'a combination of C7, OPN, DC, HRG, and LPC markers' can be used to diagnose cancer.
  • one marker selected from the group consisting of C7, DC, LPC, HRG and OPN, preferably
  • the blood of a normal person, a lung cancer (LC) patient, and a liver cancer (HC) patient is obtained, respectively, and C7, DC, LPC, HRG, and OPN in the blood are obtained. Concentration was measured.
  • FIGS. 1 (A) to 1 (D) lung cancer
  • 4 (A) to 4 (E) liver cancer
  • the cancer is lung cancer
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration (DC + HRG + LPC) is 180 to 210, and if the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration in blood is less than the cutoff value It is lung cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration (HRG + LPC) is 170 to 220, and if the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration in the blood is less than the cutoff value, it is lung cancer,
  • the cutoff value for the product of the C7 concentration and the OPN concentration is 8200 to 9000, and if the ratio of the product of the C7 concentration and the OPN concentration in the blood is greater than the cutoff value, it is lung cancer,
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is 55 to 140, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is greater than the cutoff value, it is lung cancer,
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + LPC)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is 95 to 270, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is greater than the cutoff value, it is lung cancer;
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG + LPC)) of (the product of the C7 concentration and the OPN concentration): (the sum of the DC concentration, the HRG concentration, and the LPC concentration) is between 40 and 40. 101, and if the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration, HRG concentration, and LPC concentration) in the blood is greater than the cutoff value, it can be regarded as lung cancer.
  • the cancer is liver cancer
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration (DC + HRG + LPC) is 158 to 195, and if the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration in blood is less than the cutoff value It is liver cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration (HRG + LPC) is 140 to 175, and if the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration in blood is less than the cutoff value, it is liver cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the product of the C7 concentration and the OPN concentration is 11700 to 17900, and if the ratio of the product of the C7 concentration and the OPN concentration in blood is greater than the cutoff value, it is liver cancer,
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is 55 to 140, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is greater than the cutoff value, it is liver cancer.
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + LPC)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is 150 to 265, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is above the cutoff value, it is liver cancer,
  • the present invention relates to a composition for diagnosing cancer comprising an agent for measuring the blood level of the biomarker composition for diagnosing cancer of the present invention.
  • composition for diagnosing cancer according to the present invention applies mutatis mutandis to the above-described ⁇ biomarker composition for diagnosing cancer>.
  • the agent for measuring the level of the C7, HRG or OPN marker may be an agent for measuring the protein level
  • the agent for measuring the level of the DC marker or LPC marker may be an agent for mass spectrometry.
  • the agent for measuring the protein level may be an antibody, an interacting protein, a ligand, nanoparticles, or an aptamer that specifically binds to a protein or peptide fragment of a C7, HRG or OPN marker.
  • an antibody refers to a substance that specifically binds to an antigen and causes an antigen-antibody reaction.
  • an antibody refers to an antibody that specifically binds to a biomarker of the present invention.
  • Antibodies of the present invention include both polyclonal antibodies, monoclonal antibodies and recombinant antibodies.
  • aptamer is a biopolymer substance that inhibits protein interaction through three-dimensional binding with a specific target protein in the form of single or double helix DNA or RNA, and is a variety of target molecules. has the characteristic of binding to Typically, aptamers can be small nucleic acids, 15-50 bases in length, that fold into defined secondary and tertiary structures, such as stem-loop structures. The aptamer preferably binds to a target high- or low-expression protein with a kd of less than 10 ⁇ 6 , 10 ⁇ 8 , 10 ⁇ 10 , or 10 ⁇ 12 .
  • the preparation for mass spectrometry refers to a preparation capable of analyzing the mass of a marker in blood, plasma or serum, and specifically, a preparation capable of performing liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS).
  • LC-MS liquid chromatography-mass spectrometry
  • the present invention relates to a kit for diagnosing cancer comprising an agent for measuring the blood level of the biomarker composition for diagnosing cancer of the present invention.
  • composition for diagnosing cancer according to the present invention applies mutatis mutandis to the above-described ⁇ biomarker composition for diagnosing cancer>.
  • the kit may be prepared by a conventional manufacturing method known in the art.
  • the kit may include, for example, a freeze-dried antibody, a buffer, a stabilizer, and an inactive protein.
  • the kit may further include a detectable label.
  • detectable label means an atom or molecule that allows specific detection of a molecule containing a label among molecules of the same kind without a label.
  • the detectable label may be attached to an antibody, interacting protein, ligand, nanoparticle, or aptamer that specifically binds to the protein or fragment thereof.
  • the detectable label may include a radionuclide, a fluorophore, or an enzyme.
  • the kit may be used according to various immunoassay methods or immunostaining methods known in the art.
  • the immunoassay or immunostaining method may include radioimmunoassay, radioimmunoprecipitation, immunoprecipitation, ELISA, capture-ELISA, inhibition or competition assay, sandwich assay, flow cytometry, immunofluorescence staining, and immunoaffinity purification.
  • the kit may be an enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) kit, a protein chip kit, a rapid kit, or a multiple reaction monitoring (MRM) kit.
  • ELISA enzyme linked immunosorbent assay
  • MRM multiple reaction monitoring
  • complement C7 (Complement Component 7, C7), dodecanoyl-L-carnitine (Dodecanoyl-L-carnitine, DC), lysophosphatidylcholine (LPC) from patient's blood Measuring the level of two or more biomarkers selected from the group consisting of HRG (Histidine-Rich Glycoprotein) and Osteopontin (OPN); and
  • the cancer may be lung cancer, pancreatic cancer, biliary tract cancer, colon cancer, breast cancer, stomach cancer, brain tumor, kidney cancer, liver cancer, or cervical cancer, preferably liver cancer or lung cancer.
  • the lysophosphatidylcholine may be Lysophosphatidylcholine 16:0 (LPC16) or Lysophosphatidylcholine 18:0 (Lysophosphatidylcholine 18:0, LPC18).
  • the method for providing information for diagnosing cancer when the cancer is lung cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration (DC + HRG + LPC) is 180 to 210, and if the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration in blood is less than the cutoff value It is lung cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration (HRG + LPC) is 170 to 220, and if the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration in the blood is less than the cutoff value, it is lung cancer,
  • the cutoff value for the product of the C7 concentration and the OPN concentration is 8200 to 9000, and if the ratio of the product of the C7 concentration and the OPN concentration in the blood is greater than the cutoff value, it is lung cancer,
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is 55 to 140, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is greater than the cutoff value, it is lung cancer,
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + LPC)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is 95 to 270, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is greater than the cutoff value, it is lung cancer;
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG + LPC)) of (the product of the C7 concentration and the OPN concentration): (the sum of the DC concentration, the HRG concentration, and the LPC concentration) is between 40 and 40. 101, and if the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration, HRG concentration, and LPC concentration) in the blood is greater than or equal to the cut-off value, it can provide information that lung cancer is present.
  • the cancer is liver cancer
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration (DC + HRG + LPC) is 158 to 195, and if the ratio of the sum of the DC concentration, HRG concentration and LPC concentration in blood is less than the cutoff value It is liver cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration (HRG + LPC) is 140 to 175, and if the ratio of the sum of the HRG concentration and the LPC concentration in blood is less than the cutoff value, it is liver cancer,
  • the cutoff value for the ratio of the product of the C7 concentration and the OPN concentration is 11700 to 17900, and if the ratio of the product of the C7 concentration and the OPN concentration in blood is greater than the cutoff value, it is liver cancer,
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + HRG)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is 55 to 140, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and HRG concentration) is greater than the cutoff value, it is liver cancer.
  • the cutoff value for the ratio ((C7 ⁇ OPN)/(DC + LPC)) of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is 150 to 265, and If the ratio of (product of C7 concentration and OPN concentration): (sum of DC concentration and LPC concentration) is above the cutoff value, it is liver cancer,
  • the level of C7, HRG or OPN biomarker in the blood in step (a) is measured by protein chip analysis, immunoassay, ligand binding assay, MALDI-TOF (Matrix Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) ) analysis, SELDI-TOF (Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) analysis, radiation immunoassay, radioimmunodiffusion method, Oukteroni immunodiffusion method, rocket immunoelectrophoresis, tissue immunostaining, complement fixation assay, 2 Dimensional electrophoretic analysis, liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS), LC-MS/MS (liquid chromatography-Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry), Western blot and ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) It can be done using
  • the measurement of the level of DC or LPC biomarker in blood in step (a) can be obtained by mass spectrometry of a sample in blood, plasma or serum with a mass peak area, specifically, liquid chromatography- It can be obtained through mass spectrometry (LC-MS).
  • the mass spectrometer may be any one of triple TOF, triple quadrupole, and MALDI TOF capable of quantitative measurement.
  • the present invention provides complement C7 (Complement Component 7, C7), dodecanoyl-L-carnitine (Dodecanoyl-L-carnitine, DC), lysophosphatidylcholine (LPC), HRG (Histidine-Rich Glycoprotein) ) and at least two biomarkers selected from the group consisting of osteopontin (OPN), wherein the biomarkers are extracted from blood to provide a biomarker composition for predicting cancer prognosis.
  • complement C7 Complement Component 7, C7
  • dodecanoyl-L-carnitine Dodecanoyl-L-carnitine, DC
  • LPC lysophosphatidylcholine
  • HRG Histidine-Rich Glycoprotein
  • OPN osteopontin
  • the present invention relates to a composition for predicting cancer prognosis comprising an agent for measuring the blood level of the biomarker composition for predicting cancer prognosis.
  • the present invention relates to a kit for diagnosing cancer prognosis comprising the composition for predicting cancer prognosis.
  • composition or kit for predicting cancer prognosis according to the present invention apply mutatis mutandis to the above-described ⁇ composition for diagnosis of cancer> or ⁇ kit for diagnosis of cancer>.
  • complement C7 (Complement Component 7, C7), dodecanoyl-L-carnitine (Dodecanoyl-L-carnitine, DC), lysophosphatidylcholine (LPC) from patient's blood Measuring the level of two or more biomarkers selected from the group consisting of HRG (Histidine-Rich Glycoprotein) and Osteopontin (OPN); and
  • a step of providing information indicating that the cancer prognosis is poor may be additionally provided, and the above-described ⁇ Method of Providing Information on Cancer Diagnosis> applies mutatis mutandis.
  • LC lung cancer
  • C7 enzyme-linked immunosorbent assay was performed to measure the amount of C7 protein.
  • the C7 ELISA kit used YN1203 ELISA Kit (INNOBATION BIO, Korea).
  • the separated plasma was diluted 200,000 times using the diluted solution in the ELISA kit.
  • standard materials for the preparation of the C7 standard curve were prepared according to the manufacturer's manual. The prepared samples and standards were placed in a C7 antibody-coated plate, sealed, and incubated at room temperature for 2 hours.
  • Plasma was separated from the blood sample, and standard materials for each concentration necessary for a DC (Sigma, USA) standard curve were prepared. 400 ⁇ l of lipid extraction buffer (Abnova, Taiwan) was added to 20 ⁇ l of plasma and standards, followed by vortexing and centrifugation (10,000g, 5min, 4° C.). After centrifugation, the supernatant was transferred to a new tube and dried for 12 to 16 hours using a concentrator. Add 50 ⁇ l of 100% methanol containing 0.1% formic acid to the dried metabolite extract, dissolve well using a vortex, and analyze using LC-MS/MS (liquid chromatography - mass spectrometry/mass spectrometry) proceeded.
  • LC-MS/MS liquid chromatography - mass spectrometry/mass spectrometry
  • the LC used was a Shimadzu LC 40 system, and the MS was an AB Sciex Triple Quad 5500+ system.
  • the MS was equipped with a Turbo Spray ion source.
  • Analytical samples were separated in a BEH C18 column (1.7um, 2.1 ⁇ 50mm; Waters) of a Shimadzu LC 40 system.
  • the solvent is a two-step linear gradient (solvent A, 0.1% FA in water; solvent B, 0.1% FA in 100% Acetonitrile; 5 to 55% solvent B 2.5 min, 55% solvent B 5.5 min, 55 to 95% solvent B 7.5 min, 95% solvent B 11 min, 95-5% solvent B 11.1 min and 5% solvent B 14.5 min) were used.
  • Mass spectrometry was performed using multiple reaction monitoring (MRM) mode.
  • MRM multiple reaction monitoring
  • the area of the mass peak having the same mass value was calculated in the mass spectrum of the same time period as that of the metabolite corresponding to DC passing through the liquid chromatography.
  • a standard curve was prepared using the mass peaks of the DC standard materials, and the mass peaks of each sample were substituted into the standard curve to measure the concentration of DC.
  • Plasma was separated from the blood sample, and standard materials for each concentration required for an LPC (Avanti, USA) standard curve were prepared. 400 ⁇ l of lipid extraction buffer (Abnova, Taiwan) was added to 20 ⁇ l of plasma and standards, followed by vortexing and centrifugation (10,000g, 5min, 4° C.).
  • the LC used was a Shimadzu LC 40 system, and the MS was an AB Sciex Triple Quad 5500+ system.
  • the MS was equipped with a Turbo Spray ion source.
  • Analytical samples were separated in a BEH C18 column (1.7um, 2.1 ⁇ 50mm; Waters) of a Shimadzu LC 40 system.
  • the solvent is a two-step linear gradient (solvent A, 0.1% FA in water; solvent B, 0.1% FA in 100% Acetonitrile; 5 to 55% solvent B 2.5 min, 55% solvent B 5.5 min, 55 to 95% solvent B 7.5 min, 95% solvent B 11 min, 95-5% solvent B 11.1 min and 5% solvent B 14.5 min) were used.
  • Mass spectrometry was performed using multiple reaction monitoring (MRM) mode.
  • MRM multiple reaction monitoring
  • the area of the mass peak having the same mass value was calculated in the mass spectrum of the same time period as that of the metabolite corresponding to LPC passing through the liquid chromatography.
  • a standard curve was prepared using the mass peaks of the LPC standard materials, and the mass peaks of each sample were substituted into the standard curve to measure the concentration of LPC.
  • HRG enzyme-linked immunosorbent assay was performed to measure the amount of HRG protein.
  • HRG ELISA kit the HRG ELISA Kit (My BioSource, USA) was used.
  • the separated plasma was diluted 100 times using the diluted solution in the ELISA kit.
  • standard materials for HRG standard curve production were prepared according to the manufacturer's manual.
  • the prepared samples and standards were placed in an HRG antibody-coated plate, sealed, and incubated at room temperature for 1 hour. After incubation for 1 hour, the contents of each plate well were removed and washed three times using a washing solution. After washing was completed, a detection antibody was added to the plate and incubated at room temperature for 1 hour. After 1 hour of incubation, the contents of each plate well were removed, and washing was repeated three times using a washing solution. After washing was completed, a substrate was added to the plate and incubated at room temperature for 30 minutes.
  • osteopontin ELISA enzyme-linked immunosorbent assay
  • the separated plasma was diluted 20-fold using the diluted solution in the ELISA kit. Before use, the ELISA kit was washed three times with a washing solution, and then standard materials for producing an osteopontin standard curve were prepared according to the manufacturer's manual. The prepared samples and standards were placed in an osteopontin antibody-coated plate, sealed, and incubated at room temperature at 60 rpm for 2 hours.
  • FIGS. 1 (A) to 1 (D) it was confirmed that lung cancer patients showed a difference in the concentration of markers in blood from normal people. Specifically, the concentration of C7 was higher than that of normal people, DC, Concentrations of LPC or HRG were found to be low.
  • a total of 117 patients were selected, and specifically, 100 normal and 17 hepatic cancer (HC) patients were selected and blood was collected. .
  • HC hepatic cancer
  • An enzyme-linked immunosorbent assay was performed in the same manner as in Example 1 to measure the amount of C7 protein.
  • Liquid chromatography was performed in the same manner as in Example 1, and the area of the mass peak having the same mass value was calculated in the mass spectrum of the same time period as that of the metabolite corresponding to DC passing through the liquid chromatography.
  • a standard curve was prepared using the mass peaks of the DC standard materials, and the mass peaks of each sample were substituted into the standard curve to measure the concentration of DC.
  • Liquid chromatography was performed in the same manner as in Example 1, and the area of the mass peak having the same mass value was calculated in the mass spectrum of the same time period as that of the metabolite corresponding to LPC passing through the liquid chromatography.
  • a standard curve was prepared using the mass peaks of the LPC standard materials, and the concentration of LPC was measured by substituting the mass peaks of each sample into the standard curve.
  • An enzyme-linked immunosorbent assay was performed in the same manner as in Example 1 to measure the amount of HRG protein.
  • An enzyme-linked immunosorbent assay was performed in the same manner as in Example 1 to measure the amount of osteopontin protein.
  • liver cancer patients showed a difference in concentration of blood markers from normal people. Specifically, the concentrations of C7 and OPN were higher than those of normal people. , the concentration of DC, LPC or HRG was found to be low.
  • complement component 7 C7
  • DC dodecanoyl-L-carnitine
  • LPC lysophosphatidylcholine
  • HRG Histidine-Rich
  • Osteopontin Osteopontin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

본 발명은 암 진단용 바이오마커 및 이의 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 혈액 내 보체 C7((Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin)로 구성된 군에서 선택된 2종 이상의 마커 수준을 측정하는 물질을 포함하는 암 진단 또는 예후 예측용 조성물 및 이를 이용한 암 진단 또는 예후에 대한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에서는 폐암 및 간암 환자의 혈액 내 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin, OPN)의 수준이 정상인과 다른 패턴을 보이는 것을 확인하였으며, 이들 마커를 조합하는 경우, 폐암 또는 간암을 포함한 다양한 암 진단능이 보다 향상되는 것을 확인하였으므로, 본 발명의 마커는 암 진단 및 예후 판단에 유용하게 활용할 수 있다.

Description

암 진단용 바이오마커 및 이의 용도
본 발명은 암 진단용 바이오마커 및 이의 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 혈액 내 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin)으로 구성된 군에서 선택된 2종 이상의 마커 수준을 측정하는 물질을 포함하는 암 진단 또는 예후 예측용 조성물 및 이를 이용한 암 진단 또는 예후에 대한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.
암은 세포가 무한히 증식해 정상적인 세포의 기능을 방해하는 질병으로, 간암, 폐암, 위암, 유방암, 대장암 및 난소암 등이 대표적이나, 실질적으로는 어느 조직(tissue)에서나 발생할 수 있다.
초창기 암 진단은 암 세포의 성장에 따른 생체 조직의 외적 변화에 근거하였으나, 근래에 들어 혈액, 당쇄(glyco chain), 디엔에이(DNA) 등 생물의 조직 또는 세포에 존재하는 미량의 생체 분자 검출을 이용한 진단이 시도되고 있다. 그러나 가장 보편적으로 사용되는 암 진단 방법은 생체 조직 검사를 통해 얻어진 조직 샘플을 이용하거나, 영상을 이용한 진단이다.
그 중 생체 조직 검사는 환자에게 큰 고통을 야기하며, 고비용이 들 뿐만 아니라, 진단까지 긴 시간이 소요되는 단점이 있다. 또한, 환자가 실제 암에 걸린 경우, 생체 조직 검사 과정 중 암의 전이가 유발될 수 있는 위험이 있으며, 생체 조직 검사를 통해 조직 샘플을 얻을 수 없는 부위의 경우, 외과적인 수술을 통해 의심되는 조직의 적출이 이루어지기 전에는 질병의 진단이 불가능한 단점이 있다.
특히, 간암(Hepatic cancer) 또는 간세포암(Hepatocellular carcinoma)은 성인 간암에서 가장 흔한 유형으로, 암으로 인한 사망원인 중 세 번째를 차지한다 (Stefaniuk P, et al., World J Gastroenterol., 16:418-424, 2010). 간암에서 가장 흔하게 사용하는 종양표지자는 알파-페토프로테인(alpha-Fetoprotein; AFP)으로, AFP는 성인에게서는 극히 낮은 농도(정상의 경우 7-10 ng/mL 이하)로만 존재하므로, 혈액 내부의 AFP 수준의 증가는 심각한 종양세포의 증가를 의미할 수 있다. 일반적으로 AFP가 20 ng/mL 이상으로 증가되어 있으면 간암으로 진단하나, AFP를 이용하는 진단은 민감도가 40% 정도로 낮은 단점이 있다. 즉, AFP 음성 간암이 전체 간암의 40% 이상 되기 때문에, 보다 정확하게 간암 진단율을 효과적으로 증가시킬 수 있는 추가적 마커가 필요한 실정이다.
그 외 진단 기준으로 확립되어 있지는 않으나 간암 진단에 도움이 되는 혈청 마커로는 DCP(Descarboxyprothrombin), PIVKA-II(Prothrombin Induced by Vitamin K Absence II), 글리코실화 AFP 대 총 AFP(L3 fraction) 분포, AFU(alpha fucosidase), 글리피칸 3(glypican 3), HSP-70 등이 있다. 그러나 각각은 예후 인자로서 의미를 가지는 것이 대부분이고, 단독으로 사용하였을 때 정확도가 낮아 아직 선별 검사로 사용되지 못하고 있으며, 이를 해결하기 위해 간암의 정확한 진단이 가능한 다양한 마커에 대한 연구가 이루어지고 있다 (대한민국 공개특허 제10-2014-0115490호; 대한민국 공개특허 제10-2016-0072027호).
또한, 폐암은 전세계적으로 높은 치사율을 보이는 암 중 하나로, 현재 폐암의 경우 이미징 방법 (X-ray, CT, MRI 등)에 의존도가 높은 편이다. 하지만, 폐암환자의 절반 이상은 발견 당시 이미 수술이 불가능하며 수술이 가능하다고 판단되어 수술을 시행하여도 그중 많은 수에서는 완전절제가 불가능한 상태이다. 그러므로 폐암의 완치율을 높이기 위해서는 폐암의 조기 진단 및 치료가 가장 중요하나, 폐암은 진단에 유용한 표지(marker)가 제한적이기 때문에 세부적인 진단이 어려운 문제점이 있다. 따라서, 생물학적 시료에 존재하는 암 특이적인 마커 및 이들 마커를 이용한 높은 정확도와 정밀도로 암을 진단할 수 있는 방법에 대한 개발이 요구되고 있다.
이에, 본 발명자들은 암을 보다 정확하게 진단할 수 있는 마커를 선별하기 위해 예의 노력한 결과, 간암 환자의 혈액 내 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin, OPN)의 수준이 정상인과 다른 패턴을 보이는 것을 확인하였으며, 이들 마커를 조합하는 경우, 폐암 및 간암을 포함한 다양한 암 진단능이 보다 향상되는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 혈액, 혈장 또는 혈청 내 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin, OPN)으로 구성된 군에서 선택된 2종 이상의 마커의 수준을 측정하는 물질을 포함하는 암 진단용 조성물, 이를 이용한 암 진단용 키트 및 암 진단을 위한 정보를 제공하는 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 혈액, 혈장 또는 혈청 내 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin, OPN)으로 구성된 군에서 선택된 2종 이상의 마커의 수준을 측정하는 물질을 포함하는 암 예후 예측용 조성물, 이를 이용한 암 예후 진단용 키트 및 암 예후 예측을 위한 정보를 제공하는 방법을 제공하는 데 있다.
상기 목적을 달성하기 위해,
본 발명은 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin, OPN)으로 구성된 군에서 선택된 2종 이상의 바이오마커를 포함하며,
상기 바이오마커는 혈액에서 추출한 것이고,
상기 바이오마커가
(1) DC, HRG 및 LPC인 경우, DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)로,
(2) HRG 및 LPC인 경우, HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)로,
(3) C7 및 OPN인 경우, C7 농도와 OPN 농도의 곱(C7 × OPN)으로,
(4) C7, OPN 및 DC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)로,
(5) C7, OPN 및 HRG인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)로,
(6) C7, OPN 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)로,
(7) C7, OPN, DC 및 HRG인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))로,
(8) C7, OPN, DC 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))로,
(9) C7, OPN, HRG 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))로, 또는
(10) C7, OPN, DC, HRG 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))로 암을 진단하는 것을 특징으로 하는 암 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 있어서, 상기 혈액은 전혈, 혈장 또는 혈청일 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 있어서, 상기 암은 폐암, 췌장암, 담도암, 대장암, 유방암, 위암, 뇌종양, 신장암, 간암 또는 자궁경부암 일 수 있다.
본 발명의 바람직한 또다른 일실시예에 있어서, 상기 리조포스파티딜콜린(LPC)은 리조포스파티딜콜린 16:0(Lysophosphatidylcholine 16:0, LPC16) 또는 리조포스파티딜콜린 18:0(Lysophosphatidylcholine 18:0, LPC18)일 수 있다.
본 발명의 바람직한 또다른 일실시예에 있어서, 상기 암이 폐암인 경우,
(1) 상기 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 180 ~ 210 이며, 혈액 내 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 폐암인 것으로,
(2) 상기 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 170 ~ 220 이며, 혈액 내 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 폐암인 것으로,
(3) 상기 C7 농도와 OPN 농도의 곱(C7 × OPN)에 대한 컷오프 값은 8200 ~ 9000 이며, 혈액 내 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(4) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)에 대한 컷오프 값은 340 ~ 812 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(5) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)에 대한 컷오프 값은 66 ~ 194 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(6) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)에 대한 컷오프 값은 155 ~ 370 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(7) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))에 대한 컷오프 값은 55 ~ 140 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(8) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))에 대한 컷오프 값은 95 ~ 270 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(9) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 43 ~ 114 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로, 또는
(10) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 40 ~ 101 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로 볼 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 있어서, 상기 암이 간암인 경우,
(1) 상기 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 158 ~ 195 이며, 혈액 내 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 간암인 것으로,
(2) 상기 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 140 ~ 175 이며, 혈액 내 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 간암인 것으로,
(3) 상기 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율(C7 × OPN)에 대한 컷오프 값은 11700 ~ 17900 이며, 혈액 내 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(4) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)에 대한 컷오프 값은 410 ~ 903 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(5) 상기(C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)에 대한 컷오프 값은 77 ~ 176 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(6) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)에 대한 컷오프 값은 207 ~ 359 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(7) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))에 대한 컷오프 값은 55 ~ 140 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(8) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))에 대한 컷오프 값은 150 ~ 265 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(9) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 44 ~ 120 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로, 또는
(10) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 41 ~ 103 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로 볼 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 암 진단용 바이오마커 조성물의 혈액 내 수준을 측정하는 제제를 포함하는 암 진단용 조성물을 제공한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 있어서, 상기 C7, HRG 또는 OPN 마커의 수준을 측정하는 제제는 단백질 수준을 측정하는 제제로, 각 마커의 단백질 또는 또는 펩타이드 단편에 특이적으로 결합하는 항체, 상호작용 단백질, 리간드, 나노입자(nanoparticles) 또는 압타머(aptamer)를 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 있어서, 상기 DC 마커 또는 LPC 마커의 수준을 측정하는 제제는 질량 분석용 제제일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 암 진단용 바이오마커 조성물의 혈액 내 수준을 측정하는 제제를 포함하는 암 진단용 키트를 제공한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 있어서, 상기 키트는 ELISA(enzyme linked immunosorbent assay) 키트, 단백질 칩 키트, 래피드(rapid) 키트 또는 MRM(Multiple reaction monitoring) 키트일 수 있다.
또한, 본 발명은 (a) 환자의 혈액으로부터 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin, OPN)으로 구성된 군에서 선택된 2종 이상의 바이오마커의 수준을 측정하는 단계; 및
(b) 상기 바이오마커의 수준을 정상 대조군 시료와 비교하는 단계를 포함하며,
상기 (a) 단계의 바이오마커가
(1) DC, HRG 및 LPC인 경우, DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)로,
(2) HRG 및 LPC인 경우, HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)로,
(3) C7 및 OPN인 경우, C7 농도와 OPN 농도의 곱(C7 × OPN)으로,
(4) C7, OPN 및 DC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)로,
(5) C7, OPN 및 HRG인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)로,
(6) C7, OPN 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)로,
(7) C7, OPN, DC 및 HRG인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))로,
(8) C7, OPN, DC 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))로,
(9) C7, OPN, HRG 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))로, 또는
(10) C7, OPN, DC, HRG 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))로 측정하는 것을 특징으로 하는 암 진단을 위한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 있어서, 상기 암은 폐암, 췌장암, 담도암, 대장암, 유방암, 위암, 뇌종양, 신장암, 간암 또는 자궁경부암 일 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 있어서, 상기 (a) 단계의 혈액은 전혈, 혈장 또는 혈청일 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 있어서, 상기 리조포스파티딜콜린(LPC)은 리조포스파티딜콜린 16:0(Lysophosphatidylcholine 16:0, LPC16) 또는 리조포스파티딜콜린 18:0(Lysophosphatidylcholine 18:0, LPC18)일 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 있어서, 상기 암이 폐암인 경우,
(1) 상기 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 180 ~ 210 이며, 혈액 내 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 폐암인 것으로,
(2) 상기 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 170 ~ 220 이며, 혈액 내 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 폐암인 것으로,
(3) 상기 C7 농도와 OPN 농도의 곱(C7 × OPN)에 대한 컷오프 값은 8200 ~ 9000 이며, 혈액 내 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(4) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)에 대한 컷오프 값은 340 ~ 812 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(5) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)에 대한 컷오프 값은 66 ~ 194 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(6) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)에 대한 컷오프 값은 155 ~ 370 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(7) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))에 대한 컷오프 값은 55 ~ 140 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(8) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))에 대한 컷오프 값은 95 ~ 270 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(9) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 43 ~ 114 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로, 또는
(10) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 40 ~ 101 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로 정보를 제공할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 있어서, 상기 암이 간암인 경우,
(1) 상기 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 158 ~ 195 이며, 혈액 내 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 간암인 것으로,
(2) 상기 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 140 ~ 175 이며, 혈액 내 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 간암인 것으로,
(3) 상기 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율(C7 × OPN)에 대한 컷오프 값은 11700 ~ 17900 이며, 혈액 내 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(4) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)에 대한 컷오프 값은 410 ~ 903 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(5) 상기(C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)에 대한 컷오프 값은 77 ~ 176 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(6) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)에 대한 컷오프 값은 207 ~ 359 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(7) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))에 대한 컷오프 값은 55 ~ 140 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(8) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))에 대한 컷오프 값은 150 ~ 265 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(9) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 44 ~ 120 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로, 또는
(10) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 41 ~ 103 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로 정보를 제공할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 있어서, 상기 (a) 단계에서 C7, HRG 또는 OPN 바이오마커의 수준 측정은, 단백질 칩 분석, 면역측정법, 리간드 바인딩 어세이, MALDI-TOF(Matrix Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry)분석, SELDI-TOF(Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry)분석, 방사선 면역분석, 방사 면역 확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 조직면역 염색, 보체 고정 분석법, 2차원 전기영동 분석, 액상 크로마토그래피-질량분석(liquid chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS), LC-MS/MS(liquid chromatography-Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry), 웨스턴 블랏 및 ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)를 이용하여 수행할 수 있다.
본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 있어서, 상기 (a) 단계에서 DC 또는 LPC 바이오마커의 수준 측정은, 질량피크 면적으로 혈액, 혈장 또는 혈청 내 시료를 질량분석하여 얻을 수 있으며, 구체적으로, 액체크로마토그래피-질량분석기(LC-MS)를 통해 얻으며, 상기 질량분석기는 Triple TOF, Triple Quadrupole 및 정량성 측정이 가능한 MALDI TOF 중 어느 하나인 것일 수 있다.
다른 목적을 달성하기 위해,
본 발명은 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin, OPN)으로 구성된 군에서 선택된 2종 이상의 바이오마커를 포함하며, 상기 바이오마커는 혈액에서 추출한 것을 특징으로 하는 암 예후 예측용 바이오마커 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 암 예후 예측용 바이오마커의 수준을 측정하는 물질을 포함하는 암 예후 예측용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 암 예후 예측용 바이오마커의 수준을 측정하는 물질을 포함하는 암 예후 진단용 키트를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 암 예후 예측용 바이오마커의 수준을 측정하는 단계를 포함하는 암 예후 예측을 위한 정보를 제공하는 방법을 제공하는 데 있다.
본 발명에서는 폐암 및 간암 환자의 혈액 내 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin, OPN)의 수준이 정상인과 다른 패턴을 보이는 것을 확인하였으며, 이들 마커를 조합하는 경우, 폐암 또는 간암을 포함한 다양한 암 진단능이 보다 향상되는 것을 확인하였으므로, 본 발명의 마커는 암 진단 및 예후 판단에 유용하게 활용할 수 있다.
도 1(A)는 폐암 환자군(LC)과 정상 대조군(Nor)으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도를 확인한 데이터이다. 도면에서 수치는 평균(mean)± 표준 오차(standard error of the mean, SEM) 값으로 나타내었으며, N은 환자수를 의미한다. 또한 Specificity는 특이도, Sensitivity는 민감도를 의미한다.
도 1(B)는 폐암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 DC 농도를 확인한 데이터이다.
도 1(C)는 폐암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 HRG 농도를 확인한 데이터이다.
도 1(D)는 폐암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 LPC 농도를 확인한 데이터이다.
도 2(A)는 폐암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 DC 농도, HRG 농도 및 LPC 농도를 DC 농도, HRG 농도 및 LPC 농도의 합(DC + HRG + LPC)으로 나타낸 데이터이다.
도 2(B)는 폐암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 HRG 농도 및 LPC 농도를 HRG 농도 및 LPC 농도의 합(HRG + LPC)으로 나타낸 데이터이다.
도 2(C)는 폐암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도 및 OPN 농도를 C7 농도 및 OPN 농도의 곱(C7 × OPN)으로 나타낸 데이터이다.
도 2(D)는 폐암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도, OPN 농도 및 DC 농도를 (C7 × OPN)/DC 농도비로 나타낸 데이터이다.
도 2(E)는 폐암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도, OPN 농도 및 HRG 농도를 (C7 × OPN)/HRG 농도비로 나타낸 데이터이다.
도 2(F)는 폐암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도, OPN 농도 및 LPC 농도를 (C7 × OPN)/LPC 농도비로 나타낸 데이터이다.
도 3(A)는 폐암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도, OPN 농도, DC 농도 및 HRG 농도를 (C7 × OPN)/(DC + HRG) 농도비로 나타낸 데이터이다.
도 3(B)는 폐암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도, OPN 농도, DC 농도 및 LPC 농도를 (C7 × OPN)/(DC + LPC) 농도비로 나타낸 데이터이다.
도 3(C)는 폐암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도, OPN 농도, HRG 농도 및 LPC 농도를 (C7 × OPN)/(HRG + LPC) 농도비로 나타낸 데이터이다.
도 3(D)는 폐암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도, OPN 농도, DC 농도, HRG 농도 및 LPC 농도를 (C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC) 농도비로 나타낸 데이터이다.
도 4(A)는 간암 환자군(HC)과 정상 대조군(Nor)으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도를 확인한 데이터이다.
도 4(B)는 간암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 DC 농도를 확인한 데이터이다.
도 4(C)는 간암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 HRG 농도를 확인한 데이터이다.
도 4(D)는 간암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 OPN 농도를 확인한 데이터이다.
도 4(E)는 간암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 LPC 농도를 확인한 데이터이다.
도 5(A)는 간암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 DC 농도, HRG 농도 및 LPC 농도를 DC 농도, HRG 농도 및 LPC 농도의 합(DC + HRG + LPC)으로 나타낸 데이터이다.
도 5(B)는 간암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 HRG 농도 및 LPC 농도를 HRG 농도 및 LPC 농도의 합(HRG + LPC)으로 나타낸 데이터이다.
도 5(C)는 간암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도 및 OPN 농도를 C7 농도 및 OPN 농도의 곱(C7 × OPN)으로 나타낸 데이터이다.
도 5(D)는 간암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도, OPN 농도 및 DC 농도를 (C7 × OPN)/DC 농도비로 나타낸 데이터이다.
도 5(E)는 간암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도, OPN 농도 및 HRG 농도를 (C7 × OPN)/HRG 농도비로 나타낸 데이터이다.
도 5(F)는 간암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도, OPN 농도 및 LPC 농도를 (C7 × OPN)/LPC 농도비로 나타낸 데이터이다.
도 6(A)는 간암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도, OPN 농도, DC 농도 및 HRG 농도를 (C7 × OPN)/(DC + HRG) 농도비로 나타낸 데이터이다.
도 6(B)는 간암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도, OPN 농도, DC 농도 및 LPC 농도를 (C7 × OPN)/(DC + LPC) 농도비로 나타낸 데이터이다.
도 6(C)는 간암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도, OPN 농도, HRG 농도 및 LPC 농도를 (C7 × OPN)/(HRG + LPC) 농도비로 나타낸 데이터이다.
도 6(D)는 간암 환자군과 정상 대조군으로부터 수득한 혈액 내 C7 농도, OPN 농도, DC 농도, HRG 농도 및 LPC 농도를 (C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC) 농도비로 나타낸 데이터이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
암 진단용 바이오마커 조성물
본 발명은 일관점에서, 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin, OPN)으로 구성된 군에서 선택된 2종 이상의 바이오마커를 포함하며,
상기 바이오마커는 혈액에서 추출한 것이고,
상기 바이오마커가
(1) DC, HRG 및 LPC인 경우, DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)로,
(2) HRG 및 LPC인 경우, HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)로,
(3) C7 및 OPN인 경우, C7 농도와 OPN 농도의 곱(C7 × OPN)으로,
(4) C7, OPN 및 DC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)로,
(5) C7, OPN 및 HRG인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)로,
(6) C7, OPN 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)로,
(7) C7, OPN, DC 및 HRG인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))로,
(8) C7, OPN, DC 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))로,
(9) C7, OPN, HRG 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))로, 또는
(10) C7, OPN, DC, HRG 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))로 암을 진단하는 것을 특징으로 하는 암 진단용 바이오마커 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 있어서, 상기 혈액은 전혈, 혈장 또는 혈청일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 암은 폐암, 췌장암, 담도암, 대장암, 유방암, 위암, 뇌종양, 신장암, 간암 또는 자궁경부암일 수 있으며, 바람직하게는 간암 또는 폐암일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 리조포스파티딜콜린(LPC)은 리조포스파티딜콜린 16:0(Lysophosphatidylcholine 16:0, LPC16) 또는 리조포스파티딜콜린 18:0(Lysophosphatidylcholine 18:0, LPC18)일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 C7, DC, LPC, HRG 및 OPN으로 구성된 군에서 선택된 하나의 마커를 이용하여 암을 진단할 수 있으며, 바람직하게는 2 ~ 5개의 마커를 조합하여, 더 바람직하게는 'DC, HRG 및 LPC 마커의 조합', 'HRG 및 LPC 마커의 조합', 'C7 및 OPN 마커의 조합', 'C7, OPN 및 DC 마커의 조합', 'C7, OPN 및 HRG 마커의 조합', 'C7, OPN 및 LPC 마커의 조합', 'C7, OPN, DC 및 HRG 마커의 조합', 'C7, OPN, DC 및 LPC 마커의 조합', 'C7, OPN, HRG 및 LPC 마커의 조합', 또는 'C7, OPN, DC, HRG 및 LPC 마커의 조합'을 이용하여 암을 진단할 수 있다.
본 발명의 구체적인 일구현예에서는, 정상인(Normal), 폐암(Lung cancer, LC) 환자, 간암(Hepatic cancer; HC) 환자의 혈액을 각각 수득하여, 혈액 내 C7, DC, LPC, HRG, 및 OPN 농도를 측정하였다.
그 결과, 도 1(A) 내지 도 1(D)(폐암) 및 도 4(A) 내지 도 4(E)(간암)에 나타난 바와 같이, 폐암 또는 간암 환자의 경우, 정상인과 혈액 내 마커의 농도 차이를 보이는 것을 확인하였다.
구체적으로,
혈액 내 C7 바이오마커의 농도가 정상 대조군에 비해 높은 경우;
혈액 내 OPN 바이오마커의 농도가 정상 대조군에 비해 높은 경우;
혈액 내 DC 바이오마커의 농도가 정상 대조군에 낮은 경우;
혈액 내 LPC 바이오마커의 농도가 정상 대조군에 낮은 경우; 또는
혈액 내 HRG 마커의 농도가 정상 대조군에 비해 낮은 경우; 암인 것으로 볼 수 있다.
보다 바람직하게는, 상기 암이 폐암인 경우,
(1) 상기 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 180 ~ 210 이며, 혈액 내 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 폐암인 것으로,
(2) 상기 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 170 ~ 220 이며, 혈액 내 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 폐암인 것으로,
(3) 상기 C7 농도와 OPN 농도의 곱(C7 × OPN)에 대한 컷오프 값은 8200 ~ 9000 이며, 혈액 내 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(4) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)에 대한 컷오프 값은 340 ~ 812 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(5) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)에 대한 컷오프 값은 66 ~ 194 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(6) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)에 대한 컷오프 값은 155 ~ 370 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(7) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))에 대한 컷오프 값은 55 ~ 140 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(8) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))에 대한 컷오프 값은 95 ~ 270 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(9) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 43 ~ 114 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로, 또는
(10) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 40 ~ 101 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로 볼 수 있다.
또한, 상기 암이 간암인 경우,
(1) 상기 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 158 ~ 195 이며, 혈액 내 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 간암인 것으로,
(2) 상기 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 140 ~ 175 이며, 혈액 내 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 간암인 것으로,
(3) 상기 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율(C7 × OPN)에 대한 컷오프 값은 11700 ~ 17900 이며, 혈액 내 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(4) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)에 대한 컷오프 값은 410 ~ 903 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(5) 상기(C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)에 대한 컷오프 값은 77 ~ 176 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(6) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)에 대한 컷오프 값은 207 ~ 359 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(7) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))에 대한 컷오프 값은 55 ~ 140 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(8) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))에 대한 컷오프 값은 150 ~ 265 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(9) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 44 ~ 120 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로, 또는
(10) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 41 ~ 103 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로 볼 수 있다.
암 진단용 조성물
본 발명은 다른 일관점에서, 본 발명의 암 진단용 바이오마커 조성물의 혈액 내 수준을 측정하는 제제를 포함하는 암 진단용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 암 진단용 조성물은 상술한 <암 진단용 바이오마커 조성물>을 준용한다.
본 발명에 있어서, 상기 C7, HRG 또는 OPN 마커의 수준을 측정하는 제제는 단백질 수준을 측정하는 제제일 수 있으며, 상기 DC 마커 또는 LPC 마커의 수준을 측정하는 제제는 질량 분석용 제제일 수 있다.
상기 단백질 수준을 측정하는 제제는, C7, HRG 또는 OPN 마커의 단백질 또는 또는 펩타이드 단편에 특이적으로 결합하는 항체, 상호작용 단백질, 리간드, 나노입자(nanoparticles) 또는 압타머(aptamer)일 수 있다.
본 발명에 사용된 용어 "항체"는 항원과 특이적으로 결합하여 항원-항체 반응을 일으키는 물질을 가리킨다. 본 발명의 목적상, 항체는 본 발명의 바이오마커에 대해 특이적으로 결합하는 항체를 의미한다. 본 발명의 항체는 다클론 항체, 단클론 항체 및 재조합 항체를 모두 포함한다.
본 발명에 사용된 용어 "압타머(Aptamer)"란 단일, 이중 나선의 DNA, RNA 형태로 특정 타깃 단백질과의 3차원적 결합을 통해 단백질의 상호작용을 억제하는 생고분자 물질로서, 다양한 표적분자에 결합하는 특징을 가진다. 전형적으로 압타머는 규정된 2차 및 3차 구조, 예컨대 스템-루프 구조로 접히는 15~50 염기 길이의작은 핵산일 수 있다. 압타머는 10-6, 10-8, 10-10, 또는 10-12 보다 적은 kd로 표적 고발현 단백질 또는 저발현 단백질과 결합하는 것이 바람직하다.
상기 질량 분석용 제제는 혈액, 혈장 또는 혈청 내 마커의 질량을 분석할 수 있는 제제로, 구체적으로, 액체크로마토그래피-질량분석기(LC-MS)를 수행할 수 있는 제제를 의미한다.
암 진단용 키트
본 발명은 또 다른 일관점에서, 본 발명의 암 진단용 바이오마커 조성물의 혈액 내 수준을 측정하는 제제를 포함하는 암 진단용 키트에 관한 것이다.
본 발명에 따른 암 진단용 조성물은 상술한 <암 진단용 바이오마커 조성물>을 준용한다.
상기 키트는 당업계에 알려져 있는 통상의 제조방법에 의해 제조될 수 있다. 상기 키트는 예를 들면, 동결 건조 형태의 항체와 완충액, 안정화제, 불활성 단백질 등을 포함할 수 있다.
상기 키트는 검출 가능한 표지를 더 포함할 수 있다. 용어 "검출 가능한 표지"는 표지가 없는 동일한 종류의 분자들 중에서 표지를 포함하는 분자를 특이적으로 검출하도록 하는 원자 또는 분자를 의미한다. 상기 검출 가능한 표지는 상기 단백질 또는 그의 단편에 특이적으로 결합하는 항체, 상호작용 단백질, 리간드, 나노입자, 또는 압타머에 부착된 것일 수 있다. 상기 검출 가능한 표지는 방사종(radionuclide), 형광원(fluorophore), 효소(enzyme)를 포함할 수 있다.
상기 키트는 당업계에 알려진 다양한 면역분석법 또는 면역염색법에 따라 이용될 수 있다. 상기 면역분석법 또는 면역염색법은 방사능면역분석, 방사능면역침전, 면역침전, ELISA, 캡처-ELISA, 억제 또는 경쟁 분석, 샌드위치 분석, 유세포 분석, 면역형광염색 및 면역친화성 정제를 포함할 수 있다. 바람직하게, 상기 키트는 ELISA(enzyme linked immunosorbent assay) 키트, 단백질 칩 키트, 래피드(rapid) 키트 또는 MRM(multiple reaction monitoring)인 것일 수 있다.
암 진단에 대한 정보 제공 방법
본 발명은 또 다른 일관점에서, (a) 환자의 혈액으로부터 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin, OPN)으로 구성된 군에서 선택된 2종 이상의 바이오마커의 수준을 측정하는 단계; 및
(b) 상기 바이오마커의 수준을 정상 대조군 시료와 비교하는 단계를 포함하며,
상기 (a) 단계의 바이오마커가
(1) DC, HRG 및 LPC인 경우, DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)로,
(2) HRG 및 LPC인 경우, HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)로,
(3) C7 및 OPN인 경우, C7 농도와 OPN 농도의 곱(C7 × OPN)으로,
(4) C7, OPN 및 DC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)로,
(5) C7, OPN 및 HRG인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)로,
(6) C7, OPN 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)로,
(7) C7, OPN, DC 및 HRG인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))로,
(8) C7, OPN, DC 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))로,
(9) C7, OPN, HRG 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))로, 또는
(10) C7, OPN, DC, HRG 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))로 측정하는 것을 특징으로 하는 암 진단을 위한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 있어서, 상기 암은 폐암, 췌장암, 담도암, 대장암, 유방암, 위암, 뇌종양, 신장암, 간암 또는 자궁경부암일 수 있으며, 바람직하게는 간암 또는 폐암일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 리조포스파티딜콜린(LPC)은 리조포스파티딜콜린 16:0(Lysophosphatidylcholine 16:0, LPC16) 또는 리조포스파티딜콜린 18:0(Lysophosphatidylcholine 18:0, LPC18)일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 암 진단을 위한 정보를 제공하는 방법은, 상기 암이 폐암인 경우,
(1) 상기 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 180 ~ 210 이며, 혈액 내 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 폐암인 것으로,
(2) 상기 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 170 ~ 220 이며, 혈액 내 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 폐암인 것으로,
(3) 상기 C7 농도와 OPN 농도의 곱(C7 × OPN)에 대한 컷오프 값은 8200 ~ 9000 이며, 혈액 내 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(4) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)에 대한 컷오프 값은 340 ~ 812 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(5) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)에 대한 컷오프 값은 66 ~ 194 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(6) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)에 대한 컷오프 값은 155 ~ 370 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(7) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))에 대한 컷오프 값은 55 ~ 140 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(8) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))에 대한 컷오프 값은 95 ~ 270 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
(9) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 43 ~ 114 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로, 또는
(10) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 40 ~ 101 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로 정보를 제공할 수 있다.
또한, 상기 암이 간암인 경우,
(1) 상기 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 158 ~ 195 이며, 혈액 내 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 간암인 것으로,
(2) 상기 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 140 ~ 175 이며, 혈액 내 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 간암인 것으로,
(3) 상기 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율(C7 × OPN)에 대한 컷오프 값은 11700 ~ 17900 이며, 혈액 내 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(4) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)에 대한 컷오프 값은 410 ~ 903 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(5) 상기(C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)에 대한 컷오프 값은 77 ~ 176 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(6) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)에 대한 컷오프 값은 207 ~ 359 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(7) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))에 대한 컷오프 값은 55 ~ 140 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(8) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))에 대한 컷오프 값은 150 ~ 265 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
(9) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 44 ~ 120 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로, 또는
(10) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 41 ~ 103 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로 정보를 제공할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 (a) 단계에서 혈액 내 C7, HRG 또는 OPN 바이오마커의 수준 측정은, 단백질 칩 분석, 면역측정법, 리간드 바인딩 어세이, MALDI-TOF(Matrix Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry)분석, SELDI-TOF(Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry)분석, 방사선 면역분석, 방사 면역 확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 조직면역 염색, 보체 고정 분석법, 2차원 전기영동 분석, 액상 크로마토그래피-질량분석(liquid chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS), LC-MS/MS(liquid chromatography-Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry), 웨스턴 블랏 및 ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)를 이용하여 수행할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 (a) 단계에서 혈액 내 DC 또는 LPC 바이오마커의 수준 측정은, 질량피크 면적으로 혈액, 혈장 또는 혈청 내 시료를 질량분석하여 수득할 수 있으며, 구체적으로, 액체크로마토그래피-질량분석기(LC-MS)를 통해 수득할 수 있다. 상기 질량분석기는 Triple TOF, Triple Quadrupole 및 정량성 측정이 가능한 MALDI TOF 중 어느 하나인 것일 수 있다.
암 예후 예측용 바이오마커
본 발명은 또 다른 일관점에서, 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin, OPN)으로 구성된 군에서 선택된 2종 이상의 바이오마커를 포함하며, 상기 바이오마커는 혈액에서 추출한 것을 특징으로 하는 암 예후 예측용 바이오마커 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 혈액 내 C7 바이오마커의 농도가 정상 대조군에 비해 높은 경우;
혈액 내 OPN 바이오마커의 농도가 정상 대조군에 비해 높은 경우;
혈액 내 DC 바이오마커의 농도가 정상 대조군에 낮은 경우;
혈액 내 LPC 바이오마커의 농도가 정상 대조군에 낮은 경우; 또는
혈액 내 HRG 마커의 농도가 정상 대조군에 비해 낮은 경우; 암 예후가 좋지 않은 것으로 볼 수 있으며, 구체적인 내용은 상술한 <암 진단용 바이오마커 조성물>을 준용한다.
암 예후 예측용 조성물 및 키트
본 발명은 또 다른 일관점에서, 상기 암 예후 예측용 바이오마커 조성물의 혈액 내 수준을 측정하는 제제를 포함하는 암 예후 예측용 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또 다른 일관점에서, 상기 암 예후 예측용 조성물을 포함하는 암 예후 진단용 키트에 관한 것이다.
본 발명에 따른 암 예후 예측용 조성물 또는 키트의 구체적인 내용은 상술한 <암 진단용 조성물> 또는 <암 진단용 키트>를 준용한다.
암 예후 예측을 위한 정보 제공 방법
본 발명은 또 다른 일관점에서, (a) 환자의 혈액으로부터 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin, OPN)으로 구성된 군에서 선택된 2종 이상의 바이오마커의 수준을 측정하는 단계; 및
(b) 상기 바이오마커의 수준을 정상 대조군 시료와 비교하는 단계를 포함하는 암 예후 예측을 위한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 혈액 내 C7 바이오마커의 농도가 정상 대조군에 비해 높은 경우;
혈액 내 OPN 바이오마커의 농도가 정상 대조군에 비해 높은 경우;
혈액 내 DC 바이오마커의 농도가 정상 대조군에 낮은 경우;
혈액 내 LPC 바이오마커의 농도가 정상 대조군에 낮은 경우; 또는
혈액 내 HRG 마커의 농도가 정상 대조군에 비해 낮은 경우; 암 예후가 나쁜 것으로 정보를 제공하는 단계를 추가로 제공할 수 있으며, 구체적인 내용은 상술한 <암 진단에 대한 정보 제공 방법>을 준용한다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다.
이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1 : 폐암 환자 진단
1-1 : 시료 준비
본 발명의 마커가 폐암을 진단할 수 있는지 확인하기 위해, 총 189명의 환자를 선별하였으며, 구체적으로, 정상인(Normal) 89명 및 폐암(Lung cancer, LC) 환자 100명을 선별하여 혈액을 채취하였다.
1-2 : 혈액 내 마커 농도 측정
<C7(Complement Component C7) 농도 측정>
상기 혈액 샘플에서 혈장을 각각 추출한 후 C7 효소결합면역흡착검사(ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay)를 수행하여 C7 단백질 양을 측정하였다. C7 ELISA 키트는 YN1203 ELISA Kit(INNOBATION BIO, 한국)를 사용하였다.
분리된 혈장을 ELISA 키트 내 희석용액을 이용해 20만배 희석하였다. 다음으로 C7 표준곡선 제작을 위한 표준물질들을 제조사 매뉴얼을 따라 제작하였다. 준비된 샘플과 표준물질들을 C7 항체가 코팅된 플레이트에 넣어주고 밀봉하여 2시간동안 실온에서 배양하였다.
2시간의 배양 후 각 플레이트 웰(well)의 내용물을 제거하고 세척액을 이용해 3회의 세척을 진행하였으며, 세척 완료 후 플레이트에 검출항체를 넣어준 후 1시간동안 실온에서 배양하였다.
1시간의 배양 후 각 플레이트 웰의 내용물을 제거하고 세척액을 이용해 3회의 세척을 반복 진행하였으며, 세척 완료 후 플레이트에 기질을 넣어준 후 20분 동안 실온에서 배양하였다.
20분의 배양 후 각 플레이트 웰에 정지용액(stop solution)용액을 넣어준 후 약하게 두드려주며 섞어준 후 마이크로 플레이트 리더기(의료용면역흡광측정장치, K01050.01)를 450nm로 설정하여 흡광도를 측정하였다. 측정된 흡광도는 표준물질로 제작된 표준곡선에 대입하여 알맞은 C7 단백질의 농도를 측정하였다.
<DC(Dodecanoyl-L-carnitine) 농도 측정>
상기 혈액 샘플에서 혈장을 분리하고, DC(Sigma, 미국) 표준곡선에 필요한 농도 별 표준물질들을 제작하였다. 20 ㎕의 혈장 및 표준물질들에 400 ㎕의 지질 추출 버퍼(lipid extraction buffer; Abnova, 대만)를 넣고 볼텍싱(vortexing) 후, 원심분리를(10,000g, 5min, 4℃)하였다. 원심 분리 후 상층액을 새로운 튜브에 모두 옮기고 농축기(Concentrator)를 이용해 12 ~ 16 시간 동안 건조시켜 주었다. 건조된 대사체 추출물에 50 ㎕의 0.1% 포름산이 포함된 100% 메탄올을 넣고 볼텍서(vortex)를 이용해 잘 녹인 후, LC-MS/MS(liquid chromatography - mass spectrometry/mass spectrometry)을 이용하여 분석을 진행하였다.
사용된 LC는 Shimadzu LC 40 system이며, MS는 AB Sciex Triple Quad 5500+ system였다. MS에는 Turbo Spray ion source를 장착하였다. 분석 시료는 Shimadzu LC 40 system의 BEH C18 column(1.7um, 2.1×50mm; Waters) 내에서 분리되었다. 용매는 two-step linear gradient(solvent A, 0.1% FA in water; solvent B, 0.1% FA in 100% Acetonitrile; 5 ~ 55% solvent B 2.5 min, 55% solvent B 5.5 min, 55 ~ 95% solvent B 7.5 min, 95% solvent B 11 min, 95 ~ 5% solvent B 11.1 min 및 5% solvent B 14.5 min)를 사용하였다.
MRM(Multiple reaction monitoring) 모드를 이용하여 질량분석(mass spectrometry, MS/MS)을 수행하였다. DC에 해당하는 대사체가 액체크로마토그래피를 통과해서 나오는 시간대와 동일한 시간대의 질량스펙트럼 중, 동일한 질량값을 갖는 질량피크의 면적을 계산하였다. DC 표준물질들의 질량피크를 이용해 표준곡선을 제작하고 각 시료들의 질량피크를 표준곡선에 대입하여 DC의 농도를 측정하였다.
<LPC16 농도 측정>
상기 혈액 샘플에서 혈장을 분리하고, LPC (Avanti, 미국) 표준곡선에 필요한 농도 별 표준물질들을 제작하였다. 20 ㎕의 혈장 및 표준물질들에 400 ㎕의 지질 추출 버퍼(lipid extraction buffer; Abnova, 대만)를 넣고 볼텍싱(vortexing) 후, 원심분리를(10,000g, 5min, 4℃)하였다.
원심 분리 후 상층액을 새로운 튜브에 모두 옮기고 농축기(Concentrator)를 이용해 12 ~ 16 시간 동안 건조시켜 주었다. 건조된 대사체 추출물에 50 ㎕의 0.1% 포름산이 포함된 100% 메탄올을 넣고 볼텍서(vortex)를 이용해 잘 녹인 후, LC-MS/MS(liquid chromatography - mass spectrometry/mass spectrometry)을 이용하여 분석을 진행하였다.
사용된 LC는 Shimadzu LC 40 system이며, MS는 AB Sciex Triple Quad 5500+ system였다. MS에는 Turbo Spray ion source를 장착하였다. 분석 시료는 Shimadzu LC 40 system의 BEH C18 column(1.7um, 2.1×50mm; Waters) 내에서 분리되었다. 용매는two-step linear gradient(solvent A, 0.1% FA in water; solvent B, 0.1% FA in 100% Acetonitrile; 5 ~ 55% solvent B 2.5 min, 55% solvent B 5.5 min, 55 ~ 95% solvent B 7.5 min, 95% solvent B 11 min, 95 ~ 5% solvent B 11.1 min 및 5% solvent B 14.5 min)를 사용하였다.
MRM(Multiple reaction monitoring) 모드를 이용하여 질량분석(mass spectrometry, MS/MS)을 수행하였다. LPC에 해당하는 대사체가 액체크로마토그래피를 통과해서 나오는 시간대와 동일한 시간대의 질량스펙트럼 중, 동일한 질량값을 갖는 질량피크의 면적을 계산하였다. LPC 표준물질들의 질량피크를 이용해 표준곡선을 제작하고 각 시료들의 질량피크를 표준곡선에 대입하여LPC의 농도를 측정하였다.
<HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 농도 측정>
상기 혈액 샘플에서 혈장을 각각 추출한 후 HRG 효소결합면역흡착검사(ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay)를 수행하여 HRG 단백질 양을 측정하였다. HRG ELISA 키트는 HRG ELISA Kit(My BioSource, 미국)를 사용하였다.
분리된 혈장을 ELISA 키트 내 희석용액을 이용해 100배 희석하였다. 다음으로 HRG 표준곡선 제작을 위한 표준물질들을 제조사 매뉴얼을 따라 제작하였다. 준비된 샘플과 표준물질들을 HRG 항체가 코팅된 플레이트에 넣어주고 밀봉하여 1시간동안 실온에서 배양하였다. 1시간의 배양 후 각 플레이트 웰의 내용물을 제거하고 세척액을 이용해 3회의 세척을 진행하였으며, 세척 완료 후 플레이트에 검출항체를 넣어준 후 1시간동안 실온에서 배양하였다. 1시간의 배양 후 각 플레이트 웰의 내용물을 제거하고 세척액을 이용해 3회의 세척을 반복 진행하였으며, 세척 완료 후 플레이트에 기질을 넣어준 후 30분 동안 실온에서 배양하였다.
30분의 배양 후 각 플레이트 웰에 정지용액(Stop solution)을 넣어준 후 약하게 두드려주며 섞어준 후 마이크로 플레이트 리더기(의료용면역흡광측정장치, K01050.01)를 450nm로 설정하여 흡광도를 측정하였다. 측정된 흡광도는 표준물질로 제작된 표준곡선에 대입하여 알맞은 HRG 단백질 양으로 변환되었다.
<오스테오폰틴(Osteopontin) 농도 측정>
상기 혈액 샘플에서 혈장을 각각 추출한 후 오스테오폰틴 효소결합면역흡착검사(ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay)를 수행하여 오스테오폰틴 단백질 양을 측정하였다. 오스테오폰틴 ELISA 키트는 Osteopontin Human ELISA Kit (Invitrogen, 미국)를 사용하였다.
분리된 혈장을 ELISA 키트 내 희석용액을 이용해 20배 희석하였다. 사용 전 ELISA 키트를 세척액을 이용해 3회의 세척을 진행한 다음, 오스테오폰틴 표준곡선 제작을 위한 표준물질들을 제조사 매뉴얼을 따라 제작하였다. 준비된 샘플과 표준물질들을 오스테오폰틴 항체가 코팅된 플레이트에 넣어주고 밀봉하여 2시간동안 실온에서 60 rpm으로 배양하였다.
2시간의 배양 후 각 플레이트 웰의 내용물을 제거하고 세척액을 이용해 3회의 세척을 진행하였으며, 세척 완료 후 플레이트에 비오틴-컨쥬게이트(Biotin-Conjugate)를 넣어준 후 1시간동안 실온에서 배양하였다. 1시간의 배양 후 각 플레이트 웰의 내용물을 제거하고 세척액을 이용해 3회의 세척을 반복 진행하였으며, 세척 완료 후 플레이트에 스트렙트아비딘-HRP(Streptavidin-HRP)를 넣어준 후 1시간동안 실온에서 배양하였다. 1시간의 배양 후 각 플레이트 웰의 내용물을 제거하고 세척액을 이용해 3회의 세척을 반복 진행하였다. 세척 완료 후 플레이트에 100 ㎕의 기질을 넣어준 후 30분 동안 실온에서 배양하였다.
30분의 배양 후 각 플레이트 웰에 100 ㎕의 정지용액(Stop solution)을 넣어준 후 약하게 두드려주며 섞어준 후 마이크로 플레이트 리더기(의료용면역흡광측정장치, K01050.01)를 450nm로 설정하여 흡광도를 측정하였다. 측정된 흡광도는 표준물질로 제작된 표준곡선에 대입하여 알맞은 오스테오폰틴 단백질 양으로 변환되었다.
그 결과, 도 1(A) 내지 도 1(D)에 나타난 바와 같이, 폐암 환자는 정상인과 혈액 내 마커의 농도 차이를 보이는 것을 확인하였으며, 구체적으로, 정상인에 비해 C7의 농도는 높고, DC, LPC 또는 HRG의 농도는 낮은 것으로 확인되었다.
또한, 5 종류의 마커를 이용하여 'DC, HRG 및 LPC 마커의 조합', 'HRG 및 LPC 마커의 조합', 'C7 및 OPN 마커의 조합', 'C7, OPN 및 DC 마커의 조합', 'C7, OPN 및 HRG 마커의 조합', 'C7, OPN 및 LPC 마커의 조합', 'C7, OPN, DC 및 HRG 마커의 조합', 'C7, OPN, DC 및 LPC 마커의 조합', 'C7, OPN, HRG 및 LPC 마커의 조합', 또는 'C7, OPN, DC, HRG 및 LPC 마커의 조합'을 이용하는 경우, 도 2(A) ~ 도 2(F) 및 도 3(A) ~ 도 3(D)에 나타난 바와 같이, 정상 대조군과 폐암 환자 사이에 농도비 차이가 뚜렷하게 나타나는 것을 확인하였다. 즉, 마커 단독보다는 2 종류 이상의 마커를 조합하는 경우, 폐암 진단능이 현저하게 증가하는 것을 확인하였다.
실시예 2 : 간암 환자 진단
2-1 : 시료 준비
본 발명의 마커가 간암을 진단할 수 있는지 확인하기 위해, 총 117명의 환자를 선별하였으며, 구체적으로, 정상인(Normal) 100명 및 간암(Hepatic cancer; HC) 환자 17명을 선별하여 혈액을 채취하였다.
2-2 : 혈액 내 마커 농도 측정
<C7(Complement Component C7) 농도 측정>
상기 실시예 1과 동일한 방법으로 효소결합면역흡착검사(ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay)를 수행을 수행하여 C7 단백질 양을 측정하였다.
<DC(Dodecanoyl-L-carnitine) 농도 측정>
상기 실시예 1과 동일한 방법으로 액체크로마토그래피를 수행하였으며, DC에 해당하는 대사체가 액체크로마토그래피를 통과해서 나오는 시간대와 동일한 시간대의 질량스펙트럼 중, 동일한 질량값을 갖는 질량피크의 면적을 계산하였다. DC 표준물질들의 질량피크를 이용해 표준곡선을 제작하고 각 시료들의 질량피크를 표준곡선에 대입하여 DC의 농도를 측정하였다.
<LPC16 농도 측정>
상기 실시예 1과 동일한 방법으로 액체크로마토그래피를 수행하였으며, LPC에 해당하는 대사체가 액체크로마토그래피를 통과해서 나오는 시간대와 동일한 시간대의 질량스펙트럼 중, 동일한 질량값을 갖는 질량피크의 면적을 계산하였다. LPC 표준물질들의 질량피크를 이용해 표준곡선을 제작하고 각 시료들의 질량피크를 표준곡선에 대입하여 LPC의 농도를 측정하였다.
<HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 농도 측정>
상기 실시예 1과 동일한 방법으로 효소결합면역흡착검사(ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay)를 수행하여 HRG 단백질 양을 측정하였다.
<오스테오폰틴(Osteopontin) 농도 측정>
상기 실시예 1과 동일한 방법으로 효소결합면역흡착검사(ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay)를 수행하여 오스테오폰틴 단백질 양을 측정하였다.
그 결과, 도 4(A) 내지 도 4(E)에 나타난 바와 같이, 간암 환자의 경우 정상인과 혈액 내 마커의 농도 차이를 보이는 것을 확인하였으며, 구체적으로, 정상인에 비해 C7 및 OPN의 농도는 높고, DC, LPC 또는 HRG의 농도는 낮은 것으로 확인되었다.
또한, 5 종류의 마커를 이용하여 'DC, HRG 및 LPC 마커의 조합', 'HRG 및 LPC 마커의 조합', 'C7 및 OPN 마커의 조합', 'C7, OPN 및 DC 마커의 조합', 'C7, OPN 및 HRG 마커의 조합', 'C7, OPN 및 LPC 마커의 조합', 'C7, OPN, DC 및 HRG 마커의 조합', 'C7, OPN, DC 및 LPC 마커의 조합', 'C7, OPN, HRG 및 LPC 마커의 조합', 또는 'C7, OPN, DC, HRG 및 LPC 마커의 조합'을 이용하는 경우 도 5(A) ~ 도 5(F) 및 도 6(A) ~ 도 6(D)에 나타난 바와 같이, 정상 대조군 및 간암 환자 사이에 농도비 차이가 뚜렷하게 나타나는 것을 확인하였다. 즉, 마커 단독보다는 2 종류 이상의 마커를 조합하는 경우, 간암 진단능이 현저하게 증가하는 것을 확인하였다.
본 발명에서는 폐암 및 간암 환자의 혈액 내 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin, OPN)로 구성된 마커를 조합하는 경우, 폐암 또는 간암을 포함한 다양한 암 진단능이 보다 향상되는 것을 확인하였으므로, 본 발명의 마커는 암 진단 및 예후 판단에 유용하게 활용할 수 있다.

Claims (16)

  1. 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin, OPN)으로 구성된 군에서 선택된 2종 이상의 바이오마커를 포함하며,
    상기 바이오마커는 혈액에서 추출한 것이고,
    상기 바이오마커가
    (1) DC, HRG 및 LPC인 경우, DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)로,
    (2) HRG 및 LPC인 경우, HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)로,
    (3) C7 및 OPN인 경우, C7 농도와 OPN 농도의 곱(C7 × OPN)으로,
    (4) C7, OPN 및 DC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)로,
    (5) C7, OPN 및 HRG인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)로,
    (6) C7, OPN 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)로,
    (7) C7, OPN, DC 및 HRG인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))로,
    (8) C7, OPN, DC 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))로,
    (9) C7, OPN, HRG 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))로, 또는
    (10) C7, OPN, DC, HRG 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))로 암을 진단하는 것을 특징으로 하는, 암 진단용 바이오마커 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 혈액은 전혈, 혈장 또는 혈청인 것을 특징으로 하는, 암 진단용 바이오마커 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 암은 폐암, 췌장암, 담도암, 대장암, 유방암, 위암, 뇌종양, 신장암, 간암 또는 자궁경부암인 것을 특징으로 하는, 암 진단용 바이오마커 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 리조포스파티딜콜린(LPC)은 리조포스파티딜콜린 16:0(Lysophosphatidylcholine 16:0, LPC16) 또는 리조포스파티딜콜린 18:0(Lysophosphatidylcholine 18:0, LPC18)인 것을 특징으로 하는, 암 진단용 바이오마커 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 암이 폐암인 경우,
    (1) 상기 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 180 ~ 210 이며, 혈액 내 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 폐암인 것으로,
    (2) 상기 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 170 ~ 220 이며, 혈액 내 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 폐암인 것으로,
    (3) 상기 C7 농도와 OPN 농도의 곱(C7 × OPN)에 대한 컷오프 값은 8200 ~ 9000 이며, 혈액 내 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
    (4) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)에 대한 컷오프 값은 340 ~ 812 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
    (5) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)에 대한 컷오프 값은 66 ~ 194 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
    (6) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)에 대한 컷오프 값은 155 ~ 370 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
    (7) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))에 대한 컷오프 값은 55 ~ 140 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
    (8) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))에 대한 컷오프 값은 95 ~ 270 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
    (9) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 43 ~ 114 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로, 또는
    (10) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 40 ~ 101 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로 보는 것을 특징으로 하는, 암 진단용 바이오마커 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 암이 간암인 경우,
    (1) 상기 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 158 ~ 195 이며, 혈액 내 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 간암인 것으로,
    (2) 상기 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 140 ~ 175 이며, 혈액 내 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 간암인 것으로,
    (3) 상기 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율(C7 × OPN)에 대한 컷오프 값은 11700 ~ 17900 이며, 혈액 내 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
    (4) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)에 대한 컷오프 값은 410 ~ 903 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
    (5) 상기(C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)에 대한 컷오프 값은 77 ~ 176 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
    (6) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)에 대한 컷오프 값은 207 ~ 359 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
    (7) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))에 대한 컷오프 값은 55 ~ 140 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
    (8) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))에 대한 컷오프 값은 150 ~ 265 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
    (9) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 44 ~ 120 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로, 또는
    (10) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 41 ~ 103 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로 보는 것을 특징으로 하는, 암 진단용 바이오마커 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 암 진단용 바이오마커 조성물의 혈액 내 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 암 진단용 조성물.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 암 진단용 바이오마커 조성물의 혈액 내 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 암 진단용 키트.
  9. (a) 환자의 혈액으로부터 보체 C7(Complement Component 7, C7), 도데카노일-L-카르니틴(Dodecanoyl-L-carnitine, DC), 리조포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine, LPC), HRG(Histidine-Rich Glycoprotein) 및 오스테오폰틴(Osteopontin, OPN)으로 구성된 군에서 선택된 2종 이상의 바이오마커의 수준을 측정하는 단계; 및
    (b) 상기 바이오마커의 수준을 정상 대조군 시료와 비교하는 단계를 포함하며,
    상기 (a) 단계의 바이오마커가
    (1) DC, HRG 및 LPC인 경우, DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)로,
    (2) HRG 및 LPC인 경우, HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)로,
    (3) C7 및 OPN인 경우, C7 농도와 OPN 농도의 곱(C7 × OPN)으로,
    (4) C7, OPN 및 DC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)로,
    (5) C7, OPN 및 HRG인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)로,
    (6) C7, OPN 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)로,
    (7) C7, OPN, DC 및 HRG인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))로,
    (8) C7, OPN, DC 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))로,
    (9) C7, OPN, HRG 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))로, 또는
    (10) C7, OPN, DC, HRG 및 LPC인 경우, (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))로 측정하는 것을 특징으로 하는, 암 진단을 위한 정보를 제공하는 방법.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 (a) 단계의 혈액은 전혈, 혈장 또는 혈청인 것을 특징으로 하는, 암 진단을 위한 정보를 제공하는 방법.
  11. 제9항에 있어서,
    상기 암은 폐암, 췌장암, 담도암, 대장암, 유방암, 위암, 뇌종양, 신장암, 간암 또는 자궁경부암인 것을 특징으로 하는, 암 진단을 위한 정보를 제공하는 방법.
  12. 제9항에 있어서,
    상기 (a) 단계의 리조포스파티딜콜린(LPC)은 리조포스파티딜콜린 16:0(Lysophosphatidylcholine 16:0, LPC16) 또는 리조포스파티딜콜린 18:0(Lysophosphatidylcholine 18:0, LPC18)인 것을 특징으로 하는, 암 진단을 위한 정보를 제공하는 방법.
  13. 제9항에 있어서,
    상기 암이 폐암인 경우,
    (1) 상기 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 180 ~ 210 이며, 혈액 내 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 폐암인 것으로,
    (2) 상기 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 170 ~ 220 이며, 혈액 내 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 폐암인 것으로,
    (3) 상기 C7 농도와 OPN 농도의 곱(C7 × OPN)에 대한 컷오프 값은 8200 ~ 9000 이며, 혈액 내 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
    (4) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)에 대한 컷오프 값은 340 ~ 812 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
    (5) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)에 대한 컷오프 값은 66 ~ 194 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
    (6) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)에 대한 컷오프 값은 155 ~ 370 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
    (7) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))에 대한 컷오프 값은 55 ~ 140 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
    (8) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))에 대한 컷오프 값은 95 ~ 270 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로,
    (9) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 43 ~ 114 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로, 또는
    (10) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 40 ~ 101 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 폐암인 것으로 정보를 제공하는 것을 특징으로 하는, 암 진단을 위한 정보를 제공하는 방법.
  14. 제9항에 있어서,
    상기 암이 간암인 경우,
    (1) 상기 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율(DC + HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 158 ~ 195 이며, 혈액 내 DC 농도, HRG농도 및 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 간암인 것으로,
    (2) 상기 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율(HRG + LPC)에 대한 컷오프 값은 140 ~ 175 이며, 혈액 내 HRG 농도와 LPC 농도의 합의 비율이 컷오프 값 이하이면 간암인 것으로,
    (3) 상기 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율(C7 × OPN)에 대한 컷오프 값은 11700 ~ 17900 이며, 혈액 내 C7 농도와 OPN 농도의 곱의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
    (4) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율((C7 × OPN)/DC)에 대한 컷오프 값은 410 ~ 903 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : DC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
    (5) 상기(C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율((C7 × OPN)/ HRG)에 대한 컷오프 값은 77 ~ 176 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : HRG 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
    (6) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율((C7 × OPN)/LPC)에 대한 컷오프 값은 207 ~ 359 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : LPC 농도의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
    (7) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG))에 대한 컷오프 값은 55 ~ 140 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 HRG 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
    (8) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + LPC))에 대한 컷오프 값은 150 ~ 265 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로,
    (9) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 44 ~ 120 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로, 또는
    (10) 상기 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율((C7 × OPN)/(DC + HRG + LPC))에 대한 컷오프 값은 41 ~ 103 이며, 혈액 내 (C7 농도 및 OPN 농도의 곱) : (DC 농도 , HRG 농도 및 LPC 농도의 합)의 비율이 컷오프 값 이상이면 간암인 것으로 정보를 제공하는 것을 특징으로 하는, 암 진단을 위한 정보를 제공하는 방법.
  15. 제9항에 있어서,
    상기 (a) 단계에서 보체 C7, HRG 또는 OPN 바이오마커의 수준 측정은, 단백질 칩 분석, 면역측정법, 리간드 바인딩 어세이, MALDI-TOF(Matrix Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry)분석, SELDI-TOF(Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry)분석, 방사선 면역분석, 방사 면역 확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 조직면역 염색, 보체 고정 분석법, 2차원 전기영동 분석, 액상 크로마토그래피-질량분석(liquid chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS), LC-MS/MS(liquid chromatography-Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry), 웨스턴 블랏 및 ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)를 이용하여 수행하는 것을 특징으로 하는, 암 진단을 위한 정보를 제공하는 방법.
  16. 제9항에 있어서,
    상기 (a) 단계에서 DC 바이오마커 또는 LPC 바이오마커의 수준 측정은, 액체크로마토그래피-질량분석기(LC-MS)를 통해 수득하는 것 특징으로 하는, 암 진단을 위한 정보를 제공하는 방법.
PCT/KR2022/011996 2021-10-06 2022-08-11 암 진단용 바이오마커 및 이의 용도 WO2023058885A1 (ko)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2021-0132381 2021-10-06
KR20210132381 2021-10-06
KR10-2022-0043778 2022-04-08
KR1020220043778A KR102421471B1 (ko) 2021-10-06 2022-04-08 암 진단용 바이오마커 및 이의 용도

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2023058885A1 true WO2023058885A1 (ko) 2023-04-13

Family

ID=82700896

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2022/011996 WO2023058885A1 (ko) 2021-10-06 2022-08-11 암 진단용 바이오마커 및 이의 용도
PCT/KR2022/011990 WO2023058883A1 (ko) 2021-10-06 2022-08-11 암 진단용 바이오마커 및 이의 용도
PCT/KR2022/011991 WO2023058884A1 (ko) 2021-10-06 2022-08-11 암 진단용 바이오마커 및 이의 용도

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2022/011990 WO2023058883A1 (ko) 2021-10-06 2022-08-11 암 진단용 바이오마커 및 이의 용도
PCT/KR2022/011991 WO2023058884A1 (ko) 2021-10-06 2022-08-11 암 진단용 바이오마커 및 이의 용도

Country Status (2)

Country Link
KR (3) KR102421466B1 (ko)
WO (3) WO2023058885A1 (ko)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102421466B1 (ko) * 2021-10-06 2022-07-18 (주)이노베이션바이오 암 진단용 바이오마커 및 이의 용도
KR20240054700A (ko) * 2022-10-19 2024-04-26 (주)이노베이션바이오 간암 진단용 바이오마커 및 간암 진단에 대한 인공지능 기반 정보 제공 방법

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120136583A1 (en) * 2009-07-08 2012-05-31 Worldwide Innovative Network Method for predicting efficacy of drugs in a patient
JP2013506142A (ja) * 2009-10-01 2013-02-21 フェノメノーム ディスカバリーズ インク 膵臓癌の血清ベースのバイオマーカー並びに疾患検出及び診断のためのその使用
KR20140115490A (ko) 2013-03-20 2014-10-01 서울대학교산학협력단 간암 진단용 바이오 마커
KR20160072027A (ko) 2014-12-12 2016-06-22 서울대학교산학협력단 간암 진단용 바이오마커 및 그 용도
WO2019076830A1 (en) * 2017-10-16 2019-04-25 Biopredictive METHOD OF PROGNOSIS AND MONITORING OF CANCER OF THE PRIMITIVE LIVER
KR102156217B1 (ko) * 2019-03-05 2020-09-15 연세대학교 산학협력단 대장암 진단용 지질 바이오마커 및 이의 용도
KR20200116410A (ko) * 2019-04-01 2020-10-12 국립암센터 고형암 진단 장치와 고형암 진단 정보 제공 방법
KR20210103212A (ko) * 2020-02-13 2021-08-23 (주) 프로탄바이오 폐암 진단용 다중 바이오마커 및 이의 용도
KR20210105270A (ko) * 2020-02-18 2021-08-26 (주)이노베이션바이오 동반진단용 바이오마커 조성물 및 이를 포함하는 동반진단용 키트
KR102421471B1 (ko) * 2021-10-06 2022-07-18 (주)이노베이션바이오 암 진단용 바이오마커 및 이의 용도

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9217749B2 (en) * 2006-05-31 2015-12-22 Lpath, Inc. Immune-derived moieties reactive against lysophosphatidic acid
EP2585833B1 (en) * 2010-06-23 2017-05-31 University of Louisville Research Foundation, Inc. Methods for detecting cancer
KR101334123B1 (ko) * 2011-10-14 2013-11-28 서울대학교산학협력단 소세포폐암 진단용 조성물 및 소세포폐암 진단키트
KR20180012397A (ko) * 2016-07-27 2018-02-06 주식회사 이스트컨트롤 디지털 음원 관리 시스템 및 방법, 디지털 음원 재생 장치 및 방법
KR102116178B1 (ko) * 2017-05-10 2020-05-27 서울대학교산학협력단 간암 고위험군의 간암 발병 모니터링 또는 진단용 바이오마커 및 그 용도
WO2019067092A1 (en) * 2017-08-07 2019-04-04 The Johns Hopkins University METHODS AND SUBSTANCES FOR THE EVALUATION AND TREATMENT OF CANCER

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120136583A1 (en) * 2009-07-08 2012-05-31 Worldwide Innovative Network Method for predicting efficacy of drugs in a patient
JP2013506142A (ja) * 2009-10-01 2013-02-21 フェノメノーム ディスカバリーズ インク 膵臓癌の血清ベースのバイオマーカー並びに疾患検出及び診断のためのその使用
KR20140115490A (ko) 2013-03-20 2014-10-01 서울대학교산학협력단 간암 진단용 바이오 마커
KR20160072027A (ko) 2014-12-12 2016-06-22 서울대학교산학협력단 간암 진단용 바이오마커 및 그 용도
WO2019076830A1 (en) * 2017-10-16 2019-04-25 Biopredictive METHOD OF PROGNOSIS AND MONITORING OF CANCER OF THE PRIMITIVE LIVER
KR102156217B1 (ko) * 2019-03-05 2020-09-15 연세대학교 산학협력단 대장암 진단용 지질 바이오마커 및 이의 용도
KR20200116410A (ko) * 2019-04-01 2020-10-12 국립암센터 고형암 진단 장치와 고형암 진단 정보 제공 방법
KR20210103212A (ko) * 2020-02-13 2021-08-23 (주) 프로탄바이오 폐암 진단용 다중 바이오마커 및 이의 용도
KR20210105270A (ko) * 2020-02-18 2021-08-26 (주)이노베이션바이오 동반진단용 바이오마커 조성물 및 이를 포함하는 동반진단용 키트
KR102421471B1 (ko) * 2021-10-06 2022-07-18 (주)이노베이션바이오 암 진단용 바이오마커 및 이의 용도

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
STEFANIUK P ET AL., WORLD J GASTROENTEROL., vol. 16, 2010, pages 418 - 424

Also Published As

Publication number Publication date
KR102421471B1 (ko) 2022-07-18
WO2023058884A1 (ko) 2023-04-13
WO2023058883A1 (ko) 2023-04-13
KR102421466B1 (ko) 2022-07-18
KR102421469B1 (ko) 2022-07-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2023058885A1 (ko) 암 진단용 바이오마커 및 이의 용도
WO2021194188A1 (ko) 사스-코로나바이러스-2에 중화 활성을 갖는 결합 분자
WO2020080891A1 (ko) 유방암 재발 예측 방법
WO2017010852A1 (ko) 염료 화합물
WO2018038352A2 (ko) 치매진단용 자가항체 바이오마커 및 이를 이용한 치매진단 방법
WO2020032294A1 (ko) 자성 나노입자를 이용한 바이오센서, 이를 이용하는 검출 장치 및 검출 방법
WO2015126030A1 (ko) 신규한 위암 진단방법
WO2019182371A1 (ko) 퇴행성 신경질환 진단용 조성물
WO2019177345A1 (ko) 초고감도 바이오마커 다중 검출 방법
WO2011157222A1 (zh) 淋巴瘤融合基因的联合检测方法及其诊断试剂盒
CN101768639A (zh) 一种甘蓝型油菜品种ssr指纹的快捷检测方法
WO2018070652A1 (ko) 당화혈색소 정량분석용 키트
WO2012026743A2 (ko) 라벨링제 및 이를 이용한 아미노산 서열 및 단백질 다중 정량 동시 분석방법
WO2019225923A1 (ko) 질환의 진단용 조성물
WO2019235824A1 (ko) Cox2 과발현 질환 진단용 조성물 및 이의 스크리닝 방법
WO2021182881A1 (ko) 유방암 진단용 다중 바이오마커 및 이의 용도
WO2022158877A1 (ko) 3차원 나노플라즈모닉 복합구조를 포함하는 기판, 이의 제조방법, 및 이를 이용한 신속 분석방법
WO2022211558A1 (ko) 사스-코로나바이러스-2 스파이크 단백질의 에피토프에 결합하는 사스-코로나바이러스-2 중화 결합 분자
WO2018016916A1 (ko) 레인 센서
WO2022216111A1 (ko) 암 진단용 조성물, 키트, 및 이를 이용한 암 진단 방법
WO2013100273A1 (ko) 방사선 피폭 진단용 마커 ｉｇｆｂｐ-5, 그 마커의 발현수준을 측정하는 방사선 피폭 진단용 조성물, 그 조성물을 포함하는 방사선 피폭 진단용 키트, 및 그 마커를 이용한 방사선 피폭을 진단하는 방법
WO2018079951A2 (ko) 새로운 레졸신아렌 기반의 양친매성 화합물 및 이의 활용
WO2020263063A1 (ko) 글루카곤, glp-1 및 gip 수용체 모두에 활성을 갖는 삼중 활성체 또는 이의 결합체의 간 질환에 대한 치료적 용도
WO2022055316A1 (ko) 양성 종양 또는 결절로부터 암을 구분하기 위한 바이오마커
WO2022103242A1 (ko) 면역항암제에 대한 치료 반응성을 예측하기 위한 바이오마커 및 이의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 22878706

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2022878706

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2022878706

Country of ref document: EP

Effective date: 20240506