WO2022202215A1 - ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法及び晶析装置 - Google Patents

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WO2022202215A1
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reduced coenzyme
crystals
ftu
temperature
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昴 谷崎
直生 大野
貴識 橋本
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株式会社カネカ
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    • C07C2601/12—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
    • C07C2601/16—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring the ring being unsaturated

Definitions

  • the present disclosure relates to a method for producing Form II reduced coenzyme Q10 crystals or a crystalline solid thereof and a crystallizer.
  • Coenzyme Q is an essential component that is widely distributed in living organisms, from bacteria to mammals, and is known as a component of the mitochondrial electron transport system in cells in living organisms. Coenzyme Q repeats oxidation and reduction in mitochondria, thereby serving as a transfer component in the electron transport system, and reduced coenzyme Q is known to have an antioxidant effect.
  • coenzyme Q10 which has 10 repeating structures in the side chain of coenzyme Q, is the main component, and about 40 to 90% of the coenzyme exists in vivo as a reduced form.
  • Physiological actions of coenzyme Q include activation of energy production by mitochondrial activation, activation of cardiac function, stabilization of cell membranes, and protection of cells by antioxidant action.
  • Patent Document 1 A general method for obtaining reduced coenzyme Q10 has already been disclosed (Patent Document 1). Furthermore, several methods are known for obtaining reduced coenzyme Q10 as crystals. For example, a method of crystallizing reduced coenzyme Q10 in an alcohol solution and/or a ketone solution to produce crystals (Patent Document 2), or adding a high-concentration liquid phase of reduced coenzyme Q10 to a poor solvent. A method (Patent Document 3) for crystallization by crystallization has been reported.
  • Patent Document 4 describes that crystal polymorphism is observed in reduced coenzyme Q10. Or called Form II type crystal) is much more stable than conventional reduced coenzyme Q10 (hereinafter, this crystal is called Form I type reduced coenzyme Q10 crystal, or Form I type crystal), and other It is also reported to have excellent physical properties.
  • Patent Document 5 describes a method for producing Form II-type reduced coenzyme Q10 crystals.
  • at least one organic solvent selected from the group consisting of alcohols, hydrocarbons, fatty acid esters and nitrogen compounds, and reduced coenzyme Q10 are contained, and the temperature is 32 to 43 C.
  • a method for producing Form II reduced coenzyme Q10 crystals comprising:
  • Patent Document 4 describes a method of crystallization under specific conditions as a method for obtaining Form II reduced coenzyme Q10 crystals. This method is not necessarily industrially optimal.
  • the method disclosed in Patent Document 5 aims to provide an efficient production method suitable for industrial-scale production for obtaining Form II reduced coenzyme Q10 crystals. A method focused primarily on temperature is disclosed.
  • the present inventors have extensively studied a method for producing Form II reduced coenzyme Q10 crystals or a crystalline solid thereof, and controlled the precipitation of Form II reduced coenzyme Q10 crystals based only on temperature. In some cases, even when Form II reduced coenzyme Q10 crystals are repeatedly produced under the same temperature conditions, there is a lot difference in the oxidation stability of the resulting Form II reduced coenzyme Q10 crystals or the crystalline solid thereof. found to be large.
  • the present inventors investigated a method for producing Form II reduced coenzyme Q10 crystals or a crystalline solid thereof, and found that temperature was controlled based on the rate of change in turbidity. It was found that Form II reduced coenzyme Q10 crystals or crystalline solids thereof can be stably produced. Therefore, the present disclosure provides a method for producing Form II reduced coenzyme Q10 crystals or a crystalline solid thereof, which enables stable production of Form II reduced coenzyme Q10 crystals or a crystalline solid thereof. for the purpose. It is another object of the present invention to provide a crystallizer that can be used in carrying out a method for producing Form II type reduced coenzyme Q10 crystals or a crystalline solid thereof.
  • Form II reduced coenzyme Q10 crystals in a mixed solution containing alcohol and reduced coenzyme Q10 When forming Form II reduced coenzyme Q10 crystals in a mixed solution containing alcohol and reduced coenzyme Q10, as the precipitation progresses, Form II reduced coenzyme Q10 crystals in the mixed solution increase. Turbidity increases due to increase.
  • the present inventors have found that Form II-type reduced coenzyme Q10 crystals with high oxidation stability or crystalline solids thereof can be stably produced by controlling the temperature based on the rate of change in turbidity. Found it.
  • Example aspects of this embodiment are described as follows. (1) Using a crystallizer provided with a crystallization unit, a turbidity detection unit capable of detecting turbidity in the crystallization unit, and a temperature control unit capable of adjusting the temperature in the crystallization unit, housing a liquid mixture containing alcohol and reduced coenzyme Q10 in a crystallization unit; adding Form II reduced coenzyme Q10 crystals as seed crystals to the mixed solution; Precipitating Form II reduced coenzyme Q10 crystals in the mixed solution after adding the seed crystals; The precipitation includes controlling the temperature by the temperature control unit based on the turbidity change rate obtained from the turbidity detection unit, A method for producing Form II type reduced coenzyme Q10 crystals or a crystalline solid thereof.
  • the control is a control that changes at least one of the temperature of the mixed liquid and the cooling rate of the mixed liquid based on the predetermined range of the turbidity change rate and the measured value of the turbidity change rate.
  • the predetermined range is a range determined based on the formazin turbidity (FTU) rate of change
  • the production method according to (4), wherein the monohydric alcohol having 1 to 5 carbon atoms is ethanol.
  • a crystallization unit capable of accommodating a mixed solution containing alcohol and reduced coenzyme Q10; a turbidity detection unit that detects a turbidity change rate of the mixed liquid contained in the crystallization unit; a temperature control unit capable of controlling the temperature in the crystallization unit; and a control unit controlling the adjustment of the temperature by the temperature control unit based on the turbidity change rate of the mixed liquid obtained from the turbidity detection unit.
  • a crystallizer for Form II reduced coenzyme Q10 crystals capable of accommodating a mixed solution containing alcohol and reduced coenzyme Q10; a turbidity detection unit that detects a turbidity change rate of the mixed liquid contained in the crystallization unit; a temperature control unit capable of controlling the temperature in the crystallization unit; and a control unit controlling the adjustment of the temperature by the temperature control unit based on the turbidity change rate of the mixed liquid obtained from the turbidity detection unit.
  • the control is a control that changes at least one of the temperature of the mixed liquid and the cooling rate of the mixed liquid based on the predetermined range of the turbidity change rate and the measured value of the turbidity change rate.
  • Crystallizer as described. the predetermined range is a range determined based on the formazin turbidity (FTU) rate of change,
  • FTU formazin turbidity
  • the crystallizer according to (8), wherein the predetermined range is set within a range of 2 to 45 FTU/min for a period from 1,000 to 10,000 FTU.
  • Form II reduced coenzyme Q10 crystals or a crystalline solid thereof of the present disclosure Form II reduced coenzyme Q10 crystals or a crystalline solid thereof can be produced stably.
  • the crystallizer of the present disclosure can be used when carrying out the production method.
  • FIG. 1 is a schematic diagram of one aspect of the crystallizer of the present embodiment.
  • reduced coenzyme Q10 may partially contain oxidized coenzyme Q10 as long as it contains reduced coenzyme Q10 as a main component.
  • the main component is, for example, 50% by weight or more, usually 60% by weight or more, preferably 70% by weight or more, more preferably 80% by weight or more, still more preferably 90% by weight or more, particularly preferably 95% by weight. More preferably, it means that the content is 98% by weight or more.
  • the ratio is the ratio of reduced coenzyme Q10 to the total amount of coenzyme Q10.
  • reduced coenzyme Q10 has two types of crystal polymorphs: the conventionally known Form I type and the recently discovered Form II type. Specifically, the melting point is around 48° C., and the diffraction angles (2 ⁇ 0.2°) are 3.1°, 18.7°, 19.0°, and 20° in powder X-ray (Cu—K ⁇ ) diffraction.
  • the crystal form of reduced coenzyme Q10 showing characteristic peaks at 2° and 23.0° is Form I type, and has a melting point of around 52°C. ⁇ 0.2°) Crystal form of reduced coenzyme Q10 showing characteristic peaks at 11.5°, 18.2°, 19.3°, 22.3°, 23.0°, and 33.3° is Form II type.
  • DSC differential scanning calorimetry
  • Crystal solid as used herein means a solid containing therein a portion having a crystalline structure and an amorphous component having no crystalline structure. That is, the "crystalline solid thereof” in "Form II reduced coenzyme Q10 crystal or crystalline solid thereof” means “a portion having a crystal structure of a Form II reduced coenzyme Q10 crystal and having a crystal structure. means "a solid that contains no amorphous component therein”.
  • the alcohol is preferably a monohydric alcohol having 1 to 5 carbon atoms.
  • monohydric alcohols having 1 to 5 carbon atoms include methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol and n-pentanol.
  • ethanol is particularly preferred because the saturation concentration of Form II crystals is sufficiently lower than the saturation concentration of Form I crystals and is easy to handle.
  • alcohol what was illustrated above may be used individually, and 2 or more types may be mixed and used.
  • the alcohol in the present specification may be a solvent containing alcohol as a main component, and may be a hydrous alcohol containing water.
  • alcohol has an alcohol concentration of, for example, 80% by weight or more, usually 90% by weight or more, preferably 95% by weight or more, more preferably 97% by weight or more, and still more preferably 99% by weight, based on the total amount of water and alcohol. It is at least 99.5% by weight, particularly preferably at least 99.5% by weight.
  • Alcohol having an alcohol concentration of 99.5% by weight or more means anhydrous alcohol.
  • the upper limit of the alcohol concentration is 100% by weight or less.
  • Ethanol has an ethanol concentration of, for example, 80% by weight or more, usually 90% by weight or more, preferably 95% by weight or more, more preferably 97% by weight or more, and still more preferably 99% by weight, based on the total amount of water and ethanol. It is at least 99.5% by weight, particularly preferably at least 99.5% by weight. Moreover, the upper limit of the ethanol concentration is 100% by weight or less.
  • the method for producing a Form II reduced coenzyme Q10 crystal or a crystalline solid thereof includes a crystallization unit, a turbidity detection unit capable of detecting turbidity in the crystallization unit, and a temperature in the crystallization unit.
  • a mixture containing alcohol and reduced coenzyme Q10 is placed in the crystallization unit using a crystallizer equipped with a temperature control unit capable of adjusting the adding coenzyme Q10 crystals as seed crystals, and precipitating Form II-type reduced coenzyme Q10 crystals in the mixed solution after adding the seed crystals, wherein the precipitation is detected by the turbidity detection unit.
  • a method for producing Form II reduced coenzyme Q10 crystals or a crystalline solid thereof comprising controlling the temperature with a temperature controller based on the obtained turbidity change rate.
  • the step of adding Form II reduced coenzyme Q10 crystals as seed crystals is referred to as the "seeding step”
  • the step of precipitating Form II reduced coenzyme Q10 crystals is referred to as the “crystal precipitation step”.
  • a crystallization unit In the method for producing Form II reduced coenzyme Q10 crystals according to the present embodiment, a crystallization unit, a turbidity detection unit capable of detecting turbidity in the crystallization unit, and a temperature capable of adjusting the temperature in the crystallization unit A crystallizer equipped with a control section is used.
  • a schematic diagram of one embodiment of a crystallizer is shown in FIG. In the crystallizer shown in FIG. 1, a state in which a liquid mixture 3 containing alcohol and reduced coenzyme Q10 is accommodated inside a crystallization unit 1 is illustrated.
  • the crystallization unit 1 is provided with a turbidity detection unit 5 (for example, a turbidity meter) and preferably with a temperature detection unit 7 (for example, a thermometer).
  • a temperature detection unit 7 for example, a thermometer
  • the temperature of the crystallization unit 1 can be adjusted by a temperature control unit composed of a constant temperature water bath 9 and a heat medium 11 (for example, water).
  • the turbidity detector 5 has a turbidity sensor 5a and a converter 5b that converts the signal detected by the turbidity sensor 5a into turbidity such as an FTU value.
  • the crystallizer shown in FIG. 1 preferably has stirring blades 15 for stirring the inside of the crystallization unit 1 .
  • the crystallizer shown in FIG. 1 is one aspect of the crystallizer for Form II reduced coenzyme Q10 crystals according to the present embodiment, which will be described later.
  • the control unit 13 is a control mechanism that controls temperature adjustment by the temperature control unit, and may be a central control mechanism that controls other conditions (for example, stirring conditions).
  • the control unit 13 can be configured by, for example, a software program for realizing various processes, a CPU that executes the software program, various hardware controlled by the CPU, and the like.
  • the control unit 13 is a computer including a CPU, an input/output circuit, and the like.
  • Programs, data, and control parameters required for the operation of the control unit 13 can be stored in a storage unit (not shown) in this embodiment.
  • the storage destinations of these programs and data are not particularly limited. These programs, data, and the like may be stored in a separately provided storage device such as a disk or flash memory. Alternatively, the information may be stored in an external server, storage unit, or the like that is communicatively connected.
  • the mixed liquid containing alcohol and reduced coenzyme Q10 accommodated in the crystallization unit is not particularly limited as long as it contains alcohol and reduced coenzyme Q10, and reduced coenzyme Q10 is dissolved in alcohol. It may be a homogeneous solution, or it may be a slurry in which reduced coenzyme Q10 is partly dissolved in alcohol but partly not dissolved but suspended. Enzyme Q10 is a homogeneous solution dissolved in alcohol.
  • the reduced coenzyme Q10 used in the mixture containing alcohol and reduced coenzyme Q10 may be in a crystalline or amorphous state, and its crystal polymorphism may be used. Therefore, conventionally known Form I reduced coenzyme Q10 can also be used. In addition, since it is possible to increase the purity by crystal precipitation, it may be an unpurified or partially purified reduced coenzyme Q10 containing impurities. Furthermore, an extract of reduced coenzyme Q10 obtained by a conventionally known method or a reaction solution containing reduced coenzyme Q10 obtained from oxidized coenzyme Q10 by a known reduction method may be used as it is or as necessary. Purified and/or solvent-substituted one can also be used as the mixed solution.
  • the mixed solution containing alcohol and reduced coenzyme Q10 may further contain organic solvents other than alcohol (including hydrous alcohol), but the alcohol content (alcohol purity ) is preferably 95% by weight or more, 97% by weight or more, or 99% by weight or more, and the upper limit is preferably 100% by weight or less. The alcohol purity is most preferably 99.5% by weight or higher.
  • organic solvents include at least one selected from the group consisting of hydrocarbons, fatty acid esters and nitrogen compounds.
  • the dissolved concentration of reduced coenzyme Q10 before addition of seed crystals in the mixed solution containing alcohol and reduced coenzyme Q10 is, for example, 2% by weight or more, preferably 3% by weight or more, and more preferably 5% by weight. Above, more preferably 7% by weight or more, particularly preferably 9% by weight or more.
  • the dissolved concentration of reduced coenzyme Q10 before addition of seed crystals is, for example, 50% by weight or less, preferably 45% by weight or less, more preferably 30% by weight or less, even more preferably 20% by weight or less, and particularly preferably 15% by weight. It is below.
  • a mixed solution containing alcohol and reduced coenzyme Q10 is prepared by heating a raw material mixture containing alcohol and reduced coenzyme Q10 to a temperature of, for example, 42° C. or higher to dissolve reduced coenzyme Q10. can get.
  • the temperature is preferably 70° C. or lower, more preferably 55° C. or lower.
  • the mixture containing the alcohol and the reduced coenzyme Q10 is preferably cooled to the temperature at which the seed crystals are added, which will be described later. .
  • the amount of Form II-type reduced coenzyme Q10 crystals to be added (the amount of seed crystals to be added) is not particularly limited, but the amount of reduced coenzyme Q10 (100 % by weight), preferably 0.1% by weight or more, more preferably 0.5% by weight or more, even more preferably 0.8% by weight or more, and particularly preferably 1% by weight or more.
  • the upper limit is not particularly limited, it is preferably 20% by weight or less, more preferably 4% by weight or less, relative to the amount (100% by weight) of reduced coenzyme Q10 in the mixed solution before adding seed crystals. 2% by weight or less is more preferable.
  • the reduced coenzyme Q10 crystals used as seed crystals may contain Form I reduced coenzyme Q10 crystals or amorphous forms, as long as they contain Form II reduced coenzyme Q10 crystals. However, it is preferable that the purity of Form II reduced coenzyme Q10 crystals is high.
  • Form II reduced coenzyme Q10 crystals for example, 50% by weight or more, preferably 75% by weight or more, more preferably 80% by weight or more, more preferably 90% by weight or more, are used as seed crystals. good.
  • the temperature of the mixed liquid at the time of adding the seed crystals is preferably 30 to 43°C.
  • the temperature of the mixed solution at the time of adding the seed crystals is more preferably 32° C. or higher, particularly preferably 34° C. or higher, and more preferably 40° C. or lower. Within this range, selective precipitation of Form II reduced coenzyme Q10 crystals is easy.
  • the crystal precipitation step includes controlling the temperature with the temperature control unit based on the turbidity change rate obtained from the turbidity detection unit.
  • an increase in turbidity means precipitation of crystals
  • the turbidity change rate (the amount of change in turbidity per unit time) is an index of the crystal precipitation rate.
  • Examples of the control include control to change at least one of the temperature of the mixed liquid and the cooling rate of the mixed liquid based on the predetermined range of the turbidity change rate and the measured value of the turbidity change rate.
  • the measured turbidity change rate when the measured turbidity change rate is greater than a predetermined range, it can be determined that the crystal precipitation rate is high, and the temperature of the liquid mixture can be increased or the cooling rate can be decreased. As another example, when the measured turbidity change rate is smaller than a predetermined range, it is determined that the crystal precipitation rate is slow, and the temperature of the mixed liquid is lowered or the cooling rate is increased. can be done.
  • the control is preferably performed based on the predetermined range of the turbidity change rate and the measured value of the turbidity change rate, but when the measured value deviates from the predetermined range, the temperature of the mixed liquid and the It is not necessary to perform control to change at least one of the cooling rates, and if it is expected that the measured value of the turbidity change rate will quickly return to within a predetermined range, the temperature of the mixed liquid and the cooling of the mixed liquid You don't have to change the speed. For example, when the temperature of the mixed liquid is maintained constant, as the crystal precipitation progresses, the crystal precipitation rate slows down and the turbidity change rate decreases.
  • control may be performed by changing at least one of the temperature of the mixed liquid and the cooling rate of the mixed liquid each time based on the turbidity change rate, and after setting the temperature program in advance, the turbidity change rate may be performed by changing at least one of the temperature of the mixed liquid and the cooling rate of the mixed liquid when an abnormality occurs.
  • the turbidity may be turbidity based on any index, such as kaolin turbidity and formazin turbidity (FTU), and from the viewpoint of versatility, formazin turbidity is preferred.
  • FTU formazin turbidity
  • the turbidity change rate can be calculated, for example, by dividing the difference between the turbidity at a certain point in time and the turbidity measured before that by the measurement interval.
  • the turbidity change rate at a certain time (T) can be calculated by the following formula.
  • Turbidity change rate T (turbidity / min) (measured turbidity value T - measured turbidity value TX) / X (min)
  • the turbidity change rate T means the turbidity change rate at the time (T)
  • the turbidity measurement value T means the turbidity measurement value at the time (T)
  • the turbidity measurement value T- X means the turbidity measurement X minutes before time T.
  • the FTU change rate at a certain time can be calculated by the following formula.
  • FTU change rate T (FTU/min) (measured turbidity value T (FTU) - measured turbidity value TX (FTU))/ X (min)
  • the FTU change rate T means the FTU change rate at time (T)
  • the turbidity measurement value T (FTU) means the FTU measurement value at time (T)
  • the turbidity measurement value T- X (FTU) means the measured value of FTU X minutes before time T.
  • the frequency of obtaining the turbidity change rate there is no particular limit to the frequency of obtaining the turbidity change rate, but if the turbidity change rate is measured too frequently, it may be affected by measurement errors and concentration differences in the mixed liquid, and the turbidity change rate may not be stable. If the turbidity change rate is obtained too infrequently, the crystal precipitation rate may not be sufficiently controlled. From this point of view, the turbidity change rate is preferably determined, for example, every 3 to 180 minutes, more preferably every 5 to 30 minutes, and even more preferably every 10 to 30 minutes. Note that the measurement interval may or may not be constant, and is not particularly limited.
  • the predetermined range is FTU from 1,000 to 10 ,000, it is one of the preferable modes to be set within the range of 2 to 45 FTU/min.
  • the predetermined range is more preferably set within the range of 2 to 43 FTU/min for the period from FTU to 1,000 to 10,000, more preferably set within the range of 2 to 35 FTU/min. More preferred.
  • Turbidity, such as FTU increases as crystal precipitation progresses. Especially immediately after adding seed crystals, FTU tends to increase rapidly and measurement errors tend to increase. Maintaining the rate of change is not always practical.
  • the predetermined range is set in the period from 1,000 to 10,000 FTU. By setting such a predetermined range, it is possible to carry out the method for producing Form II reduced coenzyme Q10 crystals or a crystalline solid thereof with good reproducibility.
  • the mixed solution at the time of adding the seed crystals is preferably a uniform solution in which reduced coenzyme Q10 is dissolved in alcohol.
  • the FTU of the mixture at the time of seed crystal addition is usually 0 to 250, preferably 0 to 230, more preferably 0 to 200. is. This range is preferable because Form II reduced coenzyme Q10 crystals preferentially precipitate.
  • the temperature of the mixed liquid is preferably 30 ° C. or higher and 43 ° C. or lower during the period from 1,000 to 10,000 FTU, and 30.5 ° C. It is more preferably 42° C. or higher, and particularly preferably 31° C. or higher and 41° C. or lower. Within the above range, it is easy to maintain the FTU change rate within the above range, which is preferable.
  • the temperature of the mixed liquid is preferably 29° C. or higher and 38° C. or lower, and preferably 30° C. or higher and 37° C. or lower at the time when the FTU is 10,000. It is more preferably 31° C. or higher and 36° C. or lower, particularly preferably.
  • the temperature of the mixture may be constant in the crystal precipitation process, but may be lowered stepwise or continuously. Also, the temperature of the mixture may be maintained at a constant temperature for a certain period of time and then lowered stepwise or continuously.
  • the temperature of the mixture at the time of adding the seed crystals is 34° C. or more and 38° C. or less, and the temperature of the mixture at the time when the FTU is 10,000 is 30° C. or more and 37° C. or less.
  • the temperature at which the FTU is 10,000 is preferably 0.4° C. or more and 8° C. or less lower than the temperature at the time of adding the seed crystal.
  • the term "maintained at a constant temperature” means preferably to maintain a predetermined temperature (set temperature) ⁇ 3°C, more preferably to maintain a predetermined temperature (set temperature) ⁇ 1°C.
  • the cooling rate when lowering the temperature of the mixture is preferably 0.05°C/hr or more and 20°C/hr or less, more preferably 0.1°C/hr or more and 15°C/hr or less. It is also a preferred embodiment to change the cooling rate over time.
  • the temperature is maintained for a certain period of time, for example, 0.5 to 8 hours, and the cooling rate is set to 0.05° C./hr or more and less than 0.5° C./hr for 3 to 20 hours thereafter, After that, the cooling rate is set to 0.5° C./hr or more and 15° C./hr or less, and after adding the seed crystal, the cooling rate is set to 0.05° C./hr or more and less than 0.5° C./hr for 3 to 20 hours. After that, the cooling rate is set to 0.5° C./hr or more and 15° C./hr or less.
  • the turbidity to be measured is FTU
  • the cooling rate at that time can be set, for example, based on the range described above.
  • the temperature of the mixed solution reaches 23 to 34°C
  • most of the reduced coenzyme Q10 contained in the mixed solution has already precipitated, so after the temperature reaches 23 to 34°C, For example, it is possible to increase the cooling rate from 1° C./hr to 20° C./hr.
  • the temperature at the time of finishing the crystal precipitation step is preferably 25°C or less, more preferably 20°C or less, more preferably 10°C or less, more preferably 7°C or less, more preferably 5°C or less. is.
  • the lower limit of the end point temperature is the solidification temperature of the mixed liquid system, and is preferably 0° C. or higher.
  • Precipitation of crystals is preferably carried out while forcibly flowing the liquid mixture.
  • the power required for stirring per unit volume is usually 0.003 kW/m 3 or more, preferably 0.004 kW. /m 3 or more, more preferably 0.005 kW/m 3 or more, more preferably 0.006 kW/m 3 or more, to the mixture.
  • the above-mentioned forced flow is usually provided by rotating a stirring blade, but if the above-mentioned flow is obtained, it is not always necessary to use a stirring blade, and for example, a method of circulating the mixed liquid may be used.
  • the Form II-type reduced coenzyme Q10 crystals obtained by the above method are recovered through a solid-liquid separation and drying process by conventionally known methods such as those described in Patent Documents 2 and 3, for example.
  • pressure filtration, centrifugal filtration, or the like can be used for solid-liquid separation.
  • the dried crystals and crystalline solids can be recovered by pulverizing and classifying (sieving) as necessary.
  • the Form II reduced coenzyme Q10 crystals after the solid-liquid separation are dried under heating to obtain Form II reduced coenzyme Q10 crystals. It is also possible to improve the content ratio.
  • the drying temperature is preferably 46° C. or higher, more preferably 47° C. or higher, and even more preferably 49° C. or higher.
  • the upper limit is usually 52°C or lower, preferably 51°C or lower. If the temperature is less than 46° C., drying progresses, but the content of Form II-type reduced coenzyme Q10 crystals hardly increases. If the temperature exceeds 52°C, the reduced coenzyme Q10 crystals may melt during drying.
  • the above conditions are not limited.
  • the drying may be carried out at °C or higher.
  • the heating time for drying is also not particularly limited, but is preferably 4 hours or longer, preferably 10 hours or longer, and more preferably 20 hours or longer.
  • the upper limit of the heating time is not particularly limited, but is usually 72 hours or less, preferably 48 hours or less, more preferably 36 hours or less.
  • each step in the method of the present embodiment specifically, the step of accommodating the mixed liquid described above in the crystallization unit, the seed crystal addition step, the crystal precipitation step, and recovery such as solid-liquid separation and drying
  • a deoxygenated atmosphere can be achieved by replacing the atmosphere with an inert gas, reducing pressure, boiling, or a combination thereof. It is preferable to at least replace the atmosphere with an inert gas, ie use an inert gas atmosphere.
  • the inert gas include nitrogen gas, helium gas, argon gas, hydrogen gas, carbon dioxide gas, etc. Nitrogen gas is preferred.
  • Form II reduced coenzyme Q10 crystals are contained in the obtained reduced coenzyme Q10 crystals or crystalline solid thereof and the content ratio thereof are measured by, for example, a differential scanning calorimeter (DSC). It is possible to discriminate by DSC.
  • Form II reduced coenzyme Q10 crystals show an endothermic peak at around 52 ⁇ 2° C. when measured by DSC at a heating rate of 1° C./min, indicating that Form I reduced coenzyme Q10 The crystal shows an endothermic peak around 48 ⁇ 1° C. under the same conditions.
  • Form II reduced coenzyme Q10 crystals are mixed with conventional Form I reduced coenzyme Q10 crystals or a crystalline solid thereof, the presence or absence of the peak near 52 ⁇ 2 ° C. and the endotherm thereof.
  • the presence or absence of Form II reduced coenzyme Q10 crystals and their content can be determined from the height of the peak and the ratio of the endothermic amounts.
  • Form II reduced coenzyme Q10 crystals or a crystalline solid thereof can be efficiently obtained.
  • FormII-type reduced coenzyme Q10 crystals can be obtained through the crystal precipitation step. can be obtained. Therefore, this embodiment encompasses cases where crystals are obtained and where crystalline solids are obtained.
  • the crystallizer for Form II reduced coenzyme Q10 crystals includes a crystallization unit capable of accommodating a mixture containing alcohol and reduced coenzyme Q10, and the crystallization unit accommodated in the crystallization unit. Based on the turbidity change rate of the mixture obtained from the turbidity detection unit that detects the turbidity change rate of the mixture, the temperature control unit that can adjust the temperature in the crystallization unit, and the turbidity detection unit, A crystallizer for Form II reduced coenzyme Q10 crystals, comprising a controller for controlling temperature adjustment by the temperature controller.
  • the crystallization apparatus is an apparatus capable of carrying out the method for producing Form II type reduced coenzyme Q10 crystals or a crystalline solid thereof described above.
  • the crystallizer shown in FIG. 1 can be mentioned.
  • a turbidity sensor 5a is installed in the crystallization unit 1, and more specifically, the turbidity sensor 5a is installed inside the crystallization unit 1 in FIG.
  • a light-transmitting material such as glass may be used for all or part of the crystallization section, and the turbidity sensor 5a may be installed outside the crystallization section.
  • the temperature control section is arranged outside the crystallization section 1 as the constant temperature water bath 9 and the heat medium 11, but in another embodiment, it may be arranged inside the crystallization section 1. .
  • the temperature control section may be provided by installing a heater or the like inside the crystallization section 1 .
  • the control performed by the control unit is preferably a control that changes at least one of the temperature of the mixed liquid and the cooling rate of the mixed liquid based on the predetermined range of the turbidity change rate and the measured value of the turbidity change rate. .
  • the control unit for example, by executing a program stored in the storage unit, by comparing the measured value of the turbidity change rate and the predetermined range of the turbidity change rate stored in the storage unit, the mixed liquid It is preferable to use software to determine whether it is necessary to change at least one of the temperature and the cooling rate of the liquid mixture, and to control the temperature by acting on the temperature control unit according to the determination result.
  • the predetermined range of the turbidity change rate is a range determined based on the formazin turbidity (FTU) change rate, and the range is from 1,000 FTU
  • One of the preferred modes is to set the FTU/min within the range of 2 to 45 FTU/min until reaching 10,000.
  • the predetermined range is more preferably set within the range of 2 to 43 FTU/min for the period from FTU to 1,000 to 10,000, more preferably set within the range of 2 to 35 FTU/min. , more preferred.
  • DSC measurement conditions Apparatus: DSC6220 (manufactured by SII Nano Technology)
  • Sample container Aluminum pan & cover (SSC000C008) Heating rate: 1°C/min Sample amount: 5 ⁇ 2 mg
  • the FTU change rate in the examples was obtained by measuring the formazin turbidity (FTU) of a mixed solution of ethanol and reduced coenzyme Q10 with a turbidimeter, and the FTU change rate at time (T) was calculated by the following formula. . Further, the turbidity meter used in this embodiment was calibrated with a turbidity (FTU) of 9,999 FTU when crystals of reduced coenzyme Q10 were present in the mixed solution at a concentration of 40000 mg/L.
  • FTU formazin turbidity
  • FTU change rate T (FTU/min) (measured turbidity value T (FTU) - measured turbidity value TX (FTU))/ X (min)
  • the FTU change rate T means the FTU change rate at time (T)
  • the turbidity measurement value T (FTU) means the FTU measurement value at time (T)
  • the turbidity measurement value T- X (FTU) means the measured value of FTU X minutes before time T.
  • Turbidity meter Backscattered light turbidity sensor (InPro8200, Mettler Toledo Corporation) Measurement range: 0 to 10,000 FTU
  • the FTU measurement was performed immediately after the addition of the seed crystal until the FTU reached the upper measurement limit of 10,000, and the FTU change rate was calculated.
  • the FTU change rate at a certain point T is obtained by calculating the increase in the FTU at the point T from the FTU at the point X minutes before (T-Xmin) and dividing it by X minutes. rice field.
  • the FTU rate of change was calculated from the measured FTU, the previously measured FTU, and the measurement interval.
  • the reduced coenzyme Q10 crystals obtained in Examples were stored in an open system for one month in a constant temperature bath set at 40°C RH (relative humidity) 75% and 25°C RH 60%, and then subjected to high performance liquid chromatography. The content ratio of reduced coenzyme Q10 (QH) and oxidized coenzyme Q10 is calculated.
  • the content ratio of reduced coenzyme Q10 in the initial reduced coenzyme Q10 crystals before storage in a constant temperature bath that is, the reduced coenzyme Q10 measured immediately after obtaining the crystals using the crystals obtained in the example.
  • the oxidation stability of the reduced coenzyme Q10 crystal was calculated as a relative QH ratio by the following formula.
  • Relative QH ratio (%) reduced coenzyme Q10 ratio after storage/initial reduced coenzyme Q10 ratio ⁇ 100
  • Example 1 After replacing a separable flask with a volume of 3 L with nitrogen, add 160 g of reduced coenzyme Q10 and 1440 g of ethanol with a purity of 99.5 wt% or more (reduced coenzyme Q10 concentration: 10 wt%), and stir with a stirring blade (stirring required The mixture was heated to 50° C. with a power of 0.03 kw/m 3 ) to obtain a uniform reduced coenzyme Q10 solution (QH solution) (1600 g, 2800 ml).
  • QH solution uniform reduced coenzyme Q10 solution
  • the QH solution at 50°C was cooled to 36.0°C while being stirred with a stirring blade (power required for stirring: 0.03 kw/m 3 ).
  • a stirring blade power required for stirring: 0.03 kw/m 3 .
  • To the QH solution (FTU18) cooled to 36.0 ° C. 3.2 g (2.0 wt%) of Form II reduced coenzyme Q10 crystals were added as seed crystals, and precipitation of reduced coenzyme Q10 crystals (crystallization ) was started.
  • the QH solution to which the seed crystals are added is hereinafter referred to as "crystallization mixture".
  • the formazin turbidity (FTU) in the mixture was periodically measured until the formazin turbidity (FTU) in the mixture reached 10,000, and the FTU was between 1,000 and 10,000.
  • the cooling rate and cooling temperature were controlled so that the FTU change rate was around 20.8 FTU/min until the temperature reached 20.8 FTU/min.
  • the formazin turbidity in the mixture reached 10,000 FTU, it was cooled to 25°C at 1°C/hr, and then cooled from 25°C to 1°C at 10°C/hr.
  • the Form II crystal ratio in the obtained reduced coenzyme Q10 crystals was 100%, and Form I reduced coenzyme Q10 crystals were not included.
  • the relative QH ratio of the obtained Form II reduced coenzyme Q10 crystals at 25°C RH 60% for 1 month was 91.8%, and the relative QH ratio at 40°C RH 75% for 1 month was 88.1%. rice field.
  • Table 1 shows the elapsed time, turbidity, set temperature, and FTU change rate when the FTU in Example 1 reached around 1,000 (942) as 0 min.
  • Example 2 After purging a four-necked flask with a volume of 500 mL with nitrogen, 32.8 g of reduced coenzyme Q10 and 295.2 g of ethanol with a purity of 99.5% by weight or more are added (reduced coenzyme Q10 concentration: 10% by weight) and stirred. The mixture was heated to 50° C. while stirring with a blade (required stirring power: 0.007 kw/m 3 ) to obtain 328 g (410 mL) of a uniform reduced coenzyme Q10 solution (QH solution).
  • QH solution uniform reduced coenzyme Q10 solution
  • the QH solution at 50°C was cooled to 34.0°C while stirring with a stirring blade (required power for stirring: 0.007 kw/m 3 ).
  • 0.65 g (2.0 wt%) of Form II reduced coenzyme Q10 crystals were added as seed crystals to initiate precipitation (crystallization) of reduced coenzyme Q10 crystals. did.
  • the formazin turbidity (FTU) in the mixture was periodically measured until the formazin turbidity (FTU) in the mixture reached 10,000, and the FTU was between 1,000 and 10,000.
  • the cooling rate and cooling temperature were controlled so that the FTU rate of change was around 55.6 FTU/min until the temperature reached 55.6 FTU/min.
  • the mixed solution is heated and the temperature is maintained for a certain period of time to increase the crystallization speed (crystal precipitation speed). It was adjusted.
  • the formazin turbidity in the mixture reached 10,000 FTU, it was cooled to 25°C at 1°C/hr, and then cooled from 25°C to 1°C at 10°C/hr.
  • the obtained Form II reduced coenzyme Q10 crystals had a relative QH ratio of 85.1% at 25°C RH 60% for 1 month, and a relative QH ratio of 81.4% at 40°C RH 75% for 1 month.
  • Table 2 shows the elapsed time, turbidity, set temperature, and FTU rate of change when the FTU in Example 2 reached around 1,000 (870) as 0 min.
  • Example 3 After replacing a separable flask with a volume of 500 mL with nitrogen, 32.8 g of reduced coenzyme Q10 and 295.2 g of ethanol with a purity of 99.5% by weight or more were added (reduced coenzyme Q10 concentration: 10 wt%), and a stirring blade was added. The mixture was heated to 50° C. with stirring (required power for stirring: 0.007 kw/m 3 ) to obtain 328 g (410 mL) of a uniform reduced coenzyme Q10 solution (QH solution).
  • the QH solution at 50°C was cooled to 34.5°C while stirring with a stirring blade (required power for stirring: 0.007 kw/m 3 ).
  • 0.65 g (2.0 wt%) of Form II reduced coenzyme Q10 crystals were added as seed crystals to initiate precipitation (crystallization) of reduced coenzyme Q10 crystals. did.
  • the formazin turbidity (FTU) in the mixture was periodically measured until the formazin turbidity (FTU) in the mixture reached 10,000, and the FTU was between 1,000 and 10,000.
  • the cooling rate and cooling temperature were controlled so that the FTU change rate was around 33.3 FTU/min until the temperature reached 33.3 FTU/min.
  • the mixed solution is heated and the temperature is maintained for a certain period of time to increase the crystallization speed (crystal precipitation speed). It was adjusted.
  • the formazin turbidity in the mixture reached 10,000 FTU, it was cooled to 25°C at 1°C/hr, and then cooled from 25°C to 1°C at 10°C/hr.
  • the obtained Form II reduced coenzyme Q10 crystals had a relative QH ratio of 89.4% at 25°C RH 60% for 1 month, and a relative QH ratio of 87.3% at 40°C RH 75% for 1 month.
  • Table 3 shows the elapsed time, turbidity, set temperature, and FTU rate of change when the FTU in Example 3 reached around 1,000 (877) as 0 min.
  • Example 4 After replacing a separable flask with a volume of 500 mL with nitrogen, 27.8 g of reduced coenzyme Q10 and 250.2 g of ethanol with a purity of 99.5% by weight or more were added (reduced coenzyme Q10 concentration: 10% by weight), and a stirring blade was added. The mixture was heated to 50° C. with stirring (required power for stirring: 0.007 kw/m 3 ) to give 278 g (347 mL) of a uniform reduced coenzyme Q10 solution (QH solution).
  • the QH solution at 50°C was cooled to 36.8°C while stirring with a stirring blade (required power for stirring: 0.007 kw/m 3 ).
  • the formazin turbidity (FTU) in the mixture was periodically measured until the formazin turbidity (FTU) in the mixture reached 10,000, and the FTU was between 1,000 and 10,000.
  • the cooling rate and cooling temperature were controlled so that the FTU rate of change was around 6.9 FTU/min until the temperature reached 6.9 FTU/min.
  • the mixed solution is heated and the temperature is maintained for a certain period of time to increase the crystallization speed (crystal precipitation speed). It was adjusted.
  • the formazin turbidity in the mixture reached 10,000 FTU, it was cooled to 25°C at 1°C/hr, and then cooled from 25°C to 1°C at 10°C/hr.
  • the Form II crystal ratio in the obtained reduced coenzyme Q10 crystal was 100%.
  • the relative QH ratio of the obtained Form II reduced coenzyme Q10 crystal at 25°C RH60% for one month was 92.2%, and the relative QH ratio at 40°C RH75% for one month was 90.1%. rice field.
  • Tables 4 and 5 show the elapsed time, turbidity, set temperature, and FTU change rate when the FTU in Example 4 reached around 1,000 (933) as 0 min.
  • Table 6 shows the ratio of Form II type crystals (Form II ratio) and the relative QH ratio of the reduced coenzyme Q10 crystals obtained in Examples.
  • Form II reduced coenzyme Q10 crystals obtained in Examples are excellent in oxidation stability. It can be seen that Form II reduced coenzyme Q10 crystals or crystalline solids thereof can be stably produced.
  • a preferred range can be defined by arbitrarily combining the upper and lower limits of the numerical range
  • a preferred range can be defined by arbitrarily combining the upper limits of the numerical range
  • the lower limit of the numerical range Any combination of values can be used to define a preferred range.

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Abstract

本開示は、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体を安定的に製造することが可能な、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法を提供することを目的とする。　本実施形態は、晶析部、晶析部内の濁度を検出可能な濁度検出部、及び晶析部内の温度を調節可能な温度調節部が設けられた、晶析装置を用い、アルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液を晶析部に収容すること、前記混合液に、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を種晶として添加すること、前記種晶の添加後の前記混合液中でＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を析出させることを含み、前記析出が、前記濁度検出部より得られた濁度変化率に基づき、温度調節部により温度を制御することを含む、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法である。

Description

ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法及び晶析装置
　本開示は、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法及び晶析装置に関する。
　補酵素Ｑは、細菌から哺乳動物まで広く生体に分布する必須成分であり、生体内の細胞中におけるミトコンドリアの電子伝達系構成成分として知られている。補酵素Ｑは、ミトコンドリア内で酸化と還元を繰り返すことで、電子伝達系における伝達成分としての機能を担っているほか、還元型補酵素Ｑは抗酸化作用を持つことが知られている。ヒトでは、補酵素Ｑの側鎖が繰り返し構造を１０個持つ補酵素Ｑ１０が主成分であり、生体内においては、通常、４０～９０％程度が還元型として存在している。補酵素Ｑの生理的作用としては、ミトコンドリア賦活作用によるエネルギー生産の活性化、心機能の活性化、細胞膜の安定化効果、抗酸化作用による細胞の保護効果等が挙げられている。
　現在製造・販売されている補酵素Ｑ１０の多くは酸化型補酵素Ｑ１０であるが、近年では、酸化型補酵素Ｑ１０に比べて高い経口吸収性を示す還元型補酵素Ｑ１０も市場に登場し、用いられるようになってきている。
　還元型補酵素Ｑ１０を得る一般的な方法は既に開示されている（特許文献１）。さらに、還元型補酵素Ｑ１０を結晶として得る方法についても、いくつかの方法が知られている。例えば、還元型補酵素Ｑ１０をアルコール溶液及び／又はケトン溶液中において晶出させ、結晶を製造する方法（特許文献２）や、還元型補酵素Ｑ１０の高濃度液相を貧溶媒中に添加することで結晶化を行う方法（特許文献３）などが報告されている。
　一方、特許文献４には、還元型補酵素Ｑ１０に結晶多形現象が見られることが記載されており、新たに出現した結晶形（以下、この結晶をＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶、又は、ＦｏｒｍＩＩ型結晶と呼称する）は従来の還元型補酵素Ｑ１０（以下、この結晶をＦｏｒｍＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶、又は、ＦｏｒｍＩ型結晶と呼称する）より非常に安定で、その他の物理特性にも優れていると報告されている。また、特許文献５には、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の製造方法が記載されている。特許文献５では、請求項１において、アルコール、炭化水素、脂肪酸エステル及び窒素化合物からなる群より選択される少なくとも１種の有機溶媒と、還元型補酵素Ｑ１０とを含有する、温度が３２～４３℃の溶液に、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を種晶として添加して、混合液を調製すること、及び、前記混合液中でＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を析出させることを含む、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の製造方法が開示されている。
特開平１０－１０９９３３号公報 国際公開２００３／００６４０９号 特開２００３－０８９６６９号公報 国際公開２０１２／１７６８４２号 国際公開２０２０／０４５５７１号
　特許文献４には、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の取得方法として、特定の条件で晶析を行う方法が記載されているが、長時間を要する上に回収量が少ない場合があり、必ずしも工業的には最適とはいえない方法である。特許文献５に開示された方法は、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を得るための工業的規模での生産にも適した効率的な製造方法を提供することを目的とするものであり、主に温度に着目した方法が開示されている。
　本発明者らが、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法について鋭意検討を行う中で、温度のみに基づいてＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の析出をコントロールした場合には、同じ温度条件で繰り返しＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を製造した場合であっても、得られるＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の酸化安定性のロット差が大きいことを見出した。
　本発明者らが、温度以外の要素に着目して、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法を検討する中で、濁度変化率に基づき、温度を制御することにより、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体を安定的に製造できることを見出した。そこで本開示は、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体を安定的に製造することが可能な、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法を提供することを目的とする。また、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法を実施する際に使用可能な晶析装置を提供することを別の目的とする。
　アルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液中でＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を析出させる際には、析出が進むにつれて、混合液中のＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶が増えるために濁度が増加する。本発明者らは、この濁度の変化率に基づき温度を制御することにより、安定的に酸化安定性の高いＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体を製造することができることを見出した。
　本実施形態の態様例は、以下の通りに記載される。
（１）　晶析部、晶析部内の濁度を検出可能な濁度検出部、及び晶析部内の温度を調節可能な温度調節部が設けられた、晶析装置を用い、
　アルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液を晶析部に収容すること、
　前記混合液に、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を種晶として添加すること、
　前記種晶の添加後の前記混合液中でＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を析出させることを含み、
　前記析出が、前記濁度検出部より得られた濁度変化率に基づき、前記温度調節部により温度を制御することを含む、
　ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法。
（２）　前記制御が、濁度変化率の所定範囲と濁度変化率の測定値とに基づき、混合液の温度及び混合液の冷却速度の少なくとも一方を変化させる制御である、（１）に記載の製造方法。
（３）　前記所定範囲が、ホルマジン濁度（ＦＴＵ）変化率に基づき定められる範囲であり、
　前記所定範囲が、ＦＴＵが１，０００から１０，０００になるまでの期間、２～４５ＦＴＵ／ｍｉｎの範囲内で設定される、（２）に記載の製造方法。
（４）　前記アルコールが、炭素数１～５の１価のアルコールである、（１）～（３）のいずれかに記載の製造方法。
（５）　前記炭素数１～５の１価のアルコールが、エタノールである、（４）に記載の製造方法。
（６）前記アルコールが、水とアルコールとの総量に対して、９５重量％以上のアルコールである、（１）～（５）のいずれかに記載の製造方法。
（７）　アルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液を収容可能な晶析部、
　前記晶析部に収容される前記混合液の濁度変化率を検出する濁度検出部、
　前記晶析部内の温度を調節可能な温度調節部、及び
　前記濁度検出部より得られた前記混合液の濁度変化率に基づき、前記温度調節部による温度の調節を制御する制御部
を含む、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の晶析装置。
（８）　前記制御が、濁度変化率の所定範囲と濁度変化率の測定値とに基づき、混合液の温度及び混合液の冷却速度の少なくとも一方を変化させる制御である、（７）に記載の晶析装置。
（９）　前記所定範囲が、ホルマジン濁度（ＦＴＵ）変化率に基づき定められる範囲であり、
　前記所定範囲が、ＦＴＵが１，０００から１０，０００になるまでの期間、２～４５ＦＴＵ／ｍｉｎの範囲内で設定される、（８）に記載の晶析装置。
　本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号2021-053784号の開示内容を包含する。
　本開示のＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法によれば、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体を安定的に製造することができる。また、本開示の晶析装置は、前記製造方法を実施する際に使用可能である。
図１は、本実施形態の晶析装置の一態様の概略図である。
　以下、本発明を詳細に説明する。
＜還元型補酵素Ｑ１０＞
　本明細書における「還元型補酵素Ｑ１０」とは、還元型補酵素Ｑ１０を主成分とする限り、その一部に酸化型補酵素Ｑ１０を含んでいてもよい。なお、ここで主成分とは、例えば５０重量％以上、通常６０重量％以上、好ましくは７０重量％以上、より好ましくは８０重量％以上、さらに好ましくは９０重量％以上、特に好ましくは９５重量％以上、とりわけ好ましくは９８重量％以上含まれていることを意味する。ここで前記割合は、補酵素Ｑ１０の総量に対する、還元型補酵素Ｑ１０の割合である。
　なお、上述したように、還元型補酵素Ｑ１０には、従来から知られているＦｏｒｍＩ型と、最近になって新たに見出されたＦｏｒｍＩＩ型の２種の結晶多形が存在する。具体的には、融点が４８℃付近で、粉末エックス線（Ｃｕ－Ｋα）回析において、回折角（２θ±０．２°）３．１°、１８．７°、１９．０°、２０．２°、２３．０°に特徴的なピークを示す還元型補酵素Ｑ１０の結晶形がＦｏｒｍＩ型であり、融点が５２℃付近で、粉末エックス線（Ｃｕ－Ｋα）回析において、回折角（２θ±０．２°）１１．５°、１８．２°、１９．３°、２２．３°、２３．０°、３３．３°に特徴的なピークを示す還元型補酵素Ｑ１０の結晶形がＦｏｒｍＩＩ型である。本明細書においては、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により、５℃／分の速度で昇温した場合において５４±２℃に吸熱ピークを有するか、昇温速度１℃／分において同様に測定をおこなった場合、５２±２℃に吸熱ピークを有するか、粉末エックス線（Ｃｕ－Ｋα）回析において、回折角（２θ±０．２°）１１．５°、１８．２°、１９．３°、２２．３°、２３．０°及び３３．３°に特徴的なピークを示すか、そのうち１つでも満たす還元型補酵素Ｑ１０の結晶を「ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０の結晶」という。もちろん、全ての条件を満たすものであってもかまわない。
　また、本明細書における「結晶性固体」とは、結晶構造を有する部分とともに、結晶構造を有さない非晶質成分をその中に含んでいる固体を意味する。すなわち、「ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体」における「その結晶性固体」とは、「ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の結晶構造を有する部分と共に、結晶構造を有さない非晶質成分をその中に含んでいる固体」を意味する。
＜アルコール＞
　本発明者らは、アルコール中では、ＦｏｒｍＩＩ型結晶の飽和濃度が、ＦｏｒｍＩ型結晶の飽和濃度よりも小さいために、還元型補酵素Ｑ１０の溶媒としてアルコールを用いることにより、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を効率的に析出させることが可能であることを見出した。
　アルコールとしては、炭素数１～５の１価のアルコールであることが好ましい。炭素数１～５の１価のアルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、ｎ－ブタノール、イソブタノール、ｎ－ペンタノールが挙げられる。アルコールとしては、ＦｏｒｍＩＩ型結晶の飽和濃度が、ＦｏｒｍＩ型結晶の飽和濃度よりも十分に小さく、取扱いが容易なエタノールが特に好ましい。なお、アルコールとしては、上記例示したものを単独で用いてもよく、２種以上を混合して用いてもよい。
　本明細書におけるアルコールは、アルコールを主成分とする溶媒であればよく、水を含む含水アルコールであってもよい。アルコールとしては、含水量が低いほどＦｏｒｍＩＩ型結晶の選択的な析出が容易である。このためアルコールは、水とアルコールとの総量に対して、アルコール濃度は例えば８０重量％以上、通常は９０重量％以上、好ましくは９５重量％以上、より好ましくは９７重量％以上、さらに好ましくは９９重量％以上、特に好ましくは９９．５重量％以上である。なお、アルコール濃度が９９．５重量％以上のアルコールは、無水アルコールを意味する。また、アルコール濃度の上限としては、１００重量％以下である。
　アルコールとしては、含水エタノール又は無水エタノールが特に好ましい。エタノールとしては、水とエタノールとの総量に対して、エタノール濃度は、例えば８０重量％以上、通常は９０重量％以上、好ましくは９５重量％以上、より好ましくは９７重量％以上、さらに好ましくは９９重量％以上、特に好ましくは９９．５重量％以上である。また、エタノール濃度の上限としては、１００重量％以下である。
＜ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法＞
　本実施形態に係る、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法は、晶析部、晶析部内の濁度を検出可能な濁度検出部、及び晶析部内の温度を調節可能な温度調節部が設けられた、晶析装置を用い、アルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液を晶析部に収容すること、前記混合液に、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を種晶として添加すること、前記種晶の添加後の前記混合液中でＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を析出させることを含み、前記析出が、前記濁度検出部より得られた濁度変化率に基づき、温度調節部により温度を制御することを含む、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法である。
　以下の説明ではＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を種晶として添加する工程を「種晶添加工程」、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を析出させる工程を「結晶析出工程」と称する場合がある。
　本実施形態に係る、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の製造方法では、晶析部、晶析部内の濁度を検出可能な濁度検出部、及び晶析部内の温度を調節可能な温度調節部が設けられた、晶析装置を用いる。晶析装置の一態様の概略図を図１に示す。図１に示した晶析装置では、晶析部１の内部に、アルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液３が収容された状態が図示されている。晶析部１には、濁度検出部５（例えば濁度計）が設けられており、好ましくは温度検出部７（例えば温度計）が設けられている。図１に示した晶析装置では、晶析部１の温度が、恒温水槽９及び熱媒体１１（例えば水）から構成される温度調節部によって調節可能である。図１に示した晶析装置では、濁度検出部５は、濁度センサ５ａ及び濁度センサ５ａが検出した信号をＦＴＵ値等の濁度に変換する変換器５ｂを有している。また、濁度検出部５により得られた混合液の濁度変化に基づき、温度調節部による温度の調節を制御するための制御部１３を有している。また、図１に示した晶析装置は、晶析部１内を攪拌するための攪拌翼１５を有していることが好ましい。なお、図１に示した晶析装置は、後述の本実施形態に係るＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の晶析装置の一態様である。
　制御部１３は温度調節部による温度の調節を制御する制御機構であり、それ以外の条件（例えば攪拌条件）を合わせて制御する中央制御機構であってもよい。制御部１３は、例えば、各種の処理を実現するためのソフトウェアプログラムと、該ソフトウェアプログラムを実行するＣＰＵと、該ＣＰＵによって制御される各種ハードウェア等によって構成することができる。ある態様において制御部１３は、ＣＰＵと入出力回路などとを包含して有するコンピュータである。制御部１３の動作に必要なプログラムやデータ、制御パラメータは、本実施形態では記憶部（図示せず）に保存することができる。なお、これらプログラムやデータ等の保存先は特に限定されない。これらプログラムやデータ等は、別途専用に設けられたディスクやフラッシュメモリなどの記憶装置に保存されていてもよい。また、通信可能に接続された外部のサーバや記憶部等に保存されていてもよい。
　晶析部に収容されるアルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液は、アルコールと還元型補酵素Ｑ１０を含有していれば特に限定されず、還元型補酵素Ｑ１０がアルコールに溶解した均一な溶液であってもよいし、還元型補酵素Ｑ１０の一部がアルコールに溶解しているが一部が溶解せずに懸濁したスラリーであっても良いが、好ましくは、還元型補酵素Ｑ１０がアルコールに溶解した均一な溶液である。
　アルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液に使用される還元型補酵素Ｑ１０としては、結晶、非晶状態を問わず、またその結晶多形も問わない。従って、従来公知のＦｏｒｍＩ型の還元型補酵素Ｑ１０を使用することもできる。また、結晶析出においてその純度を高めることが可能なため、不純物を有するものや、未精製・粗精製の還元型補酵素Ｑ１０であってもよい。さらに、従来公知の方法によって得られた還元型補酵素Ｑ１０の抽出液や、公知の還元方法で酸化型補酵素Ｑ１０から得られた還元型補酵素Ｑ１０を含有する反応液を、そのまま、あるいは必要に応じて精製及び／又は溶媒置換したものを、前記混合液として使用することもできる。
　アルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液は、アルコール（含水アルコールを含む）以外の他の有機溶媒を更に含んでいても良いが、溶媒成分全量あたりのアルコールの含有量（アルコールの純度）は好ましくは、９５重量％以上、９７重量％以上、９９重量％以上であり、上限としては１００重量％以下が好ましい。アルコールの純度は、最も好ましくは９９．５重量％以上である。他の有機溶媒としては、炭化水素、脂肪酸エステル及び窒素化合物からなる群より選択される少なくとも１種が例示できる。
　アルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液中の、種晶添加前の還元型補酵素Ｑ１０の溶存濃度は、例えば２重量％以上、好ましくは３重量％以上、より好ましくは５重量％以上、さらに好ましくは７重量％以上、特に好ましくは９重量％以上である。種晶添加前の還元型補酵素Ｑ１０の溶存濃度は、例えば５０重量％以下、好ましくは４５重量％以下、より好ましくは３０重量％以下、さらに好ましくは２０重量％以下、特に好ましくは１５重量％以下である。
　アルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液は、アルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する原料混合物を例えば４２℃以上の温度に加熱して、還元型補酵素Ｑ１０を溶解させることにより得られる。該温度としては、好ましくは７０℃以下、より好ましくは５５℃以下の温度である。還元型補酵素Ｑ１０を溶解させた後、種晶を添加する前に、アルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液は、後述の種晶を添加する際の温度まで冷却することが好ましい。
　種晶となるＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の添加量（種晶添加量）としては、特に限定されないが、種晶の添加前の前記混合液中の還元型補酵素Ｑ１０の量（１００重量％）に対して０．１重量％以上が好ましく、０．５重量％以上がより好ましく、０．８重量％以上がさらに好ましく、１重量％以上が特に好ましい。上限は特に制限されないが、種晶添加前の前記混合液中の還元型補酵素Ｑ１０の量（１００重量％）に対して、２０重量％以下が好ましく、４重量％以下がより好ましく、２．２重量％以下がさらに好ましい。なお、種晶に使用される還元型補酵素Ｑ１０結晶は、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を含む限り、ＦｏｒｍＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶や非晶体を含むものであっても差し支えないが、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の純度が高い方が好ましい。種晶としてはＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶が、例えば５０重量％以上、好ましくは７５重量％以上、さらに好ましくは８０重量％以上、より好ましくは９０重量％以上のものを使用するのがよい。
　種晶を添加する時点での前記混合液の温度は、３０～４３℃であることが好ましい。種晶を添加する時点での前記混合液の温度は、３２℃以上がより好ましく、３４℃以上が特に好ましい、又４０℃以下がより好ましい。該範囲では、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の選択的な析出が容易である。
　結晶析出工程は、濁度検出部より得られた濁度変化率に基づき、温度調節部により温度を制御することを含む。結晶析出工程において、濁度の上昇は結晶の析出を意味し、濁度変化率（単位時間当たりの濁度の変化量）は、結晶の析出速度の指標となる。制御としては、濁度変化率の所定範囲と濁度変化率の測定値とに基づき、混合液の温度及び混合液の冷却速度の少なくとも一方を変化させる制御が挙げられる。例えば、測定された濁度変化率が所定範囲よりも大きい場合には、結晶の析出速度が速いと判断し、混合液の温度を上昇させたり、冷却速度を低下させたりすることができる。別の例としては、測定された濁度変化率が所定範囲よりも小さい場合には、結晶の析出速度が遅いと判断し、混合液の温度を低下させたり、冷却速度を大きくしたりすることができる。なお、制御としては、濁度変化率の所定範囲と濁度変化率の測定値とに基づき行うことが好ましいが、測定値が所定範囲から外れた場合に、常に混合液の温度及び混合液の冷却速度の少なくとも一方を変化させる制御を行うことまでは要せず、速やかに濁度変化率の測定値が所定範囲内に戻ると予想される場合には、混合液の温度及び混合液の冷却速度を変化させなくてもよい。例えば、混合液の温度を一定に維持している場合には、結晶の析出が進むにつれて、結晶析出速度は遅くなり、濁度変化率も小さくなるため、例えば一次的に濁度変化率が所定範囲を上回っていたとしても、速やかに所定範囲内に低下すると考えられる場合には、必ずしも混合液の温度及び混合液の冷却速度を変化させなくてもよい。また、制御としては、濁度変化率に基づき、つど混合液の温度及び混合液の冷却速度の少なくとも一方を変化させることにより行ってもよく、予め温度プログラムを設定したうえで、濁度変化率に異常が生じた際に混合液の温度及び混合液の冷却速度の少なくとも一方を変化させることにより行ってもよい。
　濁度としては、どのような指標に基づく濁度であってもよく、例えばカオリン濁度、ホルマジン濁度（ＦＴＵ）が挙げられ、汎用性の観点から、ホルマジン濁度が好ましい。
　濁度変化率は、例えば、ある時点の濁度と、その前に測定した濁度との測定値の差を、測定間隔で除することにより算出することができる。
　例えば、ある時点（Ｔ）の濁度変化率は、以下の式により算出することができる。
　濁度変化率Ｔ（濁度／ｍｉｎ）＝（濁度測定値Ｔ－濁度測定値Ｔ－Ｘ）／Ｘ（ｍｉｎ）
（上記式において、濁度変化率Ｔは時点（Ｔ）における濁度変化率を意味し、濁度測定値Ｔは時点（Ｔ）における濁度の測定値を意味し、濁度測定値Ｔ－Ｘは時点ＴのＸ分前における濁度の測定値を意味する。）
　また、測定される濁度がホルマジン濁度（ＦＴＵ）である場合には、ある時点（Ｔ）のＦＴＵ変化率は、以下の式により算出することができる。
　ＦＴＵ変化率Ｔ（ＦＴＵ／ｍｉｎ）＝（濁度測定値Ｔ（ＦＴＵ）－濁度測定値Ｔ－Ｘ（ＦＴＵ））／Ｘ（ｍｉｎ）
（上記式において、ＦＴＵ変化率Ｔは時点（Ｔ）におけるＦＴＵ変化率を意味し、濁度測定値Ｔ（ＦＴＵ）は時点（Ｔ）におけるＦＴＵの測定値を意味し、濁度測定値Ｔ－Ｘ（ＦＴＵ）は時点ＴのＸ分前におけるＦＴＵの測定値を意味する。）
　濁度変化率を求める頻度としては特に制限はないが、あまりに頻繁に濁度変化率を測定すると、測定誤差や、混合液中の濃度差等の影響を受け、濁度変化率が安定しない場合があり、あまりに濁度変化率を求める頻度が少ない場合には、結晶の析出速度を十分に制御できない場合がある。このような観点から、濁度変化率は、例えば３～１８０分毎に求めることが好ましく、５～３０分毎に求めることがより好ましく、１０～３０分毎の求めることがさらに好ましい。なお、測定間隔は一定でも一定でなくてもよく、特に制限されない。
　測定される濁度がホルマジン濁度（ＦＴＵ）であり、濁度変化率がホルマジン濁度（ＦＴＵ）変化率に基づき定められる範囲である場合には、所定範囲が、ＦＴＵが１，０００から１０，０００になるまでの期間、２～４５ＦＴＵ／ｍｉｎの範囲内で設定されることが好ましい態様の一つである。所定範囲が、ＦＴＵが１，０００から１０，０００になるまでの期間、２～４３ＦＴＵ／ｍｉｎの範囲内で設定されることがより好ましく、２～３５ＦＴＵ／ｍｉｎの範囲内で設定されることがさらに好ましい。結晶の析出が進むにつれて濁度例えばＦＴＵは上昇するが、特に種晶を添加した直後は、ＦＴＵが急速に上昇したり、測定誤差が大きくなる傾向があるため、種晶添加時から一定のＦＴＵ変化率に維持することは必ずしも現実的ではない。前記態様では、ＦＴＵが１，０００から１０，０００になるまでの期間において、所定範囲を設定している。このような所定範囲を設定することにより、再現性よくＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法を実施することが可能である。
　種晶を添加する時点での前記混合液は還元型補酵素Ｑ１０がアルコールに溶解した均一な溶液であることが好ましい。測定される濁度がＦＴＵである場合には、種晶を添加する時点での前記混合液のＦＴＵは、通常は０～２５０であり、好ましくは０～２３０であり、より好ましくは０～２００である。該範囲では、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶が優先的に析出するため好ましい。
　測定される濁度がＦＴＵである場合には、ＦＴＵが１，０００から１０，０００になるまでの期間の、混合液の温度は３０℃以上４３℃以下であることが好ましく、３０．５℃以上４２℃以下であることがより好ましく、３１℃以上４１℃以下であることが特に好ましい。前記範囲内では、ＦＴＵ変化率を前記範囲に維持することが容易であるため好ましい。
　測定される濁度がＦＴＵである場合には、ＦＴＵが１０，０００の時点での、混合液の温度は２９℃以上３８℃以下であることが好ましく、３０℃以上３７℃以下であることがより好ましく、３１℃以上３６℃以下であることが特に好ましい。
　結晶析出工程では混合液の温度は一定であってもよいが、段階的に又は連続的に低下させてもよい。また、混合液の温度は一定期間一定の温度に保持した後に、段階的に又は連続的に低下させてもよい。好ましい一態様においては、種晶を添加する時点での混合液の温度は３４℃以上３８℃以下であり、ＦＴＵが１０，０００の時点での混合液の温度は３０℃以上３７℃以下であり、ＦＴＵが１０，０００の時点での温度が、種晶を添加する時点の温度よりも０．４℃以上８℃以下低いことが好ましい。なお、一定の温度に保持とは、好ましくは所定温度（設定温度）±３℃に保持することを意味し、より好ましくは所定温度（設定温度）±１℃に保持することを意味する。
　混合液の温度を低下させる際の冷却速度としては、０．０５℃／ｈｒ以上２０℃／ｈｒ以下が好ましく、０．１℃／ｈｒ以上１５℃／ｈｒ以下がより好ましい。冷却速度を経時的に変化させることも好ましい態様である。例えば、種晶を添加した後、一定時間、例えば０．５～８時間は温度を維持し、その後３～２０時間は冷却速度を０．０５℃／ｈｒ以上０．５℃／ｈｒ未満とし、その後冷却速度を０．５℃／ｈｒ以上１５℃／ｈｒ以下とする態様、種晶を添加した後、３～２０時間は冷却速度を０．０５℃／ｈｒ以上０．５℃／ｈｒ未満とし、その後冷却速度を０．５℃／ｈｒ以上１５℃／ｈｒ以下とする態様が挙げられる。
　結晶析出工程では、測定される濁度がＦＴＵである場合には、ＦＴＵが測定上限である１０，０００に到達した後も混合液の温度を低下させ、結晶の析出を行うことが好ましい。その際の冷却速度としては、例えば、前述の範囲に基づき設定することができる。また、混合液の温度が２３～３４℃に到達した時点で、混合液中に含まれる還元型補酵素Ｑ１０の大半が既に析出しているため、温度が２３～３４℃に到達した後は、例えば冷却速度を、１℃／ｈｒ以上２０℃／ｈｒ以下と大きくすることも可能である。
　結晶析出工程を終了する時点の温度、すなわち、終点到達温度は、好ましくは２５℃以下、より好ましくは２０℃以下、より好ましくは１０℃以下、より好ましくは７℃以下、より好ましくは５℃以下である。前記終点温度の下限は前記混合液の系の固化温度であるが、好ましくは０℃以上である。
　結晶の析出は、混合液を強制流動させながら実施するのが好ましい。過飽和の形成を抑制し、スムーズに核化・結晶成長を行う観点、或いは、高品質化の観点から、単位容積当たりの撹拌所要動力として、通常０．００３ｋＷ／ｍ３以上、好ましくは０．００４ｋＷ／ｍ３以上、より好ましくは０．００５ｋＷ／ｍ３以上、さらに好ましくは０．００６ｋＷ／ｍ３以上の流動を前記混合液に与えるのがよい。また、撹拌所要動力として、通常は０．１ｋＷ／ｍ３以下、好ましくは０．０３ｋＷ／ｍ３以下の流動を前記混合液に与えるのがよい。上記の強制流動は、通常、撹拌翼の回転により与えられるが、上記流動が得られれば必ずしも撹拌翼を用いる必要はなく、例えば、混合液の循環による方法などを利用しても良い。
　上記方法によって得られたＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶は、例えば、特許文献２や３に記載されたような従来公知の方法により、固液分離・乾燥の工程を経て回収される。例えば固液分離には加圧ろ過、遠心ろ過などが使用できる。また、乾燥後の結晶や結晶性固体を必要に応じて粉砕、分級（ふるい分け）して回収することもできる。
　本実施形態においては、より好ましい態様の一つとして、上記固液分離後のＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の乾燥を、加温下で行うことでＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の含有割合の向上を図ることもできる。この目的において、乾燥温度としては、４６℃以上が好ましく、４７℃以上がより好ましく、４９℃以上がさらに好ましい。上限としては通常５２℃以下、好ましくは５１℃以下である。４６℃未満の場合、乾燥は進むが、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の含有割合はほとんど向上しない。また、５２℃を超える場合は、乾燥中に還元型補酵素Ｑ１０結晶が融解してしまうことがある。
　なお、結晶析出工程において既に目的とするＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の含有割合に達成している場合は上記の限りではなく、例えば２５℃以上、好ましくは３０℃以上、より好ましくは３５℃以上で乾燥を実施すれば良い。
　また、乾燥を行う場合の加温時間も特に限定されないが、４時間以上が好ましく、１０時間以上が好ましく、２０時間以上がより好ましい。加温時間の上限としては特に制限はないが、通常は７２時間以下、好ましくは４８時間以下、より好ましくは３６時間以下である。
　なお、本実施形態の方法における各工程、具体的には、上記で説明した混合液を晶析部に収容する工程、種晶添加工程、及び結晶析出工程、並びに固液分離や乾燥などの回収工程、その他その後の処理工程などは、脱酸素雰囲気下にて実施するのが好ましい。脱酸素雰囲気は、雰囲気の不活性ガスによる置換、減圧、沸騰やこれらを組み合わせることにより達成できる。少なくとも、雰囲気の不活性ガスによる置換、即ち、不活性ガス雰囲気を用いるのが好適である。上記不活性ガスとしては、例えば、窒素ガス、ヘリウムガス、アルゴンガス、水素ガス、炭酸ガス等を挙げることができ、好ましくは窒素ガスである。
　得られた還元型補酵素Ｑ１０の結晶又はその結晶性固体中に、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶が含有されているかどうかやその含有割合は、例えば示差走査型熱量計（ＤＳＣ）で測定することにより判別が可能である。
　前述したとおり、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶は、ＤＳＣにより昇温速度１℃／分において測定を行った場合、５２±２℃付近に吸熱ピークを示し、ＦｏｒｍＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶は、同条件において、４８±１℃付近に吸熱ピークを示す。ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶が、従来のＦｏｒｍＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶あるいはその結晶性固体と混合された状態であっても、前記５２±２℃付近のピークの有無やその吸熱ピークの高さや吸熱量の比によりＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の存在の有無やその含有割合を判別することができる。本発明によれば、高純度のＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体を効率的に得ることができる。本実施形態によれば、結晶析出工程により、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を得ることができるが、その後の乾燥工程等によって、一部の結晶が溶融すること等により、結晶性固体が得られることがある。このため、本実施形態は、結晶が得られる場合、結晶性固体が得られる場合を包含する。
＜ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の晶析装置＞
　本実施形態に係るＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の晶析装置は、アルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液を収容可能な晶析部、前記晶析部に収容される前記混合液の濁度変化率を検出する濁度検出部、前記晶析部内の温度を調節可能な温度調節部、及び前記濁度検出部より得られた前記混合液の濁度変化率に基づき、前記温度調節部による温度の調節を制御する制御部を含む、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の晶析装置である。
　本実施形態に係る晶析装置は、前述のＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法を実施可能な装置である。
　本実施形態に係る晶析装置の一態様を示す概略図としては、前述の図１に示した晶析装置が挙げられる。晶析部１には、濁度センサ５ａが設置されており、より詳細には図１では、晶析部１の内部に濁度センサ５ａが設置されている。別の態様としては、晶析部の全部又は一部にガラス等の光を透過する材料を用い、濁度センサ５ａを晶析部の外部に設置してもよい。温度調節部は、図１では、恒温水槽９及び熱媒体１１として、晶析部１の外側に配置されているが、別の態様においては、晶析部１の内部に設置されていてもよい。例えば、温度調節部は、晶析部１の内部にヒーター等を設置することにより設けてもよい。
　制御部で行われる制御としては、濁度変化率の所定範囲と濁度変化率の測定値とに基づき、混合液の温度及び混合液の冷却速度の少なくとも一方を変化させる制御であることが好ましい。制御部では、例えば記憶部に記憶されたプログラムを実行することにより、濁度変化率の測定値と、記憶部に記憶された濁度変化率の所定範囲とを比較することにより、混合液の温度及び混合液の冷却速度の少なくとも一方を変化させる必要性を判定し、その結果に応じて温度調節部に働きかけ温度を制御することを、ソフトウェア的に実現することが好ましい。濁度がホルマジン濁度（ＦＴＵ）である場合には、濁度変化率の所定範囲が、ホルマジン濁度（ＦＴＵ）変化率に基づき定められる範囲であり、その範囲が、ＦＴＵが１，０００から１０，０００になるまでの期間、２～４５ＦＴＵ／ｍｉｎの範囲内で設定されることが好ましい態様の一つである。所定範囲が、ＦＴＵが１，０００から１０，０００になるまでの期間、２～４３ＦＴＵ／ｍｉｎの範囲内で設定されることがより好ましく、２～３５ＦＴＵ／ｍｉｎの範囲内で設定されることが、さらに好ましい。
　以下、実施例を挙げて本実施形態を説明するが、本開示はこれらの例によって限定されるものではない。
＜還元型補酵素Ｑ１０結晶におけるＦｏｒｍＩＩ型結晶の比率＞
　実施例で得られた還元型補酵素Ｑ１０結晶中のＦｏｒｍＩＩ型結晶の比率は、結晶を下記条件によるＤＳＣ測定により分析し、得られたＦｏｒｍＩ型結晶の吸熱ピークの高さ（Ｙ差）（以下、ＦｏｒｍＩのＹ差）およびＦｏｒｍＩＩ型結晶の吸熱ピークの高さ（Ｙ差）（以下、ＦｏｒｍＩＩのＹ差）より、下記の式に基づき算出した。
　ＦｏｒｍＩＩ比率（％）=ＦｏｒｍＩＩのＹ差／（ＦｏｒｍＩのＹ差＋ＦｏｒｍＩＩのＹ差）×１００
（ＤＳＣ測定条件）
装置：ＤＳＣ６２２０（ＳＩＩナノテクノロジー製）
サンプル容器：アルミ製パン&カバー（ＳＳＣ０００Ｃ００８）
昇温速度：１℃／ｍｉｎ
サンプル量：５±２ｍｇ
＜ＦＴＵ変化率の測定方法＞
　実施例におけるＦＴＵ変化率は、エタノールと還元型補酵素Ｑ１０との混合液のホルマジン濁度（ＦＴＵ）を濁度計で測定し、時点（Ｔ）のＦＴＵ変化率は、以下の式により算出した。また、本実施形態で使用した濁度計は、還元型補酵素Ｑ１０の結晶が混合液中に４００００ｍｇ／Ｌの濃度で存在する時の濁度（ＦＴＵ）を９，９９９ＦＴＵとして校正した。
　ＦＴＵ変化率Ｔ（ＦＴＵ／ｍｉｎ）＝（濁度測定値Ｔ（ＦＴＵ）－濁度測定値Ｔ－Ｘ（ＦＴＵ））／Ｘ（ｍｉｎ）
（上記式において、ＦＴＵ変化率Ｔは時点（Ｔ）におけるＦＴＵ変化率を意味し、濁度測定値Ｔ（ＦＴＵ）は時点（Ｔ）におけるＦＴＵの測定値を意味し、濁度測定値Ｔ－Ｘ（ＦＴＵ）は時点ＴのＸ分前におけるＦＴＵの測定値を意味する。）
濁度計：後方散乱光式濁度センサ（ＩｎＰｒｏ８２００、メトラー・トレド株式会社）
測定範囲：０～１０，０００ＦＴＵ
　ＦＴＵの測定は、種晶の添加直後から、ＦＴＵが測定上限である１０，０００に到達するまで行い、ＦＴＵ変化率を算出した。ある時点ＴのＦＴＵ変化率は上記式で示したように、時点ＴのＦＴＵの、Ｘ分前の時点（Ｔ－Ｘｍｉｎ）のＦＴＵからの増加量を算出し、Ｘ分で除すことにより求めた。なお、実施例においてＦＴＵ変化率は、測定したＦＴＵと、一つ前に測定したＦＴＵ、及びその測定間隔から算出した。
＜酸化安定性（相対ＱＨ比）の評価方法＞
　実施例で得られた還元型補酵素Ｑ１０結晶の酸化安定性を以下の方法で評価した。
　４０℃ＲＨ（相対湿度）７５％および２５℃ＲＨ６０％に設定した恒温槽において、開放系で実施例で得られた還元型補酵素Ｑ１０結晶を１ヶ月保存し、その後高速液体クロマトグラフィーを用いて還元型補酵素Ｑ１０（ＱＨ）および酸化型補酵素Ｑ１０の含量比を算出する。
　恒温漕で保存する前のｉｎｉｔｉａｌの還元型補酵素Ｑ１０結晶の還元型補酵素Ｑ１０の含量比、すなわち、実施例により得られた結晶を用いて、結晶取得後速やかに測定した際の還元型補酵素Ｑ１０の含量比を１００とした相対値で、還元型補酵素Ｑ１０結晶の酸化安定性を、下記式により相対ＱＨ比として算出した。
　相対ＱＨ比（％）＝保存後の還元型補酵素Ｑ１０比／ｉｎｉｔｉａｌの還元型補酵素Ｑ１０比×１００
　還元型補酵素Ｑ１０濃度および酸化型補酵素Ｑ１０濃度を測定した高速液体クロマトグラフィーの条件を以下に示す。
（ＨＰＬＣ条件）
カラム：ＳＹＭＭＥＴＲＹ　Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ製）、２５０ｍｍ（長さ）、４．６ｍｍ（内径）
移動相：Ｃ２Ｈ５ＯＨ：ＣＨ３ＯＨ＝４：３（ｖ：ｖ）
検出波長：２１０ｎｍ
流速：１ｍｌ／ｍｉｎ
［実施例１］
　容積３Ｌのセパラブルフラスコを窒素置換した後、還元型補酵素Ｑ１０を１６０ｇと純度９９．５重量％以上エタノール１４４０ｇを入れ（還元型補酵素Ｑ１０濃度：１０ｗｔ％）、撹拌翼により撹拌（撹拌所要動力０．０３ｋｗ／ｍ３）しながら５０℃まで加温し均一な還元型補酵素Ｑ１０溶液（ＱＨ溶液）（１６００ｇ、２８００ｍｌ）とした。
　５０℃のＱＨ溶液を、撹拌翼により撹拌（撹拌所要動力０．０３ｋｗ／ｍ３）しながら３６．０℃まで冷却した。３６．０℃まで冷却したＱＨ溶液（ＦＴＵ１８）に、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を種晶として３．２ｇ（２．０ｗｔ％）添加し、還元型補酵素Ｑ１０結晶の析出（晶析）を開始した。以下では、種晶を添加したＱＨ溶液を「晶析混合液」と称する。
　種晶添加後は、混合液中のホルマジン濁度（ＦＴＵ）が１０，０００となるまでの間、定期的に混合液中のホルマジン濁度を測定し、ＦＴＵが１，０００から１０，０００となるまでの間、ＦＴＵ変化率が２０．８ＦＴＵ／ｍｉｎ付近となるように、冷却速度や冷却温度を制御した。混合液中のホルマジン濁度が１０,０００ＦＴＵに達した後は、２５℃まで１℃／ｈｒで冷却し、２５℃から１℃まで１０℃／ｈｒで冷却した。
　１℃まで冷却後、スラリーにろ過による固液分離を行い、得られた結晶を４０℃で２４時間減圧乾燥することでＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を得た。
　得られた還元型補酵素Ｑ１０結晶におけるＦｏｒｍＩＩ型結晶比率は１００％であり、ＦｏｒｍＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶は含まれていなかった。また、得られたＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の２５℃ＲＨ６０％１ヶ月における相対ＱＨ比は９１．８％であり、４０℃ＲＨ７５％１ヶ月における相対ＱＨ比は８８．１％であった。
　実施例１のＦＴＵが１，０００付近（９４２）になった時点を０ｍｉｎとした際の経過時間、濁度、設定温度、ＦＴＵ変化率を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
［実施例２］
　容積５００ｍＬの四つ口フラスコを窒素置換した後、還元型補酵素Ｑ１０を３２．８ｇと、純度９９．５重量％以上エタノール２９５．２ｇを入れ（還元型補酵素Ｑ１０濃度：１０ｗｔ％）、撹拌翼により撹拌（撹拌所要動力０．００７ｋｗ／ｍ３）しながら５０℃まで加温し均一な還元型補酵素Ｑ１０溶液（ＱＨ溶液）３２８ｇ（４１０ｍＬ）とした。
　５０℃のＱＨ溶液を、撹拌翼により撹拌（撹拌所要動力０．００７ｋｗ／ｍ３）しながら３４．０℃まで冷却した。３４．０℃まで冷却したＱＨ溶液に、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を種晶として０．６５ｇ（２．０ｗｔ％）添加し、還元型補酵素Ｑ１０結晶の析出（晶析）を開始した。
　種晶添加後は、混合液中のホルマジン濁度（ＦＴＵ）が１０，０００となるまでの間、定期的に混合液中のホルマジン濁度を測定し、ＦＴＵが１，０００から１０，０００となるまでの間、ＦＴＵ変化率が５５．６ＦＴＵ／ｍｉｎ付近となるように、冷却速度や冷却温度を制御した。途中、混合液中のＦＴＵ変化率が５５．６ＦＴＵ／ｍｉｎを明らかに逸脱した場合には、混合液を加温すること、温度を一定時間保持することによって晶析速度（結晶の析出速度）を調整した。混合液中のホルマジン濁度が１０,０００ＦＴＵに達した後は、２５℃まで１℃／ｈｒで冷却し、２５℃から１℃まで１０℃／ｈｒで冷却した。
　１℃まで冷却後、スラリーにろ過による固液分離を行い、得られた結晶を４０℃で２４時間減圧乾燥することでＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を得た。
　得られたＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の２５℃ＲＨ６０％１ヶ月における相対ＱＨ比は８５．１％であり、４０℃ＲＨ７５％１ヶ月における相対ＱＨ比は８１．４％であった。
　実施例２のＦＴＵが１，０００付近（８７０）になった時点を０ｍｉｎとした際の経過時間、濁度、設定温度、ＦＴＵ変化率を表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
［実施例３］
　容積５００ｍＬのセパラブルフラスコを窒素置換した後、還元型補酵素Ｑ１０を３２．８ｇと、純度９９．５重量％以上エタノール２９５．２ｇを入れ（還元型補酵素Ｑ１０濃度：１０ｗｔ％）、撹拌翼により撹拌（撹拌所要動力０．００７ｋｗ／ｍ３）しながら５０℃まで加温し均一な還元型補酵素Ｑ１０溶液（ＱＨ溶液）３２８ｇ（４１０ｍＬ）とした。
　５０℃のＱＨ溶液を、撹拌翼により撹拌（撹拌所要動力０．００７ｋｗ／ｍ３）しながら３４．５℃まで冷却した。３４．５℃まで冷却したＱＨ溶液に、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を種晶として０．６５ｇ（２．０ｗｔ％）添加し、還元型補酵素Ｑ１０結晶の析出（晶析）を開始した。
　種晶添加後は、混合液中のホルマジン濁度（ＦＴＵ）が１０，０００となるまでの間、定期的に混合液中のホルマジン濁度を測定し、ＦＴＵが１，０００から１０，０００となるまでの間、ＦＴＵ変化率が３３．３ＦＴＵ／ｍｉｎ付近となるように、冷却速度や冷却温度を制御した。途中、混合液中のＦＴＵ変化率が３３．３ＦＴＵ／ｍｉｎを明らかに逸脱した場合には、混合液を加温すること、温度を一定時間保持することによって晶析速度（結晶の析出速度）を調整した。混合液中のホルマジン濁度が１０,０００ＦＴＵに達した後は、２５℃まで１℃／ｈｒで冷却し、２５℃から１℃まで１０℃／ｈｒで冷却した。
　１℃まで冷却後、スラリーにろ過による固液分離を行い、得られた結晶を４０℃で２４時間減圧乾燥することでＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を得た。
　得られたＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の２５℃ＲＨ６０％１ヶ月における相対ＱＨ比は８９．４％であり、４０℃ＲＨ７５％１ヶ月における相対ＱＨ比は８７．３％であった。
　実施例３のＦＴＵが１，０００付近（８７７）になった時点を０ｍｉｎとした際の経過時間、濁度、設定温度、ＦＴＵ変化率を表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
［実施例４］
　容積５００ｍＬのセパラブルフラスコを窒素置換した後、還元型補酵素Ｑ１０を２７．８ｇと、純度９９．５重量％以上エタノール２５０．２ｇを入れ（還元型補酵素Ｑ１０濃度：１０ｗｔ％）、撹拌翼により撹拌（撹拌所要動力０．００７ｋｗ／ｍ３）しながら５０℃まで加温し均一な還元型補酵素Ｑ１０溶液（ＱＨ溶液）２７８ｇ（３４７ｍＬ）とした。
　５０℃のＱＨ溶液を、撹拌翼により撹拌（撹拌所要動力０．００７ｋｗ／ｍ３）しながら３６．８℃まで冷却した。３６．８℃まで冷却したＱＨ溶液（ＦＴＵ６８３）に、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を種晶として０．５６ｇ（２．０ｗｔ％）添加し、還元型補酵素Ｑ１０結晶の析出（晶析）を開始した。
　種晶添加後は、混合液中のホルマジン濁度（ＦＴＵ）が１０，０００となるまでの間、定期的に混合液中のホルマジン濁度を測定し、ＦＴＵが１，０００から１０，０００となるまでの間、ＦＴＵ変化率が６．９ＦＴＵ／ｍｉｎ付近となるように、冷却速度や冷却温度を制御した。途中、混合液中のＦＴＵ変化率が６．９ＦＴＵ／ｍｉｎを明らかに逸脱した場合には、混合液を加温すること、温度を一定時間保持することによって晶析速度（結晶の析出速度）を調整した。混合液中のホルマジン濁度が１０,０００ＦＴＵに達した後は、２５℃まで１℃／ｈｒで冷却し、２５℃から１℃まで１０℃／ｈｒで冷却した。
　１℃まで冷却後、スラリーにろ過による固液分離を行い、得られた結晶を４０℃で２４時間減圧乾燥することでＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を得た。
　得られた還元型補酵素Ｑ１０結晶におけるＦｏｒｍＩＩ型結晶比率は１００％であった。また、得られたＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の２５℃ＲＨ６０％１ヶ月における相対ＱＨ比は９２．２％であり、４０℃ＲＨ７５％１ヶ月における相対ＱＨ比は９０．１％であった。
　実施例４のＦＴＵが１，０００付近（９３３）になった時点を０ｍｉｎとした際の経過時間、濁度、設定温度、ＦＴＵ変化率を表４、５に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　実施例で得られた還元型補酵素Ｑ１０結晶のＦｏｒｍＩＩ型結晶の割合（ＦｏｒｍＩＩ比率）及び相対ＱＨ比を表６に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
　実施例で得られたＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶は、酸化安定性に優れており、本実施形態のＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法によれば、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体を安定的に製造することができることが分かる。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。
　本明細書中に記載した数値範囲の上限値及び／又は下限値は、それぞれ任意に組み合わせて好ましい範囲を規定することができる。例えば、数値範囲の上限値及び下限値を任意に組み合わせて好ましい範囲を規定することができ、数値範囲の上限値同士を任意に組み合わせて好ましい範囲を規定することができ、また、数値範囲の下限値同士を任意に組み合わせて好ましい範囲を規定することができる。
　本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。したがって、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」等）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。
　以上、本実施形態を詳述したが、具体的な構成はこの実施形態に限定されるものではなく、本開示の要旨を逸脱しない範囲における設計変更があっても、それらは本開示に含まれるものである。
１　・・・晶析部
３　・・・混合液
５　・・・濁度検出部
５ａ・・・濁度センサ
５ｂ・・・変換器
７　・・・温度検出部
９　・・・恒温水槽
１１・・・熱媒体
１３・・・制御部
１５・・・攪拌翼

Claims (9)

  1. 　晶析部、晶析部内の濁度を検出可能な濁度検出部、及び晶析部内の温度を調節可能な温度調節部が設けられた、晶析装置を用い、
    　アルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液を晶析部に収容すること、
    　前記混合液に、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を種晶として添加すること、
    　前記種晶の添加後の前記混合液中でＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶を析出させることを含み、
    　前記析出が、前記濁度検出部より得られた濁度変化率に基づき、前記温度調節部により温度を制御することを含む、
    　ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶又はその結晶性固体の製造方法。
  2. 　前記制御が、濁度変化率の所定範囲と濁度変化率の測定値とに基づき、混合液の温度及び混合液の冷却速度の少なくとも一方を変化させる制御である、請求項１に記載の製造方法。
  3. 　前記所定範囲が、ホルマジン濁度（ＦＴＵ）変化率に基づき定められる範囲であり、
    　前記所定範囲が、ＦＴＵが１，０００から１０，０００になるまでの期間、２～４５ＦＴＵ／ｍｉｎの範囲内で設定される、請求項２に記載の製造方法。
  4. 　前記アルコールが、炭素数１～５の１価のアルコールである、請求項１～３のいずれか１項に記載の製造方法。
  5. 　前記炭素数１～５の１価のアルコールが、エタノールである、請求項４に記載の製造方法。
  6. 　前記アルコールが、水とアルコールとの総量に対して、９５重量％以上のアルコールである、請求項１～５のいずれか１項に記載の製造方法。
  7. 　アルコールと還元型補酵素Ｑ１０とを含有する混合液を収容可能な晶析部、
    　前記晶析部に収容される前記混合液の濁度変化率を検出する濁度検出部、
    　前記晶析部内の温度を調節可能な温度調節部、及び
    　前記濁度検出部より得られた前記混合液の濁度変化率に基づき、前記温度調節部による温度の調節を制御する制御部
    を含む、ＦｏｒｍＩＩ型の還元型補酵素Ｑ１０結晶の晶析装置。
  8. 　前記制御が、濁度変化率の所定範囲と濁度変化率の測定値とに基づき、混合液の温度及び混合液の冷却速度の少なくとも一方を変化させる制御である、請求項７に記載の晶析装置。
  9. 　前記所定範囲が、ホルマジン濁度（ＦＴＵ）変化率に基づき定められる範囲であり、
    　前記所定範囲が、ＦＴＵが１，０００から１０，０００になるまでの期間、２～４５ＦＴＵ／ｍｉｎの範囲内で設定される、請求項８に記載の晶析装置。
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