WO2020138674A1 - 근육 이완용 조성물 - Google Patents

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WO2020138674A1
WO2020138674A1 PCT/KR2019/013916 KR2019013916W WO2020138674A1 WO 2020138674 A1 WO2020138674 A1 WO 2020138674A1 KR 2019013916 W KR2019013916 W KR 2019013916W WO 2020138674 A1 WO2020138674 A1 WO 2020138674A1
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peptide
present
pharmaceutical composition
amino acid
cosmetic composition
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정용지
김은미
이응지
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(주)케어젠
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    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Definitions

  • the present invention relates to a peptide having a physiological activity and a composition comprising the same, specifically, a composition for muscle relaxation, skin wrinkle improvement, sebum production suppression, or acne improvement including a peptide having a physiological activity, such as a pharmaceutical composition or It relates to a cosmetic composition.
  • Axons are elongated structures that extend from the cell body and are connected to the targets of neurons, through which they transmit signals and transport substances.
  • Neuromuscular junction is a specially differentiated synaptic structure that allows the apical end of the axon to interface with skeletal muscle cells, allowing impulses to be transmitted from nerve cells to muscles.
  • Axons leading to skeletal muscles are prominent axons wrapped by myelin sheaths and branched into several terminal branches as they approach the muscles. This branched axon is wrapped by a myelin sheath, but the myelin sheath disappears at the site that enters the muscle, and forms a terminal bulge like the axon end that forms another synapse, and the terminal bulge is located on the concave muscle cell surface.
  • This structure is called the motor end plate or neuromuscular connection.
  • Synaptic vesicles in the neuromuscular junction contain the neurotransmitter acetylcholine.
  • the SNARE molecule is essential for acetylcholine release, and inhibition of the acetylcholine release action causes relaxation paralysis.
  • the voltage-sensitive calcium channel of the terminal cell membrane opens, and calcium enters and fuses the synaptic vesicle with the cell membrane, releasing the acetylcholine in the vesicle into the junction gap.
  • the free acetylcholine binds to the acetylcholine receptor in the myocyte membrane, thereby opening the sodium channel, resulting in depolarization of the cell membrane.
  • the impulse which originated in the neuromuscular junction, spreads along the surface of the muscle fibers and is delivered to the deep part of the muscle cells. The impulse is transferred to the triad, opening the calcium channel of the reticulum membrane in the myoplasm and liberating calcium into the myoplasm.
  • the impulse is stopped, calcium is re-entered into the reticular water tank in the myoplasm by active transport and the muscles relax. Therefore, when the secretion of acetylcholine is suppressed in the neuromuscular junction, the impulse generated in the neuromuscular junction is not transmitted to the muscle, and the impulse is stopped, so that the muscle is relaxed.
  • the cause of facial expression wrinkle formation or its mechanism is in the epidermal muscle tension that pulls the skin inside. These muscle tensions are the result of weakening of the facial muscles and excessive activity of the nerves. Neuronal hyperactivity is the release of excessive, uncontrolled neurotransmitters that stimulate muscle fibers. For this reason, molecules that regulate the release of neurotransmitters relax muscle tension and contribute to the removal of facial wrinkles. Accordingly, there is a need to develop new active ingredients that are effective in treating muscle spasm and reducing or eliminating facial asymmetry and/or facial wrinkles (especially facial expression wrinkles) by controlling the release of neurotransmitters.
  • Botulinum toxin is known for muscle relaxation. Botulinum toxin is most commonly used in clinical trials and cosmetology for facial wrinkle removal. Botulinum toxin causes functional damage of the SNARE protein, blocks the SNARE complex, and suppresses the secretion of the neurotransmitter acetylcholine, thereby showing a muscle relaxation effect.
  • botulinum toxin has been used as a muscle relaxant using the muscle relaxation effect of botulinum toxin (Korean Patent Publication No. 2010-0020972) or has been used for the purpose of reducing wrinkles.
  • botulinum toxin since the paralytic effect of botulinum toxin is reversible for an average of 6 months, repeated treatment of botulinum toxin is required for such treatment.
  • botulinum toxin has a size that can be recognized by the patient's immune system, an immune response to the drug may be induced. Formation of antibodies against botulinum toxin is a serious problem as it results in a significant loss of therapeutic efficacy. Therefore, there is a need to develop a molecule having a simpler and more stable molecular structure that does not induce an immune response, and which has a manufacturing cost-effective, paralytic effect similar to botulinum toxin.
  • sebum is released from the sebaceous glands and released through the pores, and forms an fat film on the skin and the surface of the hair to act as an antibacterial and bacteriostatic agent that protects our body from external bacteria.
  • the sebaceous glands secrete more sebum or become obstructed in the process of passing through the pores, the pores expand. Sebum accumulates in the enlarged pores, and the sebum accumulates with keratin, makeup makeup waste, or dust.
  • the entangled sebum waste products are oxidized by contact with the radicals of the air, causing brown or black discoloration to become a black head.
  • sebum is also a cause of acne, it is necessary to develop a substance capable of suppressing excessive sebum production.
  • the present invention provides a peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the present invention provides a composition for muscle relaxation containing a peptide comprising an amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • the composition may be in the form of a pharmaceutical composition or a cosmetic composition, but is not limited thereto.
  • the peptide may be included in 0.001% to 60% by weight relative to 100% by weight of the composition for muscle relaxation, but is not limited thereto.
  • the composition can be used for the prevention or treatment of neuromuscular diseases.
  • the neuromuscular disorders include eyelid cramps, quadrilaterals, cervical dystonia, ankylosing blepharospasm, underarm hyperhidrosis, anal fissures, vaginal spasm, dyspepsia, headache disease, idiopathic and neurogenic detrusorosis, and local dystonia.
  • the headache disease may be migraine It is not limited.
  • the peptide in another embodiment of the present invention, can inhibit the secretion of acetylcholine.
  • the present invention provides a cosmetic composition containing a peptide comprising an amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • the cosmetic composition may be used for the purpose of improving skin condition, for example, improving skin wrinkles, suppressing sebum production, or improving acne, but is not limited thereto.
  • the peptide may be included in 0.001% to 60% by weight relative to 100% by weight of the cosmetic composition, but is not limited thereto.
  • the peptide may increase the expression of collagen, but is not limited thereto.
  • Peptides comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 of the present invention shows physiological activities such as muscle relaxation, skin wrinkle improvement, sebum production inhibition, the peptide muscle relaxation composition, skin wrinkle improvement composition, sebum production inhibition It can be used as an active ingredient of a composition, a composition for inhibiting blackhead production, or a composition for improving acne.
  • Figure 1 is a long-term storage of the peptide containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 is a high temperature stability evaluation results.
  • Figure 3 shows the degree of degradation of the recombinant syntaxin 1A peptide containing the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1.
  • Figure 4 shows the degree of endogenous syntaxin 1A degradation of the peptide comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1.
  • Figure 5 shows the SNARE complex formation inhibitory effect of the peptide comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1.
  • Figure 6 shows the SNARE complex formation inhibitory effect of the peptide comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1.
  • FIG. 7 is a graph showing the inhibitory effect of acetylcholine secretion of a peptide comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1.
  • Figure 8 shows the muscle relaxation effect of the peptide comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1.
  • FIG. 17 shows an increase in collagen level by application of a peptide comprising the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1.
  • the present invention provides peptides having various physiological activities, such as useful physiological activities, such as muscle relaxation, skin wrinkle improvement, sebum production suppression, or acne improvement.
  • the peptide of the present invention comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1.
  • the peptide of the present invention may be made of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1, but is not limited thereto.
  • peptide refers to a linear molecule formed by amino acid residues being bonded to each other by peptide bonding.
  • the peptides can be prepared according to conventional biological or chemical synthesis methods known in the art, in particular solid-phase synthesis techniques.
  • the peptide may be variants or fragments of amino acids having different sequences by deletion, insertion, substitution, or a combination of amino acid residues, within a range that does not affect function.
  • Amino acid exchanges that do not alter the activity of the peptide as a whole are known in the art.
  • phosphorylation, sulfation, acrylation, glycosylation, methylation, and farnesylation may be modified.
  • the present invention includes peptides having an amino acid sequence substantially identical to a peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 and variants or active fragments thereof.
  • the substantially identical protein is 60% or more, preferably 75% or more, such as 80% or more, 90% or more, 95% or more, 98% or more, or 99% or more sequence homology to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1
  • the peptides of the present invention may further include targeting sequences, tags, labeled residues, half-life or amino acid sequences prepared for specific purposes to increase peptide stability.
  • the peptide of the present invention can be obtained by various methods well known in the art.
  • the peptides of the present invention can be prepared using polynucleotide recombination and protein expression systems or synthesized in vitro through chemical synthesis such as peptide synthesis, and cell-free protein synthesis, etc. have.
  • the protecting group may be an acetyl group, a fluorenyl methoxy carbonyl group, a formyl group, a palmitoyl group, a myristyl group, a stearyl group, or polyethylene glycol (PEG), but may improve the modification of the peptide, particularly the stability of the peptide. If there is an ingredient, it can be included without limitation.
  • The'stability' is used in a sense to include not only stability in vivo that protects the peptides of the present invention from attack of protein cleavage enzymes in vivo, but also storage stability (eg, storage stability at room temperature).
  • composition comprising the peptide of the present invention
  • Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for muscle relaxation comprising a peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • the peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 is the '1.
  • Peptides of the present invention' is the same as the peptides described in the section, detailed description above '1. Peptides of the present invention' is used, and hereinafter, description will be made only on the configuration specific to the pharmaceutical composition.
  • the peptide of the present invention has a muscle relaxation activity, and may be used as an active ingredient of a composition for muscle relaxation.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for muscle relaxation containing a peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • the peptide may be included in an amount of 0.001% to 60% by weight, for example, 0.01% to 50% by weight relative to 100% by weight of the pharmaceutical composition for muscle relaxation.
  • the content of the peptide in the pharmaceutical composition for muscle relaxation is less than the lower limit, the muscle relaxation effect by the peptide may not be sufficiently expressed, and when it exceeds the upper limit, the effect by the peptide relative to the input concentration may be relatively low. have.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be used for the prevention or treatment of neuromuscular diseases, and if the disease is intended for muscle relaxation, the pharmaceutical composition of the present invention can be applied without limitation.
  • prevention' as used in the present invention means all actions in which the pharmaceutical composition of the present invention delays the development of neuromuscular disease.
  • the term'inhibition' as used in the present invention means any action in which the pharmaceutical composition of the present invention reduces the occurrence of neuromuscular disease.
  • treatment' as used in the present invention means any action that allows the pharmaceutical composition of the present invention to improve or benefit the symptoms of neuromuscular disease.
  • the term'administration' refers to the introduction of a given substance into a subject by any suitable method, and the pharmaceutical composition of the present invention can be administered through any general route to reach a target in vivo. have.
  • the route of administration of the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, but may be administered orally or parenterally. Specifically, it may be administered parenterally, and more specifically, may be applied in a manner applied to the skin (ie, transdermal administration).
  • the administration of the present invention can be carried out once to 4 times, 2 to 3 times or 2 times a day.
  • the administration of the present invention can be carried out for a period of 4 weeks or more, 8 weeks or more, 4 weeks to 12 weeks, or 8 weeks to 12 weeks.
  • Peripheral nerves represent a neural network that separates from the central nervous system in the skull or spine and connects the central nervous system to the terminal organs such as muscles and skin.It transmits commands determined by the central nervous system to the terminal organs such as muscles, or pain relief. Delivers sensory information to the central nervous system.
  • Peripheral nervous system diseases include dysfunction of the peripheral nerves, neuromuscular connections in which the peripheral nerves are connected to the muscles, and diseases of the muscles themselves.
  • the neuromuscular disorders include eyelid cramping, oblique neck (the muscles of the neck contract and the neck is unnatural as if tilted to one side), cervical dystonia, spasticity of the blepharospasm, underarm hyperhidrosis, anal fissure, vaginal spasm, impotence, headache disease, idiopathic And nervous detrusor hyperhidrosis, local dystonia (limb, jaw joint, vocal cords, etc.), temporomandibular joint pain disorder, diabetic neuropathy, vocal cord dysfunction, strabismus, chronic neuropathy, facial muscle hypertrophy (masticus muscle, etc.), detrusor sphincter disorder, benign Diseases such as prostatic hyperplasia are not limited.
  • the headache disease may be a migraine headache.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may further include a suitable carrier, excipient or diluent commonly used in the manufacture of the pharmaceutical composition.
  • excipient or diluent usable in the pharmaceutical composition of the present invention
  • lactose dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium Silicates, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate or mineral oil.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be used in the form of an oral dosage form such as powder, granule, tablet, capsule, suspension, emulsion, syrup, aerosol, external preparation, suppository, and sterile injection solution according to a conventional method. .
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and the solid preparations include at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, gelatin, etc. Can be prepared by mixing.
  • lubricants such as magnesium stearate and talc are used in addition to simple excipients.
  • Liquid preparations for oral use include suspensions, intravenous solutions, emulsions, syrups, etc.
  • various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, can be included. .
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories.
  • Non-aqueous solvents, suspending agents may include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate.
  • injectable esters such as ethyl oleate.
  • As a base for suppositories witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, and glycerogelatin may be used.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations contain at least one excipient in the pharmaceutical composition of the present invention, for example, starch, calcium carbonate, sucrose, lactose And gelatin. Also, in addition to simple excipients, lubricants such as magnesium, steroid and talc can be used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspending agents, intravenous solutions, emulsions and syrups.
  • various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, can be included. have.
  • Formulations for skin administration may be dusting powders, emulsions, suspensions, oils, sprays, ointments, cream pastes, gels, foams, or solutions.
  • the pharmaceutical preparations of the present invention may be an ointment in anhydrous state, contain paraffin, especially low viscosity paraffin, which is suitable for topical use and is liquid at body temperature, or the natural fat or partially synthetic fat, for example coconut fatty acid triglyceride.
  • Cerides hydrogenated oils such as hydrogenated peanut oil or castor oil, fatty acid partial esters of glycerol, such as glycerol monostearate and distearate, silicones such as polymethylsiloxanes such as hexamethyldisiloxane or octamethyl It may contain trisiloxanes, for example, fatty alcohols that are associated with aqueous creams and increase water absorption capacity, and may contain sterols, wool wax, other emulsifiers and/or other additives.
  • fatty acid partial esters of glycerol such as glycerol monostearate and distearate
  • silicones such as polymethylsiloxanes such as hexamethyldisiloxane or octamethyl It may contain trisiloxanes, for example, fatty alcohols that are associated with aqueous creams and increase water absorption capacity, and may contain sterols, wool wax, other emulsifiers and/or
  • the amount of the peptide containing the amino acid sequence contained in the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the patient's condition and body weight, the degree of disease, the drug form, the route and duration of administration, and may be appropriately selected in some cases.
  • the peptide comprising the amino acid sequence may be administered at a dose of 0.0001 to 1000 mg/kg per day, specifically 0.1 to 1000 mg/kg, and the application may be applied once or several times a day. It might be.
  • the dosage of the peptide consisting of the peptide comprising the amino acid sequence of the present invention can be increased or decreased depending on the administration route, the degree of disease, sex, weight, age, and the like. Therefore, the above dosage does not limit the scope of the present invention in any way.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered to various mammals, such as rats, mice, livestock, and humans. Any mode of administration can be envisaged, for example, oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrabronchial inhalation, intrauterine dura or intracerebroventricular injection.
  • the pharmaceutical composition for preventing, inhibiting or treating neuromuscular diseases of the present invention may further contain one or more active ingredients representing improvement, alleviation, treatment or prevention of neuromuscular diseases in addition to the peptides containing the amino acid sequence.
  • composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, hormonal therapy, drug therapy, and biological response modifiers for the improvement, alleviation, treatment or prevention of neuromuscular diseases.
  • the peptide of the present invention is stable at high temperature (see FIGS. 1 and 2), decomposes syntaxin 1A involved in the release of neurotransmitters, and inhibits the formation of SNARE complex ( 3 to 6), inhibits the secretion of acetylcholine (see FIG. 7), has a muscle relaxation effect (see FIGS. 8 to 10), is capable of penetrating into cells, and penetrating to the muscle layer of tissues, a neuronal cell marker It can also coexist with the muscle relaxation effect (see FIGS. 11 to 14 ).
  • composition comprising the peptide of the present invention
  • Another aspect of the present invention provides a cosmetic composition comprising a peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • the peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 is the '1.
  • Peptides of the present invention' is the same as the peptides described in the section, detailed description above '1.
  • the peptide' item of the present invention is used, and the following will describe only the specific composition of the cosmetic composition.
  • the term'pore' refers to a small hole in which sebum present on the face, forehead, nose, etc. is secreted
  • 'black head' is a mixture of denatured sebum, old keratin, etc., accumulated in the pores, and contamination present around The substance is deposited, goes through an oxidation process, and becomes black and shows black sebum.
  • the cosmetic composition of the present invention may be a cosmetic composition for improving skin condition.
  • the "improvement of skin condition” may refer to a process of treating, alleviating or alleviating skin damage caused by an intrinsic factor or an exogenous factor of the skin, or an effect thereof, for example, wrinkle improvement, skin It may mean that it is used for purposes such as improving elasticity, wound regeneration, suppressing sebum production, or improving acne, but is not limited thereto.
  • the peptide of the present invention is stable at high temperatures (see FIGS. 1 and 2), and has an effect of improving skin wrinkles due to muscle relaxation or increased dermal constituents (see FIGS. 15 to 19).
  • the dermal constituent material may include collagen, but is not limited thereto.
  • the peptide of the present invention is stable at high temperature (see FIGS. 1 and 2), and the number of sebaceous glands is reduced and expression of the sebum production related marker is reduced by the peptide of the present invention (FIG. 20). Reference).
  • the cosmetic composition of the present invention may be prepared in a liquid or solid form using bases, auxiliaries and additives commonly used in the cosmetic field.
  • Cosmetics in liquid or solid form may include, but are not limited to, forms such as lotion, cream, lotion, and bath.
  • the bases, adjuvants and additives commonly used in the cosmetic field are not particularly limited, and include, for example, water, alcohol, propylene glycol, stearic acid, glycerol, cetyl alcohol, liquid paraffin, and the like.
  • the cosmetic composition of the present invention may contain not only the peptides containing the amino acid sequence, but also components commonly used in cosmetic compositions, such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and fragrances. , And a carrier.
  • the cosmetic composition of the present invention can be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, for example, solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing , May be formulated as an oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation and spray, but is not limited thereto. More specifically, it can be prepared in the form of flexible lotion, nutrition lotion, nutrition cream, massage cream, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, spray or powder.
  • the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a paste, cream, or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide as a carrier component This can be used.
  • lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component, and in the case of a spray, additionally, chlorofluorohydro Propellants such as carbon, propane/butane or dimethyl ether.
  • a solvent, a solubilizing agent or an emulsifying agent is used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, and propylene Glycols, 1,3-butylene glycol oil, glycerol aliphatic esters, polyethylene glycol or fatty acid esters of sorbitan.
  • the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a suspension
  • a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol as a carrier component
  • an ethoxylated isostearyl alcohol such as polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester
  • a suspending agent such as polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester
  • Microcrystalline cellulose aluminum metahydroxide, bentonite, agar or trakant, and the like.
  • the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a surfactant-containing cleansing agent
  • Sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters and the like can be used.
  • the cosmetic composition of the present invention may be used alone or in duplicate, or may be used in duplicate with other cosmetic compositions other than the present invention.
  • the cosmetic composition excellent in skin moisturizing effect and skin barrier improving effect according to the present invention may be used according to a conventional method of use, and the number of times of use may be varied according to a user's skin condition or taste.
  • the cosmetic composition of the present invention is a soap, a surfactant-containing cleansing agent, or a surfactant-free cleansing formulation
  • the soap is liquid soap, powdered soap, solid soap and oil soap
  • the surfactant-containing cleansing formulation is a cleansing foam, cleansing water, a cleansing towel and a cleansing pack
  • the surfactant-free cleansing formulation is a cleansing cream , Cleansing lotions, cleansing water and cleansing gels, but are not limited thereto.
  • Another aspect of the present invention provides the use of a pharmaceutical composition or a cosmetic composition comprising a peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 is the '1.
  • Peptides of the present invention' is the same as the peptides described in the section, detailed description above '1.
  • Peptide' item of the present invention is used, and hereinafter, only the use of the composition containing the peptide will be described.
  • the present invention provides a muscle relaxation method comprising the step of applying the peptide or pharmaceutical composition to the skin, or muscle contracted skin.
  • the application may include, but is not limited to, application to the skin.
  • the present invention provides a method for preventing, inhibiting, or treating a neuromuscular disease comprising administering the peptide or pharmaceutical composition to an individual or an individual having a neuromuscular disease.
  • the '2 For the pharmaceutical composition, the '2.
  • the pharmaceutical composition comprising the peptide of the present invention' is the same as described in the section.
  • the peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or a pharmaceutical composition comprising the peptide may be applied and administered to an individual in need thereof in an effective amount.
  • the present invention provides a method for improving skin wrinkles, including applying the peptide or cosmetic composition to skin or wrinkled skin.
  • the present invention provides a method for inhibiting sebum production, comprising applying the peptide or cosmetic composition to the skin.
  • the present invention provides a method for improving acne comprising the step of applying the peptide or cosmetic composition to the skin or skin having acne.
  • the application may include, but is not limited to, application to the skin.
  • the '3 The cosmetic composition comprising the peptide of the present invention' is the same as described in the item.
  • the peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or the cosmetic composition containing the peptide may be applied and administered to an individual in need thereof in an effective amount.
  • novel peptide sequence'KFLIK' consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1 was prepared using a known method.
  • the molecular weight of the new peptide was 647.4 Da.
  • the peptide of the present invention composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 was dissolved in sterile distilled water at a concentration of 1000 ppm, and stored at 45° C. for 7 days, 14 days, 28 days, 60 days, 75 days, followed by HPLC analysis.
  • the peptide of the present invention was dissolved in sterile distilled water at a concentration of 1000 ppm, and heated at 121° C. for 15 minutes and 30 minutes, followed by HPLC analysis.
  • SNARE soluble N-ethylmaleimide sensitive factor attachment protein receptor
  • the t-SNARE complex which is a complex of the syntaxin 1A (syntaxin 1A) protein attached to the target membrane and the SNAP-25 protein, and v-SNARE attached to the vesicle are involved. If the SNARE conjugation and twisting process is not completely completed, membrane fusion fails, and accordingly, neurotransmitter release is not achieved, resulting in muscle relaxation. It was confirmed that the peptide of the present invention has a resolution to the syntax 1A that forms t-SNARE.
  • the peptide of the present invention when the peptide of the present invention was treated, the peptide of the present invention compared to the negative control group not treated with the peptide of the present invention reduced the band of the recombinant syntaxin 1A protein in a concentration-dependent manner (FIG. 3).
  • the peptide of the present invention when the peptide of the present invention was treated, the peptide of the present invention reduced the band of the endogenous syntaxin 1A protein in a concentration-dependent manner, similar to the positive control treated with BoNT/C LC (FIG. 4).
  • the peptide of the present invention decomposes recombinant syntaxin 1A or endogenous syntaxin 1A, and accordingly, a SNARE complex is not formed, so that neurotransmitter is not released and muscle relaxation effect will be exhibited. Is expected.
  • the SNARE complex formed in the cell is inhibited by the synaptic 1A degrading action of the peptide of the present invention. Specifically, after performing the Western blot, the density of the band of the expected size of the SNARE complex was confirmed.
  • SH-SY5Y cells were seeded in 6-well plates at a density of 3X10 5 cells/well. After incubation overnight, the medium was replaced with serum-free DMEM.
  • the peptides of the present invention were treated for each concentration (10 ⁇ M, 50 ⁇ M, 100 ⁇ M) for 24 hours. For the positive control, 0.2 ⁇ M BoNT/C LC was treated. The negative control did not process the sample. After 24 hours of processing the sample, cells were collected and lysates were secured to perform Western blot for the Syntaxin 1A antibody (synaptic systems, Germany).
  • the band size of the SNARE complex is 75 kDa.
  • Coimmunoprecipitation is used for the purpose of detecting other proteins that bind a specific protein under non-denaturing conditions.
  • SH-SY5Y cells were seeded in 6-well plates at a density of 3X10 5 cells/well. After overnight culture, the medium was replaced with serum-free DMEM.
  • the peptide of the present invention at a concentration of 50 ⁇ M was treated for 24 hours.
  • 0.2 ⁇ M BoNT/C LC was treated.
  • the negative control did not process the sample.
  • FIG. 6 'IP input' represents the amount of SNAP-25 and syntaxin 1A proteins identified in the cell lysate obtained before IP, and'Immunoprecipitation: anti-SNAP-25' after immunoprecipitation using SNAP-25 antibody.
  • the obtained result is obtained by treating SNAP-25 antibody or syntaxin 1A antibody, respectively.
  • the'SNAP-25' panel detects SNAP-5 precipitated by the SNAP-25 antibody in the cell lysate again, and the'Syntaxin 1A' panel shows the cell lysate. Shows that the precipitate precipitated with the SNAP-25 antibody was detected with the syntaxin 1A antibody.
  • the negative control that did not process the sample shows that the amount of syntaxin 1A is maintained, thereby forming a SNARE complex, and the peptide treatment group and BoNT/C LC treatment group of the present invention It can be seen that the formation of SNARE complex is inhibited because the amount of silver syntaxin 1A decreases.
  • Formation of the SNARE complex is inhibited during the treatment of the peptide of the present invention, and considering the results of Experimental Example 2, it can be seen that syntaxin 1A is decomposed by the peptide treatment of the present invention and thus the formation of the SNARE complex is inhibited. As the formation of is inhibited, the release of neurotransmitters is not achieved, so it is expected to have a muscle relaxation effect.
  • the peptide of the present invention composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 has an acetylcholine secretion inhibiting function.
  • Human Bone marrow Neuroblastoma human Bone marrow Neuroblastoma
  • SH-SY5Y was inoculated and cultured in a CO 2 incubator for 24 hours. The medium was replaced with serum free medium and incubated for 48 hours.
  • the peptide of the present invention was treated with concentrations of 1 ⁇ M, 10 ⁇ M, and 50 ⁇ M, and the positive control tetanus was treated with 50 nM.
  • NIC nicotine + potassium chloride
  • KCl potassium chloride
  • the peptide of the present invention reduced the acetylcholine content in a concentration-dependent manner.
  • the effect of inhibiting acetylcholine secretion was superior to that of the group treated with thetanus, a positive control group.
  • DAS Digital Abduction Scoring
  • a score of 0 indicates that all five toes are apart, a score of 1 indicates that the two toes of the mouse are stuck during abduction, a score of 2 indicates that the thumb and two toes are not separated, and a score of 3 indicates the thumb and three toes. This is attached, and 4 points indicate that all 5 toes are attached.
  • mice Female 7 weeks old mice were injected into the calf muscles of 100 ⁇ g of the present invention and BTX-A type (BoNT-A) 0.6 units, respectively, and then DAS analyzed.
  • the peptide-administered group of the present invention showed a muscle relaxation effect compared to the unadministered group after 20 hours of administration, and showed an effect similar to that of BoNT-A.
  • the peptide of the present invention of the present invention suppresses acetylcholine secretion in vitro and exhibits a muscle relaxation effect to a degree similar to Botox in vivo, and thus can be usefully used to improve neuromuscular diseases or wrinkles.
  • The'rodamine-peptide of the present invention' conjugate used to confirm whether the peptide of the present invention penetrated into cells or tissues was prepared as follows.
  • a peptide solution of 10 mg/ml of the present invention was prepared using 100 mM sodium bicarbonate (pH 9.0).
  • a 1 mg/ml NHS-rhodamine (Thermo Scientific, 46406) solution was prepared using dimethylformamide.
  • SH-SY5Y cells were seeded in 6-well plates at a density of 3X10 5 cells/well. After overnight culture, the medium was replaced with serum-free DMEM.
  • the peptide of the present invention with rhodamine, a fluorescent material was treated for 4 hours according to concentration. After 4 hours, the cells were fixed by treatment with 4% paraformaldehyde, and then nuclear staining was performed using a DAPI staining kit (Invitrogen, USA). The penetration of the peptide into the cells was observed through a fluorescence microscope. Blue represents the nucleus of cells stained with DAPI, and red represents the'rhodamine-peptide of the invention' conjugate.
  • the rhodamine-peptide of the invention was applied and 1 hour later the rat was sacrificed for analysis. Skin tissue at the application site was collected and formalin fixation was performed for one day. After making and sectioning paraffin blocks using fixed tissue, immunohistochemical staining was performed using a cell marker TrkB Ab (Cell signaling, USA). Thereafter, nuclear staining was performed using a DAPI staining kit (Invitrogen, USA). The pattern of peptide penetration in the tissue was observed through a fluorescence microscope. Blue represents the nucleus of cells stained with DAPI, red represents the'rhodamine-peptide of the present invention' conjugate, and green represents TrkB (neural fiber marker).
  • the peptide of the present invention penetrates into the muscle layer of skin tissue when the peptide of the present invention is treated as shown in FIG. 12. It was also confirmed that it co-localized with a neuronal marker. When the magnification of FIG. 12 was observed, it was confirmed that the neurons surrounding the hair follicle or sebaceous gland coexist with the peptide of the present invention (FIGS. 13 and 14 ).
  • the peptide of the present invention can penetrate into cells, penetrate into the muscle layer of the skin tissue, and coexist with the neuronal markers in the muscle layer, so it is involved in the formation of the SNARE complex, which is involved in the neurotransmitter transmission of the nerve cells, and exhibits a muscle relaxation effect. Is expected.
  • a liposome solution containing 4000 ppm of the peptide of the present invention was applied twice a day for a total of 12 weeks to the back of a 7-week-old hairless mouse. After observing the application site visually, skin tissue was collected and fixed with formalin. Paraffin blocks were made using fixed tissue and sections were sectioned to prepare tissue slides.
  • Tissue slides were stained using Masson's Trichrome Staining Kit (Abcam, USA) and observed with an optical microscope.
  • the group coated with the liposome solution containing the peptide of the present invention for 12 weeks increased collagen levels compared to the control group applied only with the liposome solution (FIG. 17 ).
  • Immunohistochemical staining was performed using elastin antibody and fibronectin antibody (Cell signaling, USA), followed by nuclear staining using a DAPI staining kit (Invitrogen, USA). The stained tissue slide was observed with a fluorescence microscope.
  • a liposome solution containing 4000 ppm of the peptide of the present invention was applied twice a day for a total of 12 weeks to the back of a 7-week-old hairless mouse. After observing the application site visually, skin tissue was collected and fixed with formalin. Paraffin blocks were made using fixed tissue and sections were sectioned to prepare tissue slides. Immunohistochemical staining was performed using a fatty acid synthase antibody (Cell signaling, USA), a marker related to sebum production, and the stained tissue slide was observed with an optical microscope.
  • Cell signaling Cell signaling, USA
  • FIG. 20 The left panel of FIG. 20 is the result of an individual who applied the liposome containing no peptide for 12 weeks, and the right panel was the result of an individual who applied the liposome containing 4000 ppm of peptide for 12 weeks, and the concentration of the immunostaining site shown in brown was thick. It can be seen that the number is softened and the number is reduced by application of the peptide liposome.
  • Triethanolamine 0.25 Carboxyvinyl polymer 0.22 glycerin 4 Butylene glycol 2 Peptides of the invention 1.5 Wax 0.5 Cetostearyl alcohol One Glyceryl monostearate One Squalene 4 Purified water Proper
  • the softening agent containing the peptide of the present invention as an active ingredient was prepared as shown in Table 2 below.
  • Raw material Content (parts by weight) 1,3-butylene glycol 1.00 Disodium LED 0.05 Allantoin 0.10 Dipotassium glyceride 0.05 Citric Acid 0.01 Sodium citrate 0.02 Glyceres-26 1.00 Arbutin 2.00 PEG-40 hydrogenated castor oil 1.00 ethanol 30.00 Peptides of the invention 1.5 coloring agent a very small amount Flavor a very small amount Purified water Balance
  • Nutritious cream containing the peptide of the present invention as an active ingredient was prepared as shown in Table 3 below.
  • Raw material Content (parts by weight) 1,3-butylene glycol 7.0 glycerin 1.0 D-panthenol 0.1 Magnesium aluminum silicate 0.3 PEG-40 stearate 1.2 Stearic Acid 2.0 Polysorbate 60 1.5 Lipophilic glyceryl stearate 2.0 Sorbitan sesquioleate 1.5 Cetearyl alcohol 3.0 Mineral oil 4.0 Squalene 3.8 Peptides of the invention 1.5 vegetable oil 1.8 Dimethicone 0.4 Dipotassium glyceride a very small amount Allantoin a very small amount Sodium hyaluronate a very small amount Tocopheryl Acetate Proper Triethanolamine Proper Flavor Proper Purified water Balance
  • a lotion containing the peptide of the present invention as an active ingredient was prepared as shown in Table 4 below.
  • a powder was prepared by mixing the above components and filling the gas-tight fabric.
  • Peptide of the present invention 100 mg
  • tablets were prepared by tableting according to a conventional tablet manufacturing method.
  • Peptide of the present invention 100 mg
  • the capsules were prepared by filling the gelatin capsules according to a conventional capsule preparation method.
  • Peptide of the present invention 150 mg

Abstract

본 발명은 생리 활성을 나타내는 펩타이드 및 상기 펩타이드를 함유하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 펩타이드는 근육 이완, 피부 주름 개선, 피지 생성 억제 등의 다양한 생리 활성을 나타내므로, 근육 이완용 약학적 조성물, 또는 피부 주름 개선, 피지 생성 억제, 또는 여드름 개선용 화장료 유효성분으로 사용될 수 있다.

Description

근육 이완용 조성물
본 발명은 생리 활성을 갖는 펩타이드 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 생리 활성을 갖는 펩타이드를 포함하는 근육 이완, 피부주름 개선, 피지 생성 억제, 또는 여드름 개선용 조성물, 예컨대 약학적 조성물 또는 화장료 조성물에 관한 것이다.
동물의 신경계를 구성하는 신경세포는 다른 세포에서 찾아볼 수 없는 특이구조로 축삭을 가지고 있다. 축삭은 가늘고 긴 구조체로서 세포체에서 뻗어나와 신경세포의 표적에 연결되어 있으며, 이를 통해 신호를 전달하고 물질을 수송하게 된다.
신경근연접은 축삭의 종말부가 골격근세포와 연접하여 임펄스가 신경세포에서 근육으로 전달될 수 있도록 특수하게 분화된 시냅스 구조이다. 골격근으로 가는 축삭은 수초에 의해 싸여있는 유수 축삭이며 근육에 가까이 가면 여러개의 종말 가지로 분지된다. 이 분지된 축삭은 수초에 의해 싸여 있으나 근육으로 들어가는 부위에서 수초가 없어지고, 다른 시냅스를 이루는 축삭 종말과 같이 종말 팽대를 형성하며, 이 종말 팽대는 오목하게 생긴 근세포 표면에 위치하게 된다. 이러한 구조를 운동종말판 또는 신경근연접이라고 한다.
다른 시냅스에서와 같이 신경근연접의 축삭 종말에는 수많은 미토콘드리아와 시냅스 소포가 존재한다. 신경근연접의 시냅스 소포에는 신경전달물질인 아세틸콜린이 함유되어 있다. SNARE 분자는 아세틸콜린을 방출하는데 필수적이며, 아세틸콜린 방출 작용의 억제는 이완성 마비를 야기한다. 축삭 종말과 근육 사이에는 연접틈새가 있으며, 시냅스 이후 부분인 골격근세포의 세포막은 근형질쪽으로 함입되어 많은 연접 주름을 형성한다. 이 주름 부위의 세포막에도 아세틸콜린 수용체가 있어, 이 구조는 아세틸콜린과 수용체가 결합할 수 있는 면적을 넓혀주는 역할을 한다고 추측된다.
신경 임펄스가 신경근연접으로 전달되면 종말 세포막의 전압 감응성 칼슘 채널이 열리고 칼슘이 안으로 들어와 시냅스 소포를 세포막과 융합시켜 소포 내의 아세틸콜린을 연접 틈새로 유리시킨다. 유리된 아세틸콜린은 근세포막에 있는 아세틸콜린 수용체와 결합하게 되며, 이에 의해 나트륨 채널이 열리게 되고, 그 결과 세포막의 탈분극이 일어나게 된다. 신경근연접에서 시작된 임펄스는 근섬유의 표면을 따라 퍼져나가 근세포의 심부로 전달된다. 임펄스는 삼조체(triad)로 전달되어 근형질 내 세망의 막의 칼슘 채널을 열고 칼슘을 근형질 내로 유리시킨다. 칼슘은 트로포닌 C와 결합하며 이에 따라 근육의 수축이 시작된다. 임펄스가 중단되면 칼슘은 능동수송에 의해 근형질 내 세망 수조로 다시 들어가게 되며 근육은 이완된다. 따라서, 신경근연접에서 아세틸콜린의 분비를 억제하면, 신경근연접에서 발생한 임펄스가 근육으로 전달되지 않고, 임펄스가 중단되므로 근육이 이완되게 된다.
한편, 안면 표정 주름의 형성 원인이나 그 메카니즘은 피부를 내부로 당기는 표피 근육 긴장에 있다. 이러한 근육 긴장은 안면 근육 약화, 신경의 활동 과다의 결과이다. 신경의 과잉 활동은 근육 섬유를 자극하는 제어되지 않은 과도한 신경전달물질의 방출 특성이다. 이 때문에, 신경전달물질의 방출을 조절하는 분자는 근육의 긴장을 이완시켜, 안면 주름을 제거하는데 기여한다. 따라서, 신경전달물질의 방출을 조절하여, 근육 경련을 치료하고 안면 비대칭 및/또는 안면 주름(특히, 안면 표정 주름)을 감소하거나 제거하는데 효능이 있는 신규 활성 성분을 개발할 필요가 있다.
근육 이완 작용과 관련해서는 보툴리눔 톡신이 알려져 있다. 보툴리눔 톡신은 안면 주름 제거 용도로 임상 실험과 미용에 가장 보편적으로 이용된다. 보툴리눔 톡신은 SNARE 단백질의 기능적 손상을 야기하며, SNARE 복합체를 차단하여 신경전달물질인 아세틸콜린의 분비를 억제하여 근육 이완 효과를 나타낸다.
보툴리눔 톡신의 근육 이완 효과를 이용하여 근육 이완제로 사용하거나(한국 공개특허공보 제2010-0020972호), 주름을 줄이는 목적으로 이용되어 왔다. 하지만, 보툴리눔 톡신의 마비 효과는 평균 6개월간 가역적이므로, 이러한 처리에는 보툴리눔 톡신의 반복 주입이 필요하다. 또한, 보툴리눔 톡신은 환자의 면역계에 의해 인식될 수 있는 크기를 가지므로 약제에 대한 면역 반응이 유발될 수 있다. 보툴리눔 톡신에 대한 항체의 형성은 현저한 치료 효능 손실을 초래하므로 심각한 문제이다. 따라서, 면역 반응을 유발하지 않는 보다 간단하고 안정한 분자 구조를 갖으면서, 제조 비용이 효율적인, 보툴리눔 톡신과 유사한 마비 효과를 나타내는 분자의 개발이 필요한 실정이다.
한편, 피지는 피지선에서 만들어져 모공을 통하여 방출되며, 피부 및 모발 표면에 지방막을 형성하여 외부의 균으로부터 우리 몸을 보호하는 항균, 정균 작용을 한다. 피지선에서 피지의 분비가 많아지거나 모공을 통과하는 과정에서 장애가 생기게 되면 모공이 확대된다. 이와 같이 확대된 모공 안에는 피지가 축적되고, 이러한 피지는 각질, 메이크업 화장 노폐물, 또는 먼지와 서로 엉겨 축적된다. 엉겨 붙은 피지 노폐물은 공기의 라디칼과 접촉하여 산화됨으로써 갈색 혹은 검은색으로 변색되어 블랙헤드(black head)가 된다. 또한, 피지는 여드름을 유발하는 원인이기도 하므로 과도한 피지 생성을 억제할 수 있는 물질의 개발 또한 필요한 실정이다.
본 발명의 목적은 근육 이완, 피부주름 개선, 피지 생성 억제, 또는 여드름 개선과 같은 다양한 생리 활성을 갖는 펩타이드 및 이를 포함하는 약학적 또는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위해서, 본 발명은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 제공한다.
또한, 본 발명은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 근육 이완용 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 구현예에서, 상기 조성물은 약학적 조성물 또는 화장료 조성물의 형태일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 구현예에서, 상기 펩타이드는 근육 이완용 조성물 100중량%에 대하여 0.001중량% 내지 60중량%로 포함될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 구현예에서, 상기 조성물은 신경 근육 질환의 예방 또는 치료에 사용할 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에서, 상기 상기 신경 근육 질환은 눈꺼풀 경련, 사경, 경부 근긴장 이상, 강직성 안검연축, 겨드랑이 다한증, 항문열창, 질경련, 이완불능증, 두통 질환, 특발성 및 신경성 배뇨근 과다증, 국소이긴장증, 측두하악관절 통증 장애, 당뇨병성 신경증, 성대(vocal cord) 기능 장애, 사시, 만성신경병증, 안면근육비대증, 배뇨근 조임근 장애, 또는 양성 전립선 비대증일 수 있고, 상기 두통 질환은 편두통일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 구현예에서, 상기 펩타이드는 아세틸콜린의 분비를 억제할 수 있다.
또한, 본 발명은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 한 구현예에서, 상기 화장료 조성물은 피부상태 개선의 용도, 예컨대 피부 주름 개선, 피지 생성 억제, 또는 여드름 개선 등의 용도로 사용될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 구현예에서, 상기 펩타이드는 화장료 조성물 100중량%에 대하여 0.001중량% 내지 60중량%로 포함될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 구현예에서, 상기 펩타이드는 콜라겐의 발현을 증가시킬 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드는 근육 이완, 피부 주름 개선, 피지 생성 억제 등의 생리 활성을 나타내는 바, 상기 펩타이드를 근육 이완용 조성물, 피부 주름 개선용 조성물, 피지 생성 억제용 조성물, 블랙헤드 생성 억제용 조성물, 또는 여드름 개선용 조성물의 유효성분으로 이용할 수 있다.
도 1은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 장기 보관시 고온 안정성 평가 결과이다.
도 2는 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 고온 안정성 평가 결과이다.
도 3은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 재조합 신택신 1A 분해 정도를 나타낸다.
도 4는 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 내인성 신택신 1A 분해 정도를 나타낸다.
도 5는 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 SNARE 복합체 형성 억제 효과를 나타낸다.
도 6은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 SNARE 복합체 형성 억제 효과를 나타낸다.
도 7은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 아세틸콜린 분비 억제 효과를 나타내는 그래프이다.
도 8은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 근육 이완 효과를 나타낸다.
도 9 및 도 10은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드와 보톡스의 근육 이완 효과를 비교한 결과를 나타낸다.
도 11은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 세포 내 침투 여부를 확인한 결과이다.
도 12는 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 조직 침투 양상을 확인한 결과이다.
도 13은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 조직 침투 양상을 모낭 주변에서 확인한 결과이다.
도 14는 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 조직 침투 양상을 피지샘 주변에서 확인한 결과이다.
도 15 및 도 16은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 주름 완화 효과를 나타낸다.
도 17은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 도포에 의한 콜라겐 수준 증가를 나타낸다.
도 18은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 도포에 의한 엘라스틴 수준 증가를 나타낸다.
도 19는 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 도포에 의한 피브로넥틴 수준 증가를 나타낸다.
도 20은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 도포에 의한 피지샘 수 감소 및 피지 생성 관련 마커의 발현 감소 결과를 나타낸다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
1. 본 발명의 펩타이드
본 발명은 유용한 생리 활성, 예컨대 근육 이완, 피부주름 개선, 피지 생성 억제, 또는 여드름 개선 등과 같은 다양한 생리 활성을 갖는 펩타이드를 제공한다.
본 발명의 펩타이드는 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함한다. 한 구현예에서, 본 발명의 펩타이드는 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열로 이루어질 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에 있어서, "펩타이드"란 용어는 펩타이드 결합에 의해 아미노산 잔기들이 서로 결합되어 형성된 선형의 분자를 의미한다. 상기 펩타이드는 본 기술분야에 공지된 통상의 생물학적 또는 화학적 합성 방법, 특히 고상 합성 기술(solid-phase synthesis techniques)에 따라 제조될 수 있다.
상기 펩타이드는 기능에 영향을 미치지 않는 범위 내에서, 아미노산 잔기의 결실, 삽입, 치환 또는 이들의 조합에 의해서 상이한 서열을 가지는 아미노산의 변이체들, 또는 단편들일 수 있다. 상기 펩타이드의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 아미노산 교환은 본 기술 분야에 공지되어 있다. 경우에 따라서는 인산화(phosphorylation), 황화(sulfation), 아크릴화(acrylation), 당화(glycosylation), 메틸화(methylation), 파네실화(farnesylation) 등으로 변형될 수 있다. 따라서, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 펩타이드 및 이의 변이체 또는 이의 활성 단편을 포함한다. 상기 실질적으로 동일한 단백질이란 상기 서열번호 1의 아미노산 서열과 60% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 예컨대, 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 의미하나 이에 한정되지 않으며, 60% 이상의 아미노산 서열의 상동성을 가지며 동일한 활성을 가진다면 본 발명의 범위에 포함된다. 또한, 본 발명의 펩타이드는 표적화 서열, 태그(tag), 표지된 잔기, 반감기 또는 펩타이드 안정성을 증가시키기 위한 특정 목적으로 제조된 아미노산 서열을 추가적으로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 상기 펩타이드는 본 기술분야에서 널리 공지된 다양한 방법으로 획득할 수 있다. 본 발명의 한 구현예에서, 본 발명의 펩타이드는 폴리뉴클레오타이드 재조합과 단백질 발현 시스템을 이용하여 제조하거나 펩타이드 합성과 같은 화학적 합성을 통하여 시험관 내에서 합성하는 방법, 및 무세포 단백질 합성법 등으로 제조될 수 있다.
또한, 보다 나은 화학적 안정성, 강화된 약리 특성(반감기, 흡수성, 역가, 효능 등), 변경된 특이성(예를 들어, 광범위한 생물학적 활성 스펙트럼), 감소된 항원성을 획득하기 위하여, 본 발명의 펩타이드의 N-말단 또는 C-말단에 보호기가 결합되어 있을 수 있다. 예컨대, 상기 보호기는 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기 또는 폴리에틸렌글리콜(PEG)일 수 있으나, 펩타이드의 개질, 특히 펩타이드의 안정성 증진시킬 수 있는 성분이라면, 제한없이 포함할 수 있다. 상기 '안정성'은 생체 내 단백질 절단 효소의 공격으로부터 본 발명의 펩타이드를 보호하는 생체내(in vivo)에서의 안정성뿐만 아니라, 저장안정성(예컨대, 상온 저장 안정성)도 포함하는 의미로 사용된다.
2. 본 발명의 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물
본 발명의 다른 측면은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 근육 이완용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드는 상기 '1. 본 발명의 펩타이드' 항목에서 설명한 펩타이드와 동일한바, 구체적인 설명은 위 '1. 본 발명의 펩타이드' 항목을 원용하고, 이하에서는 약학적 조성물에 특유한 구성에 대해서만 설명하도록 한다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 본 발명의 상기 펩타이드는 근육 이완 활성을 가지는 바, 근육 이완을 위한 조성물의 유효성분으로 이용될 수 있다. 이에, 본 발명은 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 근육 이완용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 펩타이드는 근육 이완용 약학적 조성물 100중량%에 대하여 0.001 중량% 내지 60 중량%, 예컨대 0.01 중량% 내지 50 중량%의 함량으로 포함될 수 있다. 상기 근육 이완용 약학적 조성물 내의 상기 펩타이드의 함량이 하한값 미만일 경우에는 상기 펩타이드에 의한 근육 이완 효과가 충분히 발현되지 않을 수 있고, 상한값을 초과할 경우에는 투입 농도 대비 상기 펩타이드에 의한 효과가 상대적으로 낮을 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 신경 근육 질환의 예방 또는 치료에 사용될 수 있고, 근육 이완을 목적으로 하는 질환이라면 본 발명의 약학적 조성물을 제한없이 적용할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 '예방'은 본 발명의 약학적 조성물이 신경 근육 질환의 발생을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 '억제'는 본 발명의 약학적 조성물이 신경 근육 질환의 발생을 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 '치료'는 본 발명의 약학적 조성물이 신경 근육 질환의 증상이 호전되도록 하거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 '투여'는 어떠한 적절한 방법으로 개체에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 약학적 조성물은 생체 내 표적에 도달할 수 있는 임의의 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로는 특별히 제한되지 않으나, 경구 또는 비경구 투여할 수 있다. 구체적으로는 비경구 투여할 수 있으며, 보다 구체적으로 피부에 도포하는 방식(즉, 경피 투여)으로 적용될 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 투여는 1일 1회 내지 4회, 2회 내지 3회 또는 2회 실시할 수 있다. 또한, 본 발명의 투여는 4주 이상, 8주 이상, 4주 내지 12주 또는 8주 내지 12주의 기간 동안 실시할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 '신경 근육 질환'은 말초신경과 근육에 생기는 질병을 나타낸다. 말초신경은 두개골이나 척추 속에 있는 중추신경계에서 갈라져 나와서, 중추신경계와 근육이나 피부와 같은 말단 장기를 연결시켜주는 신경 그물망을 나타내며, 중추신경계에서 결정된 명령을 근육 등 말단 장기에 전달하거나, 통각 등의 감각 정보를 중추신경계로 전달한다. 말초신경계 질환에는 말초신경의 기능장애, 말초신경이 근육과 연결되는 신경근연접, 근육 자체에 생긴 질환을 포함한다.
상기 신경 근육 질환은 눈꺼풀 경련, 사경(목의 근육들이 수축하여 목이 한쪽으로 기운 듯 부자연스러운 상태), 경부 근긴장 이상, 강직성 안검연축, 겨드랑이 다한증, 항문열창, 질경련, 이완불능증, 두통 질환, 특발성 및 신경성 배뇨근 과다증, 국소이긴장증(사지, 턱관절, 성대 등), 측두하악관절 통증 장애, 당뇨병성 신경증, 성대 기능 장애, 사시, 만성신경병증, 안면근육비대증(저작근 등), 배뇨근 조임근 장애, 양성 전립선 비대증 등의 질환을 비제한적으로 포함한다. 상기 두통 질환은 편두통일 수 있다.
본 발명의 한 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물에서 사용가능한 담체, 부형제 또는 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등을 들 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 일반적으로 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물은 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제할 수 있다.
또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제 및 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 본 발명의 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스, 락토오스 및 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘, 스티레이드, 탈크 같은 윤활제도 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등이 포함될 수 있다.
피부 투여를 위한 제제로는 더스팅 파우더, 에멀젼, 현탁액, 오일, 스프레이, 연고, 크림 페이스트, 겔, 폼, 또는 용액일 수 있다. 본 발명의 약학 제제는 무수 상태의 연고일 수 있고, 국소 용도에 적합하고 체온 상태에서 액체인 파라핀, 특히 저점도 파라핀을 함유하거나, 또는 상기 천연지방 또는 부분합성 지방, 예를 들면, 코코넛 지방산 트리글리세라이드, 경화유, 예를 들면 수소화된 피넛 오일 또는 캐스터 오일, 글리세롤의 지방산 부분 에스테르, 예를 들면 글리세롤 모노스테아레이트 및 디스테아레이트, 실리콘, 예를 들면 폴리메틸실록산, 예컨대 헥사메틸디실록산 또는 옥타메틸트리실록산을 함유할 수 있으며, 예를 들어 수성 크림과 관련되어 있고 수분 흡수 용량을 증가시키는 지방알코올, 그리고 스테롤, 울 왁스, 다른 유화제 및/또는 기타 첨가제를 함유할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물에 함유되는 상기 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 적용량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르지만, 경우에 따라 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들면, 상기 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드는 1일 0.0001 내지 1000 mg/kg으로, 구체적으로는 0.1 내지 1000 mg/kg의 용량으로 투여될 수 있으며, 상기 적용은 하루에 한번 또는 수회 나누어 적용할 수도 있다. 본 발명의 상기 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드로 구성되는 펩타이드의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 기관지내 흡입, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 신경 근육 질환 예방, 억제 또는 치료용 약학적 조성물은 상기 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 외에 신경 근육 질환의 개선, 완화, 치료 또는 예방을 나타내는 유효성분을 1종 이상 추가로 함유할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 신경 근육 질환의 개선, 완화, 치료 또는 예방을 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 본 발명의 펩타이드는 고온에서 안정하고(도 1 및 도 2 참고), 신경전달물질의 방출에 관여하는 신택신 1A를 분해하고, SNARE 복합체의 형성을 억제하고(도 3 내지 도 6 참고), 아세틸콜린의 분비를 억제하고(도 7 참고), 근육 이완 효과가 있고(도 8 내지 도 10 참고), 세포 내로 침투 가능하고, 조직의 근육층까지 침투하여 신경 세포 마커와도 공존하여 근육 이완 효과를 나타낼 수 있다(도 11 내지 도 14 참고).
3. 본 발명의 펩타이드를 포함하는 화장료 조성물
본 발명의 다른 측면은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
상기 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드는 상기 '1. 본 발명의 펩타이드' 항목에서 설명한 펩타이드와 동일한바, 구체적인 설명은 위 '1. 본 발명의 펩타이드' 항목을 원용하고, 이하에서는 화장료 조성물의 특유한 구성에 대해서만 설명하도록 한다.
본 발명에서 용어 '모공'이란 얼굴, 이마, 코 등에 존재하는 피지가 분비되는 작은 구멍을 나타내며, '블랙헤드'란 변성된 피지, 오래된 각질 등의 혼합물이 모공에 쌓이고, 그 주변에 존재하는 오염 물질이 침적되어 산화 과정을 거쳐, 검게 되어 까맣게 보이는 피지를 나타낸다.
본 발명의 구현예에 있어서, 본 발명의 화장료 조성물은 피부상태 개선용 화장료 조성물일 수 있다. 상기 "피부상태 개선"은 피부의 내재적 요인 또는 외인적인 요인에 의해 유발되는 피부의 손상을 치료, 경감, 완화시키는 과정 또는 그의 효과 등을 포괄적으로 의미할 수 있으며, 예를 들어, 주름개선, 피부탄력개선, 상처재생, 피지생성 억제, 또는 여드름 개선 등의 용도로 사용되는 것을 의미할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 본 발명의 펩타이드는 고온에서 안정하며(도 1 및 도 2 참고), 근육 이완 또는 진피 구성 물질 증가로 인한 피부 주름의 개선 효과가 있다(도 15 내지 도 19 참고). 상기 진피 구성 물질은 콜라겐을 포함할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 본 발명의 펩타이드는 고온에서 안정하며(도 1 및 도 2 참고), 본 발명의 펩타이드에 의해 피지샘 수 감소 및 피지 생성 관련 마커의 발현이 감소된다(도 20 참고).
본 발명의 화장료 조성물은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 기제, 보조제 및 첨가제를 사용하여 액체 또는 고체 형태로 제조될 수 있다. 액체 또는 고체 형태의 화장품으로는, 예를 들면 이에 한정되지는 않으나 화장수, 크림제, 로션제, 입욕제 등의 형태를 포함할 수 있다. 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 기제, 보조제 및 첨가제는 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면 물, 알코올, 프로필렌글리콜, 스테아르산, 글리세롤, 세틸알코올, 유동 파라핀 등이 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 상기 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 본 기술분야에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 벤질벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 피부 보습 효과 및 피부 장벽 개선 효과가 우수한 화장료 조성물은 통상적인 사용 방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용 횟수를 달리할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클린징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.
4. 본 발명의 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물 또는 화장료 조성물의 용도
본 발명의 다른 측면은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물 또는 화장료 조성물의 용도를 제공한다.
상기 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드는 상기 '1. 본 발명의 펩타이드' 항목에서 설명한 펩타이드와 동일한바, 구체적인 설명은 위 '1. 본 발명의 펩타이드' 항목을 원용하고, 이하에서는 상기 펩타이드를 포함하는 조성물의 용도에 대해서만 설명하도록 한다.
본 발명의 한 측면에서, 본 발명은 상기 펩타이드 또는 약학적 조성물을 피부, 또는 근육이 수축된 피부에 적용하는 단계;를 포함하는 근육 이완 방법을 제공한다. 상기 적용은 피부에 대한 도포를 포함할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 측면에서, 본 발명은 상기 펩타이드 또는 약학적 조성물을 개체, 또는 신경 근육 질환이 발생한 개체에 투여하는 단계;를 포함하는 신경 근육 질환의 예방, 억제, 또는 치료 방법을 제공한다.
상기 약학적 조성물에 대해서는 상기 '2. 본 발명의 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물' 항목에서 설명한 바와 동일하다.
상기 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 또는 상기 펩타이드를 포함하는 약학적 조성물은 유효량으로 이를 필요로 하는 개체에 도포, 투여될 수 있다.
본 발명의 다른 측면에서, 본 발명은 상기 펩타이드 또는 화장료 조성물을 피부, 또는 주름이 발생한 피부에 적용하는 단계;를 포함하는 피부 주름 개선 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 측면에서, 본 발명은 상기 펩타이드 또는 화장료 조성물을 피부에 도포하는 단계;를 포함하는 피지 생성 억제 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 측면에서, 본 발명은 상기 펩타이드 또는 화장료 조성물을 피부, 또는 여드름이 생성된 피부에 도포하는 단계;를 포함하는 여드름 개선 방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 적용은 피부에 대한 도포를 포함할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물에 대해서는 상기 '3. 본 발명의 펩타이드를 포함하는 화장료 조성물' 항목에서 설명한 바와 동일하다.
상기 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 또는 상기 펩타이드를 포함하는 화장료 조성물은 유효량으로 이를 필요로 하는 개체에 도포, 투여될 수 있다.
이하, 본 발명을 제조예, 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 제조예, 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 제조예, 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
제조예 1. 다양한 생리 활성을 갖는 신규 펩타이드의 제조
서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열로 구성되는 신규 펩타이드 서열 'KFLIK'은 공지의 방법을 이용하여 제조하였다. 신규 펩타이드의 분자량은 647.4 Da이었다.
실험예 1. 펩타이드의 고온 안정성 평가
1-1. 장기 보관시 고온 안정성 평가
서열번호 1의 아미노산 서열로 구성된 본 발명의 펩타이드를 1000ppm 농도로 멸균 증류수에 녹이고, 45℃에서 7일, 14일, 28일, 60일, 75일 동안 보관한 후, HPLC 분석을 수행하였다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 45℃ 조건에서 최대 관찰일인 75일 동안 본 발명의 펩타이드가 안정성을 유지하는 것을 확인할 수 있었다.
1-2. 고온 안정성 평가
본 발명의 펩타이드를 1000ppm 농도로 멸균 증류수에 녹이고, 121℃에서 15분, 30분 동안 가온한 후 HPLC 분석을 수행하였다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 121℃에서 최대 가온 시간인 30분 동안 본 발명의 펩타이드가 안정성을 유지하는 것을 확인할 수 있었다.
실험예 2. 펩타이드의 신택신 1A 분해 정도 확인
SNARE(soluble N-ethylmaleimide sensitive factor attachment protein receptor) 단백질은 세포 내에서 일어나는 막융합에 관여한다. 신경 전달에 관여하는 신경 SNARE는 시냅스전 막(presynaptic membrane)과 시냅스 소포(synaptic vesicle)의 결합에 관여한다. 신경전달물질의 배출시에 신경전달물질을 담고 있는 시냅스 소포는 시냅스전 막과 융합되어야 신경전달물질 배출 통로가 형성되며, 이때 막 융합은 단백질 복합체로 존재하는 SNARE에 의해 일어난다. 특히, 표적 막(target membrane)에 부착되어 있는 신택신 1A(syntaxin 1A) 단백질과 SNAP-25 단백질의 복합체인 t-SNARE 복합체와, 소포에 부착되어 있는 v-SNARE가 관여하게 된다. SNARE 접합과 꼬임 과정이 완전히 완료되지 않으면 막 융합이 실패하고 그에 따라 신경전달물질 방출이 이뤄지지 않아 근육이 이완된다. 본 발명의 펩타이드가 t-SNARE를 이루는 신택신 1A에 대해 분해능이 있는지 확인하였다.
2-1. 재조합 신택신 1A 분해 정도 확인
실험군에는 재조합 신택신 1A 단백질(Novus biologicals, USA) 1㎍과 본 발명의 펩타이드를 20μM, 100μM, 200μM의 농도별로 반응 완충액(50mM HEPES, 40mM 2-ME, 20μM ZnCl2, pH 7.4)에 처리하고, 음성 대조군(Control)은 재조합 신택신 1A 단백질만 처리하였다. 37℃ 조건에서 4시간 동안 반응시킨 후, 신택신 1A 항체(synaptic systems, Germany)를 사용하여 웨스턴 블랏을 수행하였다.
그 결과, 본 발명의 펩타이드를 처리하면, 본 발명의 펩타이드를 처리하지 않은 음성대조군 대비 본 발명의 펩타이드가 농도 의존적으로 재조합 신택신 1A 단백질의 밴드를 감소시켰다(도 3).
2-2. 세포 내에서 발현되는 내인성(endogenouse) 신택신 1A 분해 정도 확인
30㎍ SH-SY5Y 세포 용해물과 본 발명의 펩타이드를 농도별로(20μM, 100μM, 200μM) 반응 완충액(50mM HEPES, 40mM 2-ME, 20μM ZnCl2, pH 7.4)에 처리하였다. 양성 대조군(BoNT/C LC)은 본 발명의 펩타이드 대신에 0.2μM 보툴리눔 신경독 타입 C 경쇄(BoNT/C LC)를 사용하였고, 음성 대조군(Control)은 30㎍ SH-SY5Y 세포 용해물만 처리하였다. 각 혼합물은 37℃에서 4시간 동안 반응시켰다. 신택신 1A 항체(synaptic systems, Germany)를 사용하여 웨스턴 블랏을 수행하였다.
그 결과, 본 발명의 펩타이드를 처리하면 BoNT/C LC를 처리한 양성대조군과 유사하게 본 발명의 펩타이드가 농도 의존적으로 내인성 신택신 1A 단백질의 밴드를 감소시켰다(도 4).
실험예 2의 정리: 본 발명의 펩타이드는 재조합 신택신 1A 또는 내인성 신택신 1A를 분해하며, 이에 따라, SNARE 복합체가 형성되지 않게 되므로, 신경전달물질의 방출이 이루어지지 않아 근육 이완 효과가 나타날 것으로 예상된다.
실험예 3. SNARE 복합체 형성 분석
3-1. 웨스턴 블랏으로 분석
세포 내에서 형성되는 SNARE 복합체가 본 발명의 펩타이드의 신택신 1A 분해 작용에 의해 저해되는지 확인하였다. 구체적으로 웨스턴 블랏 수행 후에 SNARE 복합체의 예상 크기의 밴드의 밀도를 확인하였다. 3X105 세포/웰의 밀도로 6-웰 플레이트에 SH-SY5Y 세포를 접종하였다. 하룻밤 동안 배양 후에 무혈청 DMEM으로 배지를 교체하였다. 본 발명의 펩타이드를 농도별로(10μM, 50μM, 100μM) 24시간 동안 처리하였다. 양성대조군의 경우 0.2μM BoNT/C LC를 처리하였다. 음성 대조군(Control)은 시료를 처리하지 않았다. 시료를 처리하고 24시간이 경과한 후, 세포를 수집하고 용해물을 확보하여 신택신 1A 항체(synaptic systems, Germany)에 대한 웨스턴 블랏을 수행하였다. SNARE 복합체의 밴드 사이즈는 75 kDa이다.
웨스턴 블랏 결과, 본 발명의 펩타이드를 처리하면, BoNT/C LC를 처리한 양성대조군과 유사하게 SH-SY5Y 세포 내에서 SNARE 복합체 형성 억제가 관찰되었다(도 5). 실험예 2의 결과를 감안하면, 본 발명의 펩타이드의 신택신 1A 분해 효과에 의해서 SNARE 복합체의 형성이 억제된 것으로 예상된다.
3-2. 공면역침강(coimmunoprecipitation, Co-IP)으로 분석
공면역침강은 비-변성 조건에서 특정 단백질과 결합하는 다른 단백질을 검출할 목적으로 사용된다. 3X105 세포/웰의 밀도로 6-웰 플레이트에 SH-SY5Y 세포를 접종하였다. 하룻밤 배양 후 무혈청 DMEM으로 배지를 교체하였다. 50μM 농도의 본 발명의 펩타이드를 24시간 동안 처리하였다. 양성 대조군의 경우 0.2μM BoNT/C LC를 처리하였다. 음성 대조군(Control)은 시료를 처리하지 않았다. 세포 용해물을 확보하여 SNAP-25 항체(synaptic systems, Germany)를 이용한 면역침강을 진행 후 SNAP-25 항체 및 신택신 1A 항체(synaptic systems, Germany)를 이용하여 웨스턴 블랏을 수행하였다.
그 결과, 본 발명의 펩타이드 처리에 의해서 SH-SY5Y 세포 내 SNARE 복합체 형성 억제에 따라 SNAP-25와 신택신 1A 간의 상호작용이 저해되는 것을 확인하였다(도 6). 도 6에서 'IP input'은 IP하기 전에 얻은 세포 용해물에서 확인된 SNAP-25, 신택신 1A 단백질의 양을 나타내며, 'Immunoprecipitation: anti-SNAP-25'은 SNAP-25 항체를 이용한 면역침강 후 얻어진 수득물에 SNAP-25 항체 또는 신택신 1A 항체를 각각 처리하여 얻은 결과를 나타낸다. 즉,'Immunoprecipitation: anti-SNAP-25'에서 'SNAP-25' 패널은 세포 용해물에서 SNAP-25 항체에 의해 침전된 SNAP-5를 다시 검출한 것이며, '신택신 1A' 패널은 세포 용해물에서 SNAP-25 항체로 침전된 침전물을 신택신 1A 항체로 검출한 것을 나타낸다. '신택신 1A' 패널에서 시료를 처리하지 않은 음성대조군(Control)은 신택신 1A의 양이 유지되어 SNARE 복합체가 형성되어 있음을 알 수 있고, 본 발명의 펩타이드 처리군과 BoNT/C LC 처리군은 신택신 1A의 양이 감소하므로 SNARE 복합체의 형성이 저해되는 것을 알 수 있다.
실험예 3의 정리:
본 발명의 펩타이드 처리시 SNARE 복합체 형성이 억제되며, 실험예 2의 결과를 감안하면 본 발명의 펩타이드 처리에 의해서 신택신 1A가 분해되고 이에 따라 SNARE 복합체의 형성이 저해되는 것을 알 수 있고, SNARE 복합체의 형성이 저해됨에 따라 신경전달물질의 방출이 이루어지지 않아 근육 이완 효과가 나타날 것으로 예상된다.
실험예 4. 펩타이드에 의한 아세틸콜린 분비 억제 기능 확인
서열번호 1의 아미노산 서열로 구성된 본 발명의 펩타이드가 아세틸콜린 분비 억제 기능이 있는지 확인하였다. 인간 골수 신경아세포종(human Bone marrow Neuroblastoma)인 SH-SY5Y를 접종하고, 24시간 동안 CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 무혈청 배지로 배지를 교체하고 48시간 동안 배양하였다. 본 발명의 펩타이드를 1μM, 10μM, 50μM의 농도로 처리하고, 양성 대조군인 테타누스(tetanus)를 50nM로 처리하였다. 또한, 아세틸콜린 분비를 촉진하기 위한 유도 인자로 니코틴(NIC)+ 염화칼륨(KCl)을 처리한 후 30분 동안 배양하였다. 니코틴과 염화칼륨만을 처리하고, 본 발명의 펩타이드 또는 테타누스를 처리하지 않은 군을 음성 대조군으로 하였다. 배양 완료 후에 배지를 분리하고 배지에 포함되어 있는 아세틸콜린의 분비량을 콜린/아세틸콜린 분석 키트를 이용하여 측정하였다.
도 7에 도시한 바와 같이, 정상군(Control)에서 분비된 아세틸콜린의 양을 기준으로, 본 발명의 펩타이드는 농도 의존적으로 아세틸콜린 함량을 감소시켰다. 또한 본 발명의 펩타이드를 50μM로 처리한 경우에는 양성 대조군인 테타누스를 처리한 군에 비해서 아세틸콜린 분비 저해 효과가 우수하였다.
실험예 5. 마우스 발가락 근육의 이완 효과 확인
C57BL/6 Female 7주령 마우스의 종아리 근육에 본 발명의 펩타이드 100㎍를 투여한 후 관찰하였다. 근육 이완 효과는 발가락 외전 채점법(Digit Abduction Scoring, DAS) 분석으로 확인하였다. 외전은 팔다리를 밖으로 내뻗는 동작을 나타내며, DAS는 종아리 근육의 놀람 반응을 만드는 동물의 능력의 감소 정도를 측정한다. DAS는 0~4점으로 나누어서 점수를 주며, 점수가 높을수록 근육 이완 효과가 높은 것을 의미한다(도 8의 A). 즉, 점수가 높을수록 아세틸콜린 분비 억제 등과 같은 기작 등을 통해 놀람 반응이 저해되는 것을 의미한다. 0점은 다섯 발가락이 모두 떨어져 있는 것을 나타내고, 1점은 마우스의 발가락 두개가 외전 동안 붙어있는 것을 나타내며, 2점은 엄지와 두개의 발가락이 분리되지 않는 것을 나타내며, 3점은 엄지와 세개의 발가락이 붙어있는 것을 나타내며, 4점은 다섯개의 발가락이 모두 붙어있는 것을 나타낸다.
도 8의 B에 나타내는 바와 같이, 본 발명의 펩타이드를 처리하기 전에는 놀람 반응이 나타나며 발가락 다섯개가 모두 떨어져 있어 0점을 나타내었다. 반면에, 본 발명의 펩타이드 주입 후에는 3시간 후부터는 본 발명의 펩타이드의 근육 이완 작용에 의해서 DAS 점수가 높아졌으며, 본 발명의 펩타이드 주입 후 17시간 이후부터는 4점을 기록하였다.
실험예 6. 펩타이드와 보톡스 근육 이완 효과 비교
C57BL/6 Female 7주령 마우스 2마리의 종아리 근육에 각각 본 발명의 펩타이드 100㎍ 및 BTX-A 타입(BoNT-A)을 0.6 Unit 주입 후 DAS 분석하였다.
도 9 및 도 10에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 펩타이드 투여군은 투여 20시간 이후에 미투여군에 비해서 근육 이완 효과가 나타났으며, BoNT-A와 유사한 정도의 효과를 나타내었다.
실험예 4 내지 실험예 6의 정리:
본 발명의 본 발명의 펩타이드는 시험관 내에서 아세틸콜린 분비를 억제하고, 생체 내에서 보톡스와 유사한 정도로 근육 이완 효과를 나타내므로, 신경 근육 질환 또는 주름을 개선하는데 유용하게 사용할 수 있다.
실험예 7. 펩타이드의 세포 내 침투 여부 또는 조직 침투 양상 확인
본 발명의 펩타이드의 세포 내 침투 여부 또는 조직 침투 양상을 확인시 사용한 '로다민-본 발명의 펩타이드' 접합체는 하기와 같이 제조하였다. 100mM 중탄산나트륨(pH 9.0)을 이용하여 10mg/ml의 본 발명의 펩타이드 용액을 제조하였다. 디메틸포름아미드를 이용하여 1mg/ml NHS-로다민(Thermo Scientific, 46406) 용액을 제조하였다. 본 발명의 펩타이드:NHS-로다민 = 1:10(몰 비)가 되도록 용액을 혼합하였다. 차광 후 인버팅하면서 상온에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응물을 투석한 후 LC/MS로 접합 여부를 확인하였다.
7-1. 세포 내 침투 여부 확인
3X105 세포/웰의 밀도로 6-웰 플레이트에 SH-SY5Y 세포를 접종하였다. 하룻밤 배양 후 무혈청 DMEM으로 배지를 교체하였다. 형광 물질인 로다민(rhodamine)이 붙은 본 발명의 펩타이드를 농도별로 4시간 동안 처리하였다. 4시간 후에 4% 파라포름알데히드를 처리하여 세포를 고정한 후 DAPI 염색 키트(Invitrogen, USA)를 이용하여 핵 염색을 진행하였다. 형광 현미경을 통해 세포 내 펩타이드 침투 여부를 관찰하였다. 파란색은 DAPI로 염색된 세포의 핵을 나타내며, 붉은색은 '로다민- 본 발명의 펩타이드' 접합체를 나타낸다.
도 11에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 펩타이드 처리시 SH-SY5Y 세포 내로 본 발명의 펩타이드가 침투하는 것을 확인하였다.
7-2. 펩타이드의 조직 침투 양상 확인
7주령 SD 랫의 등 부위를 제모한 후 로다민- 본 발명의 펩타이드를 도포하고 1시간 후 분석을 위해 랫을 희생시켰다. 도포 부위의 피부 조직을 채취하여 포르말린 고정을 하루 동안 수행하였다. 고정된 조직을 이용하여 파라핀 블록을 만들고 섹션한 후 신경 세포 마커인 TrkB Ab(Cell signaling, USA)를 사용하여 면역조직화학 염색을 수행하였다. 이 후 DAPI 염색 키트(Invitrogen, USA)를 이용하여 핵 염색을 수행하였다. 형광 현미경을 통해 조직 내 펩타이드 침투 양상을 관찰하였다. 파란색은 DAPI로 염색된 세포의 핵을 나타내며, 붉은색은 '로다민-본 발명의 펩타이드' 접합체를 나타내고, 녹색은 TrkB(신경 섬유 마커)를 나타낸다.
확인 결과, 도 12에 나타낸 바와 같이 본 발명의 펩타이드 처리시 본 발명의 펩타이드가 피부 조직의 근육층까지 침투되는 것으로 나타났다. 또한 신경 세포 마커와도 공존(co-localization)하는 것을 확인하였다. 도 12를 확대하여 관찰하였을 때, 모낭이나 피지샘 주변의 신경 세포와 본 발명의 펩타이드가 공존하는 것이 확인되었다(도 13 및 도 14).
실험예 7의 정리:
본 발명의 펩타이드는 세포 내로 침투 가능하고, 피부 조직의 근육층까지 침투되며, 근육층에서 신경 세포 마커와도 공존하므로 신경 세포의 신경전달물질 전달에 관여하는 SNARE 복합체의 형성에 관여하여 근육 이완 효과를 나타낼 것으로 예상된다.
실험예 8. 펩타이드의 주름 개선 효과 확인(진피 구성 물질 발현 증가)
7주령 무모 마우스의 등 부위에 4000ppm 본 발명의 펩타이드를 포함한 리포솜 용액을 하루 2회 총 12주간 도포하였다. 도포 부위를 육안으로 관찰한 후 피부 조직을 채취하여 포르말린으로 고정하였다. 고정된 조직을 이용하여 파라핀 블록을 만들고 블록을 섹션하여 조직 슬라이드를 준비하였다.
8-1. 주름 완화 효과 확인
12주간 본 발명의 펩타이드를 포함한 리포솜 용액을 도포한 군은 리포솜 용액만 도포한 대조군에 비해서 육안 및 현미경 관찰 결과 모두에서 근육이완 효과에 의한 확연한 주름 감소가 관찰되었다(도 15 및 도 16).
8-2. 콜라겐 발현 수준 평가
Masson's Trichrome Staining Kit (Abcam, USA)을 이용하여 조직 슬라이드를 염색한 후 광학 현미경으로 관찰하였다.
12주간 본 발명의 펩타이드를 포함한 리포솜 용액을 도포한 군은 리포솜 용액만 도포한 대조군에 비해서 콜라겐 수준이 증가하였다(도 17).
8-3. 엘라스틴 및 피브로넥틴 발현 수준 평가
엘라스틴 항체와 피브로넥틴 항체(Cell signaling, USA)를 사용하여 면역조직화학 염색을 하고, 이 후 DAPI 염색 키트(Invitrogen, USA)이용하여 핵 염색하였다. 염색이 완료된 조직 슬라이드를 형광 현미경으로 관찰하였다.
12주간 본 발명의 펩타이드를 포함한 리포솜 용액을 도포한 군은 리포솜 용액만 도포한 대조군에 비해서 엘라스틴, 피브로넥틴 수준이 증가하였다(도 18 및 도 19).
실험예 9. 펩타이드의 피지 생성 억제 효과 확인
7주령 무모 마우스의 등 부위에 4000ppm 본 발명의 펩타이드를 포함한 리포솜 용액을 하루 2회 총 12주간 도포하였다. 도포 부위를 육안으로 관찰한 후 피부 조직을 채취하여 포르말린으로 고정하였다. 고정된 조직을 이용하여 파라핀 블록을 만들고 블록을 섹션하여 조직 슬라이드를 준비하였다. 피지 생성 관련 마커인 지방산 합성효소 항체(Cell signaling, USA)를 이용하여 면역조직화학 염색을 하고, 염색이 완료된 조직 슬라이드를 광학 현미경으로 관찰하였다.
12주 간 본 발명의 펩타이드를 포함한 리포솜 용액을 도포한 군에서 리포솜 용액만을 도포한 대조군에 비해 확연한 피지샘 수 감소 및 피지 생성 관련 마커의 발현 감소가 확인되었다(도 20). 도 20의 좌측 패널은 펩타이드를 포함하지 않은 리포좀을 12주간 바른 개체의 결과이고, 우측 패널은 4000ppm의 펩타이드를 포함하는 리포좀을 12주간 바른 개체의 결과로서, 갈색으로 보이는 면역 염색 부위의 진하기가 펩타이드 리포좀 도포에 의해 연해지고 개수도 적어지는 것을 확인할 수 있다.
제조예 2. 화장품 제형의 제조
2-1. 에센스의 제조
본 발명의 펩타이드를 이용하여 하기 표 1에 기재된 함량(중량부)에 따라 에센스를 제조하였다.
조성 함량(중량부)
트리에탄올아민 0.25
카르복시비닐폴리머 0.22
글리세린 4
부틸렌글리콜 2
본 발명의 펩타이드 1.5
밀납 0.5
세토스테아릴알코올 1
글리세릴모노스테아레이트 1
스쿠알렌 4
정제수 적량
2-2. 유연화장수의 제조
본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 유연화장수는 하기 표 2와 같이 제조하였다.
원료 함량(중량부)
1,3-부틸렌글리콜 1.00
디소듐이디티에이 0.05
알란토인 0.10
디포타슘글리시리제이트 0.05
시트릭애씨드 0.01
소듐시트레이트 0.02
글리세레스-26 1.00
알부틴 2.00
PEG-40 수소화 캐스터오일 1.00
에탄올 30.00
본 발명의 펩타이드 1.5
착색제 미량
착향제 미량
정제수 잔량
2-3. 영양 크림의 제조
본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 영양크림은 하기 표 3의 조성과 같이 제조하였다.
원료 함량(중량부)
1,3-부틸렌글리콜 7.0
글리세린 1.0
D-판테놀 0.1
마그네슘알루미늄실리케이트 0.3
PEG-40 스테아레이트 1.2
스테아릭애씨드 2.0
폴리소르베이트 60 1.5
친유형글리세릴스테아레이트 2.0
소르비탄세스퀴올리에이트 1.5
세테아릴알코올 3.0
미네랄오일 4.0
스쿠알렌 3.8
본 발명의 펩타이드 1.5
식물성 오일 1.8
디메치콘 0.4
디포타슘글리시리제이트 미량
알란토인 미량
소듐히아루로네이트 미량
토코페릴아세테이트 적량
트리에탄올아민 적량
착향제 적량
정제수 잔량
2-4. 로션의 제조
본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 함유한 로션을 하기 표 4의 조성과 같이 제조하였다.
원료 함량(중량부)
세토스테아릴알코올 1.6
스테아린산 1.4
친유형모노스테아린산글리세린 1.8
PEG-100 스테아레이트 2.6
세스퀴올레인산소르비탈 0.6
스쿠알렌 4.8
마카다이아오일 2
호호바오일 2
초산토코페롤 0.4
메틸폴리실록산 0.2
초산토코페롤 0.4
1,3-부틸렌글리콜 4
산탄검 0.1
글리세린 4
d-판데놀 0.15
본 발명의 펩타이드 1.0
알란토인 0.1
카르보머(2% aq. Sol) 4
트리에탄올아민 0.15
에탄올 3
정제수 적량
제조예 3. 약학적 조성물의 제조
3-1. 산제의 제조
본 발명의 펩타이드 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
3-2. 정제의 제조
본 발명의 펩타이드 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조 방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
3-3. 캡슐제의 제조
본 발명의 펩타이드 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
3-4. 환의 제조
본 발명의 펩타이드 1 g
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환 당 4g이 되도록 제조하였다.
3-5. 과립의 제조
본 발명의 펩타이드 150 ㎎
대두추출물 50 ㎎
포도당 200 ㎎
전분 600 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.

Claims (11)

  1. 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드.
  2. 청구항 1의 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 근육 이완용 약학적 조성물.
  3. 청구항 2에 있어서,
    상기 펩타이드는 근육 이완용 약학적 조성물 100중량%에 대하여 0.001중량% 내지 60중량%로 포함되는 약학적 조성물.
  4. 청구항 2에 있어서,
    신경 근육 질환의 예방 또는 치료에 사용하는 약학적 조성물.
  5. 청구항 4에 있어서,
    상기 신경 근육 질환은 눈꺼풀 경련, 사경, 경부 근긴장 이상, 강직성 안검연축, 겨드랑이 다한증, 항문열창, 질경련, 이완불능증, 두통 질환, 특발성 및 신경성 배뇨근 과다증, 국소이긴장증, 측두하악관절 통증 장애, 당뇨병성 신경증, 성대 기능 장애, 사시, 만성신경병증, 안면근육비대증, 배뇨근 조임근 장애 및 양성 전립선 비대증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 약학적 조성물.
  6. 청구항 5에 있어서,
    상기 두통 질환은 편두통인 약학적 조성물.
  7. 청구항 2에 있어서,
    상기 펩타이드는 아세틸콜린의 분비를 억제하는 약학적 조성물.
  8. 청구항 1의 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부상태 개선용 화장료 조성물.
  9. 청구항 8에 있어서,
    피부 주름 개선, 피지 생성 억제, 또는 여드름 개선에 사용하는 화장료 조성물.
  10. 청구항 8에 있어서,
    상기 펩타이드는 화장료 조성물 100중량%에 대하여 0.001중량% 내지 60중량%로 포함되는 화장료 조성물.
  11. 청구항 8에 있어서,
    상기 펩타이드는 콜라겐의 발현을 증가시키는 화장료 조성물.
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