WO2017119756A1 - 주름개선, 노화방지, 미백, 항염증 기능성 신규 펩티드 및 이를 포함하는 조성물 - Google Patents

주름개선, 노화방지, 미백, 항염증 기능성 신규 펩티드 및 이를 포함하는 조성물 Download PDF

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inflammatory
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    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids

Definitions

  • the present specification relates to wrinkle improvement, anti-aging, whitening, anti-inflammatory functional novel peptides and compositions comprising the same. More specifically, the present specification relates to collagen biosynthesis and degradation, which is the most important factor for cosmetic application for anti-aging and wrinkle improvement.
  • UV irradiation skin aging is affected by genetic and environmental exposures (UV irradiation, mechanical shock), hormonal changes, and metabolic processes (reactive compounds such as reactive oxygen species, sugars, and aldehydes). These factors cause cumulative changes in the structure, function, and appearance of the skin. Although aging and photo-aged skin are different in morphological and histological characteristics, they are clearly distinguished in appearance, but recent studies have shown that both senescences promote the expression of collagen degrading enzymes (eg, matrix metalloproteinases, MMPs). It has been reported to share important molecular features including signaling pathways such as decreased collagen synthesis and damage to connective tissue. Environmental influences cause a more pronounced variation in skin aesthetics and tissue than internal factors, the most lethal external factor being UV radiation. The consensus of this molecular mechanism is believed that UV irradiation accelerates important aspects of aging by chronological age of human skin.
  • MMPs matrix metalloproteinases
  • skin aging is a change in the composition of extracellular matrix proteins that form a matrix in the dermis of the skin.
  • Collagen proteins in the dermal extracellular tissue provide strength and tension to the skin, which protects the skin from external irritation or force, and accounts for 90% of the dermal layer.Reducing collagen is closely related to skin aging and wrinkle formation. There is this.
  • the main crosslinking components of healthy dermis are type I collagen and type III collagen. However, in skin damaged by photoaging, the precursors of these two collagens are markedly reduced and their decrease is associated with clinical severity.
  • Degradation of collagen may be degraded as aging progresses, but when exposed to stimuli such as ultraviolet rays, the biosynthesis of collagen degrading enzymes increases, collagen synthesis decreases, and wrinkles are formed.
  • Collagen degrading enzymes are zinc-dependent intracellular proteases that can degrade or restructure components of the extracellular structure of the dermis, of which MMP-1 acts and breaks down collagen in the dermis. Therefore, the regulation of the amount and activity of the enzyme is an important factor for wrinkles.
  • Retinol and retinoids are known to be effective in various fields such as psoriasis, aging, cancer, and acne.
  • this retinoid is known to prevent collagen loss by stimulating collagen formation by inhibiting collagenase (MMP-1) when applied to the skin to prevent and restore endogenous and photoaging.
  • MMP-1 collagenase
  • ⁇ -MSH alpha melanocyte stimulating hormone
  • ⁇ -MSH alpha melanocyte stimulating hormone
  • ⁇ -MSH is a hormone that directly affects the growth of melanocytes and the biosynthetic activity of melanin.It has been known to affect the skin through the blood vessels produced by the pituitary gland.However, it stimulates skin cells (melanosite, keratin) It has also been found to play an important role in skin blackening.
  • studies have shown that skin color becomes dark when a large amount of ⁇ -MSH is administered to humans, and that melanin production increases with cell proliferation when ⁇ -MSH is administered to melanocytes cultured and isolated from humans of various races. It became.
  • UV which is the most harmful factor to the skin
  • UVA 320-400 nm
  • UVB 280-320 nm
  • UVC Divided by (200-280nm).
  • UVC is blocked by the ozone layer
  • UVA radiation is less intense than UVB radiation, but has high skin permeability
  • UVA skin damage is known to include sunburn, cancer, and skin aging.
  • UVB radiation the most dangerous environmental carcinogen associated with human health, is known to cause gene damage and skin cancer in addition to erythema and sunburn.
  • the biggest changes in skin damaged by photoaging occur in the dermis, the deeper part of the skin, leading to breakdown of connective tissue, a decrease in collagen content and the accumulation of modified elastic fibers.
  • IL-1a Interleukin-1a
  • IL-1b Interleukin-1b
  • IL-6 Interleukin 6
  • UVB irradiation showed that keratinocytes were able to excrete tumor necrosis factor- ⁇ (TNF- ⁇ ), interleukin 1 ⁇ , IL-6, IL-10 and IL-8 extracellularly. Stimulates secretion In sun-exposed skin, the release of these cytokines promotes a sustained inflammatory response, leading to skin photoaging.
  • TNF- ⁇ tumor necrosis factor- ⁇
  • interleukin 1 ⁇ interleukin 1 ⁇
  • IL-6 interleukin 1 ⁇
  • IL-10 interleukin-8
  • Inflammation is a defense reaction of a living body to prevent damage to biological tissues by external physical stimuli including photoexposure, chemical stimuli such as contact with various allergens or invasion of microorganisms such as bacteria, fungi or viruses.
  • external physical stimuli including photoexposure, chemical stimuli such as contact with various allergens or invasion of microorganisms such as bacteria, fungi or viruses.
  • the mechanisms of inflammation known to date are cellular damages caused by external biological causes (bacteria, viruses, parasites), physical causes (mechanical stimulation, heat, radiation, electricity), chemical causes, etc.
  • Vasodilation, increased capillary permeability, and aggregation of macrophages occur in inflammatory sites, resulting in increased blood flow, edema, immune cell and antibody migration, pain, and fever.
  • drugs for the treatment of inflammation include synthetic drugs such as ibuprofen, antihistamines, steroids, cortisones, immunosuppressants, and immunosuppressive drugs.
  • synthetic drugs such as ibuprofen, antihistamines, steroids, cortisones, immunosuppressants, and immunosuppressive drugs.
  • the underlying treatment of inflammation is difficult.
  • Patent Document 0002 KR 1393403 B1
  • the present inventors have developed a novel peptide and found that it is effective in improving wrinkles, anti-aging, whitening, anti-inflammatory, and completed the present specification.
  • One aspect of the invention is selected from the group consisting of a peptide consisting of an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a peptide that is a fragment of the peptide sequence, a peptide having 80% or more sequence homology with a peptide that is a peptide or fragment thereof Peptides or salts thereof.
  • the peptide may be characterized in that it exhibits wrinkle improvement, anti-aging, skin whitening, or anti-inflammatory activity.
  • the peptide may be characterized by increasing collagen production or inhibiting collagen production inhibitory factor secretion.
  • the peptide may be characterized by inhibiting melanin production.
  • the peptide may be characterized by reducing cytokine secretion causing an inflammatory response.
  • compositions that exhibits anti-wrinkle, anti-aging, skin whitening, or anti-inflammatory activity comprising the peptide or salt thereof as an active ingredient.
  • the composition comprises 0.1 ⁇ g / ml to 10000 ⁇ g / ml, preferably 1 ⁇ g / ml to 1000 ⁇ g / ml, and more preferably 10 ⁇ g / ml to the peptide or a salt thereof. It may be characterized in that it comprises a content of 1000 ⁇ m / ml.
  • Another aspect of the present invention provides a cosmetic composition comprising the peptide or a salt thereof as an active ingredient.
  • the cosmetic composition is characterized in that consisting of any one selected from the group consisting of skin, lotion, cream, foundation, essence, gel, pack, foam cleansing, soap and skin ointment. Can be.
  • Another aspect of the present invention provides a topical skin composition comprising the peptide or a salt thereof as an active ingredient.
  • Another aspect of the present invention provides a health functional food composition
  • a health functional food composition comprising the peptide or a salt thereof as an active ingredient.
  • Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing and treating skin diseases comprising the peptide or a salt thereof as an active ingredient.
  • Another aspect of the invention provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of inflammatory diseases comprising the peptide or salt thereof as an active ingredient.
  • Another aspect of the invention provides a method for preventing and treating skin diseases or inflammatory diseases comprising applying the composition comprising the peptide or salt thereof to a subject in need of the prevention and treatment of skin diseases or inflammatory diseases. do.
  • Another aspect of the invention comprises applying a composition comprising the peptide or salt thereof to a subject in need of one or more selected from the group consisting of wrinkle improvement, anti-aging, and skin whitening, or Provide skin care.
  • compositions comprising the peptide or a salt thereof; And it provides a kit that is used for the prevention and treatment of skin diseases or inflammatory diseases, including instructions indicating one or more of the amount of use, the method of use, the number of times of use of the composition.
  • compositions comprising the peptide or a salt thereof; And it provides a kit that is used for skin care or skin care comprising an instruction that discloses one or more of the amount of use, the method of use, the number of uses of the composition.
  • Another aspect of the invention provides the use of the peptide or salts thereof for the preparation of a composition for the prevention and treatment of skin diseases or inflammatory diseases.
  • Another aspect of the present invention provides the use of the peptide or salts thereof for preparing a composition for skin care or skin care.
  • Peptide having a sequence of SEQ ID NO according to one aspect of the present invention has a wrinkle improvement, anti-aging, skin whitening, anti-inflammatory effect, anti-wrinkle, anti-aging, skin whitening, anti-inflammatory functional peptide and composition using the same It is expected to provide methods for improving wrinkles, preventing aging, skin whitening, and inflammatory diseases.
  • the anti-wrinkle effect according to one aspect of the present invention refers to the effect of inhibiting or improving skin wrinkle generation through increased collagen production or inhibition of collagen production inhibitory factor secretion by the composition according to one aspect of the present invention.
  • the anti-aging effect according to one aspect of the present invention is to reduce the cytokine secretion causing the inflammatory reaction in the skin due to the ultraviolet exposure of the composition according to one aspect of the present invention to suppress or improve the skin photoaging reaction due to ultraviolet exposure, etc.
  • the whitening effect according to one aspect of the present invention refers to the effect of inhibiting melanin formation using the composition according to one aspect of the present invention to improve skin pigmentation, and improve skin brightness and uniformity.
  • the anti-inflammatory effect according to one aspect of the present invention is to suppress the widespread inflammatory response due to the biological, physical, chemical causes, etc. of the composition according to one aspect of the present invention as well as the inflammatory response caused by UV exposure or Say the effect to improve.
  • 1 is a cell activity of the human dermal fibroblast (Human dermal fibroblast), the control group treated with nothing and the concentration (0.1, 1, 10, 50, 100 ⁇ g / ml) peptide treatment group divided treatment Cell viability) is a graph showing relative results based on the relative control (%).
  • FIG. 2 shows collagen synthesis of human skin fibroblasts treated with a control group treated with nothing and a peptide treatment group by concentration (0.1, 1, 10, 50, 100 ⁇ g / ml). The measured and compared results are graphs expressed in relative (%) relative to the control group.
  • Figure 3 shows the degree of secretion of MMP-1, a collagen production inhibitory factor, of human skin fibroblasts treated with a peptide treated group and a control group (0.1, 1, 10, 50, 100 ⁇ g / ml) treated with no treatment at all It is a graph showing the comparison result by comparing the relative (%) relative to the control.
  • mice skin cancer cell line (B16F1), a negative control group not treated with ⁇ -MSH, a control group treated with nothing after the ⁇ -MSH treatment, and by concentration after the ⁇ -MSH treatment (0.1, 10, 100, 500, 1000 ⁇ g / ml) is a graph showing relative (%) relative to the control group treated only with ⁇ -MSH by measuring the melanin production degree of the divided peptide treated group.
  • a negative control group irradiated with UV-B in a normal human epidermal keratinocyte a control group treated with nothing after irradiation with UV-B and concentrations after irradiation (0.1, 0.5, 1, 10 ⁇ g / ml) is a graph showing the TNF- ⁇ concentration measured by dividing the peptide treatment group.
  • the present invention may be applied to various transformations in one aspect and may have various embodiments.
  • one aspect of the present invention will be described in more detail. However, this is not intended to limit the present invention to specific embodiments, it should be understood to include all transformations, equivalents, and substitutes included in the spirit and scope of the present invention.
  • the detailed description of the related known technology may obscure the gist of the present invention, the detailed description thereof will be omitted.
  • a novel peptide consisting of the sequence of SEQ ID NO: 1 is disclosed.
  • the peptides disclosed herein have at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% homology with each of the novel peptides of SEQ ID NO: 1 It may include a peptide having.
  • the peptides disclosed herein, the peptides represented by SEQ ID NO: 1 and one or more amino acids, two or more amino acids, three or more amino acids, four or more amino acids, five or more amino acids, six or more amino acids, or seven or more It may include peptides with altered amino acids.
  • amino acid changes belong to the property that allows the physicochemical properties of the peptide to be altered.
  • amino acid changes can be made, such as improving the thermal stability of the peptide, altering substrate specificity, changing the optimal pH, and the like.
  • the peptide of SEQ ID NO: 1 according to one aspect of the present invention has the advantage of low intracellular toxicity and high in vivo stability.
  • the peptide described in SEQ ID NO: 1 is shown in Table 1 below.
  • the "name” in Table 1 below is to distinguish peptides.
  • the peptide of SEQ ID NO: 1 may increase collagen production or inhibit collagen production inhibitor secretion, further inhibit melanin production and reduce cytokine secretion causing inflammatory reactions. Can be.
  • composition comprising a peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • composition according to one aspect of the present invention has anti-wrinkle, anti-aging, skin whitening, or anti-inflammatory activity.
  • composition according to one aspect of the present invention can be applied to all animals including humans, dogs, chickens, pigs, cows, sheep, guinea pigs or monkeys.
  • Cosmetic composition according to an aspect of the present invention is not particularly limited in the formulation, softening longevity, astringent longevity, nourishing longevity, eye cream, nutrition cream, massage cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, powder, essence It may have a dosage form, such as a pack.
  • the cosmetic composition according to an aspect of the present invention may be prepared in various forms according to a conventional cosmetic preparation method.
  • the cosmetic composition may be prepared in the form of a cosmetic product containing the peptide, lotion, cream, lotion, and the like, which may be diluted with a conventional cleansing liquid, astringent liquid, and a moisturizing liquid.
  • the cosmetic composition may include conventional adjuvants such as stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments, and flavorings commonly used in the field of cosmetic compositions.
  • Cosmetic composition comprising the peptide of SEQ ID NO: 1 according to an aspect of the present invention can produce a cosmetic composition by a known cosmetic composition manufacturing method, can be applied to quasi-drugs, external medicines not limited to general skin cosmetics have.
  • These formulations may be prepared in any of the formulations commonly prepared, for example in the form of skins, lotions, creams, foundations, essences, gels, packs, pocleaning, body oils, lipsticks, mascaras, makeup bases or soaps. It may be prepared as, but is not limited thereto.
  • composition comprising the peptide of SEQ ID NO: 1 according to an aspect of the present invention
  • other components in addition to the peptide of SEQ ID NO: 1 can be suitably selected and blended by those skilled in the art without difficulty according to the formulation, purpose of use, and the like of other cosmetics.
  • a health functional food composition comprising a peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • compositions for the prevention and treatment of skin diseases or inflammatory diseases comprising a peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • Formulations for oral administration of a food or pharmaceutical composition according to an aspect of the present invention may be, but are not limited to, tablets, pills, soft or hard capsules, granules, powders, solutions or emulsions.
  • compositions according to one aspect of the invention may include additives such as diluents, excipients, lubricants, binders, disintegrants, buffers, dispersants, surfactants, colorants, flavoring or sweetening agents as needed.
  • additives such as diluents, excipients, lubricants, binders, disintegrants, buffers, dispersants, surfactants, colorants, flavoring or sweetening agents as needed.
  • Compositions according to one aspect of the present invention may be prepared by conventional methods in the art.
  • composition according to one aspect of the present invention may increase collagen production and inhibit collagen production inhibitory factor secretion to inhibit or improve skin wrinkles.
  • composition according to an aspect of the present invention can suppress or improve skin photoaging or inflammatory response due to UV exposure by reducing cytokine secretion that causes an inflammatory response in the skin following exposure to ultraviolet light.
  • composition according to an aspect of the present invention may inhibit the formation of intracellular melanin to improve skin pigmentation phenomena such as blemishes, freckles, and blemishes, and may also improve skin brightness and uniformity by alleviating skin yellowness and redness.
  • Preferred embodiments of the invention include the most optimal mode known to the inventors for carrying out aspects of the invention. Variations of the preferred embodiments may become apparent to those skilled in the art upon reading the foregoing description. The inventors expect those skilled in the art to make appropriate use of such variations, and the inventors expect the invention to be practiced in a manner different from that described herein. Accordingly, the invention includes all modifications and equivalents of the subject matter referred to in the appended claims, as permitted by patent law. Moreover, any combination of the abovementioned elements within all possible variations is included in the invention unless expressly stated to the contrary or apparently contradictory in context. While the invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments, those skilled in the art will understand that various changes in form and detail may be made without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the following claims .
  • Novel peptides of SEQ ID NO: 1 (hereinafter referred to as Gemtide-1) were prepared according to the solid phase peptide synthesis known in the art. Specifically, peptides were synthesized by coupling amino acids one by one from the C-terminus through Fmoc solid phase synthesis (SPPS) using ASP48S (Peptron, Inc., Daejeon, Korea). As follows, the first amino acid at the C-terminus of the peptides was attached to the resin. For example:
  • HBTU [2- (1H-Benzotriazole-1-yl) -1,1,3,3-tetamethylaminium hexafluorophosphate] / HOBt [N-Hydroxxybenzotriazole] / NMM [4-Methylmorpholine] is used as the coupling reagent. It was. Fmoc removal was performed using piperidine in DMF in 20% of DMF.
  • Each peptide was synthesized by repeating a process of reacting the amino acids with each other, washing with a solvent, and then deprotecting the amino acid using the state in which the amino acid protecting group was bound to the solid support.
  • the synthesized peptide was separated from the resin and purified by HPLC. The success of the synthesis was confirmed by LC / MS and lyophilized.
  • human dermal fibroblasts (Gibco Cat. Number: C-013-5C) were used by incubating for 12 hours with 1 x 10 4 cells per well in a 96-well plate.
  • control group and the concentration (0.1, 1, 10, 50, 100 ⁇ g / ml), divided into peptide treated groups and incubated at 5% CO 2 , 37 ° C for 24 hours.
  • the medium was removed, 100 ⁇ l of DMSO (dimethylsulfoxide) was added, shaken at room temperature for 10 minutes, and the absorbance was measured at 570 nm using a microplate reader.
  • DMSO dimethylsulfoxide
  • the cell activity derived through the above experimental method was calculated and expressed as a relative value when the control group is 100%.
  • human skin fibroblasts were used by incubating for 12 hours in a number of 5 x 10 5 cells per well in a 12-well plate.
  • the cultures were collected and the amount of collagen was measured using the ELISA (procollagen type IC-peptide EIA kit) method.
  • washing buffer 100 ⁇ l of color reagent (TMBZ) was added thereto, and incubated at room temperature for 15 minutes, followed by 100 ⁇ l of 1N sulfuric acid. It was then measured with an ELISA reader at 450 nm.
  • TMBZ color reagent
  • Collagen synthesis degree derived through the above experimental method was calculated and expressed as a relative value when the control (control) is 100%, as shown in Table 2 below.
  • human skin fibroblasts were used by incubating for 14-16 hours with 5 ⁇ 10 5 cells per well in a 12-well plate.
  • the MMP-1 activity derived through the above experimental method was calculated and expressed as a relative value when the control group was 100%, as shown in Table 3 below.
  • the skin cell line (B16F1) is cultured and treated with the new peptide Through the measurement method, relative melanin content was calculated as compared to the control group treated with nothing.
  • mice skin cancer cell line (B16F1, KCLB number: 80007) was dispensed into 6-well plates at 1 ⁇ 10 5 cell numbers per well, and then cells were attached and incubated for 12 to 16 hours.
  • ⁇ -MSH ⁇ -melanocyte-stimulating hormone
  • the cells were washed with PBS, desorbed with trypsin-EDTA and centrifuged to recover the cells, and then the number of cells was measured using a hematocytometer.
  • the measured cells were centrifuged again to collect cell pellets.
  • the melanin content derived through the above experimental method was calculated as a relative value when the ⁇ -MSH treated control (control) was 100%, and was expressed as a negative control ( ⁇ -MSH (-)) not treated with ⁇ -MSH.
  • control was 100%
  • ⁇ -MSH (-) negative control
  • the culture medium was removed before UV-B irradiation, washed with PBS, and then irradiated with 30 mJ / cm 2 UV-B. Further negative controls without UV-B irradiation were generated.
  • the cells were treated with Keratinocyte-SFM peptide without BPE (epidermal growth factor, human recombinant) and BPE.
  • BPE epidermal growth factor
  • the novel peptide Gemtide-1 has an effect of inhibiting photoaging of the skin by reducing the inflammatory response in the skin exposed to ultraviolet rays.
  • the novel peptide and the composition comprising the same according to an aspect of the present invention has the effects of collagen production, collagen production inhibitory factor inhibitory, melanin production inhibition, inflammatory cytokines TNF- ⁇ and IL-6 reduced secretion You can see that. These effects are to improve the wrinkles of the skin, whitening, suppress photoaging, and anti-inflammatory effects, it is understood that the peptide and composition comprising the same according to an aspect of the present invention can have a variety of excellent effects in improving the skin condition Can be.
  • novel peptide according to one aspect of the present invention has anti-wrinkle, anti-aging, whitening, and anti-inflammatory functions, and it may be possible to develop anti-wrinkle, anti-aging, whitening, anti-inflammatory functional compositions using the same.

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Abstract

본 명세서는 신규 펩티드 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 주름개선, 노화방지 피부미백 또는 항염증 효능을 보이는 신규 펩티드 및 이를 포함한 주름개선, 노화방지 피부미백 또는 항염증 기능성 조성물에 관한 것이다. 본 명세서에 따른 신규 펩티드 및 이를 포함한 조성물은 콜라겐 생성, 광노화성 염증반응 억제, 멜라닌 생성 억제, 염증성 사이토카인 분비 감소에 탁월한 효과를 나타내어 주름개선, 노화방지, 피부미백, 또는 항염증 기능성 조성물 및 주름개선, 노화방지, 피부미백, 또는 염증성 질환 치료 방법을 제공할 수 있다.

Description

주름개선, 노화방지, 미백, 항염증 기능성 신규 펩티드 및 이를 포함하는 조성물
본 명세서는 주름개선, 노화방지, 미백, 항염증 기능성 신규 펩티드 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는, 본 명세서는 노화방지 및 주름 개선용 화장품 적용에 가장 중요한 요소인 콜라겐 생합성 및 분해 방지에 우수한 효과를 보일 뿐 아니라 미백 화장품 적용에 중요한 요소인 멜라닌 생성을 효과적으로 저해하고 자외선에 의해 증가하는 사이토카인을 감소시킴으로써 주름개선, 노화방지, 미백, 항염증 기능을 가지는 신규한 펩티드 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
피부 노화는 유전적, 환경적 노출(UV 조사, 기계적인 충격), 호르몬 변화, 대사적 과정(활성산소종, 당, 알데하이드와 같은 반응성이 큰 화합물)에 의해 영향을 받는다. 이러한 요인들은 피부의 구조, 기능, 겉모습의 축적된 변화를 초래한다. 연대학적으로 나이든 피부와 광노화된 피부는 형태학적, 조직학적으로 차이가 있어 외관이 확연히 구분되지만 최근 연구 결과들에 의하면 두 노화들이 모두 콜라겐 분해효소(예, matrix metalloproteinases, MMPs)의 발현 촉진, 프로콜라겐의 합성 감소, 결합조직의 손상과 같은 신호전달 경로를 포함한 중요한 분자적 특징을 공유한다고 보고 되어 있다. 환경에 의한 영향은 내적인 요인보다 피부에 미적 질이나 조직에 더욱 더 명백한 변이를 주는데, 가장 치명적인 외부적 요인은 UV 조사이다. 이러한 분자적 메커니즘의 일치는 UV 조사가 인간 피부의 연대학적 나이에 의한 노화의 중요 측면들을 가속화하는 것으로 여겨진다.
조직학적 관점에서 피부노화는 피부의 진피에서 매트릭스를 형성하는 세포 외 조직(extracellular matrix proteins) 조성의 변화로 나타난다. 진피 세포 외 조직 중 콜라겐 단백질들은 피부에 강도와 장력을 부여하며 이로 인해 외부의 자극이나 힘으로부터 피부를 보호하는 역할을 하며 진피층의 90%를 차지하고 있어 콜라겐의 감소는 피부 노화와 주름형성에 밀접한 관련이 있다. 건강한 진피의 주요 가교 구성 성분들은 타입Ⅰ 콜라겐과 타입Ⅲ 콜라겐이다. 하지만 광노화에 의해 손상된 피부에서는 이 두 콜라겐의 전구체가 확연히 감소하였고 이들의 감소가 임상학적 심각성과 연관되어 있다. 콜라겐의 분해는 노화가 진행되면서 분해되기도 하나 자외선 같은 자극에 노출되게 되면 콜라겐 분해효소들의 생합성이 증가하면서 콜라겐 합성이 감소하게 되어 주름이 형성된다. 콜라겐 분해효소들은 아연-의존적인 세포 내 단백분해 효소로 진피의 세포 외 구조의 성분들을 분해시키거나 재구조화시킬 수 있는 물질로서 그 중 MMP-1은 진피의 콜라겐에 작용하여 분절시킨다. 따라서 이 효소의 합성 양과 활성도의 조절이 주름에 중요한 요인으로 작용한다.
피부 주름 개선 물질로 가장 대표적인 것이 레티놀(retinol)과 레티노이드라고 명명되는 그 유도체들로써 건선, 노화, 암, 여드름 등 다방면에서 좋은 효과를 나타낸다고 알려져 있다. 또한 이 레티노이드는 피부에 도포하였을 때 콜라겐분해효소(MMP-1)를 저해 함으로서 콜라겐의 손실을 방지하고 콜라겐 형성을 자극함으로써 내인성 및 광노화를 방지하고 회복시키는 것으로 알려져 있다. 하지만 이러한 효과에도 불구하고 피부에 도포하였을 때 홍반, 가려움, 건선, 스케일링 등의 국소적 피부자극 반응을 일으킨다고 알려져 있다. 따라서 생체에 안전하고 기존의 물질보다 콜라겐분해효소(MMP-1)를 억제하고 콜라겐 합성능이 좋은 새로운 주름개선 물질 개발이 요구되고 있다.
멜라닌은 피부 기저층에 존재하는 멜라노사이트 (melanocyte)라는 특이적인 세포에서 생성되는데, 이 세포의 활성도에 따라 생성되는 멜라닌의 양이 결정된다. 멜라노사이트의 활성에 영향을 미치는 인자들 중 가장 중요하다고 알려진 것은 알파 멜라노사이트 자극 호르몬 (α-melanocyte stimulating hormone, α-MSH)이다. α-MSH는 멜라노사이트의 성장과 멜라닌의 생합성 활성에 직접적인 영향을 주는 호르몬으로서 뇌하수체에서 생산되어 혈관을 통하여 피부에 영향을 미친다고 알려져 왔으나, 자외선 등의 자극에 의하여 피부세포 (멜라노사이트, 케라티노사이트) 에서도 생성되어 피부의 흑화에 중요한 작용을 하는 것으로 밝혀졌다. 또한, α-MSH를 사람에게 다량 혈관 투여시 피부색이 검어졌다는 연구 결과가 보고되었으며, 여러 인종의 사람으로부터 분리, 배양된 멜라노사이트 세포에 α-MSH 투여시 세포 증식과 더불어 멜라닌 생성이 증가한다고 보고되었다.
피부에 손상을 가하는 환경적 요인 중에서 가장 피부에 유해한 요소인 자외선은 전자기파 스펙트럼에서 200nm 와 400nm 사이의 파장대를 말하며, 파장의 길이에 따라 UVA(320-400 nm), UVB(280-320nm) 와 UVC(200-280nm)로 나누어 진다. UVC는 오존층에 의해 차단되기 때문에 인간 피부에 해롭게 작용하는 태양복사는 UVA와 UVB이다. UVA 복사는 UVB 복사보다 덜 강하지만 피부 침투성이 높은 특징을 가지고 있고 UVA에 의한 피부 손상은 선번(sunburn), 암, 피부노화 등이 알려져 있다. 인간의 건강과 관련하여 가장 위험한 환경적 발암 인자로 알려져 있는 UVB 복사는 홍반과 선번 이외에도 유전자 손상과 피부암을 유발하는 것으로 알려져 있다. 광노화에 의해 손상된 피부의 가장 큰 변화는 피부의 깊은 부분인 진피에서 일어나며 연결 조직의 분해, 콜라겐 함량의 감소와 변형된 엘라스틱 섬유의 축적을 유발한다.
UV 조사에 의한 피부의 손상은 주름 형성뿐만 아니라 염증반응도 일으키는 것으로 알려져 있다. 피부 손상과 관련된 생물학적 메커니즘에 의해 피부는 Interleukin-1a(IL-1a), Interleukin-1b(IL-1b), Interleukin 6(IL-6)을 포함한 수많은 사이토카인을 분비하는 것으로 알려져 있다. 만성적인 염증과 여러 암 생성의 관계는 잘 알려져 있을 뿐만 아니라 여러 종양 실험에서도 잘 나타나있다. 여러 외부자극에 의해 사이토카인들을 생산하도록 유도된 케라티노사이트는 사이토카인 조절능력을 잃게 되고 결국 암을 포함한 여러 피부 질환을 일으키게 된다. 가장 주요한 외부자극 중 하나는 UVB 조사이다. UVB 조사는 케라티노사이트가 종양 괴사 인자 α (tumor necrosis factor-α, TNF-α), 인터루킨 1β (interleukin-1β,IL-1 β), IL-6, IL-10 와 IL-8을 세포 외로 분비하도록 자극한다. 태양광에 노출된 피부에서 이러한 사이토카인들의 분비는 지속적인 염증반응을 촉진시켜 피부광노화를 일으킨다.
염증은 광노출을 포함하는 외부의 물리적 자극, 각종 알레르기 유발 물질 접촉을 예로 들 수 있는 화학적 자극 또는 박테리아, 곰팡이 또는 바이러스와 같은 미생물의 침입 등에 의해 생체 조직이 손상되는 것을 막기 위한 생체의 방어 반응 중 하나이다.
현재까지 알려진 염증의 기전은 외부의 생물학적인 원인(세균, 바이러스, 기생충), 물리학적인 원인(기계적인 자극, 열, 방사선, 전기), 화학적 원인 등으로 인한 세포손상으로 히스타민 및 키닌 등이 방출되어 혈관확장, 모세혈관 투과성 증가 및 염증부위로 대식세포의 집결이 일어나고, 이에 따라서 감염부위의 혈류량 증가, 부종, 면역세포 및 항체 이동, 통증, 발열 등의 현상이 일어난다.
현재 사용되고 있는 염증의 치료제에는 이부프로펜과 같은 합성의약품, 항히스타민제, 스테로이드, 코티손, 면역억제제, 면역항진제 등이 사용되고 있으나 치료효과가 일시적이거나 단순 증상완화, 과민반응, 면역체계 악화 등의 부작용이 많이 있고 염증의 근본적인 치료가 어렵다.
주름개선, 노화방지, 피부 미백, 항염증 효과를 갖는 다양한 물질들, 그리고 이를 함유한 조성물들이 보고되고 있지만, 부작용이 적으면서도 주름개선, 보습, 노화 억제, 피부 재생, 및 항염증과 같은 다양한 요구를 모두 충족시키는 펩티드 및 이를 포함한 조성물은 아직 보고된 바 없다. 따라서, 이에 대한 연구 필요성이 제기되고 있는 실정이다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
(특허문헌 0001) KR 1254330 B1
(특허문헌 0002) KR 1393403 B1
이러한 배경하에서 본 발명자들은 신규 펩티드를 개발하여 주름개선, 노화방지, 미백, 항염증 등의 효능이 있음을 발견하고 본 명세서를 완성하게 되었다
본 발명의 목적은 일측면에서 주름개선, 노화방지, 피부미백, 항염증 효능이 있는 신규 펩티드 및 이를 포함하는 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 일측면은 서열 번호 1 로 표시되는 아미노산 서열로 구성되는 펩티드, 상기 펩티드 서열의 단편인 펩티드, 상기 펩티드 서열 또는 그의 단편인 펩티드와 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드로 구성된 군으로부터 선택되는 펩티드 또는 그의 염을 제공한다.
본 발명의 일측면에 따르면, 상기 펩티드는 주름개선, 노화방지, 피부미백, 또는 항염증 활성을 보이는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 상기 펩티드는 콜라겐 생성을 증가시키거나, 또는 콜라겐 생성 억제 인자 분비를 저해시키는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 상기 펩티드는 멜라닌 생성을 억제시키는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 상기 펩티드는 염증반응을 일으키는 사이토카인 분비를 감소시키는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 다른 일측면은 상기 펩티드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 주름개선, 노화방지, 피부미백, 또는 항염증 활성을 보이는 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 일측면에 따르면, 상기 조성물은 상기 펩티드 또는 그의 염을 0.1㎍/ml 내지 10000㎍/ml, 바람직하게는 1㎍/ml 내지 1000㎍/ml, 더 바람직하게는 10㎍/ml 내지 1000㎍/ml의 함량으로 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 또 다른 일측면은 상기 펩티드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일측면에 따르면, 상기 화장료 조성물은 스킨, 로션, 크림, 파운데이션, 에센스, 젤, 팩, 폼 클렌징, 비누 및 피부외용 연고로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형으로 이루어진 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 또 다른 일측면은 상기 펩티드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일측면은 상기 펩티드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 건강기능 식품용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일측면은 상기 펩티드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 피부 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일측면은 상기 펩티드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일측면은 상기 펩티드 또는 그의 염을 포함하는 조성물을 피부 질환 또는 염증성 질환의 예방 및 치료를 필요로 하는 대상에게 적용하는 것을 포함하는, 피부 질환 또는 염증성 질환 예방 및 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일측면은 상기 펩티드 또는 그의 염을 포함하는 조성물을 주름개선, 노화방지, 및 피부미백으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 필요로 하는 대상에게 적용하는 것을 포함하는, 피부 미용 또는 피부 관리 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일측면은 상기 펩티드 또는 그의 염을 포함하는 조성물; 및 상기 조성물의 사용량, 사용 방법, 사용 횟수 중 하나 이상을 개시한 지시서를 포함하는 피부 질환 또는 염증성 질환의 예방 및 치료를 위하여 사용되는 키트를 제공한다.
본 발명의 또 다른 일측면은 상기 펩티드 또는 그의 염을 포함하는 조성물; 및 상기 조성물의 사용량, 사용 방법, 사용 횟수 중 하나 이상을 개시한 지시서를 포함하는 피부 미용 또는 피부 관리를 위하여 사용되는 키트를 제공한다.
본 발명의 또 다른 일측면은, 피부 질환 또는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제조하기 위한, 상기 펩티드 또는 그의 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 또 다른 일측면은, 피부 미용 또는 피부 관리용 조성물을 제조하기 위한, 상기 펩티드 또는 그의 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 일측면에 따른 서열번호의 서열을 갖는 펩티드는 주름개선, 노화방지, 피부미백, 항염증 효능을 가져, 주름개선, 노화방지, 피부미백, 항염증 기능성 펩티드를 포함하는 조성물 및 이를 이용한 주름개선, 노화방지, 피부 미백, 염증성 질환 예방 및 치료 방법을 제공할 것으로 예상된다.
본 발명의 일측면에 따른 주름개선 효과는 본 발명의 일측면에 따른 조성물에 의한 콜라겐 생성 증가 또는 콜라겐 생성 억제 인자 분비의 저해를 통해, 피부 주름 생성을 억제 또는 개선하는 효과를 말한다.
본 발명의 일측면에 따른 노화방지 효과는 본 발명의 일측면에 따른 조성물이 자외선 노출에 따른 피부 내 염증반응을 일으키는 사이토카인 분비를 감소시켜 자외선 노출 등에 따른 피부 광노화 반응을 억제 또는 개선하는 효과를 말한다.
본 발명의 일측면에 따른 미백 효과는 본 발명의 일측면에 따른 조성물을 사용하여 멜라닌 형성을 억제하여 피부 색소 침착 현상을 개선시키고, 피부 밝기 및 균일도를 향상시키는 효과를 말한다.
본 발명의 일측면에 따른 항염 효과는 본 발명의 일측면에 따른 조성물이 자외선 노출에 의해 유발되는 염증반응 뿐만 아니라 외부의 생물학적인 원인, 물리학적인 원인, 화학적 원인 등으로 인한 광범위한 염증성 반응을 억제 또는 개선하는 효과를 말한다.
도 1은 인간 피부 섬유아세포(Human dermal fibroblast)에서, 아무것도 처리하지 않은 대조군(control) 및 농도별(0.1, 1, 10, 50, 100 μg/ml) 펩티드 처리군을 나누어 처리한 것의 세포 활성도(cell viability)를 측정하여 비교한 결과를 대조군을 기준으로 상대적(%)으로 나타낸 그래프이다.
도 2는 인간 피부 섬유아세포에서, 아무것도 처리하지 않은 대조군(control) 및 농도별(0.1, 1, 10, 50, 100 μg/ml) 펩티드 처리군을 나누어 처리한 것의 콜라겐 합성도(collagen synthesis)를 측정하여 비교한 결과를 대조군을 기준으로 상대적(%)으로 나타낸 그래프이다.
도 3은 인간 피부 섬유아세포에서, 아무것도 처리하지 않은 대조군 및 농도별(0.1, 1, 10, 50, 100 μg/ml) 펩티드 처리군을 나누어 처리한 것의 콜라겐 생성 저해 요소인 MMP-1의 분비 정도를 측정하여 비교한 결과를 대조군을 기준으로 상대적(%)으로 나타낸 그래프이다.
도 4는 마우스 피부암 세포주(B16F1)에서, α-MSH를 처리하지 않은 음성대조군, α-MSH 처리 후 아무것도 처리하지 않은 대조군 및 α-MSH 처리 후 농도별(0.1, 10, 100, 500, 1000 μg/ml) 펩티드 처리군을 나누어 처리한 것의 멜라닌 생성 정도를 측정하여 비교한 결과를 α-MSH 만 처리한 대조군을 기준으로 상대적(%)으로 나타낸 그래프이다.
도 5는 정상 인간 표피 각질세포(normal human epidermal keratinocyte)에서, UV-B를 조사하지 않은 음성 대조군, UV-B를 조사한 후 아무것도 처리하지 않은 대조군 및 UV-B 조사 후 농도별(0.1, 0.5, 1, 10 μg/ml) 펩티드 처리군을 나누어 처리한 것의 TNF-α 농도를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 6는 정상 인간 표피 각질세포에서, UV-B를 조사하지 않은 음성 대조군, UV-B를 조사한 후 아무것도 처리하지 않은 대조군(control) 및 UV-B 조사 후 농도별(0.1, 0.5, 1, 10 μg/ml) 펩티드 처리군을 나누어 처리한 것의 IL-6 농도를 측정하여 나타낸 그래프이다.
본 발명은 일측면에서 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 이하, 본 발명의 일측면을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
본 발명의 일 측면에서, 서열 번호 1의 서열로 구성되는 신규 펩티드를 개시한다.
본 명세서에 개시된 펩티드는 서열 번호 1의 신규 펩티드들 각각과 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드를 포함할 수 있다. 또한, 본 명세서에 개시된 펩티드는, 서열번호 1로 나타내는 펩티드 들과 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 6개 이상의 아미노산 또는 7개 이상의 아미노산이 변화된 펩티드를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 아미노산 변화는 펩티드의 물리화학적 특성이 변경되도록 하는 성질에 속한다. 예를 들어, 펩티드의 열안정성을 향상시키고, 기질 특이성을 변경시키고, 최적의 pH를 변화시키는 등의 아미노산 변화가 수행될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 서열 번호 1의 펩티드는 세포 내 독성이 낮고, 생체 내 안정성이 높다는 장점을 가진다. 서열 번호 1에 기재된 펩티드는 아래 표 1과 같다. 아래 표 1의 "이름"은 펩티드를 구별하기 위해 명명한 것이다.
서열번호 ( SEQ ID NO.) 이름 서열 아미노산 길이
1 Gemtide-1 RFIPKLTESTRRIAAS 16
본 발명의 일 측면에 따른 서열 번호 1의 펩티드는 콜라겐 생성을 증가시키거나, 또는 콜라겐 생성 억제 인자 분비를 저해할 수 있으며, 더 나아가 멜라닌 생성을 억제하고, 염증반응을 일으키는 사이토카인 분비를 감소시킬 수 있다.
본 발명의 일 측면에서는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 유효 성분으로 포함하는 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 측면에 따는 조성물은 주름개선, 노화방지, 피부미백, 또는 항염증 활성을 갖는다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 인간, 개, 닭, 돼지, 소, 양, 기니아피그 또는 원숭이를 포함하는 모든 동물에 적용될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이크림, 영양크림, 맛사지크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 파우더, 엣센스, 팩 등의 제형을 가질 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 화장료 조성물은 통상의 화장료 제조방법에 따라, 다양한 형태로 제조될 수 있다. 예를 들어, 상기 화장료 조성물은 상기 펩티드를 함유하는 향장 제품, 화장수, 크림, 로오숀 등의 형태로 제조될 수 있으며, 이는 통상의 클렌징액, 수렴액 및 보습액으로 희석하여 사용될 수 있다. 또한, 상기 화장료 조성물은 화장료 조성물 분야에서 통상적으로 사용되는 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 서열번호 1의 펩티드를 포함하는 화장료 조성물은 이미 알려진 화장료 조성물 제조방법에 의해 화장료 조성물을 제조할 수 있고, 일반적인 피부 화장료에 한정되지 않고 의약부외품, 외용 의약품에도 적용할 수 있다. 이들의 제형은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 스킨, 로션, 크림, 파운데이션, 에센스, 젤, 팩, 포클린징, 바디오일, 립스틱, 마스카라, 메이크업베이스 또는 비누형태로 제조할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 측면에 따른 서열번호 1의 펩티드를 포함하는 화장료 조성물에 있어서, 서열번호 1의 펩티드 이외에 다른 성분들은 기타 화장료의 제형, 사용목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.
본 발명의 일 측면에서는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 유효성분으로 포함하는 건강기능 식품용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 측면에서는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 유효성분으로 포함하는 피부 질환 또는 염증성 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에 일 측면에 따른 식품용 또는 약학 조성물의 경구 투여를 위한 제형은 정제, 환제, 연질 또는 경질 캅셀제, 과립제, 산제, 액제 또는 유탁제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 필요에 따라 희석제, 부형제, 활택제, 결합제, 붕해제, 완충제, 분산제, 계면 활성제, 착색제, 향료 또는 감미제 등의 첨가제를 포함할 수 있다. 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 당업계의 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 콜라겐 생성을 증가시키고, 콜라겐 생성 억제 인자 분비를 저해시켜 피부 주름 생김을 억제 또는 개선시킬 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 자외선의 노출에 따른 피부 내 염증 반응을 일으키는 사이토카인 분비를 감소시켜 자외선 노출 등에 따른 피부 광노화 또는 염증 반응을 억제 또는 개선 시킬 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 세포내 멜라닌의 형성을 억제하여 잡티, 주근깨, 기미 등의 피부 색소 침착 현상을 개선시키며, 피부 누런기, 붉은기를 완화시켜 피부 밝기 및 균일도도 향상시킬 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어들은 특정 구체예들을 설명하기 위한 목적으로만 의도된 것이지 본 발명을 한정하고자 하는 의도가 아니다. 명사 앞에 개수가 생략된 용어는 수량을 제한하고자 하는 것이 아니라 언급된 명사 물품이 하나 이상 존재하는 것을 나타내는 것이다. 용어 "포함하는", "갖는", 및 "함유하는"은 열린 용어로 해석된다(즉, "포함하지만 이에 한정되지는 않는"의 의미).
수치의 범위를 언급하는 것은 단지 그 범위 내에 속하는 각각의 별개의 수치들을 개별적으로 언급하는 것을 대신하는 쉬운 방법이기 때문이며, 그것이 아님이 명시되어 있지 않는, 각 별개의 수치는 마치 개별적으로 명세서에 언급되어 있는 것처럼 본 명세서에 통합된다. 모든 범위의 끝 값들은 그 범위 내에 포함되며 독립적으로 조합 가능하다.
본 명세서에 언급된 모든 방법들은 달리 명시되어 있거나 문맥에 의해 명백히 모순되지 않는 한 적절한 순서로 수행될 수 있다. 어느 한 실시예 및 모든 실시예 또는 예시적 언어 (예컨대, "~과 같은")를 사용하는 것은, 청구범위에 포함되어 있지 않는 한, 단지 본 발명의 일측면을 더 잘 기술하기 위함이지 본 발명의 범위를 제한하고자 함이 아니다. 명세서의 어떤 언어도 어떤 비청구된 구성요소를 본 발명의 실시에 필수적인 것으로 해석되어서는 아니된다. 다른 정의가 없는 한, 본 명세서에 사용되는 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 갖는 사람에 의해 통상 이해되는 것과 같은 의미를 갖는다.
본 발명의 바람직한 구체예들은 본 발명의 일측면을 수행하기 위해 발명자에게 알려진 가장 최적의 모드를 포함한다. 바람직한 구체예들의 변이들이 앞선 기재를 읽으면 당업자에게 명백하게 될 수 있다. 본 발명자들은 당업자들이 그러한 변이를 적절히 이용하길 기대하고, 발명자들은 본 명세서에 기재된 것과 다른 방식으로 본 발명이 실시되기를 기대한다. 따라서, 본 발명은, 특허법에 의해 허용되는 것과 같이, 첨부된 특허청구범위에서 언급된 발명의 요지의 균등물 및 모든 변형들을 포함한다. 더욱이, 모든 가능한 변이들 내에서 상기 언급된 구성요소들의 어떤 조합이라도 여기서 반대로 명시하거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 본 발명에 포함된다. 본 발명은 예시적인 구체예들을 참조하여 구체적으로 나타내어지고 기술되었지만, 당업자들은 하기 청구범위에 의해 정의되는 발명의 정신 및 범위를 벗어나지 않고서도 형태 및 디테일에서 다양한 변화가 행해질 수 있음을 잘 이해할 것이다 .
이하, 실시예 및 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 아래 실시예 및 실험예는 본 발명의 일측면에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.
실시예 1 : 신규 펩티드의 합성
서열번호 1 의 신규 펩티드(이하 Gemtide-1 이라 명명함)를 종래에 알려진 고상 펩티드 합성법에 따라 제조하였다. 구체적으로, 펩티드들은 ASP48S(Peptron, Inc., 대한민국 대전)를 이용하여 Fmoc 고상 합성법(solid phase peptide synthesis, SPPS)을 통해 C-말단부터 아미노산 하나씩 커플링함으로써 합성하였다. 다음과 같이, 펩티드들의 C-말단의 첫번째 아미노산이 수지에 부착된 것을 사용하였다. 예컨대 다음과 같다:
NH2-S(tBu)-2-chloro-Trityl Resin
NH2-Ala-2-chloro-Trityl Resin
NH2-Arg(Pbf)-2-chloro-Trityl Resin
펩티드 합성에 사용한 모든 아미노산 원료는 N-term이 Fmoc으로 보호(protection)되고, 잔기는 모두 산에서 제거되는 Trt, Boc, tBu (t-butylester), Pbf (2,2,4,6,7-pentamethyl dihydro-benzofuran-5-sulfonyl) 등으로 보호된 것을 사용하였다. 예컨대 다음과 같다:
Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Leu-OH
커플링 시약(coupling reagent)으로는 HBTU[2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetamethylaminium hexafluorophosphate] / HOBt [N-Hydroxxybenzotriazole] /NMM [4-Methylmorpholine] 를 사용하였다. Fmoc 제거는 20%의 DMF 중 피페리딘(piperidine in DMF)을 이용하였다. 합성된 펩티드를 Resin에서 분리 및 잔기의 보호기 제거에는 절단 칵테일(cleavage Cocktail) [TFA (trifluoroacetic acid) /TIS (triisopropylsilane) / EDT (ethanedithiol) / H2O=92.5/2.5/2.5/2.5] 를 사용하였다.
아미노산 보호기가 결합된 출발 아미노산이 고상 지지체에 결합되어 있는 상태를 이용하여 여기에 해당 아미노산들을 각각 반응시키고 용매로 세척한 후 탈보호하는 과정을 반복함으로써 각 펩티드를 합성하였다. 합성된 펩티드를 수지로부터 끊어낸 후 HPLC로 정제하고, 합성 성공여부를 LC/MS로 확인하고 동결 건조하였다.
본 실시예에 사용된 펩티드에 대해 고성능 액체 크로마토그래피 결과, 모든 펩티드의 순도는 95% 이상이었다.
예컨대, 펩티드 Gemtide-1 제조에 관한 구체적인 과정을 설명하면 다음과 같다.
1) 커플링
NH2-S(tBu)-2-chloro-Trityl Resin 에 보호된 아미노산(8당량)와 커플링 시약 HBTU(8당량)/HOBt(8당량)/NMM(16당량) 을 DMF에 녹여서 첨가한 후, 상온에서 2시간 동안 반응하고 DMF, MeOH, DMF순으로 세척하였다.
2) Fmoc 탈보호
20%의 DMF 중의 피페리딘(piperidine in DMF) 을 가하고 상온에서 5분 간 2회 반응하고 DMF, MeOH, DMF순으로 세척하였다.
3) 1과 2의 반응을 반복적으로 하여 펩티드 기본 골격 (NH2-R(Pbf)-F-I-P-K-L-T-E-S-T-R(Pbf)-R(Pbf)-I-A-A-S(tBu)-2-chloro-Trityl Resin) 을 만들었다.
4) 절단(cleavage): 합성이 완료된 펩티드 수지(resin)에 절단 칵테일(cleavage cocktail) 을 가하여 펩티드를 수지에서 분리하였다.
5) 얻어진 혼합물에 냉각 디에틸 에테르를 가한 후, 원심 분리하여 얻어진 펩티드를 침전시킨다.
6) 위의 과정에서 얻어진 조(crude) 펩티드를 Prep HPLC를 이용하여 분리 정제하였다. 컬럼은 Vydac Everest C18 column (250 mm × 22 mm, 10 μm)를 이용하였다. Eluent는 0.1% (v/v) 트리플루오로아세트산(trifluoroacetic acid)가 함유된 10~75% (v/v) 워터-아세토니트릴(water-acetonitrile) 선형 그레디언트(linear gradient)를 이용하였다.
7) 분리된 펩티드가 원하는 서열대로 합성이 되었는지를 LC/MS를 (Agilent HP1100 series) 이용하여 확인하였다.
8) 분자량이 확인된 펩티드를 다시 분석용 HPLC를 이용하여 95% 순도이상으로 분리 정제된 것을 확인하고 동결건조 과정을 거쳐 흰색 파우더로 제조하였다.
실시예 2: 신규 펩티드의 세포독성 평가
신규 펩티드 Gemtide-1 및 이를 포함한 조성물의 세포 독성(cytotoxicity) 여부를 측정하기 위하여, 인간 피부 섬유아세포(human dermal fibroblast)를 배양하여 신규 펩티드로 처리한 뒤, 흡광도 측정 방법을 통하여, 아무것도 처리하지 않은 대조군과 비교한 상대 세포 활성도(cell viability)를 계산하였다.
실험 세포주 배양
실험에는 인간 피부 섬유아세포(human dermal fibroblast, Gibco Cat. Number: C-013-5C)를 96-웰 플레이트에 웰 당 1 x 104 세포수를 넣고 12시간 동안 배양하여 사용하였다.
실험 방법
상기 세포주 배양 방법에 따라 배양된 배양배지를 제거하고 PBS로 세척한 후에 혈청(serum)을 첨가하지 않은 Medium 106 배지를 아무것도 처리 하지 않은 대조군(control) 및 농도별(0.1, 1, 10, 50, 100 μg/ml) 펩티드 처리군으로 나누어 처리하여 5% CO2, 37℃에서 24시간 배양하였다.
24시간이 경과한 후에 MTT 용액 (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide; 5 mg/ml)를 10 ㎕를 첨가하고 5% CO2, 37℃에서 2시간 동안 배양하였다.
배지를 제거하고 DMSO (dimethylsulfoxide)를 100 ㎕를 넣고 상온에서 10분간 흔들어준 다음 570 nm에서 마이크로 플레이트 리더(microplate reader)를 사용하여 흡광도를 측정하였다.
실험 결과 및 분석
상기 실험 방법을 통하여 도출된 세포 활성도는 대조군을 100%라 했을 때 그 상대적인 값으로 계산하여 나타내었다.
측정 및 계산 결과, 펩티드를 처리하지 않은 대조군과 비교하여 세포 활성도에 차이가 거의 없는 것으로 나타났다(도 1 참조).
이를 통하여 신규펩티드 Gemtide-1이 세포 독성에 영향을 주지 않는 것을 알 수 있었다.
실시예 3: 신규 펩티드의 콜라겐 생성 증대 효과 측정
신규펩티드 Gemtide-1 및 이를 포함한 조성물이 주름개선을 위한 콜라겐 생성 효과가 있는지 검증하기 위하여, 인간 피부 섬유아세포를 배양하여 신규 펩티드를 처리한 뒤 흡광도 측정 방법을 통하여, 아무것도 처리하지 않은 대조군과 비교한 상대 콜라겐 합성도(collagen synthesis)를 계산하였다.
실험 세포주 배양
실험에는 인간 피부 섬유아세포를 12-웰 플레이트에 웰 당 5 x 105 세포수를 넣고 12시간 동안 배양하여 사용하였다.
실험 방법
배양 배지를 제거하고 PBS로 세척 한 후에 혈청을 첨가하지 않은 Medium 106 배지를 아무것도 처리하지 않는 대조군 및 농도별 (0.1, 1, 10, 50, 100 μg/ml) 펩티드 처리군으로 나누어 처리하여 5% CO2, 37℃에서 24시간 배양하였다.
배양액을 수거하여 콜라겐 양을 ELISA (procollagen type IC-peptide EIA kit) 방법을 이용하여 측정하였다.
ELISA 방법은 ELISA plate에 배양액을 희석하여 20 ㎕를 넣고 항체-POD 컨쥬게이트 용액 100 ㎕를 함께 넣은 다음 37℃에서 3시간 배양하였다.
워싱 버퍼(washing buffer)로 4회 세척 한 후에 발색시약 (TMBZ) 100 ㎕를 넣고 상온에서 15분간 배양한 다음 1N 황산 100 ㎕를 넣었다. 그 후에 450 nm에서 ELISA 리더(reader)로 측정하였다.
실험 결과 및 분석
상기 실험 방법을 통하여 도출된 콜라겐 합성도는 대조군(control)을 100%라 했을 때 그 상대적인 값으로 계산하여 나타내었으며 다음 표 2 와 같다.
　 Gemtide -1
　 Control 0.1 1 10 50 100
Graph 값 100% 101% 103% 104% 113% 118%
증가율 - 1% 3% 4% 13% 18%
측정 및 계산 결과, 신규펩티드 Gemtide-1 처리시 콜라겐 생성이 농도 의존적으로 증가하는 것으로 나타났다(도 2 참조).
이를 통하여 신규펩티드 Gemtide-1이 인간 피부 세포에서 콜라겐 생성을 증대시키는 효과가 있는 것을 알 수 있었다.
실시예 4: 신규 펩티드의 MMP-1 감소 효과 측정
신규펩티드 Gemtide-1 및 이를 포함한 조성물이 주름개선을 위하여 콜라겐 생성을 저해시키는 MMP-1의 분비를 저해하는 효과가 있는지 검증하기 위하여, 인간 피부 섬유아세포를 배양하여 신규 펩티드로 처리한 뒤 흡광도 측정 방법을 통하여, 아무것도 처리하지 않은 대조군과 비교한 상대 MMP-1활성도를 계산하였다.
실험 세포주 배양
실험에는 인간 피부 섬유아세포를 12-웰 플레이트에 웰 당 5 x 105 세포수를 넣고 14 내지 16시간 동안 배양하여 사용하였다.
실험 방법
배양 배지를 제거하고 PBS로 세척 한 후에 혈청을 첨가하지 않은 Medium 106 배지를 아무것도 처리하지 않는 대조군 및 농도별 (0.1, 1, 10, 50, 100 μg/ml) 펩티드 처리군으로 나누어 처리하여 5% CO2, 37℃에서 24시간 배양하였다.
배양액을 수거하여 MMP-1을 ELISA(human MMP-1 ELISA Kit, RayBio®) 방법을 이용하여 측정하였다.
ELISA 방법은 ELISA 플레이트에 배양액 100 ㎕를 넣고 상온에서 2.5시간 배양한 후에 워싱 버퍼로 4회 세척하고 난 다음 바이오티닐레이티드(biotinylated) 항체 100 ㎕를 넣고 상온에서 1시간 배양하였다.
다시 워싱 버퍼로 4회 세척하고 Streptavidin solution 100 ㎕를 넣고 상온에서 45분간 가볍게 교반하여 배양한 후 TMB One-Step Substrate reagent 100 ㎕를 넣고 30분간 상온에서 배양하였다.
그 후에 종결 용액(stop solution) 50 ㎕를 넣고 450 nm에서 ELISA 리더로 측정하였다.
실험 결과 및 분석
상기 실험 방법을 통하여 도출된 MMP-1 활성도는 대조군을 100%라 했을 때 그 상대적인 값으로 계산하여 나타내었으며 다음 표 3 과 같다.
　 Gemtide -1
　 Control 0.1 1 10 50 100
Graph 값 100% 96% 97% 90% 84% 80%
억제율 - 4% 3% 10% 16% 20%
측정 및 계산 결과, 신규펩티드 Gemtide-1 처리시 콜라겐 생성을 저해하는 MMP-1의 분비가 감소하는 것으로 나타났다(도 3 참조).
이를 통하여 신규펩티드 Gemtide-1이 인간 피부 세포에서 콜라겐 생성을 저해하는 MMP-1의 분비를 감소시키는 효과가 있는 것을 알 수 있었다.
실시예 5: 신규 펩티드의 멜라닌 생성 억제 효과 측정
신규펩티드 Gemtide-1 및 이를 포함한 조성물이 피부 미백을 위하여 피부색을 어둡게 하는 요인 중 하나인 멜라닌의 생성을 억제하는 효과가 있는지 검증하기 위하여, 피부 세포주(B16F1)를 배양하여 신규 펩티드를 처리한 뒤 흡광도 측정 방법을 통하여, 아무것도 처리하지 않은 대조군과 비교한 상대 멜라닌 생성도(melanin content)를 계산하였다.
실험 세포주 배양
실험에는 마우스 피부암 세포주(B16F1, KCLB number:80007)를 6-웰 플레이트에 웰 당 1 x 105 세포수로 분주한 후에 세포를 부착시켜 12 내지 16시간 동안 배양하여 사용하였다.
실험 방법
배양 후 배지를 제거하고 멜라닌 생성을 촉진하기 위해 200 nM α-MSH (α-melanocyte-stimulating hormone)를 첨가한 배지를 α-MSH 처리 외에는 아무것도 처리하지 않는 대조군(control) 및 농도별 (0.1, 10, 100, 500, 1000 μg/ml) 펩티드 처리군으로 나누어 처리한 후에 5% CO2, 37℃에서 72시간 배양하였다.
72시간 배양 후에 세포를 PBS로 세척하고 trypsin-EDTA로 탈착시켜 원심분리하여 세포를 회수한 다음에 세포 계수기(hematocytometer)를 이용하여 세포수를 측정하였다.
측정한 세포를 다시 원심분리하여 세포 펠렛(pellet)을 수거하였다.
수거된 세포 펠렛을 건조시킨 후에 10% DMSO가 함유된 1N NaOH 100 ㎕를 넣어 60℃ 항온조에서 멜라닌을 용해한 후 마이크로플레이트 리더로 490 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 일정수 당 멜라닌양을 구하여 대조군으로 보정하였다.
실험 결과 및 분석
상기 실험 방법을 통하여 도출된 멜라닌 함량은 α-MSH 처리 대조군(control)을 100%라 했을 때 그 상대적인 값으로 계산하여 나타내었으며, α-MSH를 처리하지 않은 음성 대조군 (α-MSH(-))을 추가로 측정 및 계산하여 다음 표 4와 같이 나타내었다.
　 Gemtide -1
　 a-MSH(-) a-MSH(+) 0.1 10 100 500 1000
Graph 값 56% 100% 94% 94% 89% 80% 70%
억제율 　 　- 6% 6% 11% 20% 30%
측정 및 계산 결과, 신규펩티드 Gemtide-1 처리시 α-MSH로 유도된 멜라닌 함량이 농도 의존적으로 감소하는 것으로 나타났다(도 4 참조).
이를 통하여 신규펩티드 Gemtide-1이 세포 내에서 멜라닌 생성을 감소시키는 효과가 있는 것을 알 수 있었다.
실시예 6: 신규 펩티드의 광노화 억제 효과 측정
신규펩티드 Gemtide-1 및 이를 포함한 조성물이 자외선(UV-B) 노출에 의해 유도되는 염증반응을 억제하여 피부의 광노화를 억제하는 효과가 있는지 검증하기 위하여, 정상 인간 표피 각질세포(normal human epidermal keratinocyte)를 배양하여 신규 펩티드를 처리한 뒤, 흡광도 측정 방법을 통하여, 염증반응을 일으키는 사이토카인(cytokine)으로 알려진 TNF-α 및 IL-6의 농도를 측정하였다.
실험 세포주 배양
실험에는 정상 인간 표피 각질세포(normal human epidermal keratinocyte)를 12-웰 플레이트에 웰 당 2 x 105 세포수를 넣고 16 내지 18시간 동안 배양하여 사용하였다.
실험 방법
UV-B 조사 전에 배양배지를 제거한 후 PBS로 세척한 후에 30 mJ/㎠ UV-B를 조사하였다. 추가로 UV-B 조사를 하지 않는 음성 대조군을 생성하여 두었다.
UV-B 조사 후에 BPE(bovine pituitary extract)와 EGF(epidermal growth factor, human recombinant)를 첨가하지 않은 Keratinocyte-SFM 펩티드를 처리하여 24시간 배양하였다.
배양 후에 아무것도 처리하지 않는 대조군 및 농도별 (0.1, 0.5, 1, 10 μg/ml) 펩티드 처리군으로 나누어 처리한 후에 5% CO2, 37℃에서 배양하였다.
24시간이 경과한 후에 배양액을 수거하여 및 TNF-α 및 IL-6를 ELISA(RayBio®)를 이용하여 정량화하였다.
ELISA 방법은 ELISA 플레이트에 배양액 100 ㎕를 넣고 상온에서 2.5시간 배양한 후에 워싱 버퍼로 4회 세척하고 난 다음 비오티닐레이티드 항체 100 ㎕를 넣고 상온에서 1시간 배양하였다.
다시 워싱 버퍼로 4회 세척하고 Streptavidin solution 100 ㎕를 넣고 상온에서 45분간 가볍게 교반하여 배양한 후 TMB One-Step Substrate reagent 100 ㎕를 넣고 30분간 상온에서 배양하였다.
그 후에 종결 용액(stop solution) 50 ㎕를 넣고 450 nm에서 ELISA 리더로 측정하였다.
실험 결과 및 분석
상기 실험 방법을 통하여 UV-B를 조사하지 않은 음성 대조군(UV-B(-)), UV-B를 조사 후 아무것도 처리 하지 않은 대조군, 농도별 펩티드 처리군에서의 TNF-α 및 IL-6 농도를 측정한 뒤 대조군을 100%로 놓고 상대적인 농도 및 억제율을 계산하여 다음 표 5(TNF-α 억제율) 및 표 6(IL-6 억제율)과 같이 나타내었다.
　 Gemtide -1
　 UVB(-) control 0.1 0.5 1 10
Graph 값 57% 100% 79% 81% 80% 84%
억제율 　 　 21% 19% 20% 16%
　 Gemtide -1
　 UVB(-) control 0.1 0.5 1 10
Graph 값 9% 100% 50% 54% 52% 52%
억제율 　 　 50% 46% 48% 48%
측정 및 계산 결과, 신규펩티드 Gemtide-1 처리시 자외선 조사로 유도된 염증반응을 일으키는 사이토카인 TNF-α 및 IL-6의 분비가 감소하는 것으로 나타났다(도 5 및 도 6 참조).
이를 통하여 신규펩티드 Gemtide-1이 자외선에 노출된 피부에서 염증반응을 감소시켜 피부의 광노화를 억제하는 효과가 있는 것을 알 수 있었다.
상기 실험 결과들을 통하여, 본 발명의 일측면에 따른 신규 펩티드 및 이를 포함하는 조성물은 콜라겐 생성, 콜라겐 생성 저해 인자 억제, 멜라닌 생성 억제, 염증성 사이토카인 TNF-α 및 IL-6의 분비 감소 등의 효과를 보이는 것을 알 수 있다. 이 효과들은 피부의 주름개선, 미백, 광노화 억제, 및 항염증 효과를 줄 수 있는 것으로, 본 발명의 일측면에 따른 펩티드 및 이를 포함한 조성물이 피부 상태 개선에서 다양하고 우수한 효과를 가질 수 있음을 알 수 있다.
본 발명의 일측면에 따른 신규 펩티드가 주름개선, 노화방지, 미백, 항염증 기능이 있음을 알 수 있으며, 이를 이용하여 주름개선, 노화방지, 미백, 항염증 기능성 조성물 개발이 가능할 것으로 판단된다.

Claims (19)

  1. 서열 번호 1 로 표시되는 아미노산 서열로 구성되는 펩티드, 상기 펩티드 서열의 단편인 펩티드, 상기 펩티드 서열 또는 그의 단편인 펩티드와 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드로 구성된 군으로부터 선택되는 펩티드 또는 그의 염.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 펩티드는 주름개선, 노화방지, 피부미백, 또는 항염증 활성을 보이는 것을 특징으로 하는 펩티드 또는 그의 염.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 펩티드는 콜라겐 생성을 증가시키거나, 또는 콜라겐 생성 억제 인자 분비를 저해시키는 것을 특징으로 하는 펩티드 또는 그의 염.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 펩티드는 멜라닌 생성을 억제시키는 것을 특징으로 하는 펩티드 또는 그의 염.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 펩티드는 염증반응을 일으키는 사이토카인 분비를 감소시키는 것을 특징으로 하는 펩티드 또는 그의 염.
  6. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 주름개선, 노화방지, 피부미백, 또는 항염증 활성을 보이는 조성물.
  7. 제 6항에 있어서, 상기 조성물은 상기 펩티드 또는 그의 염을 0.1㎍/ml 내지 10000㎍/ml, 바람직하게는 1㎍/ml 내지 1000㎍/ml, 더 바람직하게는 10㎍/ml 내지 1000㎍/ml의 함량으로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  8. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물.
  9. 제 8항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨, 로션, 크림, 파운데이션, 에센스, 젤, 팩, 폼 클렌징, 비누 및 피부외용 연고로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형으로 이루어진 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  10. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 피부 외용제 조성물.
  11. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 건강기능 식품용 조성물.
  12. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 피부 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물.
  13. 제 1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드 또는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물.
  14. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드 또는 그의 염을 포함하는 조성물을 피부 질환 또는 염증성 질환의 예방 및 치료를 필요로 하는 대상에게 적용하는 것을 포함하는 피부 질환 또는 염증성 질환 예방 및 치료 방법.
  15. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드 또는 그의 염을 포함하는 조성물을 주름개선, 노화방지, 및 피부미백으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 필요로 하는 대상에게 적용하는 것을 포함하는, 피부 미용 또는 피부 관리 방법.
  16. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드 또는 그의 염을 포함하는 조성물; 및 상기 조성물의 사용량, 사용 방법, 사용 횟수 중 하나 이상을 개시한 지시서를 포함하는 피부 질환 또는 염증성 질환의 예방 및 치료를 위하여 사용되는 키트.
  17. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드 또는 그의 염을 포함하는 조성물; 및 상기 조성물의 사용량, 사용 방법, 사용 횟수 중 하나 이상을 개시한 지시서를 포함하는 피부 미용 또는 피부 관리를 위하여 사용되는 키트.
  18. 피부 질환 또는 염증성 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제조하기 위한, 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드 또는 그의 염의 용도.
  19. 피부 미용 또는 피부 관리용 조성물을 제조하기 위한, 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드 또는 그의 염의 용도.
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