WO2017200288A1 - 천연 한방 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 피부 주름 개선용 조성물 - Google Patents

천연 한방 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 피부 주름 개선용 조성물 Download PDF

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composition
extract
skin
whitening
natural copper
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마진열
양주혜
조원경
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한국한의학연구원
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    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations

Definitions

  • the present invention relates to a composition for whitening, preventing skin aging or improving skin wrinkles comprising a natural herbal extract as an active ingredient.
  • a composition for whitening, preventing skin aging or improving skin wrinkles comprising a natural herbal extract as an active ingredient.
  • whitening, natural anti-aging or fractions thereof as an active ingredient, skin aging or anti-wrinkle cosmetic composition, pharmaceutical composition and quasi-drug composition, and whitening including the step of administering the composition to the individual, anti-aging skin Or to improve wrinkles.
  • the skin is an organ that shows aging first, and the aging of the skin varies depending on various factors such as genetic factors, the degree of exposure to ultraviolet rays, and the increase in the generation of free radicals and oxidative free radicals caused by physical and chemical stresses.
  • ultraviolet rays are divided into UV-A, UV-B, and UV-C according to the wavelength range, among which ultraviolet rays of UV-B wavelength cause pigmentation such as spots, blotch, and the like on the skin.
  • ultraviolet rays form free radicals in skin cells, and the various free radicals generated thereby damage proteins, lipids, or nucleic acids in cells, reduce collagen synthesis, increase melanin synthesis, and metalloproteinases.
  • MMPs matrix metalloproteinases
  • ECM extra cellular matrix
  • the present inventors have diligently researched on substances exhibiting excellent skin-improving effect from natural resources existing in nature.
  • natural copper extracts have tyrosinase inhibitory activity, elastase inhibitory activity, free radical scavenging activity, and UV-B irradiation. Confirmed to exhibit a cell death inhibition or protective effect according to, to complete the present invention.
  • One object of the present invention is to provide a cosmetic composition for whitening, preventing skin aging or improving wrinkles comprising natural extract or fractions thereof as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is to provide a quasi-drug composition for whitening, skin anti-aging or wrinkle improvement comprising natural copper extract or fractions thereof as an active ingredient.
  • Natural copper extract according to the present invention is excellent in DPPH radical scavenging activity, tyrosinase, elastase, UV-B irradiation or cell death inhibition or protection effect, collagen fiber damage inhibition and melanin production inhibitory effect Excellent, it can be used in cosmetics, medicines and quasi-drugs for whitening, skin anti-aging or wrinkle improvement.
  • 1 is a graph showing the tyrosinase inhibitory activity according to the concentration of the natural copper extract supernatant.
  • Figure 2 is a graph showing the elastase inhibitory activity according to the concentration of natural copper extract.
  • Figure 3 is a graph showing the DPPH free radical scavenging activity according to the natural copper extract treatment.
  • Figure 4 is a graph showing the cell viability of human fibroblasts Hs27 cells according to the concentration of natural copper extract.
  • Figure 5 is a graph showing the cell viability of human skin keratinocytes HsCat cells according to the concentration of natural extract.
  • 6 is a graph showing collagen damage inhibitory activity of artificial skin according to the concentration of natural copper extract.
  • Figure 7 is a graph showing the melanin production inhibitory activity of artificial skin according to the concentration of natural copper extract.
  • the present inventors conducted various studies using substances exhibiting excellent skin improvement effects from natural resources existing in nature.
  • natural copper extracts showed tyrosinase inhibitory activity, elastase inhibitory activity, free radical scavenging activity, and UV-B irradiation. It was confirmed that exhibits a cell death suppression or protective effect of human fibroblasts and human dermal keratinocytes.
  • the natural copper extract can be used as a cosmetic composition for whitening, skin aging or wrinkle improvement.
  • the cosmetic composition comprising a natural copper extract having the whitening, skin anti-aging or wrinkle improvement effect is not known at all, and can be said to have great significance in that it was first developed by the present inventors.
  • a cosmetic composition for whitening, skin anti-aging or wrinkle improvement comprising a natural copper extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the term "Pyritum” is also called mountain valley, and is widely known as a mineral herbal medicine.
  • the natural sinus is mainly known for the effects associated with fractures and bones, but the inventors of the present invention for the first time as to the natural whitening, skin aging or wrinkle improvement effect.
  • the natural copper may be purchased commercially, but is not limited thereto.
  • extract refers to a substance obtained by extracting a substance, and specifically, an extract obtained by the extraction process of the natural copper of the present invention, a dilution of the extract, a concentrated solution, and the extract Extracts of all formulations that can be formed using the extract itself and the extract, such as dried products obtained by drying, crudes or purified products of the extract or mixtures thereof.
  • the method of extracting the natural copper is not particularly limited and may be extracted according to a method commonly used in the art.
  • Non-limiting examples of the extraction method may include solvent extraction, ultrasonic extraction, filtration, reflux extraction, and the like, which may be performed alone or in combination of two or more methods.
  • the kind of the extraction solvent used for the extraction of the natural copper in the present invention is not particularly limited, and any solvent known in the art may be used.
  • Non-limiting examples of the extractant may include water, alcohols having 1 to 4 carbon atoms or mixed solvents thereof, and these may be used alone or in combination of one or more thereof.
  • the extraction solvent may be hot water.
  • natural copper and bottled water were deposited in a Daewoong tangtang and then heated to obtain a natural copper extract, and then lyophilized to prepare a natural copper extract sample.
  • the extract may comprise 0.0001 to 10% by weight relative to the total composition, specifically may comprise 0.0005 to 5% by weight.
  • the content is less than 0.0001% by weight, it is not preferable because the original desired activity can not be sufficiently achieved, and if it exceeds 10% by weight it is not expected to increase the apparent effect as increasing content may be uneconomical.
  • fraction refers to the result obtained by performing fractionation to separate a specific component or a specific group of components from a mixture comprising several different components.
  • the fractionation method of obtaining the fraction in the present invention is not particularly limited as long as it can exhibit antioxidant, whitening, anti-aging or skin wrinkle improvement, but may be carried out according to a method commonly used in the art.
  • solvent fractionation is performed by treating various solvents
  • ultrafiltration fractionation is carried out through an ultrafiltration membrane having a constant molecular weight cut-off value
  • separation according to various chromatography size, charge, hydrophobicity or affinity
  • Chromatography and combinations thereof.
  • the kind of the fractionation solvent used to obtain the fraction in the present invention is not particularly limited, and any solvent known in the art may be used.
  • Non-limiting examples of the fractionation solvents include polar solvents such as water, distilled water and alcohols; And nonpolar solvents such as hexane, ethyl acetate, chloroform, dichloromethane, and the like. These may be used alone or in combination of two or more thereof.
  • alcohols of C 1 to C 4 may be preferably used.
  • the composition may be characterized by having an antioxidant activity.
  • the antioxidant means an action of inhibiting oxidation, and in the human body, a prooxidant and an antioxidant are balanced, but due to various factors, this balance is imbalanced and promoted toward oxidation promotion. When tilted, oxidative stress is induced, causing potential cell damage and pathological disease.
  • the natural copper extract exhibits excellent DPPH free radical scavenging activity, it was found that the natural copper extract has an antioxidant activity (Fig. 3).
  • whitening refers to whitening of the skin, and means any action that inhibits the synthesis of melanin to inhibit or prevent skin deposition of melanin.
  • the composition may be characterized by inhibiting the activity of tyrosinase (tyrosinase).
  • the tyrosinase is a metal-containing protein containing a pair of copper ions in the active site, and L-tyrosine undergoes hydroxylation in the melanin production pathway to form 3,4-dihydroxy phenylalanine (L-DOPA). Is converted to melanin via various intermediates such as dopachrome, indole-5,6-quinone, and then oxidized to phenylalanine-3,4-quinone (dopaquinone). Means.
  • the natural copper extract shows a tyrosinase inhibitory activity in a concentration-dependent manner, it can be seen that the natural copper extract has a whitening activity (Fig. 1).
  • the composition may be characterized by inhibiting the production of melanin (melanin).
  • the melanin is a pigment of dark brown granules, and is produced by a cell organelle called melanosome in melanocytes. Melanin is present in the skin, hair, eyes, etc., and the skin color is determined according to the amount of melanin. The higher the amount of melanin, the darker the skin color.
  • the natural copper extract exhibits a melanin production inhibitory effect in a concentration-dependent manner, it was found that the natural copper extract has a whitening activity (Fig. 7).
  • wrinkle refers to a fine line produced by skin attenuation, and may be caused by a gene, a decrease in collagen present in skin dermis, or an external environment.
  • the composition may be to inhibit the activity of the elastase (elastase).
  • the elastase means an enzyme having a role of catalyzing the hydrolysis reaction of elastin involved in skin elasticity.
  • the natural copper extract exhibits an elastase inhibitory activity in a concentration-dependent manner, it was found that the natural copper extract has a wrinkle improving activity (Fig. 2).
  • the composition may be characterized in that to inhibit the collagen fibers (collagen fiber) damage.
  • the collagen fiber is a fibrous tissue composed of collagen, and is present in connective tissues such as bone, cartilage, skin, and tendon. When the skin is exposed to ultraviolet rays, the collagen fibers involved in skin elasticity are damaged and photoaging of the skin proceeds.
  • the natural copper extract exhibits a collagen fiber damage inhibitory activity in a concentration-dependent manner, it can be seen that the natural copper extract has a wrinkle improving activity (Fig. 6).
  • skin aging is a symptom such as reduced skin elasticity, reduced gloss, wrinkle formation, weakened regeneration or severe dryness, and may be caused by passage of time or external environment.
  • the skin aging may be photoaging.
  • the photo aging refers to a phenomenon in which skin damage occurs such as skin elasticity and moisture decrease and wrinkles are formed upon repeated or prolonged exposure to ultraviolet rays of sunlight.
  • the addition of natural copper extracts to human Hs27 cells and human HaCat cells after UV-B irradiation, compared to the case of UV-B only irradiation confirmed that the cell survival rate is increased, It was found that the extract has an effect of inhibiting photoaging or protecting from photoaging (FIG. 4).
  • the term “improvement” refers to inhibiting or inhibiting the symptoms of melanin skin deposition, skin aging or wrinkles, or alleviating the symptoms of melanin skin deposition, skin aging or wrinkles using the composition of the present invention. I say to let you.
  • the cosmetic composition is a solution, external ointment, cream, foam, nourishing lotion, flexible lotion, pack, flexible water, latex, makeup base, essence, soap, liquid cleaning agent, bath, sunscreen cream, sun oil, It may be prepared in a formulation selected from the group consisting of suspensions, emulsions, pastes, gels, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing, oils, powder foundations, emulsion foundations, wax foundations, patches and sprays, but It is not limited.
  • the cosmetic composition of the present invention may further include one or more cosmetically acceptable carriers formulated in general skin cosmetics, and as conventional components, for example, oil, water, surfactants, moisturizers, lower alcohols, thickeners , Chelating agents, pigments, preservatives, fragrances and the like may be appropriately blended, but is not limited thereto.
  • one or more cosmetically acceptable carriers formulated in general skin cosmetics, and as conventional components, for example, oil, water, surfactants, moisturizers, lower alcohols, thickeners , Chelating agents, pigments, preservatives, fragrances and the like may be appropriately blended, but is not limited thereto.
  • the cosmetically acceptable carrier included in the cosmetic composition of the present invention varies depending on the formulation of the cosmetic composition.
  • the carrier component is animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc, zinc oxide and the like. May be used, but is not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more thereof.
  • the formulation of the present invention is a powder or a spray
  • lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate, polyamide powder and the like can be used, and especially in the case of a spray, additionally chlorofluorohards.
  • Propellants such as carboxylic, propane / butane or dimethyl ether may be included, but are not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more thereof.
  • a solvent, solubilizer or emulsion may be used as the carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, Propylene glycol, 1,3-butylglycol oil, and the like can be used, and in particular, cottonseed oil, peanut oil, corn seed oil, olive oil, castor oil and sesame oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan fatty acid ester May be used, but is not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more thereof.
  • liquid carrier diluents such as water, ethanol or propylene glycol
  • suspending agents such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol esters and polyoxyethylene sorbitan esters, micro Crystalline cellulose, aluminum metahydroxyde, bentonite, agar or tracant may be used, but is not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more thereof.
  • the formulation of the present invention is a soap
  • alkali metal salts of fatty acids fatty acid hemiester salts, fatty acid protein hydrolyzates, isethionates, lanolin derivatives, aliphatic alcohols, vegetable oils, glycerol, sugars and the like
  • carrier components May be, but is not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more thereof.
  • compositions for whitening, skin aging or wrinkle improvement comprising natural copper extract or fractions thereof as an active ingredient.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may also be used as a single agent, and may be prepared and used as a complex preparation, further comprising a drug known to have an effect of improving wrinkles or skin aging, and may be formulated using a pharmaceutically acceptable carrier or excipient. It may be prepared in unit dose form or incorporated into a multi-dose container.
  • the "pharmaceutically acceptable carrier” may refer to a carrier, excipient or diluent that does not impair the biological activity and properties of the compound to be injected, without stimulating the organism, specifically, non-naturally occuring carrier).
  • the kind of the carrier usable in the present invention is not particularly limited, and any carrier can be used as long as it is a conventionally used and pharmaceutically acceptable carrier in the art.
  • Non-limiting examples of the carrier include saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, albumin injection solution, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol and the like. These may be used alone or in combination of two or more thereof.
  • compositions comprising a pharmaceutically acceptable carrier may be in various oral or parenteral formulations.
  • diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, and surfactants are usually used.
  • solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations include at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, It can be prepared by mixing gelatin and the like.
  • lubricants such as magnesium stearate, talc can also be used.
  • Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, and syrups.In addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included. have.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations and suppositories.
  • non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, injectable esters such as ethyl oleate and the like can be used.
  • utopsol macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • the pharmaceutical composition may be administered in a pharmaceutically effective amount.
  • the "pharmaceutically effective amount” means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is determined by the type and severity of the individual, age, sex, activity of the drug, drug Sensitivity, time of administration, route of administration and rate of release, duration of treatment, factors including concurrent use of drugs, and other factors well known in the medical arts.
  • the present invention provides a quasi-drug composition for whitening, preventing skin aging, or improving wrinkles, which comprises natural copper extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the term "quasi drug” used in the present invention refers to articles that have a lesser action than drugs among those used for the purpose of diagnosing, treating, ameliorating, alleviating, treating or preventing diseases of humans or animals.
  • the drug is used for the purpose of medicine, and it includes a product used for the treatment or prevention of diseases of humans and animals, and a product having a slight or no direct action on the human body.
  • the quasi-drug composition of the present invention may be prepared selected from the group consisting of body cleanser, foam, soap, mask, ointment, cream, lotion, essence and spray, but is not limited thereto.
  • the composition according to the present invention when used as an quasi-drug additive, the composition may be added as it is, or used together with other quasi-drugs or quasi-drug components, and may be appropriately used according to a conventional method.
  • the mixing amount of the active ingredient may be appropriately determined depending on the intended use.
  • a method for whitening, skin anti-aging or wrinkle improvement comprising administering to a subject a composition comprising a natural copper extract or a fraction thereof.
  • the term "administration" means introducing a composition of the present invention to a patient in any suitable manner, and the route of administration of the composition may be administered via any general route as long as it can reach the desired tissue.
  • Due to the properties of the composition of the present invention is effective in antioxidant, whitening, skin aging or wrinkle improvement, the route of administration of the composition may be administered by applying to the skin.
  • composition of the present invention may be administered daily or intermittently, and the number of administrations per day may be administered once or divided into two or three times.
  • compositions of the present invention may be used alone or in combination with other drug treatments for antioxidant, whitening, skin aging or wrinkle improvement. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect in a minimum amount without side effects, and can be easily determined by those skilled in the art.
  • the term "individual” means all animals, such as rats, mice, and livestock, including humans, who may or may have wrinkles or skin aging. Specifically, it may be a mammal, and the subject may be an individual except a human.
  • the final concentration of natural copper extract was diluted with PBS to 0.5, 1.25, 2.5, 5 and 12.5% by weight, and the supernatant obtained after centrifugation at 3000 rpm for 5 minutes.
  • 50 ⁇ l of the supernatant was mixed with 10 ⁇ l of 0.2 M sodium phosphate buffer (pH 6.8), 50 ⁇ l of 10 mM L-tyrosine and 40 ⁇ l of mushroom tyrosinase (1000 U / mL), followed by 10 at 37 ° C. Reacted for minutes.
  • the absorbance was measured at 510 nm using an ELISA reader, and then tyrosinase inhibitory activity (%) was calculated using the following equation;
  • % Tyrosinase inhibitory activity ⁇ 1- (absorbance of sample addition / absorbance of no addition group) ⁇ X 100
  • PBS was used instead of the supernatant of natural copper extract, and ascorbic acid was used as a positive control group, which is well known for its whitening activity.
  • the tyrosinase inhibitory activity of the natural copper extract supernatant increased depending on the concentration (Fig. 1).
  • the concentration of the natural copper extract supernatant is 5 ⁇ g / mL or more, it was confirmed that exhibits a high tyrosinase inhibitory activity of more than 90% similar to the positive control (Fig. 1 and Table 1).
  • the natural copper extract had a whitening activity through tyrosinase inhibitory activity of the natural copper extract.
  • the final concentration of natural copper extract was diluted to 0.4, 4, 20 and 40 wt% using a 0.2 M Tris-Cl solution (pH 8.0).
  • 100 ⁇ l of the natural copper extract diluted to various concentrations was mixed with 100 ⁇ l of substrate solution and 50 ⁇ l of enzyme solution and reacted at 37 ° C. for 30 minutes.
  • the substrate solution is 50 mM N-succinyl- (Ala) 3-p-nitroanilide (N-succinyl-) which is an elastase substrate in 1 mL of 50 Mm Tris-Cl solution (pH 8.6).
  • 5 ⁇ l of (Ala) 3-pnitroanilide) was added thereto.
  • the enzyme solution was prepared by diluting the porcine pancreatic elastase (PPE) to a concentration of 0.6 units / mL using a 50 mM Tris-Cl solution (pH 8.6).
  • reaction product was measured for absorbance at 410 nm using an ELISA reader, and then the elastase inhibitory activity (%) was calculated using the following equation;
  • % Elastase inhibitory activity ⁇ 1- (absorbance of sample addition / absorbance of no addition) ⁇ X 100.
  • adenosine (adenosine) was used as a positive control group.
  • the elastase inhibitory activity of natural copper extract increased in a concentration-dependent manner.
  • concentration of the extract of natural copper is 40 ⁇ g / mL or more it was confirmed that exhibits a high elastase inhibitory activity of more than 90% similar to the positive control (Fig. 2).
  • the natural copper extract has anti-wrinkle activity through the elastase inhibitory activity of the natural copper extract.
  • methanol was used to dilute the extract of natural copper to a concentration of 100 ⁇ g / mL.
  • 150 ⁇ l of the diluted natural copper extract was dispensed with 150 ⁇ l of DPPH solution dissolved in 0.4 mM using methanol, and then reacted at 96 ° C. for 30 minutes.
  • the absorbance was measured at 517 nm using an ELISA reader, and then DPPH free radical scavenging activity (%) was calculated using the following equation;
  • DPPH free radical scavenging activity (%) ⁇ 1- (absorbance of the sample addition group / absorbance of the no addition group) ⁇ ⁇ 100
  • the no addition group was using distilled water instead of natural copper extract, ascorbic acid was used as a positive control group.
  • the addition of natural copper extract showed excellent DPPH free radical scavenging activity compared to the case of not adding natural copper extract.
  • the natural copper extract addition group of 100 ug / mL concentration showed a high DPPH free radical scavenging activity of 80% or more similar to the positive control group (Fig. 3).
  • natural copper extract has antioxidant activity through high DPPH free radical scavenging activity of natural copper extract.
  • Hs27 human fibroblasts and HaCat cells human keratinocytes were treated with 10% heat-inactivated fetal bovine serum, 100 ⁇ g / mL streptomycin, and 5% CO 2 , 37 ° C. and 95% humidity.
  • the cells were cultured in Dulbeccos modified Eagle's medium (DMEM) containing 100 unit / mL penicillin.
  • DMEM Dulbeccos modified Eagle's medium
  • the human Hs27 and HaCat cells were treated with natural copper extract at a concentration of 10 ⁇ g / mL, and after 2 hours, washed once with phosphate buffered saline and exposed to UV-B 8 mJ / cm 2 .
  • the cells were further cultured at 37 ° C. for 24 hours, and then cell viability was measured using MTT assay.
  • the natural copper extract increases the cell viability of UV-B irradiated human Hs27 cells and HaCat cells, it was found that the natural copper extract exhibits a photoaging inhibitory or protective effect.
  • the anti-wrinkle activity of natural copper extract according to photoaging was evaluated in 3D human skin. Specifically, the natural copper hot water extract was treated 1 hour before artificial skin so that the final concentration is 50, 100% by weight concentration UVB was irradiated 50mJ / cm 2 . Then, after incubation for 2 days in an incubator maintained at 5% CO 2 , 37 °C and humidity of 95% or more, artificial skin was cut and fixed in 4% paraformaldehyde (paraformaldehyde) and processed into a paraffin block after tissue processing. . The paraffin blocks were cut to a thickness of 5 ⁇ m, attached to slides, and stained with Masson Trichrome stain. Wrinkle inhibition activity was evaluated through collagen fibers dyed blue through tissue staining. Adenosine and ascorbic acid were used as controls.
  • the extract of natural copper increases the amount of collagen fibers of artificial skin irradiated with UV-B, it was found that the natural copper extract exhibits anti-wrinkle activity.
  • the whitening effect of natural copper extract was evaluated in 3D human skin. Specifically, natural hydrothermal extract was treated to artificial skin containing melanin so that the final concentration was 50, 100% by weight, and then cultured in an incubator maintained at 5% CO 2 , 37 ° C. and 95% humidity for 7 days. After observing under a microscope to determine the degree of inhibition of melanin production. Ascorbic acid was used as a control.
  • the natural copper extract administration group was confirmed that the melanin was reduced compared to the negative control group, in particular, the natural copper 100 ⁇ g / mL treatment group, it was confirmed that the melanin was reduced than the ascorbic acid treatment group positive control group (Fig. 7).
  • the extract of natural copper reduces the amount of melanin produced by artificial skin, it was found that the natural copper extract exhibits whitening activity.

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Abstract

본 발명은 자연동 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 피부 주름 개선용 조성물, 상기 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 자연동 추출물은 DPPH 라디칼 소거 활성이 우수하고, 티로시나아제, 엘라스타제, UV-B 조사에 따른 세포 사멸 억제 또는 보호 효과가 우수하며, 콜라겐 섬유 손상 억제 및 멜라닌 생성 억제 효과 또한 우수하여, 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선을 위한 화장품, 의약품 및 의약외품 등에 이용될 수 있다.

Description

천연 한방 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 피부 주름 개선용 조성물
본 발명은 천연 한방 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 피부 주름 개선용 조성물에 관한 것이다. 구체적으로, 자연동 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물, 약학 조성물 및 의약외품 조성물, 및 상기 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법에 관한 것이다.
피부는 노화가 일차적으로 나타나는 기관으로, 피부의 노화는 유전적 인자, 자외선에 노출 정도, 물리/화학적 스트레스에 의한 각종 활성산소 및 산화성 자유 라디컬 생성 증가 등 여러 요인에 의해 진행 속도 및 정도가 다르게 나타난다. 구체적으로, 자외선은 파장 영역에 따라 UV-A, UV-B, UV-C로 나누어지는데, 이 중 UV-B 파장의 자외선은 피부에 기미, 검버섯 등과 같은 색소침착을 발생시킨다. 또한, 자외선은 피부 세포 내 활성 산소를 형성하고, 이에 따라 생성된 각종 활성 산소는 세포 내 단백질, 지질 또는 핵산 등을 손상시키거나, 콜라겐의 합성량 감소, 멜라닌 합성량 증가 및 금속 단백질 분해효소(Matrix metalloproteinases, MMPs)의 유전자 발현을 증가시켜 콜라겐, 엘라스틴 등의 세포외 기질(extra cellular matrix; ECM)을 분해하여 피부암, 색소침착 등을 비롯한 여러 만성 피부 질환과 피부노화를 일으킨다. 이에 따라, 최근에는 피부노화의 주요 원인이 되는 자외선 또는 활성산소로부터 피부를 보호하면서, 미백, 주름개선, 피부노화 개선 및 자외선 차단 등 다기능성을 지닌 복합기능성 소재의 개발이 필요한 실정이다.
피부의 노화 또는 주름을 예방하기 위한 화장품에 대한 연구 결과로 적하수오 부정근 추출물을 함유하는 피부 주름개선 화장료 조성물(국내공개특허 제2015-0143375호), 딱총나무 및 으아리 추출물을 유효성분으로 함유하는 주름개선용 화장료 조성물(국내공개특허 제2015-0009266호) 등 다양한 조성물이 개발된 바 있다.
다만, 주름개선 화장품의 사용시 화장품에 대하여 만족하지 못한 이유로 '기대만큼 효과를 얻지 못하다'를 들고 있어, 우수한 주름 개선 또는 노화 방지 효과를 나타내는 화장료 조성물에 대한 개발 및 연구가 여전히 필요한 실정이다.
한편, 산골이라고 불리는 광물성 한약재인 자연동을 이용한 연구로는 대퇴골 간부 골절 후 골절 유합이 지연된 환아의 한의치료 증례보고(J Korean Oriental Pediatrics, 25(1):63-71), 경혈 반창고(대한민국 특허출원번호 제20-2003-0018484호), 자연동의 투여가 인체의 조골모세포 활성과 생쥐 정강이뼈 골절에 미치는 영향(The Journal of Korean Acupuncture & Moxibustion Society, vol. 26. No. 2.) 등이 알려져 있지만, 자연동의 항산화 효과, 피부 미백, 피부 주름 및 피부 노화 개선 효과 등에 대해서는 아직 알려진 바 없다.
본 발명자들은 천연에 존재하는 천연자원들로부터 우수한 피부 개선 효과를 나타나는 물질에 관하여 예의 연구 노력한 결과, 자연동 추출물이 티로시나아제 저해 활성, 엘라스타제 저해 활성, 자유라디칼 소거활성, UV-B 조사에 따른 세포 사멸 억제 또는 보호효과를 나타냄을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 자연동 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 자연동 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 자연동 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 조성물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법을 제공하는 것이다.
본 발명에 따른 자연동 추출물은 DPPH 라디칼 소거 활성이 우수하고, 티로시나아제, 엘라스타제, UV-B 조사에 따른 세포 사멸 억제 또는 보호 효과가 우수하며, 콜라겐 섬유 손상 억제 및 멜라닌 생성 억제 효과 또한 우수하여, 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선을 위한 화장품, 의약품 및 의약외품 등에 이용될 수 있다.
도 1은 자연동 추출물 상등액의 농도에 따른 티로시나아제 저해 활성을 나타낸 그래프이다.
도 2는 자연동 추출물의 농도에 따른 엘라스타제 저해 활성을 나타낸 그래프이다.
도 3은 자연동 추출물 처리에 따른 DPPH 자유라디칼 소거 활성을 나타낸 그래프이다.
도 4는 자연동 추출물의 농도에 따른 인간 섬유아세포인 Hs27 세포의 세포생존율을 나타낸 그래프이다.
도 5는 자연동 추출물의 농도에 따른 인간 피부각질세포인 HsCat 세포의 세포생존율을 나타낸 그래프이다.
도 6은 자연동 추출물의 농도에 따른 인공피부의 콜라겐 손상 억제 활성을 나타낸 그래프이다.
도 7은 자연동 추출물의 농도에 따른 인공피부의 멜라닌 생성 억제 활성을 나타낸 그래프이다.
본 발명자들은 천연에 존재하는 천연자원들로부터 우수한 피부 개선효과를 나타나는 물질을 이용한 다양한 연구 수행 결과, 자연동 추출물이 티로시나아제 저해 활성, 엘라스타제 저해 활성, 자유라디칼 소거활성, UV-B 조사에 따른 인간 섬유아세포 및 인간 피부각질세포의 세포 사멸 억제 또는 보호효과를 나타냄을 확인하였다. 이를 통해 자연동 추출물이 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선을 위한 화장료 조성물로 사용될 수 있음을 알 수 있었다. 상기 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선효과를 가지는 자연동 추출물을 포함하는 화장료 조성물은 지금까지 전혀 알려지지 않고, 본 발명자에 의해 최초로 개발되었다는 점에서 그 의의가 매우 크다고 할 수 있다.
상기 과제를 해결하기 위하여 하나의 양태로서, 자연동 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용된 용어, "자연동(Pyritum)"은 산골이라고 불리기도 하며, 광물성 한약재로 널리 알려져 있다. 상기 자연동은 주로 골절 및 뼈와 관련한 효과에 대해서 많이 알려져 있으나, 자연동의 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선효과에 대해서는 본 발명자가 최초로 규명한 것이다. 상기 자연동은 상업적으로 판매되는 것을 구입할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 사용된 용어, "추출물"은 어떤 물질을 추출 처리하여 얻어지는 물질을 의미하는 것으로, 구체적으로 상기 본 발명의 자연동의 추출처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나, 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
상기 자연동을 추출하는 방법은 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 용매 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.
본 발명에서 상기 자연동의 추출에 사용되는 추출용매의 종류는 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 추출용매의 비제한적인 예로는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합 용매 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 사용되거나 1종 이상 혼합하여 사용될 수 있다. 구체적으로, 상기 추출용매는 열수일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서는 자연동과 생수를 대웅약탕기에 넣어 침적시킨 후 가열하여 자연동 추출물을 수득한 후, 동결건조하여 자연동 추출물 시료를 제조하였다.
본 발명의 화장료 조성물은, 상기 추출물을 전체 조성물 대비 0.0001 내지 10 중량% 포함할 수 있고, 구체적으로 0.0005 내지 5 중량%를 포함할 수 있다.
상기 함량이 0.0001 중량% 미만일 경우 본래 목적하는 활성을 충분하게 달성할 수 없어 바람직하지 못하며, 10 중량%를 초과하는 경우 증가하는 함량만큼 뚜렷한 효과의 증대가 기대되지 않아 비경제적일 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어, "분획물"은 여러 다양한 구성 성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 분획 방법은 항산화, 미백, 피부 노화 방지 또는 피부 주름 개선 효과를 나타낼 수 있는 한 특별히 이에 제한되지 않으나, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 예를 들어, 다양한 용매를 처리하여 수행하는 용매 분획법, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 수행하는 한외여과 분획법, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)를 수행하는 크로마토그래피 분획법, 및 이의 조합 등이 될 수 있다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 데에 사용되는 분획 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 분획 용매의 비제한적인 예로는 물, 증류수, 알코올 등의 극성 용매; 헥산(Hexan), 에틸 아세테이트(Ethyl acetate), 클로로포름(Chloroform), 디클로로메탄(Dichloromethane) 등의 비극성 용매 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합하여 사용될 수 있다. 상기 분획 용매 중 알코올을 사용하는 경우에는 바람직하게는 C1 내지 C4의 알코올을 사용할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 항산화 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
상기 항산화는 산화를 억제하는 작용을 의미하는 것으로, 인체에는 산화촉진물질(prooxidant)과 산화억제물질(antioxidant)이 균형을 이루고 있으나 여러 가지 요인들에 의하여 이런 균형상태가 불균형을 이루게 되고 산화촉진 쪽으로 기울게 되면, 산화적 스트레스(oxidative stress)가 유발되어 잠재적인 세포 손상 및 병리적인 질환을 일으키게 된다.
본 발명의 일 실시예에서 자연동 추출물이 우수한 DPPH 자유라디칼 소거활성을 나타냄을 확인하여 자연동 추출물이 항산화 활성을 가짐을 알 수 있었다(도 3).
본 발명에서 사용된 용어, "미백"은 피부를 하얗게 하는 것을 의미하고, 멜라닌의 합성을 저해하여 멜라닌의 피부 침착을 억제하거나 방지하는 모든 작용을 의미한다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 티로시나아제(tyrosinase)의 활성을 저해하는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
상기 티로시나아제는 활성 부위에 한 쌍의 구리 이온을 함유하고 있는 금속 함유 단백질로서, 멜라닌의 생성 경로에서 L-티로신이 하이드록실화 반응을 거쳐 3,4-디하이드록시 페닐알라닌(L-DOPA)으로 전환되고, 이것이 다시 페닐알라닌-3,4-퀴논(도파퀴논)으로 산화된 다음, 도파크롬(dopachrome), 인돌-5,6-퀴논 등의 여러 중간체를 거쳐 멜라닌으로 합성되는 단계에 관여하는 효소를 의미한다.
본 발명의 일 실시예에서, 자연동 추출물이 농도 의존적으로 티로시나아제 저해 활성을 나타냄을 확인하여, 자연동 추출물이 미백 활성을 가짐을 알 수 있었다(도 1).
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 멜라닌(melanin)의 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
상기 멜라닌은 흑갈색 알갱이의 색소로서, 멜라닌 세포 내 멜라노솜이라는 세포 소기관에 의해 만들어진다. 멜라닌은 피부, 털, 눈 등에 존재하며, 멜라닌의 양에 따라 피부색이 결정되는데, 멜라닌의 양이 많을수록 검은 피부색을 띤다.
본 발명의 일 실시예에서, 자연동 추출물이 농도 의존적으로 멜라닌 생성 억제 효과를 나타냄을 확인하여, 자연동 추출물이 미백 활성을 가짐을 알 수 있었다(도 7).
본 발명에서 사용된 용어, "주름"은 피부가 쇠하여 생긴 잔줄을 의미하는 것으로, 유전자에 의한 원인, 피부 진피에 존재하는 콜라겐의 감소, 외부 환경 등에 의해 유발될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 엘라스타제(elastase)의 활성을 저해하는 것일 수 있다.
상기 엘라스타제는 피부 탄력에 관여하는 엘라스틴의 가수분해 반응을 촉매하는 역할을 갖는 효소를 의미한다.
본 발명의 일 실시예에서, 자연동 추출물이 농도 의존적으로 엘라스타제 저해 활성을 나타냄을 확인하여, 자연동 추출물이 주름 개선 활성을 가짐을 알 수 있었다(도 2).
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 콜라겐 섬유(collagen fiber) 손상을 억제하는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.
상기 콜라겐 섬유는 콜라겐으로 이루어진 섬유조직으로, 뼈, 연골, 피부, 힘줄 등의 결합조직에 존재한다. 피부가 자외선에 노출될 경우, 피부 탄력에 관여하는 콜라겐 섬유가 손상되어 피부의 광노화가 진행된다.
본 발명의 일 실시예에서, 자연동 추출물이 농도 의존적으로 콜라겐 섬유 손상 억제 활성을 나타냄을 확인하여, 자연동 추출물이 주름 개선 활성을 가짐을 알 수 있었다(도 6).
본 발명에서 사용된 용어, "피부 노화"는 피부의 탄력 감소, 윤기 감소, 주름 생성, 재생력 약화 또는 심한 건조 등의 증상이 나타나는 것으로, 시간의 흐름 또는 외부 환경 등에 의해 유발될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 피부 노화는 광노화인 것일 수 있다.
상기 광노화는 태양광선의 자외선에 반복적이거나 장기간 노출시 피부의 탄력 및 수분이 감소되고 주름이 형성되는 등 피부손상이 일어나는 현상을 의미한다.
본 발명의 일 실시예에서, 인간 Hs27 세포 및 인간 HaCat 세포에 자연동 추출물의 첨가한 뒤 UV-B를 조사한 경우, UV-B만 조사한 경우와 비교하여 세포 생존율이 증가함을 확인하여, 자연동 추출물이 광노화를 억제하거나 광노화로부터 보호하는 효과를 가짐을 알 수 있었다(도 4).
본 발명에서 사용되는 용어, "개선"은 본 발명의 조성물을 이용하여 멜라닌의 피부 침착, 피부 노화 또는 주름의 증상을 억제 또는 저해하거나, 이미 나타난 멜라닌의 피부 침착, 피부 노화 또는 주름의 증상을 완화시키는 것을 말한다.
본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 외용 연고, 크림, 폼, 영양 화장수, 유연 화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업 베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린 크림, 선 오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면 활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군에서 선택되는 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 상기 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 화장료 조성물의 제형에 따라 다양하다.
본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화 아연 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로하드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제 등이 이용될 수 있으며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일 등이 이용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 비누인 경우에는, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
다른 하나의 양태로서, 자연동 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용된 용어 "자연동", "추출물", "분획물", "미백", "피부 노화", "주름", "개선"은 상기에서 서술한 바와 같다.
본 발명의 약학 조성물은 단일제제로도 사용할 수 있고, 주름 또는 피부 노화에 개선 효과를 가진다고 알려진 약물을 추가로 포함하여 복합제제로 제조하여 사용할 수 있으며, 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다.
상기 "약학적으로 허용 가능한 담체"는 생물체를 자극하지 않으면서, 주입되는 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체, 부형제 또는 희석제를 의미할 수 있으며, 구체적으로, 비자연적 담체(non-naturally occuring carrier)일 수 있다. 본 발명에 사용 가능한 상기 담체의 종류는 특별히 제한되지 아니하며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되고 약학적으로 허용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다. 상기 담체의 비제한적인 예로는, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충식염수, 알부민 주사 용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.
약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 상기 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 구체적으로, 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다.
상기 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
다른 하나의 양태로서, 자연동 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용된 용어 "자연동", "추출물", "분획물", "미백", "피부 노화", "주름"은 상기에서 서술한 바와 같다.
본 발명에서 사용되는 용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람ㆍ동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함된다.
본 발명의 상기 의약외품 조성물은 바디 클렌저, 폼, 비누, 마스크, 연고제, 크림, 로션, 에센스 및 스프레이로 이루어진 군에서 선택되는 제조할 수 있으나,이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 상기 조성물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용 할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
다른 하나의 양태로서, 자연동 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법을 제공한다.
본 발명에서 사용된 용어 "자연동", "추출물", "분획물", "미백", "피부 노화", "주름"은 상기에서 서술한 바와 같다.
본 발명에서 사용되는 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 조성물 도입하는 것을 의미하며, 상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강 내 투여, 정맥 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비 내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 조성물이 항산화, 미백, 피부 노화 또는 주름 개선에 효과가 있는 특성상, 상기 조성물의 투여 경로는 피부에 도포하여 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물을 매일 투여 또는 간헐적으로 투여해도 좋고, 1일당 투여 횟수는 1회 또는 2~3회로 나누어 투여하는 것이 가능하다. 또한, 본 발명의 조성물은 항산화, 미백, 피부 노화 또는 주름 개선 위하여 단독으로, 또는 다른 약물 치료와 병용하여 사용할 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명에서 용어, "개체"는 주름 또는 피부 노화가 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 쥐, 생쥐, 가축 등의 모든 동물을 의미한다. 구체적으로, 포유동물일 수 있으며, 상기 개체는 인간을 제외한 개체일 수 있다.
또 다른 하나의 양태로서, 자연동 추출물 또는 이의 분획물의 미백 용도, 피부 노화 방지 용도 또는 피부 주름 개선 용도를 제공한다.
이하, 하기 실시예들을 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예들은 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 자연동 추출물의 제조
자연동 추출물을 제조하기 위하여, 하기와 같은 방법으로 열수 추출하였다.
구체적으로 자연동 50 g을 1L의 생수(화이트, (주)무학산청샘물, 경남 산청군)와 함께 대웅약탕기(DWP-5000M)에 넣어 1시간 동안 침적시킨 후, 3시간 동안 가열하여 자연동 추출물을 수득하였다. 상기 자연동 추출물을 여과망(Test sieve 106㎛ (No. 140), Retsch, Germany)으로 여과한 후, 초저온냉동고에 넣어 냉동시킨 후 동결건조하여 자연동 추출물 시료를 제조하였다.
실시예 2. 자연동 추출물의 미백 활성 측정
자연동 추출물의 미백 활성을 측정하기 위하여, 자연동 추출물의 티로시나아제(tyrosinase) 저해 활성을 확인하였다.
구체적으로 자연동 추출물의 최종농도가 0.5, 1.25, 2.5, 5 및 12.5 중량% 가 되도록 PBS로 희석하였고, 3000 rpm으로 5분간 원심분리한 후 얻은 상등액을 취하였다. 상기 상등액 50 ㎕를 0.2 M 인산나트륨 용액(sodium phosphate buffer, pH 6.8) 10 ㎕, 10 mM L-티로신 50 ㎕ 및 버섯 티로시나아제(1000 U/mL) 40 ㎕을 혼합한 후, 37 ℃에서 10분 동안 반응시켰다. 반응시킨 후 ELISA 리더기를 이용하여 510 nm에서 흡광도를 측정한 후 하기 수학식을 이용하여 티로시나아제 저해활성(%)을 산출하였다;
티로시나아제 저해 활성(%) = {1-(시료첨가군의 흡광도/무첨가군의 흡광도)} X 100
이때, 무첨가군은 자연동 추출물 상등액 대신 PBS를 사용하였고, 양성대조군으로는 미백활성이 잘 알려져 있는 아스코르브산(ascorbic acid)을 사용하였다.
실시예 농도(㎍/mL) 티로시나아제 저해 활성(%)
아스코르브산 0.25 98.01
자연동 추출물 상등액 0.5 22.04
1.25 28.68
2.5 39.62
5 94.45
12.5 95.63
실험결과, 농도의존적으로 자연동 추출물 상등액의 티로시나아제 저해 활성이 증가함을 확인하였다(도 1). 특히, 자연동 추출물 상등액의 농도가 5 ㎍/mL 이상인 경우는 양성대조군과 유사하게 90% 이상의 높은 티로시나아제 저해 활성을 나타냄을 확인하였다(도 1 및 표 1).
따라서, 자연동 추출물의 티로시나아제 저해 활성을 통해 자연동 추출물이 미백 활성을 가짐을 알 수 있었다.
실시예 3. 자연동 추출물의 주름 개선 활성 측정
자연동 추출물의 주름 개선 활성을 측정하기 위하여, 자연동 추출물의 엘라스타제(elastase) 저해 활성을 확인하였다.
구체적으로, 0.2 M Tris-Cl 용액(pH 8.0)을 사용하여 자연동 추출물의 최종농도가 0.4, 4, 20 및 40 중량%가 되도록 희석하였다. 상기 다양한 농도로 희석된 자연동 추출물 100 ㎕를 기질용액 100 ㎕ 및 효소용액 50 ㎕와 혼합한 후 37 ℃에서 30분 동안 반응시켰다. 이때, 상기 기질용액은 50 Mm Tris-Cl 용액(pH 8.6) 1 mL에 엘라스타제(elastase) 기질인 50 mM N-숙시닐-(Ala)3-p-나이트로아닐라이드(N-succinyl-(Ala)3-pnitroanilide) 5 ㎕를 넣어 제조하였다. 또한, 상기 효소용액은 50 mM Tris-Cl 용액(pH 8.6)을 사용하여 돼지 췌장 엘라스타제(porcrine pancreatic elastase, PPE)가 0.6 units/mL 농도가 되도록 로 희석하여 제조하였다.
다음으로, 상기 반응물을 ELISA 리더기를 이용하여 410 nm에서 흡광도를 측정한 후 하기 수학식을 이용하여 엘라스타제 저해 활성(%)을 산출하였다;
엘라스타제 저해 활성(%) = {1-(시료첨가군의 흡광도/무첨가군의 흡광도)} X 100.
이때, 무첨가군은 자연동 추출물 대신 증류수를 사용하였고, 양성대조군으로는 아데노신(adenosine)을 사용하였다.
실험결과, 농도의존적으로 자연동 추출물의 엘라스타제 저해 활성이 증가함을 확인하였다. 특히, 자연동 추출물의 농도가 40 ㎍/mL 이상인 경우는 양성대조군과 유사하게 90% 이상의 높은 엘라스타제 저해 활성을 나타냄을 확인하였다(도 2).
따라서, 자연동 추출물의 엘라스타제 저해 활성을 통해 자연동 추출물이 주름 개선 활성을 가짐을 알 수 있었다.
실시예 4. 자연동 추출물의 항산화 활성 측정
자연동 추출물의 항산화 활성을 측정하기 위하여, 1,1-디페닐-2-피크릴-히드라질(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)에 대한 전자 공여 활성을 통해 자유라디컬 소거활성을 확인하였다.
구체적으로 메탄올을 사용하여 자연동 추출물이 100 ㎍/mL의 농도가 되도록 희석하였다. 상기 희석한 자연동 추출물 150 ㎕은 메탄올을 사용하여 0.4 mM로 녹인 DPPH 용액 150 ㎕와 함께 각각 96 웰 플레이트에 분주한 후 상온에서 30분동안 반응시켰다. 다음으로, 상기 반응물을 ELISA 리더기를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정한 후 하기 수학식을 이용하여 DPPH 자유라디칼 소거활성(%)을 산출하였다;
DPPH 자유라디칼 소거 활성(%) = {1-(시료첨가군의 흡광도/무첨가군의 흡광도)} × 100
이때, 무첨가군은 자연동 추출물 대신 증류수를 사용하였고, 양성대조군으로 아스코르브산을 사용하였다.
실험결과, 자연동 추출물을 첨가한 경우, 자연동 추출물을 첨가하지 않은 경우에 비해 우수한 DPPH 자유라디칼 소거활성을 나타냄을 확인하였다. 구체적으로, 100 ug/mL 농도의 자연동 추출물 첨가군이 양성대조군과 유사하게 80% 이상의 높은 DPPH 자유라디칼 소거활성을 나타냄을 확인하였다(도 3).
따라서, 자연동 추출물의 높은 DPPH 자유라디칼 소거 활성을 통해 자연동 추출물이 항산화 활성을 가짐을 알 수 있었다.
실시예 5. 자연동 추출물의 광노화 억제 또는 보호효과
자연동 추출물의 광노화 억제 또는 보호 효과를 측정하기 위하여, UV-B 조사로 유도되는 세포사멸에 대한 자연동 추출물의 억제 또는 보호효과를 확인하였다.
구체적으로, 인간 섬유아세포인 Hs27 및 인간 피부각질세포인 HaCat 세포는 5 % CO2, 37 ℃ 및 95 % 이상의 습도를 유지한 배양기에서 10 % heat-inactivated fetal bovine serum, 100 ㎍/mL 스트렙토마이신 및 100 unit/mL 페니실린을 포함하는 DMEM(Dulbeccos modified Eagle's medium) 배지에서 배양하였다. 상기 인간 Hs27 및 HaCat 세포에 자연동 추출물을 10 ㎍/mL의 농도로 처리하고 2시간 후 인산완충식염수로 한번 씻고 UV-B 8 mJ/cm2에 노출시켰다. 다음으로, 상기 세포들을 추가적으로 37 ℃에서 24시간 동안 배양시킨 후, MTT 분석법을 이용하여 세포 생존율을 측정하였다.
실험결과, 인간 Hs27 세포에 UV-B만 조사한 경우, 100 % 이하로 세포 생존율이 감소한 반면, 자연동 추출물을 처리한 뒤 UV-B를 조사한 경우, 모든 농도에서100 % 이상으로 세포 생존율이 증가함을 확인하였다(도 4). 또한, 인간 HaCaT 세포에 UV-B만 조사한 경우, 100 % 이하로 세포 생존율이 감소한 반면, 자연동 추출물을 처리한 뒤 UV-B를 조사한 경우, 세포 생존율이 농도의존적으로 증가함을 확인하였다(도 5).
따라서, 자연동 추출물이 UV-B가 조사된 인간 Hs27 세포 및 HaCat 세포의 세포 생존율을 증가시키므로, 자연동 추출물이 광노화 억제 또는 보호 효과를 나타냄을 알 수 있었다.
실시예 6. 자연동 추출물의 인공피부에서의 주름 저해 활성 측정
자연동 추출물의 광노화에 따른 주름 저해활성을 인공피부(3D human skin)에서 평가하였다. 구체적으로, 자연동 열수 추출물을 최종농도가 50, 100 중량% 농도가 되도록 인공피부에 1시간 전 처리한 뒤 UVB를 50mJ/cm2조사하였다. 그 다음 5 % CO2, 37 ℃ 및 95 % 이상의 습도를 유지한 배양기에서 2일 동안 배양 시킨 후 인공피부를 잘라 4% 파라포름알데히드(paraformaldehyde)에서 고정하고 조직 처리 과정을 거쳐 파라핀 블록으로 제작하였다. 파라핀 블록은 5μm의 두께로 절단하여 슬라이드에 부착 시킨 뒤 마손 삼색염색법(masson Trichrome stain)으로 염색하였다. 조직염색을 통하여 푸른색으로 염색된 콜라겐 섬유를 통하여 주름 저해 활성을 평가 하였다. 대조군으로는 아데노신과 아스코르브산를 사용하였다.
실험결과, 인공피부에 UV-B만 조사한 경우, 콜라겐 섬유가 크게 감소한 반면, 자연동 추출물을 처리한 뒤 UV-B를 조사한 경우, 농도 의존적으로 콜라겐 섬유가 증가하였으며, 특히 자연동 100㎍/mL 처리군의 경우, UV-B를 조사하지 않은 대조군 및 아스코르브산 100㎍/mL 처리 양성 대조군과 유사한 수준의 콜라겐 섬유량을 확인하였다 (도 6).
따라서, 자연동 추출물이 UV-B가 조사된 인공피부의 콜라겐 섬유량을 증가시키므로, 자연동 추출물이 주름저해 활성을 나타냄을 알 수 있었다.
실시예 7. 자연동 추출물의 인공피부에서의 미백 활성 측정
자연동 추출물의 미백효과를 인공피부(3D human skin)에서 평가하였다. 구체적으로, 자연동 열수 추출물을 최종농도가 50, 100 중량% 농도가 되도록 멜라닌이 포함된 인공피부에 처리한 뒤 7일 동안 5 % CO2, 37 ℃ 및 95 % 이상의 습도를 유지한 배양기에서 배양시킨 후 현미경으로 관찰하여 멜라닌 생성 억제 정도를 확인하였다. 대조군으로는 아스코르브산을 사용하였다.
실험결과, 자연동 추출물 투여군은 음성대조군에 비해 멜라닌이 감소한 것을 확인하였으며, 특히 자연동 100㎍/mL 처리군의 경우, 양성대조군인 아스코르브산 처리군보다도 멜라닌이 감소한 것을 확인하였다 (도 7).
따라서, 자연동 추출물이 인공피부의 멜라닌 생성량을 감소시키므로, 자연동 추출물이 미백 활성을 나타냄을 알 수 있었다.
본 명세서는 본 발명의 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자이면 충분히 인식하고 유추할 수 있는 내용은 그 상세한 기재를 생략하였으며, 본 명세서에 기재된 구체적인 예시들 이외에 본 발명의 기술적 사상이나 필수적 구성을 변경하지 않는 범위내에서 보다 다양한 변형이 가능하다. 따라서 본 발명은 본 명세서에서 구체적으로 설명하고 예시한 것과 다른 방식으로 실시될 수 있으며, 이는 본 발명의 기술 분야에 통상의 지식을 가진 자이면 이해할 수 있는 사항이다.

Claims (14)

  1. 자연동 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 및 이들의 혼합용매로 구성되는 군으로부터 선택되는 용매로 추출하여 제조되는 것인, 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 열수 추출물인 것인, 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 전체 조성물 대비 0.0001 내지 10 중량%를 포함하는 것인, 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 항산화 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 것인, 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 티로시나아제(tyrosinase)의 활성을 저해하는 것을 특징으로 하는 것인, 화장료 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 엘라스타제(elastase)의 활성을 저해하는 것을 특징으로 하는 것인, 화장료 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 콜라겐 섬유 손상을 억제하는 피부 주름 개선 효능을 특징으로 하는 것인, 화장료 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 멜라닌의 생성을 억제하는 피부 미백 효능을 특징으로 하는 것인, 화장료 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 외용 연고, 크림, 폼, 영양 화장수, 유연 화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업 베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린 크림, 선 오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면 활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군에서 선택되는 제형을 갖는 것인, 화장료 조성물.
  11. 제1항에 있어서, 상기 피부 노화는 광노화인 것인, 화장료 조성물.
  12. 자연동 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 약학 조성물.
  13. 자연동 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선용 의약외품 조성물.
  14. 자연동 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 미백, 피부 노화 방지 또는 주름 개선 방법.
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