KR102543697B1 - 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents
야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 특히 세포 내 생물학적 반응을 유도하여 아토피 피부염을 포함하는 알러지성 피부 염증 개선 효과를 갖는 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 특히 세포 내 생물학적 반응을 유도하여 아토피 피부염을 포함하는 알러지성 피부 염증 개선 효과를 갖는 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
아토피피부염(Atopic Dermatitis, AD)은 유전적, 환경적, 면역학적 이상 반응과 피부장벽의 붕괴로 인해 발병되는 질환으로 건조증, 소양증, 홍반성 습진을 야기하는 만성 염증성 피부질환이다. 최근 전세계적으로 환경변화, 식습관 및 환경오염 등에 의해 유병률이 증가하고 있어 해결 수단에 대한 관심도 증가하고 있다.
아토피성 피부염의 정확한 원인은 아직까지 밝혀져 있지 않지만 질환의 진행과 관련하여 나타나는 면역학적 특성으로는 혈중 IgE 항체의 수준이 유의하게 상승하고 인터루킨-4(IL-4)의 발현 수준은 상승하는 반면 인터페론 감마(interferon gamma: IFNγ) 발현은 저하된다는 점이다(Boguniewicz and Beltrani, 2002; AbdelHamid, 2003). IgE는 두 개의 이소폼의 IgE 수용체와 순환하며 결합한다. 고 친화성 IgE 수용체(FcεRI)는 비만세포 및 염기성 백혈구의 표면에 존재하고, 저 친화성 IgE 수용체(FcεRⅡ 또는 CD23)는 림프구, 산성 백혈구, 혈소판 및 대식세포의 표면에 존재한다. 알러지성 질환의 증상 개시는 비만세포상의 IgE 수용체의 교차결합, 알러지원을 만난 후 결과적인 비만세포의 탈과립이다. 비만세포에 의해 방출된 분자는 히스타민, 헤파린, 프로테아제 및 자유 라디칼을 포함하며, 혈관확장, 장관 내 및/또는 기관지 평활근 수축, 점액분비 및 국소 단백질 분비와 같은 다양한 생물학적 효과를 매개한다. 비만세포의 초기 매개 반응에 따라 산성백혈구, 염기성 백혈구 및 림프구의 유입이 6-24시간 후에 발생한다. 이 후기 단계의 반응은 끊임없이 항원에 노출된 조직의 만성적 염증을 유도한다.
일반적으로, 알러지성 질환의 치료를 위하여 항히스타민, 스테로이드성 또는 비스테로이드성 항염증용 의약품 및 류코트리엔 길항제와 같은 의약품이 사용된다. 이러한 의약품들은 주로 증후성의 효과에 유용한데, 과도한 체액성 면역을 완화하거나 IgE 생산을 억제하는 것과 같은 알러지성 질환의 근본적인 치유에 요구되는 치료를 제공하지는 못한다. 또한, 국소 스테로이드 제제는 장기간 사용 시 피부 위축, 혈관확장, 색소 탈실 및 팽창 선조(튼살)의 발생 등의 다양한 부작용을 야기할 수 있다.
이에, 부작용이 적은 성분들을 이용하여 아토피 피부염을 치료하기 위한 연구가 필요한 상황이다.
이와 관련하여, 한국등록특허공보 제10-1844890호는 고욤나무 잎 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 예방 또는 개선용 조성물에 대해 개시하고 있으며, 한국등록특허공보 제10-1689875호는 펩타이드와 아미노산의 혼합물을 함유하는 아토피 개선용 화장료 조성물을 개시하고 있는 등 천연물 유래성분 또는 펩타이드와 같은 부작용이 적은 성분을 포함하는 화장료 조성물에 대한 많은 연구가 진행되고 있다.
그러나, 펩타이드는 화장료 조성물에 흔히 포함되는 첨가물과 혼합 시 안정성이 떨어지거나, 화장료 조성물로서 효능을 갖기 위해 피부에 침투가 용이해야 하는데 경피 투과성이 부족하여 피부에 충분한 효과를 보여주지 못하는 등 펩타이드를 화장료로 사용하기 위하여 더욱 많은 연구가 필요한 실정이다.
상기와 같은 문제를 해결하기 위해, 본 발명은 세포 내 생물학적 반응을 유도하여 아토피 피부염을 포함하는 알러지성 피부 염증 개선 효과를 갖는 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법을 제공한다.
상기 목적은 야레타에 단백질 분해효소를 처리하고 2~5시간 동안 가수분해한 후 고온에서 효소를 불활성화시키는 야레타 가수분해물 제조 단계; 상기 야레타 가수분해물에서 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 헥사펩타이드를 정제하는 헥사펩타이드 정제 단계; 상기 헥사펩타이드의 N-말단을 아세틸화하는 아세틸헥사펩타이드 제조 단계; 상기 아세틸헥사펩타이드 10~20중량%, 저분자 콜라겐 5~10중량%, 발효 으름 추출물 5~10중량%, 올리브 오일10~20중량% 및 정제수 40~70중량%를 혼합하는 혼합 조성물 제조 단계; 및 상기 혼합 조성물을 5~10℃에서 2~3일간 교반하며 숙성하는 최종 숙성 단계; 를 포함하는, 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물의 제조방법에 의해 달성될 수 있다.
구체적으로, 상기 최종 숙성 단계는 숙성 전 혼합 조성물 100중량%에 대하여 자연동 추출물 2~5중량%, 레티놀 5~10중량% 및 벌개미취 추출물 2~5중량%를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
구체적으로, 상기 발효 으름 추출물은 으름에 락토바실러스 아시도필루스 (Lactobacillus acidophilus)를 접종하여 1~2일간 발효시킨 다음 추출한 것일 수 있다.
구체적으로, 상기 헥사펩타이드 정제 단계는 헥사펩타이드 정제 후 헥사펩타이드의 C-말단에 서열번호 2의 아미노산 서열로 구성되는 단백질 유입 도메인을 결합하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
구체적으로, 상기 단백질 유입 도메인 결합 단계는 상기 헥사펩타이드와 단백질 유입 도메인 사이에 서열번호 3의 아미노산 서열로 구성되는 테트라펩타이드를 링커로 추가하여 헥사펩타이드의 C-말단에 테트라펩타이드의 N-말단이 결합하고 테트라펩타이드의 C-말단에 단백질 유입 도메인의 N-말단이 결합하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에 따른 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물은 세포 내 생물학적 반응을 유도하여 아토피 피부염을 포함하는 알러지성 피부 염증 개선 효과를 가지므로 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물로 사용이 가능하다.
도 1은 일실시예에 따른 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물의 제조방법을 설명하기 위한 흐름도이다.
이하에서, 첨부된 도면을 참조하여 실시예들을 상세하게 설명한다. 그러나, 실시예들에는 다양한 변경이 가해질 수 있어서 특허출원의 권리 범위가 이러한 실시예들에 의해 제한되거나 한정되는 것은 아니다. 실시예들에 대한 모든 변경, 균등물 내지 대체물이 권리 범위에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.
실시예들에 대한 특정한 구조적 또는 기능적 설명들은 단지 예시를 위한 목적으로 개시된 것으로서, 다양한 형태로 변경되어 실시될 수 있다. 따라서, 실시예들은 특정한 개시형태로 한정되는 것이 아니며, 본 명세서의 범위는 기술적 사상에 포함되는 변경, 균등물, 또는 대체물을 포함한다.
제1 또는 제2 등의 용어를 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 이런 용어들은 하나의 구성요소를 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 해석되어야 한다. 예를 들어, 제1 구성요소는 제2 구성요소로 명명될 수 있고, 유사하게 제2 구성요소는 제1 구성요소로도 명명될 수 있다.
어떤 구성요소가 다른 구성요소에 "연결되어" 있다고 언급된 때에는, 그 다른 구성요소에 직접적으로 연결되어 있거나 또는 접속되어 있을 수도 있지만, 중간에 다른 구성요소가 존재할 수도 있다고 이해되어야 할 것이다.
실시예에서 사용한 용어는 단지 설명을 목적으로 사용된 것으로, 한정하려는 의도로 해석되어서는 안된다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 명세서에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서 상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 실시예가 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥 상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.
본 발명의 실시예들에서, 별도로 다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥 상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 발명의 실시예에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.
본 발명의 실시예를 설명하기 위한 도면에 개시된 형상, 크기, 비율, 각도, 개수 등은 예시적인 것이므로 본 발명이 도시된 사항에 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명은 생략한다. 본 명세서 상에서 언급된 '포함한다', '갖는다', '이루어진다' 등이 사용되는 경우 '~만'이 사용되지 않는 이상 다른 부분이 추가될 수 있다. 구성 요소를 단수로 표현한 경우에 특별히 명시적인 기재 사항이 없는 한 복수를 포함하는 경우를 포함한다.
구성 요소를 해석함에 있어서, 별도의 명시적 기재가 없더라도 오차 범위를 포함하는 것으로 해석한다.
도면에서 나타난 각 구성의 크기 및 두께는 설명의 편의를 위해 도시된 것이며, 본 발명이 도시된 구성의 크기 및 두께에 반드시 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 여러 실시예들의 각각 특징들이 부분적으로 또는 전체적으로 서로 결합 또는 조합 가능하며, 당업자가 충분히 이해할 수 있듯이 기술적으로 다양한 연동 및 구동이 가능하며, 각 실시예들이 서로에 대하여 독립적으로 실시 가능할 수도 있고 연관 관계로 함께 실시 가능할 수도 있다.
본원의 일 측면은, 야레타에 단백질 분해효소를 처리하고 2~5시간 동안 가수분해한 후 고온에서 효소를 불활성화시키는 야레타 가수분해물 제조 단계; 상기 야레타 가수분해물에서 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 헥사펩타이드를 정제하는 헥사펩타이드 정제 단계; 상기 헥사펩타이드의 N-말단을 아세틸화하는 아세틸헥사펩타이드 제조 단계; 상기 아세틸헥사펩타이드 10~20중량%, 저분자 콜라겐 5~10중량%, 발효 으름 추출물 5~10중량%, 올리브 오일10~20중량% 및 정제수 40~70중량%를 혼합하는 혼합 조성물 제조 단계; 및 상기 혼합 조성물을 5~10℃에서 2~3일간 교반하며 숙성하는 최종 숙성 단계; 를 포함하는, 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.
이하, 도 1을 통해 본 발명의 일 실시예에 따른 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물의 제조방법을 설명할 수 있다.
먼저, 야레타에 단백질 분해효소를 처리하고 2~5시간 동안 가수분해한 후 고온에서 효소를 불활성화시켜 야레타 가수분해물을 제조한다.
상기 야레타 (Yareta, Azorella compacta)는 미나리과의 고산식물로 주로 남미의 고산지대에 서식하는 다년생식물이다. 영양분이 적은 고산지대에서 매우 느리게 자라는 특징을 가지며 복통에 효과가 있어 원주민들에게 약재로 사용되었다고 알려져 있다.
다음으로, 상기 야레타 가수분해물에서 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 헥사펩타이드를 정제한다.
상기 아미노산은 단백질을 구성하는 기본 성분들을 의미하며, 조직의 성상 및 유지에 관여하고 호르몬과 효소, 항체 등의 주요 구성성분이 된다.
상기 펩타이드는 아미노산이 2개 이상 펩티드 결합으로 연결된 구조물을 의미하며 상기한 호르몬, 효소 및 항체 등이 펩타이드로 구성될 수 있다. 주로 아미노산이 2~50개 정도 결합된 구조를 펩타이드라 하고, 50개 이상의 아미노산이 결합된 구조를 단백질이라 한다. 아미노산의 결합 개수에 따라 디(di-), 트리(tri-), 펜타(penta-) 등의 어미를 붙이며, 결합 아미노산 수가 2~10개인 것을 올리고펩타이드(oilgopeptide) 그리고 약 10~50개인 것을 폴리펩타이드(polypeptide)라 칭한다.
일 실시예에 있어서, 상기 헥사펩타이드 정제 단계는 헥사펩타이드 정제 후 헥사펩타이드의 C-말단에 서열번호 2의 아미노산 서열로 구성되는 단백질 유입 도메인을 결합하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
상기 단백질 유입 도메인 (Protein transduction domain)은 단백질 전달 도메인이라고도 하며, 단백질 혹은 유전자등의 큰 물질을 세포내로 이동시키는 역할을 한다.
본 발명에서 상기 단백질 유입 도메인은 세포 내 생물학적 반응을 유도하여 아토피 피부염과 같은 알러지성 피부 염증 개선 효과를 갖는 헥사펩타이드에 결합되어 헥사펩타이드의 세포 투과성을 높이는 효과를 주는 것일 수 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 단백질 유입 도메인 결합 단계는 상기 헥사펩타이드와 단백질 유입 도메인 사이에 서열번호 3의 아미노산 서열로 구성되는 테트라펩타이드를 링커로 추가하여 헥사펩타이드의 C-말단에 테트라펩타이드의 N-말단이 결합하고 테트라펩타이드의 C-말단에 단백질 유입 도메인의 N-말단이 결합하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에서 상기 테트라펩타이드는 헥사펩타이드와 단백질 유입 도메인의 사이에 결합하여 헥사펩타이드와 단백질 유입 도메인의 기능을 저해하지 않는 동시에 결합 안정성을 높이는 것일 수 있다.
다음으로, 상기 투과성 향상 헥사펩타이드의 N-말단을 아세틸화하여 아세틸 헥사펩타이드를 제조한다
상기 아세틸화는 펩타이드의 N-말단의 아미노기(H2N-)에 아세틸기(CH3CO-)가 결합하는 것을 의미하며, 단백질 분해효소에 의해 펩타이드가 분해되는 것을 방지할 수 있다.
다음으로, 상기 아세틸 헥사펩타이드 10~20중량%, 저분자 콜라겐 5~10중량%, 발효 으름 추출물 5~10중량%, 올리브 오일10~20중량% 및 정제수 40~70중량%를 혼합하여 혼합 조성물을 제조한다.
상기 콜라겐은 대부분의 동물, 특히 포유동물에서 많이 발견되는 섬유 단백질로, 피부와 연골 등 체내의 모든 결합조직의 대부분을 차지한다. 콜라겐은 폴리펩타이드 세 분자가 서로 삼중나선으로 꼬인 밧줄과 같은 형태를 이루고 있다. 각각의 폴리펩타이드 사슬은 글라이신과 프롤린이 서로 번갈아가면서 배치되고 중간에 여러 다른 아미노산이 군데군데 삽입되어 있다. 대표적으로 라이신과 프롤린에서 각각 유도된 하이드록시라이신과 하이드록시프롤린이 있다. 이 둘은 수소결합을 통해 사슬끼리 서로 단단히 연결되는 4차 구조 형성에 중요한 역할을 한다. 이러한 구조 덕분에 콜라겐은 매우 강하여 장력에 잘 견디고 장기간 분해되지 않으나, 섭씨 약 37도 이상의 온도에서는 폴리펩타이드 간 연결이 약해지는 경향을 보인다. 특히, 저분자 콜라겐은 콜라겐 중에서도 분자량이 적은 콜라겐을 의미하며, 크기가 적어 세포 투과성이 높아 피부미용과 관련된 분야에서 주로 사용되고 있다.
상기 으름은 으름덩굴과의 덩굴식물인 으름덩굴의 열매를 의미하며 진통, 해열, 이뇨 작용에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 발효 으름 추출물은 으름에 락토바실러스 아시도필루스 (Lactobacillus acidophilus)를 접종하여 1~2일간 발효시킨 다음 추출한 것일 수 있다.
상기 올리브 오일은 올리브 열매의 기름을 추출한 것을 의미하며 식용 외에도 화장품, 약품, 비누 등의 원료로도 이용된다. 올리브 오일은 항암, 항염, 심혈관질환 개선 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
일 실시예에 있어서, 상기 정제수는 증류수에 수소를 주입하여 제조한 수소수를 활성탄, 토르말린 분말, 편백나무칩 및 유채꽃이 4: 3: 2: 1 중량비로 혼합된 여과체에 2~3회 반복 여과시켜 제조한 것일 수 있다.
상기 활성탄은 흡착성이 강하고, 대부분의 구성물질이 탄소질로 된 물질을 의미하며, 흡착제로 기체나 습기를 흡수시키거나, 또는 탈색제로 주로 사용된다.
상기 토르말린 분말은 전기석이라고도 불리는 육방정계의 결정형 광물인 토르말린을 분말화한 것을 의미하며, 화학성분은 알루미늄, 철, 마그네슘, 나트륨, 리튬 또는 칼륨과 같은 원소들이 혼합된 결정질 붕소 규산염 광물로 이루어져 있다.
상기 편백나무칩은 겉씨식물 구과목 측백나무과의 상록교목인 편백나무를 작은 칩 형태의 크기로 분쇄한 것을 의미한다. 편백나무에는 피톤치드라는 천연 항균물질이 많이 함유되어 있어 살균 작용이 뛰어나다.
상기 유채꽃은 십자화목 배추과 배추속의 식물인 유채의 꽃을 의미하며, 유채꽃은 몸에 쌓인 노폐물을 배출하고 연소를 촉진시켜서 다이어트에 도움을 주고 β 카로틴이 풍부하게 포함되어 있어 항암 및 면역 개선효과가 있는 것으로 알려져 있다.
마지막으로, 상기 혼합 조성물을 5~10℃에서 2~3일간 교반하며 숙성하는 최종 숙성과정을 거쳐 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물을 제조한다.
일 실시예에 있어서, 상기 최종 숙성 단계는 숙성 전 혼합 조성물 100중량%에 대하여 자연동 추출물 2~5중량%, 레티놀 5~10중량% 및 벌개미취 추출물 2~5중량%를 추가로 포함하는 것일 수 있다.
상기 자연동은 산골이라고 불리기도 하며, 광물성 한약재로 널리 알려져 있다. 상기 자연동은 주로 골절 및 뼈와 관련한 효과에 대해서 많이 알려져 있다.
상기 레티놀은 지용성 비타민인 비타민 A의 기본 분자형태로, 시각색소로 작용하는 레티날(retinal), 세포 분화를 조절하는 세포 내 신호전달물질인 레티노산(retinoic acid) 등 산화/환원을 통해 다양한 형태로 존재할 수 있다.
상기 벌개미취는 국화과에 속하는 다년생 초본으로 빛이 잘 들고 물기가 많은 습지 등에서 자라며, 한국의 경기도 이남 및 제주도에서 자생하는 한국의 특산식물이다. 주로 원예용 또는 지피용으로 사용되는 경우가 많으며, 연한 잎을 삶아 나물로 먹거나, 뿌리를 달여 가래 및 천식에 대한 치료 용도로 사용되는 경우도 있다.
이하, 구체적인 실시예와 비교예를 통하여 본 발명의 구성 및 그에 따른 효과를 보다 상세히 설명하고자 한다. 그러나, 본 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1]
먼저, 야레타에 단백질 분해효소를 처리하고 4시간 동안 가수분해한 후 고온에서 효소를 불활성화시켜 야레타 가수분해물을 제조하였다.
다음으로, 상기 야레타 가수분해물을 20분간 원심분리한 후 상층액을 분리 및 농축한 후 크로마토그래피를 수행하여 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 헥사펩타이드를 정제하였다.
다음으로, 상기 헥사펩타이드의 N-말단을 아세틸화하여 아세틸 헥사펩타이드를 제조한 후 상기 아세틸 헥사펩타이드 15중량%, 저분자 콜라겐 10중량%, 발효 으름 추출물 5중량%, 올리브 오일15중량% 및 정제수 55중량%를 혼합하여 혼합 조성물을 제조하였다. 상기 발효 으름 추출물은 으름에 락토바실러스 아시도필루스 (Lactobacillus acidophilus)를 접종하여 2일간 발효시킨 다음 열수 추출을 통해 추출하였다. 또한, 상기 정제수는 증류수에 수소를 주입하여 제조한 수소수를 활성탄, 토르말린 분말, 편백나무칩 및 유채꽃이 4: 3: 2: 1 중량비로 혼합된 여과체에 2~3회 반복 여과시켜 제조하였다.
마지막으로, 상기 혼합 조성물을 9℃에서 3일간 교반하며 숙성시켜 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물을 제조하였다. 제조된 화장료 조성물을 실시예 1로 명명하였다.
[실시예 2]
실시예 1과 동일한 방법으로 제조하였으나, 헥사펩타이드 정제 단계에서 헥사펩타이드의 C-말단에 서열번호 3의 아미노산 서열로 구성되는 테트라펩타이드를 링커로 결합하고 상기 링커의 C-말단에 서열번호 2의 아미노산 서열로 구성되는 단백질 유입 도메인을 결합하는 단계를 추가로 포함하여 제조된 화장료 조성물을 실시예 2로 명명하였다.
[실시예 3]
실시예 1과 동일한 방법으로 제조하였으나, 최종 숙성 단계에서 숙성 전 혼합 조성물 100중량%에 대하여 자연동 추출물 2중량%, 레티놀 10중량% 및 벌개미취 추출물 2중량%를 추가로 포함하여 제조한 화장료 조성물을 실시예 3으로 명명하였다.
[비교예 1]
야레타에 단백질 분해효소를 처리하고 4시간 동안 가수분해한 후 고온에서 효소를 불활성화시켜 제조한 야레타 가수분해물을 비교예 1로 명명하였다.
[비교예 2]
실시예 1과 동일한 방법으로 제조하였으나, 상기 발효 으름 추출물을 제외하고 상기 정제수를 증류수로 대체하여 제조한 화장료 조성물을 비교예 2로 명명하였다.
[실험예 1: 히스타민 방출 억제 효과 분석]
실시예 1~3 및 비교예 1~2의 가려움증 유발의 핵심 물질인 히스타민 방출에 대한 억제 효과를 확인하기 위해 실험을 진행하였다.
자세하게는, 랫트 복강 비만세포 (RPMCs)에 각각 실시예 1~3 및 비교예 1~2의 조성물 (25-100 ㎍/㎖)을 주입한 후 37℃에서 10분간 전처리한 다음 compound 48/80 (0.5 ㎍/㎖)으로 자극하여 히스타민의 방출량을 측정하여 그 결과를 표 1에 나타내었다.
정상군 | 대조군 | 실시예 1 | 실시예 2 | 실시예 3 | 비교예 1 | 비교예 2 | |
히스타민 (㎍/ml) |
11.26 | 70.33 | 35.47 | 29.42 | 32.16 | 64.09 | 46.22 |
표 1에 나타낸 바와 같이, 아무 처리도 하지 않은 정상군의 히스타민 방출량에 비해 compound 48/80을 처리한 대조군은 매우 높은 히스타민 방출량을 나타내었다. 그러나 실시예 1~3 및 비교예 1~2를 처리한 실험군은 대조군과 비교하여 감소된 히스타민 방출량을 보여주었고, 특히 실시예 1~3은 히스타민 방출량의 감소폭이 매우 큰 것을 확인하여 본 발명에 따른 화장료 조성물이 히스타민 방출억제 효과를 가지는, 알레르기성 피부질환에 적용될 수 있음을 확인하였다.
[실험예 2: TNF-α 생성 억제 효과 분석]
실시예 1~3 및 비교예 1~2의 전염증성 사이토카인인 TNF-α의 생성 억제 효과를 확인하기 위해 실험을 진행하였다.
자세하게는, 활성화된 랫트 복강 비만세포 (RPMCs)에 각각 실시예 1~3 및 비교예 1~2의 조성물 (25-100 ㎍/㎖)을 2시간 동안 전처리한 후 PMA (30 ng/㎖)와 A23187 (10 μM)을 동시에 처리하고 12시간 후 배양액에 축적된 TNF-α양을 측정하여 그 결과를 표 2에 나타내었다.
정상군 | 대조군 | 실시예 1 | 실시예 2 | 실시예 3 | 비교예 1 | 비교예 2 | |
TNF-α (pg/ml) | 51.90 | 640.44 | 428.74 | 401.25 | 433.31 | 590.07 | 515.40 |
표 2에 나타낸 바와 같이, 대조군의 TNF-α 축적량이 매우 높았으나 실시예 1~3 및 비교예 1~2에서 모두 유의한 수준의 TNF-α 생성 억제 효과를 확인할 수 있었으며, 특히 실시예 1~3은 TNF-α 생성 억제 효과가 매우 우수함을 확인할 수 있었다. 따라서 본 발명에 따른 화장료 조성물이 TNF-α를 효과적으로 제어할 수 있으므로 염증반응을 제어할 수 있는 조성물이라 판단할 수 있다.
[실험예 3: 가려움 억제 효과 분석]
실시예 1~3 및 비교예 1~2의 피부 가려움증 억제에 미치는 영향을 알아보기 위해 실험을 진행하였다.
자세하게는, 실시예 1~3 및 비교예 1~2의 조성물 각각 10 mg/kg을 Balb/c 마우스에 경구투여하고 1시간 후에 가려움 유발물질 compound 48/80을 마우스의 등 양쪽 어깨 사이 높이에 피하주사한 후 마우스가 긁는 횟수를 카운트하여 그 결과를 표 3에 나타내었다.
정상군 | 대조군 | 실시예 1 | 실시예 2 | 실시예 3 | 비교예 1 | 비교예 2 | |
긁는 횟수(회/60분) | 28.1 | 284.2 | 116.0 | 109.4 | 115.1 | 194.8 | 178.8 |
표 3에 나타낸 바와 같이, 대조군과 비교하여 실시예 1~3 및 비교예 1~2 모두 긁는 횟수가 감소하였으며, 특히 실시예 1~3은 긁는 횟수가 절반 이하로 감소하여 가려움증을 억제하는 효과가 우수함을 확인하였다. 따라서 본 발명에 따른 화장료 조성물이 아토피 피부질환과 같은 피부 가려움증을 완화할 수 있을 것으로 판단된다.
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HEXA-PEPTIDE FROM YARETA AND MANUFACTURING METHODS THEREOF
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<212> PRT
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Met Gly Ser Gly Val Ala
1 5
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Protein transduction domain
<400> 2
Gly Lys Arg Lys Arg Arg Ile Arg Arg Lys
1 5 10
<210> 3
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Tetrapeptide linker
<400> 3
Gly Ser Ile Gly
1
Claims (3)
- 야레타에 단백질 분해효소를 처리하고 2~5시간 동안 가수분해한 후 고온에서 효소를 불활성화시키는 야레타 가수분해물 제조 단계;
상기 야레타 가수분해물에서 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 헥사펩타이드를 정제하는 헥사펩타이드 정제 단계;
상기 헥사펩타이드의 N-말단을 아세틸화하는 아세틸 헥사펩타이드 제조 단계;
상기 아세틸헥사펩타이드 10~20중량%, 저분자 콜라겐 5~10중량%, 발효 으름 추출물 5~10중량%, 올리브 오일10~20중량% 및 정제수 40~70중량%를 혼합하는 혼합 조성물 제조 단계; 및
상기 혼합 조성물을 5~10℃에서 2~3일간 교반하며 숙성하는 최종 숙성 단계; 를 포함하는, 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물의 제조방법.
- 제 1항에 있어서,
상기 최종 숙성 단계는 숙성 전 혼합 조성물 100중량%에 대하여 자연동 추출물 2~5중량%, 레티놀 5~10중량% 및 벌개미취 추출물 2~5중량%를 추가로 포함하는 것인, 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물의 제조방법.
- 제 1항에 있어서,
상기 발효 으름 추출물은 으름에 락토바실러스 아시도필루스 (Lactobacillus acidophilus)를 접종하여 1~2일간 발효시킨 다음 추출한 것인, 야레타 유래 헥사펩타이드를 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물의 제조방법.
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2022
- 2022-05-25 KR KR1020220064276A patent/KR102543697B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (5)
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