CN110403878A - 含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物的化妆品组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物及其制备方法。根据本发明，提供了含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物，其中，所述化妆品组合物含有双色高粱叶/茎的发酵滤液和发酵滤液萃取物，所述发酵滤液通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵而获得。基于上述配置，获得了发酵滤液或发酵滤液萃取物，所述发酵滤液通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵而获得，所述发酵滤液萃取物从所述发酵滤液萃取而来，从而具有皮肤美白和抗皱的出色效果，而不表现出对皮肤的副作用。

Description

含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物的化妆品 组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及含有双色高粱(sorghum bicolor)叶/茎的发酵滤液(fermentedfiltrate)或发酵滤液萃取物(fermented filtrate extract)作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物及其制备方法；更具体而言，涉及含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物及其制备方法，其中，获得了发酵滤液或发酵滤液萃取物，所述发酵滤液通过用曲霉(aspergillus)对双色高粱叶/茎进行发酵而获得，所述发酵滤液萃取物从所述发酵滤液萃取而来，从而具有皮肤美白和抗皱的出色效果，而不表现出对皮肤的副作用。
此外，本发明涉及含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物及其制备方法，其中，提供了含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的化妆品组合物，从而通过成纤维细胞增殖的促进、TIMP-1和弹性蛋白原(tropoelastin)的基因表达、MMP-1的基因活性抑制、酪氨酸酶的活性抑制以及黑色素的合成抑制获得皮肤美白和抗皱的出色效果。
背景技术
化妆品的功能在于防止或阻遏皮肤老化(例如由于外部因素(如水分、细尘、污染物、压力和紫外线)和内部因素(如免疫细胞功能下降和细胞活性下降)导致的自由基、活性氧、过氧化物等引起的蛋白、核酸和细胞膜脂质的破坏)以及清洁和美学功能。
此外，已不断开发出具有美白、抗皮肤皱纹、阻遏皮肤皱纹和紫外线屏蔽功能的化妆品来满足消费者对高功能化妆品的需求。特别地，在化妆品中，用于抗皮肤皱纹和阻遏皮肤皱纹的产品已经受到希望保持皮肤年轻的消费者的极大关注。
通常，由于因内部或外部环境因素造成的皮肤颜色和光泽的损失、水分流失和弹性下降，人的皮肤会变得粗糙。这就是所谓的皮肤老化，是其中产生皮肤皱纹并且着色和雀斑增加的过程。
随着皮肤老化的进展，作为皮肤成分的表皮、真皮和皮下组织的厚度变薄，并且赋予皮肤弹性的细胞外基质(ECM)成分发生改变。
胶原蛋白在细胞外基质中占总皮肤干重的约70％-80％，与弹性蛋白(弹性纤维)、蛋白聚糖、葡糖胺聚糖、层粘连蛋白和纤连蛋白一起保持弹性。然而，随着变老，胶原蛋白产生能力越来越多地显著下降；并且，随着皮肤细胞中氧化的进展，皮肤失去弹性而皱纹过度形成，从而皮肤变成衰老皮肤(senile skin)。
童年时期体内有很多胶原蛋白，从而整个身体都很光滑。然而，随着变老，胶原蛋白变得不足或胶原蛋白质量降低，从而皮肤失去弹性并产生皱纹。皮肤皱纹受多种因素影响，如皮肤的水分含量、胶原蛋白含量和免疫功能，并且，已知胶原蛋白含量在上述因素中的影响最大。
胶原蛋白分子在成纤维细胞中形成，其在分泌出细胞后形成三股螺旋结构。已知胶原蛋白的主要功能是保持皮肤的机械刚性、增强结缔组织的抵抗力、增强组织的结合强度、支持细胞粘附、诱导细胞分裂和分化等(Vander Rest等，1990)。
体内如胶原蛋白等细胞外基质的合成和降解处于适当调节之下。然而，随着老化的进展，合成减少，并且促进作为降解胶原蛋白的酶的基质金属蛋白酶(MMP)的表达，从而皮肤弹性降低并产生皱纹。
此外，由于外部因素(如污染、紫外线和压力)以及胶原酶活性和自然老化导致的细胞活性降低引起的内部因素导致活性氧和自由基增加，皮肤弹性降低(Ingrid Emerit等，Free radical and aging，1992)。
基质金属蛋白酶(MMP)是一种在体内通过自然老化和暴露于紫外线而分泌的蛋白水解剂，其是一种降解细胞外基质(ECM)中的结缔组织(胶原蛋白、弹性蛋白、糖胺聚糖等)的酶。
基质金属蛋白酶(MMP)是由细胞(例如多形核中性粒细胞、巨噬细胞、成纤维细胞和骨细胞)分泌的钙和锌依赖性内肽酶，其在中性pH下起作用并使用各种细胞外基质作为底物。MMP的类型从MMP 1到MMP16不等。在MMP 1到MMP 16中，关于胶原蛋白降解而进行深入研究的基质金属蛋白酶(MMP)是MMP 1和MMP 9。
通常，在80岁时，已知胶原蛋白与20岁时相比减少了65％，使得皮肤厚度变薄，而这与皮肤皱纹产生密切相关(Arthur K.Balin等，Aging and the skin，1989)。
此外，随着近几年对皮肤老化进行的广泛研究，胶原蛋白在皮肤中的重要性获得了进一步强调。由于通过促进皮肤中胶原蛋白的合成以及抑制基质金属蛋白酶(如MMP 1和MMP 9)的活性增加了真皮基质成分(dermis matrix component)，已知可以由此预期抗老化效果，如抗氧化、抗皱、增强弹性、强化皮肤和伤口愈合。
为了获得这样的效果，通常，将胶原蛋白与化妆品混合以使其商业化。然而，由于这些化妆品将胶原蛋白施用到皮肤表面，胶原蛋白作为一种聚合物很难被经皮吸收，从而胶原蛋白的功能无法实现。
另外，最近将胶原蛋白直接注入皮肤的真皮中。然而，因为副作用的缘故，这个方案也很难指望适当的抗皮肤皱纹。
近来，人们越来越关注促进胶原蛋白合成以解决上述问题的物质，并且，已知视黄酸和动物胎盘衍生蛋白(日本未审查专利申请第8-231370号)是胶原蛋白合成促进物质。
但是，由于视黄酸不稳定，其制剂技术很复杂，并且视黄酸的使用由于安全问题(如对皮肤的刺激性和使皮肤发红)而受到限制；而采用动物胎盘衍生蛋白中的牛提取物由于疯牛病而遭到禁止，从而基本上难以期望从促进皮肤胶原蛋白合成来实现抗皮肤皱纹的效果。
因此，迫切需要开发促进胶原蛋白生成以及抑制MMP 1、MMP 9等的活性的新物质，其对于活体是安全的、易于使用、具有高且优异的制剂稳定性并具有促进胶原蛋白生成的效果；并且迫切需要开发含有上述物质的化妆品，其易于使用。
另外，黑色素是存在于地球上的深棕色色素聚合物，其通过吸收一定量的紫外线或更多来保护皮肤免受紫外线的伤害。这种黑色素是通过前列腺素、雌激素等以及日光和紫外线产生的，并且影响酪氨酸酶的酶活化。此外，酪氨酸酶活性可能导致着色或雀斑的发展。
这种黑色素具有消除有害自由基的功能，从而保护在日常生活中长时间暴露于有害因素的现代人的皮肤免受皮肤损伤。同时，由于黑色素前体引起的毒性，过度暴露可能导致皮肤上的深棕色色素沉着以及细胞坏死或死亡、皮肤老化、皮肤癌、着色、雀斑、色素沉着等。
因此，随着紫外线增加和暴露时间变长，为了防止皮肤色素沉着和皮肤老化，应该进行抑制黑色素生成的研究和开发。特别地，在现代社会中，在从天然物质中寻求可用于食品、药品和化妆品的表现出皮肤美白和抗皱效果的原料方面存在增长的趋势。
高粱(Sorghum)(双色高粱)是一种单子叶禾本目禾本科的一年生植物，具有高抗旱性，从而即使在贫瘠的土地或旱地也能自然生长，因此将高粱作为整个亚洲和非洲的重要食物来源进行种植；在韩国，高粱与大米、大麦、小麦和玉米一起作为食物资源进行种植。存在多种高粱品种，根据用途分为谷物高粱(grain sorghum)、甜高粱(sorgo)和帚高粱(broom-corn)(Chang等，2005)。关于帚高粱，其在穗上没有穗节，与壳相连的茎长度为20cm-30cm，果实仅用作种子，因为即使在脱粒时厚壳也不会剥落。在民间疗法中，高粱已被用于各种症状，如改善食欲、促进消化、维持体温、保护胃和解毒。已知高粱中含有各种活性成分，如膳食纤维、酚类化合物和单宁，而红色高粱缺乏单宁。高粱中含有的酚类化合物由类黄酮、酚酸、抗氧化剂等组成，大多数酚类化合物被称为类黄酮(Ryu HS，Kim J，KimHS.2006，Enhancing effect of sorghum bicolor L.Moench(sorghum,su su)extractson mouse spleen and macrophage cell activation.J.Korean Diet.Assoc.19:176-182.)(Chae KY，Hong JS.2006，Quality characteristics of Sulgidduk withdifferent amounts of waxy sorghum flour.Korean J Food Cookery Sci 22:363-369.,Chang HG,Park YS.2005.Effects of waxy and normal sorghum flours onsponge cake properties.Food Eng Prog 9:199-207.)(Kim KO，Kim HS，Ryu HS.2006，Effect of Sorghum bicolor L.Moench(sorghum,su-su)Water extracts on mouseimmune cell activation.J 43-13 2017-03-31Korean Diet Assoc 12:82-88.)。
因此，本发明人基于用于使皮肤美白和抗皱效力和效果最大化的发酵技术进行了研究，并发现通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵获得的发酵滤液或发酵滤液萃取物通过成纤维细胞增殖的促进、TIMP-1和弹性蛋白原的基因表达、MMP-1的基因表达抑制、酪氨酸酶的活性抑制和黑色素的合成抑制显著地显示出皮肤美白和抗皱效果，从而完成了本发明。
[现有技术文献]
[专利文献]
(专利文献0001)韩国专利第10-1203504号(2012年11月15日注册)
(专利文献0002)韩国专利第10-1452770号(2014年10月14日注册)
(专利文献0003)韩国专利第10-1702042号(2017年1月25日注册)
发明内容
本发明的一个目的是提供含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物及其制备方法，其中，获得了发酵滤液或发酵滤液萃取物，所述发酵滤液通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵而获得，所述发酵滤液萃取物从所述发酵滤液萃取而来，从而具有皮肤美白和抗皱的出色效果，而不表现出对皮肤的副作用。
另外，本发明的一个目的是提供含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物及其制备方法，其中，提供了含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的化妆品组合物，从而通过成纤维细胞增殖的促进、TIMP-1和弹性蛋白原的基因表达、MMP-1的基因活性抑制、酪氨酸酶的活性抑制以及黑色素的合成抑制获得皮肤美白和抗皱的出色效果。
本发明要实现的各种目的不限于上述目的，并且本领域技术人员可从下面的描述中清楚地理解上文没有描述的其它目的。
根据本发明，提供了一种含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物，其中，所述化妆品组合物含有双色高粱叶/茎的发酵滤液和发酵滤液萃取物，所述发酵滤液通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵而获得。
可以通过使用包括选自于由如下提取剂(extractant)所组成的组中的至少一种的提取剂来对双色高粱叶/茎进行提取：水、C1-C4无水或含水低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯和1,3-丁二醇。
基于化妆品组合物的总重量，所述化妆品组合物可包含0.01wt％-5.0wt％的双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物。
所述双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物可具有皮肤美白和抗皱效果，而不表现出对皮肤的副作用。
此外，根据本发明，可以将化妆品组合物配制成包含选自于由如下制剂所组成的组中的至少一种的制剂：溶液、悬浮液、乳液、糊剂(paste)、凝胶、霜(cream)、化妆水(lotion)、肥皂、含表面活性剂的清洁剂、油、粉状粉底、乳液粉底、蜡状粉底、润肤化妆水、滋养化妆水、滋养霜、按摩霜、精华、面膜、眼霜、洁肤霜、洁肤泡沫、洁肤水、保湿霜、发酵霜(fermentation cream)、安瓿、洗发水、护发素(conditioner)、喷雾和粉末。
另外，根据本发明，含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物的制备方法包括：步骤(S10)，获得双色高粱叶/茎的提取物；步骤(S20)，通过用曲霉菌株接种双色高粱叶/茎的提取物来获得发酵滤液；步骤(S30)，在从步骤(S20)中获得的双色高粱叶/茎的发酵滤液中除去培养的细菌后通过采用双沸萃取(double-boiling extraction)方案来获得双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物；以及步骤(S40)，通过向步骤(S20)中获得的双色高粱叶/茎的发酵滤液或步骤(S30)中获得的双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物中添加稳定剂、维生素、着色剂、色素和芳香剂来获得化妆品组合物。
基于化妆品组合物的总重量，所述化妆品组合物可包含0.01wt％-5.0wt％的步骤(S20)中获得的双色高粱叶/茎的发酵滤液或步骤(S30)中获得的双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物。
在步骤(S10)中，可以通过如下方式获得提取物：用纯净水洗涤双色高粱叶/茎；使双色高粱叶/茎干燥；将双色高粱叶/茎细切为2cm-5cm；调节浓度来提供50％(w/w)的乙醇水溶液，对应于双色高粱叶/茎重量的20-40倍；在通过借助装配有冷却冷凝器的提取器在50℃-70℃的温度条件下三次进行回流双沸提取方案3小时-8小时来进行提取后，进行冷却；以及用3μm-8μm的滤纸进行过滤。
在步骤(S20)中，可以将步骤(S10)中获得的双色高粱叶/茎的提取物和曲霉菌株在需氧条件下在25℃-35℃下在发酵培养基(pH 5.0)中发酵24小时-72小时；可以在发酵后将2％的硅藻土添加到漏斗过滤器中以初步除去培养的细菌来制备滤液；以及可以通过使用滤纸对滤液进行过滤以使其具有0.2μm的大小并对滤液进行灭菌。
在步骤(S30)中，可以通过如下方式获得双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物：将乙醇添加到步骤(S20)中获得的双色高粱叶/茎的发酵滤液中，其中，乙醇的量为双色高粱叶/茎的发酵滤液的2-3倍；在60℃-80℃的温度条件下进行回流双沸萃取2小时-3小时；将2％的硅藻土添加到漏斗过滤器中以初步除去培养的细菌来制备滤液；通过使用滤纸对滤液进行过滤以使其具有0.2μm的大小；浓缩滤液；以及对滤液进行灭菌。
其它实施方式的细节包含在本发明的详细描述中。
根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物及其制备方法，获得了发酵滤液或发酵滤液萃取物，所述发酵滤液通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵而获得，所述发酵滤液萃取物从所述发酵滤液萃取而来，从而具有皮肤美白和抗皱的出色效果，而不表现出对皮肤的副作用。
此外，根据含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物，提供了含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的化妆品组合物，从而通过成纤维细胞增殖的促进、TIMP-1和弹性蛋白原的基因表达、MMP-1的基因活性抑制、酪氨酸酶的活性抑制以及黑色素的合成抑制获得皮肤美白和抗皱的效果。
应当理解的是，本发明的技术构思的实施方式可以提供上文没有详细描述的各种其它效果。
附图说明
图1是用于解释根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物的制备方法的流程图。
图2a-图2e是显示使用了根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液的化妆品组合物测量眼部皱纹1(R1-R5)的结果的视图。
图3是显示使用了根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液的化妆品组合物测量眼部皱纹2的结果的视图。
图4是显示使用了根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液的化妆品组合物测量皮肤亮度的结果的视图。
图5是显示使用了根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液的化妆品组合物测量皮肤黑色素的结果的视图。
图6是显示根据本发明的化妆品组合物的皱纹改善状态的照片。
图7是显示根据本发明的化妆品组合物的皮肤美白改善状态的照片。
具体实施方式
参考以下实施方式的详细描述，将更容易理解本发明的优点和特征以及实现所述优点和特征的方法。然而，本发明可以通过各种其它形式实施，并且不应该被解释为限于本文所阐述的实施方式。提供本文公开的实施方式，从而使得本发明的公开将是彻底和完整的，并将把本发明的范围充分地传达给本领域技术人员。
说明书中使用的术语仅旨在描述某些实施方式，并且决不应限制本发明。除非另有明确使用，否则单数形式的表述包括复数形式的含义。
除非另外定义，否则本文使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。在综合词典中定义的任何术语应被解释为具有相关领域的上下文中的相同含义，并且，除非明确地另外定义，否则不应被解释为具有理想主义或过度形式主义的含义。
下文中，将详细描述根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物。
本文使用的术语“皮肤美白”总体上是指增加皮肤(所述皮肤由于过量的色素(如黑色素)而具有降低的亮度)亮度或者将皮肤亮度保持在一定水平的方案，并且所述皮肤的亮度通过上述方案而得以增加。
此外，本文使用的术语“皮肤皱纹”是指由于皮肤弱化而在皮肤上形成的细纹，其可由遗传因素、皮肤真皮中存在的胶原蛋白和弹性蛋白减少、外部环境等引起。
另外，本文使用的术语“抗皮肤皱纹/抗皱”是指阻遏或抑制皮肤上皱纹的产生或者减轻已经产生的皱纹。
本发明提供了一种含有双色高粱叶/茎的发酵滤液的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物，所述发酵滤液通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵而获得。
此外，本发明提供了一种含有双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物，所述发酵滤液萃取物从通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵而获得的双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取而来。
在本发明中，仅使用双色高粱叶/茎来使皮肤美白和抗皮肤皱纹的效力和效果最大化。此外，为了通过增加活性成分的皮肤吸收效率来增强皮肤美白和抗皱的效果，作为用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物，本发明使用双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物，所述发酵滤液通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵而获得，从而通过成纤维细胞增殖的促进、TIMP-1和弹性蛋白原的基因表达、MMP-1的基因活性抑制、酪氨酸酶的活性抑制以及黑色素的合成抑制而使效果最大化。
双色高粱叶/茎的干重比优选设定为使得双色高粱叶/茎中的水含量在10wt％-50wt％的范围内，并且，优选通过使用包括选自于由如下提取剂所组成的组中的至少一种的提取剂来对双色高粱叶/茎进行提取：水、C1-C4无水或含水低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯和1,3-丁二醇。
可根据本领域公知的常规方案，即在常规的温度和压力条件下，通过使用常规溶剂利用双色高粱叶/茎来制备双色高粱叶/茎的提取物。
作为实例，可以通过使用包括选自于由如下溶剂所组成的组中的至少一种的溶剂来对作为本发明组合物的活性成分的双色高粱叶/茎进行提取：水、C1-C4无水或含水低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯和1,3-丁二醇；或者，可以在通过使用上述溶剂对双色高粱叶/茎进行提取后将双色高粱叶/茎混合。
所述溶剂优选为醇，更优选为乙醇，其中，乙醇更优选为30％-70％的乙醇。提取剂的合适添加量是双色高粱叶/茎干重的10-50倍，更优选是双色高粱叶/茎干重的20-40倍，最优选是双色高粱叶/茎干重的30倍。
同时，根据本发明的通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵而获得的发酵滤液包括通过典型的精制工序获得的提取物以及通过上述提取方案获得的提取物。
例如，应解释为通过额外进行的各种精制方案(如使用具有一定分子量截止值的超滤膜进行的分离以及通过各种色谱(制备用于通过大小、电荷、疏水性或亲和力进行分离)进行的分离)而获得的部分(fractions)也包括在根据本发明的通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵而获得的发酵滤液中。
此外，根据本发明的通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵而获得的发酵滤液可包括通过额外工序(如真空蒸馏以及冷冻干燥或喷雾干燥)制备为粉末的发酵滤液。
双色高粱叶/茎的发酵滤液或者双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物是通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵而获得的发酵滤液或者从所述发酵滤液萃取而来的发酵滤液萃取物。双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物是天然安全的试剂，其通过成纤维细胞增殖的促进、TIMP-1和弹性蛋白原的基因表达、MMP-1的基因表达抑制、酪氨酸酶的活性抑制以及黑色素的合成抑制而具有皮肤美白和抗皱的出色效果，而不表现出对皮肤的副作用，并且其生产成本低。
在本发明中，通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵而获得的发酵滤液可以是浓缩液形式或干粉形式。
发酵步骤中的米曲霉(Aspergillus oryzae)NK是从制药公司获得以用于发酵的已知菌株，其是属于曲霉属的真菌。
根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物表现出优异的抗皱效果，并且在所应用的产品中表现出优异的稳定性。
此外，通过成纤维细胞增殖的促进、TIMP-1和弹性蛋白原的基因表达、MMP-1的基因表达抑制、酪氨酸酶的活性抑制以及黑色素的合成抑制而获得皮肤美白和抗皱的效果。
根据本发明的优选实施方式，基于化妆品组合物的总重量，所述化妆品组合物包含0.01wt％-5.0wt％、优选0.02wt％-2.0wt％、更优选0.03wt％-1.0wt％的发酵滤液或发酵滤液萃取物，所述发酵滤液通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵而获得，所述发酵滤液萃取物从所述发酵滤液萃取而来。
基于化妆品组合物的总重量，当双色高粱叶/茎的发酵滤液或从所述发酵滤液萃取而来的发酵滤液萃取物的量小于0.01wt％时，成纤维细胞增殖的促进、TIMP-1和弹性蛋白原的基因表达、MMP-1的基因表达抑制可能不会发生；而当双色高粱叶/茎的发酵滤液或从所述发酵滤液萃取而来的发酵滤液萃取物的量超过5.0wt％时，具有干燥皮肤的人可能发生皮肤瘙痒和刺痛。
除通过用曲霉对双色高粱叶/茎进行发酵而获得的作为活性成分的发酵滤液外，本发明的化妆品组合物中所含的成分还包括通常用于化妆品组合物中的成分，例如常规佐剂，如抗氧化剂、稳定剂、增溶剂、维生素、着色剂、色素以及芳香剂和载体。
本发明的化妆品组合物可以制备为本领域常规制备的任何制剂，并且可以配制成例如溶液、悬浮液、乳液、糊剂、凝胶、霜、化妆水、粉末、肥皂、含表面活性剂的清洁剂、油、粉状粉底、乳液粉底、蜡状粉底、喷雾等，但本发明不限于此。更具体而言，本发明的化妆品组合物可以制备为以下制剂：润肤化妆水、滋养化妆水、滋养霜、按摩霜、精华、面膜、眼霜、洁肤霜、洁肤泡沫、洁肤水、保湿霜、发酵霜、安瓿、洗发水、护发素、喷雾或粉末。
当本发明的制剂是糊剂、霜或凝胶时，可以将选自于动物油、植物油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮(silicone)、膨润土、二氧化硅、滑石和氧化锌中的至少一种用作载体成分。
当本发明的制剂是粉末或喷雾时，可以将乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末用作载体成分。特别是当本发明的制剂是喷雾时，可以额外包含推进剂(如氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚)。
当本发明的制剂是溶液或乳液时，可以将溶剂、增溶剂或乳化剂用作载体成分。例如，可以使用选自于如下中的至少一种：水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、丁二醇、1,3-丁基乙二醇油(1,3-butyl glycol oil)、聚氧乙烯氢化蓖麻油、甘油、丙三醇、脂肪族酯、苯氧乙醇、三乙醇胺、聚乙二醇、蜂蜡、聚山梨醇酯60、脱水山梨糖醇倍半油酸酯、石蜡、脱水山梨糖醇硬脂酸酯、甘油单硬脂酸酯(亲脂性)、硬脂酸、甘油硬脂酸酯/PEG-400硬脂酸酯、羧基聚合物(carboxy polymer)、谷甾醇、聚甘油基2-油酸酯、神经酰胺、胆固醇、硬脂醇聚醚-4(steareth-4)、二鲸蜡基磷酸酯、澳洲坚果油(macadamiaoil)、羧乙烯基聚合物、黄原胶和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯。
当本发明的制剂是悬浮液时，可以将选自于如下中的至少一种用作载体成分：液体稀释剂，如水、乙醇、甘油、丁二醇或丙二醇；悬浮剂，如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯和聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、羟乙基纤维素、透明质酸钠、苯氧乙醇、偏氢氧化铝(aluminum metahydroxide)、膨润土、硬脂酸、鲸蜡醇、甘油单硬脂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯、甘油单硬脂酸酯/甘油硬脂酸酯/聚氧乙烯硬脂酸酯、蜡、石蜡、角鲨烷、辛酸/癸酸甘油三酯、羧乙烯基聚合物、三乙醇胺、琼脂和黄蓍胶。
当本发明的制剂是含表面活性剂的清洁剂时，可以将选自于如下中的至少一种用作载体成分：脂肪族醇硫酸盐、脂肪族醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐(isethionate)、咪唑啉(imidazolinium)衍生物、甲基牛磺酸盐、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰氨基甜菜碱(alkylamido betaine)、脂肪族醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物和乙氧基化甘油脂肪酸酯。
下文中，将详细描述根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物的制备方法。
图1是用于解释根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物的制备方法的流程图。
参考图1，根据本发明，含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物的制备方法包括：步骤S10，获得双色高粱叶/茎的提取物；步骤S20，通过用曲霉菌株接种双色高粱叶/茎的提取物来获得发酵滤液；步骤S30，在通过采用乙醇萃取方案对步骤S20中获得的双色高粱叶/茎的发酵滤液进行萃取并除去培养的细菌后获得发酵滤液萃取物；以及步骤S40，通过向步骤S20中获得的双色高粱叶/茎的发酵滤液或步骤S30中获得的双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物中添加稳定剂、维生素、着色剂、色素和芳香剂来获得化妆品组合物。
根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物的制备方法将就如下各个步骤而言分别进行描述。
首先，进行步骤S10(获得双色高粱叶/茎的提取物)。
用水洗涤10月-11月收获的双色高粱叶/茎、干燥、并通过使用精细切割机将其细切为具有2cm-5cm的尺寸；调节浓度来提供50％(w/w)的乙醇水溶液，对应于双色高粱叶/茎重量的20-40倍；在通过借助装配有冷却冷凝器的提取器在50℃-70℃的温度下三次进行回流双沸提取方案3小时-8小时来进行提取后，进行冷却。此后，用3μm-8μm的滤纸进行过滤以获得提取物，并使用真空浓缩器通过在50℃下对所获得的提取物进行浓缩来获得浓缩物(白利糖度(Brix)70-75)。
接下来，进行步骤S20(通过用曲霉菌株接种双色高粱叶/茎的浓缩物来获得发酵滤液)。
将步骤S10中获得的双色高粱叶/茎的浓缩物和曲霉菌株添加到发酵培养基(麸皮(bran)、酵母提取物、单磷酸钾和硫酸镁)中，调节至pH5.0，并在需氧条件下在25℃-35℃下发酵24小时-72小时。在培养后，对培养液进行离心以初步除去培养的细菌，通过使用过滤器将由此获得的滤液再次过滤以使其具有0.2μm的大小，并将其灭菌以防止进一步培养。
基于化妆品组合物的总重量，所述化妆品组合物可包含0.01wt％-5.0wt％的步骤S20中获得的双色高粱叶/茎的发酵滤液。
基于化妆品组合物的总重量，当双色高粱叶/茎的发酵滤液的量小于0.01wt％时，脂肪氧合酶和透明质酸酶的活性抑制以及自由基的清除的效果可能不会发生；而当双色高粱叶/茎的发酵滤液的量超过5.0wt％时，具有干燥皮肤的人可能发生皮肤瘙痒和刺痛。
此后，进行步骤S30(在步骤S20中进行的双色高粱叶/茎的发酵之后，通过在乙醇萃取方案中进行萃取以及冷却并通过过滤工序除去培养的细菌来获得双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物)。
通过如下方式获得双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物：将乙醇添加到步骤S20中获得的双色高粱叶/茎的发酵滤液中，其中，乙醇的量为双色高粱叶/茎的发酵滤液的2-3倍；在60℃-80℃的条件下进行回流双沸萃取2小时-3小时；进行浸渍(maceration)；将2％的硅藻土添加到漏斗过滤器中以初步除去培养的细菌；通过使用滤纸对由此获得的滤液再次进行过滤以使其具有0.2μm的大小；浓缩滤液；以及对滤液进行灭菌(121℃，15分钟，1.5atm)。
基于化妆品组合物的总重量，所述化妆品组合物可包含0.01wt％-5.0wt％的步骤S30中获得的双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物(所述发酵滤液萃取物经历了真空浓缩和冷冻干燥)。
基于化妆品组合物的总重量，当双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物的量小于0.01wt％时，脂肪氧合酶和透明质酸酶的活性抑制以及自由基的清除的效果可能不会发生；而当双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物的量超过5.0wt％时，具有干燥皮肤的人可能发生皮肤瘙痒和刺痛。
接下来，进行步骤S40(通过向步骤S20中获得的双色高粱叶/茎的发酵滤液或步骤S30中获得的双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物中添加稳定剂、维生素、着色剂、色素和芳香剂来获得化妆品组合物)。
下文中，将参考附图更详细地描述根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物的制备实施例、实施例、比较实施例、试验实施例和制剂实施例。
本发明的以下制备实施例、实施例、比较实施例、试验实施例和制剂实施例仅出于说明目的而进行描述，本发明并不限于以下制备实施例、实施例、比较实施例、试验实施例和制剂实施例。
实施例
[制备实施例]双色高粱叶/茎的提取物的制备方法
用纯净水洗涤双色高粱叶/茎、干燥、并细切为具有2cm-5cm的大小以获得细切样品。添加50％乙醇以提供330g/L的细切双色高粱叶/茎，在回流双沸条件下三次进行回流提取6小时，并进行浸渍。此后，用6μm的滤纸(whatman#3)进行过滤以制备提取物，并将所述提取物用作发酵工序中的提取物。此外，使所述提取物经历真空浓缩和冷冻干燥(在50℃以下)，以便将其用于效力评估中。
[实施例]双色高粱叶/茎的发酵滤液和双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物的制备方法
将制备实施例中制备的双色高粱叶/茎的浓缩物(白利糖度75)和米曲霉NK添加到发酵培养基中，调节至pH 5.0，并在需氧条件下在30℃下发酵48小时。在发酵后，将乙醇添加到双色高粱叶/茎的发酵滤液中，其中，乙醇的量为双色高粱叶/茎的发酵滤液的3倍；进行回流双沸萃取2小时；并进行浸渍达到室温。将2％的硅藻土添加到漏斗过滤器中以从经浸渍的发酵培养液中初步除去培养的细菌；通过使用滤纸对由此获得的滤液再次进行过滤以使其具有0.2μm的大小；浓缩滤液；并对滤液进行灭菌(90℃，15分钟，1.5atm)，从而获得双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物。将所得双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物转移到浓缩罐中，并使其经历真空浓缩和冷冻干燥(在50℃以下)。
[比较实施例]曲霉培养液的制备方法的比较实施例
在比较实施例中，将实施例中使用的发酵菌株米曲霉NK在发酵培养基(pH 5.0)中在需氧条件下在30℃下发酵48小时；将乙醇添加到米曲霉NK中，其中，乙醇的量为米曲霉NK的3倍；进行回流双沸萃取2小时；并进行浸渍达到室温。将2％的硅藻土添加到漏斗过滤器中以从经浸渍的发酵培养液中初步除去培养的细菌；通过使用滤纸对由此获得的滤液再次进行过滤以使其具有0.2μm的大小；浓缩滤液；并对滤液进行灭菌(90℃，15分钟，1.5atm)，从而获得培养物萃取物。将所得培养物萃取物转移到浓缩罐中，并使其经历真空浓缩和冷冻干燥(在50℃以下)。
[试验实施例1]对本发明的双色高粱叶/茎的发酵滤液引起的细胞增殖和毒性的观察
<细胞培养>
为了在分别在实施例和比较实施例中制备的双色高粱叶/茎的发酵滤液的干粉和曲霉培养液的干粉以及在制备实施例中制备的干粉中观察作用于抗老化的基因表达，将HaCaT(人角化细胞细胞系)用于Timp-1，并将CCD-986Sk(人成纤维细胞细胞系)用于MMP-1和弹性蛋白原。通过使用包含10％(v/v)胎牛血清(FBS；Gibco，USA)、100U/ml链霉素和100U/mL青霉素抗生素(Gibco，USA)的Dulbecco氏改良eagle培养基(DMEM；Gibco，USA)，将HaCaT和CCD-986Sk细胞在5％CO2和37℃的条件下在培养箱中进行培养。
<细胞活力测量实验(MTT测定法)>
观察分别在实施例和比较实施例中制备的双色高粱叶/茎的发酵滤液的干粉和曲霉培养液的干粉以及在制备实施例中制备的干粉对细胞增殖的影响。
实验按照以下方案进行，以观察细胞增殖和毒性。
3T3(成纤维细胞细胞系)是进行培养的细胞，将其以5,000个细胞/孔分配在96孔微量培养板上并在恒温室中培养30分钟；以0.01、0.05、0.1和0.5(％，W/V)的浓度施用样品并培养72小时。培养72小时后，施用噻唑啉蓝，并额外进行培养4小时。将所有培养液弃去，将反应终止液添加到微量培养板的各孔中，进行搅拌5分钟，并在570nm下测量吸光度。同时通过在最佳细胞生长条件下以相当于样品注入量的量施用10％胎牛血清(FBS)培养基来培养对照组，并通过将对照组的细胞增殖设定为100％来计算添加样品的实验组的细胞增殖率。
通过等式1计算细胞增殖效果，其结果如下表1所示。
[等式1]
[表1]
双色高粱叶/茎的发酵滤液对细胞增殖和毒性减轻的影响
如表1所示，当将最佳细胞生长条件下的细胞增殖设定为100％时，分别在实施例和比较实施例中制备的双色高粱叶/茎的发酵滤液的干粉和曲霉培养液的干粉以及在制备实施例中制备的双色高粱叶/茎的提取物的干粉全部没有细胞毒性。
[试验实施例2]细胞中Timp-1和弹性蛋白原的基因表达的影响以及MMP-1的基因活性抑制
在将细胞准备为使得细胞数是5×105个细胞/ml后，在培养皿(petri dish)中对HaCaT和CCD-986Sk细胞进行处理，并在5％CO2和37℃的条件下培养24小时。在细胞在培养皿中生长了至少80％后，以就提取物而言的细胞活力表示为100％以上的浓度进行添加。
对分别在实施例和比较实施例中制备的双色高粱叶/茎的发酵滤液的干粉和曲霉培养液的干粉以及在制备实施例中制备的双色高粱叶/茎的提取物的干粉进行处理，并在5％CO2和37℃的条件下在DMEM/10％FBS中培养24小时。24小时后，根据Komoroski等描述的方案对细胞进行RNA分离、cDNA合成和RT-PCR(Drug Metab.Dispos.32：512-518,2004)。在通过RT-PCR测量的基因中，观察到COL1A1、TIMP-1和弹性蛋白原的表达以及MMP-1的活性抑制。将GAPDH用作管家基因，以鉴定基因表达的差异。
各基因的引物序列示于[表2]中。使用提取的RNA作为模板，使用oligo dT-衔接子引物和DEPC水将总量设定为15μl，在70℃下进行变性5分钟，并进行莫洛尼鼠白血病病毒(M-MLV)逆转录以合成cDNA(42℃下60分钟以及94℃下5分钟)。将合成的cDNA通过PCR反应进行扩增，反应溶液总量为25μl。各反应物的终浓度为100pmol、1.0μM引物、0.2mM dNTP混合溶液、1×1.5mM 5×绿色或无色GoTaq反应缓冲液、MgCl2(PCR缓冲液)和1.25单位GoTaqDNA聚合酶。用于变性、退火和延伸的PCR反应条件如下：95℃2分钟；95℃30秒，60℃30秒，72℃1分钟，将其进行30-40个循环；以及72℃5分钟。PCR反应后，将10μl产物在2％琼脂糖凝胶上进行电泳。使用Gel Documentation System(Korea Lab Tech,Cat.No DGS-200D)来观察表达水平。
[表2]
[基因的引物序列]
引物名称 序列
GAPDH 正向：GGCATTGCTCTCAATGACAA
GAPDH 反向：TGTGAGGGAGATGCTCAGTG
MITF 正向：AACCGACAGAAGAAGCTGGA
MITF 反向：ACAAGTTCCTGGCTGCAGTT
酪氨酸酶 正向：TTATGCGATGGAACACCTGA
酪氨酸酶 反向：ACTGGCAAATCCTTCCAGTG
[表3]
[本发明的双色高粱叶/茎的发酵滤液引起的TIMP-1表达]
[表4]
[本发明的双色高粱叶/茎的发酵滤液引起的弹性蛋白原表达]
[表5]
[本发明的双色高粱叶/茎的发酵滤液引起的MMP-1表达]
如[表3]-[表5]所示，作为进行RT-PCR后观察的结果，与在比较实施例中制备的曲霉培养液的干粉以及在制备实施例中制备的双色高粱叶/茎的提取物的干粉相比，本发明的实施例中TIMP-1的表达增加；并且观察到MMP-1的表达具有以浓度依赖性方式降低的倾向。与作为对照组的腺苷相比，获得了优异或相似的结果。
另外，弹性蛋白原是形成弹性蛋白的因子，其主要由代表皮肤弹性的弹性纤维形成，并且观察到弹性蛋白原的结果与作为对照组的腺苷相似。
[试验实施例3]酪氨酸酶的活性抑制
酪氨酸酶活性抑制实验是用于观察相应物质的黑色素活性抑制效果的实验，并通过应用如Yagi通过比色法进行测量的方案来测量多巴色素。
在上述实验中，在96孔板中将40μl 1.5mM L-酪氨酸溶液添加到120μl0.1M磷酸盐缓冲液(pH 6.5)中以制备反应溶液；将10μl样品溶液添加到反应溶液中并反应5分钟；添加10μl蘑菇酪氨酸酶(100单位/ml)，并在37℃下进行酶反应10分钟。10分钟后，通过使用微板计数器在490nm下测量在反应溶液中生成的多巴色素(DOPA chrome)，并以相同的浓度使用熊果苷作为阳性对照，这对于试验结果而言是比较目标。
[等式2]
[表6]
[对本发明的双色高粱叶/茎的发酵滤液引起的酪氨酸酶活性抑制的观察]
如[表6]所示，与在比较实施例中制备的曲霉培养液的干粉以及在制备实施例中制备的双色高粱叶/茎的提取物的干粉相比，本发明的实施例中观察到酪氨酸酶的活性具有以浓度依赖性方式降低的倾向。观察到与作为对照组的熊果苷相比，表现出类似的效果。
[试验实施例4]黑色素含量的合成抑制
将B16F10小鼠黑色素瘤细胞以3.5×105个细胞/孔的浓度分配在6孔板中并培养24小时，并用α-黑素细胞刺激素(α-MSH)以及对于每种浓度制备的实施例、制备实施例和比较实施例的样品处理各孔。培养48小时后，使用磷酸盐缓冲盐水(PBS)通过洗涤两次除去培养基，并将贴附细胞转移到EP管中并离心以获得培养的细胞沉淀。对沉淀的B16F10黑色素瘤细胞的形态进行拍摄；并将黑色素溶解在1N NaOH溶液中，向其中添加DMSO，在60℃保持1小时；并分配200μl到96孔板中，从而在405nm下测量吸光度。
[表7]
作为[表7]中所示的结果，证实了在实施例和制备实施例中以浓度依赖性方式抑制黑色素合成。特别地，在如实施例中那样的双色高粱叶/茎的发酵干粉中观察到最优异的黑色素合成抑制作用。
同时，在曲霉培养液的干粉中未观察到效果；与作为对照组的熊果苷相比，显示出类似的效果，因此证实获得了对黑色素合成的优异抑制效果。
[试验实施例5]试验实施例-改善眼部皱纹和评估美白效力
<评估区域和测量方案>
对于机械(mechanical)评估，使测试对象在等温等湿条件下在等待室中稳定30分钟，其中，室内温度为20℃-25℃，湿度为40％-60％，从而允许皮肤表面温度和湿度适应于测量空间的环境，并在稳定期间限制水分摄取。对于客观(objective)测量，一个研究人员进行测量，并且每个测量对相同的区域进行测量。
<眼部皱纹1的测量>
皱纹等级测量目标区域是测试对象的眼睛边缘区域，测量距离外眼角2cm的区域点的左侧和右侧。在使用产品之前和之后，通过使用Visiometer SV600(Courage-Khazakaelectronic GmbH，Germany)对为了施加产品的区域制备的皮肤模拟物进行透明度轮廓测定分析，以分析皱纹参数R1-R5。
<皱纹参数>
<眼部皱纹2的测量>
在使用产品之前和之后，通过使用3D皮肤拍摄装置(PRIMOS premium)进行测量。在测量后分析存储图像中皮肤的平均粗糙度Ra的值。随着Ra值降低，粗糙度降低，从而可以表现出抗皱效果。
<皮肤亮度的测量>
测量皮肤亮度三次，并将其平均值用作皮肤亮度评估数据。评估值是表示作为肤色测量装置的色度计CM700d的测量参数之中的亮度的L*值，其中，随着测量值变大，皮肤色调变亮。每次就诊时测量相同的区域，并评估在使用产品之前和之后的皮肤亮度值。
<皮肤黑色素的测量>
Mexameter是一种窄带反射率分光光度计，其从探头发出568nm(绿色)、660nm(红色)和880nm(红外)的光，以测量从皮肤反射的光。随着皮肤黑色素变多，测量值变大，其中，单位是黑色素指数(M.I)。每次就诊时测量相同的区域，并评估在使用产品之前和之后的皮肤黑色素值。
图2a-图2e是显示使用了根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液的化妆品组合物测量眼部皱纹1(R1-R5)的结果的视图；图3是显示使用了根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液的化妆品组合物测量眼部皱纹2的结果的视图；图4是显示使用了根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液的化妆品组合物测量皮肤亮度的结果的视图；图5是显示使用了根据本发明的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液的化妆品组合物测量皮肤黑色素的结果的视图；图6是显示根据本发明的化妆品组合物的皱纹改善状态的照片；以及图7是显示根据本发明的化妆品组合物的皮肤美白改善状态的照片。
参见图2a-图7，通过将含有双色高粱叶/茎的发酵滤液的发酵霜设定为试验产品A并将未添加双色高粱叶/茎的发酵滤液的产品设定为对照产品B来进行人体应用效力评估。其结果是，观察到通过使用12周，作为试验产品A的双色高粱发酵霜有助于改善眼部皱纹和美白。
[制剂实施例1]含有本发明的双色高粱叶/茎的发酵滤液的化妆水的制备
[表8]显示了在含有实施例的双色高粱叶/茎的发酵滤液的干粉的化妆材料中的化妆水(爽肤水(skin lotion))的制剂实施例。
[表8]
含有双色高粱叶/茎的发酵滤液的化妆水的配置
编号 原料 含量(wt％)
1 双色高粱叶/茎的发酵滤液的干粉(实施例) 0.05
2 甘油 3.0
3 丁二醇 2.0
4 丙二醇 2.0
5 聚氧乙烯氢化蓖麻油 1.0
6 乙醇 10.0
7 三乙醇胺 0.1
8 防腐剂 痕量
9 色素 痕量
10 芳香剂 痕量
11 纯净水 余量
为了制备化妆品水，将[表8]中公开的2号、3号、4号和8号顺序添加到11号中并通过搅拌溶解；通过在约60℃下加热将5号熔化；添加10号并溶解，从而添加到11号中。最后，添加1号、6号、7号和9号，并在充分搅拌后熟化(aged)。
[制剂实施例2]含有本发明的双色高粱叶/茎的发酵滤液的滋养化妆水的制备
[表9]显示了在含有实施例的双色高粱叶/茎的发酵滤液的干粉的化妆材料中的滋养化妆水的制剂实施例。
[表9]
含有双色高粱叶/茎的发酵滤液的滋养化妆水的配置
编号 原料 含量(wt％)
1 双色高粱叶/茎的发酵滤液的干粉(实施例) 0.05
2 蜂蜡 1.0
3 聚山梨醇酯60 1.5
4 脱水山梨糖醇倍半油酸酯 0.5
5 液体石蜡 10.0
6 脱水山梨糖醇硬脂酸酯 1.0
7 甘油单硬脂酸酯，亲脂性 0.5
8 硬脂酸 1.5
9 甘油硬脂酸酯/PEG-400硬脂酸酯 1.0
10 丙二醇 3.0
11 羧基聚合物 0.1
12 三乙醇胺 0.2
13 防腐剂 痕量
14 色素 痕量
15 芳香剂 痕量
16 纯净水 余量
为了制备滋养化妆水，将[表9]中公开的10号、11号、13号和16号在混合并搅拌的同时加热至80℃-85℃，以添加到制品部分中；使乳化剂发挥作用；将2号、3号、4号、5号、6号、7号、8号、9号和12号在80℃-85℃下加热溶解并进行乳化。在乳化完成后，在用搅拌器搅拌的同时将混合物冷却至50℃；将15号添加到混合物中；将混合物冷却至45℃；将14号添加到混合物中；将1号在35℃下添加到混合物中；将混合物冷却至25℃并熟化。
[制剂实施例3]含有本发明的双色高粱叶/茎的发酵滤液的发酵霜的制备
[表10]显示了在含有实施例的双色高粱叶/茎的发酵滤液的干粉的化妆材料中的霜的制剂实施例。
[表10]
含有双色高粱叶/茎的发酵滤液的发酵霜的配置
编号 原料 含量(wt％)
1 双色高粱叶/茎的发酵滤液的干粉(实施例) 0.05
2 甘油 10.0
3 丙二醇 10.0
4 1,2-己二醇 2.0
5 鲸蜡醇 1.5
6 巴西棕榈蜡 1.5
7 PPG-14丁基醚 1.5
8 微晶蜡 0.5
9 聚山梨醇酯 0.8
10 PEG-100硬脂酸酯 0.75
11 甘油硬脂酸酯 0.75
12 聚山梨醇酯60 0.5
13 丙烯酰基二甲基牛磺酸铵/PVP共聚物 0.3
14 EDTA二钠 0.05
15 纯净水 余量
为了制备发酵霜，将[表10]中公开的2号、3号、14号和15号在混合和搅拌的同时完全溶解在主烧杯中。将5号、6号、7号、8号、9号、10号、11号和12号加热至80℃以溶解原料，并缓慢添加到主烧杯中。在搅拌同时将混合物乳化；将13号和15号添加到主烧杯中；并将混合物缓慢彻底搅拌，同时冷却至45℃的温度。此后，将1号和4号添加到主烧杯中，用均相混合器搅拌混合物5分钟并冷却至25℃，从而完成霜的制备。
[制剂实施例4]含有本发明的双色高粱叶/茎的发酵滤液的精华的制备
[表11]显示了在含有实施例的双色高粱叶/茎的发酵滤液的干粉的化妆材料中的精华的制剂实施例。
[表11]
含有双色高粱叶/茎的发酵滤液的精华的配置
编号 原料 含量(wt％)
1 双色高粱叶/茎的发酵滤液的干粉(实施例) 0.05
2 谷甾醇 1.7
3 聚甘油基2-油酸酯 1.5
4 神经酰胺 0.7
5 硬脂醇聚醚-4 1.2
6 胆固醇 1.5
7 二鲸蜡基磷酸酯 0.4
8 浓缩甘油 5.0
9 澳洲坚果油 15.0
10 羧乙烯基聚合物 0.2
11 黄原胶 0.2
12 防腐剂 痕量
13 芳香剂 痕量
14 纯净水 余量
为了制备精华，将通过在预定温度下将[表11]中公开的2号、3号、4号、5号和6号均化而制备的产物称为非离子两亲脂质。将该非离子两亲脂质与1号、7号、8号和14号混合；在预定温度下将混合物均化并使其通过微流化器；将9号在预定温度下慢慢输注以使混合物均化；并使混合物再次通过微流化器。此外，将10号、11号、12号和13号添加到混合物中，并使混合物分散、稳定并熟化。
如上所述，已出于说明目的对根据本发明实施方式的含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物及其制备方法进行了描述。然而，本发明可以通过各种其它形式实施，并且不应该被解释为限于上述实施方式。提供本文公开的实施方式，从而使得本发明的公开将是彻底和完整的，并将把本发明的范围充分地传达给本发明所属领域的普通技术人员。另外，本发明将仅由所附权利要求的范围限定。
如上所述，虽然本发明的一个优选实施方式已经参照附图进行了描述，本领域技术人员将理解的是，本发明可以通过与所公开的实施方式不同的其它具体形式实施，而不背离本发明的技术构思和基本特征。因此，公开的实施方式在所有方面均为说明性的，不应被解释为限制性的。

Claims (10)

1.含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物，其中，所述化妆品组合物含有双色高粱叶/茎的发酵滤液和发酵滤液萃取物，所述发酵滤液通过用曲霉对所述双色高粱叶/茎进行发酵而获得。
2.如权利要求1所述的化妆品组合物，其中，通过使用包括选自于由如下提取剂所组成的组中的至少一种的提取剂来对所述双色高粱叶/茎进行提取：水、C1-C4无水或含水低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯和1,3-丁二醇。
3.如权利要求1所述的化妆品组合物，其中，基于所述化妆品组合物的总重量，所述化妆品组合物包含0.01wt％-5.0wt％的所述双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物。
4.如权利要求1所述的化妆品组合物，其中，所述双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物具有皮肤美白和抗皱效果，而不表现出对皮肤的副作用。
5.通过将如权利要求1-4中任一项所述的化妆品组合物配制成包含选自于由如下制剂所组成的组中的至少一种的制剂来制备的化妆品组合物：溶液、悬浮液、乳液、糊剂、凝胶、霜、化妆水、肥皂、含表面活性剂的清洁剂、油、粉状粉底、乳液粉底、蜡状粉底、润肤化妆水、滋养化妆水、滋养霜、按摩霜、精华、面膜、眼霜、洁肤霜、洁肤泡沫、洁肤水、保湿霜、发酵霜、安瓿、洗发水、护发素、喷雾和粉末。
6.含有双色高粱叶/茎的发酵滤液或发酵滤液萃取物作为活性成分的用于皮肤美白和抗皱的化妆品组合物的制备方法，所述制备方法包括：
步骤(S10)，获得所述双色高粱叶/茎的提取物；
步骤(S20)，通过用曲霉菌株接种所述双色高粱叶/茎的提取物来获得发酵滤液；
步骤(S30)，在从步骤(S20)中获得的所述双色高粱叶/茎的发酵滤液中除去培养的细菌后通过采用双沸萃取方案来获得所述双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物；以及
步骤(S40)，通过向步骤(S20)中获得的所述双色高粱叶/茎的发酵滤液或步骤(S30)中获得的所述双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物中添加稳定剂、维生素、着色剂、色素和芳香剂来获得所述化妆品组合物。
7.如权利要求6所述的制备方法，其中，基于所述化妆品组合物的总重量，所述化妆品组合物包含0.01wt％-5.0wt％的步骤(S20)中获得的所述双色高粱叶/茎的发酵滤液或步骤(S30)中获得的所述双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物。
8.如权利要求6所述的制备方法，其中，在步骤(S10)中，通过如下方式获得所述提取物：用纯净水洗涤所述双色高粱叶/茎；使所述双色高粱叶/茎干燥；将所述双色高粱叶/茎细切为2cm-5cm；调节浓度来提供50％(w/w)的乙醇水溶液，对应于所述双色高粱叶/茎重量的20-40倍；在通过借助装配有冷却冷凝器的提取器在50℃-70℃的温度条件下三次进行回流双沸提取方案3小时-8小时来进行提取后，进行冷却；以及用3μm-8μm的滤纸进行过滤。
9.如权利要求6所述的制备方法，其中，在步骤(S20)中，添加步骤(S10)中获得的所述双色高粱叶/茎的提取物和所述曲霉菌株，并在需氧条件下在25℃-35℃下在发酵培养基(pH5.0)中发酵24小时-72小时；在发酵后将2％的硅藻土添加到漏斗过滤器中以初步除去培养的细菌来制备滤液；以及通过使用滤纸对所述滤液进行过滤以使其具有0.2μm的大小并对所述滤液进行灭菌。
10.如权利要求6所述的制备方法，其中，在步骤(S30)中，通过如下方式获得所述双色高粱叶/茎的发酵滤液萃取物：将乙醇添加到步骤(S20)中获得的所述双色高粱叶/茎的发酵滤液中，其中，乙醇的量为所述双色高粱叶/茎的发酵滤液的2-3倍；在60℃-80℃的温度条件下进行回流双沸萃取2小时-3小时；将2％的硅藻土添加到漏斗过滤器中以初步除去培养的细菌来制备滤液；通过使用滤纸对所述滤液进行过滤以使其具有0.2μm的大小；浓缩所述滤液；以及对所述滤液进行灭菌。
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