KR20150102360A

KR20150102360A - 인삼꽃 흑효모 발효를 통한 진세노사이드 Rg3 강화 및 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20150102360A
Application number: KR1020140024137A
Authority: KR
Inventors: 백미정
Original assignee: 주식회사 코리아나화장품
Priority date: 2014-02-28
Filing date: 2014-02-28
Publication date: 2015-09-07
Also published as: KR101663946B1

Abstract

본 발명은 천연추출물인 인삼꽃 추출물을 흑효모 균사체로 발효하여 수득한 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 첨가되는 인삼꽃 흑효모 발효액을 함유하는 화장료는 항산화, 항염증, 콜라겐 합성 촉진, 피부 주름 개선, 피부보습, 피부 장벽 개선으로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

인삼꽃 흑효모 발효를 통한 진세노사이드 Rg3 강화 및 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition containing an ginsenoside Rg3 reinforced extract of fermentative Ginseng flower(Panax ginseng C. A. Meyer) by Aureobasidium pullulans}

본 발명은 인삼꽃추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 좀더 구체적으로는 인삼꽃추출물을 흑효모 균사체로 발효시켜 진세노사이드 Rg3를 강화시킨 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부노화는 내인성 노화(intrinsic, chronological aging)와 광노화(phtoaging) 두 가지로 나눌 수 있다[Gilchrest BA: J. Am . Acad . Dermatol.,21, 610-613(1989)]. 내인성 노화는 연령이 증가함에 따라 생체의 생리적인 기능이 저하되어 자연적으로 유발되는 노화현상이다[Braverman IM 등: J. Invest . Dermatol., 78, 434-443(1982)]. 광노화는 피부가 광에 반복적으로 노출되어 피부의 외양 또는 기능이 변화되는 것을 의미한다[Ridder GM등: J. Am . Acad . Dermatol., 25, 751-760(1991)].

멜라닌은 피부에 존재하여 자외선 등으로부터 신체를 보호하고 체내 호르몬 분비 조절에 중요한 기능을 나타낸다. 그러나, 멜라닌이 과잉생산되면 기미, 주근깨 등을 형성하고 피부노화를 촉진하며, 피부암 유발에 중요한 작용을 하는 것으로 알려져 있는데, 멜라닌 과잉생산을 예방하기 위한 연구개발로, 아스코르빈산(일본특개평 4-9320), 하이드로퀴논(일본특개평 6-192062), 코직산(일본특개소 56-7710), 알부틴(일본특개평 4-93150) 및 식물 추출물 등이 티로시나제 저해 활성을 나타내어 미백 화장료로 이용되고 있다. 하지만, 이들 성분은 화장품 제형 중에서 안정성이 나빠, 분해되어 착색되거나, 이취가 발생하거나, 안전성이 문제가 되어 그 사용이 제한되고 있는 실정이다.

한편, 인체에 있어서 피부는 외부환경으로부터 생체를 보호하는 보호막의 기능을 하는 기관으로서, 인체 내의 생체성분 즉, 물이나 전해질 등의 손실을 방지하는 동시에 외부로부터 유해물질이 인체 내로 침입하지 못하도록 하는 역할을 한다. 이러한 피부는 크게 표피층, 진피층 및 피하지방층으로 구분된다. 표피층은 각질세포와 멜라닌 세포로 구성되는데, 피부 최외곽의 각질세포층은 외부환경과 직접 접촉하기 때문에 물리적, 화학적 혹은 물질의 투과에 대한 강한 저항성이 요구되며, 인체로부터 외부로 수분이 손실되는 것을 막아줌과 동시에 자체로도 적당한 수분을 보유함으로써 유연성을 유지하여야 한다.

일반적으로 피부의 수분량은 진피층에서는 70% 정도이나 표피층으로 갈수록 감소하여 각질세포층에서는 약 10 내지 30%가 된다. 진피층에서 공급된 물은 주로 수동적 확산에 의해 각질층 상부로 이동하며 최종적으로는 외부로 배출된다. 이를 경피수분 손실(Trans Epidermal Water Loss : TEWL)이라 하며, 이러한 경피수분 손실을 적절한 수준으로 유지시켜주는 것이 각질세포층의 지질막 성분인 피지성분과 표피지질이라고 알려져 있다.

한편, 각질세포층에는 천연보습 인자(Natural Moisturizing Factor : NMF) 라고 하는 친수성의 수분 보유능을 가진 물질이 존재하여 피부의 보습에 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다. 정상적인 각질세포층은 수분이 10내지 30% 정도가 유지되면 피부는 매끄럽고 부드러우며, 신체 보호기능을 정상적으로 발휘하게 된다. 하지만, 각질세포층의 수분함량이 10% 이하가 되면 피부는 거칠어지고 신체의 보호기능을 잃게 되어 노화현상이 일어난다.

따라서, 피부 각질세포층의 수분함량을 적절히 유지하는 것은 매우 중요하다. 이를 위하여 화장품에는 피지와 유사한 성분이나 NMF 성분 또는 폴리올과 같은 보습제 등이 첨가되어 사용되었다. 예를 들어, 수용성 폴리올로서 수산기(OH 기)가 3개 이상인 글리세린, 솔리톨 등은 뛰어난 보습력을 나타내나 끈적임이 심하여 사용할 때 불쾌감을 느끼게 하며, 수산기(OH 기)가 2개인 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 등은 피부의 부작용이 발생하기도 한다.

또한, 다른 천연보습인자인 피롤리돈 카르복실산 나트륨(PCA-Na), 젖산나트륨(Sodium lactate), 요소 등은 전해성이 강해 화장료의 유화안정성을 해치는 문제점이 있다. 아미노산, 콜라겐, 엘라스틴 등도 보습능력이 있다고 하나 보습능력에 한계가 있었다.

각질층의 수분을 보유할 수 있는 능력은 피지성분과 아미노산, 젖산, 요소 및 무기염 등으로 이루어진 천연보습인자(NMF)에 의해 조절되어질 수 있는데, 피부 외용제에서 천연보습인자와 같이 안전하면서도 사용성이 우수하고, 보습효과가 높은 물질의 개발이 화장품에서 중요한 연구과제 중 하나이다.

한편, 최근에는 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다.

한편 진세노사이드(ginsenoside)는 인삼에 있는 사포닌을 일컫는 말로 화학적으로 배당체(glycoside)라 부르는 화합물의 일종이다. 사포닌은 희랍어로 sapona에서 유래된 물질로 수용액에서 비누처럼 미세한 거품을 내는데서 붙여진 이름이다. 최근에 항암, 항산화, 콜레스테롤 저하, 피부의 항노화 효과에 대한 효능이 밝혀지면서 각광을 받기 시작했다. 한방에서는 강심제나 이뇨제로 사용되어 왔으며, 다른 식물의 사포닌과 다른 화학구조를 갖고 있으며 약리효능도 특이한 것으로 알려져 있다. (네이버 시사상식 사전)

한편 Rg3은 홍삼의 대표적인 진세노사이드로 인체에 다양한 효능 뿐 아니라 피부에서도 다양한 효능이 보고되어 있다. 일예로 (주)다나한 에서는 Rg3 를 포함하는 주름개선 기능성물질을 개발하기도 하였다. 하지만 Rg3는 인삼이나 홍삼에 극히 미량으로 함유되어 있어서 이를 산업적으로 이용 시 경제적이지 못한 단점을 갖고 있다.

이에 본 발명자들은 인삼꽃 추출물을 흑효모 균사체로 발효하여 진세노사이드 함량을 증가시켜 이러한 문제를 해결하였으며, 흑효모 발효를 통해 생성된 인삼꽃 유래 베타글루칸과 플루란(pullulan)으로 인해 피부 보습과 피부 탄력등의 다양한 생리활성 효과를 확인 하여 본 발명을 완성할 수 있었다.

본 발명자들은 여러 천연물들에 있어서 화장품으로의 응용 가능성을 연구한 결과, 인삼꽃의 추출물을 흑효모 균사체로 발효하여 제조된 추출물에서 항산화, 항염증, 콜라겐 합성 촉진, 피부 주름 개선, 보습, 피부 장벽 개선 효과를 확인하고, 본 발명을 완성하기에 이른 것이다.

대한민국 특허공개번호 제1020100059347호(공개일자: 2010.06.04)에는, 인삼꽃 정유를 함유하는 피부용 외용제 조성물에 관한 것으로서, 인삼꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장품이 기재되어 있다.

본 발명자들은 피부 화장료에 적용이 가능하고 인체에 무해하여 안전성이 매우 뛰어난 천연 추출물인 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 천연추출물인 인삼꽃추출물을 흑효모 균사체로 발효하여 수득한 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 하고 항산화, 항염증, 콜라겐 합성 촉진, 피부 주름 개선, 피부보습, 피부 장벽 개선효과를 가지는 화장료 조성물로 개발하여 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기의 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 천연추출물인 인삼꽃 추출물을 흑효모 균사체로 발효하여 수득한 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 화장료 조성물은 항산화용, 항염증용, 콜라겐합성 촉진용, 피부 주름 개선용, 피부보습용, 피부 장벽 개선용 중 선택되는 어느 하나의 용도를 가질 수도 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 인삼꽃 추출물은 물, 탄소수 1~4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 추출 용매를 사용하여 추출된 것일 수 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 인삼꽃 흑효모 발효액은 화장료 조성물 총 중량에 대해 0.0001~30.0 중량% 첨가되는 것일 수 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물은, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 갖는 것일 수 있다.

한편, 본 발명에 따른 조성물은 화장 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제, 예컨대 친수성 또는 친유성 겔화제, 친수성 또는 친유성 활성제, 보존제, 항산화제, 용매, 방향제, 충전제, 차단제, 안료, 흡취제 및 염료를 함유할 수 있다. 이들 다양한 보조제의 양은 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 양이며, 예컨대 화장료 조성물 총 중량에 대해 0.0001~30.0 중량% 이다. 다만, 어떠한 경우라도 보조제 및 그 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 악영향을 미치지 않도록 선택될 것이다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물의 제형은 특정한 것에 한정되는 것은 아니고, 일 예로 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 에멀젼, 연고로 이루어진 기초화장료 제형, 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형 중에서 선택되는 어느 하나인 것이 좋다. 또한, 이는 선택적으로 에어로졸 형태로 피부에 적용될 수도 있고, 고체 형태 예컨대, 스틱의 형태일 수도 있으며, 피부용 케어 제품 및/또는 메이크업 제품으로서 사용될 수도 있다.

본 발명은 피부 화장료에 적용이 가능하고 인체에 무해하여 안전성이 매우 뛰어난 천연추출물인 인삼꽃 추출물을 흑효모 균사체로 발효한 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

또한, 본 발명은 천연추출물인 인삼꽃추출물을 흑효모 균사체로 발효하여 수득한 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 하여 항산화, 항염증, 콜라겐 합성 촉진, 피부 주름 개선, 피부보습, 피부 장벽 개선 효과를 가지는 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

또한 본 발명의 인삼꽃 추출물을 흑효모로 발효하여 진세노사이드 Rg3의 함량이 증가된 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명자들은 다수의 천연물을 원료로 하여 다양한 추출방법으로 추출물을 제조하였고, 항산화, 항염증, 콜라겐 합성 촉진, 피부 주름 개선, 피부보습, 피부 장벽 개선 효과 등의 효과가 우수한 물질을 선별하는 연구를 수행하였다. 그 결과, 인삼꽃의 추출물에 흑효모 균사체로 발효하여 제조된 인삼꽃 흑효모 발효액이 상술한 본 발명의 목적에 가장 부합된다는 사실을 발견하게 되었다.

인삼꽃(人參花, Panax ginseng C. A. Meyer)은 인삼의 지상부에 속하며, ginsenoside 함량이 뿌리보다 많고 그 종류도 뿌리와 유사하다. 꽃에서는 Rb₂, Rc, Rd, Re, Rg₁, Rg₃ 및 총 ginsenoside가 많았으며 특히 꽃에서의 Re 함량은 채취시기와 관계 없이 월등히 많았는데 잎과 줄기와는 달리 채취시기별 함량변이도 거의 없었다(Choi et al., 2009). 뿐만 아니라 채종하지 않는 꽃은 인삼의 뿌리 성장을 촉진하기 위하여 제거된다.

흑효모(Aureobasidium pullulans)는 맥주, 포도주 등을 만드는데 사용되는 미생물로서, 곰팡이나 버섯 무리이지만 균사가 없고, 광합성능이나 운동성도 가지지 않는 단세포 생물의 총칭이다. 이는 5천 년 전부터 인간이 식품에 이용해 온 미생물이며, 효모 자체는 값싼 지방이나 단백질원으로 사용된다. 비타민 B군을 풍부하게 함유하고 있고, 비타민 D를 함유하는 것도 있다. 또한, 흑효모균은 베타-글루칸(β-Glucan)과 플루란을 생산하는 미생물로 흑효모발효물 자체만으로도 보습효과, 항산화, 진정효과를 나타낸다고 한다. 흑효모 베타-글루칸(β-glucan)과 플루란은 항암, 인슐린 분비 억제 등의 생리 활성이 있는 것으로 알려져 있는 성분이 다량 함유되어 있다.

현재까지 인삼꽃의 추출물은 다른 용도로 많이 사용되고 있다. 하지만, 본 발명에서와 같이 발효 형태, 즉 인삼꽃 흑효모 발효액은 상기 추출물 단독으로 사용할 때보다 현저히 높은 항산화, 항염, 콜라겐 합성 촉진, 피부 주름 개선, 미백, 보습, 피부 장벽 개선, 아토피 개선 효과가 있는지에 대해서는 알려지지 않았다.

또한 본 발명의 인삼꽃 흑효모 발효를 통해 진세노사이드 Rg3의 함량이 증가하는 것에 대해 알려지지 않았다.

본 발명의 인삼꽃의 추출물을 흑효모(Aureobasidium pullulans) 균사체로 발효하여 구성된 혼합물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 뛰어난 항산화, 항염증, 콜라겐 합성 촉진, 피부 주름 개선, 피부보습, 피부 장벽 개선 효과를 나타낸다.

본 발명의 화장료 조성물의 유효성분인 인삼꽃 추출물에서, 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있다. 즉, 본 발명의 조성물의 유효성분인 인삼꽃의 추출물은 물, 탄소수 1~4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 사용하여 추출하거나 인삼꽃을 상기 용매를 이용하여 추출한 후, 이를 혼합하여 제조할 수 있다.

상기 용매 중 바람직하게는 알코올이 좋으며, 더욱 바람직하게는 에탄올이 좋다. 이때, 상기 에탄올은 바람직하게 70% 에탄올인 것이 좋다. 상기 추출 용매의 적합한 양은 인삼꽃 건조 중량의 1~15 배이며, 더욱 바람직하게는 5~10배이며, 가장 바람직하게는 7배이다.

한편, 본 발명의 인삼꽃 흑효모 발효액은 상술한 추출법에 의한 인삼꽃 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 인삼꽃 흑효모 발효액에 포함된다고 해석된다.

또한, 본 발명의 인삼꽃 흑효모 발효액은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수도 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 화장료 조성물에 첨가되는 인삼꽃 흑효모 발효액의 함량은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~30.0 중량%이며, 바람직하게는 0.001~25.0 중량%이며, 가장 바람직하게는 0.1~10.0 중량%이다. 상기 인삼꽃 흑효모 발효액의 함량이 0.0001 중량% 미만인 경우에는 항산화, 항염, 콜라겐 합성 촉진, 피부 주름 개선, 보습, 피부 장벽 개선효과가 미미하다. 30중량%를 초과하면 성능은 차이가 없어 비경제적이다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물은 유효 성분으로서 상기 인삼꽃 흑효모 발효액 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있다. 다만, 이에 반드시 한정되는 것은 아니다. 더욱 상세하게는, 유연 화장수, 수렴 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

한편, 본 발명의 인삼꽃 흑효모 발효액은 항산화 효과(참조: 실험예 2), 항염 효과(참조: 실험예 3), 콜라겐 합성 효과(참조: 실험예 4), 주름 개선 효과를 나타낸다. 또한, 이러한 효과를 갖는 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하여 제조한 화장료 조성물의 경우, 피부 보습 개선 효과(참조: 실험예 5), 피부 장벽 개선 효과(참조: 실험예 6)가 뛰어난 것으로 나타났다.

이하, 본 발명의 내용을 하기 제조예를 통하여 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 하기 제조예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 권리범위가 하기 제조예에만 한정되는 것은 아니다.

[ 제조예 1: 인삼꽃 추출물의 제조]

인삼꽃을 정제수로 세척하고 건조한 다음 모두 분쇄한 후 100메시의 체를 이용하여 미세하게 만들었다. 인삼꽃 분쇄물을 100g/L가 되도록 70% 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #3 여과지로 여과 후, 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다.

[ 제조예 2: 인삼꽃 흑효모 발효액의 제조]

제조예 1로 제조한 인삼꽃 감압농축물 5g 기준으로 탄소원으로 포도당 0.05g~0.10g을 첨가하였으며, 펩톤 0.005~0.01g을 추가로 첨가하여 멸균하였다. 여기에 25g/L되게 흑효모(Aureobasidium pullulans) 균주 배양액을 접종하여 배양하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 7일간, 37℃, pH 5-7로 유지하며 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거 후 더 이상 배양이 되지 않도록 멸균(121℃, 15분, 1.5기압)하였다.

발효 후 배양균을 1차 제거 및 멸균한 인삼꽃 발효물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #3 여과지로 여과하였다. 여과가 완료되면 상기 추출단계에서 얻어진 추출액을 농축조로 이송하여 50℃ 이하에서 감압농축한 인삼꽃 흑효모 발효액을 수득하거나 이를 동결 건조하였다. 또한 인삼꽃을 처리하지 않은 흑효모 발효액을 제조예2와 동일하게 제조하여 제조 비교예1를 제조하였다.

[ 제조예 3~6]

제조예 2와 동일한 방법으로 아래 표 1의 균사체를 이용하여 발효액을 제조하였다.

제조예 구분	균사체
제조예 3	송이버섯
제조예 4	능이버섯
제조예 5	상황버섯
제조예 6	영지버섯

[ 실험예 1: 진세노사이드 분석]

제조예 1과 2로 제조된 인삼꽃 추추물과 흑인삼꽃 효모발효액의 진세노사이드를 다음 표 2 같은 조건으로 HPLC를 이용하여 분석하였다.

time	water	Acetonitrile
0	80	20
5	80	20
25	72	28
35	67	33
40	59	41
45	20	80
47	20	80
50	80	20

분석컬럼은 optipack C18, 컬럼온도 30 도, 자외선 검출기 흡광도 파장은 203nm에서 분석하였고, 발효 전후의 Rg3 함량을 표 2에 나타내었다.

발효 전 의 HPLC data

발효 후의 HPLC data

	발효 전 (ppm)	발효 후 (ppm)
흑효모발효	10.80	3540.32 ppm
송이버섯발효	10.80	15.43
능이버섯발효	10.80	13.21
상황버섯발효	10.80	15.41
영지버섯발효	10.80	13.25

발효 전후의 Rg3의 함량

흑효모 발효 전후의 Rg3의 함량을 비교 시험한 결과 발효 전에는 10.80 ppm이었으나 발효 후에는 3,540.32ppm으로 함량이 증가된 것을 확인 할 수 있었다. 하지만 다른 버섯 균사체 발효물의 경우 Rg3에 대한 유의한 함량 증가를 확인 할 수 없었다.

[ 실험예 2: 인삼꽃 추출물과 인삼꽃 흑효모발효액의 DPPH 법을 이용한 항산화 평가]

상기 제조예 1~6에서 수득한 인삼꽃 흑효모발효액과 인삼꽃 추출물의 농도별(31.5, 62.5, 125, 250, 500, 1000 ㎍/ml) 자유라디칼 소거 활성(free radical scavenging acticity)을 평가하고자 하였다.

DPPH 측정법은 억제제(inhibitor)가 안정한 라디칼 DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl radical)를 소거하여 탈색되는 정도를 540 nm에서 흡광도를 측정하는 방법이다. 사용한 시료는 하기 표 3과 같이 시험하여 하기 수학식 1을 이용하여 자유라디칼 소거활성을 측정하였다. 대조군(Control group)은 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG, Epigallocatechin gallate)로 하였다.

	Material	Ctrl group	Blank of C	Exp. Group	Blank of E
A	DPPH(MeOH)	180	(180)	180	(180)
B	Sample(용매)	(20)	(20)	20	20

A: Abs of experimental group

B: Abs blank of experimental group

C: Abs of control group

D: Abs of blank of control group

	제조예 1	비교제조예1	제조예 2	제조예 3	제조예 4	제조예 5	제조예 6
25uM EGCG				56.04
0.001%	11.22	5.23	37.98	25.34	14.51	15.14	22.12
0.002%	24.02	5.62	52.83	31.75	23.25	26.07	29.51
0.005%	25.92	6.21	72.42	39.24	32.09	34.25	37.64
0.01%	34.81	7.28	84.58	54.21	42.31	47.26	49.55

상기 표 5 의 결과에서 보는 바와 같이, 인삼꽃 발효액(제조예 2~6)이 인삼꽃 추출물(제조예 1)에 비하여 자유라디칼 소거활성이 우수하였다. 발효액 중에서는 특히 인삼꽃 흑효모발효액(제조예 2)이 가장 높은 자유라디칼 소거활성을 나타내었다. 또한 흑효모로만 발효한 비교제조예1과 비교하여도 우수한 항산화 효과를 확인 할 수 있었다. 따라서 상기의 결과는 인삼꽃 흑효모 발효액이 인삼꽃 추출물에 비해 항산화능이 높게 나타난다는 것을 확인시켜 준 것이다.

[ 실험예 3: 인삼꽃 추출물과 발효액의 항염 평가(5- Lipoxygenase 저해)]

상기 제조예 2~6과 비교제조예1 에서 수득한 인삼꽃 발효액과 인삼꽃 추출물(제조예 1)의 5-Lipoxygenase 저해 활성 실험을 하여 항염 효과를 평가하고자 하였다.

lipoxygenase는 arachidonic acid로부터 생체내 염증반응이나 알레르기 반응 등에 관여하는 다양한 화학적인 매개체 역할을 하는 여러 물질들을 생성한다. 따라서 lipoxygenase를 저해하는 물질은 각종 chemical mediators의 생성을 억제하는 결과를 가져오게 되므로 알레르기에 유효할 것이라고 추정할 수 있다. lipoxygenase의 활성정도는 기질과 효소를 이용하여 과산화물 생성정도로 측정하는 실험이다.

사용한 시료는 하기 표 6 같이 시험하여 상기 수학식 1을 이용하여 5-Lipoxygenase 저해 활성을 측정하였다. 대조군은 노르디히드로구아이아레트산 (NDGA, Nordihydroguaiaretic acid)로 하였다.

	Material	Ctrl group	Blank of C	Exp. Group	Blank of E
A	Buffer	2ml	2ml	2ml	2ml
B	Sample(용매)	(20ul)	(20ul)	20ul	20ul
C	Enzyme	40ul	-	40ul	-
D	Substrate	70ul	70ul	70ul	70ul

	제조예 1	제조비교예1	제조예 2	제조예 3	제조예 4	제조예 5	제조예 6
250nM NDGA				55.51
0.001%	22.31	2.53	31.93	24.15	25.11	23.91	30.15
0.002%	24.98	5.30	48.41	30.12	32.15	31.54	35.42
0.005%	31.63	4.25	63.02	36.14	37.66	36.98	39.22
0.01%	39.02	5.23	74.34	43.59	44.31	44.03	48.51

상기 표 7의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 인삼꽃 발효액(제조예 2~6)이 인삼꽃 추출물(제조예 1)과 제조비교예1에 비하여 5-Lipoxygenase 저해능이 우수하였다. 발효액 중에서는 특히 흑효모 발효액(제조예 2)이 가장 높은 5-Lipoxygenase 저해능을 나타내었다. 일반적으로 5-Lipoxygenase 저해능이 높을수록 항염 효과가 있으am로, 상기의 결과는 인삼꽃 흑효모 발효액이 인삼꽃 추출물에 비해 항염 효과가 높게 나타난다는 것을 확인시켜 준 것이다.

[ 실험예 4: 인삼꽃 추출물과 발효액의 콜라겐 합성량 평가]

상기 제조예 1~6과 비교제조예1 에서 수득한 추출물과 인삼꽃 추출물(제조예 1)의 콜라겐 생합성 증가율을 평가하였다.

HDF를 24-well plate에 5 x 10⁴ cells/well의 농도로 분주하여 37 ℃, 5 % CO₂ 에서 24 h 동안 배양하였다. 상기 제조예 1~6과 비교제조예1에 의해 제조된 추출물을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 인삼꽃 발효액과 인삼꽃 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 24시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 well의 상층액을 모아 콜라겐 키트(Takara, 일본)를 이용하여 프로콜라겐(procollagen) 타입 I C-펩타이드(PICP) 양을 측정하여 ng/㎖ 환산하였으며, 이에 의해 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. 콜라겐 생합성 증가율(%)은 하기 수학식 2에 따라 계산하였으며, 대조군은 엘-아스코르빅애씨드 (L-AA, L-ascorbic acid)로 하였다.

	제조예 1	제조비교예1	제조예 2	제조예 3	제조예 4	제조예 5	제조예 6
0.3mM L-AA				140.21
0.001%	103.01	102.12	126.56	107.01	111.45	109.56	118.43
0.002%	111.56	105.42	143.78	113.50	116.35	114.74	123.67
0.005%	116.45	103.56	164.64	120.06	125.21	122.34	129.16
0.01%	112.62	104.73	175.34	124.70	131.46	128.52	135.32

상기 표 8의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 인삼꽃 발효액(제조예 2~6)이 인삼꽃 추출물(제조예 1)과 제조비교예1에 비하여 콜라겐 합성량이 우수하였다. 발효액 중에서는 특히 인삼꽃 흑효모발효액(제조예 2)이 가장 높은 콜라겐 합성량을 나타내었다.

[ 실험예 4-1: 인삼꽃 추출물과 발효액의 세포 생존율 평가]

상기 제조예 2~6 과 비교제조예 1에서 수득한 인삼꽃 발효액과 인삼꽃 추출물(제조예1)이 세포에 미치는 독성을 측정하였다.

세포 독성은 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2-5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) 시약을 이용하여 세포 생존율을 측정하는 Mosmann의 방법을 변형하여 실시하였다.

HDF를 96-well plate에 1 × 10⁴ cells/well의 농도로 분주하여 37 ℃, 5 % CO₂ 에서 24 h 동안 배양하였다. 배양 배지를 제거하고 시료를 농도별로 처리한 배지에 24 h 동안 배양한 후 배지를 제거하고 PBS (Phosphate buffered saline) 두 번씩 세척하였다. MTT 를 5 mg/mL 로 PBS에 녹여 50 μL 첨가하고 37 ℃, 5 %의 CO₂ 에서 2 h 동안 배양하였다. DMSO를 한 well 당 100 μL 넣고 10 min 동안 교반한 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

측정 결과 각 시료의 모든 농도에서 세포 독성은 나타나지 않았다. 이로부터 본 발명의 인삼꽃 흑효모 발효액은 인체에 무해하며 안전성이 매우 우수함을 확인할 수 있었다.

[ 처방예 : 인삼꽃 흑효모 발효액을 함유하는 화장료의 제조]

제조예 2의 인삼꽃 흑효모 발효액이 30.0 중량% 포함된 화장료 조성물을 하기 표 9의 조성으로 제조하여 이를 처방예 1이라 하고, 인삼꽃 흑효모 발효액이 포함되지 않은 화장료 조성물을 제조하여 비교처방예 1 및 2 라 하였다.

성분	처방예 1 함량(중량%)	비교처방예 1 함량(중량%)	비교처방예 2 함량(중량%)
제조예 1	-	30.0	-
제조예 2	30.0	-	-
비교 제조예1	-	-	30
1,3-BG	10.0	10.0	10.0
글리세린	5.1	5.1	5.1
프로필렌글리콜	4.2	4.2	4.2
토코페릴아세테이트	3.0	3.0	3.0
유동파라핀	4.6	4.6	4.6
트리에탄올아민	1.0	1.0	1.0
스쿠알란	3.1	3.1	3.1
마카다미아너트오일	2.5	2.5	2.5
폴리아위베이트60	1.6	1.6	1.6
아위비탄세스퀴롤레이트	1.6	1.6	1.6
프로필파라벤	0.6	0.6	0.6
카르복실비닐폴리머	1.5	1.5	1.5
향	미량	미량	미량
방부제	미량	미량	미량
정제수	잔량	잔량	잔량
계	100	100	100

[ 실험예 5: 인삼꽃 흑효모 발효액의 피부 보습력 개선효과]

본 발명의 인삼꽃 흑효모 발효액을 함유하는 화장료의 피부 보습력 개선효과를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 실시하였다. 피부 질환이 없는 20~40대 25명을 대상으로 1조 당 20명 씩 2개조로 나누고, 각 조별로 상기 표 9 같이 제조한 처방예 1 및 비교처방예 1의 영양크림을 매일 2회씩 1개월간 얼굴 및 전박부에 도포하게 하였다. 미리 도포 시작 전 항온, 항습 조건(24℃, 습도 40%)에서 corneometer(CM820 courage Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용하여 피부 전도도를 측정하여 기본 값을 삼고, 1주, 2주, 4주 경과 후의 피부 전도도 증가율(%)을 측정하여 그 증가율을 평가하였다. 그 결과를 하기 표 10에 나타내었다.

시료	1 주 후	2 주 후	4 주 후
처방예 1	53	58	65
비교처방예 1	27	33	37
비교처방예 2	15	20	26

상기 표 10의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 인삼꽃 흑효모 발효액을 함유하는 화장료인 처방예 1의 경우, 비교처방예 1, 2에 비하여 피부 전도도 증가율이 매우 우수하였다. 일반적으로 피부 전도도는 피부 수분량에 비례하므로, 상기의 결과는 인삼꽃 흑효모를 함유하는 화장료가 그렇지 않은 화장료에 비해 피부 수분 함량도 높게 유지한다는 것을 확인시켜 준 것이다.

[ 실험예 6: 인삼꽃 흑효모 발효액의 피부 장벽 개선효과]

본 발명의 인삼꽃 흑효모 발효액을 함유하는 화장료의 피부 장벽 개선효과를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 실시하였다. 본 실험예는 제조예 7의 화장료를 사람을 대상으로 경피수분손실량(TEWL : Trans-Epidemal Water Loss)을 Tewameterr(TM300, Courage and Khazaka Electronic Co., Germany)를 이용하여 비교실험을 행하여 평가하였다. 20 ~ 40대 여성 40명을 대상으로 오른쪽과 왼쪽 얼굴에 각 시료를 바르고 눈가에서 3cm 우측으로 1cm 아래로 떨어진 부위를 바르기 전과 바른 후 1시간, 2시간, 4시간, 6시간의 경피수분손실량을 Tewameterr(TM300, Courage and Khazaka Electronic Co., Germany)를 이용하여 3회 측정하여 평균값을 사용하여 경피수분손실량을 평가하였다.

구분	1시간	2시간	4시간	6시간
처방예 1	15.3	14.9	12.1	8.9
비교처방예 1	17.9	16.7	13.6	11.4
비교처방예 2	18.9	17.3	15.2	14.2

표 11에서 나타낸 바와 같이, 경피수분손실량을 측정한 결과, 인삼꽃 흑효모 발효액을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 경피수분손실량이 감소한 것으로 보아, 피부장벽 개선에 더 좋은 효과가 있음을 알 수 있었다.

Claims

천연 추출물인 인삼꽃 추출물을 흑효모 균사체로 발효하여 수득한 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
항산화용인 것을 특징으로 하는 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
항염증용인 것을 특징으로 하는 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 주름 개선용인 것을 특징으로 하는 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 보습용인 것을 특징으로 하는 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 장벽 개선용인 것을 특징으로 하는 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 인삼꽃 추출물은,
물, 탄소수 1~4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 추출 용매를 사용하여 추출된 것을 특징으로 하는 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 인삼꽃 흑효모발효액은,
화장료 조성물 총 중량에 대해 0.0001~30.0 중량% 첨가되는 것을 특징으로 하는 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 인삼꽃 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.