WO2021251789A1 - 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 조성물 - Google Patents

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WO2021251789A1
WO2021251789A1 PCT/KR2021/007323 KR2021007323W WO2021251789A1 WO 2021251789 A1 WO2021251789 A1 WO 2021251789A1 KR 2021007323 W KR2021007323 W KR 2021007323W WO 2021251789 A1 WO2021251789 A1 WO 2021251789A1
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WO
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pain
pentapeptide
composition
present
hyperhidrosis
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PCT/KR2021/007323
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정용지
김은미
이응지
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(주)케어젠
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    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q15/00—Anti-perspirants or body deodorants

Definitions

  • the present invention relates to the use of a composition comprising pentapeptide as an active ingredient for suppressing excessive sweating, suppressing body odor, or preventing or treating pain.
  • Hyperhidrosis refers to a skin disorder characterized by excessive and abnormally increased sweating or sweating beyond that necessary for body temperature regulation. Hyperhidrosis is caused by genetic causes or physical and emotional stress, and may appear locally on the body or on a specific part of the body. When excessive sweating appears locally on the palms, soles of the feet, face, armpits, or scalp, it is called primary or focal hyperhidrosis. Systemic or secondary hyperhidrosis usually involves the entire body.
  • body odor occurs when sweat secreted from sweat glands is decomposed by microorganisms or bacteria. In the process of decomposing fat, protein, sebum, and contaminants contained in sweat secreted by microorganisms or bacteria, etc. In general, methods such as deodorizing, antibacterial, and masking are used to control body odor, but if the wrong scent is used to mask the body odor, it may give off a bad odor and have an adverse effect. In addition, when the deodorant component is used on the skin, only a temporary effect is provided until the next washing after treatment, and there is a hassle of having to reprocess after washing.
  • the present inventors have made intensive efforts to develop a material capable of suppressing body odor by inhibiting the generation of excessive sweat, which can be said to be a fundamental cause of body odor.
  • the pentapeptide newly synthesized by the present inventors has a stable molecular structure, , it has been confirmed that it can be usefully used for the treatment of hyperhidrosis and body odor control since it penetrates to the skin tissue through the dermis and exhibits high sweat reduction activity, and thus the present invention has been completed.
  • pain is caused by various causes, and if the pain lasts for a long time or the stimulus is too severe, it interferes with daily life and sometimes causes anxiety and fear.
  • pain is called headache, chest pain, abdominal pain, back pain, etc. depending on the site of occurrence, and depending on the mechanism of occurrence, somatic pain, visceral pain, neuropathic pain, and psychogenic pain. pain), and divided into acute pain and chronic pain according to the temporal concept.
  • Chronic pain which has clinical significance, is a complaint of pain that persists for more than 6 months, despite the absence of a clear cause.
  • neuropathic pain characterized by spontaneous pain, allodynia, and hyperalgesia, and severe pain is induced even by a slight temperature change or light contact with clothing. It causes a significant disruption in the patient's daily life and has a characteristic that does not respond well to various existing treatments.
  • invasive therapies such as nerve block, and various drug therapies (opioid drugs, drugs for regulating nervous system ion channel activity, anticonvulsants, etc.)
  • drug therapies opioid drugs, drugs for regulating nervous system ion channel activity, anticonvulsants, etc.
  • side effects such as gastrointestinal bleeding, gastrointestinal disorders, and liver damage may result.
  • botulinum toxin since the effect of botulinum toxin is reversible with an average of 6 months, repeated injections are required to treat pain, and since it has a size that can be recognized by the patient's immune system, an immune response to the drug may be induced. Therefore, there is a need for the development of a molecule that does not induce an immune response, has a simpler and more stable molecular structure, has a high pain relief activity, and enables a non-invasive treatment with a long lasting effect and few side effects.
  • the newly synthesized pentapeptide has a stable molecular structure, penetrates through the percutaneous tissue to the skin tissue, and exhibits high pain-suppressing activity, so it can be usefully used in the treatment of pain. was confirmed and the present invention was completed.
  • One object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating hyperhidrosis.
  • Another object of the present invention is to provide a method for preventing or treating hyperhidrosis.
  • Another object of the present invention is to provide a peptide for use in the prevention or treatment of hyperhidrosis.
  • Another object of the present invention is to provide a composition for preventing or alleviating hyperhidrosis or suppressing body odor.
  • Another object of the present invention is to provide a method for suppressing body odor.
  • Another object of the present invention is to provide a peptide for use in the suppression of body odor.
  • Another object of the present invention is to provide a composition for alleviating pain.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating pain.
  • Another object of the present invention is to provide a method for preventing or treating pain.
  • Another object of the present invention is to provide a peptide for use in the prevention or treatment of pain.
  • Another object of the present invention is to provide a quasi-drug composition for alleviating or improving pain.
  • Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for alleviating or improving pain.
  • one aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating hyperhidrosis comprising a pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • Another aspect of the present invention provides a method for preventing or treating hyperhidrosis comprising administering to a subject a pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • Another aspect of the present invention provides a pentapeptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 for use in the prevention or treatment of hyperhidrosis.
  • compositions for preventing or alleviating hyperhidrosis, or suppressing body odor comprising a pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • Another aspect of the present invention provides a method for suppressing body odor comprising administering to a subject a pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • Another aspect of the present invention provides a pentapeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 for use in suppressing body odor.
  • compositions for alleviating pain comprising a pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating pain comprising a pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • Another aspect of the present invention provides a method for preventing or treating pain comprising administering to a subject a pentapeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • Another aspect of the present invention provides a pentapeptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 for use in the prevention or treatment of pain.
  • Another aspect of the present invention provides a quasi-drug composition for preventing or improving pain comprising a pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • Another aspect of the present invention provides a cosmetic composition for alleviating pain comprising a pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • the pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 of the present invention is absorbed to the muscle layer of the skin tissue through the percutaneous (skin) and can reduce the generation of sweat by inhibiting the abnormal release of neurotransmitters from nerve terminals. It can be used for preventing, alleviating, ameliorating or treating symptoms of hyperhidrosis just by itself.
  • the pentapeptide of the present invention can block the cause of body odor in advance by inhibiting the generation of excessive sweat and provide a semi-permanent effect of inhibiting body odor.
  • the pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 of the present invention can suppress the generation and transmission of pain by inhibiting the expression of pro-inflammatory cytokines in muscle cells and the release of pain transmission factors from nerve terminals. can be used for alleviating, improving, preventing or treating
  • the pentapeptide of the present invention is absorbed to the muscle layer of the skin tissue through the percutaneous (skin), it can be used as a raw material for pharmaceuticals, quasi-drugs and cosmetics applied to the skin.
  • FIG. 1a and 1b show the thermal stability evaluation results of the KFLIK peptide: FIG. 1a shows the results of confirming the high-temperature stability of the peptide during long-term storage at 45°C, and FIG. 1b is the peptide at the maximum heating temperature (121°C). The results of confirming the high temperature stability are shown.
  • Figures 2a and 2b show the inhibitory effect of KFLIK peptide treatment on the formation of SNARE complexes in neurons:
  • Figure 2a shows the results of confirming the formation of SNARE complexes by Western-blot, and
  • Figure 2b shows the SNARE complexes. It shows the result of confirming the degree of decomposition of Syntaxin 1a.
  • A is an iodine-starch test result as an image photograph
  • B is a sweat reduction effect using Image J software It is shown as the result of intensity analysis.
  • A is an iodine-starch test result as an image photograph
  • B is a sweat reduction effect using Image J software It is shown as the result of intensity analysis.
  • FIG. 6 shows the relative sweat reduction effect of the KFLIK peptide treatment of the present invention in the armpit region of a hyperhidrosis patient
  • A is an iodine-starch test result as an image photograph
  • B is a sweat reduction effect using Image J software It is shown as the result of intensity analysis.
  • A is a blue-stained neuron nucleus and red rhodamine-pentapeptide coexisting
  • blue in B indicates the nucleus of a nerve cell stained with DAPI
  • red in C indicates rhodamine-peptide.
  • FIG. 8 is a fluorescence micrograph showing whether the KFLIK peptide penetrates to the muscle layer by collecting the skin tissue after applying the rhodamine-KFLIK peptide to the back of the experimental animal: Blue of A represents the nucleus of cells stained with DAPI, and B is Green indicates TrkB nerve fiber marker, C indicates red rhodamine-pentapeptide, and D indicates yellow penetration of the pentapeptide of the present invention to nerve cells in the muscle layer.
  • FIG. 9 shows the body odor inhibitory effect of the KFLIK peptide of the present invention, and shows the effect of inhibiting the proliferation of Corynebacterium as a result of absorbance measurement using a spectrophotometer.
  • P/C is 1% triclosan as a positive control.
  • Figures 10a and 10b show the inhibitory effect of KFLIK peptide treatment on the expression of proinflammatory cytokines in myocytes:
  • Figure 10a shows the IL-1 ⁇ , TNF- ⁇ , IL-1 ⁇ and COX-2 genes by performing RT-PCR. Shows the result of confirming the mRNA expression level of
  • Figure 10b shows the result of confirming the expression level of the COX-2, IL-1 ⁇ , TNF- ⁇ protein through Western blot.
  • 11 shows the effect of suppressing the release of substance P, a pain transmission factor, by KFLIK peptide treatment in nerve cells.
  • FIG. 12A and 12B show the muscle pain relief effect of the KFLIK peptide treatment of the present invention through human efficacy evaluation: FIG. As a result, FIG. 12b shows the degree of pain relief by KFLIK peptide treatment.
  • One aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating hyperhidrosis comprising a pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • the term 'peptide' refers to a linear or cyclic molecule formed by combining amino acid residues with each other by peptide bonds.
  • the production of the peptide may be accomplished by a conventional biological or chemical synthesis method known in the art, and for example, it may be achieved by a method such as solid-phase synthesis techniques.
  • the term 'pentapeptide' refers to a linear molecule composed of five amino acid residues
  • the pentapeptide of the present invention specifically refers to a linear peptide molecule composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 (KFLIK).
  • the 'peptide' and 'pentapeptide' may be variants or fragments of amino acids having different sequences by deletion, insertion, substitution, or combination of amino acid residues within the range that does not affect the function.
  • Amino acid exchanges that do not entirely alter the activity of the peptide are known in the art. In some cases, it may be transformed into phosphorylation, sulfation, acrylation, glycosylation, methylation, farnesylation, and the like. Accordingly, the present invention includes a peptide having an amino acid sequence substantially identical to that of a pentapeptide composed of the amino acid sequence of KFLIK, and a variant thereof or an active fragment thereof.
  • the substantially identical protein has at least 75%, preferably at least 80%, such as at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, or at least 99% sequence homology with the amino acid sequence of KFLIK. It refers to an amino acid sequence, but is not limited thereto, and is included in the scope of the present invention if it has 75% or more homology of the amino acid sequence and the same activity.
  • the peptide of the present invention may additionally include a targeting sequence, a tag, a labeled residue, an amino acid sequence prepared for a specific purpose to increase the half-life or peptide stability.
  • a protecting group may be attached to the -terminus or C-terminus.
  • the protecting group may be an acetyl group, a fluorenyl methoxy carbonyl group, a formyl group, a palmitoyl group, a myristyl group, a stearyl group, or polyethylene glycol (PEG). If there is an ingredient, it may be included without limitation.
  • the 'stability' is used to include not only stability in vivo, which protects the peptide of the present invention from attack by in vivo protein cleaving enzymes, but also storage stability (eg, storage stability at room temperature).
  • the pentapeptide composed of the amino acid sequence of KFLIK of the present invention can prevent or treat hyperhidrosis by inhibiting the formation of the SNARE complex and thereby inhibiting the excessive release of neurotransmitters from nerve terminals.
  • the pentapeptide composed of the amino acid sequence of KFLIK of the present invention can prevent or alleviate hyperhidrosis by exhibiting an effect of inhibiting the generation of sweat in the skin region where hyperhidrosis occurs.
  • the pentapeptide composed of the amino acid sequence of KFLIK of the present invention penetrates to the muscle layer of the skin tissue through percutaneous absorption, it is possible to improve or alleviate the symptoms of hyperhidrosis just by applying it to the lesion site.
  • hyperhidrosis refers to a disease state characterized by excessive and uncontrolled sweating beyond the level necessary to cool the body, and a disease in which excessive sweat is secreted by hyperactivity of sweat glands and disturbance of its cholinergic stimulation. or symptoms.
  • hyperhidrosis includes both local hyperhidrosis and systemic hyperhidrosis, and may be, for example, occurring in any one skin region selected from the group consisting of face, forehead, neck, hands, feet, and armpits, but is not limited thereto. does not
  • composition containing the pentapeptide of the present invention when the composition containing the pentapeptide of the present invention is applied to one palm, sole and armpit area of a patient with hyperhidrosis, sweat production is reduced by 45% to 90% compared to the control area in the opposite direction to which the composition is not applied. % was confirmed to decrease.
  • the term 'prevention' refers to any action of suppressing or delaying pain by administering the composition containing the pentapeptide.
  • the term 'treatment' refers to any action in which pain is 'relieved' or 'improved' or is beneficially changed by administration of the composition containing the pentapeptide.
  • the pharmaceutical composition for the prophylaxis or treatment of hyperhidrosis can be prepared according to a conventional method for oral formulations such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, external preparations, suppositories, and sterile injection solutions, respectively. It may be formulated and used in the form, and may include an appropriate carrier, excipient or diluent commonly used in the preparation of a pharmaceutical composition for formulation.
  • the pharmaceutically acceptable carriers include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia, gum, calcium phosphate, alginate, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinyl, which are commonly used in formulation. pyrrolidone, cellulose, water, syrup, methyl cellulose, methylhydroxybenzoate, propyl hydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, mineral oil, and the like.
  • the pharmaceutical composition may further include a lubricant, a wetting agent, a sweetening agent, a flavoring agent, an emulsifying agent, a suspending agent, a preservative, and the like, in addition to the above components.
  • the pharmaceutical composition may be administered orally or parenterally (eg, intramuscularly, intravenously, intraperitoneally, subcutaneously, intradermally, or locally applied) according to a desired method, and the dosage may vary depending on the patient's condition and although it varies depending on body weight, disease severity, drug form, administration route and time, it may be appropriately selected by those skilled in the art.
  • parenterally eg, intramuscularly, intravenously, intraperitoneally, subcutaneously, intradermally, or locally applied
  • the pharmaceutical composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • a 'pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is determined by the type, severity, and drug activity of the patient; Sensitivity to the drug, administration time, administration route and excretion rate, treatment period, factors including concurrent drugs and other factors well known in the medical field may be determined.
  • the pharmaceutical composition may be administered as an individual therapeutic agent or may be administered in combination with other anti-obesity agents, and may be administered simultaneously, separately, or sequentially with the conventional therapeutic agent, and may be administered singly or multiple times. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount capable of obtaining the maximum effect with a minimum amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.
  • the effective amount of the pharmaceutical composition may vary depending on the patient's age, sex, condition, weight, absorption of the active ingredient into the body, inactivation rate, excretion rate, disease type, and drugs used in combination, the route of administration, the severity of obesity, It may be increased or decreased according to gender, weight, age, etc., for example, the pharmaceutical composition may be administered per 1 kg of the patient's body weight per day, about 0.0001 ⁇ g to 500mg, preferably 0.01 ⁇ g to 100mg.
  • the present invention provides a composition for preventing or alleviating hyperhidrosis, or suppressing body odor, comprising a pentapeptide composed of the amino acid sequence of KFLIK as an active ingredient.
  • the pentapeptide composed of the amino acid sequence of KFLIK of the present invention can prevent or treat hyperhidrosis by inhibiting the formation of the SNARE complex and inhibiting the excessive release of neurotransmitters from nerve terminals, and body odor caused by excessive sweat production. can suppress.
  • the pentapeptide composed of the amino acid sequence of KFLIK of the present invention exhibits an effect of inhibiting the generation of sweat in the skin area where hyperhidrosis appears, thereby preventing or alleviating hyperhidrosis, and suppressing body odor caused by excessive sweat production.
  • the pentapeptide composed of the amino acid sequence of KFLIK of the present invention inhibits the growth of the body odor-inducing strain, thereby inhibiting the generation of body odor due to decomposition of substances contained in sweat.
  • body odor' refers to the odor of decomposed products generated by decomposition of sweat gland secretions, that is, fat, protein, sebum, and/or waste products discharged along with sweat, and specifically, sweat in the body. It may be a bad odor generated from a body part that is frequently generated, for example, armpits, feet, hands, forehead, neck, face, or scalp.
  • the 'suppression of body odor' means preventing odor caused by products decomposed by microorganisms in sweat gland secretions, or inhibiting the generation of sweat, which is the cause of body odor.
  • the inhibition of body odor may be to prevent odor in the armpit, foot, hand, forehead, neck, face, or scalp region, or to inhibit sweat production in the region, and more specifically to prevent odor. have.
  • the present invention provides a cosmetic composition for preventing or alleviating hyperhidrosis, or suppressing body odor, comprising a pentapeptide composed of the amino acid sequence of KFLIK as an active ingredient.
  • the cosmetic composition may be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, for example, a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing, It may be formulated as an oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation and spray, but is not limited thereto.
  • the cosmetic composition includes a flexible lotion, a nourishing lotion, a nourishing cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray, a powder, a deodorant, a hair tonic, a hair cream, a hair lotion, a hair shampoo, Hair conditioner, hair conditioner, hair spray, hair aerosol, pomade, a solution such as gel, sol gel, emulsion, oil, wax, aerosol, etc. may be prepared in various forms, but is not limited thereto.
  • the cosmetic composition of the present invention may include other additives such as excipients and carriers in addition to the pentapeptide composed of the amino acid sequence of KFLIK, and it is possible to apply and blend as many common ingredients as necessary in general skin cosmetics.
  • the dosage form of the cosmetic composition is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or oxidation as a carrier component Zinc or the like may be used.
  • lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component, and in particular, in the case of a spray, additional chlorofluorohydrocarbon , propellants such as propane/butane or dimethyl ether, but are not limited thereto.
  • a solvent, solubilizer or emulsifier may be used as a carrier component, for example, water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl Benzoate, propylene glycol, 1,3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or fatty acid ester of sorbitan may be used.
  • a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethyl sorbitol ester, polyoxyethylene sorbitan ester, etc. , microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracanth may be used.
  • the formulation of the cosmetic composition is surfactant-containing cleansing
  • Amide ether sulfate, alkylamidobetaine, fatty alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative or ethoxylated glycerol fatty acid ester, etc. can be used.
  • the Trolox-peptide conjugate of the present invention may be mixed with base ingredients such as thickeners, surfactants, viscosity modifiers, moisturizers, pH adjusters, preservatives, essential oils, etc. have.
  • CDE may be used as the thickener
  • LES as an anionic surfactant
  • coco betaine as an amphoteric surfactant
  • Poly Quarter may be used as the viscosity modifier
  • the moisturizer may include Glycerin may be used
  • citric acid and sodium hydroxide may be used as the pH adjusting agent.
  • Grapefruit extract and the like may be used as the preservative, and in addition, essential oils such as cedarwood, peppermint, and rosemary, silk amino acids, pentaol, or vitamin E may be added.
  • the ingredients included in the cosmetic composition include, as active ingredients, ingredients commonly used in cosmetic compositions, for example, antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and It may further include conventional adjuvants such as perfume, but is not limited thereto.
  • the present invention provides a method for preventing or treating hyperhidrosis comprising administering to a subject a pentapeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the present invention provides a pentapeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 for use in the prevention or treatment of hyperhidrosis.
  • the present invention provides a method for suppressing body odor comprising administering to a subject a pentapeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the present invention provides a pentapeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 for use in suppressing body odor.
  • the 'subject' may include a human.
  • the term 'subject' may be an individual requiring administration of the pentapeptide of the present application (subject in need thereof), and the individual requiring the administration is an individual diagnosed with hyperhidrosis or body odor, hyperhidrosis Alternatively, it may include not only individuals who have expressed symptoms related to body odor, but also individuals who wish to administer the disease or symptom to prevent or improve health.
  • the 'administration' means providing a predetermined substance to a patient by any suitable method, and the route of administration of the pentapeptide of the present invention is to be administered orally or parenterally through all general routes as long as it can reach the target tissue.
  • the pentapeptide may be administered by any device capable of transporting the active agent to the target cell.
  • the pentapeptide of the present invention inhibits the excessive release of neurotransmitters by inhibiting the formation of the SNARE complex in nerve cells, and penetrates to the nerve cells of the muscle layer just by applying it to the area where sweat is excessively generated. Since the effect of inhibiting the production of sweat is excellent, it can be used as a raw material for a pharmaceutical or cosmetic composition for the purpose of preventing, improving, alleviating or treating hyperhidrosis or suppressing body odor.
  • compositions for alleviating pain comprising a pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • the term 'peptide' refers to a linear or cyclic molecule formed by combining amino acid residues with each other by peptide bonds.
  • the production of the peptide may be accomplished by a conventional biological or chemical synthesis method known in the art, and for example, it may be achieved by a method such as solid-phase synthesis techniques.
  • the term 'pentapeptide' refers to a linear molecule composed of five amino acid residues
  • the pentapeptide of the present invention specifically refers to a linear peptide molecule composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 (KFLIK).
  • the 'peptide' and 'pentapeptide' may be variants or fragments of amino acids having different sequences by deletion, insertion, substitution, or combination of amino acid residues within the range that does not affect the function.
  • Amino acid exchanges that do not entirely alter the activity of the peptide are known in the art. In some cases, it may be transformed into phosphorylation, sulfation, acrylation, glycosylation, methylation, farnesylation, and the like. Accordingly, the present invention includes a peptide having an amino acid sequence substantially identical to a pentapeptide composed of the amino acid sequence of KFLIK, and a variant thereof or an active fragment thereof.
  • the substantially identical protein has at least 75%, preferably at least 80%, such as at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98%, or at least 99% sequence homology with the amino acid sequence of KFLIK. It refers to an amino acid sequence, but is not limited thereto, and is included in the scope of the present invention if it has 75% or more homology of the amino acid sequence and the same activity.
  • the peptide of the present invention may additionally include a targeting sequence, a tag, a labeled residue, an amino acid sequence prepared for a specific purpose to increase the half-life or peptide stability.
  • a protecting group may be attached to the -terminus or C-terminus.
  • the protecting group may be an acetyl group, a fluorenyl methoxy carbonyl group, a formyl group, a palmitoyl group, a myristyl group, a stearyl group, or polyethylene glycol (PEG). If there is an ingredient, it may be included without limitation.
  • the 'stability' is used to include not only stability in vivo, which protects the peptide of the present invention from attack by in vivo protein cleavage enzymes, but also storage stability (eg, storage stability at room temperature).
  • the pentapeptide composed of the amino acid sequence of KFLIK of the present invention suppresses the inflammatory response by suppressing the expression of proinflammatory cytokines in muscle cells, so it is possible to prevent or treat pain caused by micro lacerations.
  • the pentapeptide composed of the amino acid sequence of KFLIK of the present invention inhibits the release of substance P (substance P), which is a pain transmission factor secreted from synaptic neurons, thereby preventing the transmission of pain, thereby preventing or treating pain.
  • substance P substance P
  • the pentapeptide composed of the amino acid sequence of KFLIK of the present invention penetrates to the muscle layer of the skin tissue through percutaneous absorption, pain can be prevented, alleviated or treated simply by applying it to the lesion site.
  • 'pain' means an unpleasant sensation caused by stimulation of a special nerve having a pain receptor, and includes all symptoms that are relieved, prevented or treated by the pentapeptide of the present invention.
  • the pain according to the invention may be acute or chronic pain.
  • the pain may be one or more selected from the group consisting of inflammatory pain, neuropathic pain, nociceptive pain and psychogenic pain, for example, cancerous pain in which nociceptive pain, inflammatory pain, etc. act in a complex way. cancer pain and postoperative pain; trigeminal neuralgia pain corresponding to neuropathic pain, idiopathic pain and diabetic neuropathic pain; And it may be one or more selected from the group consisting of migraine and menstrual pain corresponding to visceral pain, but is not limited thereto.
  • composition comprising the pentapeptide of the present invention can be applied to pain occurring in the skin or musculoskeletal system, for example, diabetic neuropathy, diabetic peripheral neuropathy, viral infection Pain caused by pain, nociceptive pain, facial neuralgia, postherpetic neuralgia, back pain, disc, radiculopathy, neuropathy, hyperalgesia, central nerve sensitization sensitization-related pain, allodynia, cancer pain, myofascial pain syndrome, carpal tunnel syndrome, cubital tunnel syndrome (ulnar neuropathy), de Quervain syndrome, rotator cuff syndrome, osteoarthritis, tendonitis, Tendon synovitis, lateral epicondylitis, medial epicondylitis, tendon damage, bursa inflammation, ligament inflammation, tennis elbow, golf elbow, knee joint pain, paraknee tendonitis, meniscus damage, finger joint pain, wrist tendonitis, wrist sprain , ankle sprain, sprain, fibro
  • the pentapeptide according to the present invention reaches the muscle layer just by applying it to the skin, and is absorbed through the skin to show an excellent analgesic effect. It can also work effectively for surrounding pain. For example, pain associated with sprains, bruises, joint pain, tendonitis, ligament inflammation, frozen shoulder, rotator cuff disease, etc. of the knee, elbow, finger, shoulder, ankle, foot, etc., and pain accompanying tennis elbow, golf elbow, and de Quervain syndrome It can be effectively prevented or treated.
  • Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating pain comprising a pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • the term 'prevention' refers to any action of suppressing or delaying pain by administering the composition containing the pentapeptide.
  • the term 'treatment' refers to any action in which pain is 'relieved' or 'improved' or is beneficially changed by administration of the composition containing the pentapeptide.
  • the pharmaceutical composition for the prevention or treatment of pain according to the present invention can be prepared according to a conventional method for oral formulations such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, external preparations, suppositories, and sterile injection solutions, respectively. It may be formulated and used in the form, and may include an appropriate carrier, excipient or diluent commonly used in the preparation of a pharmaceutical composition for formulation.
  • the pharmaceutically acceptable carriers include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia, gum, calcium phosphate, alginate, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinyl, which are commonly used in formulation. pyrrolidone, cellulose, water, syrup, methyl cellulose, methylhydroxybenzoate, propyl hydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, mineral oil, and the like.
  • the pharmaceutical composition may further include a lubricant, a wetting agent, a sweetening agent, a flavoring agent, an emulsifying agent, a suspending agent, a preservative, and the like, in addition to the above components.
  • the pharmaceutical composition may be administered orally or parenterally (eg, intramuscularly, intravenously, intraperitoneally, subcutaneously, intradermally, or locally applied) according to a desired method, and the dosage may vary depending on the patient's condition and although it varies depending on body weight, disease severity, drug form, administration route and time, it may be appropriately selected by those skilled in the art.
  • parenterally eg, intramuscularly, intravenously, intraperitoneally, subcutaneously, intradermally, or locally applied
  • the pharmaceutical composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • a 'pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is determined by the type, severity, and drug activity of the patient; Sensitivity to the drug, administration time, administration route and excretion rate, treatment period, factors including concurrent drugs and other factors well known in the medical field may be determined.
  • the pharmaceutical composition may be administered as an individual therapeutic agent or may be administered in combination with other pain therapeutic agents, may be administered simultaneously, separately, or sequentially with conventional therapeutic agents, and may be administered singly or multiple times. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount capable of obtaining the maximum effect with a minimum amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.
  • the effective amount of the pharmaceutical composition may vary depending on the patient's age, sex, condition, weight, absorption of the active ingredient into the body, inactivation rate, excretion rate, disease type, and drugs used in combination, the route of administration, the severity of obesity, It may be increased or decreased according to gender, weight, age, etc., for example, the pharmaceutical composition may be administered per 1 kg of the patient's body weight per day, about 0.0001 ⁇ g to 500mg, preferably 0.01 ⁇ g to 100mg.
  • Another aspect of the present invention provides a quasi-drug composition for preventing or improving pain comprising a pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • 'quasi-drug' refers to articles with a milder action than pharmaceuticals among articles used for the purpose of diagnosing, treating, improving, alleviating, treating or preventing diseases of humans or animals.
  • quasi-drugs This excludes products used for medicinal purposes, and includes products used for the treatment or prevention of human/animal diseases, and products with minor or no direct action on the human body.
  • the quasi-drug composition of the present invention may be prepared from one or more selected from the group consisting of body cleanser, foam, soap, mask, ointment, cream, lotion, essence and spray, but is not limited thereto.
  • the composition may be prepared in the form of a band, sanitary napkin, etc., but is not limited thereto.
  • the composition may be added as it is or used together with other quasi-drugs or quasi-drug ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method.
  • the present invention provides a cosmetic composition for alleviating pain comprising a pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • the cosmetic composition may be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, for example, a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing, It may be formulated as an oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation and spray, but is not limited thereto.
  • the cosmetic composition is a flexible lotion, nourishing lotion, nourishing cream, massage cream, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, spray, powder, hair tonic, hair cream, hair lotion, hair shampoo, hair conditioner , hair conditioner, hairspray, hair aerosol, pomade, solution such as gel, sol gel, emulsion, oil, wax, aerosol, etc. may be prepared in various forms, but is not limited thereto.
  • the cosmetic composition of the present invention may include other additives such as excipients and carriers in addition to the pentapeptide composed of the amino acid sequence of KFLIK, and it is possible to apply and blend as many common ingredients as necessary in general skin cosmetics.
  • the dosage form of the cosmetic composition is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or oxidation as a carrier component Zinc or the like may be used.
  • lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component, and in particular, in the case of a spray, additional chlorofluorohydrocarbon , propellants such as propane/butane or dimethyl ether, but are not limited thereto.
  • a solvent, solubilizer or emulsifier may be used as a carrier component, for example, water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl Benzoate, propylene glycol, 1,3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or fatty acid ester of sorbitan may be used.
  • a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethyl sorbitol ester, polyoxyethylene sorbitan ester, etc. , microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracanth may be used.
  • the formulation of the cosmetic composition is surfactant-containing cleansing
  • Amide ether sulfate, alkylamidobetaine, fatty alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative or ethoxylated glycerol fatty acid ester, etc. can be used.
  • the pentapeptide conjugate of the present invention includes a thickener, a surfactant, a viscosity modifier, a moisturizer, a pH modifier, a preservative, an essential oil, and the like, base ingredients for composing the shampoo.
  • CDE may be used as the thickener
  • LES as an anionic surfactant
  • coco betaine as an amphoteric surfactant
  • Poly Quarter may be used as the viscosity modifier
  • the moisturizer may include Glycerin may be used
  • citric acid and sodium hydroxide may be used as the pH adjusting agent.
  • Grapefruit extract and the like may be used as the preservative, and in addition, essential oils such as cedarwood, peppermint, and rosemary, silk amino acids, pentaol, or vitamin E may be added.
  • ingredients included in the cosmetic composition are ingredients commonly used in cosmetic compositions in addition to the pentapeptide and carrier ingredients of the present invention as active ingredients, for example, antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and fragrances. It may further include a conventional adjuvant, but is not limited thereto.
  • the present invention provides a method for preventing or treating pain comprising administering to a subject a pentapeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the present invention provides a pentapeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 for use in the prevention or treatment of pain.
  • the present invention provides a quasi-drug composition for preventing or improving pain comprising a pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • the present invention provides a cosmetic composition for alleviating pain comprising a pentapeptide composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
  • the 'subject' may include a human.
  • the term 'subject' may be an individual requiring administration of the pentapeptide of the present application (subject in need thereof), and the subject requiring the administration is an individual diagnosed with pain, It may include not only the individual but also the individual wishing to administer the disease or symptom to prevent or improve health.
  • the 'administration' means providing a predetermined substance to the patient by any suitable method, and the administration route of the composition of the present invention can be administered orally or parenterally through all general routes as long as it can reach the target tissue. have.
  • the composition may be administered by any device capable of transporting the active to a target cell.
  • the pentapeptide of the present invention suppresses pain caused by an inflammatory reaction by inhibiting the expression of pro-inflammatory cytokines in muscle cells, and inhibits the release of P substance from nerve terminals to prevent the transmission of pain, and to the skin. It penetrates to the nerve cells of the muscle layer just by application and has an excellent effect of suppressing pain, so it can be usefully used as a raw material for pharmaceuticals, quasi-drugs, or cosmetic compositions for the purpose of alleviating, improving, preventing or treating pain.
  • a novel peptide sequence 'KFLIK' consisting of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 was prepared using a known method. As a result of measuring the molecular weight of the peptide including the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 using a molecular weight analyzer, it was confirmed that the molecular weight corresponds to 647.4 Da.
  • the peptide of the present invention consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 was dissolved in sterile distilled water at a concentration of 1000 ppm, stored at 45° C. for 7 days, 14 days, 28 days, 60 days, and 75 days, and then HPLC analysis was performed.
  • the peptide of the present invention maintained stability for 75 days, which is the maximum observation day at 45°C.
  • the peptide of the present invention was dissolved in sterile distilled water at a concentration of 1000 ppm, heated at 121° C. for 15 minutes and 30 minutes, and then HPLC analysis was performed.
  • SH-SY5Y cells were seeded in a 6-well plate at a density of 3X10 5 cells/well, and cultured in an incubator at 37° C., 5% CO 2 for 24 hours, and then the medium was replaced with a serum-free medium. Thereafter, pentapeptides at concentrations of 10 ⁇ M, 50 ⁇ M, and 100 ⁇ M were treated in a 6-well plate, and as a positive control, 0.2 ⁇ M of botulinum toxin type C light chain (BoNT/C LC) was treated and cultured. After 24 hours had elapsed, cells were collected, lysates were obtained, and western blotting was performed for syntaxin 1a antibody (synaptic systems, Germany).
  • BoNT/C LC botulinum toxin type C light chain
  • the pentapeptide of the present invention has the effect of inhibiting the release of neurotransmitters by inhibiting the formation of the SNARE complex and preventing the synaptic vesicle from fusion with the presynaptic membrane.
  • the experimental group is a reaction buffer (50mM HEPES, 40mM 2-ME, 20 ⁇ M ZnCl 2 , pH 7.4) of the pentapeptide of the present invention at concentrations of 1 ⁇ g and 20 ⁇ M, 100 ⁇ M, and 200 ⁇ M of recombinant syntaxin 1a protein (Novus biologicals, USA). treatment, and the negative control group was treated with recombinant Syntaxin 1a protein only. After reacting at 37° C. for 4 hours, western blotting was performed using the Syntaxin 1a antibody (synaptic systems, Germany).
  • the pentapeptide of the present invention has the effect of inhibiting the release of neurotransmitters by degrading the syntaxin 1a protein and preventing the formation of the SNARE complex.
  • the secretion amount of the neurotransmitter acetylcholine was measured using a neuroblastoma-derived cell line (SH-SY5Y).
  • SH-SY5Y cells were injected into a dish and cultured in an incubator at 37° C., 5% CO 2 for 24 hours. Then, the medium was replaced with a serum-free medium and cultured for 48 hours. Thereafter, pentapeptides at concentrations of 1 ⁇ M, 10 ⁇ M, and 50 ⁇ M were treated in the dish, and as a positive control, 50 nM of tetanus was treated in the dish and cultured. After a certain period of time, the release of acetylcholine was induced by treatment with nicotine (NIC) and potassium chloride (KCl). Then, the secretion amount of acetylcholine contained in the medium was measured using an acetylcholine assay kit.
  • NIC nicotine
  • KCl potassium chloride
  • the pentapeptide according to the present invention actually exhibits the effect of inhibiting sweat secretion in the palms, soles, and armpits.
  • the degree of sweat secretion using starch and iodine was taken as an image and intensity analysis using Image J software. proceeded.
  • the pentapeptide of the present invention can provide a therapeutic effect in reducing sweating and preventing excessive sweat production just by applying it to the skin in patients with hyperhidrosis, thereby fundamentally blocking the occurrence of body odor It can be seen that can provide
  • a rhodamine-pentapeptide conjugate to which a fluorescent material is conjugated was prepared.
  • a pentapeptide solution of 10 mg/ml was prepared using 100 mM sodium bicarbonate (pH 9.0), and a 1 mg/ml NHS-rhodamine (Thermo Scientific, 46406) solution was prepared using dimethylformamide.
  • SH-SY5Y cells were inoculated into a 6-well plate at a density of 3X10 5 cells/well. 37° C., 5% CO 2 After culturing for 24 hours in an incubator, the medium was replaced with a serum-free medium. After treatment with rhodamine-peptide conjugates for 4 hours at different concentrations, cells were fixed by treatment with 4% paraformaldehyde, and nuclei were stained using a DAPI staining kit (Invitrogen, USA). Intracellular peptide penetration was observed through a fluorescence microscope. Blue indicates the nucleus of cells stained with DAPI, and red indicates 'rhodamine-pentapeptide' conjugate.
  • the pentapeptide of the present invention penetrated into the nerve cells from the coexistence of blue and red colors as shown in FIG. 7 .
  • TrkB Ab Cell signaling, USA
  • nuclear staining was performed using a DAPI staining kit (Invitrogen, USA). Peptide penetration into the tissue was observed through a fluorescence microscope. Blue indicates the nucleus of cells stained with DAPI, red indicates rhodamine-pentapeptide conjugate, and green indicates TrkB (nerve fiber marker).
  • the pentapeptide of the present invention can penetrate into nerve cells, penetrates to the muscle layer of skin tissue through percutaneous absorption, and coexists with nerve cell markers in the muscle layer, so it participates in the formation of the SNARE complex and releases excessive neurotransmitters It can be seen that the effect of suppressing sweat secretion caused by sweating and the effect of blocking the generation of body odor caused by sweat secretion can be exhibited.
  • the pentapeptide of the present invention can penetrate into nerve cells, penetrates to the muscle layer of skin tissue through transdermal absorption, and coexists with nerve cell markers in the muscle layer, so that the expression of proinflammatory cytokines in muscle cells and nerve endings It can be seen that it can exhibit the effect of inhibiting the occurrence and transmission of pain by participating in the inhibition of the release of pain transmission factors.
  • Corynebacterium which is known as a representative odor bacterium that decomposes substances contained in sweat to cause odor.
  • Corynebacterium xerosis, C.xerosis, KCTC 9105 was purchased from the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology and used. The strain was inoculated in brain heart infusion (Difco, USA) medium and cultured in an incubator at 37°C for 2 days. A diluted solution diluted to a concentration of 10 6 CFU/ml by adding the same medium to the cultured strain was used as the test bacterial solution. After dispensing 100 ⁇ L of the test bacterial solution in a 96 well plate, pentapeptide was treated for each concentration. For the positive control group, 1% triclosan was added instead of pentapeptide. After culturing for 48 hours, the absorbance at 600 nm was measured with a spectrophotometer to confirm the effect of inhibiting proliferation of the bacterium.
  • the pentapeptide of the present invention can effectively suppress the unique body odor generated during sweating by inhibiting the proliferation of the body odor-inducing strain.
  • the expression pattern of inflammation-related cytokines was confirmed using mouse myoblasts.
  • Pro-inflammatory cytokines are involved in the pain of neuropathy, and when pro-inflammatory cytokines such as TNF- ⁇ are expressed after nerve damage, an inflammatory response is triggered and pain is caused.
  • C2C12 cells a mouse source cell
  • DMEM (10% PBS) medium for 3 days.
  • the cells were grown to about 70-80% of the plate, they were replaced with a differentiation medium (DMEM, 5% horse serum) and cultured for 3 days. Thereafter, the cells were cultured for 4 days after replacement with a differentiation medium (DMEM, 2% horse serum) to induce differentiation from myoblasts to myotubes. Then, it was replaced with a serum-free medium and incubated for 2 hours, and pentapeptide concentrations of 1 ⁇ M, 10 ⁇ M, and 100 ⁇ M were pre-treated for 1 hour. Then, 20 nM of TNF- ⁇ was treated and cultured for 24 hours to induce an inflammatory response.
  • DMEM differentiation medium
  • DMEM 5% horse serum
  • the protein was quantified and mixed with a sample buffer to prepare a sample. It was developed on SDS-PAGE and nitrocellulose membrane and blocked with 5% skim milk.
  • COX-2 antibody Cell Signaling Technology, USA
  • IL-1 ⁇ antibody Cell Signaling Technology, USA
  • TNF- ⁇ antibody Cell Signaling Technology, USA
  • the pentapeptide of the present invention exhibits the effect of reducing the expression of IL-1 ⁇ , IL-1 ⁇ , COX-2, and TNF- ⁇ in the root canal, that is, the expression of pro-inflammatory cytokines at both the mRNA level and the protein level. , it can be seen that it can be usefully used as a substance for preventing or treating pain.
  • the release degree of substance P at the synapse using mouse neurons was confirmed. Since substance P transmits pain from the periphery to the center, inhibition of the release of substance P may exhibit a pain-relieving effect.
  • DRG dorsal root ganglion
  • the pentapeptide of the present invention can be usefully used as a preventive or therapeutic material for pain by inhibiting the release of P material from nerve cells to prevent the transmission of a pain signal.
  • PID Pain intensity after application of the pentapeptide of the present invention - Pain intensity before application of the pentapeptide of the present invention
  • the pentapeptide of the present invention can provide a therapeutic effect in reducing pain simply by applying it to the skin of patients suffering from muscle pain.

Abstract

본 발명은 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 조성물의 과도한 땀 발생 억제 용도, 체취를 억제 용도 또는 통증의 예방 또는 치료 용도에 관한 것이다.

Description

펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 조성물
본 발명은 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 조성물의 과도한 땀 발생 억제 용도, 체취를 억제 용도 또는 통증의 예방 또는 치료 용도에 관한 것이다.
다한증(hyperhidrosis)은 신체의 온도 조절에 필요한 것 이상으로 과도하게 비정상적으로 증가된 발한 또는 땀분비를 특징으로 하는 피부 장애를 의미한다. 다한증은 유전적 원인 또는 신체적, 정서적 스트레스로 인해 발생하며 전신 또는 신체의 특정 부위에 국소적으로 나타날 수 있다. 과도한 발한이 손바닥, 발바닥, 얼굴, 겨드랑이, 두피 등에 국소적으로 나타나는 경우, 이를 1차 또는 국소 다한증이라고 한다. 전신 또는 2차 다한증은 통상 신체 전체와 관련된다.
현재 다한증을 치료하는 방법에는 땀 억제제를 사용하는 방법, 땀샘을 일시적으로 막는 이온이동법, 발한을 자극하는 신경을 일시적으로 차단시키기 위한 보톡스 요법(WO2010-078242), 및 내시경 흉부 교감신경절제술이나 땀샘을 제거하는 수술적 방법 등이 있다. 이 중에서 보툴리눔 톡신을 사용하여 신경을 일시적으로 차단하는 방법의 경우 그 마비 효과가 평균 6개월간 가역적이므로, 이러한 처리에는 보툴리눔 톡신의 반복 주사가 필요하며, 보툴리눔 톡신은 환자의 면역계에 의해 인식 될 수 있는 크기를 가지므로 약제에 대한 면역 반응이 유발될 수 있다. 따라서, 면역 반응을 유발하지 않는 보다 간단하고 안정한 분자 구조를 가지면서, 높은 땀 감소 활성을 가지고, 긴 지속성 및 적은 부작용을 갖는 비-침습적인 치료를 가능하게 하는 분자의 개발이 필요한 실정이다.
한편, 체취는 땀샘에서 분비되는 땀이 미생물이나 세균 등에 의해 분해되는 과정에서 발생하는데 몸 전체에 분포하는 에크린 땀샘(eccrine sweat gland)과 겨드랑이 등 체모가 많은 부분에 분포하는 아포크린 땀샘(apocrine sweat gland) 등에서 분비되는 땀에 포함되어 있는 지방, 단백질, 피지 및 오염물 등이 미생물이나 세균 등에 의해 분해되는 과정에서 액취, 족취, 두취 등 불쾌감을 일으키는 체취를 발생시킨다. 일반적으로 체취를 제어하기 위해 소취, 항균, 마스킹 등의 방법을 사용하고 있으나, 체취를 가리기 위해 잘못된 향을 사용할 경우에는 오히려 악취를 풍기게 되어 역효과를 낼 수 있다. 또한, 소취 성분을 피부에 사용할 경우 처리 후에 다음 세정 시까지 일시적인 효과만을 제공할 뿐 세정 이후에는 재처리 해야하는 번거로움이 존재한다.
이에 본 발명자들은 체취의 근본적인 원인이라고 할 수 있는 과도한 땀의 발생을 억제함으로써 체취를 억제할 수 있는 소재를 개발하기 위하여 예의 노력한 결과, 본 발명자들에 의해 새롭게 합성된 펜타펩타이드가 안정한 분자 구조를 가지며, 경피를 통해 피부 조직까지 침투하여 높은 땀 감소 활성을 나타내므로 다한증 치료 및 체취 제어에 유용하게 사용될 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
한편, 통증은 다양한 원인에 의해 발생하며, 통증이 장시간 지속되거나 그 자극이 너무 심한 경우에는 일상생활에 지장이 생기고 불안과 공포를 느끼기도 한다. 일반적으로 통증은 발생 부위에 따라 두통, 흉통, 복통, 요통 등으로 부르며, 발생 기전에 따라 체성통(somatic pain), 내장통(visceral pain), 신경병증성 통증(neuropathic pain), 심인성 통증(psychogenic pain) 등으로 나뉘고, 시간적 개념에 따라 급성 통증과 만성통증으로 나뉜다. 임상적으로 중요한 의미를 갖는 만성 통증은 뚜렷하게 통증을 일으킬 만한 원인이 없는데도 불구하고 일반적으로 6개월 이상 통증이 지속됨을 호소하는 것을 말한다. 만성 통증의 대부분은 자발통 (spontaneous pain), 이질통 (allodynia) 및 통각과민 (hyperalgesia)을 특징으로 하는 신경병증성 통증의 형태로 발현되며, 경미한 온도 변화나 의복에 의한 가벼운 접촉 등에 의해서도 심한 통증이 유발되어 환자의 일상생활에 중대한 지장을 초래하고, 기존의 여러 가지 치료법에도 잘 반응 하지 않는 특징이 있다.
현재, 통증의 치료에는 신경 차단술 등의 침습적 치료법이나, 여러 종류의 약물 치료법 (아편계 약물, 신경계 이온통로 활성도 조절 약물, 항경련제 등)이 응용되고 있으나, 상기 약물들은 고용량으로 투여해야 그 효과를 나타내며, 초기에는 효과가 있더라도 장기간 사용시 내성이 생겨 효과가 없어지는 경우도 빈번하다. 또한, 위장관 출혈, 위장 장애, 간 손상 등의 부작용이 초래될 수 있다.
이에, 기존 치료법의 부작용을 해소할 수 있는 새로운 치료법으로 보툴리눔독소 A를 사용하는 방법이 소개되고 있다. Ranoux 등은 기계적 이질통을 가진 대상포진 후 통증, 수술 후 신경병성 통증 환자를 대상으로 보튤리눔 독소를 피내 주사를 시행 후 통증과 이질통 감소를 보고하였고(Ranoux et al., Annals of Neurology 64(3): 274-283 (2008)), Yuan 등은 당뇨병성 신경통 환자에서 통증 감소와 수면장애 개선을 보고하였다(Yuan et al., Neurology 72:1473-1478(2009)). 그러나 최근 위약을 투여하여 비교하였을 때 같은 효과를 보였다는 보고도 증가하고 있어 더 많은 연구 결과가 필요하다.
한편, 보툴리눔 톡신은 그 효과가 평균 6개월로 가역적이므로, 통증을 치료하기 위해 반복 주사가 필요하며 환자의 면역계에 의해 인식 될 수 있는 크기를 가지므로 약제에 대한 면역 반응이 유발될 수 있다. 따라서, 면역 반응을 유발하지 않고 보다 간단하고 안정한 분자 구조를 가지면서, 높은 통증 완화 활성을 가지고, 긴 지속성 및 적은 부작용을 갖는 비-침습적인 치료를 가능하게 하는 분자의 개발이 필요한 실정이다.
이에 본 발명자들은 새로운 통증 치료제를 개발하기 위하여 예의 노력한 결과, 새롭게 합성한 펜타펩타이드가 안정한 분자 구조를 가지며, 경피를 통해 피부 조직까지 침투하여 높은 통증 억제 활성을 나타내므로 통증 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 일 목적은 다한증을 예방 또는 치료하기 위한 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 일 목적은 다한증의 예방 또는 치료방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 일 목적은 다한증의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 펩타이드를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 일 목적은 다한증을 예방 또는 완화하거나, 체취를 억제하기 위한 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 일 목적은 체취를 억제하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 일 목적은 체취의 억제에 사용하기 위한 펩타이드를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 일 목적은 통증을 완화하기 위한 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 일 목적은 통증을 예방 또는 치료하기 위한 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 일 목적은 통증의 예방 또는 치료방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 일 목적은 통증의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 펩타이드를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 일 목적은 통증을 완화 또는 개선하기 위한 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 일 목적은 통증을 완화 또는 개선하기 위한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
이를 위하여, 본 발명의 일 측면은, 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 다한증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 일 측면은 개체(subject)에 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는 다한증의 예방 또는 치료방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 다한증의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은, 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 다한증의 예방 또는 완화, 또는 체취 억제용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 개체(subject)에 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는 체취 억제 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 체취 억제에 사용하기 위한 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은, 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 통증 완화용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 통증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 개체(subject)에 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는 통증의 예방 또는 치료방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 통증의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은, 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 통증의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 측면은, 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 통증 완화용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드는 경피(피부)를 통해 피부 조직의 근육층까지 흡수되고, 신경말단에서 신경전달 물질의 비정상적인 방출을 억제하여 땀의 발생을 줄일 수 있으므로, 바르는 것 만으로도 다한증의 증상을 예방, 완화, 개선 또는 치료하는 용도로 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 상기 펜타펩타이드는 과도한 땀의 생성을 억제함으로써 체취의 발생 원인을 사전에 차단하고 반영구적으로 체취 억제 효과를 제공할 수 있다.
본 발명의 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드는 근세포에서 전염증성 사이토카인의 발현을 억제하고, 신경말단에서 통증전달 인자의 방출을 억제하여 통증의 발생 및 전달을 억제할 수 있으므로, 통증을 완화, 개선, 예방 또는 치료하는 용도로 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 펜타펩타이드는 경피(피부)를 통해 피부 조직의 근육층까지 흡수되므로, 피부에 적용하는 의약품, 의약외품 및 화장료의 원료로 사용될 수 있다.
다만, 본 발명의 효과는 상기에서 언급한 효과로 제한되지 아니하며, 언급되지 않은 또 다른 효과들은 하기의 기재로부터 당업자에게 명확히 이해될 수 있을 것이다.
도 1a 및 도 1b는 KFLIK 펩타이드의 열안정성 평과 결과를 나타낸 것이다: 도 1a는 45℃에서 장기 보관시 펩타이드의 고온 안정성을 확인한 결과를 나타낸 것이고, 도 1b는 최대 가온 온도(121℃)에서 펩타이드의 고온 안정성을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 2a 및 도 2b는 신경세포에서 KFLIK 펩타이드 처리에 의한 SNARE 복합체의 형성 억제 효과를 나타낸 것이다: 도 2a는 SNARE 복합체의 형성 여부를 웨스턴-블랏으로 확인한 결과를 나타낸 것이고, 도 2b는 SNARE 복합체를 구성하는 신택신 1a의 분해 정도를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 신경세포에서 KFLIK 펩타이드 처리에 의한 신경전달물질의 방출 억제 효과를 나타낸 것이다.
도 4는 다한증 환자의 손바닥 부위에서 본 발명의 KFLIK 펩타이드 처리에 의한 상대적인 땀 감소 효과를 나타낸 것으로, A는 요오드-전분 실험결과를 이미지 사진으로 나타낸 것이고, B는 땀 감소 효과를 이미지 J 소프트웨어를 이용한 intensity 분석 결과로 나타낸 것이다.
도 5는 다한증 환자의 발바닥 부위에서 본 발명의 KFLIK 펩타이드 처리에 의한 상대적인 땀 감소 효과를 나타낸 것으로, A는 요오드-전분 실험결과를 이미지 사진으로 나타낸 것이고, B는 땀 감소 효과를 이미지 J 소프트웨어를 이용한 intensity 분석 결과로 나타낸 것이다.
도 6은 다한증 환자의 겨드랑이 부위에서 본 발명의 KFLIK 펩타이드 처리에 의한 상대적인 땀 감소 효과를 나타낸 것으로, A는 요오드-전분 실험결과를 이미지 사진으로 나타낸 것이고, B는 땀 감소 효과를 이미지 J 소프트웨어를 이용한 intensity 분석 결과로 나타낸 것이다.
도 7은 KFLIK 펩타이드에 형광 물질인 로다민을 붙여서 신경세포 내로 KFLIK 펩타이드가 침투하는지 확인한 형광 현미경 사진이다: A는 파란색으로 염색된 신경세포의 핵과 붉은색의 로다민-펜타펩타이드가 공존하는 것을 나타낸 것이고, B의 파란색은 DAPI로 염색된 신경 세포의 핵을 나타내며, C의 붉은색은 로다민-펩타이드를 나타낸다.
도 8은 실험동물의 등에 로다민-KFLIK 펩타이드를 도포한 후 피부 조직을 채취하여 근육층까지 KFLIK 펩타이드가 침투하는지 확인한 형광 현미경 사진이다: A의 파란색은 DAPI로 염색된 세포의 핵을 나타내고, B는 녹색의 TrkB 신경섬유 마커를 나타내고, C는 붉은색의 로다민-펜타펩타이드를 나타내고, D의 노란색은 근육층의 신경 세포까지 본 발명의 펜타펩타이드가 침투한 것을 나타낸 것이다.
도 9는 본 발명의 KFLIK 펩타이드의 체취 억제 효과를 나타낸 것으로, 코리네박테리움의 증식 억제 효과를 spectrophotometer를 이용한 흡광도 측정 결과로 나타낸 것이다. P/C는 양성대조군으로 1%의 트리클로산(triclosan)이다.
도 10a 및 도 10b는 근세포에서 KFLIK 펩타이드 처리에 의한 전염증성 사이토카인의 발현 억제 효과를 나타낸 것이다: 도 10a는 RT-PCR을 수행하여 IL-1α, TNF-α, IL-1β 및 COX-2 유전자의 mRNA 발현 수준을 확인한 결과를 나타낸 것이고, 도 10b는 웨스턴 블랏을 통해 COX-2, IL-1β, TNF-α 단백질의 발현 수준을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 11은 신경세포에서 KFLIK 펩타이드 처리에 의해 통증전달인자인 P 물질(substance P)의 방출이 억제되는 효과를 나타낸 것이다.
도 12a 및 도 12b는 인체효능평가를 통해 본 발명의 KFLIK 펩타이드 처리에 의한 근육통 완화 효과를 나타낸 것이다: 도 12a는 통증 평가 척도(Numeric rating scale, NRS)의 측정을 통해 통증 강도의 평균 값을 산출한 결과이고, 도 12b는 KFLIK 펩타이드 처리에 의한 통증 경감 정도를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 일 측면은 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 다한증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 명세서에서, 용어 '펩타이드'는 펩타이드 결합에 의해 아미노산 잔기들이 서로 결합되어 형성된 선형 또는 환형의 분자를 의미한다. 상기 펩타이드의 제작은 본 기술분야에서 공지된 통상의 생물학적 또는 화학적 합성 방법에 의해 달성될 수 있는 것이고, 일 예로 고상 합성 기술(solid-phase synthesis techniques)과 같은 방법에 의해 달성될 수 있다.
본 명세서에서, 용어 '펜타펩타이드'는 5개의 아미노산 잔기로 이루어진 선형 분자를 의미하며, 본 발명의 펜타펩타이드는 구체적으로 서열번호 1의 아미노산 서열(KFLIK)로 구성된 선형 펩타이드 분자를 의미한다.
상기 '펩타이드' 및 '펜타펩타이드'는 기능에 영향을 미치지 않는 범위 내에서, 아미노산 잔기의 결실, 삽입, 치환 또는 이들의 조합에 의해서 상이한 서열을 가지는 아미노산의 변이체들, 또는 단편들일 수 있다. 상기 펩타이드의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 아미노산 교환은 본 기술 분야에 공지되어 있다. 경우에 따라서는 인산화(phosphorylation), 황화(sulfation), 아크릴화(acrylation), 당화(glycosylation), 메틸화(methylation), 파네실화(farnesylation) 등으로 변형될 수 있다. 따라서, 본 발명은 KFLIK의 아미노산 서열로 구성된 펜타펩타이드와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 펩타이드 및 이의 변이체 또는 이의 활성 단편을 포함한다. 상기 실질적으로 동일한 단백질이란 상기 KFLIK의 아미노산 서열과 75% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 예컨대, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 의미하나 이에 한정되지 않으며, 75% 이상의 아미노산 서열의 상동성을 가지며 동일한 활성을 가진다면 본 발명의 범위에 포함된다. 또한, 본 발명의 펩타이드는 표적화 서열, 태그(tag), 표지된 잔기, 반감기 또는 펩타이드 안정성을 증가시키기 위한 특정 목적으로 제조된 아미노산 서열을 추가적으로 포함할 수 있다.
또한, 보다 나은 화학적 안정성, 강화된 약리 특성(반감기, 흡수성, 역가, 효능 등), 변경된 특이성(예를 들어, 광범위한 생물학적 활성 스펙트럼), 감소된 항원성을 획득하기 위하여, 본 발명의 펩타이드의 N-말단 또는 C-말단에 보호기가 결합되어 있을 수 있다. 예컨대, 상기 보호기는 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기 또는 폴리에틸렌글리콜(PEG)일 수 있으나, 펩타이드의 개질, 특히 펩타이드의 안정성 증진시킬 수 있는 성분이라면, 제한없이 포함할 수 있다. 상기 '안정성'은 생체 내 단백질 절단 효소의 공격으로부터 본 발명의 펩타이드를 보호하는 생체내(in vivo)에서의 안정성뿐만 아니라, 저장안정성(예컨대, 상온 저장 안정성)도 포함하는 의미로 사용된다.
본 발명의 KFLIK의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드는 SNARE 복합체의 형성을 저해하여 신경말단에서 신경전달물질이 과도하게 방출되는 것을 억제함으로써 다한증을 예방 또는 치료할 수 있다.
또한, 본 발명의 KFLIK의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드는 다한증이 나타나는 피부 부위에서 땀의 발생을 억제하는 효과를 나타내어 다한증을 예방 또는 완화 할 수 있다.
또한, 본 발명의 KFLIK의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드는 경피흡수를 통해 피부 조직의 근육층까지 침투하므로, 병변 부위에 바르는 것 만으로 다한증의 증상을 개선 또는 완화 할 수 있다.
본 발명에서 '다한증'이란 신체를 냉각시키는데 필요한 정도를 넘어선 과도하고 통제되지 않은 발한으로 특성화되는 질병 상태를 의미하는 것으로, 땀샘의 기능항진 및 그의 콜린성 자극의 교란에 의해 과도하게 땀이 분비되는 질환 또는 증상을 의미한다. 본 발명에서 다한증은 국소 다한증과 전신 다한증을 모두 포함하며, 예를 들어 얼굴, 이마, 목, 손, 발 및 겨드랑이로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나의 피부 부위에 발생하는 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
구체적인 실시예에서, 본 발명의 펜타펩타이드를 함유하는 조성물을 다한증 환자의 한쪽 손바닥, 발바닥 및 겨드랑이 부위에 도포하였을 때, 위 조성물을 도포하지 않은 반대 방향의 대조 부위에 비해 땀 생성이 45% 내지 90% 감소하는 것을 확인하였다.
본 발명에서 용어 '예방'은 상기 펜타펩타이드를 포함하는 조성물의 투여로 통증을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 용어 '치료'는 상기 펜타펩타이드를 포함하는 조성물의 투여로 통증이 '완화' 또는 '개선'되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에 따른 다한증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구제 제형, 외용제, 좌제, 및 멸균 주사용액 형태로 제형화되어 사용할 수 있고, 제형화를 위하여 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다.
상기 약학적으로 허용되는 담체는 제제시 통상적으로 이용되는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아, 고무, 인산칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세 결정성 셀룰로스, 폴리비닐 피로리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필 히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 미네랄 오일 등을 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 더 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여(예를 들어, 근육 내, 정맥 내, 복강 내, 피하, 피내, 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서 '약학적으로 유효한 양'은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 상기 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 비만 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 동시에, 별도로, 또는 순차적으로 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
상기 약학적 조성물의 유효량은 환자의 연령, 성별, 상태, 체중, 체내에 활성 성분의 흡수도, 불활성율, 배설 속도, 질병 종류, 병용되는 약물에 따라 달라질 수 있으며, 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라 증감될 수 있으며, 예를 들어 상기 약학적 조성물을 1일당 환자 체중 1㎏ 당 약 0.0001㎍ 내지 500mg, 바람직하게는 0.01㎍ 내지 100mg 투여할 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 KFLIK의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 다한증의 예방 또는 완화, 또는 체취 억제용 조성물을 제공한다.
본 발명의 KFLIK의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드는 SNARE 복합체의 형성을 저해하여 신경말단에서 신경전달물질이 과도하게 방출되는 것을 억제함으로써 다한증을 예방 또는 치료할 수 있고, 과도한 땀 생성에 의해 발생하는 체취를 억제할 수 있다.
또한, 본 발명의 KFLIK의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드는 다한증이 나타나는 피부 부위에서 땀의 발생을 억제하는 효과를 나타내어 다한증을 예방 또는 완화 할 수 있고, 과도한 땀 생성에 의해 발생하는 체취를 억제할 수 있다.
또한, 본 발명의 KFLIK의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드는 체취 유발 균주의 생장을 저해함으로써, 땀에 포함된 물질이 분해되어 체취가 발생하는 것을 억제할 수 있다.
상기 펩타이드, 펜타펩타이드 및 다한증의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
본 명세서에서, 상기 '체취'는 땀샘 분비물 즉, 땀과 함께 배출된 지방, 단백질, 피지 및/또는 노폐물이 박테리아에 의해 분해되어 발생하는 분해된 산물의 악취를 의미하고, 구체적으로, 신체 중 땀이 많이 발생되는 신체 부위 예컨대, 겨드랑이, 발, 손, 이마, 목, 얼굴, 또는 두피 부위에서 발생되는 악취일 수 있다.
본 명세서에서, 상기 '체취 억제'는 땀샘 분비물이 미생물에 의해 분해된 산물에 의한 악취를 방지하거나 또는 체취의 원인인 땀의 발생을 억제하는 것을 의미한다. 구체적으로, 상기 체취 억제는 겨드랑이, 발, 손, 이마, 목, 얼굴 또는 두피 부위에서의 악취를 방지하거나, 상기 부위에서의 땀 생성을 억제하는 것일 수 있고, 보다 구체적으로 액취증을 예방하는 것일 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 KFLIK의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 다한증의 예방 또는 완화, 또는 체취 억제용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 화장료 조성물은 본 기술분야에서 통상적으로 제조되는 임의의 제형으로 제조될 수 있고, 예를 들면, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이, 파우더, 데오드란트, 헤어토닉, 헤어크림, 헤어로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어컨디셔너, 헤어스프레이, 헤어 에어졸, 포마드, 젤 등과 같은 용액, 솔젤, 에멀젼, 오일, 왁스, 에어졸 등의 다양한 형태로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물은 KFLIK의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드에 더하여 부형제, 담체 등 기타 첨가제를 포함할 수 있으며 일반 피부 화장료에 배합되는 보통의 성분을 필요한 만큼 적용 배합하는 것이 가능하다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀루로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토오스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 사용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체가 포함될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용될 수 있고, 예를 들면 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 등과 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 헤어샴푸인 경우에는 본 발명의 트롤록스-펩타이드 결합체에 증점제, 계면활성제, 점도 조절제, 보습제, pH 조절제, 방부제, 에센셜 오일 등과 같이 샴푸를 조성하기 위한 베이스 성분들이 혼합될 수 있다. 상기 증점제로는 CDE가 사용될 수 있고, 상기 계면활성제로는 음이온 계면활성제인 LES와, 양쪽성 계면활성제인 코코 베타인이 사용될 수 있고, 상기 점도조절제로는 폴리 쿼터가 사용될 수 있으며, 상기 보습제로는 글리세린이 사용될 수 있고, 상기 pH 조절제로는 구연산, 수산화나트륨이 사용될 수 있다. 상기 방부제로는 자몽 추출물 등이 사용될 수 있고, 이 외에도 시더우드, 페퍼민트, 로즈마리 등의 에센셜 오일과 실크 아미노산, 펜타올 또는 비타민 E가 첨가될 수 있다.
상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 본 발명의 상기 트롤록스-펩타이드 결합체와 담체 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 성분들, 예를 들면 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 등을 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또 다른 일 측면에서, 본 발명은 개체(subject)에 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는 다한증의 예방 또는 치료방법을 제공한다.
또 다른 일 측면에서, 본 발명은 다한증의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 제공한다.
또 다른 일 측면에서, 본 발명은 개체(subject)에 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는 체취 억제 방법을 제공한다.
또 다른 일 측면에서, 본 발명은 체취 억제에 사용하기 위한 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 제공한다.
상기‘개체(subject)'는 인간을 포함하는 것일 수 있다. 또한 용어 '개체(subject)'는 본원의 펜타펩타이드의 투여를 필요로 하는 개체(subject in need thereof)일 수 있으며, 상기 투여를 필요로 하는 개체는 다한증 또는 체취증에 대해 진단을 받은 개체, 다한증 또는 체취증 관련 증상이 발현된 개체뿐만 아니라 상기 질환이나 증상의 발현을 예방하거나 건강 개선을 위해 투여를 희망하는 개체를 포함하는 것일 수 있다.
상기 '투여'는 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며, 본 발명의 펜타펩타이드의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 일반적인 모든 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 펜타펩타이드는 활성물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
상술한 바와 같이, 본 발명의 펜타펩타이드는 신경세포에서 SNARE 복합체의 형성을 저해함으로써 신경전달물질의 과도한 방출을 억제하고, 땀이 과도하게 생성되는 부위에 바르는 것만으로도 근육층의 신경 세포까지 침투하여 땀 생성을 억제하는 효과가 우수하므로 다한증의 예방, 개선, 완화 또는 치료 또는 체취 억제를 목적으로 하는 의약품 또는 화장료 조성물의 원료로 사용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 측면은 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 통증 완화용 조성물을 제공한다.
본 명세서에서, 용어 '펩타이드'는 펩타이드 결합에 의해 아미노산 잔기들이 서로 결합되어 형성된 선형 또는 환형의 분자를 의미한다. 상기 펩타이드의 제작은 본 기술분야에서 공지된 통상의 생물학적 또는 화학적 합성 방법에 의해 달성될 수 있는 것이고, 일 예로 고상 합성 기술(solid-phase synthesis techniques)과 같은 방법에 의해 달성될 수 있다.
본 명세서에서, 용어 '펜타펩타이드'는 5개의 아미노산 잔기로 이루어진 선형 분자를 의미하며, 본 발명의 펜타펩타이드는 구체적으로 서열번호 1의 아미노산 서열(KFLIK)로 구성된 선형 펩타이드 분자를 의미한다.
상기 '펩타이드' 및 '펜타펩타이드'는 기능에 영향을 미치지 않는 범위 내에서, 아미노산 잔기의 결실, 삽입, 치환 또는 이들의 조합에 의해서 상이한 서열을 가지는 아미노산의 변이체들, 또는 단편들일 수 있다. 상기 펩타이드의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 아미노산 교환은 본 기술 분야에 공지되어 있다. 경우에 따라서는 인산화(phosphorylation), 황화(sulfation), 아크릴화(acrylation), 당화(glycosylation), 메틸화(methylation), 파네실화(farnesylation) 등으로 변형될 수 있다. 따라서, 본 발명은 KFLIK의 아미노산 서열로 구성된 펜타펩타이드와 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 펩타이드 및 이의 변이체 또는 이의 활성 단편을 포함한다. 상기 실질적으로 동일한 단백질이란 상기 KFLIK의 아미노산 서열과 75% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 예컨대, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 의미하나 이에 한정되지 않으며, 75% 이상의 아미노산 서열의 상동성을 가지며 동일한 활성을 가진다면 본 발명의 범위에 포함된다. 또한, 본 발명의 펩타이드는 표적화 서열, 태그(tag), 표지된 잔기, 반감기 또는 펩타이드 안정성을 증가시키기 위한 특정 목적으로 제조된 아미노산 서열을 추가적으로 포함할 수 있다.
또한, 보다 나은 화학적 안정성, 강화된 약리 특성(반감기, 흡수성, 역가, 효능 등), 변경된 특이성(예를 들어, 광범위한 생물학적 활성 스펙트럼), 감소된 항원성을 획득하기 위하여, 본 발명의 펩타이드의 N-말단 또는 C-말단에 보호기가 결합되어 있을 수 있다. 예컨대, 상기 보호기는 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기 또는 폴리에틸렌글리콜(PEG)일 수 있으나, 펩타이드의 개질, 특히 펩타이드의 안정성 증진시킬 수 있는 성분이라면, 제한없이 포함할 수 있다. 상기 '안정성'은 생체 내 단백질 절단 효소의 공격으로부터 본 발명의 펩타이드를 보호하는 생체 내(in vivo)에서의 안정성뿐만 아니라, 저장안정성(예컨대, 상온 저장 안정성)도 포함하는 의미로 사용된다.
본 발명의 KFLIK의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드는 근세포에서 전염증성 사이토카인의 발현을 억제하여 염증반응을 억제하므로 미세 열상 등에 의한 통증을 예방 또는 치료할 수 있다.
또한, 본 발명의 KFLIK의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드는 시냅스 뉴런에서 분비되는 통증전달인자인 물질 P(substance P)의 방출을 억제하여 통증의 전달을 방지하므로 통증을 예방 또는 치료할 수 있다.
또한, 본 발명의 KFLIK의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드는 경피흡수를 통해 피부 조직의 근육층까지 침투하므로, 병변 부위에 바르는 것 만으로 통증을 예방, 완화 또는 치료 할 수 있다.
본 발명에서 '통증'은 통증 수용체를 지닌 특수한 신경에 대한 자극으로 인해 생기는 불쾌한 감각을 의미하며, 본 발명의 펜타펩타이드에 의해 그 감각이 완화, 예방 또는 치료되는 모든 증상을 포함한다. 본 발명에 따른 통증은 급성 또는 만성 통증일 수 있다.
본 발명에서, 상기 통증은 염증성 통증, 신경병증성 통증, 통각수용성 통증 및 심인성 통증으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있으며, 예를 들어, 통각성수용성 통증, 염증성 통증 등이 복합적으로 작용하는 암성 통증(cancer pain) 및 수술 후 통증(postoperative pain); 신경병성 통증에 해당하는 삼차 신경통(trigeminal neuralgia pain), 특발성 통증(idiopathic pain) 및 당뇨성 신경병성 통증(diabetic neuropathic pain); 및 내장통에 해당하는 편두통 및 생리통으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명의 펜타펩타이드를 포함하는 조성물은 피부 또는 근골격계에 발생하는 통증에 적용할 수 있으며, 예를 들어, 당뇨신경병증(diabetic neuropathy), 당뇨말초신경병증(diabetic peripheral neuropathy), 바이러스 감염에 의한 통증, 침해성 통증(nociceptive pain), 안면신경통, 대상포진후통증(postherpetic neuralgia), 요통, 디스크, 신경근병증(radiculopathy), 신경병증(neuropathy), 통각과민증(hyperalgesia), 중추신경감작(central sensitization) 관련 통증, 이질통(allodynia), 암통증(cancer pain), 근막통증증후군, 손목터널증후군, 팔꿉굴증후군(척골신경병증), 드퀘르뱅증후군, 회전근개증후군, 골관절염(osteoarthritis), 힘줄염, 힘줄윤활막염, 외측상과염, 내측상과염, 힘줄손상, 윤활낭염증, 인대염증, 테니스엘보, 골프엘보, 무릎관절통, 무릎주변힘줄염, 반월상연골 손상, 손가락관절통, 손목힘줄염, 손목염좌, 발목염좌, 염좌, 섬유근육통(fibromyalgia), 족저근막염, 염증성 관절염, 감염성 관절염, 류마티스관절염, 퇴행성 관절통증, 오십견(frozen shoulder), 통풍, 산후관절통, 골수염, 강직성 척추염(ankylosing spondylitis), 퇴행성 척추장애, 요추관 협착증, 대퇴부 통증(cruralgia), 염좌, 타박상, 관절통 및 좌골신경통(sciatica)에서 선택되는 하나 이상에 수반되는 통증일 수 있다.
구체적으로, 본 발명에 따른 펜타펩타이드는 피부에 바르는 것 만으로도 근육층까지 도달하고, 피부를 통해 흡수되어 우수한 진통 효과를 나타내므로, 특히 피부 또는 피부와 가까이 위치한 조직의 통증, 특히 피하지방이 얇은 부위의 주위의 통증에도 효과적으로 작용할 수 있다. 예를 들어, 무릎, 팔꿈치, 손가락, 어깨 발목, 발 등의 부위의 염좌, 타박상, 관절통, 힘줄염증, 인대염증, 오십견, 회전근개질환 등과 테니스엘보, 골프엘보, 드퀘르뱅 증후군에 수반되는 통증을 효과적으로 예방, 또는 치료할 수 있다.
본 발명의 다른 일 측면은, 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 통증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 용어 '예방'은 상기 펜타펩타이드를 포함하는 조성물의 투여로 통증을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 용어 '치료'는 상기 펜타펩타이드를 포함하는 조성물의 투여로 통증이 '완화' 또는 '개선'되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에 따른 통증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구제 제형, 외용제, 좌제, 및 멸균 주사용액 형태로 제형화되어 사용할 수 있고, 제형화를 위하여 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다.
상기 약학적으로 허용되는 담체는 제제시 통상적으로 이용되는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아, 고무, 인산칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세 결정성 셀룰로스, 폴리비닐 피로리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필 히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 미네랄 오일 등을 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 더 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여(예를 들어, 근육 내, 정맥 내, 복강 내, 피하, 피내, 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여 경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서 '약학적으로 유효한 양'은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 상기 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 통증 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 동시에, 별도로, 또는 순차적으로 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
상기 약학적 조성물의 유효량은 환자의 연령, 성별, 상태, 체중, 체내에 활성 성분의 흡수도, 불활성율, 배설 속도, 질병 종류, 병용되는 약물에 따라 달라질 수 있으며, 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라 증감될 수 있으며, 예를 들어 상기 약학적 조성물을 1일당 환자 체중 1㎏ 당 약 0.0001㎍ 내지 500mg, 바람직하게는 0.01㎍ 내지 100mg 투여할 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 측면은, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 통증의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.
상기 펩타이드, 펜타펩타이드 및 통증의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
본 발명의 용어 '의약외품'은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중에서 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 약사법에 따르면 의약외품이랑 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로 사람/동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함된다.
본 발명의 의약외품 조성물은 바디 클렌저, 폼, 비누, 마스크, 연고제, 크림, 로션, 에센스 및 스프레이로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 상기 조성물은 밴드, 생리대 등의 형태로 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 펜타펩타이드를 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 통증 완화용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 펩타이드, 펜타펩타이드 및 통증의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
상기 화장료 조성물은 본 기술분야에서 통상적으로 제조되는 임의의 제형으로 제조될 수 있고, 예를 들면, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이, 파우더, 헤어토닉, 헤어크림, 헤어로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어컨디셔너, 헤어스프레이, 헤어 에어졸, 포마드, 젤 등과 같은 용액, 솔젤, 에멀젼, 오일, 왁스, 에어졸 등의 다양한 형태로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물은 KFLIK의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드에 더하여 부형제, 담체 등 기타 첨가제를 포함할 수 있으며 일반 피부 화장료에 배합되는 보통의 성분을 필요한 만큼 적용 배합하는 것이 가능하다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀루로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토오스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 사용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체가 포함될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용될 수 있고, 예를 들면 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형의 형태가 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 등과 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 헤어샴푸인 경우에는 본 발명의 펜타펩타이드 결합체에 증점제, 계면활성제, 점도 조절제, 보습제, pH 조절제, 방부제, 에센셜 오일 등과 같이 샴푸를 조성하기 위한 베이스 성분들이 혼합될 수 있다. 상기 증점제로는 CDE가 사용될 수 있고, 상기 계면활성제로는 음이온 계면활성제인 LES와, 양쪽성 계면활성제인 코코 베타인이 사용될 수 있고, 상기 점도조절제로는 폴리 쿼터가 사용될 수 있으며, 상기 보습제로는 글리세린이 사용될 수 있고, 상기 pH 조절제로는 구연산, 수산화나트륨이 사용될 수 있다. 상기 방부제로는 자몽 추출물 등이 사용될 수 있고, 이 외에도 시더우드, 페퍼민트, 로즈마리 등의 에센셜 오일과 실크 아미노산, 펜타올 또는 비타민 E가 첨가될 수 있다.
상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 본 발명의 상기 펜타펩타이드와 담체 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 성분들, 예를 들면 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 등을 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또 다른 일 측면에서, 본 발명은 개체(subject)에 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는 통증의 예방 또는 치료방법을 제공한다.
또 다른 일 측면에서, 본 발명은 통증의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 제공한다.
또 다른 일 측면에서, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 통증의 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.
또 다른 일 측면에서, 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 통증 완화용 화장료 조성물을 제공한다.
상기‘개체(subject)'는 인간을 포함하는 것일 수 있다. 또한 용어 '개체(subject)'는 본원의 펜타펩타이드의 투여를 필요로 하는 개체(subject in need thereof)일 수 있으며, 상기 투여를 필요로 하는 개체는 통증에 대해 진단을 받은 개체, 통증이 발현된 개체뿐만 아니라 상기 질환이나 증상의 발현을 예방하거나 건강 개선을 위해 투여를 희망하는 개체를 포함하는 것일 수 있다.
상기 '투여'는 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 일반적인 모든 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 조성물은 활성물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
상술한 바와 같이, 본 발명의 펜타펩타이드는 근세포에서 전염증성 사이토카인의 발현을 억제함으로써 염증 반응에 의한 통증을 억제하고, 신경 말단에서 P 물질의 방출을 억제하여 통증의 전달을 방지하며, 피부에 바르는 것만으로도 근육층의 신경 세포까지 침투하여 통증을 억제하는 효과가 우수하므로 통증의 완화, 개선, 예방 또는 치료를 목적으로 하는 의약품, 의약외품 또는 화장료 조성물의 원료로 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1]
신규한 펜타펩타이드의 합성 및 물성 확인
1-1. 펜타펩타이드의 합성
서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열로 구성되는 신규 펩타이드 서열 'KFLIK'은 공지의 방법을 이용하여 제조하였다. 분자량 측정기를 이용하여 상기 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드의 분자량을 측정한 결과, 그 분자량이 647.4 Da에 해당함을 확인하였다.
1-2. 장기 보관시 고온안정성 평가
서열번호 1의 아미노산 서열로 구성된 본 발명의 펩타이드를 1000ppm 농도로 멸균 증류수에 녹이고, 45℃에서 7일, 14일, 28일, 60일, 75일 동안 보관한 후, HPLC 분석을 수행하였다.
그 결과, 도 1a에 나타낸 바와 같이, 45℃ 조건에서 최대 관찰일인 75일 동안 본 발명의 펩타이드가 안정성을 유지하는 것을 확인할 수 있었다.
1-3. 고온 안정성 평가
본 발명의 펩타이드를 1000ppm 농도로 멸균 증류수에 녹이고, 121℃에서 15분, 30분 동안 가온 한 후 HPLC 분석을 수행하였다.
그 결과, 도 1b에 나타낸 바와 같이, 121℃에서 최대 가온 시간인 30분 동안 본 발명의 펩타이드가 안정성을 유지하는 것을 확인할 수 있었다.
[실험예 1]
신경세포에서 SNARE 복합체 형성 억제 효과 확인
1-1. SNARE 복합체 형성 억제 효과 확인
본 발명의 펜타펩타이드에 의한 신경세포에서의 신경전달물질 방출 저해 효과를 확인하기 위하여, 신경아세포종 유래의 세포주(SH-SY5Y)를 사용하여 SNARE 복합체 형성 억제 여부를 확인하였다.
구체적으로, SH-SY5Y 세포를 3X105 세포/웰의 밀도로 6-웰 플레이트에 접종하고 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양한 후 배지를 무혈청 배지로 교체하였다. 그 후 10μM, 50μM, 100μM 농도의 펜타펩타이드를 6-웰 플레이트에 처리하고, 양성대조군으로는 0.2μM의 보툴리눔 독소 타입 C 경쇄(BoNT/C LC)를 처리하여 배양하였다. 24시간이 경과한 후 세포를 수집하고 용해물을 확보하여 신택신 1a 항체(synaptic systems, Germany)에 대한 웨스턴 블랏을 수행하였다.
그 결과, [도 2a]에 나타난 바와 같이 본 발명의 펜타펩타이드를 처리하면, 보툴리눔 독소를 처리한 양성대조군과 유사하게 SNARE 복합체 형성이 억제되었다.
이를 통해, 본 발명의 펜타펩타이드는 SNARE 복합체가 형성되는 것을 억제하여 시냅스 소포가 시냅스전 막과 융합되는 것을 방지함으로써 신경전달물질 방출을 저해하는 효과가 있음을 알 수 있다.
1-2. 신택신 1a 단백질 분해 효과 확인
본 발명의 펜타펩타이드에 의한 신경세포에서의 신경전달물질 방출 저해 효과를 확인하기 위하여, 본 발명의 펜타펩타이드가 t-SNARE를 구성하는 신택신 1a 단백질에 대한 분해능이 있는지 확인하였다.
구체적으로, 실험군은 재조합 신택신 1a 단백질(Novus biologicals, USA) 1μg과 20μM, 100μM, 200μM 농도의 본 발명의 펜타펩타이드를 반응 완충액(50mM HEPES, 40mM 2-ME, 20μM ZnCl2, pH 7.4)에 처리하고, 음성 대조군(Control)은 재조합 신택신 1a 단백질만 처리하였다. 37℃ 조건에서 4시간 동안 반응시킨 후, 신택신 1a 항체(synaptic systems, Germany)를 사용하여 웨스턴 블랏을 수행하였다.
그 결과, [도 2b]에 나타난 바와 같이 본 발명의 펜타펩타이드를 처리하면 재조합 신택신 1a 단백질의 밴드가 농도 의존적으로 감소되는 것을 확인하였다.
이를 통해, 본 발명의 펜타펩타이드는 신택신 1a 단백질을 분해하며, SNARE 복합체가 형성되지 않게 함으로써 신경전달물질의 방출을 저해하는 효과가 있음을 알 수 있다.
[실험예 2]
신경세포에서 신경전달물질 방출 저해 효과 확인
본 발명의 펜타펩타이드에 의한 신경세포에서의 신경전달물질 방출 저해 효과를 확인하기 위하여, 신경아세포종 유래의 세포주(SH-SY5Y)를 사용하여 신경전달물질인 아세틸콜린(acetylcholine)의 분비량을 측정하였다.
구체적으로, SH-SY5Y 세포를 디쉬에 주입하고 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양한 후 배지를 무혈청 배지로 교체하고 48시간 동안 배양하였다. 그 후 1μM, 10μM, 50μM 농도의 펜타펩타이드를 디쉬에 처리하고, 양성대조군으로는 50nM의 테타누스(tetanus)를 디쉬에 처리하여 배양하였다. 일정 시간이 지난 후 니코틴(NIC)과 염화칼륨(KCl)을 처리하여 아세틸콜린의 방출을 유도하였다. 그 다음, 배지에 포함되어 있는 아세틸콜린의 분비량을 아세틸콜린 분석 키트를 사용하여 측정하였다.
그 결과, [도 3]에 나타난 바와 같이 니코틴(NIC)과 염화칼륨(KCl) 만을 처리한 군에서는 아무 것도 처리하지 않은 대조군에 비해 아세틸콜린의 방출량이 증가하였으나, 본 발명의 펜타펩타이드를 처리한 군에서는 모두 유의성 있게 아세틸콜린의 방출이 억제되었다.
[실험예 3]
인체효능평가를 통한 펜타펩타이드의 다한증 억제 효과 확인
본 발명에 따른 펜타펩타이드가 실제로 손바닥, 발바닥 및 겨드랑이의 땀 분비를 억제하는 효과를 나타내는지 확인하기 위하여, 녹말과 요오드를 사용하여 땀이 분비되는 정도를 이미지로 촬영하고 Image J software를 이용한 intensity 분석을 진행하였다.
구체적으로, 국소 다한증(손바닥, 발바닥, 겨드랑이)을 가진 실험 대상자 10명을 대상으로 땀의 분비 정도에 대한 인체효능평가를 실시하였다. 본 발명의 펜타펩타이드가 2000ppm 함유된 용액을 메조롤러를 이용하여 실험자의 한쪽 방향의 손바닥, 발바닥 또는 겨드랑이에 도포하였다. 이때, 반대 방향의 손바닥, 발바닥, 겨드랑이는 대조군으로 정하였고, 대조군의 경우 펜타펩타이드가 함유된 용액 대신 PBS를 메조롤러로 도포하였다. 충분히 흡수시키고 자연 건조한 후 동일한 부위에 멸균 거즈 패드로 요오드 용액을 바르고 자연 건조 시켰다. 요오드 용액이 완전히 건조되었을 때, 솜으로 요오드가 도포된 영역 위에 옥수수 전분을 고루 도포하여 전분층을 형성했다. 땀이 분비되는 경우 요오드와 전분이 녹으면서 청자색으로 색 변화가 일어나게 되므로, 대상자의 손바닥, 발바닥 또는 겨드랑이에서 시간에 따른 색 변화를 관찰하였다. 이미지 촬영 후 Image J software를 이용한 intensity 분석을 진행하였다.
그 결과, [도 4]를 통해, 본 발명의 펜타펩타이드를 포함하는 로션을 바른 피실험자의 손에서 분비되는 땀의 양이 약 74% 감소하는 것을 확인하였다. 또한, [도 5]를 통해, 본 발명의 펜타펩타이드를 포함하는 로션을 바른 피실험자의 발바닥에서 분비되는 땀의 양이 약 58% 감소하는 것을 확인하였으며, [도 6]를 통해, 본 발명의 펜타펩타이드를 포함하는 로션을 바른 피실험자의 겨드랑이에서 분비되는 땀의 양이 약 88% 감소하는 것을 확인하였다.
이를 통해, 본 발명의 펜타펩타이드가 다한증을 갖는 환자들에서 피부에 바르는 것 만으로도 발한의 감소 및 과도한 땀 생성 방지에 있어서 치료적 효과를 제공할 수 있으며, 이로 인해 체취의 발생을 원천적으로 차단하는 효과를 제공할 수 있음을 알 수 있다.
[실험예 4]
세포 내 또는 피부 조직 침투 양상 확인
4-1. 로다민-펜타펩타이드 접합체의 제조
본 발명의 펩타이드의 세포 내 침투 여부 또는 조직 침투 양상을 확인하기 위하여 형광 물질이 접합된 로다민-펜타펩타이드 접합체를 제조하였다. 먼저, 100mM 중탄산나트륨(pH 9.0)을 이용하여 10mg/ml의 펜타펩타이드 용액을 제조하고, 디메틸포름아미드를 이용하여 1mg/ml NHS-로다민(Thermo Scientific, 46406) 용액을 제조하였다. 제조된 용액을 펜타펩타이드:NHS-로다민 = 1:10(몰 비)가 되도록 혼합하였다. 차광 후 인버팅하면서 상온에서 1시간 동안 반응시키고, 반응물을 투석한 후 LC/MS로 접합 여부를 확인하였다.
4-2. 세포 내 침투 확인
본 발명에 펜타펩타이드가 신경 세포 내로 침투하는지 확인하기 위하여, SH-SY5Y 세포를 3X105 세포/웰의 밀도로 6-웰 플레이트에 접종하였다. 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양한 후 배지를 무혈청 배지로 교체하였다. 로다민-펩타이드 접합체를 농도별로 4시간 동안 처리한 후, 4% 파라포름알데히드를 처리하여 세포를 고정하고 DAPI 염색 키트(Invitrogen, USA)를 이용하여 핵을 염색하였다. 형광 현미경을 통해 세포 내 펩타이드 침투 여부를 관찰하였다. 파란색은 DAPI로 염색된 세포의 핵을 나타내며, 붉은색은 '로다민-펜타펩타이드' 접합체를 나타낸다.
그 결과, [도 7]에 나타난 바와 같이 파란색과 붉은색이 공존하는 것으로부터 본 발명의 펜타펩타이드가 신경 세포 내로 침투한 것을 확인하였다.
4-3. 조직 침투 확인
7주령 SD 랫드의 등 부위를 제모한 후 로다민-펜타펩타이드를 도포하고 1시간 후 분석을 위해 랫드를 희생시켰다. 도포 부위의 피부 조직을 채취하여 포르말린 고정을 하루 동안 수행하였다. 고정된 조직을 이용하여 파라핀 블록을 만들고 섹션한 후 신경 세포 마커인 TrkB Ab(Cell signaling, USA)를 사용하여 면역조직화학 염색을 수행하였다. 이 후 DAPI 염색 키트(Invitrogen, USA)를 이용하여 핵 염색을 수행하였다. 형광 현미경을 통해 조직 내 펩타이드 침투 양상을 관찰하였다. 파란색은 DAPI로 염색된 세포의 핵을 나타내며, 붉은색은 로다민-펜타펩타이드 접합체를 나타내고, 녹색은 TrkB(신경 섬유 마커)를 나타낸다.
그 결과, [도 8]에 나타난 바와 같이 본 발명의 펜타펩타이드가 피부 조직의 근육층까지 침투한 것을 확인하였고, 신경 세포 마커와 공존(co-localization)하는 것을 확인하였다.
이를 통해, 본 발명의 펜타펩타이드는 신경 세포 내로 침투 가능하고, 경피흡수를 통해 피부 조직의 근육층까지 침투되며, 근육층에서 신경 세포 마커와도 공존하므로 SNARE 복합체의 형성에 관여하여 신경전달 물질의 과다 방출에 의해 야기되는 땀 분비를 억제하는 효과 및 땀 분비에 의한 체취의 발생을 원천 차단하는 효과를 나타낼 수 있음을 알 수 있다.
이를 통해, 본 발명의 펜타펩타이드는 신경 세포 내로 침투 가능하고, 경피흡수를 통해 피부 조직의 근육층까지 침투되며, 근육층에서 신경 세포 마커와도 공존하므로 근육세포에서 전염증성 사이토카인의 발현 및 신경말단에서의 통증전달인자 방출 억제에 관여하여 통증의 발생 및 전달을 억제하는 효과를 나타낼 수 있음을 알 수 있다.
[실험예 5]
체취 유발 균주을 이용한 펜타펩타이드의 체취 억제 효과 확인
땀에 포함된 물질을 분해시켜 악취를 유발하는 대표적인 발취균으로 알려져 있는 코리네박테리움을 사용하여 본 발명의 펜타펩타이드의 항균 효과를 확인하였다.
구체적으로, 체취를 유발하는 균주로 코리네박테리움 제로시스(Corynebacterium xerosis, C.xerosis, KCTC 9105)를 한국생명공학연구원 생물자원센터로부터 구입하여 사용하였다. 균주를 brain heart infusion (Difco, USA) 배지에 접종하여 37℃의 incubator에서 2일간 배양하였다. 배양된 균주에 동일 배지를 첨가하여 106 CFU/ml의 농도로 희석한 희석액을 시험용 균액으로 사용하였다. 96 well plate에 상기 시험용 균액을 100 μL씩 분주한 후 펜타펩타이드를 농도 별로 처리하였다. 양성대조군은 펜타펩타이드 대신 1%의 트리클로산(triclosan)을 첨가하였다. 48시간 배양한 후에 600 nm에서 흡광도를 spectrophotometer로 측정하여 발취균의 증식 억제 효과를 확인하였다.
그 결과, [도 9]에 나타난 바와 같이 본 발명의 펜타펩타이드를 처리하면 체취 유발 균주의 증식이 뚜렷하게 억제되는 것을 확인하였다. 특히 펜타펩타이드를 1mg, 2mg 처리한 군에서는 양성 대조군과 동등한 수준으로 항균 효과가 우수함을 확인하였다.
이를 통해, 본 발명의 펜타펩타이드는 체취 유발 균주의 증식을 억제함으로써 땀이 나면서 발생하는 특유의 체취를 효과적으로 억제할 수 있음을 알 수 있다.
[실험예 6]
근세포에서 펜타펩타이드 처리에 의한 전염증성 사이토카인 방출 억제 효과 확인
6-1. 전염증성 사이토카인 유전자의 발현 수준 확인
본 발명의 펜타펩타이드에 의한 통증 개선 효과를 확인하기 위하여, 마우스 근원 세포(myoblast)를 사용하여 염증 관련 사이토카인의 발현 양상을 확인하였다. 전염증성 사이토카인은 신경병증의 통증에 관여하며, 신경 손상 후 TNF-α 등과 같은 전염증성 사이토카인이 발현되면 염증반응이 촉발되어 통증이 야기된다.
구체적으로, 마우스 근원 세포인 C2C12 세포를 2x105cells/well의 밀도로 6-웰 플레이트에 접종한 후 DMEM(10% PBS) 배지에서 3일간 배양하였다. 세포가 플레이트의 70~80% 정도까지 자란 상태에서 분화 배지(DMEM, 5% horse serum)로 교체한 다음 3일 동안 배양하였다. 그 후, 분화 배지(DMEM, 2% horse serum)으로 교체 후 4일 동안 배양시켜 근원세포에서 근관(myotube)으로 분화를 유도하였다. 그런 다음 무혈청 배지로 교체하여 2시간 동안 배양하고, 1 μM, 10 μM, 100 μM 농도의 펜타펩타이드를 1시간 동안 전 처리 하였다. 이후 20nM의 TNF-α를 처리하고 24시간 동안 배양하여 염증 반응을 유도하였다.
이후, 세포를 회수하여 RNA를 분리한 후 cDNA 합성 키트(Intron, Korea)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA, PCR 프리믹스(Intron, Korea) 및 IL-1α, TNF-α, IL-1β 및 COX-2 프라이머를 이용하여 중합효소연쇄반응을 수행하고, 증폭된 PCR 산물을 아가로스 겔에 전기영동하여 DNA 밴드 확인하여 상기 유전자들의 mRNA 발현 정도를 비교하였다. 이때 사용된 프라이머 서열은 [표 1]에 제시된 바와 같다.
유전자 프라이머 서열(5'->3') 서열번호
IL-1α F GAA GTC AGG CAG AAG TGC TC 2
R GTG CAC CCG ACT TTG TTC TT 3
TNF-α F CGT CAG CCG ATT TGC TAT CT 4
R CGG ACT CCG CAA AGT CTA AG 5
IL-1β F CAA GGA GAA CCA AGC AAC GA 6
R TTG GCC GAG GAC TAA GGA GT 7
COX-2 F TGA GTG GTA GCC AGC AAA GC 8
R CTG CAG TCC AGG TTC AAT GG 9
GAPDH F ACCACAGTCCATGCCATCAC 10
R TCCACCACCCTGTTGCTGTA 11
그 결과, [도 10a]에 나타난 바와 같이, TNF-α를 처리하여 근관에 염증을 유도한 경우, 무처리군(control)에 비하여 IL-1α, IL-1β, COX-2, TNF-α의 mRNA 발현양, 즉 전염증성 사이토카인이 현저하게 증가하는 것을 확인하였다. 그러나, 본 발명의 펜타펩타이드 1 μM 처리군 및 10 μM 처리군의 경우, 증가된 전염증성 사이토카인의 발현이 감소됨을 확인하였다.
6-2. 전염증성 사이토카인 단백질의 발현 수준 확인
한편, 염증성 사이토카인 단백질의 발현량을 확인하기 위하여 2-1에서 회수한 세포 중 일부에 대해서는 (W.B.) cell lysate 분리 후 단백질을 정량하여 샘플 버퍼와 혼합하여 샘플을 준비하였다. SDS-PAGE 및 니트로셀룰로오스 막에 전개하여 5% 스킴 밀크로 블록킹하였다. COX-2 항체(Cell Signaling Technology, USA), IL-1β 항체(Cell Signaling Technology, USA), TNF-α 항체(Cell Signaling Technology, USA)를 1차적으로 바인딩 시킨 다음 2차 항체의 결합을 진행하였다. ECL 용액을 처리한 후 타겟 단백질의 발현 수준을 관찰하였다.
그 결과, [도 10b]에 나타난 바와 같이, TNF-α를 처리하여 근관에 염증을 유도한 경우, 무처리군(control)에 비하여 COX-2, IL-1β, TNF-α의 단백질 발현 수준, 즉 전염증성 사이토카인 단백질의 양이 현저하게 증가하는 것을 확인하였다. 그러나, 본 발명의 펜타펩타이드 처리군의 경우, 증가된 전염증성 사이토카인의 발현이 농도 의존적으로 감소됨을 확인하였다.
이를 통해, 본 발명의 펜타펩타이드는 근관에서 IL-1α, IL-1β, COX-2, TNF-α의 발현, 즉 전염증성 사이토카인의 발현을 mRNA 레벨 및 단백질 레벨에서 모두 감소시키는 효과를 나타내므로, 통증의 예방 또는 치료 물질로서 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.
[실험예 7]
신경세포에서 신경전달물질의 방출 억제 효과 확인
본 발명의 펜타펩타이드에 의한 통증 개선 효과를 확인하기 위하여, 마우스 신경세포를 사용하여 시냅스에서 P 물질(substance P)의 방출 정도를 확인하였다. P 물질은 말초로부터의 통증을 중추로 전달하므로 물질 P의 방출이 억제되면 통증 완화 효과를 나타낼 수 있다.
구체적으로, 6주령 랫드의 척수에서 후근신경절(dorsal root ganglion, DRG)을 분리하여 세척한 다음 신경세포를 분리하였다. 분리된 신경세포를 24웰-플레이트에 나누어 접종한 후 하루 동안 배양한 후, 유사분열 억제제를 신경세포가 배양되는 배지에 혼합하여, 순수 신경세포 만을 6일 동안 배양시켰다. 그런 다음, 영양성분을 추가하기 위해 B-27 배지(무혈청, 1% 페니실린)로 교체하여 24시간 동안 배양한 후, 1 μM, 10 μM 농도의 펜타펩타이드를 1시간 동안 전 처리하였다. 이후 100 μM의 캡사이신을 30분 동안 처리하여 P 물질의 방출을 유도하고, P 물질의 방출량을 ELISA로 분석하였다.
그 결과, [도 11]에 나타난 바와 같이, 캡사이신을 처리하면 무처리 대조군(control)에 비하여 P 물질의 방출이 증가하였으나, 본 발명의 펜타펩타이드 처리군의 경우 증가된 P 물질의 방출량이 현저하게 감소됨을 확인하였다.
이를 통해, 본 발명의 펜타펩타이드는 신경세포에서 P 물질의 방출을 억제하여 통증 신호의 전달을 방지함으로써, 통증의 예방 또는 치료물질로서 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.
[실험예 8]
인체효능평가를 통한 펜타펩타이드의 통증 완화 효과 확인
본 발명에 따른 펜타펩타이드가 실제로 통증을 억제하는 효과를 나타내는지 확인하기 위하여, 피실험자 20명을 대상으로 지연성 근육통을 유발한 다음 본 발명의 펜타펩타이드가 함유된 로션을 통증 부위에 도포하여 통증 경감 정도에 대한 인체효능평가를 실시하였다.
구체적으로, 피실험자들에게 지연성 근육통(Delayed onset muscle soreness)를 유발하기 위해, 양 발을 골반 너비로 벌리고 허리를 곧게 펴고 서게 한 다음 발꿈치를 최대한 들어 올렸다 내리는 동작을 2분간 반복하게 하고 3분간 휴식을 취하게 하는 운동을 총 3세트 진행하였다. 24시간 후부터 통증 부위에 본 발명의 펜타펩타이드가 2000ppm 함유된 용액을 도포하였다. 그 후, 24시간, 48시간, 72시간 후 걸을 때 느껴지는 통증 평가 척도(Numeric rating scale, NRS)를 자가 측정하였다 (0은 통증 없음, 10은 상상할 수 있는 가장 심한 통증). 아래 수학식을 이용하여 통증 강도의 평균 값(Mean PID scores)을 산출하고, 72시간 시험 종료 후 통증 경감 정도를 피험자 설문을 통해 확인하였다.
[수학식]
통증 강도의 차이 (PID) = 본 발명의 펜타펩타이드 도포 후 통증 강도 - 본발명의 펜타펩타이드 도포 전 통증 강도
그 결과, [도 12a] 및 [도 12b]에 나타난 바와 같이, 운동 24시간 경과 후 유발된 통증의 정도가 본 발명의 펜타펩타이드를 도포한 실험군에서 운동 72시간 후(로션 도포 48시간 후)에 유의적으로 개선되는 것을 확인하였다.
이를 통해, 본 발명의 펜타펩타이드가 근육통이 유발된 환자들의 피부에 바르는 것 만으로도 통증 감소에 있어서 치료적 효과를 제공할 수 있음을 알 수 있다.

Claims (15)

  1. 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 다한증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 다한증은 국소 다한증 및 전신 다한증을 포함하는 것인, 약학적 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서,
    상기 다한증은 얼굴, 이마, 목, 손, 발 및 겨드랑이로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나의 피부 부위에 발생하는 것인, 약학적 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서,
    상기 조성물을 처리하지 않은 대조군 대비 땀 생성이 45% 내지 90% 감소하는 것인, 약학적 조성물.
  5. 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 다한증의 예방 또는 완화, 또는 체취 억제용 조성물.
  6. 청구항 5에 있어서,
    상기 체취는 땀샘 분비물이 박테리아에 의해 분해되어 발생하는 분해 산물에 의한 악취인, 조성물.
  7. 청구항 6에 있어서,
    상기 체취는 겨드랑이, 발, 손, 이마, 목, 얼굴, 또는 두피 부위에서 발생되는 악취인, 조성물.
  8. 청구항 5의 조성물을 유효성분으로 포함하는 다한증의 예방 또는 완화, 또는 체취 억제용 화장료 조성물.
  9. 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성되는 펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 통증 완화용 조성물.
  10. 청구항 9에 있어서,
    상기 펜타펩타이드는 i) IL-1α, IL-1β, COX-2 및 TNF-α로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 전염증성 사이토카인의 발현을 억제하고, ii) 통증 전달 인자인 P 물질(substance P)의 분비를 억제하는 것인, 조성물.
  11. 청구항 9에 있어서,
    상기 통증은 염증성 통증, 신경병증성 통증, 통각수용성 통증 및 심인성 통증으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상인, 조성물.
  12. 청구항 9에 있어서,
    상기 통증은 무릎, 팔꿈치, 손가락, 어깨, 발목 또는 발 부위의 염좌, 타박상, 관절통, 힘줄염증, 인대염증, 오십견, 회전근개질환, 테니스엘보, 골프엘보 및 드퀘르뱅 증후군으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나에 수반되는 통증인, 조성물.
  13. 청구항 9에 있어서,
    상기 통증은 수술 후 통증(postoperative pain), 암성 통증(cancer pain), 삼차 신경통(trigeminal neuralgia pain), 특발성 통증(idiopathic pain), 당뇨성 신경병성 통증(diagetic neuropathic pain), 근육통, 편두통, 생리통 및 관절염 통증으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상인, 조성물.
  14. 청구항 9의 조성물을 유효성분으로 포함하는 통증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  15. 청구항 9의 조성물을 유효성분으로 포함하는 통증 완화용 화장료 조성물.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4166156A4 (en) * 2020-06-12 2023-05-17 Caregen Co., Ltd. COMPOSITION FOR THE PREVENTION, MITIGATION OR TREATMENT OF ALLERGIC DISEASES OR PRURITUS WITH PENTAPEPTIDE AS THE ACTIVE INGREDIENT

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102469721B1 (ko) * 2020-06-12 2022-11-23 (주)케어젠 보툴리눔 톡신 유사 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20090041066A (ko) * 2007-10-23 2009-04-28 성균관대학교산학협력단 신경전달물질 배출을 조절하는 합성 펩타이드
WO2010078242A1 (en) 2008-12-31 2010-07-08 Revance Therapeutics, Inc. Injectable botulinum toxin formulations
US8318898B2 (en) * 2005-12-23 2012-11-27 Universite De Lausanne Synthetic peptides for use as inhibitors of neurotransmitter secretion and as inducers of cellular relaxation
US20160279193A1 (en) * 2013-11-06 2016-09-29 Norwegian University Of Science And Technology (Ntnu) Immunosuppressive agents and their use in therapy
US20160289272A1 (en) * 2013-11-06 2016-10-06 Norwegian University Of Science And Technology Antimicrobial agents and their use in therapy
KR102132274B1 (ko) * 2018-12-26 2020-07-09 (주)케어젠 근육 이완용 조성물

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8318898B2 (en) * 2005-12-23 2012-11-27 Universite De Lausanne Synthetic peptides for use as inhibitors of neurotransmitter secretion and as inducers of cellular relaxation
KR20090041066A (ko) * 2007-10-23 2009-04-28 성균관대학교산학협력단 신경전달물질 배출을 조절하는 합성 펩타이드
WO2010078242A1 (en) 2008-12-31 2010-07-08 Revance Therapeutics, Inc. Injectable botulinum toxin formulations
US20160279193A1 (en) * 2013-11-06 2016-09-29 Norwegian University Of Science And Technology (Ntnu) Immunosuppressive agents and their use in therapy
US20160289272A1 (en) * 2013-11-06 2016-10-06 Norwegian University Of Science And Technology Antimicrobial agents and their use in therapy
KR102132274B1 (ko) * 2018-12-26 2020-07-09 (주)케어젠 근육 이완용 조성물

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RANOUX ET AL., ANNALS OF NEUROLOGY, vol. 64, no. 3, 2008, pages 274 - 283
YUAN ET AL., NEUROLOGY, vol. 72, 2009, pages 1473 - 1478

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4166156A4 (en) * 2020-06-12 2023-05-17 Caregen Co., Ltd. COMPOSITION FOR THE PREVENTION, MITIGATION OR TREATMENT OF ALLERGIC DISEASES OR PRURITUS WITH PENTAPEPTIDE AS THE ACTIVE INGREDIENT

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