WO2016122091A1 - 심비디움(cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 및 치료용 약학조성물 - Google Patents

심비디움(cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 및 치료용 약학조성물 Download PDF

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contact dermatitis
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dermatitis
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김택중
김완중
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연세대학교 원주산학협력단
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Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases or contact dermatitis, a functional food for preventing or improving allergic diseases or contact dermatitis, an external skin preparation and a cosmetic composition containing a Cymbidium extract as an active ingredient. .
  • Induced body cells are known (Galli SJ et al., Agents & Actions supplements., 1993). These cells have receptors for IgE (Fc ⁇ RI), antibodies that cause allergies to the cell surface, which are stimulated by allergens (called antigens or allergens) to induce various allergies they have. Secrete the substance outside the cell (Amin K., Respiratory Medicine., 2012).
  • allergens for allergies suffer from allergens are identified and then administered in small amounts for several years to reduce the allergy gradually.
  • This method has the disadvantage of taking several years of treatment and causing anaphylactic shock.
  • Methods using other DNA vaccines Jay E. Slater et al., Journal of Allergy and Clinical Immunology., 1998), Therapies that block IgE from binding to mast cell receptors (Brian J Sutton et al., British Medical Bulletin., 2000), and therapeutic approaches such as antibody therapy for the allergenic cytokine, IL-4 (Carl J., The Journal of Experimental Medicine., 1993).
  • these approaches are expensive or have not yet been fully elucidated.
  • Cymbidium used as an active ingredient in the composition of the present invention is native to Southeast Asia, China, Japan, New Guinea, Northern Australia, two petals, one tongue, and three calyx flowers, blades, It has a fusiform stalk and thick roots, commonly called bulbs. It has been reported to have excellent air purification and humidification ability because it generates more negative ions and increases relative humidity. In addition, it has been developed and sold as a hair regeneration product and a hair shampoo in Japan because of its excellent hair vitality, regeneration and anti-inflammatory function, and these studies have been reported in Korea.
  • Korean Patent Publication No. 2013-0010885 discloses Dionaea muscipula extract may be included in a cosmetic treatment composition against skin changes due to accelerated or endogenous aging, and additionally, Cymbidium erythraeum extract It is disclosed that it can be included to counteract the loss of wrinkles, firmness and elasticity and increased pigmentation.
  • An object of the present invention is to find a new material for the prevention or treatment or improvement of allergic diseases or contact dermatitis including cymbidium extract as an active ingredient and to provide a novel use thereof.
  • the present invention by confirming the effect of inhibiting the secretion effect of allergens of mast cells inducing allergy by cymbidium extract and the inhibitory effect of inflammation in animal model of contact dermatitis ( cymbidium) It provides a pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases or contact dermatitis, health functional food, external skin preparations and cosmetic compositions for preventing or improving allergic diseases or contact dermatitis.
  • the cymbidium extract of the present invention is induced by allergen-induced suppression of allergens and delayed hypersensitivity antigens (DNCB (2.4-dinitrochlorobenzene)) of allergy-inducing mast cells without showing cytotoxicity at therapeutic doses.
  • DNCB delayed hypersensitivity antigens
  • the contact dermatitis because they represent the effects of reduced scratching behavior in animal models and mitigation of the symptoms in the skin sensory evaluation, blood in IgE decreased Cymbidium (cymbidium) extract is allergic or contact dermatitis preventive or therapeutic pharmaceutical composition It can be usefully used as an active ingredient in health functional foods, external skin preparations and cosmetic compositions for preventing or improving allergic diseases or contact dermatitis.
  • 1 is a graph showing the cytotoxicity when cultivated in mast cells after treatment with symbidium extract 25, 50, 100, 200 ⁇ g / ml.
  • Figure 2 shows the effect of inhibiting the secretion of allergens of mast cells according to the concentration of the symbidium extract.
  • Figure 3 shows the inhibitory effect of the symbidium extract in vivo antibody / antigen response in a concentration-dependent pictures and graphs.
  • Figure 4 is a graph showing the observation of the scratching behavior of the ICR mouse when applying the symbidium extract.
  • 5 is a graph showing that the skin sensory evaluation of the ICR mouse when the symbidium extract was applied.
  • FIG. 6 is a graph showing the measurement of the blood IgE level of ICR mice when the symbidium extract was applied.
  • FIG. 9 is a graph showing the results of measuring the effect of symbidium treatment on DNCB-induced skin in AD-like ICR mice.
  • Figure 11 graphically shows the effect of symbidium treatment on DNCB-induced cytokine mRNA expression in AD-like ICR mice.
  • FIG. 13 is a graph showing the results of measuring expression of IgE / DNP-BSA-induced Syk, Erk1 / 2, Akt, JNK, and PLC- ⁇ after symbidium treatment.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases or contact dermatitis containing cymbidium as an active ingredient.
  • the symbidium extract may be any one selected from the group consisting of flowers, leaves, branches, roots, stems, fruits, shells, and mixtures thereof, of symbidium, and more specifically, Roots and stems can be used.
  • the symbidium extract is extracted with water, an organic solvent, or a mixed solvent thereof.
  • the organic solvent may be alcohol having 1 to 5 carbon atoms, ethyl acetate, acetone, ether, chloroform, benzene, hexane or dichloromethane, more specifically ethanol.
  • the allergic disease may be a disease selected from the group consisting of atopic dermatitis, allergic dermatitis, allergic rhinitis, allergic conjunctivitis, allergic asthma and anaphylactic shock, It is not limited to this.
  • the allergic dermatitis may be psoriasis, contact allergic dermatitis, urticaria, and the like.
  • the pharmaceutical composition may alleviate or inhibit inflammatory reactions, itching, or edema caused by allergic diseases or contact dermatitis.
  • the contact dermatitis is contact dermatitis by contact with an external substance.
  • the symbidium ( cymbidium ) of the pharmaceutical composition may be included in 0.001 to 10% by weight of the total weight of the pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition may be formulated in a formulation selected from the group consisting of tablets, granules, pills, capsules, solutions, injections, ointments, suppositories, and powders, but is not limited thereto.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases or contact dermatitis, containing a cymbidium extract as an active ingredient.
  • the symbidium extract may be any one selected from the group consisting of flowers, leaves, branches, roots, stems, fruits, shells, and mixtures thereof, of symbidium, and more specifically, Roots and stems can be used.
  • the symbidium extract is extracted with water, an organic solvent, or a mixed solvent thereof.
  • the organic solvent may be alcohol having 1 to 5 carbon atoms, ethyl acetate, acetone, ether, chloroform, benzene, hexane or dichloromethane, more specifically ethanol.
  • the allergic disease may be a disease selected from the group consisting of atopic dermatitis, allergic dermatitis, allergic rhinitis, allergic conjunctivitis, allergic asthma and anaphylactic shock, It is not limited to this.
  • the allergic dermatitis may be psoriasis, contact allergic dermatitis, urticaria, and the like.
  • the pharmaceutical composition may alleviate or inhibit inflammatory reactions, itching, or edema caused by allergic diseases or contact dermatitis.
  • the contact dermatitis is contact dermatitis by contact with an external substance.
  • the symbidium ( cymbidium ) of the pharmaceutical composition may be included in 0.001 to 10% by weight of the total weight of the pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition may be formulated in a formulation selected from the group consisting of tablets, granules, pills, capsules, solutions, injections, ointments, suppositories, and powders, but is not limited thereto.
  • compositions for the prevention and treatment of allergic diseases or contact dermatitis comprising a symbidium extract according to the present invention, respectively, oral formulations of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols and the like according to conventional methods , External preparations (ointments, patches, gels), suppositories, and sterile injectable parenteral forms.
  • Carriers, excipients and diluents that may be included in the composition comprising the symbidium extract include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, aceitol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, Calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oil.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like, and such solid preparations may contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate and sucrose in the extract. Or lactose, gelatin, or the like is mixed.
  • lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, liquid solutions, emulsions, and syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories.
  • the non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, injectable esters such as ethyl oleate and the like can be used.
  • As the base of the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.
  • the term "pharmaceutically effective amount” refers to an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and an effective dose level refers to an individual's type and severity, age, sex, activity of the drug. , Drug sensitivity, time of administration, route of administration and rate of administration, duration of treatment, factors including concurrently used drugs, and other factors well known in the medical arts, but for the desired effect, the symbidium extract of the present invention Silver may be administered at a dose of 0.0001 to 50 mg / kg or 0.001 to 50 mg / kg, once or several times per day, which dose limit the scope of the invention in any aspect. no.
  • compositions of the present invention may be administered as individual therapeutic agents or in combination with other therapeutic agents that exhibit antiallergic or contact dermatitis inhibitory effects, and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. And single or multiple administrations. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect in a minimum amount without side effects, and can be easily determined by those skilled in the art.
  • the term "individual” means any animal including a human who has already developed or can develop a disease that can be prevented or treated through anti-allergic or contact dermatitis inhibitory activity and comprises a composition comprising an extract of the present invention. By administering to an individual, the disease can be effectively prevented and treated.
  • the route of administration of the composition may be administered via any general route as long as it can reach the desired tissue.
  • the composition of the present invention may be administered as desired, but is not limited to intraperitoneal administration, intravenous administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, intradermal administration, oral administration, intranasal administration, pulmonary administration, rectal administration.
  • the composition may also be administered by any device in which the active agent may migrate to the target cell.
  • treatment includes the cure of allergic disease or contact dermatitis as well as the partial cure, improvement and alleviation of allergic disease or contact dermatitis as a result of applying the pharmaceutical composition of the present invention to allergic disease or contact dermatitis. do.
  • the "prevention" is to prevent or prevent allergic disease or contact dermatitis by applying the pharmaceutical composition of the present invention to allergic disease or contact dermatitis to prevent or block allergic disease or contact dermatitis. it means.
  • improved is meant to include alleviation, prevention or treatment of symptoms.
  • active ingredient means a component that exhibits activity alone or in combination with a carrier (carrier) that is not active in itself.
  • the present invention relates to a skin external preparation for preventing or treating allergic diseases or contact dermatitis, which contains a cymbidium extract as an active ingredient.
  • the symbidium extract may be any one selected from the group consisting of flowers, leaves, branches, roots, stems, fruits, shells, and mixtures thereof, of symbidium, and more specifically, Roots and stems can be used
  • the symbidium extract is extracted with water, an organic solvent, or a mixed solvent thereof.
  • the organic solvent may be alcohol having 1 to 5 carbon atoms, ethyl acetate, acetone, ether, chloroform, benzene, hexane or dichloromethane, more specifically ethanol.
  • the allergic disease may be a disease selected from the group consisting of atopic dermatitis, allergic dermatitis, allergic rhinitis, allergic conjunctivitis, allergic asthma and anaphylactic shock, It is not limited to this.
  • the allergic dermatitis may be psoriasis, contact allergic dermatitis, urticaria and the like.
  • the external preparation for skin may alleviate or inhibit an inflammatory response, itching, or edema caused by an allergic disease or contact dermatitis.
  • the external skin preparation may be formulated in a dosage form selected from the group consisting of external preparations, external preparations, external preparations, ointments, creams, gels, warnings, dressings, patches and sprays, It is not limited to this.
  • the extract of symbidium ( cymbidium ) of the external preparation for skin may be contained in 0.0001 to 5% by weight of the total external skin preparation.
  • the present invention relates to a health functional food for preventing or improving allergic diseases or contact dermatitis, containing a cymbidium extract as an active ingredient.
  • the symbidium extract may be any one selected from the group consisting of flowers, leaves, branches, roots, stems, fruits, shells, and mixtures thereof, of symbidium, and more specifically, Roots and stems can be used.
  • the symbidium extract is extracted with water, an organic solvent, or a mixed solvent thereof.
  • the organic solvent may be alcohol having 1 to 5 carbon atoms, ethyl acetate, acetone, ether, chloroform, benzene, hexane or dichloromethane, more specifically ethanol.
  • the allergic disease may be a disease selected from the group consisting of atopic dermatitis, allergic dermatitis, allergic rhinitis, allergic conjunctivitis, allergic asthma and anaphylactic shock, It is not limited to this.
  • the allergic dermatitis may be psoriasis, contact allergic dermatitis, urticaria and the like.
  • the health functional food can alleviate or suppress inflammatory reactions, itching, or edema caused by allergic diseases or contact dermatitis.
  • the symbidium ( cymbidium ) of the health functional food may be included in 0.001 to 1% by weight of the total health functional food.
  • the health functional food may be formulated in a formulation selected from the group consisting of tablets, granules, pills, capsules, solutions and powders, but is not limited thereto.
  • the health functional food of the present invention includes the symbidium extract or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and may include an appropriate food supplement.
  • the term "food additive” means a component that can be added to food supplements, and can be used by those skilled in the art as appropriately added to prepare a health functional food of each formulation. Flavors, colorants and fillers, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stables, including various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic and natural flavors Although the agent, preservatives, glycerin, alcohol, carbonation agent used in the carbonated beverage and the like are included, the examples of the food additive additive of the present invention is not limited.
  • the term "health functional food” refers to a food prepared and processed in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids and pills using raw materials or ingredients having useful functions for the human body.
  • a useful effect for health use such as nutrient control or physiological action on the structure and function of the human body, etc.
  • the health functional food according to the present invention can be prepared by methods commonly used in the art In the manufacture, the raw materials and ingredients commonly added in the art can be prepared.In addition, unlike general medicines, foods are used as raw materials, and there are no side effects that may occur when the medicine is taken for a long time. Excellent portability, the health functional food of the present invention as an adjuvant to enhance the antiallergic or contact dermatitis inhibitory effect Ingestion is possible.
  • the mixed amount of the active ingredient may be suitably determined depending on the purpose of use (prevention, health or therapeutic treatment).
  • the symbidium extract of the present invention in the manufacture of food may be included in an amount of 0.01 to 5% by weight of the raw material composition.
  • it can be added at a ratio of 0.02 to 2 g or 0.3 to 1 g based on 100 mL.
  • the amount may be used below the above range.
  • Examples of the food to which the substance can be added include dairy products including meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, ice cream, various soups, drinks, tea, drinks, Alcoholic beverages and vitamin complexes, and the like and include all of the health foods in the conventional sense.
  • the health food composition of the present invention may contain various flavors or natural carbohydrates and the like as additional ingredients, as in conventional food.
  • the above-mentioned natural carbohydrates are glucose, monosaccharides such as fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol.
  • sweetening agent natural sweetening agents such as tautin and stevia extract, synthetic sweetening agents such as saccharin and aspartame, and the like can be used.
  • the proportion of the natural carbohydrate is generally about 0.1 to 10 g, specifically about 1 to 8 g, more specifically 5 to 6 g per 100 mL of the composition of the present invention.
  • the symbidium extract of the present invention has various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic and natural flavors, coloring and neutralizing agents (such as cheese and chocolate), pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protection Sex colloid thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated beverages and the like.
  • the symbidium extract of the present invention may contain a fruit flesh for the production of natural fruit juice and fruit juice drinks and vegetable drinks. These components can be used independently or in combination.
  • the ratio of the additive is not very important, but is generally selected from 0.0001 to about 10 parts by weight per 100 parts by weight of the symbidium extract of the present invention.
  • the present invention relates to a cosmetic composition for the prevention or improvement of allergic diseases or contact dermatitis containing a cymbidium extract as an active ingredient.
  • the symbidium extract may be any one selected from the group consisting of flowers, leaves, branches, roots, stems, fruits, shells, and mixtures thereof, of symbidium, and more specifically, Roots and stems can be used
  • the symbidium extract is extracted with water, an organic solvent, or a mixed solvent thereof.
  • the organic solvent may be alcohol having 1 to 5 carbon atoms, ethyl acetate, acetone, ether, chloroform, benzene, hexane or dichloromethane, more specifically ethanol.
  • the allergic disease may be a disease selected from the group consisting of atopic dermatitis, allergic dermatitis, allergic rhinitis, allergic conjunctivitis, allergic asthma and anaphylactic shock, It is not limited to this.
  • the allergic dermatitis may be psoriasis, contact allergic dermatitis, urticaria and the like.
  • the cosmetic composition may alleviate or inhibit inflammatory reactions, itching, or edema caused by allergic diseases or contact dermatitis.
  • the symbidium ( cymbidium ) extract of the cosmetic composition may be contained in more than 0.000001 to 0.01% by weight, more specifically 0.000051 to 0.001% by weight of 0.000001 to 1% by weight of the total cosmetic composition weight .
  • the cosmetic composition is a skin adhesive type cosmetic formulation, for example, basic cosmetics (cosmetics, creams, essences, cleansing foam, cleansing water, packs, soaps), body cosmetics (body lotion, Body oils, body gels, soaps), color cosmetics (foundation, lipstick, mascara, makeup base), hair cosmetics (shampoo, rinse, hair conditioner, hair gel) and the like.
  • body cosmetics body lotion, Body oils, body gels, soaps
  • color cosmetics foundation, lipstick, mascara, makeup base
  • hair cosmetics shampoo, rinse, hair conditioner, hair gel
  • transdermal dosage form for example, an ointment, a liquid, a dressing, a patch or a spray, and the like, but is not limited thereto.
  • the cosmetic composition may be used in combination in an amount of about 0.05 to 10.0% by weight based on the dry weight of the cosmetic.
  • the cosmetic composition further comprises a fatty substance, organic solvent, solubilizer, thickener and gelling agent, emollient, antioxidant, suspending agent, stabilizer, foaming agent, fragrance, surfactant, water Commonly used in ionic or nonionic emulsifiers, fillers, metal ionblockers and chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, lipid vesicles or cosmetics It may contain adjuvants conventionally used in the cosmetic field, such as any other ingredient.
  • Cymbidium was cultivated by the RDA's Good Agricultural Practice (GAP), and in 2009 in Chungcheongbuk-do Negong (GPS: E 128 ° 62 ⁇ N 36 ° 56 ⁇ ). Harvested. The sample was extracted as follows. To 50 g of symbiotic root and stem dry samples, 150 ml of 99% ethanol was added, reacted for 48 hours at 150 rpm, filtered and concentrated under reduced pressure, and lyophilized powder was used as a sample of this experiment.
  • GAP Good Agricultural Practice
  • GAP Good Agricultural Practice
  • Normal mast cells were cultured in DMEM medium containing 5% fetal bovine serum (FBS). In a 75 cm 2 plastic flask (Falcon Co., England), normal mast cells were treated with 10% FBS, 7.5% NaHCO 3 150 ⁇ g / ml, glutamine 58.4 ⁇ g / ml and antibiotic / antimycotics 4.4 ⁇ l / ml Incubated in DMEM medium containing 37 °C, 5% CO 2 conditions. Cell lines were maintained by secondary culture once every 2-3 days.
  • FBS fetal bovine serum
  • Toxicity of symbidium extract was measured using the MTT assay method. That is, normal mast cells (RBL-2H3) were aliquoted to 1 ⁇ 10 5 cells / well in a 24-well plate. This was incubated for 24 hours in an incubator at 37 °C, 5% CO 2 conditions, followed by incubation for 24 hours with the addition of symbidium extract of various concentrations of 0, 25, 50, 100, 200 ⁇ g / ml.
  • CMF-PBS calcium magnesium free-phosphate buffered saline, pH 7.2
  • mast cells are placed in a 24-well plate with 2 ⁇ 10 5 cells in 400 ng / ml DNP-specific IgE. Incubated. The cultured cells were washed with PIPES buffer (25 mM PIPES, pH 7.2, 119 mM NaCl, 5 mM KCl, 0.4 mM MgCl 2 , 1 mM CaCl 2 , 5.6 mM glucose, and 0.1% BSA) and then the antigen was added. Pre-incubated for 30 minutes before.
  • PIPES buffer 25 mM PIPES, pH 7.2, 119 mM NaCl, 5 mM KCl, 0.4 mM MgCl 2 , 1 mM CaCl 2 , 5.6 mM glucose, and 0.1% BSA
  • allergens were added to a final concentration of 50 ng / ml to induce stimulation.
  • the secretion of allergens was determined by the activity of hexosaminidase, a marker of degranulation secreted from the medium, from p-nitrophenylacetyl- ⁇ -D-glucosaminide. Determined by the amount of free p-nitrophenyl.
  • Figure 2 shows the concentration-dependent inhibitory effect of the symbidium extract on the allergen-induced mast cells, it was confirmed that the symbidium extract concentration-dependently suppress the secretion of various allergens of the mast cells.
  • Figure 3 shows the concentration-dependent inhibition of the antibody / antigen response in vivo of the symbidium extract, it was confirmed that the symbidium extract inhibits the antibody / antigen response in ICR mice in a concentration-dependent manner.
  • DNCB 2,4-dinitrochlorobenzene
  • olive oil and acetone as an antigen of delayed-type hypersensitivity.
  • 300 ⁇ l was applied to 2 cm 2 of the dorsal region of the ICR mouse for first immunization.
  • 250 ⁇ l of 0.5% DNCB was applied to the dorsal area, and the cells were treated with the same concentration and the same amount continuously for about 2 weeks for secondary immunization.
  • 200 ⁇ l was applied to the dorsal area at the concentration of 10 mg / mL once every other day from the second DNCB administration.
  • Scratch behavior verification experiments were performed to measure the number of scratching behaviors caused by contact dermatitis through video recording at the interval of 48 hours after the second DNCB administration. After the second application of DNCB, the behavior of scraping the dorsal area of the subjects increased continuously after damage and inflammation of the dorsal epidermis.
  • Figure 4 observed the scratching behavior of the ICR mouse when the application of the symbidium extract was confirmed that after the fourth administration, the scratching behavior is significantly reduced in the group coated with the symbidium extract.
  • 5 is a skin sensory evaluation of the ICR mouse when the application of the symbidium extract was compared to the group applied to both the DNCB and the group applied to both the symbidium extract and DNCB through the skin sensory evaluation, the group applied only DNCB times As the score increases, the score increases to 12 points, while the group coated with the symbidium extract decreases from the third dose and decreases to 2 points.
  • Figure 6 is a measure of the blood IgE level of the ICR mouse when the application of the symbidium extract, the concentration of IgE in the serum-induced contact dermatitis DNCB-only group was increased by about three times, but applied with the symbidium extract The group was confirmed to be reduced similarly to the normal group.
  • 25 ⁇ L of 1% 2,4-dinitrochlorobenzene (DNCB) solution (dissolved in acetone and olive oil 3: 1 mixed solvent) was applied to the 7.5 cm 2 area of the dorsal skin on the first day.
  • 200 ⁇ L of 10 mg / mL symbidium extract was applied to the DNCB-induced dorsal skin of six mice in total for a two week treatment period.
  • the skin severity measurement method is a clinical visual evaluation method commonly used in atopic dermatitis.
  • the severity of atopic dermatitis is measured by erythma, pruritus and dry skin, edema and excoriation, Five items such as erosion and lichenification are expressed as the sum of the scores of each evaluation. Each item was scored as symptom-free (0 point), symptom weak (1 point), moderate (2 point), and severe (3 point), and the scores of each item were summed up to give an evaluation score.
  • the symbidium extract of the present invention was confirmed that the atopic dermatitis induced animal model showed an excellent effect in suppressing the symptoms of atopic dermatitis.
  • the dorsal epidermis in each mouse was fixed in 4% para-formaldehyde solution and stabilized with 30% sucrose solution. This was embedded in a Tissue-Tek O.C.T compound and stained with hematoxylin and eosin to observe histological changes under an optical microscope.
  • the thickness of the dorsal skin was significantly thicker than in the normal group, whereas in the symbidium extract treatment group, the epidermis and dermis thickening decreased compared with the DNCB group (Fig. 10).
  • mouse IL-13 sense 5'-CCTGGCTCTTGCTTGCCTT-3 ';
  • the denaturation, annealing and extension conditions and cycles were 60 seconds at 94 ° C, 45 seconds at 49 ° C, 45 seconds at 72 ° C and 35 cycles.
  • the dorsal epidermis was used in each mouse after the sacrifice of atopic dermatitis induced mice.
  • RIPA containing 2 nM EDTA, 137 mM NaCl, 20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM sodium vanadate, 10 mM NaF, 1 mM PMSF, 1% Triton X-100, 10% glycerol and protease inhibitor cocktail Lysis with buffer. Protein concentration of each sample was measured using a Bradford assay kit (Bio-Rad, CA, USA) and performed according to manufacturer's instructions.
  • the powders are mixed and mixed, followed by filling into an airtight fabric to prepare a powder.
  • Tablets are prepared by mixing the above components according to a conventional method for preparing tablets and then compressing them.
  • the capsules are prepared by mixing the above components and filling the gelatin capsules according to a conventional capsule preparation method.
  • the ingredients are used according to the conventional methods in the cosmetic production for two-way cake production.
  • the ingredients are used according to the conventional methods in the field of cosmetic preparation for skin preparation.
  • Serum Produce Symbidium Extract 0.001 v / v% Jojoba 5 Black Sesame 2 Sweet Almond 3 Emulsifying Power Wax One Vitamin E One glycerin 2 Hyaluronic acid One Marine Elastin One Purified water Remaining amount
  • the ingredients are used according to the conventional methods in the cosmetic manufacturing field for the production of serum.
  • the ingredients are used according to the conventional methods in the manufacture of cosmetics for the manufacture of lotions.
  • the ingredients are used according to the conventional methods in the cosmetic preparation for cream making.
  • the ingredients are used in accordance with conventional methods in the art of making cosmetics for the manufacture of packs.
  • the ingredients are used according to the conventional methods in the cosmetic manufacturing field for the manufacture of massage creams.
  • the ingredients are used according to the conventional methods in the manufacture of cosmetics for the production of makeup bases.
  • the powder ingredients are prepared according to conventional methods in the field of cosmetic preparation for the production of powder facts using the above ingredients.
  • the ingredients are used according to the conventional methods in the cosmetic production for two-way cake production.
  • Cymbidium (cymbidium) extracts can be useful in allergic or contact dermatitis prevention or treatment a pharmaceutical composition, allergic or contact dermatitis, preventing or improving functional health food for, the active ingredient of the external preparation for skin and a cosmetic composition for have.

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Abstract

본 발명은 심비디움(cymbidium) 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 및 치료용 약학적 조성물, 피부외용제, 화장료 조성물 및 건강기능식품에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 심비디움(cymbidium) 추출물은 알레르기를 유발하는 비만세포의 분비를 저농도에서 억제하는 효과 및 지연형 과민반응의 항원(DNCB (2.4-dinitrochlorobenzene))에 의해 유발된 알레르기성 접촉성 피부염 동물 모델에서 긁는 행위, 피부 관능, 혈중 내 IgE에 대해 감소 효과를 나타내므로 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 및 치료용 약학적 조성물, 피부외용제, 화장료 조성물 및 건강기능식품으로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

심비디움(CYMBIDIUM) 추출물을 유효성분으로 함유하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 및 치료용 약학조성물
본 발명은 심비디움(Cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 건강기능식품, 피부외용제 및 화장료 조성물에 관한 것이다.
비만세포 및 혈중 호염구는 사이토카인을 분비함으로써 여러 가지 알레르기 질환 즉, 알레르기성 비염, 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 천식, 음식 알레르기 및 아나필락틱 쇼크(anaphylactic shock) 등을 유발하는 체내세포로 알려져 있다(Galli SJ et al., Agents & Actions supplements., 1993). 이들 세포는 세포표면에 알레르기를 유발하는 항체인 IgE에 대한 수용체(FcεRI)를 가지고 있고, 그것은 알레르기를 유발하는 물질(항원 혹은 알러젠으로 불림)에 의해 자극을 받아 자신이 가지고 있는 다양한 알레르기를 유발시키는 물질을 세포 바깥으로 분비한다(Amin K., Respiratory Medicine., 2012).
알레르기를 치료하는 다양한 방법들이 존재하나, 현재 대부분의 알레르기 치료는 그 원인을 없애기보다는 증상을 완화하는 방향으로 연구가 진행되고 있다. 대표적으로 알레르겐에 의해 비만세포 등에서 분비된 히스타민이나 류코트리엔 등의 수용체에 대한 길항제들이 주를 이루고 있으며, 이러한 약물들이 거대한 시장을 이루고 있다(A Roquet et al., American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine., 1997). 그러나 이러한 약물은 환자에게 투여 후 단기간 내에 내성을 보이기 때문에 일정기간 지난 후 혹은 반복 투여 시 환자들의 증상을 호전시키지 못하는 경우가 많다. 따라서 항히스타민제 등의 부작용이 없는 알레르기 치료제 개발을 요구하고 있는 실정이다.
이 외에 다른 치료 방법으로 알레르기 환자가 앓고 있는 알레르기에 대한 알레르겐을 규명 후 이를 소량씩 수년간 투여하여 그 알레르기를 점차 감소시키는 방법이 있다. 하지만 이 방법은 치료기간이 수년이 걸리고 아나필락틱 쇼크 등을 유발시킬 수 있다는 단점이 있다. 기타 DNA 백신을 사용하는 방법(Jay E.Slater et al., Journal of Allergy and Clinical Immunology., 1998), IgE가 비만세포의 수용체에 결합하는 것을 차단하는 치료법(Brian J Sutton et al., British Medical Bulletin., 2000), 그리고 알레르기를 유발하는 사이토카인인 IL-4에 대한 항체 치료법(Carl J., The Journal of Experimental Medicine., 1993) 등의 치료적 접근법이 있다. 하지만 이러한 접근법들은 비용이 많이 들거나 아직 완전히 그 치료 효과가 규명되지 않은 문제가 있다.
본 발명의 조성물에서 유효성분으로 사용하는 심비디움(Cymbidium)은 동남아시아, 중국, 일본, 뉴기니, 오스트레일리아 북구가 원산지로, 2개의 꽃잎, 1개의 설판, 그리고 3개의 꽃받침으로 구성된 꽃, 칼모양의 잎, 일반적으로 벌브라고 불리는 방추형의 비대한 줄기 및 굵은 끈과 같은 뿌리를 가지고 있다. 산세베리아 보다 음이온 발생량이 더 많으며 상대습도까지 높여주는 기능이 있어 공기정화와 가습 능력이 우수한 식물로 보고되고 있다. 또한 모발세력 활력, 재생기능, 항염기능이 우수해 일본에서는 모발재생제품, 모발샴푸 등으로 개발되어 판매되고 있으며, 우리나라에서도 이러한 연구결과가 보고된바 있다. 다수의 연구결과에 따르면 심비디움의 뿌리에서 추출된 페난트렌(Phenanthrene)과 페닐프로파노이드(phenylpropanoid)는 항균력 실험에서 고초균, 폐렴간균, 적색백선균에 대해 항균기능을 가지고(Yoshikawa K et al., Journal of Natural Medicines., 2014), 카라기닌(Carrageenin)으로 유도된 쥐의 부종에 대한 항염증 실험에서 효과를 나타내었으며(Howlader M A et al., Pakistan Journal of Biological Sciences., 2011), 착향 및 화장품 성분으로 이용된다고 알려진 리날로올(linalool)과 4-메틸-페놀(4-methyl-phenol)은 심비디움 뿌리에서 색층분석법을 통해 분석되었다(Gaytan V G et al., Journal of Analytical Sciences, Methods and Instrumentation., 2013). 또한 심비디움에서 추출된 유효성분인 방향성 글리코사이드(aromatic glucosides)는 과산화물제거 실험에서 항산화능을 나타낸다는 점이 검증되었다(Yoshikawa L et al., Journal of Natural Medicines., 2013).
한국공개특허 제2013-0010885호에는 파리지옥풀(Dionaea muscipula) 추출물이 가속 또는 내인성 노화에 따른 피부 변화에 대항하는 미용 치료용 조성물에 포함될 수 있고 여기에 추가로 심비디움 에리트레움(Cymbidium erythraeum) 추출물이 주름, 견고성 및 탄력성의 상실 및 착색 증가에 대항하기 위하여 포함될 수 있다는 점이 개시되어 있다.
하지만 심비디움에 대한 항알레르기 또는 접촉성 피부염 억제 효과에 대해서는 알려진 바 없다.
본 발명의 목적은 심비디움(cymbidium) 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료 또는 개선을 위한 새로운 소재를 발굴하고 이의 신규 용도를 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 심비디움(cymbidium) 추출물에 의한 알레르기를 유발하는 비만세포의 알레르기 유발물질의 분비 작용 억제 효과 및 접촉성 피부염 동물 모델에서의 염증 억제 효과를 확인함으로써 상기 심비디움(cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 건강기능식품, 피부외용제 및 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 심비디움(cymbidium) 추출물은 치료용량에서 세포독성을 나타내지 않으면서 알레르기를 유발하는 비만세포의 알레르기 유발물질의 분비 작용 억제 및 지연형 과민반응의 항원(DNCB (2.4-dinitrochlorobenzene))에 의해 유발된 접촉성 피부염 동물 모델에서의 긁는 행위 감소 및 피부관능 평가에서 제증상의 완화, 혈중 내 IgE 감소 등의 효과를 나타내므로 심비디움(cymbidium) 추출물은 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 건강기능식품, 피부외용제 및 화장료 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 심비디움 추출물을 25, 50, 100, 200 μg/ml을 처리한 후 비만세포에서 배양하였을 때 나타나는 세포독성을 보여주는 그래프이다.
도 2는 심비디움 추출물의 농도에 따른 비만세포의 알레르기 유발물질 분비 억제 효과를 나타낸 것이다.
도 3 은 심비디움 추출물의 생체 내 항체/항원 반응 억제효과를 농도 의존적으로 사진과 그래프를 통해 나타낸 것이다.
도 4는 심비디움 추출물을 도포하였을 때 ICR 마우스의 긁는 행동을 관찰한 것을 그래프로 나타낸 것이다.
도 5은 심비디움 추출물을 도포하였을 때 ICR 마우스의 피부 관능 평가를 실시한 것을 그래프로 나타낸 것이다.
도 6은 심비디움 추출물을 도포하였을 때 ICR 마우스의 혈중 IgE 수준을 측정한 것을 그래프로 나타낸 것이다.
도 7은 DNCB-유도 아토피성 피부 마우스 모델 실험디자인과정을 나타낸 것이다.
도 8은 AD-like ICR 마우스에서 심비디움 처리가 DNCB-유도 피부에 미치는 효과를 측정한 결과이다.
도 9는 AD-like ICR 마우스에서 심비디움 처리가 DNCB-유도 피부에 미치는 효과를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 10은 AD-like ICR 마우스에서 심비디움 처리가 DNCB-유도 등피부 두께에 미치는 효과를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 11은 AD-like ICR 마우스에서 심비디움 처리가 DNCB-유도 사이토카인 mRNA 발현에 미치는 영향을 그래프로 나타낸 것이다.
도 12는 심비디움 처리 후 IgE/DNP-BSA 유도성 Syk, Erk1/2, Akt, JNK 및 PLC-γ의 발현을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 13은 심비디움 처리 후 IgE/DNP-BSA 유도성 Syk, Erk1/2, Akt, JNK, 및 PLC-γ의 발현을 측정한 결과를 그래프화한 것이다.
본 발명은 심비디움(cymbidium)을 유효성분으로 함유하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 일 실시양태에서, 상기 심비디움 추출물은 심비디움의 꽃, 잎, 가지, 뿌리, 줄기, 열매, 껍질 및 이들의 혼합물로 구성된 그룹으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있으며, 보다 구체적으로 상기 심비디움의 뿌리 및 줄기를 사용할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 심비디움 추출물은 물, 유기용매, 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸 아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산 또는 디클로로메탄일 수 있고, 보다 구체적으로 에탄올일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 알레르기 질환은 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 천식 및 아나필락틱 쇼크(anaphylactic shock)로 구성된 그룹으로부터 선택되는 질환일 수 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다.
발명의 일 양태에서, 상기 알레르기성 피부염은 건선, 접촉성 알레르기 피부염, 두드러기 등일 수 있다.
발명의 일 양태에서, 상기 약학적 조성물은 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염에 의한 염증반응, 가려움증, 또는 부종을 완화 또는 억제할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 접촉성 피부염은 외부물질과의 접촉에 의한 접촉성 피부염이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 약학적 조성물 중 심비디움(cymbidium)이 전체 약학적 조성물 중량의 0.001 내지 10 중량%로 포함되는 것일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 약학적 조성물은 정제, 과립제, 환제, 캅셀제, 액제, 주사제, 연고제, 좌제 및 산제로 구성된 그룹으로부터 선택되는 제형으로 제형화될 수 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다.
이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명은 심비디움(cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 일 실시양태에서, 상기 심비디움 추출물은 심비디움의 꽃, 잎, 가지, 뿌리, 줄기, 열매, 껍질 및 이들의 혼합물로 구성된 그룹으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있으며, 보다 구체적으로 상기 심비디움의 뿌리 및 줄기를 사용할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 심비디움 추출물은 물, 유기용매, 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸 아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산 또는 디클로로메탄일 수 있고, 보다 구체적으로 에탄올일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 알레르기 질환은 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 천식 및 아나필락틱 쇼크(anaphylactic shock)로 구성된 그룹으로부터 선택되는 질환일 수 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다.
발명의 일 양태에서, 상기 알레르기성 피부염은 건선, 접촉성 알레르기 피부염, 두드러기 등일 수 있다.
발명의 일 양태에서, 상기 약학적 조성물은 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염에 의한 염증반응, 가려움증, 또는 부종을 완화 또는 억제할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 접촉성 피부염은 외부물질과의 접촉에 의한 접촉성 피부염이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 약학적 조성물 중 심비디움(cymbidium)이 전체 약학적 조성물 중량의 0.001 내지 10 중량%로 포함되는 것일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 약학적 조성물은 정제, 과립제, 환제, 캅셀제, 액제, 주사제, 연고제, 좌제 및 산제로 구성된 그룹으로부터 선택되는 제형으로 제형화될 수 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 심비디움 추출물을 포함하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 및 치료용 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제(연고제, 패취제, 겔제), 좌제 및 멸균 주사용액 비경구 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
심비디움 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에이스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐리롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 및 광물유를 들 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁액, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 웨텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween)61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다.
본 발명에서 용어 "약학적으로 유효한 양”은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 심비디움 추출물은 성인의 경우, 1일 1회 내지 수회 투여 시, 0.0001 내지 50 mg/kg 또는 0.001 내지 50 mg/kg의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 항알레르기 또는 접촉성 피부염 억제 효과를 나타내는 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명에서 용어 "개체”란 항알레르기 또는 접촉성 피부염 억제 활성을 통해 예방 또는 치료할 수 있는 질환이 이미 발병되었거나, 발병될 수 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미하고 본 발명의 추출물을 포함하는 조성물을 개체에게 투여함으로써, 상기 질환을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있다.
상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 목적하는 바에 따라 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
본 발명에서 “치료”는 본 발명의 약학적 조성물을 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염에 적용한 결과로서 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염의 완치는 물론 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 증세의 부분적 완치, 호전 및 경감을 포함한다.
본 발명에서 “예방”은 본 발명의 약학적 조성물을 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염에 적용하여 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 증세를 억제 또는 차단함으로써, 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염이 사전에 발생되지 않도록 하는 것을 의미한다.
또한 본 발명에 있어서, “개선”이란 증상의 경감, 예방 또는 치료를 포함하는 의미이다.
또한 본 발명에 있어서, “유효성분”이란 단독으로 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체(carrier)와 함께 활성을 나타내는 성분을 의미한다.
본 발명은 심비디움(cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 피부외용제에 관한 것이다.
본 발명에 따른 일 실시양태에서, 상기 심비디움 추출물은 심비디움의 꽃, 잎, 가지, 뿌리, 줄기, 열매, 껍질 및 이들의 혼합물로 구성된 그룹으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있으며, 보다 구체적으로 상기 심비디움의 뿌리 및 줄기를 사용할 수 있다
본 발명의 일 양태에서, 상기 심비디움 추출물은 물, 유기용매, 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸 아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산 또는 디클로로메탄일 수 있고, 보다 구체적으로 에탄올일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 알레르기 질환은 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 천식 및 아나필락틱 쇼크(anaphylactic shock)로 구성된 그룹으로부터 선택되는 질환일 수 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 알레르기성 피부염은 건선, 접촉성 알레르기 피부염, 두드러기 등일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 피부외용제는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염에 의한 염증반응, 가려움증, 또는 부종을 완화 또는 억제할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 피부외용제는 외용산제, 외용정제, 외용액제, 연고제, 크림제, 겔제, 경고제, 드레싱제, 패취제 및 스프레이제로 구성된 그룹으로부터 선택되는 제형으로 제형화될 수 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 피부외용제 중 심비디움(cymbidium) 추출물이 전체 피부외용제 중량의 0.0001 내지 5 중량%로 포함되는 것일 수 있다.
본 발명은 심비디움(cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다.
본 발명에 따른 일 실시양태에서, 상기 심비디움 추출물은 심비디움의 꽃, 잎, 가지, 뿌리, 줄기, 열매, 껍질 및 이들의 혼합물로 구성된 그룹으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있으며, 보다 구체적으로 상기 심비디움의 뿌리 및 줄기를 사용할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 심비디움 추출물은 물, 유기용매, 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸 아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산 또는 디클로로메탄일 수 있고, 보다 구체적으로 에탄올일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 알레르기 질환은 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 천식 및 아나필락틱 쇼크(anaphylactic shock)로 구성된 그룹으로부터 선택되는 질환일 수 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 알레르기성 피부염은 건선, 접촉성 알레르기 피부염, 두드러기 등일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 건강기능식품은 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염에 의한 염증반응, 가려움증, 또는 부종을 완화 또는 억제할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 건강기능식품 중 심비디움(cymbidium)이 전체 건강기능식품 중량의 0.001 내지 1 중량%로 포함되는 것일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 건강기능식품은 정제, 과립제, 환제, 캅셀제, 액제 및 산제로 구성된 그룹으로부터 선택되는 제형으로 제형화될 수 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 건강기능식품은, 상기 심비디움 추출물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하되, 적절한 식품보조첨가제가 포함될 수 있다.
본 발명에서 용어 "식품보조첨가제”란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 용어 "건강기능식품”이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 “기능성”이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명에 따른 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 건강기능식품은 항알레르기 또는 접촉성 피부염 억제 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.
유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품의 제조 시에 본 발명의 심비디움 추출물은 원료 조성물 중 0.01 내지 5 중량%의 양으로 포함될 수 있다. 건강음료의 경우 100 mL를 기준으로 0.02 내지 2 g 또는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강식품 조성물은 통상의 식품과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL 당 일반적으로 약 0.1 ~ 10 g, 구체적으로 약 1 ~ 8 g, 보다 구체적으로 5 ~ 6 g 이다.
상기 외에 본 발명의 심비디움 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 및 천연 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
그밖에 본 발명의 심비디움 추출물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이때, 첨가제의 비율은 그다지 중요하지는 않지만 본 발명의 심비디움 추출물 100 중량부 당 0.0001 내지 약 10 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명은 심비디움(cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 일 실시양태에서, 상기 심비디움 추출물은 심비디움의 꽃, 잎, 가지, 뿌리, 줄기, 열매, 껍질 및 이들의 혼합물로 구성된 그룹으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있으며, 보다 구체적으로 상기 심비디움의 뿌리 및 줄기를 사용할 수 있다
본 발명의 일 양태에서, 상기 심비디움 추출물은 물, 유기용매, 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸 아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산 또는 디클로로메탄일 수 있고, 보다 구체적으로 에탄올일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 알레르기 질환은 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 천식 및 아나필락틱 쇼크(anaphylactic shock)로 구성된 그룹으로부터 선택되는 질환일 수 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 알레르기성 피부염은 건선, 접촉성 알레르기 피부염, 두드러기 등일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화장료 조성물은 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염에 의한 염증반응, 가려움증, 또는 부종을 완화 또는 억제할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화장료 조성물 중 심비디움(cymbidium) 추출물이 전체 화장료 조성물 중량의 0.000001 내지 1 중량% 보다 구체적으로 0.000001 내지 0.01 중량%, 보다 더 구체적으로 0.00005 내지 0.001 중량% 포함되는 것일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화장료 조성물은 피부 점착 타입의 화장료 제형, 예를 들어, 기초제품 화장료(화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 비누), 바디제품 화장료(바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 비누), 색조제품 화장료(파운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발제품 화장료(샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 젤) 등을 가질 수 있다. 또한, 경피 투여형 제형, 예를 들어, 연고제, 액제, 드레싱제, 패취제 또는 스프레이제 등으로 제조될 수 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화장료 조성물은 화장료의 건조중량에 대하여 약 0.05 내지 10.0 중량% 함량으로 배합하여 사용할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화장료 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속 이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
이하, 본 발명에 따르는 실시예, 실험예, 및 제조예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하나, 본 발명의 범위가 하기 제시된 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1. 심비디움 추출물의 제조
심비디움(Cymbidium)은 농촌진흥청(Rural Development Administration, RDA)의 우수농산물관리제도(Good Agricultural Practice, GAP)에 의해 재배되었으며, 2009년 충청북도 음성(GPS: E 128° 62´ N 36° 56´)에서 수확되었다. 시료의 추출은 다음과 같이 추출하였다. 심비디움 뿌리와 줄기 음건조 시료 50 g에 99% 에탄올 150 ml을 첨가하여 150 rpm으로 48시간 동안 반응하여 여과한 후, 감압농축하여 동결건조 한 분말을 본 실험의 시료로 사용하였다.
[실험예] 생리활성 확인 실험
실험예 1: 심비디움 추출물의 알레르기 억제효과 확인
(1) 세포배양
정상 비만세포(RBL-2H3)를 우태아 혈청(fetal bovine serum; FBS)이 5% 함유된 DMEM 배지에서 배양하였다. 즉, 75 ㎠ 플라스틱 플라스크 (Falcon Co., England)에 정상 비만세포를 10% FBS, 7.5% NaHCO3 150 μg/ml, 글루타민 58.4 μg/ml 및 항생제(antibiotics)/항진균제(antimycotics) 4.4 μl/ml 가 함유된 DMEM 배지에서 37 ℃, 5% CO2의 조건하에서 배양하였다. 2∼3일마다 한 번씩 2차 배양하여 세포주를 유지하였다.
(2) 세포정량
세포가 자란 75 ㎠ 플라스틱 플라스크에서 배지액을 제거하고, CMF-PBS (calcium magnesium free-phosphate buffered saline, pH 7.2)로 세척한 후, 0.25% 트립신/EDTA를 처리하여 세포를 플라스크 바닥으로부터 떼어낸 후 세포 배양액으로 중화시켜서 원심분리(1200 rpm, 3 min) 하였다. 남은 세포의 펠렛(pellet)에 배양액을 가한 다음, 멸균 피펫으로 반복 흡입하여 단일세포 부유액을 만든 후 트립판 블루(trypan blue)를 세포부유액과 9:1의 비율로 혼합하여 광학현미경 상에서 혈구계산판(hemocytometer)을 이용하여 측정 하였다.
(3) 세포독성 측정
심비디움 추출물의 독성측정은 MTT assay 방법을 이용하였다. 즉, 정상 비만세포(RBL-2H3)를 24웰 플레이트에 1×105 cells/well이 되도록 분주하였다. 이를 37 ℃, 5% CO2조건의 배양기에서 24시간 배양한 후, 0, 25, 50, 100, 200 μg/ml의 다양한 농도의 심비디움 추출물을 첨가하여 24시간 동안 배양하였다. CMF-PBS (calcium magnesium free-phosphate buffered saline, pH 7.2) 10 ml에 0.01 g의 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)를 녹인 MTT용액을 각 웰마다 50 ul분주하고, 1시간 배양기에서 반응 후, 배지액을 제거하였다. 그리고 DMSO(Dimethyl sulfoxide)를 분주하고, 96웰에 각각 옮긴 후, 흡광도를 측정하여 심비디움 (cymbidium) 추출물의 세포독성을 결정하였다.
심비디움 추출물이 첨가된 배양 정상 비만세포에서 세포독성을 측정한 결과를 도 1에 나타내었다. 심비디움 추출물을 첨가하지 않았을 경우는 100%의 생존율을 보였고, 심비디움 추출물을 첨가한 첨가군에서는 첨가하지 않은 군과 비슷한 생존율을 보였다. 따라서 심비디움 추출물은 배양 비만세포에 독성을 나타내지 않음을 알 수 있었다.
(4) 심비디움 추출물의 비만세포에 대한 알레르기 유발물질 분비 억제효과
심비디움 추출물이 체내에서 알레르기를 유발하는 비만세포로부터 알레르기 유발물질의 분비를 억제시키는 효과가 있는지 확인하기 위하여, 비만세포를 24웰 플레이트에 2×105 cells을 400 ng/㎖ DNP-특이성 IgE와 같이 배양하였다. 상기 배양된 세포를 PIPES 완충액(25 mM PIPES, pH 7.2, 119 mM NaCl, 5mM KCl, 0.4 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 5.6 mM glucose, 및 0.1% BSA)으로 세척한 다음, 항원을 첨가하기 전에 30분 동안 전 배양하였다. 전 배양 후 항원을 최종 농도 50 ng/㎖로 첨가하여 자극을 유도하였다. 알레르기 유도 물질의 분비 정도는 배지 중에 분비된 탈과립의 표식자인 헥소사미니다아제(hexosaminidase)의 활성을 p-니트로페닐아세틸-β-D-글루코사미니드(p-nitrophenylacetyl-β-D-glucosaminide)로부터 유리된 p-니트로페닐(pnitrophenol)의 양으로 결정하였다.
도 2는 알레르기를 유발하는 비만세포에 대한 심비디움 추출물의 농도 의존적 억제 효과를 나타낸 것으로, 심비디움 추출물이 비만세포의 다양한 알레르기 유발물질의 분비를 농도 의존적으로 억제함을 확인할 수 있었다.
(5) 심비디움 추출물의 수동 피부 아나필락시스를 통한 항체/항원 반응 억제효과
심비디움 추출물의 생체 내 항체/항원 반응 억제효과를 확인하기 위해 DNP-특이성 IgE 항체 0.5 μg을 7주령 수컷 ICR 마우스의 한쪽 귀 피내주사를 한 다음, 24 시간 후 DNP-BSA 200 μg과 에반스 블루(Evans blue) 3%를 마우스 꼬리 정맥주사를 통해 주입하여 항원/항체 반응을 일으켰다. 1시간 후 심비디움 추출물을 0, 30, 50, 100 mg/kg농도로 경구 투여하고, 1 시간 후 ICR 마우스를 안락사 시켜 IgE 항체를 주입하였던 귀를 적출하였다. 염색된 적출한 ICR 마우스의 귀는 500 μl의 포름아마이드(formamide)를 투여하여 63 ℃에서 12시간 동안 반응시켜 추출되도록 하였다.
도 3 은 심비디움 추출물의 생체 내 항체/항원 반응 억제효과를 농도 의존적으로 나타낸 것으로, 심비디움 추출물이 ICR 마우스 내 항체/항원 반응을 농도 의존적으로 억제함을 확인할 수 있었다.
실험예 2: 심비디움 추출물의 알레르기성 접촉성 피부염 유도 동물 모델에서의 억제효과 확인
(1) 알레르기성 접촉성 피부염 유도 동물 모델 준비
알레르기성 접촉성 피부염을 유도하기 위해 7주령의 수컷 ICR 마우스의 등쪽 부위 털을 면도한 후, 24시간 후 지연형 과민반응의 항원으로 DNCB(2,4-dinitrochlorobenzene)를 올리브 오일과 아세톤의 혼합용액(혼합 부피 비율 1:3)에 1 w/v%가 되게 용해한 후 ICR 마우스의 등쪽 부위 2 ㎝2에 300 ㎕를 도포하여 1차 면역시켰다. 1차 면역 4일 경과 후 0.5% DNCB를 등쪽 부위에 250 ㎕ 도포하고 이를 약 2주간 지속적으로 동일 농도, 동일 양을 처리하여 2차 면역을 실시하였다. 심비디움 추출물을 도포하는 군은 2차 DNCB 투여 시부터 격일 단위로 한번씩 10 mg/mL의 농도로 등쪽 부위에 200 ㎕씩을 도포하였다.
(2) 알레르기성 접촉성 피부염 유도 동물 모델의 긁는 행동 변화 측정
2차 DNCB 투여 후 48시간 간격으로 동영상 촬영을 통해 접촉성 피부염에 의해 발생되는 긁는 행동의 횟수를 측정 할 수 있는 긁는 행동 확인 실험을 실시하였다. DNCB의 2차 도포 후 등쪽 표피의 손상 및 염증이 지속적으로 발생한 뒤로 개체들의 등쪽 부위를 긁는 행동이 계속해서 증가하는 양상을 확인하였다.
도 4는 심비디움 추출물을 도포하였을 때 ICR 마우스의 긁는 행동을 관찰한 것으로 심비디움 추출물을 함께 도포한 군에서는 4번째 투여 이후, 긁는 행동이 확연하게 감소되는 것을 확인하였다.
(3) 알레르기성 접촉성 피부염 유도 동물 모델의 피부 관능 평가 실시
2차 투여 DNCB 투여 후 긁는 행동 관찰을 하는 동안 ICR 마우스의 피부 상태를 홍반, 가려움과 건조피부, 부종과 혈종, 짓무름, 태선화, 이 5항목에 대해 증상 없음 0점, 증상 약함 1점, 보통 2점, 심함 3점으로 채점한 후, 5항목의 점수를 합산함으로써 최소 0점(아무 증상이 없는 상태)에서 최고 15점 (모든 항목의 증상이 심한 상태)사이의 평가 점수를 부여하였다.
도 5은 심비디움 추출물을 도포하였을 때 ICR 마우스의 피부 관능 평가를 실시한 것으로 피부 관능평가를 통해 DNCB를 도포한 군과 심비디움 추출물과 DNCB를 모두 도포한 군을 비교하였을 때, DNCB만 도포한 군은 횟수가 거듭할수록 점수가 증가하여 12점 까지 향상된 반면 심비디움 추출물을 함께 도포한 군에서는 3 번째 투여부터 감소하여 2점대까지 저하된 것을 확인하였다.
(4) 알레르기성 접촉성 피부염 유도 동물 모델의 혈청 내 IgE의 변화
알레르기성 접촉성 피부염 유도 동물 모델의 혈중 IgE 수준을 측정하기 위해 DNCB 및 심비디움 추출물을 6회차까지 진행한 후, 심장혈을 채취하여 혈청을 분리하였다. 그 후, 마우스용 IgE 효소결합 면역흡착 분석법(ELISA MAXTMDeluxeset)을 이용하여 흡광도를 450 nm에서 측정하였다.
도 6은 심비디움 추출물을 도포하였을 때 ICR 마우스의 혈중 IgE 수준을 측정한 것으로 DNCB만 도포한 접촉성 피부염을 유발한 군에서는 혈청 내 IgE의 농도가 약 3배 정도 증가되었으나, 심비디움 추출물을 함께 도포한 군에서는 정상군과 비슷하게 감소된 것을 확인하였다.
실험예 3: 심비디움 추출물의 아토피성 피부염 유도 동물 모델에서의 억제효과 확인
(1) 아토피성 피부염 유도 동물 모델 준비
ICR 마우스를 3그룹(미처리군, DNCB-유도군, 및 DNCB 처리 후 심비디움 추출물 처리군; 그룹 당 n = 6)으로 나누었다. 등쪽 털을 완전히 제거한 후, 25 μL의 1% 2,4-디니트로클로로벤젠(DNCB) 용액(아세톤 및 올리브 오일 3:1 혼합용매에 용해된)을 첫째 날 등쪽 피부의 7.5 cm2 부위에 적용하고, 4일째에 sensitization시켰다. sensitization 후 등쪽 피부 7.5 cm2 에 대해, 200 μL의 10 mg/mL 심비디움 추출물을 2주 치료 기간 동안 총 6회 마우스의 DNCB-유도 등쪽 피부에 적용하였다. 첫번째 DNCB 투여로부터 17일째 되는 날 동물을 희생시켰다(동물 모델 준비에 대해서는 도7 참조). 실험 결과, 심비디움 추출물 처리군의 경우 등쪽 피부의 아토피 증상이 DNCB 미처리군과 같은 수준으로 치료되는 것으로 나타났다(도8 참조).
(2) 심비디움 추출물의 아토피성 피부염 유도 동물 모델에서의 억제 효과 실험-skin severity
아토피성 피부염 유도 마우스를 희생한 후, 등쪽 피부를 촬영하고, 실험기간 동안 등쪽 피부 부위에 0.5% DNCB를 처리한 후 피부염의 severity를 측정하였다. skin severity 측정 평가 방법은 아토피성 피부염에서 일반적으로 사용되는 임상적 육안 평가법으로서 아토피 피부염의 심각성 정도를 홍반(erythma), 가려움과 건조피부(pruritus and dry skin), 부종과 혈종(edema and excoriation), 짓무름(erosion), 태선화(lichenification)와 같은 5가지 항목을 각각 평가한 점수의 총합으로 나타낸다. 각각의 항목에 대하여 증상 없음(0점), 증상 약함(1점), 보통(2점), 심함(3점)으로 채점한 후, 각 항목의 점수를 합산하여 평가점수를 부여하였다. 그 결과, 심비디움 추출물을 처리하였을 경우, DNCB군에 비해 현저히 그 score가 감소되는 것을 확인할 수 있었다(도9). 이를 통해 본 발명의 심비디움 추출물이 아토피성 피부염 유도 동물 모델에서 아토피성 피부염 제증상을 억제하는데 우수한 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
(3) 심비디움 추출물의 아토피성 피부염 유도 동물 모델에서의 억제 효과 실험-피부두께
아토피성 피부염 유도 마우스를 희생한 후, 각 마우스에서 등쪽 표피를 사용하여 4% 파라-포름알데히드 용액에 고정하고 30% 수크로즈 용액으로 안정화시켰다. 이를 Tissue-Tek O.C.T compound에 embedded시키고 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하여 광학현미경으로 조직학적 변화를 관찰하였다. DNCB군의 경우 등쪽 피부 두께가 정상군에 비하여 현저히 비후되어 있는 반면, 심비디움 추출물 처리군의 경우 표피 및 진피의 비후가 DNCB군과 비교하여 감소하였다.(도10)
(4) 심비디움 추출물의 아토피성 피부염 유도 동물 모델에서의 억제 효과 실험-cytokines mRNA 발현
아토피성 피부염 유도 마우스를 희생한 후 각 마우스에서 등쪽 표피를 사용하였다. Tri reagent(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)를 사용하여 총 RNA를 분리하였고, manufacturer's instruction에 따라 실험을 수행하였다. 총 RNA 농도는 분광광도계(GE Healthcare, Buckinghamshire, UK)를 사용하여 측정하였다. 총 RNA는 cDNA 합성에 템플레이트로 사용되었고, cDNA Synthesis Kit(Takara Bio, Shiga, Japan)을 사용하여 수행하였다. SYBR Green I 및 Lightcycler®96 instrument(Roche, Basel, Switzerland)를 사용하여 Real-time PCR 분석을 수행하였다. 다음의 프라이머가 사용되었다:
마우스 IL-4 sense 5'-GGTCTCAACCCCCAGCTAGT-3' ;
IL-4 antisense 5'-GCCGATGATCTCTCTCAAGTGA-3' ;
mouse IL-13 sense 5'-CCTGGCTCTTGCTTGCCTT-3' ;
IL-13 antisense '5-GGTCTTGTGTGATGTTGCTCA-3' ;
mouse TNF- sense 5'-CTGTAGCCCACGTCGTAGC-3' ;
TNF-α antisense 5'-TTGAGATCCATGCCGTTG-3' ;
mouse β-actin sense 5'-ATGCCATCCTGCGTCTGGACCTGGC-3' ;
β-actin antisense 5'-AGCATTTGCGGTGCACGATGGAGGG-3'.
denaturation, annealing 및 extension 컨디션 및 사이클수는 94℃에서 60초동안, 49℃에서 45초동안, 72℃에서 45초동안 및 35 사이클로 하였다.
실험결과 심비디움 추출물을 처리하는 경우 IL-4, IL-13 및 TNF-α mRNA의 발현이 감소하는 것으로 나타났다(도11 참조).
(5) 심비디움 추출물의 아토피성 피부염 유도 동물 모델에서의 억제 효과 실험-IgE/DNP-BSA 유도성 Syk, PLC-γ, Akt, Erk 1/2, JNK의 발현
아토피성 피부염 유도 마우스를 희생한 후 각 마우스에서 등쪽 표피를 사용하였다. 2 nM EDTA, 137 mM NaCl, 20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM 소디움 바나데이트, 10 mM NaF, 1 mM PMSF, 1% 트리톤 X-100, 10% 글리세롤 및 protease inhibitor cocktail을 함유하는 RIPA 완충액으로 용해시켰다. 각 샘플의 단백질 농도를 Bradford 분석 키트(Bio-Rad, CA, USA)를 사용하여 측정하였고, manufacturer's instructions에 따라 수행하였다. whole lysates를 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)를 사용하여 10-15% 폴리아크릴아마디드 겔 상에서 분석하였다. 단백질을 PVDF 멤브레인(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)로 트랜스퍼하였다. 멤브레인을 0.1% 트윈-20(TBS/T) 및 5% 스킴드 밀크 분말을 함유하는 Tris-buffered saline에서, 4℃에서 하룻밤동안 블록킹시키고, 각 primary 항체와 배양하였다. Syk, phospho-Syk, PLC-γ, phospho-PLC-γ, Akt, phospho-Akt, p44/42 MAP kinase 및 phospho-944/22 MAP kinase(Thr 202/Tyr 204)를 Cell Signaling(Beverly, MA, USA)에서 입수하였따. 블롯을 TBS/T로 세척하고 horseradish peroxidase와 컨쥬게이트된 각 secondary 항체와 함께 배양하였다. 면역블롯 분석을 위한 enhanced chemiluminescence detection reagent(GE Healthcare, Buckinghamshire, UK)를 사용하여 단백질을 검출하였다. 그 결과 심비디움 추출물은 IgE/DNP-BSA 유도성 Syk, Erk1/2, Akt, JNK 및 PLC-γ의 인산화를 저해하는 것으로 나타났다(도12 및 도13).
[제조예]
제조예 1. 산제의 제조
심비디움 추출물 10 mg
수크로즈 100 mg
탈크 10 mg
상기 성분들을 분말화하여 혼합한 후 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
제조예 2. 정제의 제조
심비디움 추출물 10 mg
전분 100 mg
수크로즈 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
통상의 정제의 제조방법에 따라 상기 성분들을 혼합한 후 이를 타정하여 정제를 제조한다.
제조예 3. 캅셀제의 제조
심비디움 추출물 10 mg
결정성 셀룰로오즈 3 mg
락토오즈 15 mg
스테아린산 마그네슘 1 mg
통상의 캅셀제의 제조방법에 따라 상기 성분들을 혼합한 후 젤라틴 캡슐에 충진하여 캅셀제를 제조한다.
제조예 4. 과립제의 제조
심비디움 추출물 10 mg
대두 추출물 50 mg
포도당 200 mg
전분 500 mg
상기 성분들을 혼합한 후 30% 에탄올 100 mL를 첨가하여 60 ℃에서 건조시켜 과립을 형성한 후 포에 충진하여 과립제를 제조한다.
제조예 5. 환제의 제조
심비디움 추출물 20 mg
유당 1,500 mg
글리세린 1,500 mg
전분 980 mg
상기 성분들을 혼합한 후 통상의 환제의 제조방법에 따라 1환 당 2~3 g이 되도록 제조한다.
제조예 6. 주사제의 제조
심비디움 추출물 10 mg
만니톨 180 mg
주사용 멸균 증류수 2,970 mg
Na2HPO4·12H2O 30 mg
통상의 주사제 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 mL)가 되도록 상기 성분을 혼합하여 제조한다.
제조예 7. 액제의 제조
심비디움 추출물 10 mg
이성화당 10,000 mg
만니톨 5,000 mg
정제수 적량
통상의 액제 제조방법에 따라 정제수에 상기 성분을 용해시키고, 적절한 향을 가한 다음 병에 충진하여 멸균시켜 제조한다.
제조예 8. 비누의 제조
물 330 mL와 NaOH 175 g을 혼합하여 완전히 용해시킨 후, 심비디움 추출물 10 mg을 약 30 분 동안 조금씩 첨가하면서 혼합하였다. 상기 혼합물을 건조될 때까지 그늘지고 바람이 잘 통하는 곳에서 건조시켰다.
제조예 9. 목욕제의 제조
심비디움 추출물 10 mg을 약 60 ℃ 정도가 되도록 한 후 천일염을 넣어 포화용액을 만들고, 물을 증발시켰다. 상기 용액을 실온에서 냉각시킨 후 급속냉동시켜 동결건조하였다. 상기 동결건조된 고형제를 분말화하여 목욕제를 제조하였다.
제조예 10. 클렌징 로숀 제조
심비디움 추출물 0.001 v/v%
에틸렌디아민테트라초산나트륨 0.02
파라옥시안식향산메칠 0.2
글리세린 4
소듐히아루로닉액시드 2
프로필렌글리콜 3
카보머 5
세테아릴알코올 0.7
글리세릴스테아테이트 0.5
쉐어버터 1
파라옥시안식향산프로필 0.1
마카다미아넛오일 1
세스퀴올레인산 0.5
글리세릴스테아테이트 1
모노올레인산폴리옥시에칠소르비탄 2
폴리데센 5
미네랄오일 20
디메치콘 5
스테아릴디메치콘 2
트리에탄올아민 0.05
향료 적량
색소 적량
정제수 잔량
상기 성분들을 사용하여 투웨이 케이크 제조를 위한 화장품 제조분야에서의 통상적인 방법에 따라 제조한다.
제조예 11. 스킨 제조
심비디움 추출물 0.001 v/v%
파라옥시안식향산메칠 0.2
에틸렌디아민테트라초산나트륨 0.02
1,3-부틸렌글리콜 0.02
알란토인 3
소듐히아루로닉액시드 5
카보머 0.1
세토스테아릴알코올 0.7
파라옥시안식향산프로필 0.1
소르비탄올리베이트 1.5
소이레시틴 0.2
디메치콘 0.2
세칠옥타노에이트 0.2
쉐어버터 0.2
소듐폴리아크릴레이트 3
트리에탄올아민 0.1
이미다졸리디닐우레아 0.3
향료 적량
색소 적량
정제수 잔량
상기 성분들을 사용하여 스킨 제조를 위한 화장품 제조분야에서의 통상적인 방법에 따라 제조한다.
제조예 12. 세럼 제조
심비디움 추출물 0.001 v/v%
호호바 5
블랙쎄서미 2
스윗아몬드 3
이멀싱파잉왁스 1
비타민E 1
글리세린 2
히아루론산 1
마린 엘라스틴 1
정제수 잔량
상기 성분들을 사용하여 세럼 제조를 위한 화장품 제조분야에서의 통상적인 방법에 따라 제조한다.
제조예 13. 로숀 제조
심비디움 추출물 0.001 v/v%
파라옥시안식향산메칠 0.2
에틸렌디아민테트라초산나트륨 0.02
1,3-부틸렌글리콜 0.02
알란토인 3
소듐히아루로닉액시드 5
카보머 0.1
세토스테아릴알코올 0.7
파라옥시안식향산프로필 0.1
소르비탄올리베이트 1.5
소이레시틴 0.2
디메치콘 0.2
세칠옥타노에이트 0.2
쉐어버터 0.2
소듐폴리아크릴레이트 3
트리에탄올아민 0.1
이미다졸리디닐우레아 0.3
향료 적량
색소 적량
정제수 잔량
상기 성분들을 사용하여 로숀 제조를 위한 화장품 제조분야에서의 통상적인 방법에 따라 제조한다.
제조예 14. 에센스 제조
심비디움 추출물 0.001 v/v%
알란토인 0.05
에틸렌디아민테트라초산나트륨 0.02
트리에탄올아민 0.2
소듐히아루로닉액시드 7
이미다졸리디닐우레아 0.15
소듐플리아크릴레이트 0.4
카보머 0.2
에탄올 3
모노스테아린산폴리옥시에틸렌소르비탄 0.2
파라옥시안식향산메칠 0.2
향료 적량
색소 적량
정제수 잔량
상기 성분들을 사용하여 에센스 제조를 위한 화장품 제조분야에서의 통상적인 방법에 따라 제조한다.
제조예 15. 크림 제조
심비디움 추출물 0.001 v/v%
에틸렌디아민테트라초산나트륨 0.02
알란토인 0.1
글리세린 5
파라옥시안식향산메칠 0.2
소듐히아루로닉액시드 6
카보머 0.1
세토스테아릴알코올 1.7
폴리데센 2
스쿠알란 2
파라옥시안식향산프로필 0.1
부틸렌글리콜디카프릴레이트 3
세틸옥타노이에이트 5
마이크로크리스탈린납 0.1
트리에칠펜탄디올 0.1
쉐어버터 0.2
소르비탄올리베이트 0.3
사이클로메치콘 0.3
스테아릴디메치콘 0.5
이미다졸리디닐우레아 0.15
향료 적량
색소 적량
정제수 잔량
상기 성분들을 사용하여 크림 제조를 위한 화장품 제조분야에서의 통상적인 방법에 따라 제조한다.
제조예 16. 팩 제조
심비디움 추출물 0.001 v/v%
에틸렌디아민테트라초산나트륨 0.02
베타인 3
글리세릴폴리메타크릴레이트 2
알란토인 0.1
소듐히아루로닉액시드 2
글리세린 3
디프로필렌글리콜 5
파라옥시안식향산메칠 0.2
폴리비닐알코올 10
모노올레인산폴리옥시에틸렌소르비탄 0.9
세스퀴올레인산 0.3
호호바에스테르 2
세테아릴알코올 1.5
페트로라륨 0.5
향료 적량
색소 적량
정제수 적량
상기 성분들을 사용하여 팩 제조를 위한 화장품 제조분야에서의 통상적인 방법에 따라 제조한다.
제조예 17. 마사지크림 제조
심비디움 추출물 0.001 v/v%
정제수 적량
글리세린 4.0
바셀린 3.5
트리에탄올 아민 0.5
유동 파라핀 24.5
스쿠알란 2.5
밀납 2.1
토코페릴아세테이트 0.1
카바폴 1.0
솔비탄세스퀴올레이트 3.1
향 미량
방부제 미량
상기 성분들을 사용하여 마사지크림 제조를 위한 화장품 제조분야에서의 통상적인 방법에 따라 제조한다.
제조예 18. 메이크업 베이스 제조
심비디움 추출물 0.001 v/v%
정제수 적량
코팅실리카 1
실리카 10
이산화티탄 8
산화아연 3
색소 1
판상파우더 잔량
상기 성분들을 사용하여 메이크업 베이스 제조를 위한 화장품 제조분야에서의 통상적인 방법에 따라 제조한다.
제조예 19. 파우더 팩트 제조
심비디움 추출물 0.001 v/v%
정제수 적량
마이카 15
이산화티탄 7
실리콘오일 3
에스터계오일 3
색소 적량
향료 적량
탈크 잔량
상기 성분들을 사용하여 파우더 팩트 제조를 위한 화장품 제조분야에서의 통상적인 방법에 따라 파우더 팩트를 제조한다.
제조예 20. 투웨이 케이크 제조
심비디움 추출물 0.001 v/v%
정제수 적량
마이카 15
이산화티탄 12
실리콘오일 3
에스터계오일 5
색소 적량
향료 적량
탈크 잔량
상기 성분들을 사용하여 투웨이 케이크 제조를 위한 화장품 제조분야에서의 통상적인 방법에 따라 제조한다.
본 발명의 심비디움(cymbidium) 추출물은 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 건강기능식품, 피부외용제 및 화장료 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (21)

  1. 심비디움(cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 알레르기 질환은 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 천식 및 아나필락틱 쇼크(anaphylactic shock)로 구성된 그룹으로부터 선택되는 질환인 것을 특징으로 하는 알레르기성 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염에 의한 염증반응, 가려움증, 또는 부종을 완화 또는 억제하는 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 접촉성 피부염은 외부물질과의 접촉에 의한 접촉성 피부염인 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 약학적 조성물 중 심비디움(cymbidium) 추출물이 전체 약학적 조성물 중량의 0.001 내지 10 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서,상기 약학적 조성물은 정제, 과립제, 환제, 캅셀제, 액제, 주사제, 연고제, 좌제 및 산제로 구성된 그룹으로부터 선택되는 제형으로 제형화되는 것을 특징으로 하는 알레르기성 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 심비디움(cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 피부외용제.
  8. 제7항에 있어서, 상기 알레르기 질환은 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 천식 및 아나필락틱 쇼크(anaphylactic shock)로 구성된 그룹으로부터 선택되는 질환인 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 피부외용제.
  9. 제7항에 있어서, 상기 피부외용제는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염에 의한 염증반응, 가려움증, 또는 부종을 완화 또는 억제하는 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 피부외용제.
  10. 제7항에 있어서, 상기 피부외용제는 외용산제, 외용정제, 외용액제, 연고제, 크림제, 겔제, 경고제, 드레싱제, 패취제 및 스프레이제로 구성된 그룹으로부터 선택되는 제형으로 제형화되는 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 피부외용제.
  11. 제7항에 있어서, 상기 피부외용제 중 심비디움(cymbidium) 추출물이 전체 피부외용제 중량의 0.0001 내지 5 중량%인 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 치료용 피부외용제.
  12. 심비디움(cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  13. 제12항에 있어서, 상기 알레르기 질환은 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 천식 및 아나필락틱 쇼크(anaphylactic shock)로 구성된 그룹으로부터 선택되는 질환인 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  14. 제12항에 있어서, 상기 건강기능식품은 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염에 의한 염증반응, 가려움증, 또는 부종을 완화 또는 억제하는 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  15. 제12항에 있어서, 상기 건강기능식품 중 심비디움(cymbidium) 추출물이 전체 건강기능식품 중량의 0.001 내지 1 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  16. 제12항에 있어서, 상기 건강기능식품은 정제, 과립제, 환제, 캅셀제, 액제 및 산제로 구성된 그룹으로부터 선택되는 제형으로 제형화되는 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  17. 심비디움(cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  18. 제17항에 있어서, 상기 알레르기 질환은 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 알레르기성 천식 및 아나필락틱 쇼크(anaphylactic shock)로 구성된 그룹으로부터 선택되는 질환인 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  19. 제17항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염에 의한 염증반응, 가려움증, 또는 부종을 완화 또는 억제하는 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  20. 제17항에 있어서, 상기 화장료 조성물 중 심비디움(cymbidium) 추출물이 전체 화장료 조성물 중량의 0.000001 내지 1 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  21. 제17항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 비누, 클렌징 폼, 클렌징 크림, 클렌징 워터, 목욕제, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 로숀, 크림, 에센스, 아스트린젠트, 유액, 젤, 립스틱, 분무제, 샴푸, 린스, 트리트먼트, 바디클렌져, 팩, 마사지제, 페이스파우더, 콤팩트, 파운데이션, 투웨이케이크 및 메이크업베이스로 이루어진 그룹으로부터 선택된 어느 하나 이상의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 알레르기 질환 또는 접촉성 피부염 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
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