WO2020056735A1 - 提高产物中丙二酰基人参皂苷含量的方法 - Google Patents

提高产物中丙二酰基人参皂苷含量的方法 Download PDF

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WO2020056735A1
WO2020056735A1 PCT/CN2018/107014 CN2018107014W WO2020056735A1 WO 2020056735 A1 WO2020056735 A1 WO 2020056735A1 CN 2018107014 W CN2018107014 W CN 2018107014W WO 2020056735 A1 WO2020056735 A1 WO 2020056735A1
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ginsenoside
malonyl
malonyl ginsenoside
product
mixture
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PCT/CN2018/107014
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裴文国
王璐
窦建鹏
赵洪梅
汪研
李晓华
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吉林加一健康产业股份有限公司
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton

Definitions

  • the invention belongs to the field of medicinal chemistry, and particularly relates to a method for increasing the content of malonyl ginsenoside in a product.
  • Panax ginseng belongs to the genus Panax family, and its main producing areas include northeast China, North Korea, Japan, and eastern Russia.
  • the earliest medical masterpiece in China "Shen Nong's Herbal Classic” has recorded the medicinal effects of ginseng.
  • Modern medical research proves that ginseng has many pharmacological activities such as anti-tumor, regulating the central nervous system, regulating the immune system, and anti-hemolysis.
  • Ginsenoside is the main medicinal ingredient in the genus Panax spp., which has various effects such as enhancing immunity, anti-fatigue, anti-tumor, anti-hypoxia, anti-aging, lowering blood sugar and so on. More than 40 types of ginsenosides have been discovered, which are divided into neutral ginsenosides and acid ginsenosides.
  • Malonyl ginsenosides are acidic ginsenosides.
  • malonyl ginsenosides have been discovered including malonyl ginsenoside Rb1, malonyl ginsenoside Rb2, malonyl ginsenoside Rc, malonyl ginsenoside Rd, and propyl Diacyl ginsenoside Re and others.
  • malonyl ginsenoside The structural formula of malonyl ginsenoside is as follows:
  • R 1 to R 3 groups in malonyl ginsenosides Rb1, Rb2, Rc, Rd, and Re are shown in the following table, Glc represents glucose, Rha represents rhamnose, and Ara (f) represents furan arabinose.
  • Ara (p) stands for pyran-type arabinose.
  • the traditional method for extracting malonyl ginsenosides includes the steps of crushing fresh ginseng or raw sun ginseng, leaching with 70% (W / W) ethanol or methanol at low temperature, and filtering to obtain malonyl Extract of ginsenoside.
  • the content of malonyl ginsenoside in the product obtained by the traditional method is low, and the content needs to be further increased.
  • the purpose of the present invention is to provide a method for increasing the content of malonyl ginsenoside in a product, so as to obtain a product with a higher content of malonyl ginsenoside.
  • the invention also provides a method for preparing malonyl ginsenoside or a product containing malonyl ginsenoside. Based on this, the present invention also provides a product containing malonyl ginsenoside and its application.
  • the first aspect of the present invention relates to a method for increasing the content of malonyl ginsenoside in a product, comprising the following steps:
  • step (2) extracting the first mixture obtained in step (1) to obtain an extract containing malonyl ginsenoside C 7-10 phenyl alkyl ester;
  • step (3) The extract obtained in step (2) is subjected to hydrogenation treatment to obtain a second mixture containing malonyl ginsenoside.
  • step (1) the mixture obtained by the hydrogenation treatment in step (3) does not contain malonyl ginsenoside compounds.
  • step (1) mixed system must Maintain no more than 50ppm.
  • the C 7-10 phenyl alkyl alcohol is selected from the group consisting of benzyl alcohol, phenyl ethanol, phenylpropanol, and any combination thereof, and the malonyl ginsenoside C 7-10 phenyl alkyl
  • the ester is selected from malonyl ginsenoside benzyl ester, malonyl ginsenoside phenylethyl ester, malonyl ginsenoside phenylpropyl ester, and any combination thereof.
  • the mixed system further contains a catalyst.
  • the catalyst in step (1), is p-toluenesulfonic acid.
  • the mass of the catalyst is 3% to 20% of the sample mass, such as 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10 %, 11%, 12%, 13%, 14%, 14.7%, 16%, 17%, 18%, 19%.
  • the temperature of the mixed system is maintained at 100 ° C to 130 ° C, such as 105 ° C, 110 ° C, 115 ° C, 120 ° C, 125 ° C, 135 ° C, 140 ° C 145 ° C.
  • step (3) the hydrogenation treatment is performed under the catalysis of Pd (OH) 2 / C.
  • the content of 2 Pd (OH) Pd (OH) 2 / C is 5% (W / W) ⁇ 20% (W / W), for example, 7% (W / W ), 8% (W / W), 9% (W / W), 10% (W / W), 12% (W / W), 14% (W / W), 16% (W / W), 18% (W / W), 19% (W / W).
  • the method includes one or more of the following A to L:
  • step (1) the sample containing malonyl ginsenoside is a total ginsenoside sample
  • step (1) the mixed system further contains a solvent
  • the solvent is toluene and / or xylene
  • the volume of the solvent is 0.5 to 4 times the volume of the C 7-10 phenylalkyl alcohol, preferably 0.8 times, 1 time, 2 times, and 3 times;
  • the ratio of the amount of the sample to the C 7-10 phenylalkyl alcohol is (0.01 to 1.5): 1 (g / mL), such as 0.02: 1 (g / mL), 0.03: 1 ( g / mL), 0.04: 1 (g / mL), 0.05: 1 (g / mL), 0.065: 1 (g / mL), 0.08: 1 (g / mL), 0.1: 1 (g / mL), 0.2: 1 (g / mL), 0.3: 1 (g / mL), 0.4: 1 (g / mL), 0.5: 1 (g / mL), 0.7: 1 (g / mL), 0.8: 1 (g / mL), 0.9: 1 (g / mL), 1: 1 (g / mL), 1.1: 1 (g / mL), 1.2: 1 (g / mL), 1.3: 1 (g /
  • step (1) the water content of the mixed system is maintained by refluxing water
  • step (1) the temperature and water content of the mixed system are maintained for 3 to 25 hours, such as 7 hours, 9 hours, 10 hours, 12 hours, 13 hours, 14 hours, 15 hours, 16 hours, and 17 hours. , 18 hours, 19 hours, 20 hours, 22 hours, 23 hours, 24 hours;
  • step (2) the extractant is selected from ethyl acetate, dichloromethane, or a combination thereof;
  • step (2) the number of extractions is one or more times
  • step (3) the hydrogenation treatment is performed at normal temperature
  • the time of the hydrogenation treatment is 4 to 16 hours, preferably 5 to 15 hours, such as 6 hours, 8 hours, 10 hours, 12 hours, 13 hours, and 14 hours;
  • steps (1) and (2) further including step (1 '): filtering the first mixture obtained in step (1), collecting the filtrate, and adjusting the pH of the filtrate to 6-10 (for example, 7) , 8, 9), standing still, and performing the extraction in step (2) on the filtrate after the standing;
  • the pH value is adjusted by adding a pH adjuster (such as an alkali solution such as a sodium hydroxide solution);
  • a pH adjuster such as an alkali solution such as a sodium hydroxide solution
  • filtering is performed through a filter paper
  • the standing time is 10 to 120 minutes, such as 20 minutes, 30 minutes, 50 minutes, 60 minutes, 70 minutes, 90 minutes, 100 minutes;
  • step (2) further includes step (2 '): removing water and extractant from the extract obtained in step (2), and then performing a hydrogenation treatment in step (3);
  • step (2 ') water is removed by a desiccant (e.g., anhydrous sodium sulfate);
  • a desiccant e.g., anhydrous sodium sulfate
  • step (2 ') the extractant is removed by distillation (e.g., vacuum distillation);
  • step (4) filtering the second mixture obtained in step (3) to obtain a filtrate, and concentrating the filtrate to obtain a third mixture containing malonyl ginsenoside;
  • filtering is performed through a filter paper
  • the concentration is performed by distillation under reduced pressure.
  • step (1 ') in item J, in step (1 '), the solvent in the first mixture obtained in step (1) is removed before filtration.
  • step (1 ') the solvent in the first mixture obtained in step (1) is removed by distillation under reduced pressure.
  • the solvent in the first mixture is toluene and / or xylene.
  • step (1) p-toluenesulfonic acid is first dissolved in benzyl alcohol to obtain a solution, and the solution is then mixed with a ginseng total saponin sample, toluene and / or xylene, and maintained.
  • the temperature of the mixed system is 95 ° C. to 150 ° C. and the water content of the mixed system is kept ⁇ 50 ppm to obtain a first mixture containing malonyl ginsenoside benzyl ester.
  • step (3) a hydrogenation treatment is performed in a hydrogen atmosphere
  • the pressure of the hydrogen atmosphere is 0.1 to 0.9 MPa, such as 0.2 MPa, 0.3 MPa, 0.4 MPa, 0.5 MPa, 0.6 MPa, 0.7 MPa, 0.8 MPa.
  • the solvent used in the hydrogenation treatment is anhydrous methanol
  • the ratio of the extract to anhydrous methanol obtained in step (2) is (10-40): 1 (mg / mL), such as 13: 1 (mg / mL), 15: 1 (mg / mL), 18 : 1 (mg / mL), 20: 1 (mg / mL), 22: 1 (mg / mL), 24: 1 (mg / mL), 26: 1 (mg / mL), 28: 1 (mg / mL) mL), 30: 1 (mg / mL), 32: 1 (mg / mL), 34: 1 (mg / mL), 36: 1 (mg / mL), 38: 1 (mg / mL).
  • 1 (mg / mL) such as 13: 1 (mg / mL), 15: 1 (mg / mL), 18 : 1 (mg / mL), 20: 1 (mg /
  • the method for preparing a total ginsenoside sample includes the following steps:
  • step 2) Ultrafiltration of the liquid phase obtained in step 1) with an ultrafiltration membrane having a molecular weight cut-off of 80 to 160 kDa (for example, 85 kDa, 90 kDa, 95 kDa, 100 kDa, 110 kDa, 120 kDa, 130 kDa, 140 kDa, 150 kDa) ;
  • step 2) The permeate obtained in step 2) is concentrated and dried to obtain a total ginsenoside sample.
  • the method for preparing a total ginsenoside sample further includes one or more of the following a to i:
  • step 1) before leaching, crush the ginseng;
  • the material-liquid ratio of the extraction is 1: (1 to 13) (g / g), such as 1: 3 (g / g), 1: 2 (g / g), 1: 5 ( g / g), 1: 6 (g / g), 1: 8 (g / g), 1:10 (g / g), 1:12 (g / g);
  • step 1) the extraction temperature is normal temperature
  • the extraction time is 0.5 to 5 hours, such as 1 hour, 2 hours, 3 hours, and 4 hours;
  • step 1) the number of extractions is one or more times;
  • the concentration of the methanol aqueous solution is 40% (W / W) to 90% (W / W), for example, 50% (W / W), 60% (W / W), 70% (W / W), 80% (W / W);
  • step 2) before ultrafiltration, the liquid phase obtained in step 1) is filtered and methanol is removed;
  • filtering through filter paper Preferably, filtering through filter paper
  • methanol is removed by distillation under reduced pressure
  • step 3 concentration by nanofiltration treatment
  • the cut-off molecular weight of the nanofiltration membrane is 0.3 to 7 kDa, for example, 0.5 kDa, 0.8 kDa, 1 kDa, 1.5 kDa, 2 kDa, 3 kDa, 4 kDa, 5 kDa, 6 kDa;
  • step 3 the drying is performed under vacuum.
  • malonyl ginsenoside is selected from malonyl ginsenoside Rb1, malonyl ginsenoside Rb2, malonyl ginsenoside Rc, malonyl ginsenoside Rd, malonyl ginsenoside Re, and any combination thereof. .
  • the second aspect of the present invention relates to a method for preparing malonyl ginsenoside or a product containing malonyl ginsenoside, comprising the step of preparing a second mixture or a third mixture according to the method described in the first aspect of the present invention.
  • the second or third mixture is malonyl ginsenoside or a product containing malonyl ginsenoside.
  • the third aspect of the present invention relates to a product containing malonyl ginsenoside, wherein the content of malonyl ginsenoside is ⁇ 62% (W / W), preferably ⁇ 66% (W / W), such as 63% ( W / W), 64% (W / W), 65% (W / W), 67% (W / W), 69% (W / W), 70% (W / W), 72% (W / W) W), 73% (W / W), 74% (W / W), 75% (W / W), 76% (W / W), 80% (W / W), 85% (W / W) , 90% (W / W).
  • the product comprises a second mixture or a third mixture prepared in the method of the first or second aspect of the invention.
  • the product further comprises (artificially added) food or pharmaceutically acceptable excipients.
  • the product consists of the second or third mixture prepared in the method of the first or second aspect of the present invention and at least one food-acceptable excipient.
  • the product consists of the second or third mixture prepared in the method of the first or second aspect of the present invention and at least one pharmaceutically acceptable excipient.
  • the food or pharmaceutically acceptable excipient may be selected from the group consisting of a binder, an excipient, a disintegrant, a lubricant, a sweetener, a flavoring agent, a carrier, At least one of a preservative, a pigment, a sustained release agent, a surfactant, a diluent, a dispersant, an antimicrobial agent, an isotonicity agent, a delayed absorption agent, an antimicrobial agent, and a thickener.
  • Binders can be, for example, starch (corn starch), tragacanth, acacia, gelatin; excipients can be, for example, dicalcium phosphate; disintegrants can be, for example, corn starch, potato starch, alginic acid, etc .; lubricants It can be, for example, magnesium stearate; the sweetener can be, for example, sucrose, maltose, fructose, lactose, glucose, abastine, aspartame, etc .; the flavoring agent can be, for example, mint, matcha, wintergreen, fruit, Cocoa, vanilla and other flavors, fragrances, etc .; the carrier can be, for example, a liquid carrier (such as vegetable oil, polyethylene glycol) or a solid carrier (such as talc, clay, microcrystalline cellulose, silica, alumina, etc.); a preservative It can be, for example, methyl paraben, propyl paraben; the surfactant can be
  • a fourth aspect of the present invention relates to a kit comprising a C 7-10 phenyl alkyl alcohol, p-toluenesulfonic acid, toluene and / or xylene, ethyl acetate and / or dichloromethane, hydrogen, and Pd (OH) 2 / C.
  • the C 7-10 phenylalkyl alcohol is selected from the group consisting of benzyl alcohol, phenethyl alcohol, phenylpropanol, and any combination thereof.
  • the content of 2 Pd (OH) Pd (OH) 2 / C is 5% (W / W) ⁇ 20% (W / W), for example, 7% (W / W ), 8% (W / W), 9% (W / W), 10% (W / W), 12% (W / W), 14% (W / W), 16% (W / W), 18% (W / W), 19% (W / W).
  • the kit further comprises anhydrous methanol and a pH adjuster.
  • the kit further comprises an ultra-filtration membrane with an aqueous methanol solution and a cut-off molecular weight of 80 to 160 kDa (for example, 85 kDa, 90 kDa, 95 kDa, 100 kDa, 110 kDa, 120 kDa, 130 kDa, 140 kDa, 150 kDa) And nanofiltration membranes.
  • 80 to 160 kDa for example, 85 kDa, 90 kDa, 95 kDa, 100 kDa, 110 kDa, 120 kDa, 130 kDa, 140 kDa, 150 kDa
  • nanofiltration membranes for example, 85 kDa, 90 kDa, 95 kDa, 100 kDa, 110 kDa, 120 kDa, 130 kDa, 140 kDa, 150 kDa
  • a fifth aspect of the present invention relates to the use of the product according to the third aspect of the present invention in the preparation of a cosmetic, a food (such as a health food) or a medicament.
  • the sixth aspect of the present invention relates to the use of the second mixture or the third mixture prepared in the method described in the first or second aspect of the present invention in the preparation of cosmetics, foods (such as health foods) or medicines.
  • the seventh aspect of the present invention relates to the use of the kit according to the fourth aspect of the present invention to increase the content of malonyl ginsenoside in the product or to prepare malonyl ginsenoside or a product containing malonyl ginsenoside.
  • the product is used for preparing a cosmetic, a food (such as a health food) or a medicament.
  • the kit is used to increase the content of malonyl ginsenoside in the product or to prepare malonyl ginsenoside or a product containing malonyl ginsenoside.
  • C 7-10 phenylalkyl alcohol refers to a compound of the following structural formula:
  • n 1, 2, 3, or 4.
  • malonyl ginsenoside C 7-10 phenylalkyl ester refers to a compound obtained by esterifying a carboxyl group in malonyl ginsenoside with a hydroxyl group in C 7-10 phenylalkyl alcohol; wherein, C 7-10 phenylalkyl alcohol is as defined above.
  • extraction refers to the use of different solubility or partition coefficients of the components to be separated in two mutually incompatible (or slightly soluble) solvents, so that the components to be separated are transferred from one solvent to another and separated Dispose of two solvents.
  • the method of the invention can obtain a product with a higher content of malonyl ginsenoside, thereby increasing the content of malonyl ginsenoside in products such as food, medicine, cosmetics and the like.
  • the extract was dried by adding anhydrous sodium sulfate, filtered to remove sodium sulfate, and the filtrate was collected; the filtrate was distilled under reduced pressure to recover the extractant to obtain 25.8 g of a substance containing benzoic acid ginsenoside malonate.
  • step (3) The content of malonyl ginsenoside in the substance obtained in step (2) is analyzed by high performance liquid chromatography.
  • HPLC HPLC
  • the column is a Cosmosil Sugar-D (4.6mm ⁇ 250mm, 5 ⁇ m) reversed-phase column; column temperature: 25 ° C; detection wavelength: 203nm; flow rate: 1mL / min; mobile phase: B Eye (A), 50 mM KH 2 PO 4 (B); Elution procedure: 0 to 14 min: 19% (A); 14 to 20 min: 26% (A); 20 to 50 min: 26% to 30% (A ).
  • the injection volume was 20 ⁇ L; the analysis time was 50 min.
  • the obtained liquid chromatogram includes chromatographic peaks of malonyl ginsenoside Re, Rb1, Rc, Rb2, and Rd.
  • the sum of the contents of malonyl ginsenosides Re, Rb1, Rc, Rb2, and Rd was calculated as the content of malonyl ginsenosides.
  • the extract was added to dry with anhydrous sodium sulfate, filtered to remove sodium sulfate, and the filtrate was collected; the filtrate was distilled under reduced pressure to recover the extractant to obtain 26.4 g of a substance containing ginsenoside benzyl malonate.
  • the content of malonyl ginsenoside in the material obtained in step (2) was detected according to the method in Example 1. After measurement, the content of malonyl ginsenoside in the material obtained in step (2) reached 69% (W / W).
  • the extract was dried by adding anhydrous sodium sulfate, filtered to remove sodium sulfate, and the filtrate was collected; the filtrate was distilled under reduced pressure to recover the extractant to obtain 20.2 g of a substance containing malonic acid ginsenoside benzyl ester.
  • the content of malonyl ginsenoside in the material obtained in step (2) was measured according to the method in Example 1. After measurement, the content of malonyl ginsenoside in the material obtained in step (2) reached 73% (W / W).
  • step (2) of Example 1 The benzyl alcohol in step (2) of Example 1 was replaced with absolute ethanol, and the rest was the same as in Example 1 to obtain 14.5 g of product.
  • the content of malonyl ginsenoside in the product was measured according to the method in Example 1, and it was found that the product did not contain malonyl ginsenoside.
  • step (2) of Example 1 The benzyl alcohol in step (2) of Example 1 was replaced with tert-butanol, and the rest was the same as in Example 1 to obtain 16.7 g of product.
  • the content of malonyl ginsenoside in the product was measured according to the method in Example 1, and it was found that the product did not contain malonyl ginsenoside.
  • step (2) of Example 1 The p-toluenesulfonic acid in step (2) of Example 1 was replaced with the same amount of sulfuric acid (98% by mass), and the rest was the same as in Example 1 to obtain 9.7 g of product.
  • the content of malonyl ginsenoside in the product was detected according to the method in Example 1, and the content of malonyl ginsenoside in the product was determined to be 64%.
  • step (2) of Example 1 The reaction system in step (2) of Example 1 was not subjected to water separation operation, and the rest was the same as that of Example 1 to obtain 11.5 g of a product.
  • the content of malonyl ginsenoside in the product was measured according to the method in Example 1, and the content of malonyl ginsenoside in the product was determined to be 58%.

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Abstract

一种提高产物中丙二酰基人参皂苷含量的方法、由该方法制备得到的含丙二酰基人参皂苷的产品和实施该方法的试剂盒，所述方法包括如下步骤：（1）将含有丙二酰基人参皂苷的样品与C 7-10苯基烷基醇混合，保持混合体系的温度为95℃-150℃并且保持混合体系的水含量≤50ppm，得到含有丙二酰基人参皂苷C 7-10苯基烷基酯的第一混合物；（2）对步骤（1）得到的第一混合物进行萃取，得到含有丙二酰基人参皂苷C 7-10苯基烷基酯的萃取物；（3）对步骤（2）得到的萃取物进行氢化处理，得到含有丙二酰基人参皂苷的第二混合物。

Description

提高产物中丙二酰基人参皂苷含量的方法 技术领域
本发明属于医药化学领域，具体涉及一种提高产物中丙二酰基人参皂苷含量的方法。
背景技术
人参属于五加科人参属植物，其主产地包括中国东北、朝鲜、日本及俄罗斯东部。我国最早的医药名著《神农本草经》中已记载了人参的药用作用。现代医学研究证明，人参具有抗肿瘤、调节中枢神经系统、调节免疫系统、抗溶血等多方面的药理活性。
人参皂苷是五加科人参属植物中的主要药效成分，具有增强免疫力、抗疲劳、抗肿瘤、抗缺氧、抗衰老、降血糖等多种功效。已发现的人参皂苷种类有40余种，分为中性人参皂苷和酸性人参皂苷。
丙二酰基人参皂苷属于酸性人参皂苷，目前，已发现的丙二酰基人参皂苷包括丙二酰基人参皂苷Rb1、丙二酰基人参皂苷Rb2、丙二酰基人参皂苷Rc、丙二酰基人参皂苷Rd及丙二酰基人参皂苷Re等。
丙二酰基人参皂苷的结构通式如下：
Figure PCTCN2018107014-appb-000001
其中，丙二酰基人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re中的R 1至R 3基团如下表所示，Glc代表葡萄糖，Rha代表鼠李糖，Ara(f)代表呋喃型阿拉伯糖，Ara(p)代表吡喃型阿拉伯糖。
Figure PCTCN2018107014-appb-000002
Figure PCTCN2018107014-appb-000003
传统的提取丙二酰基人参皂苷的方法包括如下步骤：将鲜参或生晒参粉碎，在低温下用70％(W/W)的乙醇或甲醇进行浸提，过滤，即得含有丙二酰基人参皂苷的提取液。但是，传统方法得到产品中的丙二酰基人参皂苷含量较低，需要进一步提高含量。
因此，目前需要一种提高产物中丙二酰基人参皂苷含量的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高产物中丙二酰基人参皂苷含量的方法，以获得丙二酰基人参皂苷含量较高的产物。本发明还提供了一种制备丙二酰基人参皂苷或含有丙二酰基人参皂苷的产物的方法。在此基础上，本发明还提供了一种含有丙二酰基人参皂苷的产品及其应用。
本发明第一方面涉及一种提高产物中丙二酰基人参皂苷含量的方法，包括如下步骤：
(1)将含有丙二酰基人参皂苷的样品与C 7-10苯基烷基醇混合，保持混合体系的温度为95℃～150℃(例如105℃、110℃、115℃、120℃、125℃、135℃、140℃、145℃)并且保持混合体系的水含量≤50ppm，得到含有丙二酰基人参皂苷C 7-10苯基烷基酯的第一混合物；
(2)对步骤(1)得到的第一混合物进行萃取，得到含有丙二酰基人参皂苷C 7-10苯基烷基酯的萃取物；
(3)对步骤(2)得到的萃取物进行氢化处理，得到含有丙二酰基人参皂苷的第二混合物。
发明人经研究发现，如果步骤(1)中采用其它醇类化合物参与混合，则最终经步骤(3)的氢化处理得到的混合物中不含有丙二酰基人参皂苷化合物。
不拘于理论的限制，由于丙二酰基人参皂苷化合物酯键上的酰基不稳定，高温遇水易水解脱去丙二酸，转变为其它化合物，因此，步骤(1)混合体系的水含量需始终维持不超过50ppm。
本发明第一方面的一些实施方式中，C 7-10苯基烷基醇选自苯甲醇、苯乙醇、苯丙醇及其任意的组合，丙二酰基人参皂苷C 7-10苯基烷基酯选自丙二酰基人参皂苷苄酯、丙二酰基人参皂苷苯乙酯、丙二酰基人参皂苷苯丙酯及其任意的组合。
本发明第一方面的一些实施方式中，步骤(1)中，混合体系中还含有催化剂。
本发明第一方面的一些实施方式中，步骤(1)中，催化剂为对甲苯磺酸。
本发明第一方面的一些实施方式中，步骤(1)中，催化剂的质量为样品质量的3％～20％，例如4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、14.7％、16％、17％、18％、19％。
本发明第一方面的一些实施方式中，步骤(1)中，保持混合体系的温度为100℃～130℃，例如105℃、110℃、115℃、120℃、125℃、135℃、140℃、145℃。
本发明第一方面的一些实施方式中，步骤(3)中，氢化处理在Pd(OH) 2/C的催化作用下进行。
本发明第一方面的一些实施方式中，Pd(OH) 2/C中Pd(OH) 2的含量为5％(W/W)～20％(W/W)，例如7％(W/W)、8％(W/W)、9％(W/W)、10％(W/W)、12％(W/W)、14％(W/W)、16％(W/W)、18％(W/W)、19％(W/W)。
本发明第一方面的一些实施方式中，方法包括如下A至L的中一项或者多项：
A.步骤(1)中，含有丙二酰基人参皂苷的样品为人参总皂苷样品；
B.步骤(1)中，混合体系中还含有溶剂；
优选地，所述溶剂为甲苯和/或二甲苯；
优选地，所述溶剂的体积为C 7-10苯基烷基醇体积的0.5～4倍，优选为0.8倍、1倍、2倍、3倍；
C.步骤(1)中，样品与C 7-10苯基烷基醇的用量比例为(0.01～1.5):1(g/mL)，例如0.02:1(g/mL)、0.03:1(g/mL)、0.04:1(g/mL)、0.05:1(g/mL)、0.065:1(g/mL)、0.08:1(g/mL)、0.1:1(g/mL)、0.2:1(g/mL)、0.3:1(g/mL)、0.4:1(g/mL)、0.5:1(g/mL)、0.7:1(g/mL)、0.8:1(g/mL)、0.9:1(g/mL)、1:1(g/mL)、1.1:1(g/mL)、1.2:1(g/mL)、1.3:1(g/mL)、1.4:1(g/mL)；
D.步骤(1)中，通过回流分水保持混合体系的水含量；
E.步骤(1)中，保持混合体系温度和水含量的时间为3～25小时，例如7小时、9小时、10小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、22小时、23小时、24小时；
F.步骤(2)中，萃取剂选自乙酸乙酯、二氯甲烷或其组合；
G.步骤(2)中，萃取次数为一次或多次；
H.步骤(3)中，氢化处理在常温下进行；
I.步骤(3)中，氢化处理的时间为4～16小时，优选为5～15小时，例如6小时、8小时、10小时、12小时、13小时、14小时；
J.在步骤(1)和(2)之间，还包括步骤(1’)：将步骤(1)得到的第一混合物过滤，收集滤液，将滤液的pH值调至6～10(例如7、8、9)，静置，对静置后的滤液进行步骤(2)中的萃取；
优选地，通过加入pH调节剂(例如氢氧化钠溶液等碱溶液)调节pH值；
优选地，通过滤纸进行过滤；
优选地，静置时间为10～120分钟，例如20分钟、30分钟、50分钟、60分钟、70分钟、90分钟、100分钟；
K.在步骤(2)和(3)之间，还包括步骤(2’)：除去步骤(2)得到萃取物中的水和萃取剂，再进行步骤(3)中的氢化处理；
优选地，步骤(2’)中，通过干燥剂(例如无水硫酸钠)除去水；
优选地，步骤(2’)中，通过蒸馏(例如减压蒸馏)除去萃取剂；
L.还包括步骤(4)：将步骤(3)得到的第二混合物过滤，得到滤液，将滤液浓缩，得到含有丙二酰基人参皂苷的第三混合物；
优选地，通过滤纸进行过滤；
优选地，通过减压蒸馏进行浓缩。
本发明第一方面的一些实施方式中，第J项中，步骤(1’)中，在过滤之前，除去步骤(1)得到的第一混合物中的溶剂。
本发明第一方面的一些实施方式中，步骤(1’)中，通过减压蒸馏除去步骤(1)得到的第一混合物中的溶剂。
本发明第一方面的一些实施方式中，第一混合物中的溶剂为甲苯和/或二甲苯。
本发明第一方面的一些实施方式中，步骤(1)中，先将对甲苯磺酸溶解于苯甲醇中，得到溶液，再将溶液与人参总皂苷样品、甲苯和/或二甲苯混合，保持混合体系的温度为95℃～150℃并且保持混合体系的水含量≤50ppm，得到含有丙二酰基人参皂苷苄酯的第一混合物。
本发明第一方面的一些实施方式中，步骤(3)中，在氢气气氛中进行氢化处理；
优选地，氢气气氛的压力为0.1～0.9MPa，例如0.2MPa、0.3MPa、0.4MPa、0.5MPa、0.6MPa、0.7MPa、0.8MPa。
本发明第一方面的一些实施方式中，步骤(3)中，氢化处理使用的溶剂为无水甲醇；
优选地，步骤(2)得到萃取物与无水甲醇的比例为(10～40):1(mg/mL)，例如13:1(mg/mL)、15:1(mg/mL)、18:1(mg/mL)、20:1(mg/mL)、22:1(mg/mL)、24:1(mg/mL)、26:1(mg/mL)、28:1(mg/mL)、30:1(mg/mL)、32:1(mg/mL)、34:1(mg/mL)、36:1(mg/mL)、38:1(mg/mL)。
本发明第一方面的一些实施方式中，制备人参总皂苷样品的方法包括如下步骤：
1)用甲醇水溶液浸提人参，固液分离，得到液相物；
2)将步骤1)得到的液相物以截留分子量为80～160kDa(例如85kDa、90kDa、95kDa、100kDa、110kDa、120kDa、130kDa、140kDa、150kDa)的超滤膜进行超滤，获得透过液；
3)将步骤2)获得的透过液浓缩，干燥，得到人参总皂苷样品。
本发明第一方面的一些实施方式中，制备人参总皂苷样品的方法还包括如下a至i中的一项或者多项：
a.步骤1)中，在浸提之前，破碎人参；
b.步骤1)中，浸提的料液比为1:(1～13)(g/g)，例如1:3(g/g)、1:2(g/g)、1:5(g/g)、1:6(g/g)、1:8(g/g)、1:10(g/g)、1:12(g/g)；
c.步骤1)中，浸提温度为常温；
d.步骤1)中，浸提时间为0.5～5小时，例如1小时、2小时、3小时、4小时；
e.步骤1)中，浸提次数为一次或多次；
f.步骤1)中，甲醇水溶液的浓度为40％(W/W)～90％(W/W)，例如50％(W/W)、60％(W/W)、70％(W/W)、80％(W/W)；
g.步骤2)中，在超滤之前，将步骤1)得到的液相物过滤并除去甲醇；
优选地，通过滤纸过滤；
优选地，通过减压蒸馏除去甲醇；
h.步骤3)中，通过纳滤处理进行浓缩；
优选地，纳滤膜的截留分子量为0.3～7kDa，例如0.5kDa、0.8kDa、1kDa、1.5kDa、2kDa、3kDa、4kDa、5kDa、6kDa；
i.步骤3)中，干燥为真空干燥。
本发明中，丙二酰基人参皂苷选自丙二酰基人参皂苷Rb1、丙二酰基人参皂苷Rb2、丙二酰基人参皂苷Rc、丙二酰基人参皂苷Rd、丙二酰基人参皂苷Re及其任意的组合。
本发明第二方面涉及一种制备丙二酰基人参皂苷或含有丙二酰基人参皂苷的产物的方法，包括按照本发明第一方面所述方法制备第二混合物或者第三混合物的步骤。
本发明第二方面的一些实施方式中，所述第二混合物或第三混合物为丙二酰基人参皂苷或含有丙二酰基人参皂苷的产物。
本发明第三方面涉及一种含有丙二酰基人参皂苷的产品，其中，丙二酰基人参皂苷的含量≥62％(W/W)，优选为≥66％(W/W)，例如63％(W/W)、64％(W/W)、65％(W/W)、67％(W/W)、69％(W/W)、70％(W/W)、72％(W/W)、73％(W/W)、74％(W/W)、75％(W/W)、76％(W/W)、80％(W/W)、85％(W/W)、90％(W/W)。
本发明第三方面的一些实施方式中，所述产品包含本发明第一或第二方面所述方法中制备的第二混合物或者第三混合物。
本发明第三方面的一些实施方式中，所述产品还包含(人工添加的)食品上或药学上可接受的辅料。
本发明第三方面的一些实施方式中，所述产品由本发明第一或第二方面所述方法中制备的第二混合物或者第三混合物以及至少一种食品上可接受的辅料组成。
本发明第三方面的一些实施方式中，所述产品由本发明第一或第二方面所述方法中制备的第二混合物或者第三混合物以及至少一种药学上可接受的辅料组成。
本发明第三方面的一些实施方式中，所述食品上或药学上可接受的辅料可以为选自粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、载体、防腐剂、色素、缓释剂、表面活性剂、稀释剂、分散剂、抗微生物剂、等渗剂、延缓吸收剂、抗微生物剂和增稠剂中的至少一种。
粘合剂可以为如淀粉(玉米淀粉)、黄耆胶、阿拉伯胶、明胶；赋形剂可以为如磷酸氢二钙；崩解剂可以为如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸等；润滑剂可以为如硬脂酸镁；甜味剂可以为如蔗糖、麦芽糖、果糖、乳糖、葡萄糖、阿巴斯甜、阿司帕坦等； 调味剂可以为如具有薄荷、抹茶、冬青油、水果、可可、香草等香味的香精香料等；载体可以为如液体载体(如植物油、聚乙二醇)或固体载体(如滑石、粘土、微晶纤维素、二氧化硅、氧化铝等)；防腐剂可以为如对羟苯甲酸甲酯、对羟苯甲酸丙酯；表面活性剂可以为如阴离子型表面活性剂、阳离子性表面活性剂；分散剂可以为如甘油、液体聚乙二醇、甘油三乙酸酯及其混合物、植物油、水、乙醇、多元醇(乙二醇、丙二醇)、无毒甘油酯或其混合物等；抗微生物剂可以为如对羟苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等；等渗剂可以为如糖、缓冲剂、氯化钠；延缓吸收剂可以为如单硬脂酸铝、明胶等；增稠剂可以为如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐、脂肪酸酯、脂肪醇、改性纤维素、改性无机材料等。
本发明第四方面涉及一种试剂盒，包含C 7-10苯基烷基醇、对甲苯磺酸、甲苯和/或二甲苯、乙酸乙酯和/或二氯甲烷、氢气以及Pd(OH) 2/C。
本发明第四方面的一些实施方式中，C 7-10苯基烷基醇选自苯甲醇、苯乙醇、苯丙醇及其任意的组合。
本发明第四方面的一些实施方式中，Pd(OH) 2/C中Pd(OH) 2的含量为5％(W/W)～20％(W/W)，例如7％(W/W)、8％(W/W)、9％(W/W)、10％(W/W)、12％(W/W)、14％(W/W)、16％(W/W)、18％(W/W)、19％(W/W)。
本发明第四方面的一些实施方式中，所述试剂盒还包含无水甲醇和pH调节剂。
本发明第四方面的一些实施方式中，所述试剂盒还包含甲醇水溶液、截留分子量为80～160kDa(例如85kDa、90kDa、95kDa、100kDa、110kDa、120kDa、130kDa、140kDa、150kDa)的超滤膜以及纳滤膜。
本发明第五方面涉及本发明第三方面所述的产品在制备化妆品、食品(例如保健食品)或药物中的用途。
本发明第六方面涉及本发明第一或二方面所述方法中制备的第二混合物或者第三混合物在制备化妆品、食品(例如保健食品)或药物中的用途。
本发明第七方面涉及本发明第四方面所述的试剂盒在提高产物中丙二酰基人参皂苷含量或者在制备丙二酰基人参皂苷或含有丙二酰基人参皂苷的产物中的用途。
本发明第三方面的一些实施方式中，所述产品用于制备化妆品、食品(例如保健食品)或药物。
本发明第四方面的一些实施方式中，所述试剂盒用于提高产物中丙二酰基人参皂苷含量或者制备丙二酰基人参皂苷或含有丙二酰基人参皂苷的产物。
本发明中，如无特别说明，其中：
术语“C 7-10苯基烷基醇”是指如下结构式的化合物：
Figure PCTCN2018107014-appb-000004
其中，n为1、2、3或4。
术语“丙二酰基人参皂苷C 7-10苯基烷基酯”是指丙二酰基人参皂苷中的羧基与C 7-10苯基烷基醇中的羟基经酯化反应得到的化合物；其中，C 7-10苯基烷基醇的定义如上所述。
术语“萃取”是指利用待分离组分在两种互不相溶(或微溶)溶剂中溶解度或分配系数的不同,使待分离组分从一种溶剂中转移到另一溶剂中并分离开两溶剂的处理过程。
本发明取得了如下有益的技术效果：
本发明方法能获得丙二酰基人参皂苷含量较高的产物，从而提高了食品、药品、化妆品等产品中的丙二酰基人参皂苷含量。
具体实施方式
[根据细则91更正 04.12.2018]　
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。以下对至少一个示例性实施例的描述实际上仅仅是说明性的，决不作为对本发明及其应用或使用的任何限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
(1)人参总皂苷的制备：
将人参粉碎，加入相当于人参质量8倍的60％(W/W)甲醇水溶液，在常温下浸提1小时，滤纸过滤，得滤液和滤渣；继续对滤渣重复两次上述浸提操作；合并三次得到的滤液，过滤，减压蒸馏至原体积的1/3以回收甲醇，采用截留分子量为100kDa的超滤膜对蒸馏剩余物进行超滤，收集透过液，再采用截留分子量为1kDa的纳滤膜对透过液进行浓缩，将得到的浓缩液真空干燥，得到人参总皂苷。
(2)从人参总皂苷中分离纯化丙二酰基人参皂苷：
将6.3g对甲苯磺酸和1000mL苯甲醇加入反应器中加热溶解，再加入1000mL甲苯和65g人参总皂苷，110℃回流反应12小时并同时分水，以保持反应体系含水量不超过50ppm，反应结束后，对反应器内物料减压蒸馏以回收甲苯，将剩余物料过滤，用稀碱液调节滤液的pH值至8，静置30分钟后，用1000mL乙酸乙酯萃取(重复三次)，合并萃取物，加入无水硫酸钠进行干燥，过滤除去硫酸钠，收集滤液；将滤液减压蒸馏回收萃取剂，得到25.8g含丙二酸人参皂苷苄酯的物质。
将25.8g含丙二酸人参皂苷苄酯的物质溶解于1000mL无水甲醇中，加入2.6g Pd(OH) 2/C催化剂(其中Pd(OH) 2的质量含量为10％)，在0.3MPa氢气气氛中常温反应12小时；将反应得到的物质过滤，将滤液减压浓缩至干，得到20.3g物质。
(3)采用高效液相色谱分析步骤(2)所得物质中丙二酰基人参皂苷含量。
高效液相色谱的操作条件如下：色谱柱为Cosmosil Sugar-D(4.6mm×250mm，5μm)反相色谱柱；柱温：25℃；检测波长：203nm；流速：1mL/min；流动相：乙睛(A)，50mM KH 2PO 4(B)；洗脱程序为：0～14min：19％(A)；14～20min：26％(A)；20～50min：26％～30％(A)。进样量为20μL；分析时间为50min。
经标准品标定可知，得到的液相色谱图中包括丙二酰基人参皂苷Re、Rb1、Rc、Rb2、Rd的色谱峰。通过标准品外标法，计算出丙二酰基人参皂苷Re、Rb1、Rc、Rb2、Rd的含量之和为丙二酰基人参皂苷含量。
经计算，步骤(2)所得物质中丙二酰基人参皂苷含量达到72％(W/W)。
实施例2
(1)人参总皂苷的制备：
将人参粉碎，加入相当于人参质量8倍的60％(W/W)甲醇水溶液，在常温下浸提1小时，滤纸过滤，得滤液和滤渣；继续对滤渣重复两次上述浸提操作；合并三次 得到的滤液，过滤，减压蒸馏至原体积的1/3以回收甲醇，采用截留分子量为100kDa的超滤膜对蒸馏剩余物进行超滤，收集透过液，再采用截留分子量为1kDa的纳滤膜对透过液进行浓缩，将得到的浓缩液真空干燥，得到人参总皂苷。
(2)从人参总皂苷中分离纯化丙二酰基人参皂苷：
将6.3g对甲苯磺酸和1000mL苯甲醇加入反应器中加热溶解，再加入1000mL甲苯和80g人参总皂苷，110℃回流反应18小时并同时分水，以保持反应体系含水量不超过50ppm，反应结束后，对反应器内物料减压蒸馏以回收甲苯，将剩余物料过滤，用稀碱液调节滤液的pH值至8，静置30分钟后，用1000mL乙酸乙酯萃取(重复三次)，合并萃取物，加入无水硫酸钠进行干燥，过滤除去硫酸钠，收集滤液；将滤液减压蒸馏回收萃取剂，得到26.4g含丙二酸人参皂苷苄酯的物质。
将26.4g含丙二酸人参皂苷苄酯的物质溶解于1000mL无水甲醇中，加入2.6g Pd(OH) 2/C催化剂(其中Pd(OH) 2的质量含量为10％)，在0.3MPa氢气气氛中常温反应12小时；将反应得到的物质过滤，将滤液减压浓缩至干，得到20.5g物质。
按照实施例1中方法检测步骤(2)所得物质中丙二酰基人参皂苷的含量，经测定，步骤(2)所得物质中丙二酰基人参皂苷的含量达到69％(W/W)。
实施例3
(1)人参总皂苷的制备：
将人参粉碎，加入相当于人参质量8倍的60％(W/W)甲醇水溶液，在常温下浸提1小时，滤纸过滤，得滤液和滤渣；继续对滤渣重复两次上述浸提操作；合并三次得到的滤液，过滤，减压蒸馏至原体积的1/3以回收甲醇，采用截留分子量为100kDa的超滤膜对蒸馏剩余物进行超滤，收集透过液，再采用截留分子量为1kDa的纳滤膜对透过液进行浓缩，将得到的浓缩液真空干燥，得到人参总皂苷。
(2)从人参总皂苷中分离纯化丙二酰基人参皂苷：
将6.0g对甲苯磺酸和1000mL苯甲醇加入反应器中加热溶解，再加入1000mL甲苯和50g人参总皂苷，110℃回流反应15小时并同时分水，以保持反应体系含水量不超过50ppm，反应结束后，对反应器内物料减压蒸馏以回收甲苯，将剩余物料过滤，用稀碱液调节滤液的pH值至8，静置30分钟后，用1000mL乙酸乙酯萃取(重复三次)，合并萃取物，加入无水硫酸钠进行干燥，过滤除去硫酸钠，收集滤液；将滤液减压蒸馏回收萃取剂，得到20.2g含丙二酸人参皂苷苄酯的物质。
将20.2g含丙二酸人参皂苷苄酯的物质溶解于1000mL无水甲醇中，加入2.0g Pd(OH) 2/C催化剂(其中Pd(OH) 2的质量含量为10％)，在0.3MPa氢气气氛中常温反应12小时；将反应得到的物质过滤，将滤液减压浓缩至干，得到15.4g物质。
按照实施例1中方法检测步骤(2)所得物质中丙二酰基人参皂苷的含量，经测定，步骤(2)所得物质中丙二酰基人参皂苷的含量达到73％(W/W)。
对比例1
将实施例1步骤(2)中的苯甲醇替换为无水乙醇，其余与实施例1相同，得到14.5g产品。
按照实施例1中方法检测产品中丙二酰基人参皂苷的含量，发现产品中不含丙二酰基人参皂苷。
对比例2
将实施例1步骤(2)中的苯甲醇替换为叔丁醇，其余与实施例1相同，得到16.7g产品。
按照实施例1中方法检测产品中丙二酰基人参皂苷的含量，发现产品中不含丙二酰基人参皂苷。
由对比例1～2可知，采用无水乙醇、叔丁醇等其它醇类物质参与反应，最终无法分离得到含有丙二酰基人参皂苷的产品。
对比例3
将实施例1步骤(2)中的对甲苯磺酸替换为等量硫酸(质量分数为98％)，其余与实施例1相同，得到9.7g产品。
按照实施例1中方法检测产品中丙二酰基人参皂苷的含量，测得产品中丙二酰基人参皂苷的含量为64％。
由对比例3可知，与其它催化剂相比，本发明采用对苯磺酸为催化剂能提高最终产品中丙二酰基人参皂苷的含量。
对比例4
将实施例1步骤(2)中反应体系不进行分水操作，其余与实施例1相同，得到11.5g产品。
按照实施例1中方法检测产品中丙二酰基人参皂苷的含量，测得产品中丙二酰基人参皂苷的含量为58％。
由对比例4可知，反应原料丙二酰基人参皂苷高温下容易水解为其它化合物，导致产品中丙二酰基人参皂苷的含量降低。
最后应当说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本发明技术方案的精神，其均应涵盖在本发明请求保护的技术方案范围当中。

Claims (17)

  1. 一种提高产物中丙二酰基人参皂苷含量的方法，包括如下步骤：
    (1)将含有丙二酰基人参皂苷的样品与C 7-10苯基烷基醇混合，保持混合体系的温度为95℃～150℃并且保持混合体系的水含量≤50ppm，得到含有丙二酰基人参皂苷C 7-10苯基烷基酯的第一混合物；
    (2)对步骤(1)得到的第一混合物进行萃取，得到含有丙二酰基人参皂苷C 7-10苯基烷基酯的萃取物；
    (3)对步骤(2)得到的萃取物进行氢化处理，得到含有丙二酰基人参皂苷的第二混合物。
  2. 根据权利要求1所述的方法，其中，C 7-10苯基烷基醇选自苯甲醇、苯乙醇、苯丙醇及其任意的组合，丙二酰基人参皂苷C 7-10苯基烷基酯选自丙二酰基人参皂苷苄酯、丙二酰基人参皂苷苯乙酯、丙二酰基人参皂苷苯丙酯及其任意的组合。
  3. 根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，混合体系中还含有催化剂；
    优选地，所述催化剂为对甲苯磺酸；
    优选地，所述催化剂的质量为样品质量的3％～20％。
  4. 根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(1)中，保持混合体系的温度为100℃～130℃。
  5. 根据权利要求1所述的方法，其中，步骤(3)中，氢化处理在Pd(OH) 2/C的催化作用下进行；
    优选地，Pd(OH) 2/C中Pd(OH) 2的含量为5％(W/W)～20％(W/W)。
  6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于如下A至L的中一项或者多项：
    A.步骤(1)中，含有丙二酰基人参皂苷的样品为人参总皂苷样品；
    B.步骤(1)中，混合体系中还含有溶剂；
    优选地，所述溶剂为甲苯和/或二甲苯；
    优选地，所述溶剂的体积为C 7-10苯基烷基醇体积的0.5～4倍；
    C.步骤(1)中，样品与C 7-10苯基烷基醇的用量比例为(0.01～1.5):1(g/mL)；
    D.步骤(1)中，通过回流分水保持混合体系的水含量；
    E.步骤(1)中，保持混合体系温度和水含量的时间为3～25小时；
    F.步骤(2)中，萃取剂选自乙酸乙酯、二氯甲烷或其组合；
    G.步骤(2)中，萃取次数为一次或多次；
    H.步骤(3)中，氢化处理在常温下进行；
    I.步骤(3)中，氢化处理的时间为4～16小时，优选为5～15小时；
    J.在步骤(1)和(2)之间，还包括步骤(1’)：将步骤(1)得到的第一混合物过滤，收集滤液，将滤液的pH值调至6～10，静置，对静置后的滤液进行步骤(2)中的萃取；
    K.在步骤(2)和(3)之间，还包括步骤(2’)：除去步骤(2)得到萃取物中的水和萃取剂，再进行步骤(3)中的氢化处理；
    优选地，步骤(2’)中，通过干燥剂(例如无水硫酸钠)除去水；
    优选地，步骤(2’)中，通过蒸馏(例如减压蒸馏)除去萃取剂；
    L.还包括步骤(4)：将步骤(3)得到的第二混合物过滤，得到滤液，将滤液浓缩，得到含有丙二酰基人参皂苷的第三混合物。
  7. 根据权利要求6所述的方法，其中，第J项中，步骤(1’)中，在过滤之前，除去步骤(1)得到的第一混合物中的溶剂；
    优选地，通过减压蒸馏除去步骤(1)得到的第一混合物中的溶剂；
    优选地，所述溶剂为甲苯和/或二甲苯。
  8. 根据权利要求6所述的方法，其中，制备人参总皂苷样品的方法包括如下步骤：
    1)用甲醇水溶液浸提人参，固液分离，得到液相物；
    2)将步骤1)得到的液相物以截留分子量为80～160kDa的超滤膜进行超滤，获得透过液；
    3)将步骤2)获得的透过液浓缩，干燥，得到人参总皂苷样品。
  9. 根据权利要求8所述的方法，其中，制备人参总皂苷样品的方法还包括如下a 至i中的一项或者多项：
    a.步骤1)中，在浸提之前，破碎人参；
    b.步骤1)中，浸提的料液比为1:(1～13)(g/g)；
    c.步骤1)中，浸提温度为常温；
    d.步骤1)中，浸提时间为0.5～5小时；
    e.步骤1)中，浸提次数为一次或多次，例如三次；
    f.步骤1)中，甲醇水溶液的浓度为40％(W/W)～90％(W/W)；
    g.步骤2)中，在超滤之前，将步骤1)得到的液相物过滤并除去甲醇；
    优选地，通过减压蒸馏除去甲醇；
    h.步骤3)中，通过纳滤处理进行浓缩；
    优选地，纳滤膜的截留分子量为0.3～7kDa；
    i.步骤3)中，干燥为真空干燥。
  10. 一种制备丙二酰基人参皂苷或含有丙二酰基人参皂苷的产物的方法，包括按照权利要求1至9中任一项所述方法制备第二混合物或者第三混合物的步骤。
  11. 一种含有丙二酰基人参皂苷的产品，其中，丙二酰基人参皂苷的含量≥62％(W/W)，优选为≥66％(W/W)；
    优选地，所述产品包含权利要求1至10任一项所述方法中制备的第二混合物或者第三混合物。
  12. 根据权利要求11所述的产品，其还包含食品上或药学上可接受的辅料。
  13. 一种试剂盒，包含C 7-10苯基烷基醇、对甲苯磺酸、甲苯和/或二甲苯、乙酸乙酯和/或二氯甲烷、氢气以及Pd(OH) 2/C；
    优选地，C 7-10苯基烷基醇选自苯甲醇、苯乙醇、苯丙醇及其任意的组合；
    优选地，Pd(OH) 2/C中Pd(OH) 2的含量为5％(W/W)～20％(W/W)；
    优选地，还包含无水甲醇和pH调节剂；
    优选地，还包含甲醇水溶液、截留分子量为80～160kDa的超滤膜以及纳滤膜。
  14. 权利要求11或12所述产品在制备化妆品、食品(例如保健食品)或药物中的用途。
  15. 权利要求13所述的试剂盒在提高产物中丙二酰基人参皂苷含量或者在制备丙二酰基人参皂苷或含有丙二酰基人参皂苷的产物中的用途。
  16. 权利要求11或12所述产品，用于制备化妆品、食品(例如保健食品)或药物。
  17. 权利要求13所述试剂盒，用于提高产物中丙二酰基人参皂苷含量或者制备丙二酰基人参皂苷或含有丙二酰基人参皂苷的产物。
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