CN102391115A - 一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法 - Google Patents
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Abstract
一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,包括滤液A、B制取、膜分离、回收乙醇、上柱加样和水洗杂质后;用体积百分浓度为5﹪~25﹪乙醇洗脱大孔树脂柱,将洗脱液过700道尔顿膜,膜浓缩液于50℃~80℃下减压浓缩,喷雾干燥,得到绿原酸提取物;再换用体积百分浓度为55﹪~85﹪乙醇洗脱大孔树脂柱,将洗脱液于50℃~80℃下减压浓缩,喷雾干燥,得到黄酮提取物。与现有技术相比,本发明采用膜分离技术与柱层析分离技术联用制备金银花提取物,兼可同时收得金银花中的绿原酸提取物和黄酮类提取物,具有药材利用度高、收得有效成分含量高、便于后续加工使用,且工艺简单、操作过程能耗低,便于大规模工业化生产及推广等优点。
Description
技术领域
本发明涉及金银花产品的制备技术,特别是涉及一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法。
背景技术
金银花是常用的药食同源药材,具有清热解毒,凉散风热等作用。近年来,随着非典、甲型H1N1流感等重大疫情的发生,卫生部推荐的防疫配方中采用了金银花药材,使得金银花除了具有传统认识上的清热解毒,凉散风热功效外,作为复方配伍中君药的金银花,尚有主导提高人体免疫力之功效。由此可见,金银花已经被越来越广泛地应用于防病治病,使得其身价倍增,从非典前每公斤二三十元飞涨到目前每公斤两三百元,翻了近十倍。
现代药理研究资料表明,金银花含有丰富的绿原酸,具有广泛的抑菌作用,对常见的呼吸道病毒具有较强的抑制作用。金银花中除功效成分绿原酸外,还含有大量如木犀草素等黄酮类成分。黄酮类物质具有广泛的生理活性,可降血压、降血脂、抗氧化等。另有实验证明,金银花含有的黄酮类成分如木犀草素也具有较强的抗菌作用。
对金银花的应用,随着认知上的进步,人们越来越了解到金银花中含有的黄酮类物质也具有非常重要的功效。而现有技术中的金银花提取制备技术,则往往偏重考察绿原酸含量,而忽略或未能兼顾到黄酮类物质。
由于绿原酸属水溶性,黄酮类物质属醇溶性,这两类物质性质差异较大。采用现有技术中的工艺如水提醇沉或醇提水沉,不是有效成分损失量大,就是两者不能兼顾,从而使得金银花的利用率很低。
现有技术中已有人对此进行了探索,摸索出一些较为有效的方法。但这些方法存在一个共同的缺陷,就是不适合大规模的工业化生产。
例如:授权公告号为CN201689209U的中国发明专利申请,公开了一种“金银花提取物及其制备方法和应用”,其技术方案为“取金银花药材,加8~20倍体积的水提取2~4次,每次0.5~1.5小时,调节提取液的PH为1~6,上大孔吸附树脂柱,先用水洗脱杂质,再用10~70﹪的乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,回收乙醇,浓缩,调节浓缩液PH为1~6,加乙酸乙酯萃取,回收乙酸乙酯,浓缩、干燥。”该发明专利申请中以水为溶剂提取金银花,而水提取会损失掉大量的醇溶性黄酮类物质;而且在纯化活性成分时,加乙酸乙酯萃取,然而乙酸乙酯属有机溶剂,易燃易爆,实验室使用尚需万分小心,工业化生产时安全更难以保障。
因此,为解决上述问题,提供一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法的技术显得尤为重要。
发明内容
本发明的目的在于避免现有技术中的不足之处而提供一种兼可同时收得金银花中的绿原酸提取物和黄酮类提取物,且可用于工业化大面积生产的膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法。
本发明的目的通过以下技术方案实现:
提供一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,包括有以下步骤:
步骤一,滤液A的制取:将金银花和体积百分浓度为40﹪~80﹪的乙醇按料液质量比1:6~20混合,在温度为50℃~80℃,搅拌时间为1h~3h的条件下提取,离心过滤得到滤液A和滤渣;
步骤二,滤液B的制取:将滤渣和体积百分浓度为40﹪~80﹪的乙醇按料液质量比为1:6~20混合,在温度为50℃~80℃,搅拌时间为1h~3h的条件下提取,离心过滤得到滤液B;
步骤三,膜分离:合并滤液A和滤液B,用孔径为0.22μm~0.5μm的微孔滤膜过滤,得到滤液C;
步骤四,回收乙醇:将滤液C在温度为50℃~80℃下,减压回收乙醇至无醇味,同时制得浓缩液;
步骤五,上柱加样和水洗杂质:将浓缩液加入大孔树脂柱,待加入结束后,用纯化水洗脱杂质,洗至大孔树脂柱流出液无色为止,弃去流出液;然后分别进行以下步骤六和步骤七;
步骤六,绿原酸提取物的制取:用体积百分浓度为5﹪~25﹪的乙醇洗脱大孔树脂柱,收集洗脱出的含有绿原酸的洗脱液,将所述含有绿原酸的洗脱液过700道尔顿膜,将过700道尔顿膜后的浓缩液于温度为50℃~80℃下减压浓缩至密度为1.01~1.11的粘稠液体,喷雾干燥,得到黄褐色粉末状的绿原酸提取物;
步骤七,黄酮类提取物的制取:换用体积百分浓度为55﹪~85﹪的乙醇洗脱大孔树脂柱,收集洗脱出的含有黄酮类的洗脱液;将所述含有黄酮类的洗脱液于温度为50﹪~80℃下减压浓缩至密度为1.01~1.11的粘稠液体,喷雾干燥,得到棕黄色粉末状的黄酮类提取物。
其中,所述步骤一之前包括原料预处理步骤,所述原料预处理步骤为将金银花粉碎过20目~60目筛。
其中,所述步骤一中的乙醇体积百分浓度为45﹪~60﹪,所述步骤二中的乙醇体积百分浓度为45﹪~60﹪。
其中,所述步骤一中的乙醇体积百分浓度为55﹪,所述步骤二中的乙醇体积百分浓度为55﹪。
其中,所述步骤六进一步包括,将过700道尔顿膜后的透过液,继续回收乙醇,或者留待下次生产时供洗脱用。
其中,所述步骤六中的乙醇体积百分浓度为10﹪~20﹪。
其中,所述步骤六中的乙醇体积百分浓度为16﹪。
其中,所述步骤七中的乙醇体积百分浓度为65﹪~75﹪。
其中,所述步骤七中的乙醇体积百分浓度为70﹪。
其中,所述大孔树脂柱中所填充的大孔树脂的型号为HPD-700。
本发明的有益效果:
一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,包括滤液A的制取、滤液B的制取、膜分离、回收乙醇、上柱加样和水洗杂质后;采用体积百分浓度为5﹪~25﹪的乙醇洗脱大孔树脂柱,收集洗脱出的含有绿原酸的洗脱液,将所述含有绿原酸的洗脱液过700道尔顿膜,将过700道尔顿膜后的膜浓缩液于温度为50℃~80℃下减压浓缩至密度为1.01~1.11的粘稠液体,喷雾干燥,得到黄褐色粉末状的绿原酸提取物;以及换用体积百分浓度为55﹪~85﹪的乙醇洗脱大孔树脂柱,收集洗脱出的含有黄酮的洗脱液;将所述含有黄酮的洗脱液于温度为50﹪~80℃下减压浓缩至密度为1.01~1.11的粘稠液体,喷雾干燥,得到棕黄色粉末状的黄酮提取物。与现有技术相比,本发明采用膜分离技术与柱层析分离技术联用制备金银花提取物,兼可同时收得金银花中的绿原酸提取物和黄酮类提取物,而且具有以下特点:
(1)收得的有效成分含量高,便于后续加工使用。
(2)采用体积百分浓度为40﹪~80﹪的乙醇作为提取溶剂,可保证同时提取出绿原酸和黄酮类物质,避免了单一溶剂不能同时且较大程度地提取两类有效成分的问题。
(3)采用700道尔顿膜进行膜分离浓缩绿原酸溶液,在常温下即可进行,具有能耗低,以及有利于保持绿原酸提取物的生物活性的特点。
(4)本发明除乙醇外不使用其它有机溶剂,而且乙醇可回收使用,不造成环境污染,低碳环保。
(5)药材利用度高,操作过程能耗低,适宜于工业化生产。
(6)工艺过程简单、工艺条件宽松,便于工人操作和大规模工业化生产及推广。
具体实施方式
结合以下实施例对本发明作进一步描述。
实施例1
一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,包括:称取金银花20kg,于300 L提取罐中,加入160L的体积百分浓度为55﹪的乙醇进行混合,在温度为60℃~70℃、搅拌时间为2h的条件下提取,离心过滤得到滤液A和滤渣;重复一次上述提取步骤,将160L的体积百分浓度为55﹪的乙醇加入至提取罐中,与滤渣进行混合,在温度为60℃~70℃、搅拌时间为2h的条件下提取,离心过滤得到滤液B;合并滤液A和滤液B后,用孔径为0.25μm~0.35μm微孔滤膜滤过得到滤液C;将滤液C用1000L真空浓缩罐,在温度为60℃~70℃下,回收乙醇至无醇味后,同时收得浓缩液;用泵将浓缩液加入填充有型号为HPD-700的大孔树脂的大孔树脂柱(D×H= 10×60cm)洗脱 ,待浓缩液加入结束后,再用纯化水洗大孔树脂柱,直至大孔树脂柱的流出液为无色为止,然后分别提取绿原酸和黄酮类物质。
绿原酸提取物的制取:用体积百分浓度为16﹪的乙醇洗脱大孔树脂柱,收集洗脱出的含有绿原酸的洗脱液,将含有绿原酸的洗脱液过700道尔顿膜,将过700道尔顿膜后的浓缩液于温度为55℃~65℃下减压浓缩至密度为1.01~1.11的粘稠液体,喷雾干燥,得到黄褐色粉末状的绿原酸提取物112.4g。其中,将过700道尔顿膜后的透过液可减压回收乙醇,也可留作下次柱分离洗脱用的溶液。
绿原酸含量测试结果:液相色谱法测定绿原酸的含量为28.9﹪。
黄酮类提取物的制取:换用体积百分浓度为70﹪乙醇洗脱大孔树脂柱,收集洗脱出的含有黄酮类的洗脱液,将含有黄酮类的洗脱液于温度为55℃~65℃下减压浓缩至密度为1.01~1.11的粘稠液体,喷雾干燥,得到棕黄色粉末状的黄酮类提取物1.16kg。比色法测定黄酮含量为95.3﹪。
另外,在合并滤液A和滤液B,与用孔径为0.25μm~0.35μm微孔滤膜滤过之间还可以采用板框压滤机压滤,压滤完后加入10L 的55﹪乙醇进行洗涤得到洗涤液,然后将滤液和洗涤液一起用微孔滤膜过滤。
实施例2
一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,包括:称取金银花23kg,于300 L提取罐中,加入200L的体积百分浓度为60﹪的乙醇进行混合,在温度为70℃~80℃、搅拌时间为1h的条件下提取,离心过滤得到滤液A和滤渣;重复一次上述提取步骤,将200L的体积百分浓度为60﹪的乙醇加入至提取罐中,与滤渣进行混合,在温度为70℃~80℃、搅拌时间为1h的条件下提取,离心过滤得到滤液B;合并滤液A和滤液B后,用孔径为0.35μm~0.45μm微孔滤膜滤过得到滤液C;将滤液C用1000L真空浓缩罐,在温度为55℃~65℃下,回收乙醇至无醇味,同时收得浓缩液;用泵将浓缩液加入填充有型号为HPD-700的大孔树脂的大孔树脂柱(D×H= 10×60cm)洗脱,待浓缩液加入结束后,再用纯化水洗大孔树脂柱,直至大孔树脂柱的流出液为无色为止,然后分别提取绿原酸和黄酮类物质。
绿原酸提取物的制取:用体积百分浓度为18﹪的乙醇洗脱大孔树脂柱,收集洗脱出的含有绿原酸的洗脱液,将含有绿原酸的洗脱液过700道尔顿膜,将过700道尔顿膜后的浓缩液于温度为60℃~65℃下减压浓缩至密度为1.01~1.11的粘稠液体,喷雾干燥,得到黄褐色粉末状的绿原酸提取物128.8g。其中,将过700道尔顿膜后的透过液可减压回收乙醇,也可留作下次柱分离洗脱用的溶液。
绿原酸含量测试结果:液相色谱法测定绿原酸的含量为28.3﹪。
黄酮类提取物的制取:换用体积百分浓度为68﹪乙醇洗脱大孔树脂柱,收集洗脱出的含有黄酮类的洗脱液,将含有黄酮类的洗脱液于温度为65℃~80℃下减压浓缩至密度为1.01~1.11的粘稠液体,喷雾干燥,得到棕黄色粉末状的黄酮类提取物1.23kg。比色法测定黄酮含量为96.2﹪。
另外,在合并滤液A和滤液B,与用孔径为0.25μm~0.35μm微孔滤膜滤过之间还可以采用板框压滤机压滤,压滤完后加入10L 的55﹪乙醇进行洗涤得到洗涤液,然后将滤液和洗涤液一起用微孔滤膜过滤。
实施例3
一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,包括:称取金银花50kg,分两部分提取,每份25kg。将每份25kg金银花加入于300 L提取罐中,加入200L的体积百分浓度为55﹪的乙醇进行混合,在温度为65℃~78℃、搅拌时间为2h的条件下提取,离心过滤得到滤液A和滤渣;重复一次上述提取步骤,将200L的体积百分浓度为55﹪的乙醇进行混合,在温度为65℃~78℃、搅拌时间为2h的条件下提取,离心过滤得到滤液B;合并滤液A和滤液B后,用孔径为0.45μm~0.5μm微孔滤膜滤过得到滤液C;将滤液C用1000L真空浓缩罐,在温度为60℃~70℃下,回收乙醇至无醇味后,同时收得浓缩液;用泵将浓缩液加入型号为HPD-700的大孔树脂的大孔树脂柱(D×H =10×60 cm)洗脱,待浓缩液加入结束后,再用纯化水洗大孔树脂柱,直至大孔树脂柱的流出液为无色为止,然后分别提取绿原酸和黄酮类物质。
绿原酸提取物的制取:用体积百分浓度为16﹪的乙醇洗脱大孔树脂柱,收集洗脱出的含有绿原酸的洗脱液,将含有绿原酸的洗脱液过700道尔顿膜,将过700道尔顿膜后的浓缩液于温度为60℃~65℃下减压浓缩至密度为1.01~1.11的粘稠液体,喷雾干燥,得到黄褐色粉末状的绿原酸提取物276.5g。其中,将过700道尔顿膜后的透过液可减压回收乙醇,也可留作下次柱分离的溶液。
绿原酸含量测试结果:液相色谱法测定绿原酸含量为29.3﹪。
黄酮类提取物的制取:换用体积百分浓度为70﹪乙醇洗脱大孔树脂柱,收集洗脱出的含有黄酮类的洗脱液,将含有黄酮类的洗脱液于温度为65℃~80℃下减压浓缩至密度为1.01~1.11的粘稠液体,喷雾干燥,得到棕黄色粉末状的黄酮类提取物2.88kg。比色法测定黄酮含量为96.7﹪。
另外,在合并滤液A和滤液B,与用孔径为0.25μm~0.35μm微孔滤膜滤过之间还可以采用板框压滤机压滤,压滤完后加入10L 的55﹪乙醇进行洗涤得到洗涤液,然后将滤液和洗涤液一起用微孔滤膜过滤。
最后应当说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对本发明保护范围的限制,尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,其特征在于,包括有以下步骤:
步骤一,滤液A的制取:将金银花和体积百分浓度为40﹪~80﹪的乙醇按料液质量比1:6~20混合,在温度为50℃~80℃,搅拌时间为1h~3h的条件下提取,离心过滤得到滤液A和滤渣;
步骤二,滤液B的制取:将滤渣和体积百分浓度为40﹪~80﹪的乙醇按料液质量比为1:6~20混合,在温度为50℃~80℃,搅拌时间为1h~3h的条件下提取,离心过滤得到滤液B;
步骤三,膜分离:合并滤液A和滤液B,用孔径为0.22μm~0.5μm的微孔滤膜过滤,得到滤液C;
步骤四,回收乙醇:将滤液C在温度为50℃~80℃下,减压回收乙醇至无醇味,同时制得浓缩液;
步骤五,上柱加样和水洗杂质:将浓缩液加入大孔树脂柱,待加入结束后,用纯化水洗脱杂质,洗至大孔树脂柱流出液无色为止,弃去流出液;然后分别进行以下步骤六和步骤七;
步骤六,绿原酸提取物的制取:用体积百分浓度为5﹪~25﹪的乙醇洗脱大孔树脂柱,收集洗脱出的含有绿原酸的洗脱液,将所述含有绿原酸的洗脱液过700道尔顿膜,将过700道尔顿膜后的浓缩液于温度为50℃~80℃下减压浓缩至密度为1.01~1.11的粘稠液体,喷雾干燥,得到黄褐色粉末状的绿原酸提取物;
步骤七,黄酮类提取物的制取:换用体积百分浓度为55﹪~85﹪的乙醇洗脱大孔树脂柱,收集洗脱出的含有黄酮类的洗脱液;将所述含有黄酮类的洗脱液于温度为50﹪~80℃下减压浓缩至密度为1.01~1.11的粘稠液体,喷雾干燥,得到棕黄色粉末状的黄酮类提取物。
2.根据权利要求1所述的一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,其特征在于:所述步骤一之前包括原料预处理步骤,所述原料预处理步骤为将金银花粉碎过20目~60目筛。
3.根据权利要求1所述的一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,其特征在于:所述步骤一中的乙醇体积百分浓度为45﹪~60﹪,所述步骤二中的乙醇体积百分浓度为45﹪~60﹪。
4.根据权利要求3所述的一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,其特征在于:所述步骤一中的乙醇体积百分浓度为55﹪,所述步骤二中的乙醇体积百分浓度为55﹪。
5.根据权利要求1所述的一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,其特征在于:所述步骤六进一步包括,将过700道尔顿膜后的透过液,继续回收乙醇,或者留待下次生产时供洗脱用。
6.根据权利要求1所述的一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,其特征在于:所述步骤六中的乙醇体积百分浓度为10﹪~20﹪。
7.根据权利要求7所述的一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,其特征在于:所述步骤六中的乙醇体积百分浓度为16﹪。
8.根据权利要求1所述的一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,其特征在于:所述步骤七中的乙醇体积百分浓度为65﹪~75﹪。
9.根据权利要求8所述的一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,其特征在于:所述步骤七中的乙醇体积百分浓度为70﹪。
10.根据权利要求1所述的一种膜分离柱层析联用制备金银花提取物的方法,其特征在于:所述大孔树脂柱中所填充的大孔树脂的型号为HPD-700。
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CN102391115B (zh) | 2014-07-16 |
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