CN111072618A - 一种自显齿蛇葡萄叶中方便快速提纯二氢杨梅素的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种自显齿蛇葡萄叶中方便快速提纯二氢杨梅素的方法。a、显齿蛇葡萄叶经粉碎后先用体积分数70％～90％的醇/水液提取，所使用的醇是乙醇、甲醇或异丙醇，离心或过滤方式分离获得醇提取液；b、在醇提取液中加入水，然后于40～50摄氏度水浴条件下经减压蒸馏除去其中的醇溶剂，随着醇从溶剂中逐渐被蒸馏移除，在剩下的以水为主的溶剂中逐步析出固体，放置冷却到室温，然后离心或过滤移除水液，得到初提固状物；c、初提固状物先用水洗涤，再用含醇的乙酸乙酯、含醇的二氯甲烷或含醇的氯仿混合溶液混悬洗涤，过滤除去洗涤液并干燥后得到二氢杨梅素，所使用的醇是乙醇、甲醇或异丙醇。本发明具有操作简单、提取收率高等优越特点。

Description

一种自显齿蛇葡萄叶中方便快速提纯二氢杨梅素的方法
技术领域
本发明属于药用植物功能成分提取纯化方法技术领域，具体涉及一种从显齿蛇葡萄叶中方便提纯二氢杨梅素的技术方法。
背景技术
显齿蛇葡萄(Ampelopsis grossedentata)为葡萄科蛇葡萄属木质藤本植物，在我国有广泛分布，至今已有数百年的药用历史。显齿蛇葡萄因具明显的药理保健功能，目前其已被人们制作为藤茶、霉茶等具典型地域特色的保健茶饮。黄酮类成分是显齿蛇葡萄中主含量的功效成分，而其中的二氢杨梅素占到其总黄酮的约80％。据文献报道，二氢杨梅素具有清除自由基，控制血脂、血糖，降血压和抑制血栓形成，抗肿瘤及消炎等多种功效，并对保护肝细胞、维持肝脏正常功能及缓解酒精中毒等效果良好，具有广泛的应用价值。当前自显齿蛇葡萄提取二氢杨梅素的技术方法已有诸多的研究和报道，但相关已报道技术方法均尚存在一定的不足。目前文献和专利文件报道的有关自显齿蛇葡萄提取二氢杨梅素的方法，大多是在先采用热水或醇水初提取后，进一步结合采用了柱层析纯化或重结晶除杂等关键步骤。其中结合采用了柱层析分离纯化步骤的相关方法技术，因需要耗费较多的用于层析的材料和有机溶剂而致使了明显偏高的成本；而采用热水提取结合冷却重结晶除杂纯化的方法，则需偏高的能耗和较多(因重结晶过程所需)的时间等成本。
发明内容
本发明的目的是提供一种综合具有操作简单、省时省溶剂并具良好提取收率等优越特点的自显齿蛇葡萄叶中方便快速提纯二氢杨梅素的方法。
在自显齿蛇葡萄叶提纯二氢杨梅素过程中主要会有中小极性有机化合物和糖类及氨基酸等水溶性成分对提取纯度的影响和干扰。基于研究中我们发现二氢杨梅素与上述影响提取纯度的干扰成分分别在水、醇、和多种溶剂中溶解性质上的显著差异性，本发明的从显齿蛇葡萄叶中方便快捷提纯二氢杨梅素的方法，该方法无需采用柱层析，也比用水重结晶更省能耗和时间，综合具有操作简单、省时省溶剂并具良好提取收率等优越特点，从而实现了本发明的目的。
本发明提供的自显齿蛇葡萄叶中方便快速提纯二氢杨梅素的方法，包括如下步骤：
a、显齿蛇葡萄叶经粉碎后先用体积分数70％～90％的醇/水液提取，所使用的醇是乙醇、甲醇或异丙醇，离心或过滤方式分离获得醇提取液；
b、在醇提取液中加入水，然后于40～50摄氏度水浴条件下经减压蒸馏除去其中的醇溶剂，随着醇从溶剂中逐渐被蒸馏移除，在剩下的以水为主的溶剂中逐步析出固体，放置冷却到室温，然后离心或过滤移除水液，得到初提固状物；
c、初提固状物先用水洗涤，再用含醇的乙酸乙酯、含醇的二氯甲烷或含醇的氯仿混合溶液混悬洗涤，过滤除去洗涤液并干燥后得到二氢杨梅素，所使用的醇是乙醇、甲醇或异丙醇。
优选，所述的步骤a中的显齿蛇葡萄叶经粉碎，其粉碎后过80～100目筛的粉碎物再用体积分数70％～90％的醇/水液提取。
优选，所述的步骤a中显齿蛇葡萄叶经粉碎后先用体积分数70％～90％的醇/水液提取，其是按1:4(g/ml)的料液质量体积比混合，于室温提取3小时。
优选，所述的步骤b中在醇提取液中加入水是在醇提取液中加入醇提取液三分之一体积的纯水。
优选，所述的步骤c中初提固状物用含醇的乙酸乙酯、含醇的二氯甲烷或含醇的氯仿混合溶液混悬洗涤是初提固状物用含体积分数约5％醇的乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿混合溶液混悬洗涤。
优选，所述的显齿蛇葡萄叶为干显齿蛇葡萄叶或新鲜的显齿蛇葡萄叶。
按照本发明获得的目标产品，波谱检测分析该目标产品即为二氢杨梅素，HPLC检测分析纯度已达96％以上。
以上所述的步骤b中减压浓缩蒸馏回收的醇溶液可用于多次重复使用。步骤c中用于洗涤的含5％醇的乙酸乙酯(或二氯甲烷或氯仿)溶液在蒸馏回收后亦可再次使用。
本发明方法的步骤中，采用70％～90％的醇/水初提取，既能使得二氢杨梅素被较充分地提取出来，又能限制大部分中小极性成分被溶出；减压蒸馏浓缩仅以除去醇为目标而非到蒸干剩下的水分，蒸馏达到目标的速度快能耗少，且蒸出回收的醇液可再次使用能综合减少成本；固状物经水洗涤能快速除去水溶性氨基酸和糖类干扰物而又不明显损失二氢杨梅素；进一步用含5％醇的乙酸乙酯(或二氯甲烷或氯仿)溶液混悬固状物进行洗涤可除去中小极性有机杂质，同时其对目标物的溶解性也较小不会有过多目标物损失，故采用上述步骤方法所获得的目标产品能具有良好品质，具有较高的纯度，达96％以上。
本发明的技术方法与现有诸多技术相比，其不需采用柱层析分离纯化的步骤，能节省层析材料和溶剂等成本，且更易于操作；相对于直接采用大体积(热)水提取又大大减少了提取液的使用体积，无需加热大量的水而又能节省能耗，也无需要过多时间的重结晶等待过程，综合具有操作简单、省时省溶剂并具良好提取收率等优越特点。
附图说明：
图1是本发明实施例1制备的二氢杨梅素的1H NMR图谱。
图2是本发明实施例1制备的二氢杨梅素的13C NMR图谱。
图3是本发明实施例1制备的二氢杨梅素的HPLC分析图谱。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制，根据本发明的实质对本发明进行的简单改进(比如近似极性溶剂替代等)都属于本发明要求保护的范围。
实施例1：
本实施例具体提供了一次自显齿蛇葡萄干叶(霉茶)中提纯获得二氢杨梅素的过程，其是依据采用上述本发明的方法，具体步骤过程如下：
(1)将显齿蛇葡萄干叶霉茶样品粉碎，过80～100目筛得到材料干粉，然后取上述干粉样品10g先用40ml的体积分数70％的乙醇/水溶液在室温下提取3小时，过滤分离获得醇提取液。
(3)30ml醇提取液加入10ml纯水，然后于45摄氏度水浴条件下经减压蒸馏除去醇提取液中的醇溶剂，随着醇逐渐被蒸出移除，剩下以水为主的溶剂中逐步析出大量固体，待放置自然冷却到室温，过滤移除水液，得到初提固状物。
(3)相应获得的初提固状物先用10ml水洗涤一次，然后用20ml含体积分数5％乙醇的乙酸乙酯溶液混悬洗涤一次，过滤除去洗涤液并干燥后得到目标产品2.21g，经波谱分析(图1和图2)此目标产品为二氢杨梅素，HPLC检测分析(图3)纯度超过96％，收率在75％以上。
实施例2：
本实施例具体提供了一次自显齿蛇葡萄干叶(霉茶)中提纯获得二氢杨梅素的过程，其是依据采用上述本发明的方法，具体步骤过程如下：
(1)将显齿蛇葡萄干叶霉茶样品粉碎，过80～100目筛得到材料干粉，然后取上述干粉样品10g先用40ml的体积分数82％的甲醇/水在室温下提取3小时，离心分离获得醇提取液。
(3)30ml醇提取液中加入10ml纯水，然后于40摄氏度水浴条件下经减压蒸馏除去醇提取液中的醇溶剂，随着醇逐渐被蒸出移除，剩下以水为主的溶剂中逐步析出大量固体，待放置自然冷却到室温，过滤移除水液，得到初提固状物。
(3)相应获得的初提固状物先用10ml水洗涤一次，然后用20ml含体积分数5％甲醇的二氯甲烷混悬洗涤一次，过滤除去洗涤液并干燥后得到目标产品2.46g，经波谱分析为二氢杨梅素，HPLC检测分析纯度超过96％，收率在75％以上。
实施例3：
本实施例具体提供了一次自显齿蛇葡萄干叶(霉茶)中提纯获得二氢杨梅素的过程，其是依据采用上述本发明的方法，具体步骤过程如下：
(1)将显齿蛇葡萄干叶霉茶样品粉碎，过80～100目筛得到材料干粉，然后取上述干粉样品10g先用40ml的体积分数90％的甲醇/水在室温下提取3小时，离心分离获得醇提取液。
(3)30ml醇水提取液加入10ml纯水，然后于50摄氏度水浴条件下经减压蒸馏除去醇提取液中的醇溶剂，随着醇逐渐被蒸出移除，剩下以水为主的溶剂中逐步析出大量固体，待放置冷却到室温，过滤移除水液，得到初提固状物。
(3)相应获得的初提固状物先用10ml水洗涤一次，然后用10ml含体积分数5％甲醇的二氯甲烷混悬洗涤两次，过滤除去洗涤液并干燥后得到目标产品2.26g，经对比分析此目标产品为二氢杨梅素，HPLC检测分析纯度能达96％，收率在75％以上。
实施例4：
本实施例具体提供了一次自显齿蛇葡萄干鲜叶中提纯获得二氢杨梅素的过程，具体步骤过程如下：
(1)取显齿蛇葡萄鲜叶样品40g剪碎为小片，置于60ml的体积分数90％的乙醇/水中在室温下机械打碎提取10分钟，离心分离获得醇水提取液。
(3)获得的醇水提取液加入20ml纯水，然后于45摄氏度水浴条件下经减压蒸馏除去提取液中的醇溶剂，随着醇逐渐被蒸出移除，剩下以水为主的溶剂中逐步析出大量固体，待放置自然冷却到室温，过滤移除水液，得到初提固状物。
(3)相应获得的初提固状物先用10ml水洗涤一次，然后用5ml含体积分数5％的乙酸乙酯混悬洗涤一次，过滤除去洗涤液并干燥后得到目标产品0.9g，经对比分析产品为二氢杨梅素，检测分析纯度能达96％。
2.4实验结论：
本发明提供的方法能自显齿蛇葡萄叶中方便快速提纯二氢杨梅素。本发明方法的步骤中，采用70％～90％的醇/水初提取，既能使得二氢杨梅素被较充分地提取出来，又能限制大部分中小极性成分被溶出；减压蒸馏仅以除去醇为目标而非到蒸干剩下的水分，蒸馏达到除醇目标的速度快能耗少，蒸出回收的醇液可再次使用能减少成本；初提固状物经相继的水洗涤和有机溶剂洗涤能快速除去水溶性氨基酸和糖类及中小极性有机杂质干扰物而又不明显损失目标物，所获得的目标产品能达到较高的纯度品质。
本发明的技术方法与现有诸多技术相比，其不需采用柱层析分离纯化的步骤，能节省层析材料和溶剂等成本，且更易于操作；相对于直接采用(热)水提取又大大减少了提取液的使用体积和对大体积水加到高热所需的能耗成本，也无需要重结晶的等待过程，综合具有操作简单、省时省溶剂并具良好提取收率等优越特点。

Claims (6)

1.一种自显齿蛇葡萄叶中方便快速提纯二氢杨梅素的方法，其特征在于，包括如下步骤：
a、显齿蛇葡萄叶经粉碎后先用体积分数70％～90％的醇/水液提取，所使用的醇是乙醇、甲醇或异丙醇，离心或过滤方式分离获得醇提取液；
b、在醇提取液中加入水，然后于40～50摄氏度水浴条件下经减压蒸馏除去其中的醇溶剂，随着醇从溶剂中逐渐被蒸馏移除，在剩下的以水为主的溶剂中逐步析出固体，放置冷却到室温，然后离心或过滤移除水液，得到初提固状物；
c、初提固状物先用水洗涤，再用含醇的乙酸乙酯、含醇的二氯甲烷或含醇的氯仿混合溶液混悬洗涤，过滤除去洗涤液并干燥后得到二氢杨梅素，所使用的醇是乙醇、甲醇或异丙醇。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤a中的显齿蛇葡萄叶经粉碎，其粉碎后过80～100目筛的粉碎物再用体积分数70％～90％的醇/水液提取。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤a中显齿蛇葡萄叶经粉碎后先用体积分数70％～90％的醇/水液提取，其是按1:4(g/ml)的料液质量体积比混合，于室温提取3小时。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤b中在醇提取液中加入水是在醇提取液中加入醇提取液三分之一体积的纯水。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤c中初提固状物用含醇的乙酸乙酯、含醇的二氯甲烷或含醇的氯仿混合溶液混悬洗涤是初提固状物用含体积分数5％醇的乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿混合溶液混悬洗涤。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的显齿蛇葡萄叶为干显齿蛇葡萄叶或新鲜的显齿蛇葡萄叶。
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