CN101824018A - 一种二氢杨梅素的纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种二氢杨梅素的纯化方法，包括以下步骤：(1)将二氢杨梅素粗品溶于一定量的溶剂中，调成糊状；(2)与一定量吸附剂混匀，在45～75℃干燥0.25～1h；(3)将混合物置于一定量的热水中，趁热过滤，滤液静置过夜；(4)过滤、干燥得二氢杨梅素晶体；(5)对于粗品含量低于50％的原料，可按步骤(1)～(4)重新操作一次，除所述固液量比、第二次吸附剂用量、热水用量以二氢杨梅素晶体质量为标准配比外，其余不变。本发明所需设备简单、投入小；大幅减少了溶剂使用，避免了溶剂的损耗，且无需加热溶解粗产品、蒸馏回收溶剂等操作，节能环保；步骤少，单次处理量大，成本低，易于在农村及农场实现产业化生产。

Description

一种二氢杨梅素的纯化方法

技术领域

本方法涉及一种二氢杨梅素的纯化方法，具体地说涉及到以葡萄科蛇葡萄属植物(如藤茶、粤蛇葡萄、大叶蛇葡萄、显齿蛇葡萄)的提取物为原料，纯化二氢杨梅素的方法。属天然产物有效成分分离领域。

背景技术

二氢杨梅素(3，5，7，3’，4’，5’-六羟基-2，3-双氢黄酮醇，Dihydromyricetin)是一种多羟基双氢黄酮醇。由于该化合物大量存在于蛇葡萄科植物中，如显齿蛇葡萄、粤蛇葡萄、羽叶蛇葡萄、东北蛇葡萄、光叶蛇葡萄等，特别是在显齿蛇葡萄植物的幼嫩茎叶中其含量可达30％以上，故该化合物又称蛇葡萄素，见下图。

现代医学研究表明，二氢杨梅素除具有黄酮类化合物的普通特性之外，在解除醇中毒、抗高血压、抑制体外血小板聚集和体内血栓的形成、降低血脂和血糖水平，提高SOD活性以及保肝护肝等方面具有特殊功效。

从蛇葡萄中提取二氢杨梅素的主要方法包括：有机溶剂提取、热水提取、碱液提取和二氧化碳超临界萃取等。由于二氢杨梅素极性大在二氧化碳中的溶解度较小，且在碱液中又不稳定，因此用碱液提取或用二氧化碳超临界萃取的效率均较低。通常采用是水、乙醇，以及两者的混合物为溶剂来浸提，混合溶剂提取效率较高，单次提取率可达30％，粗产品中二氢杨梅素的含量一般在20～80％之间。

二氢杨梅素粗品纯化可用重结晶、大孔吸附树脂、高效液相色谱、高效逆流液相色谱等方法。高效液相色谱法及高效逆流液相色谱法分离效率高，但对设备要求高、且单次分离量小，难以实现规模化生产，只适宜制备对照品。谭斌等(现代食品科技，2008，24(7)：631～634)使用GS10A-AKTAprime plus高速逆流色谱联用设备，采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水-三氯乙酸五元溶剂系统，当进样体积为2～50ml(样品量约为300mg～6g)、转速为700～800r/min、流速为1.5～2.5ml/min时，5h内均可将粗二氢杨梅素粗样品(含量40.1％)分离得99％白色结晶。

大孔吸附树脂自身具有多孔结构，可根据空隙大小对化学成分进行机械筛分，同时又带有极性基团，可通过范德华力和形成氢键对极性相近的化学成分进行选择性吸附，该方法方便，处理量大，能连续生产。陈玉琼等(食品科学，2009，30(9)：51～55)选用了十余种大孔树脂吸附分离二氢杨梅素粗品，用乙醇的梯度水溶液洗脱，结果产品纯均达不到90％。张友胜等(天然产物研究与开发，2002，14(3)：50～54)也对大孔吸附树脂进行了筛选，选用大孔吸附树脂D-16(非极性，粒径范围为0.3～1.25mm)，运用“增温溶解保温过柱，温水解吸”的方法，可以将含量80％二氢杨梅素纯化至90％。由于大孔吸附树脂分离二氢杨梅素存在吸附选择性不高，难以得到高纯产品；同时，过柱时还要求保温，操作难度大；另外，树脂需再生及洗脱溶剂消耗较大等问题，产业化有一定难度。

重结晶方法纯化二氢杨梅素，工艺相对简单，操作比较方便，适应于中、小企业应用。重结晶主要采用乙醇、水作溶剂。以水为溶剂，沸水溶解二氢杨梅素约为1g/100ml，单次重结晶处理量有限；且随着水温降低，趁热过滤时二氢杨梅素析出过快，过滤操作损失大，回收率低。高建华等(天然产物研究与开发，2006，18：81～84)用水为溶剂，经反复6次或以上重结晶，二氢杨梅素的含量可从50％纯化到95％。谭斌等(现代食品科技，2008，24(7)：631～634)用水对二氢杨梅素粗品(40.1％)重结晶，未加活性炭脱色，需反复9次以上重结晶，或加活性炭脱色，需6次以上重结晶，产品纯度才能达90％以上，回收率大于75％。因此，用水作溶剂，存在单次处理量小；需反复多次结晶，高能低效，且操作繁琐，不适宜产业化。

用乙醇作溶剂，热乙醇溶解二氢杨梅素的能力较强，但冷却过程中二氢杨梅素析出慢，色素易保留在产品中至产品颜色偏黄；且二氢杨梅素在冷乙醇的溶解度较大，需在0～4℃下陈化，来提高纯化回收率。谭斌等(现代食品科技，2008，24(7)：631～634)用70～80℃乙醇对二氢杨梅素粗品(40.1％)重结晶，反复4次以上，产品纯度可达95％，回收率约为71％。该方法溶剂消耗量大，需低温陈化，对设备要求高。

发明内容

本发明的特点在于运用先吸附剂吸附，后热水洗脱方法，克服了二氢杨梅素分离中存在的问题，提供一种操作简便、生产量大、能耗低、溶剂损耗小、分离效率高的二氢杨梅素制备方法。

本发明以蛇葡萄中提取的二氢杨梅素粗产品(二氢杨梅素含量为20～80％)为原料，通过吸附剂除杂，热水洗脱，简便快速地制备出高纯二氢杨梅素晶体。具体步骤如下：

(1)将二氢杨梅素粗品溶于一定量的溶剂中，调成糊状；

——所述溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮等其中一种或两种混合物；

——所述固液量比为1∶0.5～4(g/ml)；

(2)与一定量吸附剂混匀，在45～75℃干燥0.25～1h；

——所述吸附剂为粉末活性炭或脱色树脂，用量为二氢杨梅素粗品质量的0.2～3倍；

(3)将混合物置于一定量的热水中，趁热过滤，滤液静置过夜；

——所述热水温度为60～95℃；

——所述热水用量为二氢杨梅素粗品质量的50～300倍；

——所述静置温度为5～30℃，静置时间为8～24小时；

(4)过滤、干燥得二氢杨梅素晶体；

——所述干燥温度为60～80℃，干燥时间为4～8小时；

(5)对于粗品含量低于50％的原料，可按步骤(1)～(4)重新操作一次，除所述固液量比、第二次吸附剂用量、热水用量以二氢杨梅素晶体质量为标准配比外，其余不变。

本发明所需设备简单、投入小；大幅减少了溶剂使用，避免了溶剂在回收过程的损耗，且无需加热溶解粗产品、蒸馏回收溶剂等操作，节能环保；整个工艺步骤少，单次处理量大，成本低，易于在农村及农场实现产业化生产。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明进行详细的说明。

称取二氢杨梅素粗品(48％，经HPLC定量分析)10g，加入无水乙醇20ml，搅成糊状，加入活性炭10g，置于60℃干燥30min；加入90℃水1200ml，搅拌片刻后趁热过滤，滤液置于室温下放置过夜；经过滤、干燥得二氢杨梅素晶体，称重得4.28g，纯度为83％。

将上述所得二氢杨梅素晶体按上述操作重结晶，重结晶中除无水乙醇加入量为8.5ml、活性炭为4.28g、热水用量为513ml之外，其余不变，二次结晶所得二氢杨梅素晶体2.5g，纯度为95％。

Claims (1)

1.一种二氢杨梅素的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将二氢杨梅素粗品溶于一定量的溶剂中，调成糊状；

——所述溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮其中一种或两种的混合物；

——所述固液量比为1∶0.5～4(g/ml)；

(2)与一定量吸附剂混匀，在45～75℃干燥0.25～1h；

——所述吸附剂为粉末活性炭或脱色树脂，用量为二氢杨梅素粗品质量的0.2～3倍；

(3)将混合物置于一定量的热水中，趁热过滤，滤液静置过夜；

——所述热水温度为60～95℃；

——所述热水用量为二氢杨梅素粗品质量的50～300倍；

——所述静置温度为5～30℃，静置时间为8～24小时；

(4)过滤、干燥得二氢杨梅素晶体；

——所述干燥温度为60～80℃，干燥时间为4～8小时；

(5)对于粗品含量低于50％的原料，可按步骤(1)～(4)重新操作一次，除所述固液量比、第二次吸附剂用量、热水用量以二氢杨梅素晶体质量为标准配比外，其余不变。