WO2020031638A1 - アンジオテンシンｉ変換酵素活性阻害剤 - Google Patents

アンジオテンシンｉ変換酵素活性阻害剤 Download PDF

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extract
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amber
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武田　令子
春奈 榮岩
山本　卓也
幹夫 山野
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琥珀バイオテクノロジー株式会社
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    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives

Definitions

  • the present invention relates to an angiotensin I converting enzyme activity inhibitor comprising an amber extract.
  • Amber is a fossil made mainly from the resin of the pine genus plant buried underground for a long time and condensed. In China, its powder has been used as a Chinese medicine since ancient times. It mainly contains resin, essential oil, succinic acid, etc., and is soluble in a small amount in ethanol, diethyl ether or benzene (for example, see Non-Patent Document 1).
  • amber is known for its various physicochemical and biological effects, has been used as a very useful material in various fields, and is expected to have unlimited potential. I have.
  • the renin-angiotensin system is known as one of the mechanisms that regulate blood pressure.
  • Angiotensin I converting enzyme (ACE) is an enzyme that produces angiotensin II, a blood pressure increasing substance, from angiotensin I in this renin-angiotensin system, and is considered to be a key factor in preventing hypertension.
  • ACE angiotensin I converting enzyme
  • functional foods such as specified health foods and functionally labeled foods have been put on the market for the purpose of preventing or improving hypertension. .
  • Methylated catechins for example, see Patent Literature 10
  • peptides such as proteolysis products
  • Patent Literatures 11 and 12 are known as those exhibiting such effects.
  • An object of the present invention is to provide an ACE activity inhibitor that can be incorporated into foods and drinks that are easily taken in daily.
  • angiotensin I converting enzyme activity inhibitor which comprises an amber extract whose extraction solvent is aqueous ethanol (water content: 1% by mass to 60% by mass).
  • An oral administration composition for inhibiting angiotensin I converting enzyme activity comprising the angiotensin I converting enzyme activity inhibitor according to ⁇ 1>.
  • a The ACE activity inhibitor characterized by containing the amber extract of the present invention can inhibit the production of angiotensin II which is a blood pressure increasing substance.
  • the ACE activity inhibitor of the present invention is characterized by containing an amber extract as an active ingredient.
  • the amber extract referred to in the present invention is amber itself, a processed product obtained by crushing and shredding amber, an extract obtained by adding a solvent to amber or a processed product thereof, and an extract obtained by removing a solvent from the extract.
  • the product include a solvent-free product, a purified product thereof, and the like. Among them, an extract or a solvent-free product thereof is particularly preferable.
  • the place of production of the amber used in the present invention is not particularly limited. However, in consideration of the amount of production and reserves, amber from Kaliningrad, Russia can be preferably exemplified.
  • the solvent for the extract examples include water, alcohols such as methanol and ethanol, 1,3-butanediol, propylene glycol and glycerin, esters such as ethyl acetate and methyl formate, nitriles such as acetonitrile, diethyl ether and the like.
  • examples thereof include ethers such as tetrahydrofuran, halogenated hydrocarbons such as chloroform and methylene chloride, ketones such as acetone and methyl ethyl ketone, and one or more of these may be used alone or as a mixture.
  • preferred are water or alcohols, and more preferred are aqueous alcohols.
  • ethanol having a water content of 1% by mass to 60% by mass, preferably 10% by mass to 50% by mass can be used. Regardless of whether the water content is higher or lower, the extraction efficiency may deteriorate.
  • the extraction method for example, 2 to 20 times the amount of a solvent may be added to the ground amber and immersed for several days at room temperature or several hours at a temperature near the boiling point. Thereafter, insolubles may be removed by filtration or the like, followed by concentration under reduced pressure. Further, this may be purified by column chromatography using a column filled with silica gel, octadecylsilylated silica gel, ion exchange resin and the like.
  • drinks containing the extract of the present invention include tea drinks, coffee drinks, soft drinks, alcoholic beverages, milk drinks, carbonated drinks, health drinks, nutritional drinks, sports drinks and the like, and concentrated concentrates and prepared powders of these drinks.
  • examples of foods include gums, candies, jellies, tablet confections, health foods, nutritional supplements, supplements, and the like.
  • the extract of the present invention is used as a medicament such as a drug for preventing hypertension, it is provided in the form of powders, granules, tablets, capsules, liquids, injections and the like.
  • the extract of the present invention can be orally administered as it is or diluted with water or the like. Alternatively, it is prepared by formulating this together with a known pharmaceutical carrier.
  • the extract of the present invention is prepared as an oral liquid preparation such as a syrup, or an extract, processed into a powder or the like, mixed with a pharmaceutically acceptable carrier, and used as a tablet, capsule, granule, powder or the like. It can be administered as a solid preparation.
  • various organic or inorganic carrier materials commonly used as formulation materials are used, excipients in solid formulations, lubricants, binders, disintegrants, solvents in liquid formulations, excipients, It is blended as a suspending agent, a binder and the like. If necessary, formulation additives such as preservatives, antioxidants, coloring agents, sweeteners and the like can also be used.
  • the food, beverage, or pharmaceutical composition containing the extract of the present invention may contain the extract of the present invention at any concentration.
  • the extract of the present invention is contained at a concentration of 0.01 to 50% by mass, more preferably 0.05 to 20% by mass, based on the total amount of the food, beverage or pharmaceutical composition.
  • the effective dose can be appropriately determined depending on the age and weight of the patient, the type and severity of the disease, and the route of administration.
  • ACE activity inhibition test Using ACE Kit-WST (trade name, manufactured by Dojindo Laboratories Inc.), ACE activity was measured in the following order.
  • ACE inhibitory activity (inhibition rate%) is calculated by the following formula.
  • ACE inhibitory activity value (% inhibition) [(A blank1 -A sample ) / (A blank1 -A blank2 )] ⁇ 100 From the results of FIG. 1, it was confirmed that the amber extract of the present invention inhibited ACE activity in a concentration-dependent manner.
  • Example 2 Effect of amber extract on blood pressure
  • Ten subjects with high blood pressure were asked to take 100 mg of the amber extract of Production Example 1 once a day for 4 weeks, before taking (0 W) and for 2 weeks Blood pressure (systolic and diastolic) was measured after (2W) and after 4 weeks (4W).

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Abstract

日常的な摂取が簡便である飲食品に組み込むことができるＡＣＥ活性阻害剤を提供する。本発明のＡＣＥ活性阻害剤は、抽出溶媒が含水エタノール（含水率：１質量％～６０質量％）である琥珀抽出物を含有する。

Description

アンジオテンシンＩ変換酵素活性阻害剤
　本発明は琥珀抽出物を含むアンジオテンシンＩ変換酵素活性阻害剤に関する。
　琥珀とは、主にマツ属植物の樹脂が長期間地下に埋没し凝結してできた化石であり、中国では古くからその粉末が漢方薬として用いられている。主に樹脂、精油、コハク酸等を含み、エタノールやジエチルエーテルあるいはベンゼンに少量溶ける（例えば、非特許文献１を参照）。
　日本では宝飾品としてよく知られているが、近年では、粉末や抽出物を化粧品や健康食品に用いる例が増えている。例えば、琥珀粉末を化粧品に配合し、肌感触を改善する技術（例えば、特許文献１を参照）、琥珀抽出物を皮膚外用剤に配合する技術（例えば、特許文献２、特許文献３を参照）、琥珀抽出物中の美白効果を利用する技術（例えば、特許文献４、特許文献５を参照）、琥珀抽出画分中の皮膚ターンオーバー促進因子を利用する技術（例えば、特許文献６を参照）、琥珀抽出物中の皮膚のスキンファーミング効果を利用する技術（例えば、特許文献７を参照）、琥珀抽出画分中のヒアルロン酸産生促進因子を利用する技術（例えば、特許文献８を参照）、琥珀抽出画分中の血管新生促進因子を利用する技術（例えば、特許文献９を参照）などが知られている。
　このように、琥珀には様々な物理化学的、生物学的効果が知られており、非常に有用な素材として様々な分野で用いられてきており、無限の可能性を秘める素材として期待されている。
　血圧を調節するメカニズムのひとつにレニン－アンジオテンシン系が知られている。アンジオテンシンＩ変換酵素（ＡＣＥ）は、このレニン－アンジオテンシン系において、アンジオテンシンＩから血圧上昇物質であるアンジオテンシンＩＩを生成する酵素であり、高血圧症を防ぐうえでキーファクターであると考えられている。最近では高血圧症の予防、改善を目的として特定保健用食品や機能性表示食品のような機能性食品が上市されているが、その中でもACE活性阻害作用を有する食品成分の研究が多くなされている。
　このような作用を示すものとしては、メチル化カテキン（例えば、特許文献１０を参照）、タンパク質分解産物などのペプチド（例えば、特許文献１１、特許文献１２を参照）などが知られているが、より実効性の高い、新規な素材が継続的に市場で求められている。
特開２００４－８３４７８号公報 特開Ｈ９－２２７３３４号公報 特開２００１－１３１０４８号公報 特開２０１０－２３５５５１号公報 特開２０１２－２４０９６７号公報 特開２００７－３１４５２２号公報 特開２００８－１８９６６９号公報 特開２００８－２６６２６０号公報 特開２０１１－２５６１６４号公報 特開２０１１－７９７８９号公報 特開２００９－５１８１３号公報 特開２００８－２９７２０８号公報
中薬大辞典　第二巻　上海科学技術出版社（江蘇新医学院「中薬大辞典」編集部）小学館編）公知文献１参照
　本発明は、日常的な摂取が簡便である飲食品に組み込むことができるＡＣＥ活性阻害剤を提供することを課題とする。
　このような状況を鑑みて、本発明者らは鋭意研究をした結果、琥珀抽出物にこれまで知られていなかったACE活性阻害効果を見出し、本発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下に示すとおりである。
＜１＞抽出溶媒が含水エタノール（含水率：１質量％～６０質量％）である琥珀抽出物を含有することを特徴とするアンジオテンシンＩ変換酵素活性阻害剤。
＜２＞＜１＞に記載のアンジオテンシンＩ変換酵素活性阻害剤を配合してなるアンジオテンシンＩ変換酵素活性阻害用経口投与組成物。
＜３＞態様が医薬品、医薬部外品、飲食物又は食品添加物である＜２＞に記載のアンジオテンシンＩ変換酵素活性阻害用経口投与組成物。
　本発明の琥珀抽出物を含有することを特徴とするＡＣＥ活性阻害剤は、血圧上昇物質であるアンジオテンシンＩＩの生成を阻害することができる。
製造例１の琥珀抽出物によるアンジオテンシンI変換酵素活性阻害を示すグラフ 製造例２の琥珀抽出物服用による拡張期血圧、収縮期血圧の降下促進を示すグラフ
＜本発明の琥珀抽出物＞
　本発明のＡＣＥ活性阻害剤は、有効成分として琥珀抽出物を含有することを特徴とする。ここで、本発明で言う琥珀抽出物とは、琥珀そのもの、琥珀を粉砕、細切等加工した加工物、琥珀又はその加工物に溶媒を加え抽出した抽出物、抽出物から溶媒を除去した抽出物の溶媒除去物、それらの精製物等が例示でき、これらの内では抽出物又はその溶媒除去物が特に好ましい。又、本発明で用いる琥珀の産地は特に限定されることはないが、産出量、埋蔵量を考慮し、ロシア・カリーニングラード産のものが好ましく例示できる。
　抽出物の溶媒としては、例えば、水、メタノールやエタノール、１，３－ブタンジオール、プロピレングリコール、グリセリン等のアルコール類、酢酸エチルや蟻酸メチル等のエステル類、アセトニトリル等のニトリル類、ジエチルエーテルやテトラヒドロフラン等のエーテル類、クロロホルムや塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素類、アセトンやメチルエチルケトン等のケトン類等が例示でき、これらの１種又は２種以上を単独あるいは混合して用いればよい。これらの内好ましいものは水又はアルコール類、より好ましいものは含水アルコールである。さらにアルコールとしては、含水率１質量％～６０質量％、好ましくは１０質量％～５０質量％のエタノールを用いることができる。含水率はこれより高くても低くても、抽出効率が悪くなる場合が存する。
　抽出の方法は、例えば琥珀の粉砕物に２～２０倍量の溶媒を加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬すればよい。その後濾過等によって不溶物を除去し、減圧濃縮等すればよい。又、これをシリカゲル、オクタデシルシリル化シリカゲル、イオン交換樹脂等を充填したカラムでカラムクロマトグラフィーによって精製してもよい。
　＜製造例１＞
　ロシア・カリーニングラード産の琥珀の粉末１００ｇを５０％エタノール（含水率５０％のエタノール）で抽出し、それを減圧濃縮、凍結乾燥し、５０％エタノール抽出物８ｇを得た。
　本発明の抽出物を含む飲料の例としては、茶飲料、コーヒー飲料、清涼飲料、酒、乳飲料、炭酸飲料、健康飲料、栄養ドリンク、スポーツドリンク等とこれら飲料の濃縮原液及び調製粉末等であり、食品の例としては、ガム、キャンディー、ゼリー、錠菓、健康食品、栄養補給食品、サプリメント等である。
　本発明の抽出物を高血圧症の予防薬等の医薬として用いる場合には、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、液剤、注射剤等の形態で提供される。本発明の抽出物をそのまま、あるいは水等で希釈して、経口的に投与できる。もしくはこれを公知の医薬用担体と共に製剤化することにより調製される。例えば、本発明の抽出物をシロップ剤などの経口液状製剤として、又はエキス、粉末などに加工して、薬学的に許容される担体と配合し、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤などの経口固形製剤として投与できる。薬学的に許容できる担体としては、製剤素材として慣用の各種有機あるいは無機担体物質が用いられ、固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、液状製剤における溶剤、賦形剤、懸濁化剤、結合剤などとして配合される。また、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色料、甘味剤などの製剤添加物を用いることもできる。
　本発明の抽出物を含む飲食品又は医薬組成物には、本発明の抽出物を任意の濃度で含ませることができる。好ましくは、本発明の抽出物を飲食品又は医薬組成物全量に対して、０．０１～５０質量％の濃度で含み、より好ましくは０．０５～２０質量％の濃度で含む。
　また、有効な用量は、患者の年齢及び体重、疾病の種類及び重篤度並びに投与の経路により適宜決定することができる。
　以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
　＜実施例１＞ＡＣＥ活性阻害試験
　ＡＣＥ　Ｋｉｔ－ＷＳＴ（商品名、株式会社同仁化学研究所社製）を用いて、以下の順序に従ってＡＣＥ活性を測定した。
　（１）製造例１の琥珀抽出物１０ｍｇをジメチルスルホキシド１ｍｌで溶解し、遠心後の上澄みを順次純水で５倍希釈していきそれぞれサンプル溶液とした。
　（２）９６ウェルプレートの各ウェルに、サンプル溶液（ｓａｍｐｌｅ）もしくは純水（ｂｌａｎｋ１、ｂｌａｎｋ２）を２０μｌずつ入れる。
　（３）各ウェルに基質バッファーを２０μｌずつ加える。
　（４）ｂｌａｎｋ２のウェルに純水を２０μｌずつ加える。
　（５）サンプル溶液を入れたウェルとｂｌａｎｋ１のウェルに酵素溶液を２０μｌずつ加え、３７℃で６０分間インキュベートする。
　（６）各ウェルに発色液を２００μｌずつ加え、室温で１０分間インキュベートする。
　（７）プレートリーダーで４５０ｎｍの吸光度を測定する。
　（８）ＡＣＥ阻害活性（阻害率％）は下記の計算式により算出する。
　ＡＣＥ阻害活性値（阻害率％）＝［（Ａblank1－Ａsample）/（Ａblank1－Ａblank2）］x１００
　図１の結果より、本発明の琥珀抽出物はＡＣＥ活性を濃度依存的に阻害することが確認された。
　＜実施例２＞琥珀抽出物の血圧に対する影響
　血圧が高めな被験者１０名に、製造例１の琥珀抽出物１００ｍｇを４週間１日１回服用してもらい、服用前（０Ｗ）と服用２週間後（２Ｗ）及び４週間後（４Ｗ）に血圧（収縮期及び拡張期）を測定した。
　図２の結果より、本発明の琥珀抽出物は収縮期血圧、拡張期血圧ともに降下を促進することが確認された。

Claims (3)

  1. 　抽出溶媒が含水エタノール（含水率：１質量％～６０質量％）である琥珀抽出物を含有することを特徴とするアンジオテンシンＩ変換酵素活性阻害剤。
  2. 　請求項１記載のアンジオテンシンＩ変換酵素活性阻害剤を配合してなるアンジオテンシンＩ変換酵素活性阻害用経口投与組成物。
  3. 　態様が医薬品、医薬部外品、飲食物又は食品添加物である請求項２に記載のアンジオテンシンＩ変換酵素活性阻害用経口投与組成物。
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