KR20230173239A - 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 조성물 - Google Patents

땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 조성물에 대한 것이다.
본 발명에 따른 조성물은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함함으로써 생체 내 강력한 염증 매개물인 산화질소(NO)의 생성을 효과적으로 억제하고, 유도성 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase: iNOS), 시클로옥시게나아제-2(Cyclooxygenase-2: COX-2), TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-1β(interleukin-1β), 및 IL-6(interleukin-6) 중에서 선택되는 염증 활성 인자의 발현을 억제하는 효과가 있으며, 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비를 억제하는 효과가 있다. 또한, 땃두릅나무 추출물 및 한련초 추출물을 각각 독립적으로 사용하는 경우에 비해 훨씬 우수한 상승적 항염증 효능 및 항알레르기 효능을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 항염증 및 항알레르기용 조성물은 항염증 및 항알레르기 효능이 있는 화장품, 의약품 또는 건강기능식품의 제조에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 조성물{Composition with anti-inflammatory and anti-allergic activity comprising complex extract of Oplopanax elatus and Eclipta prostarata as effective component}
본 발명은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 조성물에 대한 것이다.
염증반응은 인체가 항상성 유지하기 위해 외부 자극원에 대한 인체의 방어 기작으로 미생물 유래의 LPS(lipopolysaccharide)와 같은 외부 자극원과 아라키돈산(arachidonic acid)과 같은 내부 자극원들을 매개로 하여 발생한다.
LPS는 그람 음성박테리아의 세포벽 최외각층에 존재하는 물질로서 병원성 세균과 진핵생물간의 상호작용에 다양한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 특히 LPS는 인체에서 외래물질로 인식되어 세포 방어시스템을 활성화시키고, 이로 인해 면역 방어시스템 중 하나인, 염증유발경로가 활성화된다.
세포가 LPS 등의 외부 자극원에 의해 자극을 받게 되면, iNOS(유도형 NO synthetase) 및 COX-2(cyclooxygenase-2)의 발현이 유도되고, 이로 인해 염증반응을 매개하는 세포 내 신호 전달 물질인 일산화질소(nitric oxide, NO)와 프로스타글란딘(prostaglandin E2, PGE2)을 방출하게 된다. 이렇게 과다 방출된 NO 및 PGE2로 인해 인체 및 조직에 염증반응이 일어나게 된다.
일반적으로 NO는 생리적인 현상인 혈압조절과 신경전달 매개체로 작용하는 등 정상적인 생리활성의 조절작용을 하는 조절물질이며, 면역반응에 있어서도 중추적인 조절물질 역할을 하고 있다. 하지만, iNOS에 의해 과발현된 NO는 염증반응을 일으키고 면역체계의 이상을 유발한다.
대부분의 염증 질환의 치료제로서 널리 사용되고 있는 제제인 비스테로이드성 소염제(non-steroidal antiinflammatory drugs, NSAIDS)는 시클로옥시게나제(cyclooxygenase, COX)라고 하는 아라키돈산(arachidonicacid)으로부터 프로스타글란딘(prostaglandin)의 생합성에 관여하는 효소 활성을 억제함으로써, 항염증 작용을 나타내는데, 주 치료작용 외에 위장관 장애, 간장애, 신장애 등의 심각한 부작용을 야기하므로 장기간의 사용에 제약이 따른다(Rajakariar R et al. 2006).
따라서 부작용이 거의 없어 장기간 사용하는데 무리가 없으면서 항염증 효능에 탁월한 새로운 소염 진통제의 개발이 널리 요구되고 있다. 이는 최근 천연 자원으로부터의 효능 검증을 통한 소재 개발 연구가 활성화되고 있는 이유이기도 하다. 또한, 천연자원을 이용한 항염 효과가 있는 피부 외용제, 화장품에 대한 인기가 증가하고 있으며, 이러한 부작용 없는 천연 화장품 소재 및 제품에 대한 연구가 증대하고 있다.
이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 인체에 항염증 및 항알레르기 효능이 있는 천연물을 찾기 위해 예의 노력하였고, 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물이 땃두릅나무 추출물 및 한련초 추출물을 각각 단독으로 이용하는 경우에 비해 항염증 효능이 현저히 우수할 뿐만 아니라 항알레르기 효능이 나타남을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
KR 10-2019-0075889 A
본 발명의 목적은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 복합추출물은 땃두릅나무 및 한련초가 1 : 0.05-1의 중량비로 혼합된 혼합물의 추출물일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 복합추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매의 추출물일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 혼합용매는 20 내지 80 부피%의 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 프로판올일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 혼합용매는 50 내지 70 부피%의 에탄올일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 복합추출물은 하기의 특성 중에서 선택된 하나 이상을 나타냄으로써 염증 또는 알레르기를 예방 또는 개선하는 효과를 가질 수 있다:
1) 산화질소(nitric oxide: NO)의 생성 억제;
2) 유도성 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase: iNOS) 및 시클로옥시게나아제-2(Cyclooxygenase-2: COX-2)의 발현 억제;
3) TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-1β(interleukin-1β), 및 IL-6(interleukin-6)의 발현 억제; 및
4) 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비 억제.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 복합추출물은 1 내지 1,000 ㎍/g의 농도로 포함되는 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 화장료 조성물은 화장수, 유액, 크림, 에센스, 화장 연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 파운데이션, 파우더, 메이크업 제거제 및 세정제로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것일 수 있다.
또한 본 발명은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 피부 외용제 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 약학 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 조성물은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함함으로써 생체 내 강력한 염증 매개물인 산화질소(NO)의 생성을 효과적으로 억제하고, 유도성 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase: iNOS), 시클로옥시게나아제-2(Cyclooxygenase-2: COX-2), TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-1β(interleukin-1β), 및 IL-6(interleukin-6) 중에서 선택되는 염증 활성 인자의 발현을 억제하는 효과가 있으며, 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비를 억제하는 효과가 있다. 또한, 땃두릅나무 추출물 및 한련초 추출물을 각각 독립적으로 사용하는 경우에 비해 훨씬 우수한 상승적 항염증 효능 및 항알레르기 효능을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 항염증 및 항알레르기용 조성물은 항염증 및 항알레르기 효능이 있는 화장품, 의약품 또는 건강기능식품의 제조에 유용하게 이용될 수 있다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "항염증"은 염증의 예방, 염증의 개선 및 염증의 치료를 포함하며, 구체적으로는 질병 상태로 진행된 만성 염증, 꽃가루와 같이 일반적으로 무해한 물질에 의한 염증반응, NO 과다 생성에 의한 염증반응, LPS(lipopolysaccharide)와 같은 염증 유발 물질에 의한 염증반응, 류마티스성 관절염과 같은 자가 면역 반응에 의한 염증반응 등 인체에 유해한 염증반응의 억제를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 “항알레르기”는 알레르기의 예방, 알레르기 증상의 개선 또는 치료를 포함하며, 구체적으로는 알레르기 주요 인자인 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase) 과다 분비에 의한 알레르기 반응 등 인체에 유해한 알레르기 반응의 억제를 의미한다.
본 발명의 일 측면은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물에 관한 것이다.
상기 땃두릅나무(Oplopanax elatus)는 두릅나무과의 낙엽 활엽 관목으로 한방에서 부르는 한약명은 자인삼(刺人蔘)이다. 땃두릅나무는 전 세계적으로 우리나라, 중국, 러시아, 미국, 캐나다 등지에 소량 분포하는 것으로 알려져 있다. 국내에는 예로부터 한방에서 줄기와 가지는 약용으로 사용하고 뿌리는 발열, 해수에 효과가 있으며, 뿌리의 껍질은 신경쇠약, 우울증, 저혈압, 당뇨병, 신장병 등에 효과가 있다고 알려져 있다. 중국의 길림중초약에서는 해열과 진해(열을 내리고 기침을 누그러지게 하는) 효능이 있으며, 인삼의 생리활성 작용과 비슷하다고 기록하고 있으며, 우리의 한방에선 인삼보다 뛰어난 약효를 지녔다고 해서 천삼이란 이름으로 부르기도 한다. 지금까지 연구된 바에 의하면 성분에 관한 연구가 대부분이었으며, 줄기에는 시린진(syringin), 다우코스테롤(daucosterol), β-시토스테롤(β-sitosterol), L-람노오스(L-rhamnose)가 함유되어 있고, 잎에는 시렌세노사이드 O(cirensenosides O)와 시렌세노사이드 P(cirensenosides P)가 함유되어 있는 것으로 알려져 있다. 본 발명에서 사용되는 땃두릅나무는 잎, 줄기 및 가지 중에서 선택된 1종 이상, 바람직하게는 줄기 및 가지 중에서 선택된 1종 이상, 더욱 바람직하게는 줄기일 수 있다.
상기 한련초(Eclipta prostrate L.)는 우리나라의 중부지방과 남부지방의 논두렁, 개울가의 습기가 있는 곳에서 자생하는 다년초 식물로써, 애장초, 목한련, 묵두초, 하련초 등으로도 불린다. 예로부터 혈류량 촉진, 진통, 면역, 피부염, 모발 성장 촉진 및 피부가 갈라지는 피부염 등에 효과가 있다고 알려져 있다. 상기 한련초에는 사포닌과 탄닌, 고미질, 에크립틴(한련초소), 비타민 A류 물질, 니코틴과 쿠마린 화합물인 웨델로락톤(wedelolactone)과 데메시웨델로락톤(demethylwedelolactone-7-glucosid)이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다. 본 발명에서 사용되는 한련초는 잎, 줄기 및 꽃 중에서 선택된 1종 이상일 수 있고, 바람직하게는 상기 잎, 줄기 및 꽃을 모두 포함하는 지상부 전초일 수 있다.
본 발명의 용어 “복합추출물”은 1) 땃두릅나무 추출물 및 한련초 추출물의 혼합 형태, 또는 2) 땃두릅나무 및 한련초의 혼합물을 추출한 형태를 의미한다. 상기 복합추출물은 상기 2) 번과 같이 혼합물을 추출하는 것이 각각의 추출물을 따로 제조한 후 혼합한 것에 비해 항염증 및 항알레르기 효능 면에서 더욱 바람직하다.
일 구현예에 있어서, 상기 복합추출물은 상기 땃두릅나무 및 한련초가 1 : 0.05-1의 중량비, 바람직하게는 1 : 0.05-0.5의 중량비, 더욱 바람직하게는 1 : 0.05-0.3의 중량비, 더욱 바람직하게는 1 : 0.1-0.3의 중량비로 혼합된 혼합물의 추출물일 수 있다. 상기 땃두릅나무 및 한련초의 중량비가 상기 범위일 때 상기 땃두릅나무 및 한련초의 병용에 따른 상승효과를 극대화할 수 있고, 상기 땃두릅나무 및 한련초의 중량비가 상기 범위를 벗어나는 경우에는 항염증 및 항알레르기 효능이 기대에 미치지 못하게 된다.
또는, 상기 복합추출물은 땃두릅나무 추출물 및 한련초 추출물이 1 : 0.05-1의 중량비, 바람직하게는 1 : 0.05-0.5의 중량비, 더욱 바람직하게는 1 : 0.05-0.3의 중량비, 더욱 바람직하게는 1 : 0.1-0.3의 중량비, 더욱 바람직하게는 1 : 0.1-0.2로 포함된 것일 수 있다.
일 구현예에 있어서, 상기 복합추출물의 추출용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매일 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 4의 알코올은 특별히 한정할 필요는 없으나 예를 들어 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올 또는 노말-부탄올 등이 이용될 수 있다. 상기 혼합용매는 20 내지 80 부피%의 탄소수 1 내지 4의 알코올일 수 있고, 바람직하게는 20 내지 80 부피%의 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 프로판올일 수 있다.
상기 추출용매로는 특별히 한정하는 것은 아니지만 물로 추출된 추출물이 염증 및 알레르기의 예방, 개선 또는 치료에 더욱 바람직하게 작용한다.
일 구현예에 있어서, 상기 복합추출물은 각각 또는 혼합물로서 추출용매와 1 : 1 내지 20, 바람직하게는 1 : 1 내지 10, 더욱 바람직하게는 1 : 1 내지 5의 중량비로 혼합하여 65 내지 95 ℃, 바람직하게는 70 내지 90 ℃, 더욱 바람직하게는 75 내지 85 ℃에서 1 내지 10시간, 바람직하게는 1 내지 5시간 동안 추출한 후 감압농축을 수행하여 제조한 것일 수 있다. 상기 중량비가 상기 범위를 벗어나는 경우에는 추출물에 땃두릅나무 및 한련초의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있다.
상기 복합추출물은 땃두릅나무 및 한련초의 혼합물을 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물을 제2의 유기용매로 재분획한 분획물일 수 있다. 바람직하게는 상기 복합추출물은 땃두릅나무 및 한련초 혼합물의 에탄올 추출물을 헥산, 에틸아세테이트, 부탄올 또는 물로 재분획한 분획물일 수 있다.
본 명세서에서 땃두릅나무 및 한련초를 언급하면서 사용되는 용어 "복합추출물"은 추출용매를 처리하여 얻은 조추출물뿐만 아니라 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물의 가공물, 예를 들어 복합추출물을 추가적으로 농축한 농축물, 이를 건조한 건조물 또는 그를 분쇄한 분말을 포함할 수 있다. 예를 들어, 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물은 감압증류 및 동결건조, 또는 분무건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
또한, 본 발명의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물은 광의로는 땃두릅나무 및 한련초를 동물에게 투여할 수 있도록 제형화된 땃두릅나무 및 한련초 복합추출물의 가공물, 예컨대, 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물 분말도 포함하는 의미를 갖는다. 비록 본 발명에서 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물로 실험을 진행하긴 하였으나, 땃두릅나무 및 한련초 복합추출물의 가공물과 같은 형태로도 목적하는 효과를 달성할 수 있음은 당업자라면 예상 가능할 것이다.
본 발명의 일 실시예에서, 염증 반응 유도 인자인 지질다당류(LPS:lipopolysaccharides) 및 본 발명의 조성물을 세포에 처리하여 NO의 발생을 유도한 후, LPS만 처리한 음성대조군과 비교하였다. 그 결과, 본 발명의 조성물을 처리한 경우 세포독성 없이 농도 의존적으로 NO 발생이 줄어들어, 항염 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다.
본 발명의 다른 실시예에서, 알레르기 반응 유도 인자인 IgE(Immunoglubulin E)를 세포에 처리하여 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비를 유도하고, 본 발명의 조성물을 처리한 후, IgE만 처리한 음성대조군과 비교하였다. 그 결과, 본 발명의 조성물은 세포로부터 분비되는 베타-헥소사미니다아제를 감소시켜 항알레르기 효과가 뛰어남을 확인할 수 있었다.
한편, 본 발명의 발명자들은 구체적인 실험을 통해 상기 조성물에 대한 피부누적 자극을 시험한 결과 인체에 무해한 물질임을 확인하였다. 또한, 본 발명의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.
본 명세서에서 '유효성분으로 포함하는'이란 효능이나 활성을 달성하는데 충분한 양, 즉 화장료 조성물로써 피부에 항염증 및 항알레르기 활성을 나타낼 수 있는 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미한다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물은 효과적인 항염증 및 항알레르기 효능을 제공하기에 바람직한 임의의 함량으로 조성물에 존재할 수 있다. 일 양태에 따르면, 상기 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물은 0.00001 내지 99.9 중량%일 수 있고, 0.0001 내지 30 중량%, 바람직하게는 0.0001 내지 10 중량%, 더욱 바람직하게는 0.0001 내지 10 중량%, 더욱 바람직하게는 0.0001 내지 5 중량%로 포함될 수 있다. 상기 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물의 함량이 상기 범위의 미만인 경우에는 상기 복합추출에 의한 효과를 기대하기 어려우며, 상기 범위를 초과하는 경우에는 함량의 증가에 따른 효과의 증가가 미미할 뿐만 아니라, 제형의 안정성이 저하되는 문제가 있다. 즉, 본 발명의 복합추출물이 조성물 내에 상기 범위로 포함됨으로써, 우수한 항염 및 항알레르기 효과를 구현할 수 있고 제형 및 제품 안정성을 가지며 경제성 면에서도 최적의 함량으로 우수한 효과를 발휘할 수 있다.
또한, 상기 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물은 하기의 특성 중에서 선택된 하나 이상, 바람직하게는 둘 이상, 더욱 바람직하게는 하기 특성을 모두 나타냄으로써 염증성 질환 또는 알레르기성 질환을 예방 또는 개선하는 효과를 가지는 것일 수 있다:
1) 산화질소(nitric oxide: NO)의 생성 억제;
2) 유도성 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase: iNOS) 및 시클로옥시게나아제-2(Cyclooxygenase-2: COX-2)의 발현 억제;
3) TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-1β(interleukin-1β), 및 IL-6(interleukin-6)의 발현 억제; 및
4) 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비 억제.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물의 제형은 화장수, 유액, 크림, 에센스, 화장 연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 파운데이션, 파우더 및 메이크업 제거제로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물은 상기 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물 이외에 피부학적으로 허용가능한 부형제를 추가적으로 포함할 수 있다.
상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 보습제는 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 솔비톨, 헥실렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 디글리세린, 1,2-헥산디올, 판테놀, 베타인, 스쿠알란, 바셀린, 유동파라핀 및 하이드롤라이즈드 밀 글루텐 중 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.
본 발명의 다른 측면은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 용어, “땃두릅나무”, “한련초”, “복합추출물” 및 “항염증 및 항알레르기”에 대해서는 상술하였으므로, 과도한 중복을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명의 피부 외용제 조성물은 염증성 질환, 또는 알레르기성 질환의 예방 또는 개선에 유용하게 이용될 수 있다.
본 발명의 용어 "예방"이란, 본 발명의 조성물의 투여로 염증성 질환 또는 알레르기성 질환의 증상을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어 "개선"이란, 본 발명의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 포함하는 조성물의 투여로 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 것을 의미한다.
일 구현예에 따르면, 상기 피부 외용제 조성물은 연고, 패치, 겔, 크림 또는 분무제의 제형일 수 있다.
본 발명의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다
본 발명의 또 다른 측면은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 용어, “땃두릅나무”, “한련초”, “복합추출물” 및 “항염증 및 항알레르기”에 대해서는 상술하였으므로, 과도한 중복을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명의 약학 조성물은 염증성 질환, 또는 알레르기성 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 이용될 수 있다.
구체적으로, 상기 약학 조성물은 상기 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하여 하기의 특성 중에서 선택된 하나 이상, 바람직하게는 둘 이상, 더욱 바람직하게는 하기 특성을 모두 나타냄으로써 염증성 질환 또는 알레르기성 질환을 예방 또는 치료하는 효과를 가지는 것일 수 있다:
1) 산화질소(nitric oxide: NO)의 생성 억제;
2) 유도성 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase: iNOS) 및 시클로옥시게나아제-2(Cyclooxygenase-2: COX-2)의 발현 억제;
3) TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-1β(interleukin-1β), 및 IL-6(interleukin-6)의 발현 억제; 및
4) 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비 억제.
상기 염증성 질환은 NO 과다 생성에 의한 것으로, 예를 들어 기관지염, 천식, 비염, 염증성 장 질환 및 관절염 중에서 선택되는 1종 이상일 수 있다.
상기 알레르기성 질환은 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase) 과다 분비에 의한 것으로, 예를 들어 접촉성 피부염, 알레르기성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 두드러기, 건선, 비염, 천식 및 알레르기성 결막염 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
본 발명의 용어 "예방"이란, 본 발명의 조성물의 투여로 염증성 질환 또는 알레르기성 질환의 증상을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 용어 "치료"란, 본 발명의 조성물의 투여로 염증성 질환 또는 알레르기성 질환의 증상을 호전 또는 이롭게 변경시키는 모든 행위를 의미한다.
상기 “약학 조성물”은 유효성분으로 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물 이외에, 약학 조성물 등의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
상기 “담체”는 세포 또는 조직 내로의 화합물의 부가를 용이하게 하는 화합물이다. 상기 “부형제”는 유효성분에 적당한 형태를 부여하여 제형화하거나 양을 증가시켜 사용하기 편리하게 하기 위해 첨가하는 화합물이다. 상기 “희석제”는 대상 화합물의 생물학적 활성 형태를 안정화시킬 뿐만 아니라, 화합물을 용해시키게 되는 물에서 희석되는 화합물이다.
상기 담체, 부형제 및 희석제로는 특별히 한정할 필요는 없으나 예를 들어, 유당, 포도당, 설탕, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 예를 들어, 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구 투여인 경우에는 정맥 내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여이다.
본 발명의 약학 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화할 수 있다. 제형화할 경우에는 하나 이상의 완충제(예를 들어, 식염수 또는 PBS), 항산화제, 정균제, 킬레이트화제(예를 들어, EDTA 또는 글루타치온), 충진제, 증량제, 결합제, 아쥬반트(예를 들어, 알루미늄 하이드록사이드), 현탁제, 농후제 습윤제, 붕해제 또는 계면활성제, 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.
경구투여를 위한 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 또는 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 약학 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분(옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분 등 포함), 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose), 락토오스(Lactose), 덱스트로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 말티톨, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 예컨대, 활성 성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다.
단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물 또는 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 또는 보존제 등이 포함될 수 있다.
또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있으며, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
비경구적으로 투여하는 경우 본 발명의 약학 조성물은 적합한 비경구용 담체와 함께 주사제, 경피 투여제 및 비강 흡입제의 형태로 당 업계에 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있다. 상기 주사제의 경우에는 반드시 멸균되어야 하며 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염으로부터 보호되어야 한다. 주사제의 경우 적합한 담체의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 이들의 혼합물 및/또는 식물유를 포함하는 용매 또는 분산매질일 수 있다. 보다 바람직하게는, 적합한 담체로는 행크스 용액, 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 phosphate buffered saline (PBS) 또는 주사용 멸균수, 10% 에탄올, 40% 프로필렌 글리콜 및 5% 덱스트로즈와 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 상기 주사제를 미생물 오염으로부터 보호하기 위해서는 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르빈산, 티메로살 등과 같은 다양한 항균제 및 항진균제를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 주사제는 대부분의 경우 당 또는 나트륨 클로라이드와 같은 등장화제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효량으로 포함할 때 염증성 질환 또는 알레르기성 질환에 대한 바람직한 예방, 개선 또는 치료 효과를 제공할 수 있다. 본 명세서에서, '유효량'이라 함은 음성 대조군에 비해 그 이상의 반응을 나타내는 양을 말하며 바람직하게는 염증성 질환 또는 알레르기성 질환을 개선 또는 치료하기에 충분한 양을 말한다. 상기 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물은 약학 조성물 총 함량에 대하여 1 내지 1,000 ㎍/g, 바람직하게는 5 내지 1,000 ㎍/g, 더욱 바람직하게는 10 내지 500 ㎍/g, 더욱 바람직하게는 40 내지 400 ㎍/g, 더욱 바람직하게는 50 내지 300 ㎍/g, 더욱 바람직하게는 50 내지 200 ㎍/g, 더욱 바람직하게는 100 내지 200 ㎍/g의 농도로 포함될 수 있다. 이때, 상기 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물의 함량이 상기 하한치 미만이면, 세포 생존율은 우수하나 염증성 질환 또는 알레르기성 질환 예방, 개선 또는 치료 효과가 원하는 정도로 나타나지 않을 수 있다. 반대로 상기 상한치를 초과하는 경우 농도가 증가하는 만큼 염증성 질환 또는 알레르기성 질환 예방, 개선 또는 치료 효과가 증가하지 않을 수 있다. 한편, 인 비트로 실험 결과, 본 발명의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물의 농도가 상기 범위인 경우에는 염증성 질환 또는 알레르기성 질환의 예방, 개선 또는 치료에 대하여 유의적인 효과가 나타나면서도 세포독성 등의 부작용이 나타나지 않았다. 본 발명의 약학 조성물에 포함되는 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물의 유효량은 조성물이 제품화되는 형태 등에 따라 달라질 것이다.
본 발명의 약학적 조성물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다.
상기 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 바람직한 구현예에 따르면, 상기 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물의 바람직한 1일 투여량은 1 mg/kg 내지 1 g/㎏, 바람직하게는 5 mg/kg 내지 1 g/kg, 더욱 바람직하게는 10 내지 500 mg/kg, 더욱 바람직하게는 40 내지 400 mg/kg, 더욱 바람직하게는 50 내지 300 mg/kg, 더욱 바람직하게는 50 내지 200 mg/kg, 더욱 바람직하게는 100 내지 200 mg/㎏일 수 있다.
본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 용어, “땃두릅나무”, “한련초”, “복합추출물” 및 “항염증 및 항알레르기”에 대해서는 상술하였으므로, 과도한 중복을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 염증성 질환, 또는 알레르기성 질환의 예방 또는 개선에 유용하게 이용될 수 있다.
상기 염증성 질환은 NO 과다 생성에 의한 것으로, 예를 들어 기관지염, 천식, 비염, 염증성 장 질환 및 관절염 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
상기 알레르기성 질환은 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase) 과다 분비에 의한 것으로, 예를 들어 접촉성 피부염, 알레르기성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 두드러기, 건선, 비염, 천식 및 알레르기성 결막염 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
본 발명의 용어 "예방"이란, 상기 염증성 질환 또는 알레르기성 질환을 억제시키거나 또는 지연시키는 모든 것을 의미한다.
본 발명의 용어 "개선"이란, 본 발명의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 포함하는 조성물의 투여로 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 것을 의미한다.
상기 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽 또는 음료의 형태로 제공될 수 있으며, 상기 건강기능식품 조성물은 상기 유효성분 이외에 다른 식품 또는 식품 첨가물과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적 예를 들어 예방, 개선 또는 치료적 처치에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일 양태에 따르면, 상기 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물은 0.001 내지 30 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 5 중량%로 포함될 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물에 함유된 상기 유효성분의 유효용량은 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류, 섭취자의 연령, 체중, 일반 건강상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로, 섭취 기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 항염증 및 항알레르기 효능을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 상기 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있음은 확실하다.
또한, 본 발명은 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증 및 항알레르기용 식품첨가제를 제공한다. 본 발명에서의 용어, "땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물"은 상술한 바와 같다.
상기 식품첨가제는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 등에 첨가하여 섭취할 수 있다.
이하, 실시예에 의하여 본 발명을 상세히 설명하겠으나, 다음 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
<실시예>
실시예 1: 땃두릅나무 및 한련초 복합추출물의 제조 (1 : 0.1)
땃두릅나무의 줄기 및 가지를 건조한 후 분쇄하여 땃두릅나무 분말을 준비하고, 한련초의 지상부 전초를 건조한 후 분쇄하여 한련초 분말을 준비하였다.
상기 땃두릅나무 분말 및 한련초 분말을 1 : 0.1의 중량비로 혼합한 혼합물과 물을 1 : 3의 중량비로 혼합하고, 85 ℃에서 3시간 동안 추출한 후 여과 및 감압농축한 후 동결건조하여 분말화하여 땃두릅나무 및 한련초 복합추출물(1 : 0.1)을 제조하였다.
실시예 2: 땃두릅나무 및 한련초 복합추출물의 제조 (1 : 0.3)
실시예 1과 동일하게 실시하되, 땃두릅나무 분말 및 한련초 분말을 1 : 0.1의 중량비 대신 1 : 0.3의 중량비로 혼합하여 땃두릅나무 및 한련초 복합추출물(1 : 0.3)을 제조하였다.
비교예 1: 땃두릅나무 추출물 단독
실시예 1과 동일하게 실시하되, 땃두릅나무 및 한련초의 혼합물 대신 땃두릅나무를 단독으로 추출하여 땃두릅나무 추출물을 제조하였다.
비교예 2: 한련초 추출물 단독
실시예 1과 동일하게 실시하되, 땃두릅나무 및 한련초의 혼합물 대신 한련초를 단독으로 추출하여 한련초 추출물을 제조하였다.
<시험예>
<재료 및 방법>
시약 및 기기
Fetal bovine serum (FBS), Antibiotic-Antimycotic, DMEM, Trypsin-EDTA 등의 세포 배양용 시약들은 Life technologies (Gibco™, USA)에서 구입하였고, 세포 배양에 사용된 37℃, 5% CO2 incubator는 Panasonic (Oska, Japan)에서 구입하였다. 실험에 사용된 시약 중 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), Lipopolysaccharide (LPS), Crystal violet, formalin, methanol은 Sigma사(St. Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다.
세포배양
마우스 대식세포주인 RAW 264.7 세포는 한국세포주은행 (KCLB 40071, Seoul, Korea)에서 분양 받아 사용하였으며, 37℃, 5% CO2 조건하에서 10% FBS와 1% Antibiotic-Antimycotic (10 units/mL penicillin, 100 μg/mL sterptomycin, 0.25 μg/mL amphotericin)이 첨가된 DMEM 배지에서 배양하였다.
Total RNA 추출
총 RNA는 LPS로 염증이 유도된 RAW 264.7 세포에 TRIZol (Sigma-Aldrich Co., USA)을 처리하여 제조사의 지시에 따라 추출하였다. 추출한 RNA는 DEPC (Diethyl Pyrocarbonate water)에 용해 시켜 RT-PCR을 수행하였다.
RT-PCR(역전사 중합 효소 연쇄반응; Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)
PCR은 DNA polymerase, buffer, dNTP, tracking dye가 포함된 RT-PCR kit (Bioneer, Korea)를 사용하여 mRNA로부터 cDNA를 합성한 후, TLR4, TNF-α, IL-1β, COX-2, 그리고 iNOS 등 각각의 유전자에 해당하는 프라이머를 사용하여 94 ℃ 30 s, 55~62 ℃ 30 s, 72 ℃에서 1 min, 총 35 cycles 조건으로 PCR을 수행하였다. PCR 산물은 1.5% agarose gel 상에서 전기영동 하여 UV transilluminator로 확인하였다. 정량적 비교를 위하여 GAPDH으로 표준화하여 나타내었다. 분석에 사용된 각각의 프라이머의 염기서열은 하기 표 1에 나타내었다.
타겟 유전자 염기서열
iNOS F : 5` -CGGTGCTGTATTTCCTTACGAGGCGAAGAAGG - 3`
R: 5` - GGTGCTGTCTGTTAGGAGGTCAAGTAAAGGGC - 3`
COX-2 F : 5` - TTGAAGACCAGGAGTACCGC - 3`
R : 5` - GGTACAGTCCCATGACATCG - 3`
IL-1β F : 5` - AGCCATGGCAGAAGTACCT - 3`
R : 5` -CAGCTCTCTTTAGGAAGACAC - 3`
IL-6 F : 5` - GTGTTGCCTGCTGCCTTCCCTG - 3`
R : 5` - CTCTAGGTATACCTCAAACTCCAA - 3`
TNF-α F : 5` - TTGACCTCAGCGCTGAGTTG - 3`
R : 5` - CCTGTAGCCCACGTCGTAGC -3`
β-actin F : 5` - GGATTCCTATGTGGGCGACGA - 3`
R : 5` - CGCTCGGTGAGGATCTTCATG - 3`
통계분석
모든 실험은 3회 반복하여 측정하였으며, 결과 값은 평균±표준편차로 나타내었다. 통계분석은 SPSS software(ver. 20.0, SPSS Inc., Chicargo, IL, USA)를 이용하였다. 각 평균값의 차이를 검증하기 위해 일원배치 분산분석(One-way ANOVA)을 시행하여 p<0.05인 경우 유의한 것으로 판정하였다. 각각의 데이터에서 *, ** 및 ***은 대조군과 비교하여 각각 p<0.05, p<0.01 및 p<0.001에서 유의적 차이가 있음(Student's t-test)을 의미한다.
시험예 1: 세포 독성 시험
상기 실시예 1에서 얻은 시료의 MTS 어세이법에 의한 세포 생존율에 대한 효과를 알아보기 위해 기존 문헌에 기재된 방법을 이용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다(Choi JH et al., Flowers of Inula japonica attenuate inflammatory responses, Immune Network 2010, 10(5), 145-152).
먼저, 24 well plate에 Raw 264.7 세포를 5×104 cell/mL의 밀도로 분주하고 5% CO2, 37 ℃ 조건에서 배양하였다. 24시간 후 실시예에 따른 시료를 각각 농도별(10, 100, 500 및 1,000 ㎍/㎖)로 처리하여 24시간 동안 더 배양하였다. 이후 상층액을 제거하고 1 μg/mL의 MTT 용액을 첨가하여 2 시간 방치 후 DMSO를 well당 100 μL을 가하여 20 분 동안 formazan crystal을 용해시켜 ELISA plate reader로 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포생존율을 하기 수학식 1로 계산하였으며, 그 결과를 대조군 (무처리군)에 대한 상대 비율로 하기 표 2에 나타내었다.
[수학식 1]
세포 생존율(%) = (시료처리군의 흡광도 / 대조군의 흡광도) × 100
시료 (㎍/mL) 세포 생존율(%)
대조군 (무처리군) 100
실시예 1 10 109.1
100 108.6
500 102.7
1,000 98.7
실시예 2 10 106.4
100 105.7
500 99.6
1,000 89.4
상기 표 2를 살펴보면, 본 발명의 실시예에 따른 조성물은 1,000 ㎍/㎖ 농도까지 유의적인 독성을 나타내지 않는 것을 확인할 수 있다.
시험예 2: 산화질소(NO) 생성 억제 효과
Mouse macrophage cell인 RAW 264.7 cell에 염증 유발 물질인 LPS (Lipopolysaccharide)를 인위적으로 처리하여 유도된 NO(Nitric oxide)의 양을 측정함으로써 항염 효능을 평가하였다.
96-well plate에 well 당 2×105 cells/well 이 되도록 분주한 다음, 24시간 동안 37 ℃, 5% CO2 incubator에서 배양하였다. Overnight 한 다음 새로운 배지로 교환해주고 LPS (1 μg/mL)와 실시예 및 비교예의 시료를 각각 농도별로 투여하여 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, 배지 상층액을 취해 13,000 rpm에서 3분 동안 원심 분리하여 상등액만 모은 후, Griess 시약과 1:1로 혼합하여 10분 동안 반응시킨 후 570 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 대조군(control, LPS 처리군)에 대한 상대 비율로 하기 표 3에 나타내었다.
구분 NO 생성량 (% of control)
6.25 ㎍/㎖ 12.5 ㎍/㎖ 50 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 200 ㎍/㎖
실시예 1 72.5±1.1* 46.4±4.2** 31.6±3.5** 14.3±0.7*** 3.8±0.2***
실시예 2 85.4±3.7 50.8±5.9** 42.3±2.6** 25.7±1.3*** 7.2±0.7***
비교예 1 99.5±3.8 97.5±6.3 67.5±8.4* 45.0±6.1** 32.5±5.1**
비교예 2 96.7±6.1 68.3±2.5* 55.4±5.1** 42.5±3.2** 25.3±4.7**
상기 표 3을 살펴보면, 땃두릅나무와 한련초의 복합추출물을 처리하는 경우 땃두릅나무 추출물 및 한련초 추출물을 각각 단독으로 처리하는 경우에 비해 NO의 생성을 더욱 억제하는 것을 확인할 수 있다.
시험예 3: iNOS 및 COX-2의 발현 저해 효과
LPS에 의해 자극된 RAW 264.7 세포에서 실시예 및 비교예에 따른 추출물이 iNOS 및 COX-2 발현에 미치는 영향을 확인하기 위하여 RT-PCR을 진행하였으며, 그 결과를 대조군(control, LPS 처리군)에 대한 상대 비율로 하기 표 4 및 표 5에 나타내었다.
구분 iNOS 발현수준 (% of control)
6.25 ㎍/㎖ 12.5 ㎍/㎖ 50 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 200 ㎍/㎖
실시예 1 76.4±5.7* 48.5±6.2** 33.9±2.6** 16.7±2.2*** 5.3±0.7***
실시예 2 87.6±6.4 52.3±4.2** 41.5±3.7** 24.6±3.1*** 14.7±1.2***
비교예 1 91.3±6.4 74.6±8.3* 63.4±6.1* 47.4±6.4** 40.9±3.4**
비교예 2 91.7±8.2 72.5±5.4* 59.3±4.8* 46.7±5.8** 32.2±2.6**
구분 COX-2 발현수준 (% of control)
6.25 ㎍/㎖ 12.5 ㎍/㎖ 50 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 200 ㎍/㎖
실시예 1 77.6±2.3* 49.1±3.4** 35.6±3.4** 17.4±1.6*** 6.4±0.5***
실시예 2 86.1±3.7 68.4±5.2* 48.3±4.1** 30.5±3.1** 17.3±1.3***
비교예 1 94.6±6.1 81.4±7.3 66.3±5.8* 47.3±5.2** 42.5±4.5**
비교예 2 93.4±5.8 87.3±4.9 61.6±6.7* 44.2±6.3** 35.8±5.1**
상기 표 4 및 표 5를 살펴보면, 땃두릅나무와 한련초의 복합추출물을 처리하는 경우 땃두릅나무 추출물 및 한련초 추출물을 각각 단독으로 처리하는 경우에 비해 iNOS 및 COX-2의 발현을 더욱 저해하는 것을 확인할 수 있다.
시험예 4: IL-1β, IL-6 및 TNF-α 생성 저해 효과
IL-1β, IL-6 및 TNF-α는 대식세포가 분비하는 주요한 염증성 사이토카인으로 알려져 있다. IL-1β, IL-6 및 TNF-α은 LPS로 자극된 RAW 264.7 세포에서 대식세포의 표면의 수용체인 toll-like receptor 4 (TLR4)가 이를 인식하고 활성화 하는 염증 매개물질로, 발열, 부종, 발적, 통증 등의 염증 반응을 일으킨다고 알려져 있다(Microbial pathogenesis, 16(6), 401 (1994); FEBS letters, 579(20), 4423 (2005)).
LPS에 의해 자극된 RAW 264.7 세포에서 실시예 및 비교예에 따른 추출물이 IL-1β, IL-6 및 TNF-α 발현에 미치는 영향을 알아보기 위하여 RT-PCR을 실시하였으며, 그 결과를 대조군(control, LPS 처리군)에 대한 상대 비율로 하기 표 6 내지 표 8에 나타내었다.
구분 IL-1β 발현수준 (% of control)
6.25 ㎍/㎖ 12.5 ㎍/㎖ 50 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 200 ㎍/㎖
실시예 1 76.1±6.1* 48.6±3.4** 37.5±6.1** 24.7±5.8** 11.6±6.2***
실시예 2 89.2±8.0 57.3±6.1** 46.2±4.5** 34.1±3.1** 21.3±5.8**
비교예 1 97.3±7.2 80.3±5.3 77.4±2.7* 66.4±6.2* 49.8±4.7**
비교예 2 99.4±1.9 88.2±2.9 73.1±8.3* 51.6±5.5** 30.2±6.3**
구분 IL-6 발현수준 (% of control)
6.25 ㎍/㎖ 12.5 ㎍/㎖ 50 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 200 ㎍/㎖
실시예 1 78.2±5.9* 51.3±5.0** 35.6±3.4** 19.2±1.8*** 9.4±0.5***
실시예 2 89.3±7.3 60.2±5.8** 45.8±4.1** 27.6±2.5** 17.3±1.1***
비교예 1 94.6±9.2 85.8±7.3 76.6±5.7* 60.4±6.3* 50.6±6.2**
비교예 2 98.2±8.6 76.4±6.4* 63.7±5.2* 50.6±2.5** 43.1±2.4**
구분 TNF-α 발현수준 (% of control)
6.25 ㎍/㎖ 12.5 ㎍/㎖ 50 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 200 ㎍/㎖
실시예 1 72.4±6.6* 49.2±6.8** 32.6±2.8** 19.1±1.6** 7.4±0.5***
실시예 2 89.6±8.1 58.1±5.2** 43.5±4.2** 28.4±2.2** 19.3±1.6***
비교예 1 87.8±5.7 77.6±8.3* 69.4±6.7* 50.6±3.7** 39.1±2.4**
비교예 2 95.8±4.9 67.1±4.9* 54.3±5.8** 46.2±5.3** 34.1±3.3**
상기 표 6 내지 표 8을 살펴보면, 땃두릅나무와 한련초의 복합추출물을 처리하는 경우 땃두릅나무 추출물 및 한련초 추출물을 각각 단독으로 처리하는 경우에 비해 IL-1β, IL-6 및 TNF-α의 생성을 더욱 억제하는 것을 확인할 수 있다.
시험예 5: β-hexosaminidase 분비 억제 효과
Mouse mast cell인 RBL-2H3 cell에 IgE(Immunoglobulin E)를 인위적으로 처리하여 유도된 β-hexosaminidase의 양을 측정함으로 항알레르기 효능을 평가하였다.
RBL-2H3 cell을 96-well plate에 well 당 1×105 cells/well이 되도록 분주한 다음 37 ℃, 5% CO2 incubator에서 16시간 동안 배양하였다. 이후 상기 배지에 Monoclonal DNP-specific IgE (1 μg/mL)를 처리하여 1시간 동안 반응시킨 후 배지를 제거하고, Tyrode's buffer를 이용하여 세척하였다. 그리고 각 well에 Tyrode's buffe (pH 7.3)를 다시 분주한 후 37 ℃, 5% CO2 incubator에서 10분간 배양한 뒤 buffer를 제거하였다. 상기 well에 실시예 및 비교예의 시료를 Tyrode's buffer를 이용하여 각각 농도별로 희석하여 처리한 후 37 ℃, 5% CO2 incubator에서 20분간 배양하였다. 이후, DNP-BSA를 (1 μg/mL) 처리한 후 37 ℃, 5% CO2 incubator에서 2시간 배양하였다. 배양 후, 배양 상등액만 모아 p-nitrophenyl N-acetyl-β-D-glucosamide과 1:1로 혼합하고 37 ℃, 5% CO2 incubator에서 1시간 동안 반응시켰다. 이후, 각 well 당 Sodium bicarbonate (pH 10.2)를 처리하여 발색을 확인하고, 405 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 대조군(control, IgE 처리군)에 대한 상대 비율로 하기 표 9에 나타내었다.
구분 β-hexosaminidase 분비량 (% of control)
6.25 ㎍/㎖ 12.5 ㎍/㎖ 50 ㎍/㎖ 100 ㎍/㎖ 200 ㎍/㎖
실시예 1 89.4±2.4 77.4±4.5* 64.3±4.2** 39.7±5.5*** 24.6±1.6***
실시예 2 99.2±2.3 89.4±6.2 75.3±1.9* 59.2±4.7** 43.2±2.4***
비교예 1 99.5±4.2 99.6±2.8 98.7±1.2 94.6±6.7 92.7±3.9
비교예 2 98.7±5.1 98.2±3.0 97.5±4.4 89.5±3.6 86.1±2.1
상기 표 9를 살펴보면, 땃두릅나무 추출물 및 한련초 추출물을 각각 단독으로 처리하는 경우에는 β-hexosaminidase의 분비를 억제하는 효과가 유의적으로 나타나지 않았으나, 본 발명의 실시예에 따른 땃두릅나무 및 한련초 복합추출물을 처리하는 경우에는 β-hexosaminidase의 분비를 현저히 억제하는 효과가 나타나, 땃두릅나무 및 한련초의 병용이 β-hexosaminidase의 분비 억제에 미치는 상승효과가 있음을 알 수 있다.
시험예 6: 인체첩포 시험
인체 첩포시험은 헬싱키 선언에 근거한 윤리규정 및 식품의약품안전처 화장품 인체적용시험가이드라인에 따라 실시되었으며, Frosch & Kligman이 고안한 방법(J. Am. Acad. Dermatol, 1(1) 35 (1979))을 응용하여 특정 피부질환 및 알레르기가 없는 20세 ~ 60세의 건강한 여성 피험자 32명(평균연령 41.34±8.06세)을 대상으로 실시하였다. 먼저, 첩포 부위를 70% ethanol로 소독한 후 실시예의 시료 20μL가 적용된 Van der Bend (Van der Bend, Netherlands)를 첩포하였다. 48 h 후 첩포를 제거하고 skin marker (Chemotechnique Diagnostics AB, Sweden)로 시험 부위를 표시하였으며, 20 min, 24 h 후에 각 시험 부위의 반응도를 평가하였다. 일차 피부자극 시험(Skin Primary irritation Test)의 평가 기준은 하기 표 10에 제시한 PCPC Guidelines의 판정 기준에 따랐으며, 2회에 걸쳐 평가한 피부 반응의 정도(평균 반응도)를 하기 수학식 2에 따라 점수화하였다.
반응도 임상 증상(반응)
0 무반응
1 희미한 또는 가벼운 홍반
2 보통의 홍반; 및 첩포 경계에서 가까스로 감지할 수 있는 부종 및/또는 구진 형성
3 보통의 홍반; 및 첩포 부위 전반에 퍼진 부종
4 심한 홍반; 및 심한 부종; 또는 수포 발생
5 첩포 부위를 넘어서서 심각한 반응이 퍼짐
[수학식 2]
평균반응도 = [(반응도 × 반응이 나타난 피검자수)/(총피검자수 × 최고점수(5점)) × 100] × 1/2
인체 피부에서의 피부 자극 정도를 평가하기 위하여 액상 상태의 실시예 1 및 2의 시료 20 μL를 각각 32명의 피험자에 첩포하여 인체 첩포 시험을 실시하고, 그 결과를 하기 표 11에 나타내었다.
구분 반응이 나타난 피검자수(명) 반응도
24시간 48시간 평균
대조군 0 0.0 0.0 0.0
실시예 1 0 0.0 0.0 0.0
실시예 2 0 0.0 0.0 0.0
상기 표 11을 살펴보면, 본 발명의 실시예에 따른 시료를 첩포하여 피부 자극 정도를 평가한 결과 32명의 피험자가 모두 반응 등급이 0.0으로서 음성 반응을 나타냈으므로, 본 발명의 조성물은 인체 피부 일차 자극 측면에서 무자극 물질로 판단된다.
본 발명자들은 본 발명의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물이 산화질소(NO)의 생성을 억제하고, iNOS 및 COX-2의 발현을 저해하며, IL-1β, IL-6 및 TNF-α의 생성을 억제할 뿐만 아니라 β-hexosaminidase의 분비를 억제하는 것을 구체적으로 확인하였다. 따라서, 본 발명의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물이 염증 및 알레르기의 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있음을 알 수 있었다.
아래에 본 발명의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
<제조예>
<제조예 1> 화장품의 제조
1-1: 유연화장수(스킨)
본 발명의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 포함하는 항염 및 항알레르기용 유연화장수를 제조하기 위해 하기 표 12에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
성분 함량(중량%)
실시예 1의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물 0.1
글리세린 6.0
1,3-부틸렌글라이콜 3.0
피이지1500 1.0
알란토인 0.1
DL-판테놀 0.3
EDTA-2Na 0.02
벤조페논-9 0.04
소듐하이알루로네이트 5.0
에탄올 10.0
폴리소르베이트20 0.2
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100
1-2 영양화장수(로션)
본 발명의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 포함하는 항염 및 항알레르기용 영양화장수를 제조하기 위해 하기 표 13에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
성분 함량(중량%)
실시예 1의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물 0.1
프로필렌글리콜 6.0
글리세린 4.0
트리에탄올아민 1.2
토코페릴아세테이트 3.0
유동 파라핀 5.0
스쿠알란 3.0
마카다미너트오일 2.0
폴리소르베이트 60 1.5
소르비탄세스퀴올레이트 1.0
카르복시비닐폴리머 1.0
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100
1-3: 영양크림
본 발명의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 포함하는 항염 및 항알레르기용 영양크림을 제조하기 위해 하기 표 14에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
성분 함량(중량%)
실시예 1의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물 0.1
친유형 모노스테아린산글리세린 1.5
세테아릴 알코올 1.5
스테아린산 1.0
폴리소르베이트 60 1.5
소르비탄 스테아레이트 0.6
이소스테아릴이소스테아레이트 5.0
스쿠알란 5.0
광물유 35.0
디메치콘 0.5
하이드록시에칠셀룰로오스 0.12
글리세린 6.0
트리에탄올아민 0.7
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100
1-4: 마스크 팩용 유액
본 발명의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 포함하는 항염 및 항알레르기용 유액을 제조하기 위해 하기 표 15에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
성분 함량(중량%)
실시예 1의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물 0.1
폴리비닐알코올 15.0
셀룰로오스 검 0.15
글리세린 3.0
PEG 1500 2.0
사이클로덱스트린 0.15
DL-판테놀 0.4
알란토인 0.1
글리시리진산모노암모늄 0.3
니코틴아마이드 0.5
에탄올 6.0
PEG 40 경화 피마자유 0.3
방부제, 향, 색소 미량
증류수 잔량
합계 100
<제조예 2> 약학적 제제의 제조
2-1: 산제의 제조
실시예 1의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물 20 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
2-2: 정제의 제조
실시예 1의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물 10 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
2-3: 캡슐제의 제조
실시예 1의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물 10 mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
<제조예 3> 건강기능식품의 제조
3-1: 과립의 제조
실시예 1의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물 1,000 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 mg
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼륨 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 건강기능식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
3-2: 건강 음료의 제조
실시예 1의 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물 1,000 mg
구연산 1,000 mg
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 mL
통상의 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 기능성 음료 조성물 제조예 사용하였다.
비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한, 첨부된 특허청구범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.

Claims (13)

  1. 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 복합추출물은 땃두릅나무 및 한련초가 1 : 0.05-1의 중량비로 혼합된 혼합물의 추출물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 복합추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매의 추출물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 혼합용매는 20 내지 80 부피%의 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 프로판올인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  5. 제3항에 있어서,
    상기 혼합용매는 50 내지 70 부피%의 에탄올인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 복합추출물은 하기의 특성 중에서 선택된 하나 이상을 나타냄으로써 염증 또는 알레르기를 예방 또는 개선하는 효과를 가지는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물:
    1) 산화질소(nitric oxide: NO)의 생성 억제;
    2) 유도성 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase: iNOS) 및 시클로옥시게나아제-2(Cyclooxygenase-2: COX-2)의 발현 억제;
    3) TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-1β(interleukin-1β), 및 IL-6(interleukin-6)의 발현 억제; 및
    4) 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비 억제.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 복합추출물은 0.0001 내지 10 중량% 농도로 포함되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 화장수, 유액, 크림, 에센스, 화장 연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 파운데이션, 파우더 및 메이크업 제거제로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  9. 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 피부 외용제 조성물.
  10. 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 약학 조성물.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 복합추출물은 하기의 특성 중에서 선택된 하나 이상을 나타냄으로써 염증성 질환 또는 알레르기성 질환을 예방 또는 치료하는 효과를 가지는 것을 특징으로 하는 약학 조성물:
    1) 산화질소(nitric oxide: NO)의 생성 억제;
    2) 유도성 산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase: iNOS) 및 시클로옥시게나아제-2(Cyclooxygenase-2: COX-2)의 발현 억제;
    3) TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-1β(interleukin-1β), 및 IL-6(interleukin-6)의 발현 억제; 및
    4) 베타-헥소사미니다아제(β-hexosaminidase)의 분비 억제.
  12. 제10항에 있어서,
    상기 염증성 질환은 기관지염, 천식, 비염, 염증성 장 질환 및 관절염 중에서 선택되는 1종 이상의 질환인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  13. 땃두릅나무 및 한련초의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증 및 항알레르기용 건강기능식품 조성물.

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