KR101851167B1 - 조팝나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 알러지성 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 조팝나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 알러지성 질환 예방, 치료 및 개선을 위한 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 본 발명의 조팝나무 추출물은 비만 세포의 과립 분비를 억제하고, 비만 세포 및 피부 각질세포에서 염증 반응과 관련된 사이토카인의 분비를 억제할 수 있음과 동시에, 세포 증식을 유도할 수 있어 세포에 대하여 안전하게 사용할 수 있는 자원으로서 항알러지 효과를 나타낼 수 있으므로, 알러지성 질환의 예방, 개선 및 치료용 조성물의 유효성분으로 효과적이다.

Description

조팝나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 알러지성 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition containing extract of Spiraea prunifolia for prevention and treatment of allergic diease}

본 발명은 조팝나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 알러지성 질환 예방, 치료 및 개선을 위한 조성물에 관한 것이다.

산업과 문병이 발달함에 따라 발생하는 환경오염, 식생활 변화, 스트레스 등으로 인해 1980년대 이전 1% 미만이었던 알러지 질환 관련 환자는 2000년대 들어 5% 이상으로 증가하였으며, 이 역시 매년 증가하는 추세에 있다.

알러지(allergy, 알레르기)는, 어떠한 외래성 물질과 접하게 되면 항원항체 반응에 의해 생체 내에서 나타나는 급격한 면역 반응을 지칭한다. 항원이 유입됨에 따라 보호작용으로 나타나는 면역 반응이 어떠한 원인으로 인해 생체에 불리하게 작용하여 장애를 일으킬 수 있는데, 생체에 불리한 면역 반응으로서 과민 반응이 나타나게 되는 것을 알러지 반응으로 나타낸다.

알러지 반응을 유발하는 항원은 알러젠(allergen)이라고 하며, 전형적인 알러젠은 꽃가루, 약물, 식물성 섬유, 세균, 음식물, 염색약, 화학물질 등이 있다. 면역계에는 항원에 대항하여 신체를 지키기 위한 몇 가지 방어 메커니즘이 있다. 이들 중 가장 많은 종류는 림프구로, 특정 항원에 반응하기 위해 특이화되어 있으며, B세포와 T세포가 이에 해당한다. B세포는 항원에 결합하여 항원을 파괴시키고 중화시키는 단백질인 항체를 생성한다. T세포는 항체를 생산하는 대신에 항원에 직접 결합하여 공격을 자극한다. 알러지 반응은 즉시형 알러지 또는 지연형 알러지로 나타나는데, 항원이 B세포나 T세포 중 어느 세포와 반응하는지에 따라 결정된다.

알러지 반응은 크게 4 가지로 분류할 수 있으며, 그 중 제 1형 알러지는 지방 세포(mast cell) 또는 호염구(basophil) 표면에 발현된 IgE에 알러젠이 결합하여, 지방 세포 또는 호염구가 이를 항원으로 인식하고 히스타민, β-헥소사미니다제(β-hexosaminidase) 등의 여러 가지 물질을 과도하게 분비하면서 부종, 발적 및 가려움 등의 반응부터 호흡 곤란, 아나필락시스(anaphylaxis)까지 다양한 증상을 유발하게 된다.

알러지를 치료 또는 예방하기 위한 제제로는 크게 스테로이드성 소염제 또는 비스테로이드성 소염제 및 항히스타민제 또는 항류코트리엔제로 나눌 수 있다. 전자는 대부분 강력한 면역억제 작용을 가지므로 단기간 내에 일시적인 진정 효과를 나타낼 수는 있지만, 메스꺼움 등의 가벼운 부작용부터 성장 억제나 골다공증 등과 같은 심각한 부작용까지 있어 장기간 복용에는 많은 문제가 따른다. 후자는 일시적인 완화 효과를 보일 수는 있으나, 졸림이나 어지러움 등의 부작용이 있어 사용에 제한이 따른다. 따라서, 효능, 효과뿐만 아니라 보다 안전하게 적용하기 위해 부작용이 적은 천연물 유래의 항알러지제를 개발하기 위한 연구가 계속되고 있다.

천연물을 이용한 항알러지 효과의 연구와 관련하여, 대한민국 등록특허 제 10-1649707호에서는 갈매나무(Rhamnus davurica) 추출물, 괭이눈(Chrysosplenium grayanum) 추출물, 나한송(Podocarpus macrophyllus) 추출물, 조록나무(Distylium racemosom) 추출물 및 진달래(Rhododendron mucronulatum) 추출물의 항알러지 효과를 개시하고 있고, 대한민국 공개특허 제 10-2012-0003317호에서는 일본잎갈나무(Larix leptolepis), 다릅나무(Maackia amurensis), 산괴불주머니(Corydalis speciosa), 배나무(Pyrus pyrifolia), 및 눈갯버들(Salix graciliglans) 등의 비만세포 과립 분비 억제를 통한 항알러지 효과를 개시하고 있다.

조팝나무(Spiraea prunifolia for. simpliciflora Nakai)는 장미목에 속하는 약용 식물로서, 전국적으로 국내 산지 등에 널리 분포하고 있으며 산록이나 들판 등 양지 바른 곳에서 잘 자란다. 일반적으로 전통의학에서는 뿌리를 약재로서 사용하며, 해열, 혈관 조직의 수축 및 지사의 수렴 작용에 사용될 수 있다. 감기로 인한 열, 신경통, 목이 붓고 아픈 증세, 학질(매일 일정한 시간이 되면 오한이 나고 열이 오르는 증세), 설사 등에도 사용할 수 있다.

그럼에도 불구하고, 조팝나무에 대한 약리 성분 및 용도에 대한 연구가 많이 진행되지 않아 조팝나무에 대한 적용 용도가 넓지 않다. 구체적으로, 대한민국 등록특허 제 10-1176526호에서는 조팝나무 추출물의 항산화 효과를 통한 피부 노화 방지 효과, 피부 주름개선 효과, 피부 미백효과 및 피부 손상 억제 효과에 대하여 공지한 바 있으나, 이외 용도에 대한 연구는 공지된 바 없다.

이에, 본 발명자들은 천연물을 사용하여 생체에 안전하고 효과가 높은 항알러지제를 제공하기 위해서 노력한 결과, 조팝나무 잎의 추출물이 비만 세포(mast cell)의 과립 분비를 억제하고, 염증 반응과 관련된 사이토카인의 분비를 억제할 수 있음과 동시에, 세포 증식을 유도할 수 있어 세포에 대하여 안전하게 사용할 수 있는 자원으로서 항알러지 효과를 나타낼 수 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

이에, 본 발명자들은 조팝나무 잎 추출물의 항알러지 효과를 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은, 알러지성 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 또다른 목적은 알러지성 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 또다른 목적은 알러지성 질환의 예방 및 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 조팝나무(Spiraea prunifolia for. simpliciflora Nakai) 추출물을 유효성분으로 함유하는 알러지성 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 조팝나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 알러지성 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

또한, 본 발명은 조팝나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 알러지성 질환의 예방 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 조팝나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 알러지성 질환의 예방 및 개선용 의약외품을 제공한다.

상기 조팝나무 추출물은 조팝나무를 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출하는 것일 수 있고, 상기 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올일 수 있다.

상기 알러지성 질환은 과민증(anaphylaxis), 알러지성 비염(allergic rhinitis), 천식(asthma), 두드러기(urticaria), 아토피성 피부염(atopic dermatitis), 접촉성 피부염 및 알러지성 피부염(allergic dermatitis)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 질환일 수 있다.

본 발명의 조팝나무 추출물은 비만 세포의 과립 분비를 억제하고, 비만 세포 및 피부 각질세포에서 염증 반응과 관련된 사이토카인의 분비를 억제할 수 있음과 동시에, 세포 증식을 유도할 수 있어 세포에 대하여 안전하게 사용할 수 있는 자원으로서 항알러지 효과를 나타낼 수 있으므로, 알러지성 질환의 예방, 개선 및 치료용 조성물의 유효성분으로 효과적이다.

도 1은 비만 세포인 RBL-2H3 세포에서 본 발명의 조팝나무 추출물과 배나무 추출물(비교예 1)의 β-헥소사미니다제(β-hexosaminidase) 저해 활성을 확인한 결과를 나타낸다.
도 2는 RBL-2H3 세포에서 본 발명의 조팝나무 추출물과 배나무 추출물(비교예 1)의 IL-4 분비 저해능을 확인한 결과를 나타낸다.
도 3은 RBL-2H3 세포에서 본 발명의 조팝나무 추출물과 배나무 추출물(비교예 1)의 세포 증식능을 비교한 결과를 나타낸다.
도 4는 피부각질세포인 HaCaT 세포에서 본 발명의 조팝나무 추출물과 배나무 추출물(비교예 1)의 TNF-α 발현 저해 효과를 나타낸다.
도 5는 피부각질세포인 Jurkat T 세포에서 본 발명의 조팝나무 추출물과 배나무 추출물(비교예 1)의 IL-4 발현 저해 효과를 나타낸다.
도 6은 HaCaT 세포에서 본 발명의 조팝나무 추출물과 배나무 추출물(비교예 1)의 세포증식률을 확인한 결과를 나타낸다.
도 7은 Jurkat 세포에서 본 발명의 조팝나무 추출물과 배나무 추출물(비교예 1)의 세포증식률을 확인한 결과를 나타낸다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

상술한 바와 같이, 환경오염, 식생활 변화, 스트레스 등의 증가로 인해 알러지 질환의 환자가 급증하고 있으나, 화학적 합성 약물의 경우에는 강력한 면역 억제 작용을 가지므로 부작용을 나타낼 수 있어, 체내에 안전하고 부작용이 적은 천연물 유래의 약물에 대한 개발이 요구되고 있다.

본 발명의 조팝나무(Spiraea prunifolia for. simpliciflora Nakai) 추출물은 비만 세포의 과립 분비를 억제하고, 비만 세포 및 피부 각질세포에서 염증 반응과 관련된 사이토카인의 분비를 억제할 수 있음과 동시에, 세포 증식을 유도할 수 있어 세포에 대하여 안전하게 사용할 수 있는 자원으로서 항알러지 효과를 나타낼 수 있으므로, 알러지성 질환의 예방, 개선 및 치료용 조성물의 유효성분으로 효과적이다.

따라서, 본 발명은 조팝나무(Spiraea prunifolia for. simpliciflora Nakai) 추출물을 유효성분으로 함유하는 알러지성 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

상기 추출물은 물, C₁ 내지 C₂의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출하는 것이 바람직하며, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인것이 바람직하다.

본 발명의 조팝나무 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:

1) 조팝나무에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;

2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계; 및

3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축한 후 건조하는 단계.

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 조팝나무은 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 조팝나무은 조팝나무의 뿌리, 꽃, 줄기, 잎 또는 열매가 모두 이용 가능하며, 이에 한정되지 않는다.

상기 방법에 있어서, 조팝나무 추출물의 추출 방법으로는 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류냉각 추출 및 초음파추출 등 당업계의 통상적인 방법을 이용할 수 있다. 상기 추출용매는 건조된 조팝나무 분량의 2 내지 20 배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하다. 추출온도는 20 내지 80℃인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 10 내지 100 시간인 것이 바람직하며, 구체적으로 24 내지 96 시간이 더욱 바람직하고, 보다 구체적으로 72 시간이 가장 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

본 발명의 알러지성 질환은 알러지 반응이 원인이 되어 나타나는 질환으로서 당업계에 알려진 질환을 나타낸다. 보다 구체적으로, 알러지성 질환은 과민증(anaphylaxis), 알러지성 비염(allergic rhinitis), 천식(asthma), 두드러기(urticaria), 아토피성 피부염(atopic dermatitis), 접촉성 피부염 및 알러지성 피부염(allergic dermatitis)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 질환인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 조팝나무 잎으로부터 메탄올 추출하여 조팝나무 추출물을 제조하였고, 이의 항알러지 활성을 비교하기 위해서 항알러지 효과를 나타내는 것으로 보고된 배나무(Pyrus pyrifolia var. culta (Makino) Nakai)의 잎 추출물을 동일한 추출 방법으로 제조하여 비교예로서 사용하였다(대한민국 공개특허 10-2012-0003317호, 대한민국 공개특허 10-2012-0015881호).

또한, 본 발명자들은 비만 세포의 탈과립으로 인해 히스타민이 방출되는 알러지 반응에 있어서 조팝나무 추출물의 알러지 억제 효과를 확인한 결과, 조팝나무 추출물은 IgE로 자극된 RBL-2H3 세포에서 β-헥소사미니다제 방출 및 IL-4의 분비를 억제할 수 있음을 확인하였으며, 이는 배나무 추출물보다 유의적으로 높은 수준의 항알러지 활성을 나타낼 수 있음을 확인하였다(도 1 및 도 2).

또한, 본 발명자들은 알러지 자극을 받은 피부조직에서 조팝나무 추출물에 의한 알러지 억제 효과를 확인하기 위해 피부각질세포주인 HaCaT 세포 및 Jurkat T 세포에 알러지 자극제를 처리하여 조팝나무 추출물의 항알러지 활성을 확인한 결과, 조팝나무 추출물은 배나무 추출물과 유사한 수준으로 TNF-α 또는 IL-4의 발현을 저해할 수 있음을 확인하였을 뿐 아니라(도 4 및 도 5), 높은 세포 증식율을 나타내어 세포에 대한 안전성을 가짐을 확인하였다(도 6 및 도 7).

따라서, 본 발명의 조팝나무 추출물은 비만 세포의 과립 분비를 억제하고, 비만 세포 및 피부 각질세포에서 염증 반응과 관련된 사이토카인의 분비를 억제할 수 있음과 동시에, 세포 증식을 유도할 수 있어 세포에 대하여 안전하게 사용할 수 있는 자원으로서 항알러지 효과를 나타낼 수 있으므로, 알러지로 인해 유발한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 상기 조성물을 제형화할 경우에는 하나 이상의 완충제(예를 들어, 식염수 또는 PBS), 항산화제, 정균제, 킬레이트화제(예를 들어, EDTA 또는 글루타치온), 충진제, 증량제, 결합제, 아쥬반트(예를 들어, 알루미늄 하이드록사이드), 현탁제, 농후제 습윤제, 붕해제 또는 계면활성제, 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분(옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분 등 포함), 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose), 덱스트로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 말티톨, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 예컨대, 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다.

또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 또는 보존제 등이 포함될 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있으며, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제 또는 좌제 등이 포함된다. 비수성용제 및 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있으며, 비경구 투여시 피부외용; 복강내, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사하는 주사제; 경피 투여제; 또는 비강 흡입제의 형태로 당업계에 공지된 방법에 따라 제형화할 수 있다.

상기 주사제의 경우에는 반드시 멸균되어야 하며 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염으로부터 보호되어야 한다. 주사제의 경우 적합한 담체의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 이들의 혼합물 및/또는 식물유를 포함하는 용매 또는 분산매질일 수 있다. 보다 바람직하게는, 적합한 담체로는 행크스 용액, 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS (phosphate buffered saline) 또는 주사용 멸균수, 10% 에탄올, 40% 프로필렌 글리콜 및 5% 덱스트로즈와 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 상기 주사제를 미생물 오염으로부터 보호하기 위해서는 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르빈산, 티메로살 등과 같은 다양한 항균제 및 항진균제를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 주사제는 대부분의 경우 당 또는 나트륨 클로라이드와 같은 등장화제를 추가로 포함할 수 있다.

경피 투여제의 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태가 포함된다. 상기에서 경피 투여는 약학 조성물을 국소적으로 피부에 투여하여 약학 조성물에 함유된 유효한 양의 활성성분이 피부 내로 전달되는 것을 의미한다.

흡입 투여제의 경우, 본 발명에 따라 사용되는 화합물은 적합한 추진제, 예를 들면, 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체를 사용하여, 가압 팩 또는 연무기로부터 에어로졸 스프레이 형태로 편리하게 전달 할 수 있다. 가압 에어로졸의 경우, 투약 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브를 제공하여 결정할 수 있다. 예를 들면, 흡입기 또는 취입기에 사용되는 젤라틴 캡슐 및 카트리지는 화합물, 및 락토즈 또는 전분과 같은 적합한 분말 기제의 분말 혼합물을 함유하도록 제형화할 수 있다. 비경구 투여용 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour)에 기재되어 있다.

본 발명의 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 즉, 본 발명의 조성물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하다. 일일 투여량으로는, 비경구 투여 시 조팝나무 추출물을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.01 내지 50 mg, 더 바람직하게는 0.1 내지 30 mg의 양으로 투여되도록, 그리고 경구 투여 시는 본 발명의 조팝나무 추출물을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.01 내지 100 mg, 더 바람직하게는 0.01 내지 10 mg의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 또한 조팝나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 외용제의 제형으로 제공할 수 있다. 본 발명의 알러지성 질환 예방 및 치료용 약학 조성물을 피부외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 유화제, 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 활성제, 친유성 활성제 또는 지질 소낭 등 피부 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명의 알러지성 질환 예방 및 치료용 약학 조성물이 피부 외용제로 제공될 경우, 이에 제한되는 것은 아니나, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제 등의 제형일 수 있다.

또한, 본 발명은 조팝나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 알러지성 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

상기 추출물은 물, C₁ 내지 C₂의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출하는 것이 바람직하며, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것이 바람직하다.

본 발명의 알러지성 질환은 알러지 반응이 원인이 되어 나타나는 질환으로서 당업계에 알려진 질환을 나타낸다. 보다 구체적으로, 알러지성 질환은 과민증(anaphylaxis), 알러지성 비염(allergic rhinitis), 천식(asthma), 두드러기(urticaria), 아토피성 피부염(atopic dermatitis), 접촉성 피부염 및 알러지성 피부염(allergic dermatitis)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 질환인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 조팝나무 추출물은 비만 세포의 과립 분비를 억제하고, 비만 세포 및 피부 각질세포에서 염증 반응과 관련된 사이토카인의 분비를 억제할 수 있음과 동시에, 세포 증식을 유도할 수 있어 세포에 대하여 안전하게 사용할 수 있는 자원으로서 항알러지 효과를 나타낼 수 있으므로, 알러지성 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품의 유효성분으로서 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다. 일반 식품으로는 이에 한정되지 않지만 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지 콘비이프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게이트, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치이즈 등), 식용식물 유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 본 발명의 조팝나무 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 영양보조제로는 이에 한정되지 않지만 캡슐, 타블렛, 환 등에 본 발명의 조팝나무 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 건강기능식품으로는 이에 한정되지 않지만 예를 들면, 본 발명의 조팝나무 추출물 자체를 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용(건강음료)할 수 있도록 액상화, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 본 발명의 조팝나무 추출물을 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 조팝나무 추출물과 알러지성 질환 예방 및 개선 효과가 있다고 알려진 공지의 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.

본 발명의 조팝나무 추출물을 건강음료로 이용하는 경우, 상기 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 감미제는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제; 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL 당 일반적으로 약 0.01 ～ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ～ 0.03 g 이다.

또한, 본 발명의 조팝나무 추출물은 알러지성 질환 예방 및 개선용 식품 조성물의 유효성분으로 함유될 수 있는데, 그 양은 알러지성 질환 예방 및 개선 작용을 달성하기에 유효한 양으로 특별히 한정되는 것은 아니나, 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량%인 것이 바람직하다. 본 발명의 식품 조성물은 조팝나무 추출물과 함께 알러지성 질환 예방 및 개선용 조성물에 효과가 있는 것으로 알려진 다른 활성 성분과 함께 혼합하여 제조될 수 있다.

상기 외에 본 발명의 건강식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산, 펙트산의 염, 알긴산, 알긴산의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 또는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강식품은 천연 과일주스, 과일주스 음료, 또는 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

또한, 본 발명은 조팝나무 추출물을 유효성분으로 포함하는, 알러지성 질환 개선용 화장료 조성물을 제공한다. 상기 화장료 조성물은 특히 제한되는 것은 아니나, 피부 외용으로 사용하거나, 경구 섭취할 수 있다.

본 발명의 알러지성 질환은 알러지 반응이 원인이 되어 나타나는 질환으로서 당업계에 알려진 질환을 나타낸다. 보다 구체적으로, 알러지성 질환은 과민증, 알러지성 비염, 천식, 두드러기, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염 및 알러지성 피부염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 질환인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 조팝나무 추출물은 비만 세포의 과립 분비를 억제하고, 비만 세포 및 피부 각질세포에서 염증 반응과 관련된 사이토카인의 분비를 억제할 수 있음과 동시에, 세포 증식을 유도할 수 있어 세포에 대하여 안전하게 사용할 수 있는 자원으로서 항알러지 효과를 나타낼 수 있으므로, 알러지성 질환의 예방 및 개선용 화장료 조성물의 유효성분으로서 사용할 수 있다.

본 발명의 알러지성 질환 개선용 조성물은 또한 화장료 조성물일 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 조팝나무 추출물을 유효성분으로 함유하며 피부학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 기초 화장품 조성물(화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 보디오일), 색조 화장품 조성물(화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 제품 조성물(샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤) 및 비누 등의 형태로 제조될 수 있다.

상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화장료 조성물로 세안제 및 비누를 제조하는 경우에는 통상의 세안제 및 비누 베이스에 상기 조팝나무 추출물을 첨가하여 용이하게 제조할 수 있다. 크림을 제조하는 경우에는 일반적인 수중유적형(O/W)의 크림베이스에 조팝나무 추출물 또는 이의 염을 첨가하여 제조할 수 있다. 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등과 물성개선을 목적으로 한 단백질, 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연소재를 추가로 첨가할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 조팝나무 추출물의 함량은 이에 한정되지 않지만 전체 조성물 총중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%인 것이 바람직하고, 0.01 내지 5중량%인 것이 더욱 바람직하다. 상기 함량이 0.001중량% 미만에서는 목적하는 항노화 또는 주름개선 효과를 기대할 수 없고, 10중량% 초과에서는 안전성 또는 제형상의 제조에 어려움이 있을 수 있다.

아울러, 본 발명은 조팝나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 알러지성 질환의 예방 및 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.

본 발명의 조팝나무 추출물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물은 그대로 첨가되거나 다른 의약외품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.

바람직하게는, 상기 의약외품 조성물은 소독청경제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제비누, 핸드워시, 가습기 충진제, 마스크, 연고제 또는 필터 충진제일 수 있다.

이하, 실시예 및 제조예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예 및 제조예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예 및 제조예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

< 실시예 1> 조팝나무( Spiraea prunifolia for. simpliciflora Nakai ) 추출물의 제조

조팝나무는 2008년에 화양의 산지에서 채취한 조팝나무 잎을 사용하였다. 건조한 잎을 분쇄하고, 가속용매 추출장치를 이용해 50℃ 조건에서 100% 메탄올로 추출한 후, 여과하고 감압농축장치로 용매를 제거하여 수득한 조추출물을 조팝나무 추출물로서 사용하였다. 조팝나무 추출물의 추출 조건 및 추출 수율은 하기 [표 1]과 같다.

조팝나무 추출물 및 배나무 추출물의 추출 조건

식물명	학명	사용 부위	추출 조건	산지	채취시기	추출 시료량(g)	확보된 추출물량(g)	수율(%)
조팝나무	Spiraea prunifolia for. simpliciflora Nakai	잎	20	화양	2008.6.20	15	3.72	25.36
배나무	Pyrus pyrifolia var. culta (Makino) Nakai	잎	20	인약연 뒷산 (음성군소이면)	2008.7.03	49	12.25	24.94

< 비교예 1> 배나무( Pyrus pyrifolia var. culta ( Makino ) Nakai ) 추출물의 제조

배나무는 2008년에 익약연 뒷산에서 채취한 배나무 잎을 사용하였다. 건조한 잎을 분쇄하고, 가속용매 추출장치를 이용해 50℃ 조건에서 100% 메탄올로 추출한 후, 여과하고 감압농축장치로 용매를 제거하여 수득한 조추출물을 배나무 추출물로서 사용하였다. 배나무 추출물의 추출 조건 및 추출 수율은 상기 [표 1]과 같다.

< 실험예 1> 세포 배양 및 자료 처리

본 발명의 실험예를 수행하기 위해 사용된 세포는 다음과 같은 방법으로 배양하였다.

비만세포(mast cell)인 RBL-2H3 세포(한국세포주은행에서 구입)는 15% 우태아혈청(FBS), 100 mM 나트륨 피부르산(sodium pyruvate) 및 페니실린을 포함하는 MEM 배지에 2.5×10⁵ 세포/웰의 농도로 접종하고, 48웰 배양 플레이트에서 배양하였다.

피부각질세포인 HaCa T 세포와 Jurkat T 세포(모두 한국세포주은행에서 구입)는 10% 우태아혈청, 100 IU/㎖ 페니실린G, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 및 2 mM L-글루타민을 포함하는 RPMI640 배지에서 배양하였다. 각각의 세포주는 대수증식기(Log-phase)에 해당하는 세포를 각각의 실험에 맞게 12-웰, 6-웰 또는 60 ㎜ 페트리 디쉬에 분주하여 배양하였다.

하기 실험예의 결과 처리는 SPSS 20.0 프로글매을 이용하여 평균(M) 및 표준편차(SD)를 산출하였으며, 연구 대상이 소수이기 때문에 정규분포 검증을 위해 Kolmogorov-Smirnov 검정 분석(Kolmogorov-Smirnov on sample test)을 실시하였다. 집단 간 차이 검증은 일원분산분석(One-way ANOVA)을 사용하였으며, 사후검증은 LSD방법을 이용하였다. 통계적 유의수준은 a= 0.05로 설정하였다.

< 실험예 2> 비만세포에서 조팝나무 추출물의 항알러지 효과 확인

<2-1> β- 헥소사미니다제(β-hexosaminidase)의 방출억제 활성 확인

본 발명의 조팝나무 추출물의 항알러지 효과를 확인하기 위하여, 알러지 초기반응에서 비만 세포(mast cell)의 탈과립으로 인해 방출되는 염증 매개인자인 β-헥소사미니다제의 방출량을 확인하였다.

구체적으로, 비만 세포인 PBL-2H3 세포를 배양한 후, 배지를 타이로스 완충용액(Tyrode’s buffer)으로 교체하고, 200 ng/㎖ 디-니트로페닐/IgE(DNP/IgE; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)을 첨가한 다음 37℃의 5% CO₂ 배양기에서 24 시간 동안 배양하였다. 그런 다음, 제조한 조팝나무 추출물 또는 배나무 추출물을 처리하고 1 시간 동안 추가 배양한 후, 50 ng/㎖ DNP-BSA를 첨가하여 2 시간 동안 37℃에서 배양하고, 얼음 위로 이동시켜 탈과립 반응을 중지 유도하였다. 탈과립 반응이 중지된 세포 배지 내의 β-헥소사미니다제 농도를 측정하기 위하여, 96 웰 블랙 플레이트에 세포 배양 배지(상층액) 25 ㎕을 옮기고 2.4 mM 4-methylumbelliferyl-N-acetyl-b-D-glucosaminide(Sigma-Aldrich, USA) 100 ㎕을 가하여 혼합한 다음 1 시간 동안 37 ℃에서 배양하였다. 배양 종료 후, 0.1 M 글리신-탄산염 완충용액(pH 10.0) 175 ㎕을 첨가하여 반응응 멈추고, Biotek Synergy HT 플레이트 리더(Biotek, Winooski, VT, USA)를 이용하여 형광 발색 정도를 측정하였다. 형광 발색은 360 ㎚의 흡수파장 및 450 ㎚의 방출파장의 조건에서 측정하였다. 용매 대조군은 추출물 대신 DMSO를 처리하여 동일한 방법을 수행하였으며, 용매 대조군의 흡광도와 실험군의 흡광도의 차를 대조군의 흡광도로 나눈 값을 백분율로 나타내어 β-헥소사미니다제 저해 활성(%)을 비교하였다.

그 결과, 도 1에서 나타난 바와 같이 조팝나무 추출물은 약 70%의 β-헥소사미니다제 저해 활성을 나타내어, 비교예 1의 배나무 추출물보다 높은 수준의 β-헥소사미니다제 저해 활성을 나타내는 것을 확인하였다(도 1).

<2-2> IL-4 방출량 확인을 통한 조팝나무 추출물의 억제 활성 확인

본 발명의 조팝나무 추출물의 항알러지 효과를 확인하기 위하여, Th2 세포 및 비만세포에서 주로 생산되어 알러지 반응 발생의 주요 인자로서 작용하는 사이토카인인 IL-4가 배지 내로 방출되는 양을 확인하였다.

구체적으로, 비만 세포인 PBL-2H3 세포를 배양한 후, 배지를 타이로스 완충용액으로 교체하고, 200 ng/㎖ DNP/IgE를 첨가한 다음 37℃의 5% CO₂ 배양기에서 24 시간 동안 배양하였다. 그런 다음, 제조한 조팝나무 추출물 또는 배나무 추출물을 100 ㎕로 처리하고 1×비오티닐화된 항-IL-4 항체 50 ㎕를 첨가하고 실온(18 내지 25℃)에서 4 시간 동안 배양하였다. 4 시간 후, 플레이트를 수차례 세척하고 1× streptavidin-HRP 용액 100 ㎕을 가하여 상온에서 30 분 동안 재배양하였다. 그런 다음, 다시 플레이트를 세척하고 chromogen TMB 기질 용액 100 ㎕을 가한 후 알루미늄 호일로 싸서 빛을 차단하고 실온의 암실에서 10 내지 20 분 동안 배양하였다. 배양 후에는 각 웰에 정지 시약(stop reagent) 100 ㎕를 가한 즉시, Biotek Synergy HT 플레이트 리더기를 이용하여 450 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 용매 대조군은 추출물 대신 DMSO를 처리하여 동일한 방법을 수행하였으며, 용매 대조군의 흡광도와 실험군의 흡광도의 차를 대조군의 흡광도로 나눈 값을 백분율로 나타내어 IL-4 분비 저해능(%)을 비교하였다.

그 결과 도 2에서 나타난 바와 같이, 조팝나무 추출물은 약 35%의 IL-4 분비 저해 활성을 나타내어, 비교예 1의 배나무 추출물보다 높은 수준의 IL-4 분비 저해 활성을 나타내는 것을 확인하였다(도 2).

<2-3> 세포 증식유도 효과의 확인

본 발명의 조팝나무 추출물이 세포에 대하여 독성을 나타내는지 안전성을 확인하기 위해서, 조팝나무 추출물의 세포 증식 유도 효과를 확인하였다.

구체적으로, 비만 세포인 PBL-2H3 세포를 배양한 후, 배지를 타이로스 완충용액으로 교체하고, 200 ng/㎖ DNP/IgE를 첨가한 다음 37℃의 5% CO₂ 배양기에서 24 시간 동안 배양하였다. 24 시간 후, 배지에 조팝나무 추출물 또는 배나무 추출물을 처리하고 24 시간 동안 추가 배양하였다. 배양 후에는 MTT 분석으로 세포 증식 정도를 확인하기 위해 배지에 0.1% MTT 용액 100 ㎕를 가하고 3 시간 동안 37℃에서 반응하였다. 반응 후에는 배지 및 MTT 용액을 제거한 다음, 디메틸 설폭사이드 100 ㎕를 첨가하여 형성된 결정을 녹여 마이크로플레이트 리더기에서 540 ㎚ 파장의 흡광도를 측정하였다.

그 결과 도 3에서 나타난 바와 같이, 조팝나무 추출물은 약 60% 수준의 세포 증식능을 나타내는 것을 확인하였다(도 3).

< 실험예 3> 피부각질세포에서 조팝나무 추출물의 항알러지 효과 확인

<3-1> TNF -α 및 IL-4 mRNA 발현 수준 확인을 통한 조팝나무의 억제 활성 확인

본 발명의 조팝나무 추출물이 알러지 반응 유도를 매개하는 비만세포 외에 알러지 자극 반응을 받은 피부각질세포에 대해서도 항알러지 효과는 나타낼 수 있는지 확인하기 위하여, 알러지 자극을 받은 피부각질세포에서 TNF-α 및 IL-4의 발현 수준을 확인하였다.

구체적으로, 피부각질세포인 HaCaT 세포 또는 Jurkat T 세포를 각각 2×10⁶ 세포/웰 농도로 6-웰 플레이트에 분주한 다음, 각각의 세포 배지에 알러지 자극제를 첨가하였다. HaCaT 세포를 자극하기 위한 자극제로서는 TNF-α 및 TNF-γ(모두 R&D systems, USA)을 첨가하였으며, Jurlat T 세포를 자극하기 위한 자극제로서는 포볼 12-미리스테이트 13-아세테이트(PMA) 및 A23187(모두 sigma, USA)를 배지에 첨가하였다. 24 시간 동안 세포를 배양한 다음, 조팝나무 추출물 또는 배나무 추출물을 처리하여 4 시간 동안 추가 배양하였다.

배양 후, 세포를 수득하여 클로로포름을 첨가하여 20 내지 30초 동안 볼텍싱 혼합하고 4℃에서 15,000 rpm으로 15 분 동안 원심분리하였다. 원심분리 후 3 층으로 분리된 시료 중 최상층액을 새 튜브로 옮긴 뒤, 동량의 이소프로판올을 가하고 10 분 동안 실온 방치한 후, 다시 4℃에서 15,000 rpm으로 15 분 동안 원심분리하였다. 분리된 상층액을 버리고 침전물만 수득하여, 핵산가수분해효소 억제제를 포함하는 75% 에탄올 수용액으로 세척한 후, 4℃에서 13,000 rpm으로 5 분 동안 원심분리하였다. 분리된 상층액을 다시 제거한 후 수득한 침전물을 핵산가수분해효소 억제제(diethyl pyrocarbonate, DEPC)를 포함하는 증류수에 녹여 세포로부터 mRNA를 추출 분리하였다. 추출 분리한 mRNA는 -80℃에서 보관하였으며, 전체 RNA 농도는 RNase가 처리된 0.1% DEPC 수용액에 용해하여 UV 분광광도계로 260 ㎚/280 ㎚에서 흡광도 측정하여 계산하였다. 추출 분리한 1 ㎍의 mRNA를 주형으로 하고 100 pmole 올리고뉴클레오티드 dT 프라이머 및 Accupower ^® RT PreMix(Bioneer Co, Korea)를 혼합하여, 증류수로 반응 전체 용량을 20 ㎕로 조절한 PCR 반응물을 70℃에서 5분, 42℃에서 1시간 및 80℃에서 15분 동안 반응하여 cDNA를 역전사 합성하였다.

합성된 cDNA를 주형으로 하여 1 ㎍ cDNA, Accupower ^® RT PreMix(Bioneer Co, Korea) 및 정방향/역방향 프라이머 각각 10 pmol을 혼합하여 PCR 반응물을 제조하고 PCR 반응하여 TNF-α 또는 IL-4 mRNA 서열을 증폭하였다. 증폭된 PCR 산물은 1% 아가오로스 젤에서 전기영동하여 밴드의 두께 및 밝기를 이용하여 ImageJ 1.44d 프로그램을 통해 정량분석하였다.

또한, mRNA 발현 수준의 실시간 정량 분석을 위해 실시간 PCR(real-time PCR)을 수행하였다. 상기 역전사 합성한 cDNA를 주형으로 하여 DyNAmo SYBR Green qPCR 키트(TaKaRa Bio Inc., Japan)의 2×PCR master mix 및 정방향/역방향 프라이머를 혼합하고 PCR 조건에 맞추어 DNA Engine Opticon(MJ Research, 미국) 기기를 이용하여 PCR 증폭 수행을 하였다. 상대적인 DNA 정량 분석을 위한 보정을 위해 각각의 시료군 내 GAPDH의 발현 수준을 기준으로 TNF-α 및 IL-4 발현 수준을 보정하였다. 용매 대조군(CON)으로는 알러지 자극제를 처리하지 않고 추출물 대신 DMSO를 처리한 군을 대상으로 하였으며, 추출물 처리군에서의 TNF-α 및 IL-4 발현 수준을 용매대조군과 비교하여 상대적인 유전자 발현 수준을 계산하였다. 음성 대조군(NC)으로는 알러지 자극제를 처리하고 추출물을 처리하지 않는 군을 대상으로 하였다.

그 결과, 도 4 및 도 5에서 나타난 바와 같이 HaCaT 세포에서 음성 대조군에 비해 배나무 추출물 및 조팝나무 추출물 모두에서 TNF-α의 mRNA 발현 수준이 유의적으로 감소하는 것을 확인하였다(도 4). 또한, Jurkat 세포에서도 마찬가지로 음성 대조군에 비해 배나무 추출물 및 조팝나무 추출물 모두에서 IL-4의 mRNA 발현 수준이 유의적으로 감소하는 것을 확인하였으며, 특히 조팝나무 추출물이 배나무 추출물보다 IL-4 mRNA 발현 수준 억제 효과가 높은 수준으로 나타나는 것을 확인하였다(도 5).

<3-2> 세포 증식유도 효과의 확인

본 발명의 조팝나무 추출물이 세포에 대하여 독성을 나타내는지 안전성을 확인하기 위해서, 조팝나무 추출물의 세포 증식 유도 효과를 확인하였다.

구체적으로, HaCaT 세포 또는 Jurkat T 세포를 각각 5×10⁵ 세포/웰 농도로 10% FBS 및 1% 항생제(앰피실린, 스트렙토마이신)을 포함하는 DMEM 배지를 분주한 48-웰 플레이트에 접종한 다음, 37℃의 5% CO₂ 배양기에서 24 시간 동안 배양하였다. 24 시간 후, 배지에 조팝나무 추출물 또는 배나무 추출물을 처리하고 24 시간 동안 추가 배양하였다. 배양 후에는 상기 실험예 <2-3>과 동일한 방법으로 MTT 분석을 수행하여 세포 증식율을 확인하였다.

그 결과, 도 6 및 도 7에서 나타난 바와 같이 HaCaT 세포 및 Jurkat 세포 모두에서 배나무 추출물 및 조팝나무 추출물 모두 용매 대조군(CON)과 유사한 수준으로 95% 이상의 높은 세포 증식율을 나타내는 것을 확인하였다(도 6 및 도 7).

이하, 본 발명에 따른 상기 조팝나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 의약품, 건강 식품, 건강 음료 또는 화장료 조성물의 제조예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다. 상기 근육 질환 예방 및 치료 또는 근 기능 개선 효과가 우수한 조팝나무 추출물을 가지고 하기와 같은 조성성분 및 조성비에 따라 제조예 1 내지 4의 의약품, 건강 식품, 건강 음료 및 화장료 조성물을 통상적인 방법에 따라서 제조하였다.

<제조예 1> 약학적 제제의 제조

<1-1> 산제의 제조

본 발명의 조팝나무 추출물 0.1 g

유당 1.5 g

탈크 0.5 g

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<1-2> 정제의 제조

본 발명의 조팝나무 추출물 0.1 g

락토오스 7.9 g

결정성 셀룰로오스 1.5 g

마그네슘 스테아레이트 0.5 g

상기의 성분들을 혼합한 후 직타법(direct tableting method)으로 정제를 제조하였다.

<1-3> 캡슐제의 제조

본 발명의 조팝나무 추출물 0.1 g

옥수수전분 5 g

카르복시 셀룰로오스 4.9 g

상기의 성분들을 혼합하여 분말을 제조한 후, 상기 분말을 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라 경질 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<1-4> 주사제의 제조

본 발명의 조팝나무 추출물 0.1 g

주사용 멸균 증류수 적량

pH 조절제 적량

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플 당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조하였다.

<1-5> 액제의 제조

본 발명의 조팝나무 추출물 0.1 g

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고, 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합하였다. 그 다음 정제수를 가하여 전체 100 로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.

<제조예 2> 건강식품의 제조

<2-1> 밀가루 식품의 제조

본 발명의 조팝나무 추출물 0.5 ~ 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이를 혼합한 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.

<2-2> 스프 및 육즙(gravies)의 제조

본 발명의 조팝나무 추출물 0.1 ~ 5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.

<2-3> 그라운드 비프(ground beef)의 제조

본 발명의 조팝나무 추출물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.

<2-4> 유제품(dairy products)의 제조

본 발명의 조팝나무 추출물 5 ~ 10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

<2-5> 건강보조식품의 제조

본 발명의 조팝나무 추출물 100 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B1 0.13 ㎎

비타민 B2 0.15 ㎎

비타민 B6 0.5 ㎎

비타민 B12 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였으나, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

<제조예 3> 건강 음료의 제조

본 발명의 조팝나무 추출물 100 ㎎

구연산 100 ㎎

올리고당 100 ㎎

매실농축액 2 ㎎

타우린 100 ㎎

정제수를 가하여 전체 500 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 1 ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였으나, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

<제조예 4> 화장료 조성물의 제조

<4-1> 영양화장수( 밀크로션 )

본 발명의 조팝나무 추출물을 포함하는 알러지성 질환 개선용 유연화장수(밀크로션)는 하기 [표 2]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.

배합성분	제조예4-1 (중량%)
본 발명의 조팝나무 추출물	2.0
스쿠알란	5.0
밀납	4.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.5
유동파라핀	0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
카르복시비닐폴리머	0.1
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	to 100

<4-2> 유연화장수(스킨로션)

본 발명의 조팝나무 추출물을 포함하는 알러지성 질환 개선용 유연화장수(스킨로션)는 하기 [표 3]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.

배합성분	제조예4-2 (중량%)
본 발명의 조팝나무 추출물	2.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	2.0
프로필렌글리콜	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1
PEG 12 노닐페닐에테르	0.2
폴리솔베이트 80	0.4
에탄올	10.0
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	to 100

<4-3> 영양크림

본 발명의 조팝나무 추출물을 포함하는 알러지성 질환 개선용 영양크림은 하기 [표 4]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.

배합성분	제조예4-3 (중량%)
본 발명의 조팝나무 추출물	2.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	0.5
PEG60 경화피마자유	2.0
유동파라핀	10
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0
글리세린	5.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제	적량
색소	적량
향료	적량
정제수	to 100

<4-4> 마사지크림

본 발명의 조팝나무 추출물을 포함하는 알러지성 질환 개선용 마사지크림은 하기 [표 5]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.

배합성분	제조예4-4 (중량%)
본 발명의 조팝나무 추출물	1.0
밀납	10.0
폴리솔베이트 60	1.5
PEG 60 경화피마자유	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	0.8
유동파라핀	40.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0
글리세린	5.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	to 100

<4-5> 팩

본 발명의 조팝나무 추출물을 포함하는 알러지성 질환 개선용 팩은 하기 [표 6]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.

배합성분	제조예4-5 (중량%)
본 발명의 조팝나무 추출물	1.0
폴리비닐알콜	13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스	0.2
글리세린	5.0
알란토인	0.1
에탄올	6.0
PEG 12 노닐페닐에테르	0.3
폴리솔베이트 60	0.3
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	to 100

<4-6> 젤

본 발명의 조팝나무 추출물을 포함하는 알러지성 질환 개선용 젤은 하기 [표 7]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 화장품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.

배합성분	제조예4-6 (중량%)
본 발명의 조팝나무 추출물	0.5
에틸렌디아민초산나트륨	0.05
글리세린	5.0
카르복시비닐폴리머	0.3
에탄올	5.0
PEG 60 경화피마자유	0.5
트리에탄올아민	0.3
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	to 100

상술한 본 발명은 상기에 기술된 실시예 및 제조예들에 의해 한정되지 않고, 통상의 기술자들에 의해 다양한 변형 및 변경을 가져올 수 있으며, 그 외의 색채 화장품을 포함하는 다양한 용도의 화장품에 적용될 수 있는 것이고, 그 효능에 따라 인체에 얇게 도포하여 바를 수 있는 약제 즉, 연고로 제조에 이용될 수 있고, 이는 첨부된 청구항에서 정의되는 본 발명의 취지와 범위에 포함된다.

Claims (8)

1. 조팝나무(Spiraea prunifolia for. simpliciflora Nakai) 추출물을 유효성분으로 함유하는 과민증(anaphylaxis), 알러지성 비염(allergic rhinitis), 천식(asthma), 두드러기(urticaria), 접촉성 피부염 및 알러지성 피부염(allergic dermatitis)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 알러지성 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
   
2. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출하는 것을 특징으로 하는, 알러지성 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
   
3. 제 2항에 있어서, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는, 알러지성 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
   
4. 삭제
5. 조팝나무 추출물을 유효성분으로 함유하는, 과민증(anaphylaxis), 알러지성 비염(allergic rhinitis), 천식(asthma), 두드러기(urticaria), 접촉성 피부염 및 알러지성 피부염(allergic dermatitis)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 알러지성 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품.
   
6. 삭제
7. 조팝나무 추출물을 유효성분으로 함유하는, 과민증(anaphylaxis), 알러지성 비염(allergic rhinitis), 천식(asthma), 두드러기(urticaria), 접촉성 피부염 및 알러지성 피부염(allergic dermatitis)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 알러지성 질환의 예방 및 개선용 화장료 조성물.
   
8. 삭제

Images