WO2013172732A1 - Комплексные соединения германия, способы их получения и лекарственные средства - Google Patents

Комплексные соединения германия, способы их получения и лекарственные средства Download PDF

Info

Publication number
WO2013172732A1
WO2013172732A1 PCT/RU2012/000897 RU2012000897W WO2013172732A1 WO 2013172732 A1 WO2013172732 A1 WO 2013172732A1 RU 2012000897 W RU2012000897 W RU 2012000897W WO 2013172732 A1 WO2013172732 A1 WO 2013172732A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
germanium
guanine
derivative
acid
compounds
Prior art date
Application number
PCT/RU2012/000897
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Александр Дмитриевич ИСАЕВ
Игорь Валерьевич АМБРОСОВ
Тамаз Омарович МАНАШЕРОВ
Светлана Константиновна МАТЕЛО
Original Assignee
Общество С Ограниченной Ответственностью "Вдс Фарма"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество С Ограниченной Ответственностью "Вдс Фарма" filed Critical Общество С Ограниченной Ответственностью "Вдс Фарма"
Priority to KR1020147035216A priority Critical patent/KR101717280B1/ko
Priority to JP2015512600A priority patent/JP5993088B2/ja
Priority to CN201280073187.7A priority patent/CN104302651B/zh
Priority to PL12876796T priority patent/PL2851368T3/pl
Priority to EP12876796.9A priority patent/EP2851368B1/en
Priority to CA2873390A priority patent/CA2873390C/en
Priority to AU2012380376A priority patent/AU2012380376B2/en
Priority to IN9234DEN2014 priority patent/IN2014DN09234A/en
Priority to BR112014027919A priority patent/BR112014027919B1/pt
Priority to US14/400,081 priority patent/US9745337B2/en
Priority to ES12876796T priority patent/ES2710915T3/es
Priority to DK12876796.9T priority patent/DK2851368T3/en
Publication of WO2013172732A1 publication Critical patent/WO2013172732A1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H23/00—Compounds containing boron, silicon, or a metal, e.g. chelates, vitamin B12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/28—Compounds containing heavy metals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/52—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an inorganic compound, e.g. an inorganic ion that is complexed with the active ingredient
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/547—Chelates, e.g. Gd-DOTA or Zinc-amino acid chelates; Chelate-forming compounds, e.g. DOTA or ethylenediamine being covalently linked or complexed to the pharmacologically- or therapeutically-active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic Table
    • C07F7/30—Germanium compounds

Definitions

  • the invention relates to medicine and pharmacology, in particular to the development of drugs intended for the prevention and / or treatment of various viral diseases, in particular caused by herpes viruses, and also used as part of complex anti-cancer and immunotherapy.
  • the invention relates to new complex compounds of germanium with derivatives of the nitrogenous bases of the purine series (nucleoside analogues), hydroxycarboxylic acids and, preferably, amino acids.
  • the invention relates to complex compounds of germanium with derivatives of adenine and / or guanine, preferably acyclovir, valacyclovir, ganciclovir, penciclovir, vidarabine and others are used.
  • the proposed compounds provide a high level of biological, in particular, antiviral activity against herpes viruses, for example, herpes simplex viruses type 1 and 2, including resistant strains, for example, acyclovir-resistant stamps.
  • guanine derivatives are used as medicines for the treatment and prevention of various viral infections, in particular infections caused by the herpes virus, including as part of complex therapy in the treatment of HIV-infected and cancer patients, as well as in organ transplantation .
  • guanine derivatives are used as antiviral drugs, in particular for the treatment of herpes virus infections.
  • Herpes is the most common human disease caused by the herpes virus. Eight types of herpes viruses are known, among which the most famous are the herpes simplex virus type 1 and 2 (HSV-1 and HSV-2), Varicella-Zoster virus (HHV-3), Epstein-Barr virus (HHV-4), cytomegalovirus (HHV- 5) and others. In the world, a significant part of the population is infected with herpes viruses in the form of a latent infection. The herpes virus is in the nerve cells of an infected person constantly, but clinically the disease manifests itself only in the period of exacerbation, i.e. active reproduction of the pathogen.
  • HSV-1 is the cause of diseases such as keratitis, "cold on the lips", encephalitis
  • HSV-2 causes genital infections
  • HHV-3 causes chickenpox and shingles
  • HHV-4 is the cause of infectious mononucleosis
  • HHV-5 - cytomegalovirus hepatitis, colitis, pneumonitis.
  • Acyclovir which is a derivative of guanine, and which prevents the multiplication of the virus in cells, has become widespread as such a drug.
  • acyclovir effectively prevents the proliferation of viruses when used in large doses, in particular, when taking the drug inside, it is used in an amount up to 4000 mg / day.
  • an increase in a single dosage of acyclovir leads to a decrease in its bioavailability, which can cause drug toxic effects on the body.
  • acyclovir Another disadvantage of acyclovir is its low solubility in water: 1.3 mg / ml at 25 ° C and 2.5 mg / ml at 37 ° C, while acyclovir is practically insoluble in hydrophobic systems. Therefore, when taking acyclovir inside, there is a possibility of the formation of small crystals in the urine (Mason W.J., Nickols N.N., Crystalluria from acyclovir use, N. Engl. J. Med., 2008, 358: el4) and the appearance of nephrotoxicity. In addition, recently acyclovir resistant strains of herpes viruses have been increasingly appearing, especially in people with reduced immunity.
  • Valaciclovir is a modified form of acyclovir and has greater efficacy and bioavailability: 54% versus 15-20% for acyclovir. Nevertheless, valaciclovir, like acyclovir, is effective only in large doses of 1000-4000 mg / day.
  • penciclovir and ganciclovir which are active against herpes simplex viruses type 1 and 2 (HSV-1 and HSV-2), Varicella-Zoster virus, Epstein-Barr virus, cytomegalovirus infections and which are used to treat and prevention of infections caused by these viruses, including for the treatment and prevention of immunocompromised individuals, such as AIDS patients, as well as cancer patients and organ transplants.
  • HSV-1 and HSV-2 herpes simplex viruses type 1 and 2
  • Varicella-Zoster virus Epstein-Barr virus
  • cytomegalovirus infections which are used to treat and prevention of infections caused by these viruses, including for the treatment and prevention of immunocompromised individuals, such as AIDS patients, as well as cancer patients and organ transplants.
  • a common disadvantage of penciclovir and Ganciclovir is their low solubility in water (penciclovir - 0.17%, ganciclovir - 0.43%,), as well as low bioavailability (1.5% and 5%, respectively).
  • Antiviral drugs should have the following properties: penetrate the cell, have minimal cytotoxicity, act selectively, not addictive, and not accumulate in the body. Therefore, one of the directions in the creation of new dosage forms was the search for compounds that, in combination with already known drugs, improve their antiviral activity.
  • EP 0 477 871 (1992, IPC A61K 31/52) discloses an antiviral composition having selective and synergistic activity against herpes simplex viruses type 1 and 2.
  • the antiviral composition consists of at least two compounds representing guanine derivatives: oxetanocin G (OXT-G), acyclovir (ACV), carbocyclic oxetanocin G C-OXT-G).
  • the combination of acyclovir (0.04-0.4 ⁇ g / ml) with oxetanocin G (0.4-5.4 ⁇ g / ml) or with carbocyclic oxetanocin G (0.01-0.2 ⁇ g / ml) provides a synergistic effect in relation to the HSV-1 virus
  • the combination of acyclovir (0.1-3.4 ⁇ g / ml) with oxetanocin G (0.4-4 ⁇ g / ml) or with carbocyclic oxetanocin G (0.04-0.54 ⁇ g / ml) provides a synergistic effect in relation to the HSV-2 virus.
  • compositions based on netropsin or its bis-derivative with acyclovir and ganciclovir are provided, providing a high level of antiviral activity against herpes simplex virus type 1 (HSV-1).
  • HSV-1 herpes simplex virus type 1
  • Combinations of compounds of netropsins with acyclovir and ganciclovir provide a significant increase in antiherpetic action compared to each of the combined antiviral substances taken separately. So with the combined use of netropsin (2.5 ⁇ g / ml) and bis-netropsin (0.15 ⁇ g / ml) with acyclovir, 50% inhibition of the development of virus-induced cytopathic effect is achieved at a concentration of acyclovir of 0.075 ⁇ g / ml and 0.15 ⁇ g / ml , which is 5 and 3 times less, respectively, than when using only one acyclovir (0.4 ⁇ g / ml). The combination of netropsin and bis-netropsin with ganciclovir reduces the concentration of ganciclovir by 5 times.
  • US Pat. No. 6,448,227 discloses a mixture containing S-acetyl glutathione and acyclovir as an anti-herpes simplex virus or Varicella-Zoster virus.
  • Glutathione is a ⁇ -glutamylcysteinylglycine tripeptide.
  • S-acetyl glutathione is an effective agent against herpes simplex virus (HSV-1) starting at concentrations of 0.35 mg / ml
  • acyclovir is especially effective at concentrations of 0.45 ⁇ g / ml.
  • the combination of S-acetyl glutathione and acyclovir leads to a strong synergistic effect against HSV-1. For example, if you use S-acetyl glutathione (0.7 mg / ml) with acyclovir (0.45 ⁇ g / ml), then the titer of the virus is not determined.
  • compositions of S-acetyl glutathione (0.35 mg / ml) with three different concentrations of acyclovir show a noticeable synergistic effect against the Varicella-Zoster virus, especially strong at a concentration of acyclovir of 0.9 ⁇ g / ml.
  • compositions consisting of germatran derivatives with foscarnet or acyclovir were tested on male guinea pigs infected with the HSV-2 herpes simplex virus. Clinical studies have shown that the use of germatran derivatives in compositions together with foscarnet or acyclovir enhances the effect of the latter 2-4 times in the treatment of HSV-2.
  • compositions of xanthates are claimed in combination with antiviral drugs for the treatment of viral diseases.
  • xanthates especially tricyclodecan-9-yl-xanthogenate (D609), are well known as substances with antiviral and antitumor activity.
  • xanthates as antiviral drugs is complicated by the fact that high concentrations of these agents are required for the effective treatment of living organisms.
  • the patent demonstrates that the use of xanthate derivatives, such as D609, in combination with acyclovir leads to increased antiviral activity.
  • xanthate derivatives such as D609
  • the activity of acyclovir in cell culture increased by 5 times.
  • the combination of D609 and acyclovir ensured the survival of all animals infected with HSV-1 virus.
  • the authors of this invention offer a fundamentally different approach to solving the problem of improving the antiviral activity of known compounds.
  • the invention provides complex compounds of germanium with derivatives of the nitrogenous bases of the purine series, hydroxycarboxylic acids and amino acids, while these complex compounds of germanium are individual chemical compounds with improved biopharmaceutical characteristics, in particular, high solubility in water compared with the corresponding derivatives of nitrogenous bases, and exhibit higher antiviral activity and immunostimulating activity than with tvetstvuyuschie derivatives of nitrogenous bases.
  • the aim of the present invention is the proposal of new complex compounds of germanium with derivatives of nitrogenous bases of the purine series (nucleoside analogues), hydroxycarboxylic acids and, optionally, but preferably, amino acids with antiviral activity, in particular against herpes viruses.
  • Another objective of the invention is to propose new complex compounds of germanium with derivatives of the nitrogenous bases of the purine series (nucleoside analogues), hydroxycarboxylic acids and, optionally, but preferably, amino acids with higher antiviral activity, in particular against herpes viruses, compared with the antiviral activity of derivatives corresponding nitrogen bases.
  • Another objective of the invention is the proposal of new complex compounds of germanium with derivatives of the nitrogenous bases of the purine series (nucleoside analogues), hydroxycarboxylic acids and, optionally, but preferably, amino acids that have good solubility in water.
  • Another objective of the invention is to develop a simple method for producing complex compounds of germanium with various derivatives of the nitrogenous bases of the purine series (nucleoside analogues), various in nature hydroxycarboxylic acids, and various in nature amino acids that are stable in the solid state and can easily be converted into an aqueous solution.
  • Another objective of the invention is the development of such a method for producing complex compounds of germanium with derivatives of nitrogenous bases of the purine series (nucleoside analogues), hydroxycarboxylic acids and, optionally, but preferably amino acids, which allows you to adjust the ratio of germanium, a derivative of the nitrogenous base of the purine series, hydroxycarboxylic acid and amino acids in complex compound, that is, to regulate the composition of the complex compound.
  • Another objective of the invention is the proposal of an antiviral drug containing, as an active component, a complex compound of germanium with derivatives of the nitrogenous bases of the purine series (nucleoside analogues), hydroxycarboxylic acids and, optionally, but preferably, amino acids.
  • Another objective of the invention is the use of complex compounds of germanium with derivatives of the nitrogenous bases of the purine series (nucleoside analogues), hydroxycarboxylic acids and, optionally, but preferably, amino acids to obtain a drug to improve immunity.
  • Another objective of the invention is the use of complex compounds of germanium with derivatives of the nitrogenous bases of the purine series (nucleoside analogues), hydroxycarboxylic acids and, optionally, but preferably, amino acids for the treatment and / or prevention of viral diseases, in particular diseases caused by the herpes virus.
  • AD is a derivative of the nitrogenous base of the purine series with antiviral activity
  • CA is hydroxycarboxylic acid
  • Derivatives of the nitrogenous bases of the purine series use derivatives of adenine and / or guanine, preferably acyclovir, valacyclovir, ganciclovir, penciclovir, vidarabine are used.
  • hydroxycarboxylic acid citric, lactic and / or malic acid is preferably used.
  • the amino acids are preferably arginine, glycine, lysine, threonine.
  • Germanium complex compounds of structural formula (I) are individual chemical compounds that are readily soluble in water and which can be isolated in solid form.
  • Germanium complex compounds of structural formula (I) containing derivatives of the nitrogenous bases of the purine series exhibit high antiviral and immunostimulating activity.
  • a method for producing germanium complex compounds of structural formula (1) _ includes mixing germanium dioxide with water to obtain an aqueous suspension of germanium dioxide, adding a mixture of hydroxycarboxylic acid, a derivative of the nitrogenous base of the purine series, and optionally, but preferably, amino acids, heating the resulting mixture at a temperature of 40-100 ° C for 3-14 hours to form the target product, removing water by any known method to obtain a powdered product KTA.
  • a mixture of several amino acids of different chemical nature and / or a mixture of hydroxycarboxylic acids of various chemical nature can be added to an aqueous suspension of germanium dioxide, and / or a mixture of various derivatives of the nitrogenous bases of the purine series.
  • New germanium-organic complex compounds containing derivatives of the nitrogenous bases of the purine series are obtained, the composition of which is described by the following structural formula:
  • AD is a derivative of the nitrogenous base of the purine series with antiviral activity
  • CA is hydroxycarboxylic acid
  • AA is an amino acid selected from various a-amino acids
  • x can be 1 or 2
  • y can be 2, 3 or 4
  • z can be 0, 1 or 2 that is, x, y, z are integers.
  • Derivatives of the nitrogenous bases of the purine series are derivatives of adenine and / or guanine, which have antiviral activity, in particular against herpes viruses. Such derivatives are well known in the prior art. Examples of such compounds are cyclo-viral guanine derivatives such as acyclovir (9 - [(2-hydroxyethoxy) methyl] guanine), valaciclovir (2- (guanine-9-ylmethoxy) L-valine ethyl ester), ganciclovir (9- [(1,3-dihydroxy-2-propoxy) methyl] guanine), penciclovir (9- [4-hydroxy-3- (hydroxymethyl) butyl] guanine), etc.
  • adenine derivatives can also be used according to the invention, for example, vidarabine (9-P-0-ribofuranosyladenine).
  • vidarabine (9-P-0-ribofuranosyladenine).
  • nucleoside analogues In this application, these terms are used interchangeably.
  • guanine derivatives that have antiviral activity are used as derivatives of the nitrogen bases of the purine series (AD).
  • AD purine series
  • hydroxycarboxylic acids (CA) in the method according to the invention can be used various hydroxycarboxylic acids, such as citric, milk, apple and others.
  • citric acid is used in the process.
  • amino acids (AA) Any ⁇ -amino acids may be used as amino acids (AA) in the method according to the invention, arginine, glycine, lysine, threonine are preferred, arginine and lysine are most preferred.
  • Compounds of structural formula (I) are individual chemical compounds that can be isolated in the solid state as an amorphous powder.
  • Individual chemical compounds of formula (I) are germanium-organic compounds containing several biologically active components in a single molecule, such as germanium and a nitrogenous derivative that exhibits antiviral activity. This provides the proposed compounds with high antiviral and immunostimulating activity.
  • the presence of hydroxycarboxylic acid and amino acids in the complex also provides the compounds with high solubility in water.
  • amino acids and hydroxycarboxylic acids increase the biological activity of the complex compounds of formula (I).
  • the method according to the invention is characterized in that germanium dioxide is mixed with water to obtain an aqueous suspension.
  • a nitrogenous base derivative hydroxycarboxylic acid and an amino acid or a nitrogenous base derivative and hydroxycarboxylic acid.
  • the mixture is stirred at 40-100 ° C for 3-14 hours to obtain a solution of the target product, then water is removed by any known method and the target product is obtained in the form of a white amorphous powder.
  • germanium dioxide As germanium dioxide, germanium dioxide of both ⁇ -modification, which is insoluble in water, and ⁇ -modification, which is soluble in water, can be used. It is preferable to use germanium dioxide a-modification, which is not soluble in water, and when mixed with water forms suspension of germanium dioxide in water.
  • Derivatives of the nitrogenous bases of the purine series use derivatives of adenine or guanine, which have antiviral activity, in particular against herpes viruses.
  • the cyclo-viral derivatives of guanine are used in the method, such as acyclovir (9 - [(2-hydroxyethoxy) methyl] guanine), valaciclovir (2- (guanine-9-ylmethoxy) ethyl ester of L-valine), ganciclovir (9- [(1,3-dihydroxy-2-propoxy) methyl] guanine), penciclovir (9- [4-hydroxy-3-
  • adenine derivatives for example, vidarabine (9- ⁇ - ⁇ -ribofuranosyladenine), are used in the method of the invention.
  • hydroxycarboxylic acids such as citric, lactic, malic and others can be used.
  • citric acid is used in the process.
  • amino acids (AA) Any ⁇ -amino acids may be used as amino acids (AA) in the method according to the invention, arginine, glycine, lysine, threonine are preferred, arginine and lysine are most preferred.
  • the ratio of germanium, a derivative of the nitrogenous base of the purine series, hydroxycarboxylic acid and amino acid in the germanium complex depends on the amount of these components that are added to the aqueous suspension of germanium dioxide. By adjusting the ratio between the amount of germanium dioxide and the amount of the derivative of the nitrogenous base of the purine series, hydroxycarboxylic acid and amino acids, complex compounds with different ratios of germanium, the derivative of the nitrogenous base of the purine series, hydroxycarboxylic acid and amino acids can be obtained.
  • a complex compound is formed in which the molar ratio between the derivative of the nitrogenous base of the purine series and germanium dioxide is 1: 1.
  • the ratio can be adjusted between germanium and a derivative of the nitrogenous base of the purine series in the resulting complex compound.
  • the ratio of germanium to hydroxycarboxylic acid and amino acid can be controlled in the complex compound.
  • hydroxycarboxylic acid (or amino acids) to an aqueous solution with germanium dioxide in a stoichiometric ratio
  • a complex compound is formed in which the molar ratio of germanium to hydroxycarboxylic acid (or amino acid) is 1: 1.
  • a complex compound with a molar ratio of hydroxycarboxylic acid (or amino acid) to germanium is 2: 1.
  • the temperature at which the reaction of the formation of the target complex compound of germanium with derivatives of the nitrogenous bases of the purine series, hydroxycarboxylic acids and optionally, but preferably amino acids is 40-100 ° C.
  • a temperature of 80-100 ° C is preferred, a temperature of 85-100 ° C is more preferred.
  • the reaction time is 3-14 hours.
  • the reaction time is 5-12 hours, even more preferably 6-8 hours.
  • germanium-organic complex compound is controlled by the complete dissolution of germanium dioxide (in the case of using insoluble germanium dioxide) and the formation of a clear solution. Any other methods for controlling product formation, for example, based on sampling and analysis, may be used.
  • the solution is filtered, and then water is removed from the solution by any known method.
  • any of the known methods can be used, for example, evaporation of water, vacuum distillation by heating or freeze-drying (freeze-drying).
  • the target compounds are obtained as an amorphous powder.
  • Derivatives of the nitrogenous base of the purine series, hydroxycarboxylic acids and amino acids can be added to an aqueous suspension of germanium dioxide at the same time or by sequential introduction of these components.
  • the order of introduction of the components does not significantly affect the resulting target product - a complex of germanium with derivatives of the nitrogenous base of the purine series, hydroxycarboxylic acids and amino acids, if any.
  • One method variant is a method in which hydroxycarboxylic acid is added to an aqueous suspension of germanium dioxide, the resulting mixture is heated with stirring at 80-100 ° C for 6-10 hours until a clear solution is formed, then an amino acid and a derivative of the nitrogenous base of the purine series are added to in particular, guanine, and continue heating at 80-100 ° C for 2-3 hours, the solution is filtered and water is removed to obtain a complex compound
  • Another variant of the method is a method in which an amino acid is added to an aqueous suspension of germanium dioxide, the resulting mixture is heated with stirring at 80-100 ° C for 3-5 hours until a clear solution is formed, then hydroxycarboxylic acid and a derivative of the nitrogenous base of the purine series are added, in particular, guanine, and continue heating at 80-100 ° C for 3-5 hours, the solution is filtered and water is removed to obtain the complex compound in solid form.
  • Another variant of the method is a method in which an amino acid and hydroxycarboxylic acid are added to an aqueous suspension of germanium dioxide, the resulting mixture is heated with stirring at 80-100 ° C for 6-8 hours until a clear solution is formed, then a derivative of the nitrogenous base of the purine series is added, in particular, guanine, and continue heating at 80-100 ° C for 2-3 hours, the solution is filtered and water is removed to obtain the complex compound in solid form.
  • Another variant of the method is a method in which a mixture of an amino acid, hydroxycarboxylic acid and a derivative of the nitrogen base of the purine series, in particular guanine, is added to an aqueous suspension of germanium dioxide, the resulting mixture is heated with stirring at 80-100 ° C for 6-12 hours forming a clear solution, the solution is filtered and water removed to obtaining complex compounds in solid form.
  • Another method variant is a method in which hydroxycarboxylic acid is added to an aqueous suspension of germanium dioxide, the resulting mixture is heated with stirring at 80-100 ° C for 8-9 hours until a clear solution is formed. Then a derivative of the nitrogenous base of the purine series, in particular guanine, is added, and heating is continued at 80-100 ° C for 2-3 hours, the solution is filtered and water is removed to obtain the complex compound in solid form.
  • the resulting product is a white amorphous powder, which is readily soluble in water. It should be noted that most of the derivatives of guanine, as a rule, are hardly soluble in water (with the exception of valacyclovir). So the solubility in water of acyclovir is 2.5 mg / ml at 37 ° C, the solubility in water of ganciclovir is 4.3 mg / ml at 25 ° C, the solubility in water of penciclovir is 1.74 mg / ml at 20 ° C, the solubility in water, valaciclovir is 174 mg / ml at 25 ° C.
  • derivatives of adenine have limited solubility in water, for example, the drug vidarabine is poorly soluble in water and is used as an ointment.
  • the germanium complexes obtained according to the invention have good solubility in water of more than 25 wt.% At 20 ° C, i.e. more than 250 mg / ml at 20 ° C.
  • the high solubility of the germanium complex compounds obtained according to the invention makes it possible to obtain and use aqueous solutions with a high concentration of these compounds as antiviral drugs without the side effects of nephrotoxicity.
  • AD is a derivative of the nitrogenous base of the purine series with antiviral activity
  • CA is hydroxycarboxylic acid
  • AA is a-amino acid
  • germanium-containing compounds of the base of the purine series as well as amino acids and hydroxycarboxylic acids gives the complex compounds high biological activity and good solubility in water, and they can be useful in the development and preparation of new pharmaceutical compositions and drugs for various medical applications.
  • germanium complex compounds exhibiting very high biological activity can be obtained, on the basis of which highly effective pharmaceutical preparations can be obtained. It is proposed to use the germanium complex compounds proposed according to the invention as the active component of such pharmaceutical preparations and medicines.
  • the proposed complex compounds of germanium exhibit the same type of biological activity as those of the base of the purine series.
  • the complex compound of germanium can also exhibit a different type of biological activity, which is not characteristic of those initial components that make up its composition.
  • Germany complex compounds should be used in effective amounts.
  • pharmaceutical compositions and preparations may also contain traditional auxiliary components, which are well known from the prior art.
  • Example 1 For the germanium complex compound obtained in Example 1, NMR and IR spectra were obtained and analyzed, and also elemental analysis data were obtained.
  • FIG. 1 The ⁇ NMR spectrum in D 2 0 of the complex compound of germanium with arginine, citric acid and acyclovir is presented.
  • FIG. Figure 2 shows the IR spectrum of a complex compound of germanium with arginine, citric acid, and acyclovir.
  • the elemental analysis data of the compound obtained in Example 1 are presented in Table 1. Next, the compound obtained in Example 1 is designated as WDS-1.
  • Example 5 NMR and IR spectra of the compound obtained in Example 5 are shown in FIG. 3 and 4, respectively. Elemental analysis data are presented in Table 1. The compound is hereinafter referred to as WDS-5.
  • Arg - arginine Gly - glycine, Lys - lysine, Thr - threonine, Citr - citric acid, Mai - malic acid, Acv - acyclovir, Vcv - valaciclovir, Gcv - ganciclovir, Pcv - penciclovir, Vdrb - vidarabine
  • the acute toxicity of new compounds obtained, in particular, according to Examples 1, 5 and 6, was determined on non-linear white male mice weighing 18-20 g with a single intragastric (iv) administration at doses of 1000, 2000, 3000, 4000 and 5000 mg / kg of a 20% aqueous solution of 0.1; 0.2; 0.3; 0.4; and 0.5 ml per 20 g of mouse weight, respectively.
  • the introduction of each of the compounds was carried out separately. Within 14 days after the introduction of each of the compounds there were no signs of intoxication, lag in weight gain and death of animals. In the interval of the studied doses, no violation of animal movements, reflexes, and behavior was observed.
  • mice Anatomical studies did not detect changes in the lungs, kidneys, spleen or other organs.
  • the LD50 value for the studied compounds was more than 5000 mg / kg, which allows them to be classified as hazard class IV in accordance with the hazard classification of substances according to the degree of exposure to the body according to GOST 12.1.007-76 or toxicity class V (practically non-toxic substances) by Hodge, Sterner (1943).
  • the studied substances do not accumulate in the body and do not possess cumulative properties.
  • intragastric administration to nonlinear mice for 14 days at a dose of 1000 mg / kg, there were no deaths of animals, changes in body weight, and weight coefficients of parenchymal organs (liver, kidneys, spleen) in animals of the experimental group as compared to indicators in animals of the control group.
  • the solubility of drugs in the gastrointestinal biofluids is an important biopharmaceutical property.
  • a number of biopharmaceutical characteristics of some of the new compounds obtained were studied, in particular WDS-1 and WDS-5 in comparison with acyclovir. The test was carried out in accordance with the requirements of the regulatory documentation of the European Medical Agency (Guidance on the Investigation of Bioequivalence. European Medicines Agency (EMA). Committee for Medicinal Products of Human Use (CHMP), 2010).
  • D / S Dose / Solubility Ratio
  • biopharmaceutical solubility is not a constant for a specific drug substance (drug), but depends on the maximum registered dosage of drugs for the immediate release of systemic action.
  • dose to solubility ratio was calculated based on the maximum dosage of acyclovir registered for medical use in the Russian Federation in the dosage form - tablets (800 mg).
  • bio-relevant media are solubility media that are as close as possible to the internal fluids of the human body (intestinal, gastric juice) in chemical composition and in physicochemical properties (pH, osmolality, buffer capacity, surface tension). Modeling of physiological conditions is achieved by using surfactants — lecithin and sodium taurocholate as part of these media.
  • biorelevant media fasting artificial intestinal juice (FaSSIF)) and after meals (Fed State Simulated Intestinal Fluid (FeSSIF)).
  • the criterion for assessing the absorption of a dissolved substance through the membrane of the small intestine of a substance is permeability - the fraction of a substance that has penetrated through the intestinal wall.
  • the physicochemical property of a molecule that makes the greatest contribution to its permeability is lipophilicity.
  • the measure of lipophilicity used in the indirect assessment of intestinal permeability is the partition coefficient of octanol-water (partition coefficient) - the logarithm of the ratio of concentrations of non-ionized substance in the system of two immiscible liquids - n-octanol and water (log P).
  • the biopharmaceutical solubility of the germanium complex compounds obtained according to the invention can be characterized as “high” in the entire physiological pH range corresponding to the pH values in the stomach, duodenum, or initial small intestine.
  • the solubility value is not only quantitatively, but also qualitatively different from the solubility of acyclovir. So the solubility of the complex compounds according to the invention is not less than 10 times higher than that of acyclovir, in addition, the solubility of the germanium complex compounds of the invention is “high” in the entire pH range studied, while the solubility of acyclovir at pH 4.4-4.5 and 6.8 is “low”.
  • the bio-relevant solubility of the germanium complex compounds of the invention in both FaSSIF and FeSSIF bio-relevant media is “high”, with more than 10 maximum dosages of the substance being dissolved in 250 ml. Since the solubility in both biorelevant media is high, the food intake process will not be limiting when the substance is dissolved in the gastrointestinal tract, and other factors should be taken into account when optimizing the dosage regimen (for example, is there an irritant effect on the gastrointestinal wall, destruction of the compound when eating and etc.).
  • the distribution coefficient log P of the investigated germanium complex compounds according to the invention is lower than that of metoprolol and is comparable in magnitude with the distribution coefficient log P for acyclovir.
  • the intestinal permeability of these compounds can be characterized as “low”.
  • the bioavailability of the germanium complex compounds of the invention will be higher than the bioavailability of acyclovir.
  • the process of absorption through the intestinal wall will be the limiting stage in which the compounds of the invention enter the systemic circulation.
  • the complex compounds of the invention have significantly greater bio-relevant and biopharmaceutical solubility, which may indicate their higher bioavailability.
  • the antiviral activity of the new germanium compounds of the invention was studied in vitro on green monkey kidney cell cultures (VERO) in accordance with generally accepted methods (Guskova TA., Nikolaeva I.S., Peter V .V. Guidelines for the study of the antiviral activity of pharmacological substances / UR Manual of experimental (preclinical) study of new pharmacological substances. - M. - Ministry of Health of the Russian Federation. CJSC IIA Remedium. - 2000. - S.274-280.
  • HSV herpes simplex virus
  • the criteria for evaluating antiviral activity were: the ability to prevent the development of virus-induced cytopathic effects and inhibit the reproduction of viruses in cell culture.
  • the studied samples were introduced in the composition of the nutrient medium 1 hour after infection of the cell culture with a certain dose of the virus (therapeutic regimen). Evaluation of the antiviral activity of the samples and virus-induced cytopathic action in cell culture was carried out daily by light microscopy according to the degree of change in the morphology of the cell monolayer. The results were taken into account on the 4th day after the cells contacted with infectious material, after the appearance of a pronounced (100%) cytopathic effect in the control samples (positive control).
  • Virus titer was determined by Reed and Mench (Reed, LJ; Muench, N. (1938). "A simple method of estimating fifty percent endpoints.” The American Journal of Hygiene 27: 493- 497).
  • the compound having considered low antiviral activity while the difference equal to 1.5 - 2.0 lg TCD 50 the compound was considered to have moderate antiviral activity, with a difference of> 2.0 lg TCD 50 the compound had a pronounced inhibitory activity against HSV.
  • an acyclovir sample in the concentration range from 500 to 100 ⁇ g / ml significantly reduced the infectious activity of the virus by a value in the range from 2.0 lg to 1.0 lg.
  • a sample of the complex compound according to the invention WDS-5 in a concentration range equivalent to acyclovir from 400 to 160 ⁇ g / ml, significantly reduced the infectious activity of HSV-1 virus "L2 / R" in the range of 1.75-1.0 log tyd 50 .
  • HSV-infected rabbits started 48 hours after infection and were administered per os 6 times a day at a concentration of 10 mg / ml daily for 8 days.
  • WDS-1 showed a pronounced positive therapeutic effect and led to a statistically significant decrease in the severity of the clinical picture of ophthalmic herpes, a decrease in the duration of the disease, and prevention of complications of herpes virus infection of the eyes with menigoencephalitis compared with similar indicators in the control group.
  • FIG. 5 shows the dynamics of the course of ophthalmic herpes in rabbits.
  • the therapeutic effect index of compound WDS-1 was 42.9%.
  • a decrease in the severity of the inflammatory process was noted, leading to a rapid decrease in the severity of clinical manifestations.
  • the drug is most active in the treatment of epithelial keratitis.
  • the survival of animals in the experimental group was 100% against the background of good tolerance compared to 66.7% in the control.
  • Table 3 The effect of compound WDS-1 on the reproduction of HSV-1 in samples of swabs from the eyes obtained in rabbits with ophthalmic herpes.
  • the titers of the virus isolated in animals treated with WDS-1 compounds on the 5th day after infection were significantly lower than the titers of the virus isolated in animals treated with placebo and amounted to 1.25 lg TCD5o / 0. 1 ml and 4.0 lg of SCC / OD ml, respectively.
  • High titers of the virus in control animals indicate continued active reproduction of the virus, including in the corneal epithelium.
  • the germanium complexes of the invention have a combined antiviral mechanism of action. They not only exhibit an inhibitory effect on herpes viruses, including acyclovir-resistant strains (in particular, HSV-1 "L2 / R"), but also simultaneously stimulate the formation and maintenance of specific humoral immunity for a long period of time.
  • the germanium complex compounds of the invention can be used to treat and prevent various infections caused, in particular, by herpes viruses.
  • the germanium complexes of the invention can be used as immunostimulating agents. Due to the combined mechanism of action of the compounds according to the invention, drugs based on them should be effective for the treatment and prevention of immunocompromised persons, for example, AIDS patients, as well as cancer patients and organ transplants.
  • the resulting compounds are non-toxic and have good biopharmaceutical characteristics, which allows us to develop on their basis a wide range of drugs containing the active compounds of the invention in effective doses of the germanium complex compounds of the invention.
  • Medicines according to the invention can be made in the form of various dosage forms: solid (capsules, tablets), liquid (solutions for injection and ingestion, eye drops) and soft (ointments, gels, suppositories), etc., and may contain as additional components pharmaceutically acceptable carriers and other commonly used ingredients.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к разработке лекарственных средств, предназначенных для профилактики и/или лечения вирусных заболеваний, вызванных, в частности гер песвиру сами. Предложены комплексные соединения германия, имеющие общую структурную формулу: Gex[AD][CA]y[AA]z (I) где AD - производное азотистого основания пуринового ряда, обладающее противовирусной активностью, которое может быть выбрано из производных гуанина, таких как ацикловир, валацикловир, ганцикловир, пенцикловир, или производных аденина, таких как видарабин; СА - гидроксикарбоновая кислота, которая может быть выбрана из таких кислот, как (но не ограничиваясь) лимонная, молочная, яблочная; АА - аминокислота, которая может быть выбрана из различных α-аминокислот, таких как аргинин, глицин, лизин, треонин, и где х = 1÷2, у = 2÷4, z = 0÷2. Комплексные соединения германия обладают высокой противовирусной и иммуностимулирующей активностью, хорошо растворимы в воде. Указанные соединения получают путем получения водной суспензии диоксида германия, добавления к ней гидроксикарбоновой кислоты, производного азотистого основания пуринового ряда, и необязательно, но предпочтительно, аминокислоты, нагревания полученной смеси при перемешивании при температуре 40- 100°С в течение 3-14 часов и удаления воды из раствора с получением комплексного соединения германия.

Description

КОМПЛЕКСНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ГЕРМАНИЯ, СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к медицине и фармакологии, а именно к разработке лекарственных средств, предназначенных для профилактики и/или лечения различных вирусных заболеваний, в частности, вызванных герпесвирусами, а также используемых в составе комплексной противораковой и иммунотерапии.
Изобретение относится к новым комплексным соединениям германия с производными азотистых оснований пуринового ряда (нуклеозидными аналогами), гидроксикарбоновыми кислотами и, предпочтительно, аминокислотами. В частности, изобретение относится к комплексным соединениям германия с производными аденина и/или гуанина, предпочтительно используют ацикловир, валацикловир, ганцикловир, пенцикловир, видарабин и др.
Предложенные соединения обеспечивают высокий уровень биологической, в частности, противовирусной активности в отношении герпесвирусов, например вирусов простого герпеса 1 и 2 типа, включая резистентные штаммы, например, ацикловир-резистентные штампы.
Предшествующий уровень техники
В настоящее время некоторые производные азотистых оснований используются в качестве лекарственных средств для лечения и профилактики различных вирусных инфекций, в частности, инфекций, вызванных вирусом герпеса, в том числе в составе комплексной терапии при лечении ВИЧ-инфицированных и онкологических больных, а также при трансплантации органов. Например, производные гуанина используются в качестве противовирусных препаратов, в частности, для лечения инфекций, вызванных вирусом герпеса.
Герпес является наиболее распространенным заболеванием человека, возбудителем которого является вирус герпеса. Известны 8 типов герпесвирусов, среди которых наиболее известны вирус простого герпеса 1 и 2 типа (ВПГ-1 и ВПГ- 2), вирус Варицелла - Зостер (ВГЧ-3), вирус Эпштейн-Барра (ВГЧ-4), цитомегаловирус (ВГЧ-5) и другие. В мире значительная часть населения заражена вирусами герпеса в виде латентной инфекции. Вирус герпеса находится в нервных клетках инфицированного человека постоянно, но клинически заболевание проявляется только в период обострения, т.е. активного размножения возбудителя. ВПГ-1 служит причиной таких заболеваний как кератит, «простуда на губах», энцефалит; ВПГ-2 вызывает инфекции гениталий; ВГЧ-3 вызывает болезни ветряной оспы и опоясывающего лишая; ВГЧ-4 является причиной инфекционного мононуклеоза; ВГЧ-5 - цитомегаловирусный гепатит, колит, пневмонит.
Для того чтобы лечить заболевания, вызванные вирусами герпеса, применяют лекарственные средства, которые при регулярном приёме способны эффективно подавлять симптомы заражения вирусом, его размножение и развитие. Широкое распространение в качестве такого средства получил ацикловир, который является производным гуанина, и который препятствует размножению вируса в клетках. Однако ацикловир эффективно препятствует размножению вирусов при использовании его в больших дозах, в частности, при приеме указанного препарата внутрь его используют в количестве до 4000 мг/сут. При этом увеличение разовой дозировки ацикловира приводит к уменьшению его биодоступности, что может вызывать медикаментозное токсическое воздействие на организм. Еще одним недостатком ацикловира является его низкая растворимость в воде: 1,3 мг/мл при 25°С и 2,5 мг/мл при 37°С, при этом ацикловир практически нерастворим в гидрофобных системах. Поэтому при приеме ацикловира внутрь существует вероятность образования мелких кристаллов в моче (Mason W.J., Nickols Н.Н., Crystalluria from acyclovir use, N. Engl. J. Med., 2008, 358: el4) и появления нефротоксичности. Кроме этого, в последнее время все чаще появляются штаммы герпесвирусов, устойчивые к ацикловиру, особенно у людей со сниженным иммунитетом.
Валацикловир представляет модифицированную форму ацикловира и обладает большей эффективностью и био доступностью: 54% против 15-20% для ацикловира. Тем не менее, валацикловир, как и ацикловир, эффективен только в больших дозах 1000-4000 мг/сут.
Известны также другие производные гуанина, например пенцикловир и ганцикловир, которые обладают активностью против вирусов простого герпеса 1 и 2 типа (ВПГ-1 и ВПГ-2), вируса Варицелла - Зостер, вируса Эпштейн - Барра, цитомегаловирусных инфекций и которые используются для лечения и профилактики инфекций, вызванных этими вирусами, в том числе для лечения и профилактики лиц с ослабленным иммунитетом, например, больных СПИДом, а также онкологических больных и при трансплантации органов. Общим недостатком пенцикловира и ганцикловира, является их невысокая растворимость в воде (пенцикловира - 0,17%, ганцикловира - 0,43%,), а также низкая биодоступность (1,5% и 5% соответственно) .
Противовирусные препараты должны обладать следующими свойствами: проникать в клетку, обладать минимальной цитотоксичностью, действовать избирательно, не вызывать привыкания и не накапливаться в организме. Поэтому одно из направлений в создании новых лекарственных форм заключалось в поисках соединений, которые в сочетании с уже известными препаратами улучшают их противовирусную активность. В патенте ЕР 0477871 (1992 г., МПК А61К 31/52) раскрывается антивирусная композиция, обладающая селективной и синергетической активностью по отношению к вирусам простого герпеса 1 и 2 типа. Антивирусная композиция состоит, по крайней мере, из двух соединений, представляющих производные гуанина: оксетаноцин Г (OXT-G), ацикловир (ACV), карбоциклический оксетаноцин Г C-OXT-G).
Figure imgf000005_0001
OXT-G ACV C-OXT-G
Было проведено изучение влияния антивирусных композиций на репродукцию вируса простого герпеса 1 и 2 типа (ВПГ-1 и ВПГ-2) в культуре клеток Vero. Монослойные культуры клеток Vero выращивали в питательной среде Игла с добавлением 10% сыворотки крови телят при температуре 37°С. После чего их заражали вирусом ВПГ-1 и ВПГ-2. Далее, в культуральную среду зараженных клеток вносили производные гуанина как в отдельности, так и в комбинациях друг с другом и определяли концентрации, которые предотвращали развитие вирусиндуцированного цитопатического эффекта на 50% (ИД50). Показано, что композиции, состоящие из двух соединений, достигают значений ИД50 при более низких концентрациях, чем это необходимо для каждого компонента в отдельности. Например, сочетание ацикловира (0,04-0,4 мкг/мл) с оксетаноцином Г (0,4-5,4 мкг/мл) или с карбоциклическим оксетаноцином Г (0,01-0,2 мкг/мл) обеспечивает синергетический эффект по отношению к вирусу ВПГ-1, а сочетание ацикловира (0,1- 3,4 мкг/мл) с оксетаноцином Г (0,4-4 мкг/мл) или с карбоциклическим оксетаноцином Г (0,04-0,54 мкг/мл) обеспечивает синергетический эффект по отношению к вирусу ВПГ-2.
В патенте РФ 2240792 (2004 г., МПК А61К 31/40) предложены композиции на основе нетропсина или его бис-производного с ацикловиром и ганцикловиром, обеспечивающие высокий уровень противовирусной активности в отношении вируса простого герпеса 1 типа (ВПГ-1).
Figure imgf000006_0001
Комбинации соединений нетропсинов с ацикловиром и ганцикловиром обеспечивают значительное усиление противогерпетического действия по сравнению с каждым из комбинируемых противовирусных веществ, взятых в отдельности. Так при сочетанном применении нетропсина (2,5 мкг/мл) и бис-нетропсина (0,15 мкг/мл) с ацикловиром, 50% ингибирование развития вирусиндуцированного цитопатического эффекта достигается при концентрации ацикловира 0,075 мкг/мл и 0,15 мкг/мл, что в 5 и 3 раза меньше, соответственно, чем при использовании только одного ацикловира (0,4 мкг/мл). Сочетание нетропсина и бис-нетропсина с ганцикловиром приводит к снижению концентрации ганцикловира в 5 раз.
В патенте США 6448227 (2002 г., МПК А61К 38/00) раскрыта смесь, содержащая S-ацетил глутатион и ацикловир, в качестве средства против вируса простого герпеса или вируса Варицелла - Зостер. Глутатион представляет трипептид γ-глутамилцистеинилглицин.
Figure imgf000006_0002
Показано, что S-ацетил глутатион является эффективным агентом против вируса простого герпеса (ВПГ-1) начиная с концентраций 0,35 мг/мл, ацикловир особенно эффективен при концентрациях 0,45 мкг/мл. Комбинация S-ацетил глутатиона и ацикловира приводит к сильному синергетическому действию против ВПГ-1. Например, если использовать S- ацетил глутатион (0,7 мг/мл) с ацикловиром (0,45 мкг/мл), то титр вируса не определяется.
Также показано, что композиции S-ацетил глутатиона (0,35 мг/мл) с тремя различными концентрациями ацикловира показывают заметный синергетический эффект против вируса Варицелла - Зостер, особенно сильный при концентрации ацикловира 0,9 мкг/мл.
В патенте РФ 2104032 (1998 г., МПК А61К 47/22) раскрыт способ усиления эффективности лекарственных средств с помощью германий-органических соединений производных герматрана. Было показано, что германий-органические соединения усиливают действие многих известных противовирусных препаратов, таких как производные адамантана (митадан, ремантадин), аналоги нуклеозидов (ацикловир, ганцикловир, видарабин, идоксуридин), производные тиосемикарбазона (метисадон), фоскарнет. Индекс лечебного действия возрастает в 4 раза при одновременном снижении токсичности препаратов и уменьшении побочных эффектов. Противовирусную активность композиций, состоящих из производных герматрана с фоскарнетом или ацикловиром, проверяли на самцах морских свинок, инфицированных простым вирусом герпеса ВПГ-2. Клинические исследования показали, что применение в композициях производных герматрана совместно с фоскарнетом или ацикловиром усиливает действие последних в 2-4 раза при лечении ВПГ-2.
В патенте ФРГ 10343365 (2005 г., МПК А61К 45/00) заявлены фармацевтические композиции ксантогенатов (дитиокарбонаты) в комбинации с противовирусными препаратами для лечения вирусных заболеваний. Ксантогенаты, особенно трициклодекан-9-ил-ксантогенат (D609), хорошо известны как вещества, обладающие противовирусной и противоопухолевой активностью.
Figure imgf000007_0001
ксантогенат D6og
Применение ксантогенатов в качестве противовирусных препаратов осложняется тем, что требуются высокие концентрации этих агентов для эффективного лечения живых организмов. В патенте демонстрируется, что использование производных ксантогенатов, таких как D609, в сочетании с ацикловиром приводит к усилению противовирусной активности. В присутствии низких неэффективных концентраций ксантогената, активность ацикловира на культуре клеток возрастала в 5 раз. В экспериментах на живых организмах, комбинация D609 и ацикловира обеспечивала выживание всех животных, инфицированных вирусом ВПГ-1.
Таким образом, задачу улучшения противовирусной активности известных препаратов в уровне техники предлагалось решать посредством получения антивирусных композиций, в состав которых входят несколько активных соединений, которые усиливают антивирусное действие препарата.
Авторы данного изобретения предлагают принципиально иной подход для решения задачи улучшения антивирусной активности известных соединений. По изобретению предложены комплексные соединения германия с производными азотистых оснований пуринового ряда, гидроксикарбоновыми кислотами и аминокислотами, при этом указанные комплексные соединения германия представляют собой индивидуальные химические соединения, обладающие улучшенными биофармацевтическими характеристиками, в частности, высокой растворимостью в воде по сравнению с соответствующими производными азотистых оснований, и проявляют более высокую противовирусную активность и иммуностимулирующую активность, чем соответствующие производные азотистых оснований.
Цели изобретения
Целью настоящего изобретения является предложение новых комплексных соединений германия с производными азотистых оснований пуринового ряда (нуклеозидными аналогами), гидроксикарбоновыми кислотами и, необязательно, но предпочтительно, аминокислотами, обладающих противовирусной активностью, в частности, в отношении герпесвирусов.
Другой целью изобретения является предложение новых комплексных соединений германия с производными азотистых оснований пуринового ряда (нуклеозидными аналогами), гидроксикарбоновыми кислотами и, необязательно, но предпочтительно, аминокислотами, обладающих более высокой противовирусной активностью, в частности, в отношении герпесвирусов, по сравнению с противовирусной активностью производных соответствующих азотистых оснований.
Другой целью изобретения является предложение новых комплексных соединений германия с производными азотистых оснований пуринового ряда (нуклеозидными аналогами), гидроксикарбоновыми кислотами и, необязательно, но предпочтительно, аминокислотами, которые имеют хорошую растворимость в воде.
Еще одной целью изобретения является разработка простого способа получения комплексных соединений германия с различными производными азотистых оснований пуринового ряда (нуклеозидными аналогами), различными по природе гидроксикарбоновыми кислотами, и различными по природе аминокислотами, которые устойчивы в твердом состоянии и легко могут быть переведены в водный раствор.
Другой целью изобретения является разработка такого способа получения комплексных соединений германия с производными азотистых оснований пуринового ряда (нуклеозидными аналогами), гидроксикарбоновыми кислотами и, необязательно, но предпочтительно, аминокислотами, который позволяет регулировать соотношение германия, производного азотистого основания пуринового ряда, гидроксикарбоновой кислоты и аминокислоты в комплексном соединении, то есть регулировать состав комплексного соединения.
Еще одной целью изобретения является предложение противовирусного лекарственного средства, содержащего в качестве активного компонента комплексное соединение германия с производными азотистых оснований пуринового ряда (нуклеозидными аналогами), гидроксикарбоновыми кислотами и, необязательно, но предпочтительно, аминокислотами.
Другой целью изобретения является применение комплексных соединений германия с производными азотистых оснований пуринового ряда (нуклеозидными аналогами), гидроксикарбоновыми кислотами и, необязательно, но предпочтительно, аминокислотами для получения лекарственного средства для улучшения иммунитета.
Еще одной целью изобретения является применение комплексных соединений германия с производными азотистых оснований пуринового ряда (нуклеозидными аналогами), гидроксикарбоновыми кислотами и, необязательно, но предпочтительно, аминокислотами для лечения и/или профилактики вирусных заболеваний, в частности, заболеваний, вызванных вирусом герпеса.
Краткое раскрытие изобретения
Заявленные цели достигаются тем, что предложены новые германий- органические комплексные соединения, содержащие производные азотистых оснований пуринового ряда (нуклеозидные аналоги), состав которых описывается следующей структурной формулой:
Gex[AD][CA]y[AA]z (I)
где AD - производное азотистого основания пуринового ряда, обладающее противовирусной активностью;
СА - гидроксикарбоновая кислота;
АА - аминокислота, которая может быть выбрана из различных а-аминокислот, где х = 1-2, у = 2-4, z = 0-2,
при этом все AD в комплексном соединении являются одинаковыми или разными, все СА в комплексном соединении являются одинаковыми или разными,
все АА в комплексном соединении являются одинаковыми или разными.
В качестве производных азотистых оснований пуринового ряда (нуклеозидных аналогов) используют производные аденина и/или гуанина, предпочтительно используют ацикловир, валацикловир, ганцикловир, пенцикловир, видарабин.
В качестве гидроксикарбоновой кислоты предпочительно используют лимонную, молочную и/или яблочную кислоту.
В качестве аминокислоты предпочтительно используют аргинин, глицин, лизин, треонин.
Комплексные соединения германия структурной формулы (I) представляют собой индивидуальные химические соединения, хорошо растворимые в воде, которые могут быть выделены в твердом виде.
Комплексные соединения германия структурной формулы (I), содержащие производные азотистых оснований пуринового ряда, проявляют высокую противовирусную и иммуностимулирующую активность.
Способ получения комплексных соединений германия структурной формулы (1)_включает смешивание диоксида германия с водой для получения водной суспензии диоксида германия, добавление к полученной суспензии диоксида германия смеси гидроксикарбоновой кислоты, производного азотистого основания пуринового ряда, и необязательно, но предпочтительно, аминокислоты, нагревание полученной смеси при температуре 40-100°С в течение 3-14 часов для образования целевого продукта, удаление воды любым известным способом для получения порошкообразного продукта.
В способе по изобретению к водной суспензии диоксида германия может быть добавлена смесь нескольких различных по своей химической природе аминокислот и/или смесь различных по своей химической природе гидроксикарбоновых кислот, и/или смесь различных производных азотистых оснований пуринового ряда. Подробное раскрытие изобретения
Получены новые германий-органические комплексные соединения, содержащие производные азотистых оснований пуринового ряда (нуклеозидные аналоги), состав которых описывается следующей структурной формулой:
Gex[AD][CA]y[AA]z (I)
где AD - производное азотистого основания пуринового ряда, обладающее противовирусной активностью;
СА - гидроксикарбоновая кислота;
АА - аминокислота, выбранная из различных а-аминокислот,
где х = 2, у = 2+4, z = 0+2,
при этом все AD в комплексном соединении являются одинаковыми или разными, все СА в комплексном соединении являются одинаковыми или разными,
все АА в комплексном соединении являются одинаковыми или разными.
В структурной формуле (I) х может принимать значения 1 или 2, у может принимать значения 2, 3 или 4, z может принимать значения 0, 1 или 2, то есть х, у, z являются целыми числами.
В качестве производных азотистых оснований пуринового ряда (AD) используют производные аденина и/или гуанина, которые обладают противовирусной активностью, в частности, в отношении герпесвирусов. Такие производные хорошо известны в предшествующем уровне техники. Примерами таких соединений являются производные гуанина, относящиеся к цикловирам, такие как ацикловир (9-[(2- гидроксиэтокси)метил] гуанин), валацикловир (2-(гуанин-9-илметокси)этиловый эфир L-валина), ганцикловир (9-[(1,3-дигидрокси-2-пропокси)метил]гуанин), пенцикловир (9-[4-гидрокси-3-(гидроксиметил)бутил]гуанин) и др. По изобретению могут быть использованы также известные производные аденина, например, видарабин (9-Р-0-рибофуранозиладенин). В уровне техники такие соединения называют также нуклеозидными аналогами. В настоящей заявке эти термины используются взаимозаменяемо.
Предпочтительно в качестве производных азотистых оснований пуринового ряда (AD) используют производные гуанина, которые обладают противовирусной активностью, в частности, в отношении герпесвирусов.
В качестве гидроксикарбоновых кислот (СА) в способе по изобретению могут быть использованы различные гидроксикарбоновые кислоты, такие как лимонная, молочная, яблочная и другие. Предпочтительно в способе используют лимонную кислоту.
В качестве аминокислот (АА) в способе по изобретению могут быть использованы любые α-аминокислоты, предпочтительными являются аргинин, глицин, лизин, треонин, наиболее предпочтительными являются аргинин и лизин.
Соединения структурной формулы (I) являются индивидуальными химическими соединениями, которые могут быть выделены в твердом состоянии виде аморфного порошка.
Индивидуальные химические соединения формулы (I) представляют собой германий-органические соединения, содержащие в одной молекуле несколько биологически активных составляющих, таких как германий и производное азотистого основания, которое проявляет противовирусную активность. Это обеспечивает предложенным соединениям высокую противовирусную и иммуностимулирующую активность. Наличие в комплексном соединении также гидроксикарбоновой кислоты и аминокислоты обеспечивает соединениям высокую растворимость в воде. Кроме того, аминокислоты и гидроксикарбоновые кислоты увеличивают биологическую активность комплексных соединений формулы (I).
Для получения соединений формулы (I) по изобретению предложен простой способ, содержащий минимальное количество стадий.
Способ по изобретению характеризуется тем, что диоксид германия смешивают с водой для получения водной суспензии. К перемешиваемой водной суспензии диоксида германия добавляют производное азотистого основания, гидроксикарбоновую кислоту и аминокислоту или производное азотистого основания и гидроксикарбоновую кислоту. По способу может быть добавлено не одно, а несколько различных производных азотистого основания, не одна, а несколько соединений различных гидроксикарбоновых кислот, не одна, а несколько различных аминокислот. Смесь перемешивают при 40-100°С в течение 3-14 часов для получения раствора целевого продукта, затем удаляют воду любым известным способом и получают целевой продукт в виде белого аморфного порошка.
В качестве диоксида германия может быть использован диоксид германия как α-модификации, который нерастворим в воде, так и β-модификации, который растворяется в воде. Предпочтительно использовать диоксид германия а- модификации, который не растворяется в воде, и при смешивании с водой образует суспензию диоксида германия в воде.
В качестве производных азотистых оснований пуринового ряда (AD) используют производные аденина или гуанина, которые обладают противовирусной активностью, в частности, в отношении герпесвирусов. Предпочтительно по способу используют производные гуанина, относящиеся к цикловирам, такие как ацикловир (9-[(2-гидроксиэтокси)метил] гуанин), валацикловир (2-(гуанин-9- илметокси)этиловый эфир L-валина), ганцикловир (9-[(1,3-дигидрокси-2- пропокси)метил] гуанин), пенцикловир (9-[4-гидрокси-3-
(гидроксиметил)бутил]гуанин). В другом осуществлении в способе по изобретению используют известные производные аденина, например, видарабин (9-β-ϋ- рибофуранозиладенин).
В качестве гидроксикарбоновых кислот (СА) в способе по изобретению могут быть использованы гидроксикарбоновые кислоты, такие как лимонная, молочная, яблочная и другие. Предпочтительно в способе используют лимонную кислоту.
В качестве аминокислот (АА) в способе по изобретению могут быть использованы любые α-аминокислоты, предпочтительными являются аргинин, глицин, лизин, треонин, наиболее предпочтительными являются аргинин и лизин.
Соотношение германия, производного азотистого основания пуринового ряда, гидроксикарбоновой кислоты и аминокислоты в комплексном соединении германия зависит от количества указанных компонентов, которые добавляют к водной суспензии диоксида германия. Регулируя соотношение между количеством диоксида германия и количеством производного азотистого основания пуринового ряда, гидроксикарбоновой кислоты и аминокислоты, можно получать комплексные соединения с различным соотношением германия, производного азотистого основания пуринового ряда, гидроксикарбоновой кислоты и аминокислоты. При добавлении производного азотистого основания пуринового ряда к водному раствору диоксида германия в стехиометрическом соотношении, образуется комплексное соединение, в котором мольное отношение между производным азотистого основания пуринового ряда и диоксидом германия составляет 1 : 1. Регулируя мольное отношение производного гуанина и диоксида германия, можно регулировать соотношение между германием и производным азотистого основания пуринового ряда в полученном комплексном соединении.
Аналогичным образом можно регулировать в комплексном соединении отношение германия к гидроксикарбоновой кислоте и аминокислоте. При добавлении гидроксикарбоновой кислоты (или аминокислоты) к водному раствору с диоксидом германия в стехиометрическом соотношении, образуется комплексное соединение, в котором мольное отношение германия к гидроксикарбоновой кислоте (или аминокислоте) составляет 1 :1. При добавлении удвоенного количества гидроксикарбоновой кислоты (или аминокислоты) по отношению к стехиометрическому получают комплексное соединение с мольным отношением гидроксикарбоновой кислоты (или аминокислоты) к германию 2:1.
Более детально возможность получения по изобретению комплексных соединений германия с различным соотношением германия, производных азотистых оснований пуринового ряда, гидроксикарбоновых кислот и аминокислот продемонстрирована в примерах осуществления изобретения.
Регулирование состава комплексного соединения германия по изобретению позволяет получать комплексные соединения с различным содержанием производного азотистого основания пуринового ряда. Это является важным преимуществом предложенных комплексных соединений при их использовании в качестве лекарственных средств для лечения вирусных заболеваний, поскольку позволяет получать лекарственные средства с увеличенной или уменьшенной противовирусной активностью.
Температура, при которой проводят реакцию образования целевого комплексного соединения германия с производными азотистых оснований пуринового ряда, гидроксикарбоновыми кислотами и необязательно, но предпочтительно, аминокислотами составляет 40-100°С. Предпочтительной является температура 80-100°С, более предпочтительной является температура 85-100°С.
Время проведения реакции составляет 3-14 часов. Предпочтительно время реакции составляет 5-12 часов, еще более предпочтительно 6-8 часов.
Образование германий-органического комплексного соединения контролируется по полному растворению диоксида германия (в случае использования нерастворимого диоксида германия) и образованию прозрачного раствора. Могут быть использованы любые другие методы контролирования образования продукта, например, основанные на отборе и анализе проб.
Для выделения германий-органического комплексного соединения раствор фильтруют, а затем из раствора удаляют воду любым известным методом. Для этого может быть использован любой из известных методов, например, выпаривание воды, вакуумная дистилляция при нагревании или лиофильная (сублимационная) сушка. Целевые соединения получают в виде аморфного порошка.
Производные азотистого основания пуринового ряда, гидроксикарбоновые кислоты и аминокислоты могут быть добавлены к водной суспензии диоксида германия одновременно или при последовательном введении указанных компонентов. Порядок введения компонентов не оказывает существенного влияния на получаемый целевой продукт - комплекс германия с производными азотистого основания пуринового ряда, гидроксикарбоновыми кислотами и аминокислотами, если таковые добавляют.
Одним вариантом способа является способ, в котором к водной суспензии диоксида германия добавляют гидроксикарбоновую кислоту, нагревают полученную смесь при перемешивании при 80-100°С в течение 6-10 часов до образования прозрачного раствора, затем добавляют аминокислоту и производное азотистого основания пуринового ряда, в частности, гуанина, и продолжают нагревание при 80- 100°С в течение 2-3 часов, раствор фильтруют и удаляют воду для получения комплексного соединения
Другим вариантом способа является способ, в котором к водной суспензии диоксида германия добавляют аминокислоту, нагревают полученную смесь при перемешивании при 80-100°С в течение 3-5 часов до образования прозрачного раствора, затем добавляют гидроксикарбоновую кислоту и производное азотистого основания пуринового ряда, в частности, гуанина, и продолжают нагревание при 80- 100°С в течение 3-5 часов, раствор фильтруют и удаляют воду для получения комплексного соединения в твердом виде.
Еще одним вариантом способа является способ, в котором к водной суспензии диоксида германия добавляют аминокислоту и гидроксикарбоновую кислоту, нагревают полученную смесь при перемешивании при 80-100°С в течение 6-8 часов до образования прозрачного раствора, затем добавляют производное азотистого основания пуринового ряда, в частности, гуанина, и продолжают нагревание при 80- 100°С в течение 2-3 часов, раствор фильтруют и удаляют воду для получения комплексного соединения в твердом виде.
Еще одним вариантом способа является способ, в котором к водной суспензии диоксида германия добавляют смесь аминокислоты, гидроксикарбоновой кислоты и производного азотистого основания пуринового ряда, в частности, гуанина, нагревают полученную смесь при перемешивании при 80-100°С в течение 6-12 часов до образования прозрачного раствора, раствор фильтруют и удаляют воду для получения комплексного соединения в твердом виде.
Еще одним вариантом способа является способ, в котором к водной суспензии диоксида германия добавляют гидроксикарбоновую кислоту, нагревают полученную смесь при перемешивании при 80-100°С в течение 8-9 часов до образования прозрачного раствора. Затем добавляют производное азотистого основания пуринового ряда, в частности, гуанина, и продолжают нагревание при 80-100°С в течение 2-3 часов, раствор фильтруют и удаляют воду для получения комплексного соединения в твердом виде.
Полученный продукт представляет собой белый аморфный порошок, который легко растворяется в воде. Следует отметить, что большинство производных гуанина, как правило, трудно растворимы в воде (за исключением валацикловира). Так растворимость в воде ацикловира составляет 2,5 мг/мл при 37°С, растворимость в воде ганцикловира составляет 4,3 мг/мл при 25°С, растворимость в воде пенцикловира составляет 1,74 мг/мл при 20°С, растворимость в воде валацикловира составляет 174 мг/мл при 25°С. Аналогично, производные аденина обладают ограниченной растворимостью в воде, например, препарат видарабин плохо растворим в воде и используется в виде мази. Полученные по изобретению комплексные соединения германия обладают хорошей растворимостью в воде более 25 мас.% при 20°С, т.е. более 250 мг/мл при 20°С. Высокая растворимость полученных по изобретению комплексных соединений германия позволяет получить и использовать в качестве противовирусного лекарственного средства водные растворы с высокой концентрацией этих соединений без побочных явлений нефротоксичности.
Были изучены ЯМР и ИК-спектры различных комплексных соединений германия с производными азотистого основания пуринового ряда, в частности, гуанина, гидроксикарбоновыми кислотами и аминокислотами, в случае использования таковых, которые были получены в соответствии с изобретением, а также был выполнен элементный анализ этих соединений. Полученные данные свидетельствуют, что комплексные соединения германия имеют общую структурную формулу:
Gex[AD][CA]y[AA]z (I)
где AD - производное азотистого основания пуринового ряда, обладающее противовирусной активностью, СА - гидроксикарбоновая кислота, АА - а- аминокислота, где х = 1-2, у = 2-4, z = 0+2, при этом х, у, z являются целыми числами,
при этом все AD в комплексном соединении являются одинаковыми или разными, все СА в комплексном соединении являются одинаковыми или разными,
все АА в комплексном соединении являются одинаковыми или разными.
Присутствие в германийсодержащих соединениях основания пуринового ряда, а также аминокислоты и гидроксикарбоновой кислоты придает комплексным соединениям высокую биологическую активность и хорошую растворимость в воде, и они могут быть полезны при разработке и приготовлении новых фармацевтических композиций и лекарственных средств для различных медицинских применений. Посредством изменения природы основания пуринового ряда, аминокислоты и/или гидроксикарбоновой кислоты могут быть получены комплексные соединения германия, проявляющие очень высокую биологическую активность, на основе которых могут быть получены высокоэффективные фармацевтические препараты. В качестве активного компонента таких фармацевтических препаратов и лекарственных средств предлагается использовать предложенные по изобретению комплексные соединения германия. Следует ожидать, и как продемонстрировано ниже с соединениями, полученными по примерам 1 и 5, предпочтительно предложенные комплексные соединения германия проявляют тот же вид биологической активности, который проявляют входящие в его состав основания пуринового ряда. Однако комплексное соединение германия может проявлять также и иной вид биологической активности, который не характерен для тех исходных компонентов, которые входят в его состав. Комплексные соединения германия следует использовать в эффективных количествах. При этом фармацевтические композиции и препараты могут содержать также традиционные вспомогательные компоненты, которые хорошо известны из предшествующего уровня техники.
Ниже даны примеры получения комплексных соединений германия с производными азотистого основания пуринового ряда, в частности, производными гуанина и аденина, гидроксикарбоновыми кислотами и аминокислотами, в случае использования последних. Приведенные ниже примеры служат лишь для иллюстрации способа получения предложенных комплексных соединений германия, и не предназначены для ограничения изобретения только этими примерами.
Пример 1
В кругл одонную колбу, снабженную мешалкой и термометром, загружают 3,12 г (0,03 моль) α-диоксида германия и 12,6 г (0,06 моль) моногидрата лимонной кислоты и 200 мл дистиллированной воды. Суспензию перемешивают при нагревании (85-95°С) в течение 8-9 часов до образования прозрачного раствора. Затем добавляют 2,61 г (0,015 моль) аргинина и 3,38 г (0,015 моль) ацикловира и перемешивают при нагревании (85-95°С) в течение 2 часов. Далее раствор охлаждают, фильтруют и удаляют воду на роторном испарителе. Получают 19,5 г (95%) белого аморфного порошка.
Для комплексного соединения германия, полученного по примеру 1, были получены и проанализированы ЯМР и ИК-спектры, а также были получены данные элементного анализа. На фиг. 1. представлен Ή ЯМР спектр в D20 комплексного соединения германия с аргинином, лимонной кислотой и ацикловиром. На фиг. 2 представлен ИК-спектр комплексного соединения германия с аргинином, лимонной кислотой и ацикловиром. Данные элементного анализа полученного по примеру 1 соединения представлены в таблице 1. Далее соединение, полученное по примеру 1, обозначают как WDS-1.
Пример 2
В кругло донную колбу, снабженную мешалкой и термометром, загружают 3,12 г (0,03 моль) α-диоксида германия, 12,6 г (0,06 моль) моногидрата лимонной кислоты,
4.5 г (0,06 моль) глицина, 9,73 г (0,03 моль) валацикловира и 250 мл дистиллированной воды. Суспензию перемешивают при нагревании (85-95°С) в течение 10-12 часов. Образовавшийся прозрачный раствор охлаждают, фильтруют и удаляют воду на роторном испарителе. Получают 27,1 г (94%) белого аморфного порошка. Данные элементного анализа представлены в таблице 1. Далее соединение обозначают как WDS-2.
Пример 3
В круглодонную колбу, снабженную мешалкой и термометром, загружают 3,12 г (0,03 моль) α-диоксида германия, 12,6 г (0,06 моль) моногидрата лимонной кислоты,
7.6 г (0,03 моль) пенцикловира и 250 мл дистиллированной воды. Суспензию перемешивают при нагревании (85-95°С) в течение 7-9 часов до образования прозрачного раствора. Затем добавляют 5,22 г (0,03 моль) аргинина и перемешивают при нагревании (85-95°С) в течение 2 часов. Далее раствор охлаждают, фильтруют и удаляют воду на роторном испарителе. Получают 26 г (95%) белого аморфного порошка. Данные элементного анализа представлены в таблице 1. Далее соединение обозначают как WDS-3. Пример 4
В круглодонную колбу, снабженную мешалкой и термометром, загружают 3,12 г (0,03 моль) α-диоксида германия, 7,14 г (0,06 моль) треонина и 250 мл дистиллированной воды. Суспензию перемешивают при нагревании (85-95°С) в течение 5-7 часов. Затем добавляют 7,65 г (0,03 моль) ганцикловира, 8,04 г (0,06 моль) яблочной кислоты и смесь перемешивают при нагревании (85-95°С) в течение 3 часов. Далее раствор охлаждают, фильтруют и удаляют воду на роторном испарителе. Получают 23,1 г (93%) белого аморфного порошка. Данные элементного анализа представлены в таблице 1. Далее соединение обозначают как WDS-4.
Пример 5
В круглодонную колбу, снабженную мешалкой и термометром, загружают 3,12 г (0,03 моль) α-диоксида германия, 2,46 г (0,015 моль) моногидрата лизина, 12,6 г (0,06 моль) моногидрата лимонной кислоты и 200 мл дистиллированной воды. Суспензию перемешивают при нагревании (85-95°С) в течение 6-7 часов до образования прозрачного раствора. Затем добавляют 3,38 г (0,015 моль) ацикловира и перемешивают при нагревании (85-95°С) в течение 2 часов. Далее раствор охлаждают, фильтруют и удаляют воду на роторном испарителе. Получают 19,2 г (94%) белого аморфного порошка.
ЯМР и ИК-спектры полученного по примеру 5 соединения приведены на фиг. 3 и 4, соответственно. Данные элементного анализа представлены в таблице 1. Далее соединение обозначают как WDS-5.
Пример 6
В круглодонную колбу, снабженную мешалкой и термометром, загружают 3,12 г (0,03 моль) α-диоксида германия и 12,6 г (0,06 моль) моногидрата лимонной кислоты и 200 мл дистиллированной воды. Суспензию перемешивают при нагревании (85-95°С) в течение 8-9 часов до образования прозрачного раствора. Затем добавляют 3,38 г (0,015 моль) ацикловира и перемешивают при нагревании (85-95°С) в течение 2 часов. Далее раствор охлаждают, фильтруют и удаляют воду лиофильной сушкой. Получают 16,9 г (94%) белого аморфного порошка. Данные элементного анализа представлены в таблице 1. Далее соединение обозначают как WDS-6.
Пример 7
В круглодонную колбу, снабженную мешалкой и термометром, загружают 3,12 г (0,03 моль) α-диоксида германия и 12,6 г (0,06 моль) моногидрата лимонной кислоты и 200 мл дистиллированной воды. Суспензию перемешивают при нагревании (85-95°С) в течение 8-9 часов до образования прозрачного раствора. Затем добавляют 8,55 г (0,03 моль) моногидрата видарабина и перемешивают при нагревании (85-95°С) в течение 2 часов. Далее раствор охлаждают, фильтруют и удаляют воду лиофильной сушкой. Получают 20,5 г (95%) белого аморфного порошка. Данные элементного анализа представлены в таблице 1. Далее соединение обозначают как WDS-7.
Таблица 1. Данные элементного анализа полученных композиций.
Figure imgf000021_0001
Arg - аргинин, Gly - глицин, Lys - лизин, Thr - треонин, Citr - лимонная кислота, Mai - яблочная кислота, Acv - ацикловир, Vcv - валацикловир, Gcv - ганцикловир, Pcv - пенцикловир, Vdrb - видарабин
Острая токсичность
Определение острой токсичности новых соединений, полученных, в частности, согласно примерам 1, 5 и 6 проводили на нелинейных белых мышах-самцах массой 18-20 г при однократном внутрижелудочном (в/ж) введении в дозах 1000, 2000, 3000, 4000 и 5000 мг/кг 20% водного раствора по 0,1 ; 0,2; 0,3; 0,4; и 0,5 мл на 20 г массы мыши, соответственно. Введение каждого из соединений проводили в отдельности. В течение 14 дней после введения каждого из соединений не обнаружено признаков интоксикации, отставания прироста массы тела и гибели животных. В интервале исследованных доз не наблюдалось какого-либо нарушения движений животных, рефлексов и поведения. Анатомические исследования не обнаружили изменений в легких, почках, селезенке и других органах. Для мышей величина LD50 для исследованных соединений составила более 5000 мг/кг, что позволяет отнести их к IV классу опасности в соответствии с классификацией опасности веществ по степени воздействия на организм по ГОСТу 12.1.007-76 или к V классу токсичности (практически нетоксичным веществам) по Hodge, Sterner (1943).
В экспериментах также не было выявлено кожно-раздражающего, кожно- резорбтивного и сенсибилизирующего действий исследуемых веществ.
Исследуемые вещества не накапливаются в организме и не обладают кумулятивными свойствами. При внутрижелудочном введении нелинейным мышам в течение 14 дней в дозе 1000 мг/кг не было отмечено гибели животных, изменений массы тела, коэффициентов массы паренхиматозных органов (печени, почек, селезенки) у животных опытной группы по сравнению с показателями у животных контрольной группы.
Биофармацевтические характеристики
Растворимость лекарственных средств в биожидкостях ЖКТ (желудочный сок, кишечный сок) является важным биофармацевтическим свойством. Был изучен ряд биофармацевтических характеристик некоторых полученных новых соединений, в частности WDS-1 и WDS-5 в сравнении с ацикловиром. Испытание проводили согласно требованиям нормативной документации Европейского Медицинского Агентства (Guidance on the Investigation of Bioequivalence. European Medicines Agency (EMA). Committee for Medicinal Products of Human Use (CHMP), 2010).
Для этого изучали водную растворимость указанных соединений при различных значениях рН, соответствующих физиологическим жидкостям ЖКТ (желудочный сок - рН 1,2, сок двенадцатиперстной кишки - рН 4,4, сок тонкого кишечника - pH 6,8).
Одной из характеристик биофармацевтической растворимости, позволяющей описать лекарственное вещество (ЛВ) как вещество с «высокой» или «низкой» растворимостью, является отношение дозы к растворимости (Dose/Solubility Ratio, D/S). Отношение дозы к растворимости определяют по формуле: максимальная доза (D) (мг) / водная растворимость (S) (мг/мл). Если значение D/S < 250 мл, то ЛВ характеризуется "высокой" растворимостью в соответствующем водном растворе.
Важно отметить, что биофармацевтическая растворимость не является постоянной величиной для конкретного лекарственного вещества (ЛВ), а зависит от максимальной зарегистрированной дозировки ЛС немедленного высвобождения системного действия. В данных экспериментах отношение дозы к растворимости рассчитывалось на основании максимальной дозировки ацикловира, зарегистрированной к медицинскому применению в РФ в лекарственной форме - таблетки (800 мг).
Еще одним биофармацевтическим показателем является растворимость в биорелевантных средах. Это среды растворения, максимально приближенные к внутренним жидкостям человеческого организма (кишечный, желудочный сок) по химическому составу и по физико-химическим свойствам (рН, осмоляльность, буферная ёмкость, поверхностное натяжение). Моделирование физиологических условий достигается путем использования в составе данных сред поверхностно- активных веществ - лецитина и натрия таурохолата. Существует 2 основных вида биорелевантых сред - искусственный кишечный сок натощак (Fasted State Simulated Intestinal Fluid (FaSSIF)) и после еды (Fed State Simulated Intestinal Fluid (FeSSIF)). Различия в растворимости вещества в данных средах могут приниматься во внимание при оптимизации режима дозирования (натощак или после еды). Если максимальная дозировка лекарственного вещества полностью растворяется в 250 мл каждой из данных сред, можно говорить о его «высокой» биорелевантной растворимости.
Критерием, позволяющим оценить всасывание растворенного вещества через мембрану тонкого кишечника вещества, является проницаемость - доля вещества, проникшего через стенку кишечника. Физико-химическим свойством молекулы, вносящим наибольший вклад в ее проницаемость, является липофильность. Мерой липофильности, используемой при косвенной оценке кишечной проницаемости, является коэффициент распределения октанол-вода (partition coefficient) - логарифм отношения концентраций неионизированной субстанции в системе двух несмешивающихся жидкостей - н- октанол и вода (log Р). Косвенным критерием «высокой» (более 90%) кишечной проницаемости является следующий критерий: если коэффициент распределения log Р превышает таковой для стандартной субстанции - метопролола (для которого log Р = 1,72), то кишечная проницаемость считается высокой. Полученные в экспериментах результаты представлены в таблице 2
Таблица 2. Биофармацевтические характеристики соединений WDS-1 и WDS-
5 в сравнении с ацикловиром
Figure imgf000024_0001
для исследуемых субстанций, 4,5 - для ацикловира.
Таким образом, биофармацевтическую растворимость полученных по изобретению комплексных соединений германия можно охарактеризовать как «высокую» во всем физиологическом диапазоне рН, соответствующих значениям рН в желудке, двенадцатиперстной кишке или начальном отделе тонкого кишечника. Следует отметить, что для комплексных соединений германия по изобретению величина растворимости не только количественно, но и качественно отличается от растворимости ацикловира. Так величина растворимости комплексных соединений по изобретению не менее чем в 10 раз превышает таковую у ацикловира, кроме того, растворимость комплексных соединений германия по изобретению является «высокой» во всем изученном диапазоне рН, тогда как растворимость ацикловира при рН 4,4 - 4,5 и 6,8 является "низкой".
Биорелевантная растворимость комплексных соединений германия по изобретению в обоих биорелевантных средах FaSSIF и FeSSIF является «высокой», причем в 250 мл растворяется более 10 максимальных дозировок субстанции. Поскольку растворимость в обоих биорелевантных средах является высокой, то процесс приема пищи не будет являться лимитирующим при растворении субстанции в средах ЖКТ, а при оптимизации режима дозирования следует учитывать иные факторы (например, имеется ли раздражающее действие на стенку ЖКТ, разрушение соединения при приеме пищи и т.д.).
Коэффициент распределения log Р исследованных комплексных соединений германия по изобретению ниже такового у метопролола и соизмерим по величине с коэффициентом распределения log Р для ацикловира. Таким образом, кишечную проницаемость этих соединений можно охарактеризовать как «низкую». В то же время, с учетом высокой биофармацевтической растворимости этих соединений, которая обсуждалась выше и продемонстрирована в таблице 2, следует ожидать, что биодоступность комплексных соединений германия по изобретению будет более высокой, чем биодоступность ацикловира. Однако возможно, что лимитирующей стадией попадания соединений по изобретению в системный кровоток будет процесс всасывания через стенку кишечника.
В целом, при сходной с ацикловиром липофильности комплексные соединения по изобретению имеют значительно большую биорелевантную и биофармацевтическую растворимость, что может свидетельствовать об их более высокой биодоступности.
Противовирусная активность
(А) Изучение противовирусной активности комплексных соединений германия по изобретению в экспериментах in vitro.
Противовирусную активность новых соединений германия по изобретению, в частности WDS-1 и WDS-5, изучали в экспериментах in vitro на культуре клеток почек зеленых мартышек (VERO) в соответствии с общепринятыми методиками (Гуськова ТА., Николаева И.С., Петере В.В. Методические указания по изучению противовирусной активности фармакологических веществ/УРуководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - M. - Минздрав РФ. ЗАО ИИА Ремедиум. - 2000. - С.274-280.
Cotarelo М., Catalan P., Sanchez-Carrillo С, Menasalvas A., Cercenado Е. et al. Cytopathic effect inhibition assay for determining the in vitro susceptibility of herpes simplex virus to antiviral agents. J. Antimicrob. Chemother., 1999. - V.44. - P.705-708.
Kruppenbacher J. P., Klass R. and Eggers H. J. A rapid and reliable assay for testing acyclovir sensitivity of clinical herpes simplex virus isolates independent of virus dose and reading time. Antiviral Res., 1994. - V.23. - P. 1 1-22.
Flint, S.J.; Enquist, W., Racaniello, V.R., and Skalka, A.M. (2009). "Virological Methods". Principles of Virology. ASM Press).
В качестве образцов сравнения использовали ацикловир и валацикловир, соответственно.
Для изучения противовирусной активности в качестве тест-вируса использовали штамм вируса простого герпеса (ВПГ) 1-го антигенного типа, высокоустойчивый к ацикловиру (штамм «L2/R»).
Критериями оценки противовирусной активности являлись: способность предотвращать развитие индуцируемого вирусами цитопатического действия и ингибировать репродукцию вирусов в культуре клеток. Исследуемые образцы вносили в составе питательной среды через 1 час после инфицирования культуры клеток определенной дозой вируса (терапевтическая схема). Оценку противовирусной активности образцов и вирус-индуцированного цитопатического действия в культуре клеток проводили ежедневно методом световой микроскопии по степени изменения морфологии клеточного монослоя. Учет результатов осуществляли на 4-е сутки после контакта клеток с инфекционным материалом, после появления выраженного (100%) цитопатического действия в контрольных пробах (позитивный контроль). Наличие противовирусной активности у образцов германий-органических соединений по изобретению оценивали по разнице титров вируса в опыте по сравнению с контролем. Титр вируса определяли по Риду и Менчу (Reed, L.J.; Muench, Н. (1938). "A simple method of estimating fifty percent endpoints". The American Journal of Hygiene 27: 493- 497). Если разность в титрах составляла <1,5 lg тканевой цигопатогенной дозы, вызывающей гибель 50% клеток монослоя ТЦД50 (TCD50 - tissue culture dose causes cytopathology in 50% of cultured cells), то соединение считали обладающим низкой противовирусной активностью, при разности равной 1,5 - 2,0 lg ТЦД50 соединение считали обладающим умеренной противовирусной активностью, при разности > 2,0 lg ТЦД50 соединение имело выраженную ингибирующую активность в отношении ВПГ. В данном эксперименте образец ацикловира в диапазоне концентраций от 500 до 100 мкг/мл достоверно снижал инфекционную активность вируса на величину в диапазоне от 2,0 lg до 1,0 lg. Образец валацикловира в концентрации 500 мкг/мл и 250 мкг/мл достоверно снижал инфекционную активность вируса ВПГ-1 "L2 R" на 1,5 lg. Образец комплексного соединения по изобретению WDS-1 в диапазоне концентраций, эквивалентной по ацикловиру от 400 до 160 мкг/мл, достоверно снижал инфекционную активность вируса ВПГ-1 "L2/R" в интервале 3,25-1,5 lg ТЦД50. Образец комплексного соединения по изобретению WDS-5 в диапазоне концентраций, эквивалентной по ацикловиру от 400 до 160 мкг/мл, достоверно снижал инфекционную активность вируса ВПГ-1 "L2/R" в интервале 1,75-1,0 lg тид50.
(В) Изучение противовирусной активности комплексных соединений германия по изобретению в экспериментах in vivo.
(а) Изучение терапевтической противовирусной эффективности соединений по изобретению.
Для оценки терапевтической эффективности соединения по изобретению WDS-1 , полученного с использованием ацикловира, в in vivo эксперименте была использована модель герпетического офтальмогерпеса (кератита) кроликов (Kaufman Н.Е., Martola E.L., Dohlman C.H. The use of 5-iodo-2 -deoxyuridine (IDU) in the treatment of herpes simplex keratitis. Arch, Ophthalmol 1962; 68:235-239). Животных заражали с помощью пипетки на предварительно скарифицированную роговицу (с последующим втиранием) культуральной жидкостью, содержащую ВПГ-1 в дозе 10 ТЦИД50 (тканевых цитопатогенных инфекционных доз, вызывающее 50% поражение клеточного монослоя (TCID50 - 50% tissue culture infectious dose). Лечение зараженных ВПГ кроликов начинали через 48 часов после инфицирования. Препарат вводили per os 6 раз в сутки в концентрации 10 мг/мл ежедневно в течение 8 дней.
Применение соединения по изобретению WDS-1 показало выраженное положительное лечебное воздействие и приводило к статистически достоверному уменьшению выраженности клинической картины офтальмогерпеса, снижению длительности заболевания, предотвращению развития осложнения герпесвирусной инфекции глаз менигоэнцефалитом по сравнению с аналогичными показателями в контрольной группе.
На фиг. 5 представлена динамика течения офтальмогерпеса у кроликов. Индекс лечебного действия соединения WDS-1 составил 42,9%. В группе кроликов, получавших соединение WDS-1, уже на 2-е сутки после начала лечения отмечали снижение тяжести воспалительного процесса, приводящее к быстрому снижению выраженности клинических проявлений. Наиболее быстро препарат проявляет активность в случае лечения эпителиальных кератитов. К 13-м суткам после инфицирования наблюдалось затихание клинических проявлений. Выживаемость животных в экспериментальной группе составила 100% на фоне хорошей переносимости в сравнении с 66,7% в контроле.
При использовании соединения WDS-1 выделение вируса из смывов с глаз отмечалось у животных до 9-го дня после инфицирования, что было на 3 дня меньше, чем в группе контроля (таблица 3).
Таблица 3. Влияние соединения WDS-1 на репродукцию ВПГ-1 в образцах смывов с глаз, полученных у кроликов с офтальмогерпесом.
Figure imgf000028_0001
Как видно из таблицы 3, показатели титров вируса, выделенного у животных, получавших соединения WDS-1, на 5-е сутки после инфицирования были достоверно ниже титров вируса, выделенного у животных, получавших плацебо, и составили 1,25 lg ТЦД5о/0,1 мл и 4,0 lg ТЦЦю/ОД мл соответственно. Высокие титры вируса у контрольных животных свидетельствуют о продолжении активной репродукции вируса, в том числе и в эпителии роговицы.
Результаты изучения влияния исследуемого вещества на частоту и уровень репродукции ВПГ-1 у животных с выделением вируса свидетельствуют о наличии у соединения WDS-1 специфического противовирусного действия.
(Ь) Изучение иммуностимулирующего действия соединений по изобретению.
Одновременно с определением влияния соединения по изобретению WDS-1 на течение экспериментальной герпетической инфекции глаз у кроликов нами проведено изучение у последних продукции специфических вируснейтражзуюших антител (ВА) в реакции нейтрализации in vitro. До начала проведения эксперимента вируснейтрализующие антитела отсутствовали у всех животных. Через 14 дней после инфицирования, применение нового вещества у инфицированных животных приводило к достоверному увеличению индукции вируснейтрализующих антител (ВА). Так, у животных контрольной группы индекс нейтрализации (ИН), отражающий содержание вируснейтрализующих антител (В А) в сыворотке крови, был равен 2,0 lg ТЦД50, в то время как у инфицированных животных на фоне применения WDS-1 составил 3,5 lg ТЦД50. Похожая тенденция наблюдалась и через 21 день наблюдений.
Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют о том, что комплексные соединения германия по изобретению обладают комбинированным механизмом противовирусного действия. Они не только проявляют ингибирующее действие на герпесвирусы, в том числе на ацикловир-устойчивые штаммы (в частности ВПГ-1 «L2/R»), но также одновременно стимулируют формирование и поддержание в течение длительного периода времени специфического гуморального иммунитета.
Комплексные соединения германия по изобретению могут быть использованы для лечения и профилактики различных инфекций, вызываемых, в частности, герпесвирусами. Кроме того, комплексные соединения германия по изобретению могут быть использованы в качестве иммуностимулирующих средств. Вследствие комбинированного механизма действия предложенных по изобретению соединений лекарственные средства на их основе должны быть эффективны для лечения и профилактики лиц с ослабленным иммунитетом, например, больных СПИДом, а также онкологических больных и при трансплантации органов.
Полученные соединения нетоксичны и обладают хорошими биофармацевтическими характеристиками, что позволяет разработать на их основе широкий спектр лекарственных средств, содержащих в качестве активного компонента предложенные по изобретению комплексные соединения германия в эффективных дозах. Лекарственные средства по изобретению могут быть выполнены в виде различных лекарственных форм: твердых (капсулы, таблетки), жидких (растворы для инъекций и приема вовнутрь, глазные капли) и мягкие (мази, гели, суппозитории) и др. и могут содержать в качестве дополнительных компонентов фармацевтически приемлемые носители и другие обычно используемые ингредиенты.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Комплексные соединения германия, имеющие общую структурную формулу (I):
Gex[AD][CA]y[AA]z (I)
где AD - производное азотистого основания пуринового ряда, обладающее противовирусной активностью;
СА - гидроксикарбоновая кислота;
АА - аминокислота, выбранная из а-аминокислот,
где х = 1-5-2, у = 2 4, z = 0+2,
при этом все AD в комплексном соединении являются одинаковыми или разными, все СА в комплексном соединении являются одинаковыми или разными,
все АА в комплексном соединении являются одинаковыми или разными.
2. Комплексные соединения по п. 1, где AD является производным гуанина или аденина.
3. Комплексные соединения по п. 2, где производное гуанина выбрано из группы: ацикловир (9- [(2-гидроксиэтокси)метил] гуанин), валацикловир (2-(гуанин-9- илметокси)этиловый эфир L-валина), ганцикловир (9-[(1,3-дигидрокси-2- пропокси)метил] гуанин), пенцикловир (9-[4-гидрокси-3- (гидроксиметил)бутил]гуанин) или их смеси.
4. Комплексные соединения по п. 2, где в качестве производного аденина выбран видарабин (9-Р-0-рибофуранозиладенин).
5. Комплексные соединения по п. 1 , где аминокислоты АА выбраны из группы: аргинин, глицин, лизин, треонин или их смеси.
6. Комплексные соединения по п. 1, где гидроксикарбоновые кислоты СА выбраны из группы: лимонная кислота, молочная кислота, яблочная кислота или их смеси.
7. Способ получения комплексных соединений германия по пп. 1-6, включающий следующие стадии:
(a) смешивание диоксида германия с водой для получения водного раствора или водной суспензии;
(b) добавление к указанному водному раствору или водной суспензии
0) по крайней мере одного соединения, являющегося производным азотистого основания пуринового ряда, обладающего противовирусной активностью, по крайней мере одной гидрокси арбоновой кислоты и по крайней мере одной аминокислоты
или
(ii) по крайней мере одного соединения, являющегося производным азотистого основания пуринового ряда, обладающего противовирусной активностью, и по крайней мере одной гидроксикарбоновой кислоты,
при этом указанные компоненты добавляют в любом порядке;
(c) нагревание полученной смеси при перемешивании при температуре 40- 100°С в течение 3-14 часов;
(d) фильтрование полученного раствора;
(e) удаление воды из раствора с получением комплексного соединения.
8. Способ по пункту 7, в котором нагревание проводят при температуре 80-100°С, в течение 5-12 часов.
9. Способ по пункту 8, в котором нагревание проводят при температуре 85-100°С в течение 6-8 часов,
10. Способ по пункту 7, в котором нагревание при перемешивании проводят до образования прозрачного раствора.
11. Способ по пункту 7, в котором в качестве производного азотистого основания пуринового ряда, обладающего противовирусной активностью, используют производное гуанина и/или аденина.
12. Способ по п. 11, в котором в качестве производного гуанина используют соединение, выбранное из группы: ацикловир (9-[(2- гидроксиэтокси)метил]гуанин), валацикловир (2-(гуанин-9-илметокси)этиловый эфир L-валина), ганцикловир (9-[(1,3-дигидрокси-2-пропокси)метил]гуанин), пенцикловир (9-[4-гидрокси-3-(гидроксиметил)бутил]гуанин) или их смеси.
13. Способ по п. 11, в котором в качестве производного аденина используют видарабин (9-р-В-рибофуранозиладенин).
14. Способ по п. 7, в котором в качестве аминокислоты используют аргинин, глицин, лизин, треонин или их смеси.
15. Способ по п. 7, в котором в качестве гидроксикарбоновой кислоты используют лимонную кислоту, молочную кислоту, яблочную кислоту или их смеси.
16. Лекарственное средство, обладающее противовирусной активностью, содержащее в качестве активного компонента комплексное соединение германия по одному из пунктов 1-6.
17. Лекарственное средство по п. 16, обладающее активностью против герпесвирусов, преимущественно против вирусов герпеса 1 и 2 типов.
18. Иммуностимулирующее средство, содержащее в качестве активного компонента комплексное соединение германия по одному из пунктов 1-6.
PCT/RU2012/000897 2012-05-16 2012-11-01 Комплексные соединения германия, способы их получения и лекарственные средства WO2013172732A1 (ru)

Priority Applications (12)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020147035216A KR101717280B1 (ko) 2012-05-16 2012-11-01 게르마늄의 착체 화합물, 이를 제조하는 방법, 및 약물
JP2015512600A JP5993088B2 (ja) 2012-05-16 2012-11-01 ゲルマニウムの錯化合物、その生産方法、及び薬物
CN201280073187.7A CN104302651B (zh) 2012-05-16 2012-11-01 锗的配位化合物、其生产方法和药物
PL12876796T PL2851368T3 (pl) 2012-05-16 2012-11-01 Związki kompleksowe germanu, sposoby ich wytwarzania i leki
EP12876796.9A EP2851368B1 (en) 2012-05-16 2012-11-01 Complex compounds of germanium, methods for producing same, and drugs
CA2873390A CA2873390C (en) 2012-05-16 2012-11-01 Complex compounds of germanium, methods for producing same, and drugs
AU2012380376A AU2012380376B2 (en) 2012-05-16 2012-11-01 Complex compounds of germanium, methods for producing same, and drugs
IN9234DEN2014 IN2014DN09234A (ru) 2012-05-16 2012-11-01
BR112014027919A BR112014027919B1 (pt) 2012-05-16 2012-11-01 compostos complexos de germânio, métodos de produção dos mesmos e medicamentos.
US14/400,081 US9745337B2 (en) 2012-05-16 2012-11-01 Complex compounds of germanium, methods for producing same, and drugs
ES12876796T ES2710915T3 (es) 2012-05-16 2012-11-01 Compuestos complejos de germanio, métodos para la producción de los mismos y fármacos
DK12876796.9T DK2851368T3 (en) 2012-05-16 2012-11-01 COMPLEX COMPOUNDS OF GERMANIUM, PROCEDURES FOR PRODUCING THEREOF, AND PHARMACEUTICALS

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2012120329 2012-05-16
RU2012120329/04A RU2487878C1 (ru) 2012-05-16 2012-05-16 Комплексные соединения германия с производными азотистых оснований пуринового ряда, способы их получения и содержащие их лекарственные средства

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2013172732A1 true WO2013172732A1 (ru) 2013-11-21

Family

ID=48791166

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2012/000897 WO2013172732A1 (ru) 2012-05-16 2012-11-01 Комплексные соединения германия, способы их получения и лекарственные средства

Country Status (16)

Country Link
US (1) US9745337B2 (ru)
EP (1) EP2851368B1 (ru)
JP (1) JP5993088B2 (ru)
KR (1) KR101717280B1 (ru)
CN (1) CN104302651B (ru)
AU (1) AU2012380376B2 (ru)
BR (1) BR112014027919B1 (ru)
CA (1) CA2873390C (ru)
DK (1) DK2851368T3 (ru)
ES (1) ES2710915T3 (ru)
IN (1) IN2014DN09234A (ru)
PL (1) PL2851368T3 (ru)
PT (1) PT2851368T (ru)
RU (1) RU2487878C1 (ru)
TR (1) TR201901561T4 (ru)
WO (1) WO2013172732A1 (ru)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2626954C2 (ru) * 2015-11-11 2017-08-02 Общество С Ограниченной Ответственностью "Вдс Фарма" Комплексные соединения германия с аминокислотами и липоевой кислотой
RU2752934C1 (ru) * 2020-10-16 2021-08-11 Александр Дмитриевич Исаев Комплексные соединения германия с ациклическими полиолами и способ их получения
CN114133398B (zh) * 2021-12-31 2022-11-22 中南民族大学 氨基酸取代的阿昔洛韦类三环核苷衍生物及其合成方法和应用

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3674823A (en) * 1969-04-02 1972-07-04 Daiichi Yakuhin Sangyo Kk Compound of germanic acid and cysteine
DE3212817A1 (de) * 1982-04-06 1983-10-13 Sanum-Kehlbeck GmbH & Co KG, 2812 Hoya Pharmazeutisch wirksame organische germaniumverbindungen und verfahren zu deren herstellung
EP0477871A2 (en) 1990-09-28 1992-04-01 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Antiviral composition, containing guanine derivatives
RU2104032C1 (ru) 1997-03-11 1998-02-10 Общество с ограниченной ответственностью "Снежный барс" Способ усиления лечебного эффекта лекарственных средств
US6448227B1 (en) 1999-02-22 2002-09-10 Gernot Treusch Therapeutically effective substance mixture
RU2233286C2 (ru) * 1998-08-17 2004-07-27 Евгений Владимирович Соловьев Биохимические комплексы германия с высокой терапевтической активностью и широким спектром использования
RU2240792C2 (ru) 2002-07-30 2004-11-27 Государственное учреждение Научно-исследовательский институт вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН Комбинации на основе нетропсина или его бис-производного, обладающие антигерпетической активностью
DE10343365A1 (de) 2003-09-17 2005-04-14 Biosphings Ag Pharmazeutische Formulierungen von Xanthogenaten und Hemmstoffen der viralen Nukleinsäurereplikation

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3616208A (en) * 1967-09-29 1971-10-26 Parke Davis & Co Fermentation process for 9-(beta-d-arabinofuranosyl)adenine
JPS4924213A (ru) 1972-06-19 1974-03-04
CN1154359A (zh) 1996-01-12 1997-07-16 常达正 氨基酸锗的制备方法及其应用
CA2264654A1 (en) 1996-09-05 1998-03-12 Primamedic Ltd. 1,3-dicarboxylic germanium complex and its therapeutic use
RU2233280C1 (ru) 2003-03-25 2004-07-27 Научно-исследовательский институт физической и органической химии Ростовского государственного университета СОЛИ-10-ω-АРИЛОКСИАЛКИЛ-2,3,4,10-ТЕТРАГИДРОПИРИМИДО[1,2-A]БЕНЗИМИДАЗОЛА, ОБЛАДАЮЩИЕ МЕСТНОАНЕСТЕЗИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ
RU2476436C1 (ru) * 2012-01-25 2013-02-27 Общество С Ограниченной Ответственностью "Вдс Фарма" Комплексные соединения германия с аминокислотами и карбоновыми кислотами

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3674823A (en) * 1969-04-02 1972-07-04 Daiichi Yakuhin Sangyo Kk Compound of germanic acid and cysteine
DE3212817A1 (de) * 1982-04-06 1983-10-13 Sanum-Kehlbeck GmbH & Co KG, 2812 Hoya Pharmazeutisch wirksame organische germaniumverbindungen und verfahren zu deren herstellung
EP0477871A2 (en) 1990-09-28 1992-04-01 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Antiviral composition, containing guanine derivatives
RU2104032C1 (ru) 1997-03-11 1998-02-10 Общество с ограниченной ответственностью "Снежный барс" Способ усиления лечебного эффекта лекарственных средств
RU2233286C2 (ru) * 1998-08-17 2004-07-27 Евгений Владимирович Соловьев Биохимические комплексы германия с высокой терапевтической активностью и широким спектром использования
US6448227B1 (en) 1999-02-22 2002-09-10 Gernot Treusch Therapeutically effective substance mixture
RU2240792C2 (ru) 2002-07-30 2004-11-27 Государственное учреждение Научно-исследовательский институт вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН Комбинации на основе нетропсина или его бис-производного, обладающие антигерпетической активностью
DE10343365A1 (de) 2003-09-17 2005-04-14 Biosphings Ag Pharmazeutische Formulierungen von Xanthogenaten und Hemmstoffen der viralen Nukleinsäurereplikation

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
COTARELO, M.; CATALAN, P.; SANCHEZ-CARRILLO, C.; MENASALVAS, A.; CERCENADO, E. ET AL.: "Cytopathic effect inhibition assay for determining the in vitro susceptibility of herpes simplex virus to antiviral agents", J. ANTIMICROB. CHEMOTHER., vol. 44, 1999, pages 705 - 708
FLINT, S.J.; ENQUIST, W.; RACANIELLO, V.R.; SKALKA, A.M.: "Principles of Virology", 2009, ASM PRESS, article "Virological Methods"
GUS'KOVA, T.A.; NIKOLAEVA, I.S.; PETERS, V.V.: "The Manual on the Experimental (Preclinical) Study of New Pharmacological Agents", 2000, article "Methodological Guidance to Study Antiviral Activity of Pharmacological Agents", pages: 274 - 280
KAUFINAN, H.E.; MARTOLA, E.L.; DOHLMAN, C.H.: "The use of 5-iodo-2-deoxyuridine (IDU) in the treatment of herpes simplex keratitis", ARCH. OPHTHALMOL., vol. 68, 1962, pages 235 - 239
KRUPPENBACHER, J. P.; KLASS, R.; EGGERS, H. J.: "A rapid and reliable assay for testing acyclovir sensitivity of clinical herpes simplex virus isolates independent of virus dose and reading time", ANTIVIRAL RES., vol. 23, 1994, pages 11 - 22, XP023702739, DOI: doi:10.1016/0166-3542(94)90029-9
MASON, W.J.; NICKOLS H.H.: "Crystalluria from acyclovir use", N. ENGL. J. MED., vol. 358, 2008, pages EL4
REED, L.J.; MUENCH, H.: "A simple method of estimating fifty percent endpoints", THE AMERICAN JOURNAL OF HYGIENE, vol. 27, 1938, pages 493 - 497

Also Published As

Publication number Publication date
EP2851368A1 (en) 2015-03-25
IN2014DN09234A (ru) 2015-07-10
JP2015518823A (ja) 2015-07-06
EP2851368B1 (en) 2019-01-02
CN104302651A (zh) 2015-01-21
US9745337B2 (en) 2017-08-29
EP2851368A4 (en) 2016-02-10
PL2851368T3 (pl) 2019-06-28
CN104302651B (zh) 2017-04-12
RU2487878C1 (ru) 2013-07-20
ES2710915T3 (es) 2019-04-29
BR112014027919A2 (pt) 2017-06-27
JP5993088B2 (ja) 2016-09-14
US20150126726A1 (en) 2015-05-07
PT2851368T (pt) 2019-02-11
AU2012380376B2 (en) 2015-10-01
DK2851368T3 (en) 2019-02-25
BR112014027919B1 (pt) 2020-02-04
KR101717280B1 (ko) 2017-03-17
AU2012380376A1 (en) 2014-12-04
TR201901561T4 (tr) 2019-02-21
KR20150011386A (ko) 2015-01-30
CA2873390A1 (en) 2013-11-21
CA2873390C (en) 2017-10-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Griffith et al. Relation of arginine-lysine antagonism to herpes simplex growth in tissue culture
CN103232490B (zh) 具有抑制hiv-1/hbv病毒复制活性的核苷类化合物、制备方法及抗病毒方面的应用
JP4782365B2 (ja) ウイルス感染症と癌細胞を二重ターゲッティングする組成物及び方法
JPH031310B2 (ru)
JPH031309B2 (ru)
CN101370783B (zh) 9-氧代吖啶-10-乙酸和1-烷基氨基-1-脱氧多羟基化合物的盐和混合物、包含其的药物组合物以及治疗方法
RU2487878C1 (ru) Комплексные соединения германия с производными азотистых оснований пуринового ряда, способы их получения и содержащие их лекарственные средства
CN103347849B (zh) 富勒烯с60的均聚氨基酸和杂多氨基酸衍生物、其制备方法和基于该衍生物的药物组合物
DE60032915T2 (de) Gallium komplexe von 3-hydroxy-4-pyronen zur behandlung von durch intrazelluläre prokaryoten, dns- und retro-viren verursachten infektionen
US4093716A (en) Compositions containing 5-amino-5-deoxythymidine and pharmaceutically acceptable salts thereof
ES2774663T3 (es) Agente para inducir interferón endógeno
CN101955461B (zh) 一种Hsp90抑制剂Xbj-B11及其制备方法与应用
WO1990007340A1 (en) Anti-hiv agent
US6140367A (en) Use of ethylene diamine disuccinate for preparing a medicament with antiviral properties
US11202774B2 (en) 5-substituted 2,4-thiazolidinediones (thiohydantoins), pseudothiohydantoins, and propseudothiohydantoins for use as antiviral agents
EP1669357A8 (en) Substance which exhibits antiviral and antibacterial activity and is based on derivatives of 2,8-dithioxo-1h-pyrano[ 2,3-d,6,5-d&#39;] dipyrimidine and 10-aza-analogue thereof
CN105541946A (zh) 一种环磷腺苷晶型化合物
CA1098040A (en) Antiviral agent
Bartholomaeus et al. Automimmune responses to liver antigens in man regulated by suppressor T lymphocytes

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 12876796

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 14400081

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2873390

Country of ref document: CA

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2015512600

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2012876796

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2012380376

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20121101

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20147035216

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112014027919

Country of ref document: BR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 112014027919

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20141107