WO2011115088A1 - ヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤、それを含む皮膚外用組成物および化粧料 - Google Patents

ヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤、それを含む皮膚外用組成物および化粧料 Download PDF

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skin
degradation product
axillary
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和琴 武川
響男 藤村
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コンビ株式会社
学校法人 北里研究所
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    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin

Definitions

  • the present invention relates to a human skin epidermis cell growth promoter comprising an axillary enzyme degradation product as an active ingredient.
  • the present invention also relates to a composition for external use on skin and a cosmetic comprising an axillary enzyme degradation product as an active ingredient thereof.
  • Skin troubles such as rough skin, wrinkles, sagging skin, and reduced tension are particularly important concerns for women. These skin problems are usually considered to be caused by environmental factors, factors associated with aging such as aging, and psychological factors such as stress. In particular, it can be said that environmental factors adversely affecting the skin due to the recent increase in ultraviolet rays and the drying of the living environment accompanying the frequent use of air conditioners are increasing.
  • Skin tissue consists of epidermis, dermis, and subcutaneous tissue.
  • the epidermis is a component that forms the outermost layer of the skin, and is basically composed of a horny layer, a granular layer, a spiny layer, and a basal layer.
  • new keratinocytes epidermal cells
  • the basal layer which is the lowest layer
  • the cells are gradually pushed up while changing their function and shape upward.
  • it peels off from the surface of the skin.
  • it takes about 28 days for epidermal cells to divide in the basal layer and be pushed up to become keratinocytes and peel off from the skin surface.
  • This series of processes from epidermal cell division to cell detachment on the cell surface is called turnover. By repeating such turnover in the epidermis, metabolism is performed in the skin so that it always becomes healthy skin. It has been broken.
  • the metabolism of the skin is activated, the turnover cycle is maintained, and the skin surface is always healthy, improving the moisture of the skin and improving the texture of the skin. It can be said that it will improve the quality of life (QOL).
  • Epidermal cell growth factor is an epithelial cell regeneration factor known to be present in the body of animals including humans. It is a protein derived from an extract of mouse submandibular gland. First discovered as a kind (mEGF (mouse EGF)). EGF varies from animal species to animal species, and mouse EGF does not directly show cell growth promoting effects in humans. Human EGF has already been found, and it is known that EGF works on cells on the skin surface to promote cell proliferation. On the other hand, for example, in JP 2009-234980 A, humans gradually decrease the amount of EGF secretion as they age (Life Sciences vol. 31, pp679-683, 1982). It is described that it is a cause of the phenomenon. For this reason, it is thought that replenishing EGF to the skin can promote cell neoplasia (proliferation) in the human epidermis and improve the skin condition.
  • mEGF mouse EGF
  • Axilla is a nest that swallows make by making their saliva into a thread, and it is known that it contains a lot of glycoprotein and almost no lipid.
  • Axilla is conventionally used as an edible material in Chinese cuisine, a raw material for Chinese medicine, and the like. In recent years, health foods using axilla as a raw material have been developed. However, only a few examples of application to external uses such as external preparations and cosmetics are known.
  • Japanese Patent Application Laid-Open No. 2003-095961 discloses an oral skin enhancement agent using an axillary enzyme degradation product.
  • the effect here is to increase the water retention of the skin and obtain a moist and fine skin. By promoting cell growth in the epidermis, the turnover cycle is maintained and the skin is fine. There is no mention of maintaining or improving the skin condition.
  • WO99 / 022709 discloses a cosmetic containing an axillary hydrous solvent extract, particularly a hot water extract.
  • This cosmetic can be used for skin care and is used for external use.
  • the extract used here is obtained by hot water extraction of the axilla to remove the solid content, which is clearly different from the axillary enzyme degradation product that is used as it is after the entire axilla is enzymatically treated. is there.
  • the effect is also different from the effect of the present invention based on promoting cell proliferation in the epidermis.
  • Japanese Unexamined Patent Publication No. 2009-234980 relates to a cosmetic composition containing an EGF-related substance and neuraminic acids, and here, it is disclosed that an axilla is used as one of the supply sources of neuramins. Yes.
  • neuraminic acids are used to activate EGF-related substances, and EGF-related substances are essential components, whereas axilla is not an essential component, and neuraminic acids are aligned with eggs and milk. It is only expected as a supply source.
  • the enzyme degradation product of axilla has an excellent human epidermal cell growth promoting effect similar to human EGF. It was unexpected and surprising that an axillary enzymatic degradation product derived from a swallow not related to humans showed a human EGF-like cell growth promoting effect. Moreover, the effect seen in the enzyme degradation product was remarkable compared with the case of the axillary water extract, and this point was also surprising. The present invention is based on these findings.
  • an object of the present invention is to provide an excellent human skin epidermal cell growth promoter, an external preparation containing the same, and a cosmetic that can be efficiently produced and are highly safe.
  • the human skin epidermal cell growth promoter according to the present invention comprises an axillary enzyme degradation product as an active ingredient.
  • the enzyme degradation product is a degradation product by protease.
  • the enzymatic degradation product has a molecular weight of 70 to 200,000.
  • the enzyme degradation product has an average molecular weight of 300 to 50,000.
  • an external skin composition comprising the human epidermal cell growth promoter according to the present invention.
  • the composition is used in skin care, more preferably used to smooth the skin and improve the skin or skin condition.
  • the external composition for skin according to the present invention is a cosmetic.
  • the external composition for skin according to the present invention is a lotion, milky lotion, skin care cream, moisturizing liquid, lip balm, cosmetic liquid pack, or face wash.
  • an axillary enzymatic degradation product for producing a human skin epidermis cell proliferation promoter.
  • an axillary enzymatic degradation product for producing a skin care external composition for skin care.
  • a method for promoting the proliferation of human skin epidermis cells which comprises applying an effective amount of the enzyme degradation product which is the active ingredient of the present invention to human skin.
  • a skin care method comprising applying an effective amount of the active ingredient of the present invention to human skin.
  • a method for conditioning skin texture and improving or improving skin condition comprising applying an effective amount of an active ingredient of the present invention to human skin.
  • an axillary enzyme degradation product as an active ingredient, human skin epidermal cell proliferation can be significantly promoted as compared with the conventional one.
  • enzymatic degradation products can be used for external skin use or cosmetics to maintain the turnover period in the skin or restore the delay of the period, thereby improving skin texture. Can condition, maintain or improve skin or skin condition.
  • the enzyme degradation product used uses an axilla well-known as an edible material, it is highly safe and easily accepted by consumers.
  • the enzymatic degradation product can be obtained by subjecting the axilla directly to the enzyme treatment, it can be produced efficiently and the production cost can be kept low.
  • the human skin epidermal cell proliferation promoter comprises an axillary enzyme degradation product as an active ingredient.
  • the axilla which is the raw material of the enzyme degradation product, is a nest that swallows make by making their saliva into a thread, and it contains a lot of glycoprotein and almost no lipid.
  • the swiftlet is that swallows acids belonging to swiftlet genus (Collocalia) of swifts family (Apodidae), for example, Apodidae Collocalia francica, Apodidae Collocalia salangana , Apodidae Collocalia fuciphaga, Apodidae Collocalia inexpectata, Apodidae Collocalia vestita, Apodidae Collocalia Examples include esculenta and Apodidae Collocalia maximus .
  • a commercially available product can be used for the axilla.
  • axilla There are various types of commercially available axillas, ranging from those that have only been cleaned after removing dirt such as hair and feces, to those that have been collected by repeating bleaching and cleaning after collecting axilla debris.
  • the axilla used in the invention is preferably an axilla that has not been excessively washed or bleached in the pretreatment.
  • An axillary enzyme degradation product means a product obtained by degrading an axilla by applying an enzymatic reaction, and obtained by degrading an axilla or a processed product thereof using a protease, a complex enzyme containing a protease, or the like.
  • the enzyme used for the decomposition treatment is preferably a protease, more preferably pancreatin.
  • Axillary enzyme degradation products can usually be performed by first heat-sterilizing and then subjecting them to enzymatic treatment in water.
  • the conditions for the sterilization treatment can be set with reference to conventional heat sterilization conditions as appropriate, and the conditions for the enzyme treatment can also be set as appropriate according to the type of enzyme used and the state of the axilla.
  • an axillary enzymatic degradation product can be prepared as follows.
  • axillary processed product when the axillary processed product is enzymatically decomposed, 10 to 100 times the mass of water is added to an axilla ground to a particle size of 2 mm or less, preferably 150 ⁇ m or less, and 1 to 60 ° C., After leaving still for 0.5 to 48 hours or stirring to swell, heat sterilize at 60 to 130 ° C. for 5 seconds to 30 minutes, and filter as necessary. By subjecting to enzymatic treatment, an axillary enzymatic degradation product can be obtained.
  • the longer the enzymatic reaction time the more the degradation of the protein proceeds, and an enzymatic degradation product containing a lower molecular weight protein is obtained.
  • the enzyme reaction time is set to 0.5 to 48 hours, preferably 0.5 to 36 hours, more preferably 3 to 36 hours, and even more preferably about 24 hours, and the enzyme reaction is further advanced. Enzymatic degradation products are preferred.
  • the molecular weight of the axillary enzymatic degradation product thus obtained is preferably 70 to 200,000, more preferably 70 to 180,000. More preferably, the molecular weight is between 70 and 150,000, and even more preferably between 70 and 120,000.
  • the average molecular weight (weight average molecular weight) of the axillary enzyme degradation product is preferably 300 to 100,000, and more preferably 300 to 70,000. More preferably, the average molecular weight is 300 to 50,000.
  • composition for external use of skin The human skin epidermal cell proliferation promoter according to the present invention can be used alone as it is, but it is contained as an additive in various compositions for external use of skin such as cosmetics, pharmaceuticals and quasi drugs. And a composition having an effect of promoting the growth of human skin epidermal cells can be obtained. The resulting composition can be used effectively for skin care, preferably for improving skin texture and improving or maintaining skin or skin condition.
  • the enzyme degradation product of the axilla which is an active ingredient according to the present invention, has an effect of actually proliferating EGF-R-expressing skin constituent cells, and this effect is not affected by the addition of the enzyme degradation product of axilla and the heat of the axilla. It was remarkable compared with the water extract group (test result of Example 1 described later). Further, the axillary enzyme degradation product, which is an active ingredient according to the present invention, showed an effect of actually phosphorylating the EGF receptor (EGF-R) (the test result of Example 2 described later).
  • EGF-R is phosphorylated means that the enzymatic degradation product of the axilla actually retains the action as a ligand of EGF-R, that is, actually retains the EGF-like action. Show.
  • human skin epidermal cell proliferation promoting activity means that human skin epidermal cells can actually be proliferated. It is considered that the enzyme degradation product of the axilla contains a component that can act as a ligand for the EGF receptor. As a result, EGF activity is promoted, and the proliferation of epidermal cells is promoted. This is a theory and does not limit the present invention.
  • an EGF-like effect can be expected by using an enzyme degradation product of axilla.
  • cell proliferation in the epidermis can be promoted, and the cycle of turnover in the epidermis is maintained or the cycle is delayed.
  • “improvement or maintenance” of the skin or the skin condition is used in the meaning including the improvement, adjustment, delay or alleviation of the deterioration of the condition.
  • an external composition for skin comprising the human skin epidermal cell growth promoter according to the present invention.
  • the composition for external use on the skin is provided as a pharmaceutical, a quasi-drug, or a cosmetic, and more preferably as a cosmetic.
  • the content of the axillary enzyme degradation product as an active ingredient is not particularly limited and varies depending on the form of the composition. It is in the range of 0.001 to 20% by weight, preferably 0.005 to 5% by weight, and can be appropriately changed depending on the form of the composition.
  • the content of the axillary enzyme degradation product (in terms of dry matter) in the external composition for skin according to the present invention is 0.001 mg or more, more preferably 0.001 mg to 1 mg per day, and can be applied to the skin per square centimeter. It is preferable to include.
  • the external composition for skin according to the present invention contains an active ingredient, and the promoter according to the present invention can further contain other optional ingredients as long as the effect of promoting the proliferation of human skin epidermis cells is not impaired.
  • optional components include various components commonly used in skin external preparations and cosmetics, such as humectants, lower alcohols, polyhydric alcohols, saccharides, surfactants, buffers, emulsifiers, and stabilizers.
  • Thickeners antioxidants, antiseptics, antiseptics, chelating agents, pH adjusters, fragrances, dyes, UV absorbers, UV scattering agents, vitamins, amino acids, anti-inflammatory agents, water, peptides, sugar alcohols , Enzymes, plant extracts, antioxidants, talc, clay, pollen, pearl and the like.
  • examples of the humectant include polyethylene glycol, polypropylene glycol, glycerin, propylene glycol, sorbitol, acidic mucopolysaccharides such as hyaluronic acid and chondroitin sulfate, amino acids, collagen, collagen peptides, and elastin.
  • lower alcohols examples include ethanol, propanol, and isopropanol.
  • polyhydric alcohol examples include glycerin, pentaerythritol, dipentaerythritol, ethylene glycol, propylene glycol, polypropylene glycol, and 1,3-butylene glycol.
  • saccharide examples include saccharides such as glucose, galactose, maltose, lactose, xylose, D-glucuronic acid, saccharose, glucosamine, galactosamine, D-sorbitol, sorbitan, cellulose, starch, oligosaccharides, polysaccharides and derivatives thereof. Is mentioned.
  • An external composition for skin according to the present invention comprises a human skin epidermis cell growth promoter containing an axillary enzyme degradation product and an optional ingredient as described above by appropriately blending and adjusting according to a known method, thereby preparing a lotion, emulsion, and skin care cream.
  • vanishing cream, nourishing cream, burning cream moisturizing liquid
  • pack agent for example, essence liquid pack
  • lotion face wash, body lotion, body cream, etc.
  • the external composition for skin according to the present invention further comprises makeup cosmetics such as foundations, lip balms, lipsticks, eye shadows, blushers, medicinal cosmetics such as sunscreen products and deodorant cosmetics, shampoos and hair rinses, hair conditioners, etc. It may be used as a cosmetic for hair, a skin cleanser or a bath cosmetic such as a bath.
  • the promotion of proliferation of human skin epidermal cells comprising applying an effective amount of the enzyme degradation product, which is the active ingredient of the present invention, to human skin.
  • the “effective amount” is an amount sufficient to exert human skin epidermal cell proliferation promoting activity in a desired region in the body by application.
  • a skin care method comprising applying an effective amount of the active ingredient of the present invention to human skin as described above.
  • a method for conditioning skin texture and improving or improving skin condition comprising applying an effective amount of an active ingredient of the present invention to human skin.
  • the “effective amount” is an amount sufficient to obtain a desired effect.
  • the expression of a value using “about” and “degree” includes a variation in a value that can be allowed by those skilled in the art to achieve the purpose by setting the value. Meaning. For example, it means that a variation within 20%, preferably within 10%, more preferably within 5% of a predetermined value or range can be tolerated.
  • Axillary hot water extract (comparative example) 40 g of commercially available unbleached axilla (dried product) was pulverized with a pulverizer, and the pulverized product was added to 1000 ml of distilled water and subjected to extraction treatment under heating and reflux for 2 hours. After heating to reflux and allowing to stand, the supernatant was collected and filtered, and the filtrate was recovered. The residue was further added to 1000 ml of distilled water in the same manner as described above and subjected to a re-extraction treatment with heating under reflux, and then the solid residue was removed by filtration, and the filtrate was recovered. The obtained filtrate (extract) was combined and concentrated under reduced pressure, and the resulting concentrate was lyophilized to obtain a yellowish white “axillary hot water extract” (comparative example).
  • the amount of sialic acid and the amount of protein in each of the obtained axillary samples were measured as follows.
  • the amount of sialic acid was measured as free N-acetylneuraminic acid by high performance liquid chromatography after acid hydrolysis of each sample.
  • the amount of protein was measured using a Bio Rad protein assay kit based on the Brad ford method.
  • the molecular weight of the protein contained in the axillary enzyme degradation product was evaluated using the Western blot method. Specifically, first, according to the measurement method described above, the amount of protein in the axillary enzyme degradation product was confirmed. Proteins derived from axillary enzyme digest (100 ⁇ g) were separated by 10-15% polyacrylamide using SDS-PAGE. The protein developed on the gel was transferred to an Immuno-blot PVDF membrane (Polyvinylidene difluoride, obtained from Bio-Lad Lab). The PVDF membrane was blocked for 1 hour in PBS containing 3% skim milk and 0.1% Tween-20, and visually judged. In addition, in the evaluation of the molecular weight of the protein, data shown in known literature (Guo, CT, Suzuki Y., et al., Antiviral Res. 70, pp. 140-146 (2006) was also referred to.
  • the protein molecular weight contained in the axillary enzyme degradation product should be in the range of about 70 to 120,000 (the upper limit may be about 200,000 depending on the evaluation conditions). I understood.
  • the average molecular weight of the protein in the axillary enzyme degradation product 1 was about 55,000.
  • the average molecular weight of the protein in the axillary enzyme degradation product 2 was found to be about 33,000.
  • (i) Material As cells, human epidermis (skin) -derived EGF-R-expressing cells A431 cells purchased from ATCC were used.
  • As the axillary enzyme degradation product the axillary enzyme degradation product 1 (enzyme treatment 3 hours), the axillary enzyme degradation product 2 (enzyme treatment 24 hours), and the axillary hot water extract obtained according to the above (1) were used. .
  • r-EGF human recombinant EGF
  • the cryopreserved extract supernatant was dissolved, diluted 10-fold with a sample diluent, and measured according to the measurement method of the Active EGF receptor EIA kit.
  • the results were calculated from a standard curve using a phosphorylated EGF receptor standard solution and expressed as the number of phosphorylated tyrosines (fmol / L) in the EGF receptor.
  • EGF-R phosphorylation was enhanced compared to the non-added control group (Cont).
  • the phosphorylation numbers of EGF-R in the 0.1% and 0.01% added concentration groups of the axillary enzyme degradation product 2 (Enz2 0.1% and Enz2 0.01%, respectively) are both positive controls.
  • the value was higher than that of the r-EGF added group of 0.15 ng / ml (r-EGF 0.15 ng).
  • r-EGF 0.15 ng 0.15 ng
  • r-EGF 0.15 ng In the group containing 0.1% of the axillary enzyme degradation product 1 (Enz 1% 0.1%), enhanced phosphorylation of EGF-R was observed very early (10 hours).
  • both axillary enzyme degradation product 1 and axillary enzyme degradation product 2 promote the phosphorylation of EGF-R at the addition concentration of 0.1% and 0.01%, and affect the proliferation of epidermal cells (A431 cells). It was suggested that

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Abstract

　本発明によるヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤は、燕窩の酵素分解物を有効成分とする。本発明によれば、効率的に生産でき、かつ安全性の高い、優れたヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤、およびそれを含む外用剤および化粧料が提供される。

Description

ヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤、それを含む皮膚外用組成物および化粧料 関連出願の参照
　本願は、先行する日本国特許出願である特願２０１０－０５８１０４号（出願日：２０１０年３月１５日）に基づくものであって、その優先権の利益を主張するものであり、その開示内容全体は参照することによりここに組み込まれる。
　本発明は、燕窩の酵素分解物を有効成分とするヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤に関する。また本発明は、その有効成分である燕窩の酵素分解物を含む、皮膚外用組成物および化粧料に関する。
　肌荒れやしわ、肌のたるみ、張りの低下等の肌のトラブルは、特に女性にとって重大な関心事である。これらの肌のトラブルは、通常、環境的な要因や、老化といった加齢に伴う要因、さらにはストレスなどの心理的要因などにより引き起こされると考えられている。特に、近年の紫外線の増大や、エアコンの多用などに伴う生活環境の乾燥化などによる肌に悪影響を及ぼす環境的要因は増大しつつあると言える。
　皮膚組織は、表皮、真皮、皮下組織からなる。表皮は、皮膚の最外層を形成する構成要素であり、さらに角層、顆粒層、有棘層、基底層から基本的になることが知られている。表皮では、最下層である基底層で新しい角化細胞（表皮細胞）が分裂して生じ、次第に細胞は上の方に向かって機能と形を変えながら押し上げられていき、角層の角質細胞となった後、最後は皮膚の表面から剥がれ落ちる。ヒトの健康な皮膚では、基底層で表皮細胞が分裂してそれが押し上げられて角質細胞となって皮膚表面から剥がれ落ちるまで、２８日程度かかると言われている。このような表皮細胞の分裂から細胞表面での細胞の剥離までの一連の流れをターンオーバーといい、このようなターンオーバーを表皮で繰り返すことで、常に健康な皮膚となるよう皮膚では新陳代謝が行われている。
　ところが、加齢に伴ってこのターンオーバーの周期が遅くなることが知られており、ターンオーバー周期の遅れによって、皮膚表面に古い角質等が残り、肌のくすみや肌荒れの状態等につながるとされている。
　このため、皮膚表皮細胞増殖促進を進めることで、皮膚の新陳代謝を活発化させ、ターンオーバーの周期を維持し、常に健康な皮膚表面とすることは、肌の潤いを向上させ、肌のきめを整えることとなり、生活の質（ＱＯＬ）向上につながると言える。
　表皮（上皮）細胞成長因子（Epidermal growth factor （ＥＧＦ））は、ヒトを含む動物の体内に存在することが知られている上皮細胞再生因子であり、マウスの顎下腺の抽出物からタンパク質の一種として初めて見出された（ｍＥＧＦ（マウスＥＧＦ））。ＥＧＦは動物種毎にそれぞれ異なり、マウスＥＧＦがそのままヒトにおいて細胞増殖促進効果を示すことにはならない。ヒトＥＧＦについても既に見出されており、ＥＧＦが、皮膚表面にある細胞に働きかけ細胞の増殖を促進することが知られている。一方で、例えば、特開２００９－２３４９８０号公報には、ヒトは、年齢を重ねるに従って、ＥＧＦの分泌量が減少していき（Life Sciences vol. 31, pp679-683, 1982）、これが肌の老化現象の一因である旨が記載されている。このため、ＥＧＦを肌に補給することで、ヒト表皮における細胞の新生（増殖）を促進でき、肌の状態を良好にできると考えられている。
　燕窩は、アナツバメが自らの唾液を糸状にして作る巣であり、その成分としては、糖タンパク質を多く含み、脂質は殆ど含まれないことが知られている。燕窩は、従来、中華料理における食用素材や、漢方薬の原料などに使用されている。近年では、燕窩を原料に用いた健康食品なども開発されているが、外用剤や化粧料のような外用用途への適用例はまだ僅かしか知られていない。
　特開２００３－０９５９６１号公報には、燕窩の酵素分解物を用いた経口用の美肌促進剤が開示されている。しかしながら、ここには、経口用途のみが示されているに過ぎず、外用用途への利用可能性については何ら記載も示唆もされていない。またここでの効果は、皮膚の保水性を高め、しっとりとしたキメの細かな肌を得ることであって、表皮における細胞増殖を促進することで、ターンオーバー周期を維持し、肌のきめ細かさなどの肌の状態の維持、向上を図ることについては、何ら記載されていない。
　ＷＯ９９／０２２７０９には、燕窩の含水溶剤抽出物、特に熱水抽出物を含む化粧料が開示されている。この化粧料は、スキンケア用途に使用でき、外用用途で使用するものである。しかしながら、ここで使用される抽出物は、燕窩を熱水抽出して、固形分を除去したものであり、燕窩全体を酵素処理してそのまま使用する燕窩酵素分解物とは、明らかに異なるものである。また効果に関しても、表皮における細胞増殖を促進することに基づく、本発明の効果とは異なるものである。
　特開２００９－２３４９８０号公報には、ＥＧＦ関連物質と、ノイラミン酸類とを含む、美容組成物に関するものであり、ここでは、ノイラミン類の補給源の一つとして燕窩を利用することが開示されている。しかしながら、ここでは、ノイラミン酸類は、ＥＧＦ関連物質を活性化するために使用されるものであり、ＥＧＦ関連物質は必須の成分である一方、燕窩は必須成分ではなく、卵や牛乳と並ぶノイラミン酸類の供給源として期待されているに過ぎない。
　本発明者等は今般、燕窩の酵素分解物が、ヒトＥＧＦ様の優れたヒト表皮細胞増殖促進効果を有することを見出した。ヒトとは関わりのないアナツバメ由来の燕窩の酵素分解物が、ヒトＥＧＦ様の細胞増殖促進効果を示したことは予想外の驚くべきことであった。また、酵素分解物において見られる効果は、燕窩の水抽出物の場合に比べて顕著であり、この点も驚くべきことであった。本発明はこれら知見に基づくものである。
　よって本発明は、効率的に生産でき、かつ安全性の高い、優れたヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤、およびそれを含む外用剤および化粧料の提供をその目的とする。
　本発明によるヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤は、燕窩の酵素分解物を有効成分とする。
　本発明の一つの好ましい態様によれば、前記酵素分解物は、プロテアーゼによる分解物である。
　本発明の一つのより好ましい態様によれば、前記酵素分解物の分子量は、７０～２００，０００である。
　本発明の一つのさらに好ましい態様によれば、前記酵素分解物の平均分子量は、３００～５０，０００である。
　本発明の別の態様によれば、本発明によるヒト表皮細胞増殖促進剤を含んでなる、皮膚外用組成物が提供される。好ましくはこの組成物は、スキンケアに用いられ、より好ましくは、肌のきめを整え、肌もしくは皮膚の状態を改善するために用いられる。
　本発明の別のより好ましい態様によれば、本発明による皮膚外用組成物は、化粧料である。本発明の別のさらに好ましい態様によれば、本発明による皮膚外用組成物は、ローション、乳液、スキンケア用クリーム、保湿液、リップクリーム、美容液パック、または洗顔料である。
　本発明の別の態様によれば、ヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤を製造するための、燕窩の酵素分解物の使用が提供される。本発明の別の一つの態様によれば、スキンケア用の皮膚外用組成物を製造するための、燕窩の酵素分解物の使用が提供される。
　本発明のさらに別の態様によれば、本発明の有効性成分である酵素分解物の有効量を、ヒトの皮膚に適用することを含んでなる、ヒト皮膚表皮細胞の増殖促進方法が提供される。本発明のさらに別の一つの態様によれば、本発明の有効成分の有効量を、ヒトの皮膚に適用することを含んでなる、スキンケア方法が提供される。同様に、本発明の有効成分の有効量を、ヒトの皮膚に適用することを含んでなる、肌のきめを整え、肌の状態を向上もしくは改善する方法が提供される。　
　本発明によれば、燕窩の酵素分解物を有効成分として使用することで、ヒト皮膚表皮細胞増殖を、従来に比べて顕著に促進させることができる。またこのヒト皮膚表皮細胞増殖促進能に基づいて、酵素分解物を皮膚外用用途または化粧料用途に使用することで、皮膚におけるターンオーバー周期を維持もしくは周期の遅延を回復して、肌のきめを整え、肌もしくは皮膚の状態を維持もしくは改善させることができる。このようにして本発明によれば、消費者のＱＯＬの向上を図ることができる。また、使用される酵素分解物は、食用素材としても周知な燕窩を使用するため、安全性が高く、消費者にも受け入れられやすいものである。さらに酵素分解物は、燕窩をそのまま酵素処理して得ることができるため、効率的に製造でき、また製造コストも低く抑えることができる。
燕窩サンプル中のシアル酸量の測定結果を示すグラフである。 燕窩サンプル中のタンパク質量の測定結果を示すグラフである。 ＧＰＣ－ＨＰＬＣによる燕窩酵素分解物１の測定結果を示すグラフである。 ＧＰＣ－ＨＰＬＣによる燕窩酵素分解物２の測定結果を示すグラフである。 実施例（３）の結果を示すグラフである。 実施例（４）の結果を示すグラフである。
発明の具体的説明
ヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤および有効成分
　本発明によるヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤は、前記したように、燕窩の酵素分解物を有効成分とする。
　酵素分解物の原料である燕窩は、アナツバメが自らの唾液を糸状にして作る巣であり、その成分としては、糖タンパク質を多く含み、脂質はほとんど含まれていない。ここでアナツバメとは、アマツバメ科（Apodidae）のアナツバメ属（Collocalia）に属するツバメ類のことであり、例えば、Apodidae Collocalia francica、Apodidae Collocalia salangana、Apodidae Collocalia fuciphaga、Apodidae Collocalia inexpectata、Apodidae Collocalia vestita、Apodidae Collocalia esculenta、Apodidae Collocalia maximusなどが挙げられる。
　本発明において、燕窩は、市販品を使用できる。一般に市販されている燕窩には、毛や糞等の汚れを取り除いて洗浄しただけのものから、燕窩のクズを集めて漂白と洗浄を繰り返して成形したものまで、様々な種類があるが、本発明で用いる燕窩は、前処理において過度の洗浄や漂白等が行われていない燕窩を用いることが好ましい。
　燕窩の酵素分解物とは、燕窩を酵素反応を適用して分解し、得られたものを意味し、燕窩またはその処理物を、プロテアーゼやプロテアーゼを含む複合酵素等を用いて分解することにより得ることができる。ここで分解処理に使用する酵素としては、好ましくはプロテアーゼであり、より好ましくはパンクレアチンである。
　燕窩の酵素分解物は、通常、まず加熱殺菌処理を施した後、水中にて酵素処理に付すことによって行うことができる。殺菌処理の条件は、慣用の加熱殺菌条件を適宜参考にして設定することができ、酵素処理の条件も、使用する酵素の種類や、燕窩の状態に応じて適宜設定することができる。
　より具体的な例を挙げれば、燕窩の酵素分解物は、以下のようにして調製することができる。
　例えば、粉砕した燕窩に、その質量の１０～５０倍の水を加えて膨潤させた後、６０～１３０℃で、５秒～３０分間加熱殺菌処理する。その後、適量の酵素をそのまま添加して、酵素の至適ｐＨ、至適温度で０．５～４８時間酵素反応を行なう。酵素反応終了後、加熱処理等により酵素を失活させ、反応液を濾過して不溶物を除去することにより、燕窩の酵素分解物を得ることができる。また、この酵素分解物は、必要に応じて乾燥して粉末化してもよい。なお、上記の各工程においては、適宜ｐＨ調整、脱色、脱臭等の操作を行なってもよい。
　別の例として、燕窩の処理物を酵素分解する場合には、粒径２ｍｍ以下、好ましくは１５０μｍ以下に粉砕した燕窩に、その質量の１０～１００倍の水を加えて、１～６０℃、０．５～４８時間静置または撹拌して膨潤させた後、６０～１３０℃、５秒～３０分間加熱殺菌処理し、必要に応じて濾過して、得られた溶液を、上記と同様にして酵素処理に付すことにより、燕窩の酵素分解物を得ることができる。
　酵素分解物の調製法において、酵素反応の時間が長いほど、タンパク質の分解が進み、より低分子のタンパク質を含む、酵素分解物が得られることとなる。本発明においては、酵素反応時間を、０．５～４８時間、好ましくは０．５～３６時間、より好ましくは３～３６時間、さらに好ましくは約２４時間程度として、酵素反応をより進行させた酵素分解物が好ましい。
　このようにして得られる燕窩の酵素分解物の分子量は７０～２００，０００が好ましく、７０～１８０，０００がより好ましい。さらに好ましくは、分子量は、７０～１５０，０００であり、さらにより好ましくは、７０～１２０，０００である。
　また燕窩の酵素分解物の平均分子量（重量平均分子量）は、３００～１００，０００が望ましく、３００～７０，０００が好ましい。より好ましくは、平均分子量は、３００～５０，０００である。
皮膚外用組成物
　本発明によるヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤は、単独でそのままでも使用することができるが、化粧料、医薬品、医薬部外品などの種々の皮膚外用組成物に添加剤として含有させることができ、ヒト皮膚表皮細胞の増殖促進効果を有する組成物を得ることができる。得られた組成物は、スキンケア、好ましくは、肌のきめを整え、肌もしくは皮膚の状態を改善もしくは維持させるために有効に使用することができる。
　本発明による有効成分である燕窩の酵素分解物は、ＥＧＦ－Ｒ発現皮膚構成細胞を実際に増殖させる効果を有しており、この効果は、燕窩の酵素分解物の非添加群および燕窩の熱水抽出物群に比べて顕著であった（後述する実施例１の試験結果）。また本発明による有効成分である燕窩の酵素分解物は、ＥＧＦレセプター（ＥＧＦ－Ｒ）を実際にリン酸化する効果を示した（後述する実施例２の試験結果）。ＥＧＦ－Ｒがリン酸化されるということは、燕窩の酵素分解物がＥＧＦ－Ｒのリガンドとしての作用を実際に保持していること、すなわち、ＥＧＦ様の作用を実際に保持していることを示している。
　したがって、本発明において、ヒト皮膚表皮細胞増殖促進活性とは、ヒト皮膚表皮細胞を実際に増殖させることができることをいう。燕窩の酵素分解物には、ＥＧＦレセプターのリガンドとして作用し得る成分が含まれると考えられ、その結果ＥＧＦ活性が促進され、表皮細胞の増殖を促進すると考えられる。なおこれは理論であって本発明を限定するものではない。
　このため、本発明によれば、燕窩の酵素分解物を使用することで、ＥＧＦ様の効果が期待でき、その結果、表皮における細胞増殖促進でき、表皮におけるターンオーバーの周期を維持もしくは周期の遅延を回復して、ヒト皮膚の新陳代謝を高めることができる。これにより、肌のきめを整え、肌や皮膚の状態の改善および向上に有効であることは明らかである。また皮膚の状態の悪化の予防効果も可能と言える。
　なお、本明細書において、肌もしくは皮膚の状態の「改善または維持」とは、該状態の、向上、調節、状態悪化の遅延もしくは緩和などを包含する意味で使用される。
　よって前記したように、本発明の別の態様によれば、本発明によるヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤を含んでなる、皮膚外用組成物が提供される。好ましくは、皮膚外用組成物は、医薬品、医薬部外品、または化粧料として提供され、より好ましくは、化粧料として提供される。
　本発明による皮膚外用組成物（特に化粧料）において、有効成分である燕窩酵素分解物の含有量（乾物換算）は、特に制限はなく、組成物の形態により異なるが、一般には固形分として、０．００１～２０重量％、好ましくは０．００５～５重量％の範囲であり、組成物の形態に応じて適宜変更することができる。
　あるいは、本発明による皮膚外用組成物における燕窩酵素分解物の含有量（乾物換算）は、１日当り０．００１ｍｇ以上、より好ましくは０．００１ｍｇ～１ｍｇ、１平方ｃｍあたりの皮膚に適用できるように含むことが好ましい。
　本発明による皮膚外用組成物は、有効成分を含み、かつヒト皮膚表皮細胞増殖促進効果を損なわない限りにおいて、本発明による促進剤は、他の任意成分をさらに含んでなることができる。このような任意成分としては、例えば、皮膚外用剤や化粧料に慣用されている各種成分、例えば、保湿剤、低級アルコール、多価アルコール、糖類、界面活性剤、緩衝剤、乳化剤、安定化剤、増粘剤、酸化防止剤、防腐防菌剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、香料、色素、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、ビタミン類、アミノ酸類、抗炎症剤、水、ペプチド、糖アルコール類、酵素類、植物エキス類、抗酸化物質類、タルク、クレイ、花粉、パールなどが挙げられる。
　ここで保湿剤としては、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール、ヒアルロン酸やコンドロイチン硫酸等の酸性ムコ多糖類、アミノ酸、コラーゲン、コラーゲンペプチド、エラスチンなどが挙げられる。
　低級アルコールとしては、例えば、エタノール、プロパノール、イソプロパノールなどが挙げられる。
　多価アルコールとしては、例えば、グリセリン、ペンタエリストリール、ジペンタエリスリトール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、1,3－ブチレングリコールなどが挙げられる。
　糖類としては、例えば、グルコース、ガラクトース、マルトース、ラクトース、キシロース、Ｄ－グルクロン酸、サッカロース、グルコサミン、ガラクトサミン、Ｄ－ソルビット、ソルビタン、セルロース、デンプンなどの糖類、オリゴ糖類、多糖類およびこれらの誘導体などが挙げられる。
　本発明による皮膚外用組成物は、燕窩酵素分解物を含むヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤および上記のような任意成分を、公知の方法に従って適宜配合し調整することによって、ローション、乳液、スキンケア用クリーム（例えば、バニシングクリーム、ナリシングクリーム、バーニングクリーム）、保湿液、パック剤（例えば、美容液パック）、化粧水、洗顔料、ボディローション、ボディクリームなどの種々の化粧料において慣用の製品形態とすることができる。本発明による皮膚外用組成物は、さらに、ファウンデーション類、リップクリーム、リップスティック、アイシャドウ、頬紅などのメーキャップ化粧品や、日焼け止め用製品や防臭化粧品などの薬用化粧品、シャンプーやヘアリンス、整髪料などの頭髪用化粧品、皮膚洗浄剤や浴剤の浴用化粧品などとして用いてもよい。
　本発明のさらに別の態様によれば、前記したように、本発明の有効成分である酵素分解物の有効量を、ヒトの皮膚に適用することを含んでなる、ヒト皮膚表皮細胞の増殖促進方法が提供される。なおここで「有効量」とは、適用によって、体内における所望の領域において、ヒト皮膚表皮細胞増殖促進活性を発揮しうるのに十分な量である。
　さらに本発明のさらに別の一つの態様によれば、前記したように、本発明の有効成分の有効量を、ヒトの皮膚に適用することを含んでなる、スキンケア方法が提供される。同様に、本発明の有効成分の有効量を、ヒトの皮膚に適用することを含んでなる、肌のきめを整え、肌の状態を向上もしくは改善する方法も提供される。なおここで「有効量」とは、所望の効果が得られるのに十分な量である。
　なお本明細書において、「約」および「程度」を用いた値の表現は、その値を設定することによる目的を達成する上で、当業者であれば許容することができる値の変動を含む意味である。例えば、所定の値または範囲の２０％以内、好ましくは１０％以内、より好ましくは５％以内の変動を許容し得ることを意味する。
　以下の例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
（１）　燕窩サンプルの調製
　(1-1)　燕窩酵素分解物１
　市販の無漂白の燕窩を粉砕機で粉砕して、１００メッシュパス（粒径１５０μｍ以下）の燕窩粉末を得、この燕窩粉末に、約５０倍量（質量）の水を加えて５℃で２０時間膨潤させた後、１２１℃、１５分間加熱殺菌処理した。
　得られた処理液を冷却した後、ｐＨを調整し、燕窩粉末に対して２質量％の量のプロテアーゼ含有酵素（商品名「パンクレアチンＦ」、天野製薬株式会社製）を添加して、４５℃で３時間反応させた。
　この酵素反応液をｐＨ７．０に調整した後、９０℃で５分間加熱して酵素を失活させて、濾過し、濾液（水溶性画分）を回収した。この濾液を濃縮後、凍結乾燥して、「燕窩酵素分解物１」を得た。
　(1-2)　燕窩酵素分解物２
　酵素反応の時間を２４時間とした以外は、前記(1-1)項の酵素分解物１と同様に行い、「燕窩酵素分解物２」を得た。
　(1-3)　燕窩熱水抽出物（比較例）
　市販の無漂白の燕窩（乾燥物）４０ｇを粉砕機で粉砕し、この粉砕物を、１０００ｍｌの蒸留水に加えて、加熱還流下にて２時間抽出処理を行った。加熱還流後、静置した後、上清を分取して濾過し、濾液を回収した。残渣についてはさらに、上記と同様に１０００ｍｌの蒸留水に加えて、加熱還流下にて再抽出処理を行った後、固形物残渣を濾過により除去し、濾液を回収した。得られている濾液（抽出液）を併せ、減圧下にて濃縮し、得られた濃縮物を凍結乾燥して、黄白色の「燕窩熱水抽出物」（比較例）を得た。
（２）　燕窩サンプルの分析
　得られた各燕窩サンプル（燕窩酵素分解物１、燕窩酵素分解物２および燕窩熱水抽出物）中のシアル酸量とタンパク質量とを下記のようにして測定した。
　シアル酸の量は、各試料を酸加水分解後に高速液体クロマトグラフィーにて遊離Ｎ－アセチルノイラミン酸として測定した。
　タンパク質の量は、Ｂｒａｄ ｆｏｒｄ法に基づくBio Rad社のプロテインアッセイキットを使用して測定した。
　結果は、図１および図２に示される通りであった。
　次に、燕窩酵素分解物１および燕窩酵素分解物２に含まれるタンパク質の分子量およびその分布を測定するため、下記のような条件にて、ＧＰＣによる分析を行った。
　［ＨＰＬＣの測定条件］
　　・カラム：　Shodex Asahipak GS320HQ （φ7.6×300mm）
　　・カラム温度：　３５℃
　　・移動相：　50mM ＣＨ３ＣＯＯＮＨ３　ｐＨ６．７
　　・流速：　０．４ml/min
　　・試料注入量：　１０μｌ
　　・検出器：　紫外分光検出器（ＵＶ２２０ｎｍにて測定）
　［使用した分子量マーカー］
　　・ＢＳＡ　MW 66,000
　　・Gly-gly　MW 132.1
　　・Gly-gly-gly　MW 189.17
　　・L-Asparaginic acid　MW133.1
　　・DL-Asparaginic acid　MW 150.1
　　・N-Acetylneuraminic acid　MW 309.3
　測定結果は、図３および図４に示される通りであった。
　さらに、燕窩酵素分解物に含まれるタンパク質の分子量について、ウエスタンブロッド法を使用して評価した。具体的には、まず、前記した測定法に従い、燕窩酵素分解物中のタンパク質の量を確認した。燕窩酵素分解物由来のタンパク質（１００μｇ）を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥを用いて、１０～１５％のポリアクリルアミドにより分離した。ゲルに展開したタンパク質をImmuno-blot ＰＶＤＦ膜（Polyvinylidene difluoride、Bio-Lad Lab社より入手）に転写した。ＰＶＤＦ膜を３％スキムミルクと０．１％ Tween-20を含むＰＢＳ中にて、１時間ブロッキングし、視覚的に判定した。
　なお、タンパク質の分子量の評価にあたっては、公知文献（Guo, C. T., Suzuki Y., et al., Antiviral Res. 70, pp.140-146 (2006) に示されているデータも参考にした。
　これらの結果から、燕窩酵素分解物中に含まれるタンパク質分子量は、約７０～１２０，０００程度（なお評価条件によっては、上限値は２００，０００程度となる場合がある）の範囲で存在することがわかった。
　さらに、得られた結果から、燕窩酵素分解物１におけるタンパク質の平均分子量は、約５５，０００であるとわかった。また、燕窩酵素分解物２におけるタンパク質の平均分子量は、約３３，０００であるとわかった。
（３）　酵素処理燕窩の細胞増殖促進活性
　酵素処理燕窩のＥＧＦ様作用、すなわち、細胞増殖促進活性を、ＥＧＦ－Ｒ発現皮膚構成細胞を用いて検討した。
　(i)　材料：
　細胞は、ＡＴＣＣより購入したヒト表皮（皮膚）由来のＥＧＦ－Ｒ発現細胞Ａ４３１細胞を用いた。
　燕窩酵素分解物としては、上記（１）に従って得た、燕窩酵素分解物１（酵素処理３時間）と、燕窩酵素分解物２（酵素処理２４時間）と、燕窩熱水抽出物とを用いた。
　(ii)　実験方法：
　３％ＦＣＳを添加したＤＭＥ培地にて、５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調整したＡ４３１細胞に、燕窩酵素分解物または燕窩熱水抽出物を、下記の各種濃度で添加し、９６穴平底プレートにて５×１０３ｃｅｌｌｓ／１ｍｌ／ｗｅｌｌで培養した。
　　最終添加濃度：
　　　・燕窩熱水抽出物（ｈｅａｒｔ）：　　１％，０．１％，０．０１％
　　　・燕窩酵素分解物１（Ｅｎｚ１）：　　１％，０．１％，０．０１％
　　　・燕窩酵素分解物２（Ｅｎｚ２）：　　１％，０．１％，０．０１％
　また、対照として、燕窩酵素分解物もｒ－ＥＧＦも添加しない非添加群についても用意し培養を行った。
　細胞の増殖を、経時的に、Ｃｅｌｌ　Ｃｏｕｎｔｉｎｇ　Ｋｉｔ－８
（同仁化学研究所社製）（トリチウムサイミジンの取り込み試験の代替法）を用いて検討し、ＥＧＦ様採用の有無を調べた。
　結果は，４６０ｎｍ付近に極大吸収を持つ水溶性ホルマザンの色素量としてＡＢＳ（アブソーバンス）で示される。
　結果は図５に示される通りであった。
　結果から、非添加コントロール群（Ａ４３１／３％ＦＣＳ）に比較して、細胞の増殖が抑制される群と、増殖される群とに明確に分かれた。
　燕窩酵素分解物１および燕窩酵素分解物２の添加群（特に０．１％および０．０１％の濃度）で共に、明らかな増殖促進効果が認められた。
　一方、燕窩熱水抽出物の１％添加群では、非添加コントロール群に比較しても、細胞増殖が極端に抑制された。燕窩熱水抽出物の０．１％添加群および０．０１添加群においても、細胞増殖は非添加コントロール群よりも低かった。
　このため、燕窩酵素分解物には細胞増殖促進する一方、燕窩熱水抽出物についてはむしろ細胞増殖を抑制または阻害する傾向が認められた。
（４）　燕窩酵素分解物のＥＧＦ様作用の検証（ＥＧＦ－Ｒリン酸化の検討）
　燕窩酵素分解物のＥＧＦ様作用を、ＥＧＦ－Ｒ発現皮膚構成細胞のＥＧＦリセプターリン酸化を指標に検討した。
　(i)　材料：
　細胞は、ＡＴＣＣより購入したヒト表皮（皮膚）由来のＥＧＦ－Ｒ発現細胞Ａ４３１細胞を用いた。
　燕窩酵素分解物としては、上記（１）に従って得た、燕窩酵素分解物１（酵素処理３時間）と、燕窩酵素分解物２（酵素処理２４時間）とを用いた。
　陽性対照として、ヒト組み替え型ＥＧＦ（ｒ－ＥＧＦ）（Protein Expressより入手）を用いた。
　ＥＧＦ－Ｒのリン酸化は、Active EGF receptor ＥＩＡキット (Takara社)を用いて測定した。
　(ii)　細胞培養：
　３％ＦＣＳを添加したＤＭＥ培地にて、それぞれ５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調整したＡ４３１細胞に、燕窩酵素分解物と、陽性対照としてのｒ－ＥＧＦとを、下記の各種濃度で添加し、２４穴平底プレートにて５×１０４ｃｅｌｌｓ／１ｍｌ／ｗｅｌｌで培養した。
　　最終添加濃度：
　　　・燕窩酵素分解物１（Ｅｎｚ１）：　　０．１％，０．０１％
　　　・燕窩酵素分解物２（Ｅｎｚ２）：　　０．１％，０．０１％
　　　・ｒ－ＥＧＦ　：　　０．１５ｎｇ／ｍｌ
　また、対照として、燕窩酵素分解物もｒ－ＥＧＦも添加しない非添加群についても用意し培養を行った。
　(iv)　検体の調整および測定：
　培養１０時間より５０時間まで（データは１０～３４時間）の間、経時的に細胞を回収し、測定キットに付属のレセプター抽出用緩衝液を用いて、検体を調整した。培養上清を除いた後、レセプター抽出用緩衝液を５０μｌ／ｗｅｌｌ加え、Cell Scraperを用いて細胞をかきとり２ｗｅｌｌ分の細胞抽出液を、１．５ｍｌ用のマイクロ遠心チューブにプールした。４℃、１００００ｒｐｍの条件にて５分間遠心して細胞不溶物を沈殿させ、抽出上清を測定まで－８０℃に凍結保存した。
　凍結保存した抽出上清を溶解し、検体希釈液を用いてそれぞれ１０倍に希釈してActive EGF receptor ＥＩＡキットの測定法に従って測定した。
　結果は、リン酸化ＥＧＦレセプター標準液による標準曲線より算出し、ＥＧＦレセプター中のリン酸化チロシン数（ｆｍｏｌ／Ｌ）で示した。
　結果は図６に示される通りであった。
　培養３４時間までの検討では、何れも非添加コントロール群（Ｃｏｎｔ）に比較して、ＥＧＦ－Ｒのリン酸化が亢進していた。燕窩酵素分解物２の０．１％および０．０１％添加濃度群（それぞれ、Ｅｎｚ２ ０．１％、Ｅｎｚ２ ０．０１％）のＥＧＦ－Ｒのリン酸化数は、いずれも、陽性対照であるｒ－ＥＧＦの０．１５ｎｇ／ｍｌ添加群（ｒ－ＥＧＦ０．１５ｎｇ）よりも高い値を示した。燕窩酵素分解物１の０．１％添加群（Ｅｎｚ１ ０．１％）においては、非常に早期に（１０時間）、ＥＧＦ－Ｒのリン酸化の亢進が認められた。
　結果から、燕窩酵素分解物１および燕窩酵素分解物２は共に、０．１％および０．０１％の添加濃度でＥＧＦ－Ｒのリン酸化を促進し、表皮細胞（Ａ４３１細胞）の増殖に影響を及ぼすことが示唆された。

Claims (20)

  1. 　燕窩の酵素分解物を有効成分とする、ヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤。
  2. 　酵素分解物がプロテアーゼによる分解物である、請求項１に記載のヒト表皮細胞増殖促進剤。
  3. 　酵素分解物の分子量が、７０～２００，０００である、請求項１または２に記載のヒト表皮細胞増殖促進剤。
  4. 　酵素分解物の平均分子量が、３００～５０，０００である、請求項１～３のいずれか一項に記載のヒト表皮細胞増殖促進剤。
  5. 　請求項１～４のいずれか一項に記載のヒト表皮細胞増殖促進剤を含んでなる、皮膚外用組成物。
  6. 　スキンケアに用いられる、請求項５に記載の組成物。
  7. 　肌のきめを整え、肌もしくは皮膚の状態を改善するために用いられる、請求項５または６に記載の組成物。
  8. 　化粧料である、請求項５～７のいずれか一項に記載の組成物。
  9. 　ローション、乳液、スキンケア用クリーム、保湿液、リップクリーム、または美容液パック、洗顔料である、請求項５～７のいずれか一項に記載の組成物。
  10. 　ヒト皮膚表皮細胞増殖促進剤を製造するための、燕窩の酵素分解物の使用。
  11. 　スキンケア用の皮膚外用組成物を製造するための、燕窩の酵素分解物の使用。
  12. 　皮膚外用組成物が、肌のきめを整え、肌の状態を向上もしくは改善するために用いられるものである、請求項１１に記載の使用。
  13. 　酵素分解物がプロテアーゼによる分解物である、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の使用。
  14. 　酵素分解物の分子量が、７０～２００，０００である、請求項１０～１３のいずれか一項に記載の使用。
  15. 　酵素分解物の平均分子量が、３００～５０，０００である、請求項１０～１４のいずれか一項に記載の使用。
  16. 　皮膚外用組成物が化粧料である、請求項１１～１５のいずれか一項に記載の使用。
  17. 　酵素分解物の有効量を、ヒトの皮膚に適用することを含んでなる、ヒト皮膚表皮細胞の増殖促進方法。
  18. 　酵素分解物の有効量を、ヒトの皮膚に適用することを含んでなる、スキンケア方法。
  19. 　酵素分解物の有効量を、ヒトの皮膚に適用することを含んでなる、肌のきめを整え、肌の状態を向上もしくは改善する方法。
  20. 　酵素分解物がプロテアーゼによる分解物である、請求項１７～１９のいずれか一項に記載の方法。
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