KR102450862B1 - 천궁, 작약 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

천궁, 작약 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 천궁, 작약 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 열풍건조 및 효소 처리와 수성 2상 시스템을 이용하여 정제된 천궁, 작약 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하여 안정성이 우수하며, 피부 미백 효과, 세포재생 효과, 주름개선 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

천궁, 작약 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition containing Cnidium officinale exosome, Paeonia lactiflora exosome}
본 발명은 천궁, 작약 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 열풍건조 처리와 효소 처리 및 수성 2상 시스템을 이용하여 정제된 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀을 유효성분으로 함유하여 피부 미백, 세포재생, 주름개선 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.
화장품의 기능은 청결과 단순한 메이크업을 지나, 공해 물질, 스트레스, 자외선, 활성산소, 과산화물 등의 피부 노화 원인을 제거하거나 억제하는 것으로 확장되어 왔다. 전 세계적으로 고령화 사회로 진입함에 따라 피부 노화 방지를 위한 화장품의 시장이 지속적으로 증가하고 있으며 현대 여성들에게 깨끗하고 건강한 피부를 갖고자 하는 것이 큰 관심사가 되어 미백 효과가 있는 원료들과 이를 이용한 미백 화장품의 수요가 계속해서 증가하고 있다. 사람의 피부색은 자외선으로부터 피부를 보호하는 보호색소인 멜라닌의 형태 및 그 양에 의해 결정되어진다. 멜라닌은 멜라노사이트 내의 소기관인 멜라노좀에서 합성되며 멜라노사이트의 수지상 돌기를 통해 주위의 케라티노사이트로 이행한다. 멜라닌은 멜라노사이트 내에서 티로신이라는 아미노산으로부터 출발하여 도파(DOPA)로, 다시 산화하여 도파퀴논(DOPA-quinone)이 생성되는 단계에서 티로시나아제라는 산화 효소가 관여한다. 그 후의 반응은 자동 산화반응이 일어나 5,6-dihydroxyindol을 거치면서 indol-5,6-quinone이 형성되고 최종적으로 흑갈색의 멜라닌을 만들어낸다. 피부에서 자외선에 노출되면 멜라노사이트는 활발하게 멜라노솜을 만들고 만들어진 멜라노솜을 케라티노사이트가 왕성하게 거두어들여 대량의 멜라노솜이 케라티노사이트에 존재하게 된 결과 피부가 검어진다. 멜라닌의 합성에 가장 영향을 주는 것은 자외선이지만 멜라닌 합성은 그 외에도 여러 가지 호르몬의 영향을 받는다. 그 대표적인 것이 뇌하수체로부터 분비되는 멜라닌세포자극호르몬(MSH)이다. 그 외에 부신피질 호르몬이나 성호르몬, 갑상선호르몬 등 여러 가지 영향과 더불어 유전적 소인과 환경요인, 호르몬, 식품, 의약품에 의해서도 영향을 받는다. 인체에서의 멜라닌은 아민, 유리기, 금속이온 등과 같은 세포 독성 물질에 대한 보호 기능을 수행하나 과잉 생산 시 기미, 주근깨 등의 색소 침착을 형성하고 피부노화를 촉진하며 피부암의 유발에 관여한다. 과거 미백 관련 연구 동향은 자외선 흡수제 관련 연구와 아스코르빈산 유도체, 알부틴류와 기타 다른 합성 미백제 등 원료 합성에 대한 연구에 초점이 맞춰졌으나 최근 들어서는 안전한 천연물을 소재로 하여 미백 효능이 있는 원료 개발을 하고 있으며 또한 피부 주름을 개선하고, 피부 자극 및 염증을 완화시켜 주는 화장료의 개발이 활발하게 이루어지고 있다.
본 발명에서 "엑소좀(Exosome)"이란 다양한 세포들로부터 분비되는 막 구조의 작은 소낭을 의미하며, 세포밖 소포체(Extracellular Vesicles, EVs)의 한 종류로 정의된다. 모든 세포들은 다른 세포들 또는 외부 환경과 정보 교환을 하며 이를 위해 세포밖 소포체를 분비한다. 엑소좀은 50~200 nm 정도의 크기를 가지며 단백질, 지질, 핵산 등 생리활성 물질을 포함한다. 엑소좀은 포유류, 박테리아, 식물 등 다양한 세포에 존재하며 기원하는 세포들의 상태를 반영하고 있어 진단 및 치료에 활용할 수 있다. 엑소좀은 이중인지질막 구조체로 세포내 침투가 용이하고, 면역 반응, 신호전달과 같은 다양한 생리적, 병리적 기능을 수행한다.
최근에 식물에서 유래한 엑소좀의 다양한 효능에 관한 연구가 이루어지고 있으며 이의 항산화, 항염 등의 피부 효능에 대해서도 연구가 시작되고 있다. 식물 유래 엑소좀은 식물 세포 자체가 분비하는 생리활성 및 신호전달물질이 들어있어 세포간의 이동과 흡수에 도움을 주는 천연 나노입자이며, 식물에서 정제한 엑소좀은 포유류 유래 엑소좀에 비해 독성이 없다고 알려져 있다.
이러한 엑소좀은 다양한 장점 및 활성으로 인해 의약품, 화장품, 식품 등의 분야에서 활용이 가능한 소재이나 인지질이중막으로 구성되어 있는 구조적인 특징으로 인해 분산력이 낮고 응집하려는 성질이 있다. 또한 고온에서 불안정하고, 화장품 제형을 제조하는 과정에서 쉽게 깨질 수 있으며, 이러한 성질은 제형 내 엑소좀의 안정성을 저하시키고 침전을 일으킬 수 있다. 따라서 지속적인 활성 유지를 위해 수용액 내의 엑소좀의 용해도 및 분산성을 높여 제형 내 안정성을 높일 필요가 있다.
본 발명자들은 다양한 방법을 적용함으로써 수율이 우수할 뿐 아니라 피부 개선 활성 및 제형내 분산안정성이 우수한 식물유래 엑소좀을 제조하기 위하여 노력하여 왔다. 그 결과 천궁, 작약을 특정한 조건에서 열풍 건조처리한 후 효소 처리하고, 수성 2상 시스템을 적용하면 안정성이 우수하며 우수한 피부 미백효과, 세포재생효과 및 피부주름개선 효과를 나타내는 식물 유래 엑소좀이 얻어진다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
(0001) 대한민국 등록특허 제10-2125567호 (2020.06.16) (0002) 대한민국 등록특허 제10-2265811호 (2021.06.16.) (0003) 대한민국 공개특허 제10-2017-0136932호 (2017.12.12)
본 발명은 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀 또는 그 혼합 엑소좀을 유효성분으로 함유하여 안정성이 우수하며 피부 미백, 세포재생, 주름개선 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀 또는 그 혼합 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.
바람직하게는 상기 천궁 엑소좀 또는 작약 엑소좀은, (A)천궁 또는 작약을 40~60℃, 20~24시간 열풍건조 처리하는 단계; (B)열풍건조 처리한 천궁 또는 작약에 셀룰라제(cellulase), 헤미셀룰라제(hemicellulase) 및 펙티나제(pectinase)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 효소를 가하고 40~50℃, pH 4.5~5.0 조건에서 1~3시간 반응시키는 효소처리 단계; (C) 효소 처리한 천궁 또는 작약을 착즙하는 단계; (D)상기 착즙액을 1,000xg~10,000xg에서 원심분리하여 상층액을 수득하는 단계; (E)엑소좀이 존재하는 상기 상층액을 동결건조하는 단계; (F)상기 동결건조물에 PEG(Polyethylene glycol)/Dextran을 사용하여 수성 2상계를 형성하는 단계; 및 (G)상기 수성 2상계 중 엑소좀이 농축된 하층액을 수득하는 단계를 포함하는 방법에 의하여 정제된 것이다.
더욱 바람직하게는 상기 열풍건조 처리는 50℃의 온도에서 24시간 동안 수행하는 것임을 특징으로 한다.
유효성분으로서의 상기 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀 또는 그 혼합 엑소좀은 조성물 전체중량에 대하여 0.0001 ~ 30.0%(w/w) 함유된다.
상기 혼합 엑소좀은 천궁 엑소좀과 작약 엑소좀이 1~3:1~3의 중량비로 혼합된 것이다.
상기 화장료 조성물은 피부 미백용, 피부 세포재생용, 피부 주름개선용임을 특징으로 한다.
상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨토너, 팩, 영양크림, 수분 크림, 에센스, 바디크림, 바디로션, 바디오일, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 젤, 클렌징폼, 클렌징로션, 비누, 패치, 파운데이션, 립스틱, 메이크업 베이스 등의 제형을 가지는 것임을 특징으로 한다.
열풍건조 처리와 효소 처리 및 수성 2상 시스템을 이용하여 정제된 본 발명의 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀 또는 그 혼합 엑소좀은 안정성이 우수하며, 우수한 피부미백 효과, 세포재생 효과, 주름개선 효과를 나타내므로 피부 개선 화장료로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따라 정제된 천궁 유래 엑소좀의 TEM 이미지이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따라 정제된 작약 유래 엑소좀의 TEM 이미지이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따라 정제된 천궁 유래 엑소좀 입자의 크기 분포와 입자수를 확인하기 위한 NTA 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따라 정제된 작약 유래 엑소좀 입자의 크기 분포와 입자수를 확인하기 위한 NTA 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명에 의해 정제된 천궁, 작약 유래 엑소좀의 세포 독성을 MTT assay로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명에 의해 정제된 천궁, 작약 유래 엑소좀의 미백 효능을 티로시나아제 활성 억제율로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명에 의해 정제된 천궁, 작약 유래 엑소좀의 미백 효능을 멜라닌 생성 억제율로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명에 의해 정제된 천궁, 작약 유래 엑소좀의 세포재생 효능을 wound healing assay로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 9는 본 발명에 의해 정제된 천궁, 작약 유래 엑소좀의 주름 개선 효능을 MMP-1 활성 억제율로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 10은 본 발명에 의해 정제된 천궁, 작약 유래 엑소좀의 주름 개선 효능을 COL1A1 발현으로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다.
식물 유래 엑소좀은 식물 세포 자체가 분비하는 생리활성 및 신호전달물질을 함유하고 있으며, 포유류 유래 엑소좀에 비해 독성이 없다고 알려져 있다. 이러한 장점으로 인해 의약품, 화장품, 식품 등의 분야에서 활용이 가능한 소재이나 인지질 이중막으로 구성되어 있는 구조적인 특징으로 인해 분산력이 낮고 응집하려는 성질이 있어, 제형 내에서 그 활성을 지속적으로 유지하기 어렵다는 문제점을 가진다. 본 발명은 천궁, 작약으로부터 엑소좀을 고순도로 분리 정제하여, 이를 화장료로 이용하는 것을 기술적 특징으로 한다.
본 발명에 따르면 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀 또는 그 혼합 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.
천궁(Cnidium officinale)은 쌍떡잎식물 미나리과에 속하는 여러해살이풀이다. 중국이 원산지이며 열매는 맺지 않고 키는 30 ~ 60cm 정도이다. 천궁은 뭉친 어혈을 풀어주고 기를 통하게 하여 혈액순환에 도움이 된다. 진통효과와 진정작용에 효과가 좋으며 천궁을 끓인 물로 머리를 감으면 머리결의 윤기를 더해주고 두피 건강에 좋다. 몸 안에 쌓인 노폐물과 중금속, 독소를 배출하는데 효과적이며 기미나 잡티제거에 효과적이다. 또한 항산화 작용이 뛰어나 피부의 노화를 막아주고 콜라겐의 파괴도 막아주게 되어 피부 건강에 좋다. 천궁에는 정유 성분인 ligustilide, cnidilide, senkyunolide, butylphthalide, butylidenephthalide, butylidenephthalide가 함유되어 있고 pretnenolone, vanillin, ferulic acid 등이 있으며 주요 성분인 TMP(Tetramethylprazine)는 지질과산화정도를 줄이고 항산화 효소인 SOD, GSH-Px 등의 활성을 현저히 증가시키는 것으로 확인되었으며, LDL에 의해 유도된 혈관의 산화적 손상에 대한 TMP의 효능은 미세 혈관의 손상을 감소시키는 것으로 확인되었다. 본 발명의 천궁 엑소좀 제조에는 전초, 뿌리가 사용될 수 있다.
작약(Paeonia lactiflora)은 쌍떡잎식물강 미나리아재비목 미나리아재비과의 다년초로 높이는 약 50 ~ 90cm까지 자란다. 잎은 겹잎으로 5월부터 초여름까지 모란과 비슷한 모습을 한 큰 꽃을 피우며 붉은색, 흰색, 분홍색 등의 색이 있다. 작약은 중국을 기원으로 하여 중앙아시아 및 남유럽 원산에서 옛날부터 관상과 약용으로 재배되어 이용되어 왔으며 육질성의 뿌리를 건조한 것을 한약재로 이용한다. 작약에는 paeoniflorin, paeonin, paeonol, 8-debenzoylpaeonifilorin, monoterpene glycoside로 albiflorin R1 등의 성분이 함유되어 있고, Paeoniflorin 성분은 진통, 진정 작용을 갖고 있어 근육의 긴장을 풀어주거나 혈관의 기능을 원활하게 하는 효능이 있다. 빈혈, 생리 불순 등 여성 질환에 도움이 되며 뛰어난 항염 및 항바이러스작용을 통해 면역력을 강화하는 데 이로운 작용을 한다. 또한 염증성질환을 개선하는데 효과적이며 각종 염증성 피부질환들을 예방하는데 좋은 효과가 있다. 본 발명의 작약 엑소좀의 제조에는 잎, 뿌리가 사용될 수 있다.
바람직하게는 본 발명 유효성분으로서의 상기 천궁, 작약 유래 엑소좀은 다음과 같은 방법으로 분리 정제된다.
(A)천궁 또는 작약을 40~60℃, 20~24시간 열풍건조 처리하는 단계; (B)열풍건조 처리한 천궁 또는 작약에 셀룰라제(cellulase), 헤미셀룰라제(hemicellulase) 및 펙티나제(pectinase)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 효소를 가하고 40~50℃, pH 4.5~5.0 조건에서 1~3시간 반응시키는 효소처리 단계; (C) 효소 처리한 천궁 또는 작약을 착즙하는 단계; (D)상기 착즙액을 1,000xg~10,000xg에서 원심분리하여 상층액을 수득하는 단계; (E)엑소좀이 존재하는 상기 상층액을 동결건조하는 단계; (F)상기 동결건조물에 PEG(Polyethylene glycol)/Dextran을 사용하여 수성 2상계를 형성하는 단계; 및 (G)상기 수성 2상계 중 엑소좀이 농축된 하층액을 수득하는 단계를 포함하는 방법에 의하여 정제된다.
상기 (A) 단계에서 열풍건조 처리는 열풍건조기를 이용하여 천궁 또는 작약 생물을 40~60℃의 온도에서 20~24시간 동안 열풍건조하는 것이며, 더욱 바람직하게는 50℃의 온도에서 24시간 열풍건조하는 것이다.
식물의 경우 여러 환경적인 요인에 의해 엑소좀의 분비량이 달라질 수 있다. 천궁과 작약을 40~60℃의 온도에서 20~24시간 동안 열풍건조 처리하는 경우 엑소좀의 분비량이 증가하는 것을 확인하였다.
이어서, 열풍건조 전처리된 천궁 또는 작약에 가수분해효소를 가하여 효소반응을 시킨다. 상기 (B) 단계에서 천궁 또는 작약을 효소처리하는 공정에는 셀룰라제(cellulase), 헤미셀룰라제(hemicellulase) 및 펙티나제(pectinase)와 같은 식물 세포벽 성분을 가수 분해할 수 있는 효소로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 효소가 사용된다. 상기 효소처리 공정은 40~50℃, pH 4.5~5.0 조건에서 1~3시간 반응시키는 것을 특징으로 하며, 더욱 바람직하게는 50℃에서 2시간 수행하는 것임을 특징으로 한다. 식물의 세포벽은 셀룰로오스(cellulose), 헤미셀룰로오스(hemicellulose), 펙틴(pectin), 리그닌(lignin) 등의 성분으로 이루어져있으며 이 성분들은 대부분 공유결합, 수소결합, 이온결합, 소수결합 등을 통하여 강하게 연결되어 있어, 외부로부터의 공격에 대해 식물 조직을 방어한다. 이러한 식물 세포벽 성분을 효소를 사용하여 가수분해하여 엑소좀 추출을 용이하게 한다.
상기 (C) 단계에서 효소 처리한 천궁 또는 작약을 착즙하는 공정에 사용되는 스크류는 교반 속도가 20~50 rpm인 것을 사용하는 것이 바람직하다. 효소처리에 의한 식물세포벽의 투과율 변화로 인해 즙이 쉽게 빠져나오기 때문에 교반 속도가 일정 이하인 스크류를 사용하는 것이 좋다.
상기 (D) 단계에서 사용되는 원심분리법은 크기, 모양, 밀도, 점성, 로터 속도에 따른 원심력을 이용하여 용액의 입자를 분리해내는 방법을 의미한다. 순차적으로 rpm을 조절하여 큰 오염 물질 제거가 필요하며 수성 2상계를 형성하기 위한 최종 용액을 얻기 위해서는 10,000xg에서 수행하는 것이 더욱 바람직하다.
상기 (E) 단계에서 사용되는 동결건조는 용기의 온도를 급격하게 낮추어 건조시키고자 하는 물질을 얼린 다음 용기 내부의 압력을 진공에 가깝게 하여 재료에 포함된 고체화된 용매를 바로 수증기로 승화시켜 건조하는 방법이다. -50 ~ -80℃에서 15~24시간동안 동결하고, 동결건조기에서 진공상태로 72~120시간동안 건조한다. 이때 진공상태는 통상 동결건조기의 압력 상태를 의미한다.
엑소좀을 효율적으로 분리 정제하기 위하여 본 발명에서는 상호간에 잘 용해되지 않은 2종류의 수용액으로 2층을 만들어 각층으로의 친화성 차이를 이용한 분리법의 하나인 수성 2상분배법(aqueous two phase partition method)을 사용하였다.
수성 2상계를 형성하는 방법에는 일반적으로 PEG/염(염으로는 sulfate, phosphate, citrate 등)도 사용할 수 있으나, 본 발명의 목적을 달성하기 위해서는 PEG/Dextran을 사용하는 것이 바람직하다. Dextran은 박테리아 작용에 의해 얻은 천연 고분자로 화장품 제형에서 점증제, 결합제, 벌킹제로 사용한다.
상기 (F) 단계에서 수성 2상계의 형성에 있어서 PEG는 분자량이 10,000~35,000인 것을 1~15중량%, 바람직하게는 2~5중량% 사용하고 Dextran은 분자량이 300,000~650,000인 것을 1~8 중량%, 바람직하게는 1~3중량% 사용하는 것을 특징으로 한다. 상기 PEG와 Dextran이 3.3중량%:1.7중량%의 농도비율로 사용되는 경우에 엑소좀의 수율이 가장 높고, 안정성이 가장 우수하므로 더욱 바람직하다.
엑소좀의 순도를 높이기 위해, 상기 (G)단계에 이어서 동일한 농도의 수성 2상계 용액을 사용하여 수성 2상계를 형성하고 하층액을 수득하는 과정을 2~3회 수행하는 공정을 추가적으로 수행할 수 있다.
이와 같은 방법에 의하여 제조된 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀 및 그 혼합 엑소좀은 우수한 피부 미백 효과(시험예 7, 시험예 8), 피부세포재생 효과(시험예 9), 피부 주름개선 효과(시험예 10, 시험예 11, 시험예 13)를 나타내었다.
그러므로 상기 천궁, 작약 유래 엑소좀은 피부 미백용, 피부 세포재생용, 피부 주름개선용 화장료 조성물에 사용될 수 있다. 이때 상기 유효성분으로서의 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀 또는 그 혼합 엑소좀은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.0001 내지 30.0%(w/w) 함유될 수 있다. 상기 혼합 엑소좀은 천궁 엑소좀과 작약 엑소좀이 1~3:1~3의 중량비로 혼합된 것이며, 더욱 바람직하게는 동일 중량비율로 혼합된 것이다.
상기의 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 가능하며 예를 들면, 스킨로션, 스킨토너, 팩, 영양크림, 수분 크림, 에센스, 바디크림, 바디로션, 바디오일, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 젤, 클렌징폼, 클렌징로션, 비누, 패치, 파운데이션, 립스틱, 메이크업 베이스 등으로 제조될 수 있다.
[실시예]
이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 시험예에 의거하여 좀 더 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것이 아니고, 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 치환 및 균등한 타 실시예로 변경할 수 있음은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 명백할 것이다.
실시예 1: 천궁 엑소좀의 제조
천궁 열풍건조 처리
천궁 뿌리 생물 200g을 열풍건조기를 이용하여 50℃의 온도에서 24hr 열풍건조 처리를 실행하였다.
천궁 효소 처리
열풍건조 처리한 천궁에 증류수를 가하고 cellulase와 pectinase를 각각 기질 대비 1.2%, 0.1% 첨가하여 50℃의 온도와 pH 4.5~5.0 조건에서 2시간 반응시켰다. 반응 후 천궁 원물과 반응액을 모두 착즙에 사용하였다.
천궁 착즙
효소 처리한 천궁을 일반 착즙기를 사용하여 30 rpm의 저속 스크류로 천궁 착즙을 수행하였으며 수득한 천궁 착즙액은 메쉬망에 걸러 부유물을 제거하였다. 회수한 천궁 착즙액은 정제를 진행하기 전까지 -80℃에서 보관하였다.
엑소좀 정제를 위한 상층액 회수
천궁 착즙액은 엑소좀 정제를 위해 큰 오염 물질 제거가 필요하기 때문에 10,000xg에서 10분동안 4℃에서 원심분리를 수행하였다. 원심분리를 수행 후 수성 2상계를 형성하기 위해 상층액을 회수하였다.
상층액 동결건조
엑소좀의 대량생산을 위해 상층액의 부피를 줄이는 목적으로 동결건조를 수행하였다. -80℃에서 20시간동안 동결하고, 동결건조기에서 진공상태로 100시간동안 건조하였다. 이때 진공상태는 통상 동결건조기의 압력 상태를 의미하며 동결 및 건조 시간은 용액의 부피에 따라 달라질 수 있다.
수성 2상계 형성
동결건조한 상층액에 정제수를 추가하고 PEG(Polyethylene glycol)/Dextran을 사용하여 수성 2상계를 형성하였다. PEG(Sigma Aldrich에서 구매)는 분자량이 10,000~35,000인 것을 3.3 중량% 사용하고 Dextran(Sigma Aldrich에서 구매)은 분자량이 300,000~650,000인 것을 1.7 중량% 사용하여 수성 2상 시스템을 형성하였다.
천궁 엑소좀의 회수
상층액과 PEG/Dextran 용액을 혼합한 후 1,000xg에서 10분동안 4℃에서 원심분리를 수행하였다. 원심분리 후 상층액을 제거하여 엑소좀을 회수하였다.
추가 세척 공정
순도를 높이기 위해 회수된 하층액에 동일한 농도의 상기 수성 2상계 용액을 넣어 추가 세척 공정을 수행하였다. 3회 반복 처리 후 최종 엑소좀이 농축된 하층액을 회수하였다.
실시예 2: 작약 엑소좀의 제조
작약 뿌리를 사용하여 상기 실시예와 동일하게 하여 작약 유래 엑소좀을 정제하였다.
실시예 3: 천궁, 작약 혼합 엑소좀의 제조
상기 실시예 1, 2에서 제조한 천궁 엑소좀과 작약 엑소좀을 동일 중량비율로 혼합하여 제조하였다.
비교예 1: 천궁 추출물 제조
천궁 건조물 10g을 정제수 100g에 넣고 80℃에서 3시간동안 추출하였다. 추출 후 감압여과를 수행하여 천궁 추출물을 얻은 후 회전증발농축기를 사용하여 증류하여 파우더 형태로 샘플을 수득하였다.
비교예 2: 작약 추출물 제조
작약 건조물 10g을 정제수 100g에 넣고 80℃에서 3시간동안 추출하였다. 추출 후 감압여과를 수행하여 작약 추출물을 얻은 후 회전증발농축기를 사용하여 증류하여 파우더 형태로 샘플을 수득하였다.
시험예 1: 천궁 엑소좀의 특성 분석: TEM 분석
정제한 천궁 유래 엑소좀의 구조를 확인하기 위해 투과 전자 현미경(TEM)으로 분석하였다. 도 1은 상기 실시예 1에 따라서 정제된 천궁 유래 엑소좀의 TEM 분석 이미지이다. 분석 결과, 구형의 인지질 이중층 구조로 된 약 160nm의 입자의 존재를 확인하였다.
시험예 2: 작약 엑소좀의 특성 분석: TEM 분석
정제한 작약 유래 엑소좀의 모양을 확인하기 위해 투과 전자 현미경(TEM)으로 분석하였다. 도 2는 상기 실시예 2에 따라서 정제된 작약 유래 엑소좀의 TEM 분석 이미지이다. 분석 결과, 구형의 인지질 이중층 구조로 된 약 150nm의 입자의 존재를 확인하였다.
시험예 3: 천궁 엑소좀의 특성 분석: NTA 분석
정제한 천궁 유래 엑소좀의 입자 크기 분포와 단위 부피당 입자 수를 확인하기 위해 나노입자추적분석(Nanoparticle Tracking Analysis, NTA)으로 분석하였다. 도 3은 상기 실시예 1에 따라서 정제된 천궁 유래 엑소좀의 NTA 분석 결과를 나타낸 그래프이며 분석 결과, 입자들의 평균 크기 163.8nm와 1 mL의 단위 부피당 8.10 × 1010 개의 농도를 확인하였다.
시험예 4: 작약 엑소좀의 특성 분석: NTA 분석
정제한 작약 유래 엑소좀의 입자 크기 분포와 단위 부피당 입자 수를 확인하기 위해 나노입자추적분석(Nanoparticle Tracking Analysis, NTA)으로 분석하였다.
도 4는 상기 실시예 2에 따라서 정제된 작약 유래 엑소좀의 NTA 분석 결과를 나타낸 그래프이며 분석 결과, 입자들의 평균 크기 154.7nm와 1 mL의 단위 부피당 7.40 × 1010 개의 농도를 확인하였다.
시험예 5: 천궁, 작약 유래 엑소좀의 온도별 안정성 분석
본 발명 실시예 1, 2에 따라 정제한 천궁, 작약 유래 엑소좀의 온도별 안정성을 확인하였다. 하기 표 1은 상기 실시예 1, 2에 따라서 정제된 천궁, 작약 유래 엑소좀을 12주 간 4℃, 25℃, 45℃에서 보관 후 나노입자추적분석(NTA)을 통해 입자의 크기와 농도를 나타낸 표이다.
천궁 엑소좀
(4℃보관)		 천궁 엑소좀
(25℃보관)		 천궁 엑소좀
(45℃보관)
Particle Number
(Particles/ml)		 Particle Size
(nm)		 Particle Number
(Particles/ml)		 Particle Size
(nm)		 Particle Number
(Particles/ml)		 Particle Size
(nm)
초기 8.10 x 1010 163.8 8.10 x 1010 163.8 8.10 x 1010 163.8
2주차 8.07 x 1010 162.7 8.11 x 1010 161.8 8.11 x 1010 160.3
4주차 8.11 x 1010 162.6 8.10 x 1010 160.4 8.08 x 1010 161.8
8주차 8.01 x 1010 160.7 8.17 x 1010 159.3 8.01 x 1010 160.9
12주차 8.14 x 1010 159.6 8.21 x 1010 160.2 8.04 x 1010 158.7
작약 엑소좀
(4℃보관)		 작약 엑소좀
(25℃보관)		 작약 엑소좀
(45℃보관)
Particle Number
(Particles/ml)		 Particle Size
(nm)		 Particle Number
(Particles/ml)		 Particle Size
(nm)		 Particle Number
(Particles/ml)		 Particle Size
(nm)
초기 7.40 x 1010 154.7 7.40 x 1010 154.7 7.40 x 1010 154.7
2주차 7.37 x 1010 155.6 7.36 x 1010 154.2 7.33 x 1010 153.1
4주차 7.33 x 1010 154.7 7.32 x 1010 155.7 7.40 x 1010 154.3
8주차 7.37 x 1010 152.6 7.33 x 1010 154.1 7.38 x 1010 154.7
12주차 7.36 x 1010 152.5 7.37 x 1010 156.9 7.41 x 1010 156.9
온도별 12주 안정성을 분석한 결과, 실시예에 해당하는 천궁, 작약 유래 엑소좀의 크기 및 농도 변화가 4℃, 25℃, 45℃ 조건에서 모두 안정적임을 확인하였다.
시험예 6: 천궁, 작약 엑소좀의 세포독성 평가
천궁 엑소좀, 작약 엑소좀 및 천궁 추출물, 작약 추출물의 세포독성을 확인하기 위해 MTT assay 평가를 진행하였다. 96well 플레이트에 사람의 섬유아세포 세포주(human dermal fibroblast, HDFa)를 1×105 cells/mL의 농도로 접종 후 37℃로 18시간동안 5% CO2 하에 배양하였다. 배양 후, 배지를 제거하고 PBS buffer로 세척한 후 새로운 배지와 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀 및 천궁 추출물, 작약 추출물을 농도 별로 투여하고 다시 24시간동안 배양하였다. 세포의 생존율을 측정하기 위해 MTT solution(5mg/mL)을 첨가한 후 4시간 동안 형성된 formazan을 Dimethyl sulfoxide(DMSO)로 용해하고 ELISA reader를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다.
도 5는 상기 실시예 1, 2에 따라서 정제된 천궁, 작약 유래 엑소좀의 세포독성을 MTT assay로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다. 시험 결과, 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀, 천궁과 작약 혼합 엑소좀 및 천궁 추출물, 작약 추출물을 처리하였을 때 모든 농도에서 세포독성이 나타나지 않았다.
시험예 7: 천궁, 작약 엑소좀의 미백 효능 평가
Tyrosinase에 의해 tyrosine이 dopaquinone으로 산화되면서 피부에서는 색소침착이 일어난다. 엑소좀의 미백 효능을 확인하기 위해 추출물과 비교하여 피부를 검게 만드는 티로시나아제 효소 활성 억제 시험을 진행하였다. 버섯 유래의 티로시나아제와 티로신은 Sigma Chemical에서 구매하여 사용하였으며, 티로시나제 활성은 0.1M 포스페이트 버퍼(pH 6.5) 150㎕ 와 버섯 티로시나제(2100unit/㎖, 0.05M 포스페이트 버퍼, pH 6.5) 8㎕, 1.5mM 농도의 L-티로신 36㎕ 와 함께 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀, 그 혼합 엑소좀과 천궁 추출물, 작약 추출물을 농도별로 처리하였다. 티로시나아제 억제 활성은 시료를 37℃에서 15분 동안 반응을 진행한 후 490 nm에서 흡광도를 측정하여 확인하였다. 이때 음성 대조군으로는 PBS를 처리하였으며 양성 대조군으로는 Niacinamide 0.01%를 처리하였다.
도 6은 상기 실시예에 따라서 정제된 천궁, 작약 유래 엑소좀의 미백 효능을 티로시나아제 활성 억제율로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다. 시험 결과, 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀과 천궁 추출물, 작약 추출물을 처리하였을 때 농도 의존적으로 티로시나아제 활성 억제율이 증가하였으며, 추출물에 비해 천궁, 작약 유래 엑소좀을 처리하였을 때 활성 억제율이 더 증가됨을 확인하였다. 또한 천궁과 작약 혼합 엑소좀을 처리하였을 때 가장 높은 활성 억제율을 나타내는 것을 확인하였다. 이때 양성 대조군인 Niacinamide 0.01%를 처리하였을 때는 45.76% 억제율을 보였다.
시험예 8: 천궁, 작약 엑소좀의 미백 효능 평가
천궁, 작약 유래 엑소좀의 미백 효능을 확인하기 위해 추출물과 비교하여 멜라닌 생성 억제 시험을 진행하였다. 마우스에서 유래한 B16F10 세포주(멜라닌 분비 세포)를 접종 후 10% FBS를 첨가한 Dulbecco Modified Eagle Medium(DMEM) 배양 배지에서 37℃로 24시간 동안 5% CO2 하에 배양하였다. 배양 후 배지를 버리고 새 배지로 교체 후 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀, 그 혼합 엑소좀과 천궁 추출물, 작약 추출물을 농도별로 처리하고 72시간 배양하였다. 배양 후 세포를 Trypsin-EDTA를 처리 후 원심분리하여 회수하였다. 회수한 세포를 세척 후 1N NaOH 500μL를 처리하고 100℃에서 10분간 반응시켜 멜라닌을 용해하였다. 멜라닌의 양은 405nm에서 흡광도를 측정하여 확인하였다. 이때 음성 대조군으로는 PBS를 처리하였으며 미백제로 알려진 합성물질인 arbutin을 표준시료로 사용하고 결과는 %로 환산하였다.
도 7은 상기 실시예에 따라서 정제된 천궁, 작약 유래 엑소좀의 미백 효능을 멜라닌 생성 억제율로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다. 시험 결과, 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀과 천궁 추출물, 작약 추출물을 처리하였을 때 농도 의존적으로 멜라닌 생성 억제율이 증가하였으며, 추출물에 비해 천궁, 작약 유래 엑소좀을 처리하였을 때 생성 억제율이 더 증가됨을 확인하였다. 또한 천궁과 작약 혼합 엑소좀을 처리하였을 때 가장 높은 멜라닌 생성 억제율을 나타내는 것을 확인하였다.
시험예 9: 천궁, 작약 엑소좀의 세포재생 효능 평가
천궁, 작약 유래 엑소좀의 세포재생 효능을 확인하기 위해 wound healing assay 평가를 진행하였다. 세포는 화학적 및 물리적 자극에 의해 손상을 받게 되면 다양한 케모카인(chemokine)과 사이토카인(cytokine)을 분비함과 동시에 피부 손상 부위로 이동해 세포의 증식을 유도한다. 따라서 피부 세포의 성장 및 이동을 시험하는 wound healing assay를 통해 시료에 의한 세포 재생 유도 효과를 확인하였다. 각질형성세포(HaCaT)를 12well 플레이트에 2×105 cells/mL의 농도로 접종 후 37℃로 24시간동안 5% CO2 하에 배양하였다. 배양 후, 200 ㎕ 파이펫 팁을 이용하여 세포를 긁어 내었다. 긁어낸 후 떨어져나간 세포들은 PBS buffer로 반복해서 세척하고 1.5% 소혈청이 포함된 DMEM 배지로 교체한 후 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀 및 천궁 추출물, 작약 추출물을 처리하고 양성대조군으로는 Madecassoside를 0.1% 처리하였다. 그 후 18시간 동안 배양하였으며 상처가 생긴 후 0시간과 8시간에 같은 위치를 현미경으로 촬영하여 8시간 동안 줄어든 면적을 Image J(National Institutes of Health, USA)로 측정하여 평균값을 계산하였다.
도 8은 상기 실시예에 따라서 정제된 천궁, 작약 유래 엑소좀의 피부재생 효능을 wound healing assay로 평가한 결과를 나타낸 이미지이며, 천궁, 작약 엑소좀과 천궁, 작약 추출물을 1% 처리하였을 때의 결과를 나타내었다.
도 9는 wound gap 면적율에 대한 그래프 결과이며, 농도 별 시료를 처리한 결과를 나타내었다. 시험 결과, 천궁 유래 엑소좀, 작약 유래 엑소좀을 처리하였을 때 wound gap 면적이 감소하였으며 천궁, 작약 혼합 엑소좀을 처리하였을 때 더 높은 면적 감소율을 보였다. 이로 인해 세포의 성장 및 이동이 증가하여 세포재생에 효과가 있음을 확인하였다. 이 때 양성 대조군인 Madecassosid 0.1%를 처리하였을 때는 43.29% 면적율을 보였다.
시험예 10: 천궁, 작약 엑소좀의 주름개선 효능 평가
천궁, 작약 유래 엑소좀의 주름개선 효능을 확인하기 위해 추출물과 비교하여 MMP-1(Matrix Metalloproteinase-1) 발현에 미치는 영향을 평가를 진행하였다. 사람의 섬유아세포 세포주(human dermal fibroblast, HDFa)를 접종 후 100 IU/mL penicillin, 100 μg/mL streptomycin을 첨가한 Fibroblast Basal Medium (Medium 106) 배양 배지에서 37℃로 24시간 동안 5% CO2 하에 배양하였다. 배양 후 배지를 버리고 세포 손상을 유도하기 위해 UVB 20 mJ/cm2를 조사한 후 상기 실시예의 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀, 그 혼합 엑소좀 및 비교예의 천궁 추출물, 작약 추출물을 처리하고 48시간 배양하였다. 배양 후에 TransZol reagent를 이용하여 RNA를 추출한 뒤 RT-PCR(실시간 유전자 중합효소 연쇄반응)을 진행하여 MMP-1의 mRNA 변화량을 측정하였다. PCR에 의하여 생성된 산물은 1% agarose gel에서 전기영동하여 Gel Documentation system으로 확인하였다. 음성 대조군으로는 PBS를 처리하였으며 양성 대조군으로는 TGF-β1을 20nM를 처리하였다.
도 10은 상기 실시예에 따라서 정제된 천궁, 작약 유래 엑소좀의 주름 개선 효능을 확인하기 위한 MMP-1 활성 억제 평가 결과를 나타낸 그래프이다. 시험 결과, 천궁 유래 엑소좀과 작약 유래 엑소좀을 처리하였을 때 농도 의존적으로 MMP-1의 발현이 감소하였으며 천궁 추출물과 작약 추출물을 처리하였을 때보다 더 높은 주름개선 효과가 있음을 확인하였다. 천궁과 작약 혼합 엑소좀을 처리하였을 때도 주름개선 효과가 우수함을 확인하였다. 이때 양성 대조군인 TGF-β1을 20nM를 처리하였을 때는 42.36% 발현율을 보였다.
시험예 11: 천궁, 작약 엑소좀의 주름개선 효능 평가
천궁, 작약 유래 엑소좀의 주름개선 효능을 확인하기 위해 추출물과 비교하여 COL1A1 발현에 미치는 영향을 확인하였다. 사람의 섬유아세포 세포주(human dermal fibroblast, HDFa)를 접종 후 100 IU/mL penicillin, 100 μg/mL streptomycin을 첨가한 Fibroblast Basal Medium(Medium 106) 배양 배지에서 37℃로 24시간 동안 5% CO2 하에 배양하였다. 배양 후 배지를 버리고 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀, 혼합 엑소좀 및 천궁 추출물, 작약 추출물을 처리하고 48시간 배양하였다. 배양 후에 TransZol reagent를 이용하여 RNA를 추출한 뒤 RT-PCR(실시간 유전자 중합효소 연쇄반응)을 진행하여 피부 연결 조직을 유지시키는 collagen의 mRNA 변화량을 측정하였다. PCR에 의하여 생성된 산물은 1% agarose gel에서 전기영동하여 Gel Documentation system으로 확인하였다. 이때 음성 대조군으로는 PBS를 처리하였으며 양성 대조군으로는 TGF-β1 20nM을 처리하였다.
도 11은 상기 실시예에 따라서 정제된 천궁, 작약 유래 엑소좀의 주름개선 효능을 COL1A1 발현으로 평가한 결과를 나타낸 그래프이다. 시험 결과, 천궁 유래 엑소좀과 작약 유래 엑소좀을 처리하였을 때 농도 의존적으로 COL1A1의 발현이 증가하였으며 천궁 추출물과 작약 추출물을 처리하였을 때보다 더 높은 주름개선 효과가 있음을 확인하였다. 천궁과 작약 혼합 엑소좀을 처리하였을 때도 주름개선 효과가 우수함을 확인하였다. 이때 양성 대조군인 TGF-β1 20nM을 처리하였을 때는 213.18% 발현율을 보였다.
제형예 1~3: 크림의 제조
하기 표 2의 조성으로 상기 실시예에 따라서 정제된 천궁 유래 엑소좀, 작약 유래 엑소좀을 포함하는 크림을 통상의 방법으로 제조하였다. 비교예 1의 천궁 추출물을 함유하는 크림을 비교 제형예 1로 하고 비교예 2의 작약 추출물을 함유하는 크림을 비교 제형예 2로 하였다.
성분 제형예 1 제형예 2 제형예 3 비교
제형예 1		 비교
제형예 2
함량(중량 %)
천궁 엑소좀(실시예 1) 6 - - - -
작약 엑소좀(실시예 2) - 6 - - -
천궁 + 작약 엑소좀(실시예 3) - - 6 - -
천궁 추출물(비교예 1) - - - 6 -
작약 추출물(비교예 2) - - - - 6
글리세린 10 10 10 10 10
부틸렌글라이콜 5 5 5 5 5
글리세릴올리에이트 1.8 1.8 1.8 1.8 1.8
세테아릴올리베이트 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
솔비탄올리베이트 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
세틸에틸헥사노에이트 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
비즈왁스 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
스쿠알란 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
1,2-헥산다이올 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
콜레스테릴/베헤닐/옥틸도데실라우로일글루타메이트 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
디메치콘 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
사이클로펜타실론삭/사이클로헥사실록산 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
세티아릴알코올 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
미네랄 오일 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5
디소듐이디티에이 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
비에이치티 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
토코페릴아세테이트 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3
판테놀 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
에칠헥실메톡시신나메이트 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
향 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량 잔량
시험예 12: 천궁, 작약 엑소좀의 제형 성상 안정성 분석
상기 제형예 1~3에 따라서 제조된 크림의 성상안정성 시험을 진행하였다. 제조된 크림을 12주 간 Cycling Chamber에서 24시간 간격으로 4℃ ↔ 45℃의 온도 변화를 주면서 그 성상의 변화를 관찰하였다. 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
주차 제형예 1 제형예 2 제형예 3
초기 - - -
2주차 - - -
4주차 - - -
8주차 - - -
12주차 - - -
(-; 변화없음, +; 약간 색의 변화, ++; 색변화 또는 약간의 침전, +++; 색변화와 침전 발생)
천궁 엑소좀(실시예 1), 작약 엑소좀(실시예 2), 천궁, 작약 혼합 엑소좀(실시예 3)을 함유한 크림 제형의 안정성을 관찰한 결과, 성상안정성이 유지되는 것을 확인하였다.
시험예 13: 천궁, 작약 엑소좀의 주름개선 평가
천궁, 작약 유래 엑소좀의 주름 개선 효능을 확인하기 위해 30 ~ 50대의 성인 여성 20명을 대상으로 상기 제형예에서 제조된 크림을 얼굴 양쪽면에 바르고, LED 광원장치로 633nm의 적색광을 6주간 누적 시간 24시간 조사한 후, 주름 개선 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.
표 4는 상기 실시예에 따라서 정제된 천궁, 작약 유래 엑소좀의 주름개선 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가한 결과를 나타낸 표이다.
주름개선효과
우수 약간 없음
제형예 1 10 6 4
제형예 2 10 7 3
제형예 3 13 5 2
비교제형예1 1 4 15
비교제형예2 2 4 14
상기 표 4의 결과에서도 알 수 있듯이, 본 발명의 천궁 엑소좀, 작약 엑소좀, 천궁, 작약 혼합 엑소좀이 포함된 크림에서 우수한 피부 주름개선 효과를 나타내었다.

Claims (8)

  1. 천궁 엑소좀과 작약 엑소좀이 각각 1~3:1~3의 중량비로 혼합되어 이루어지는 천궁 엑소좀과 작약 엑소좀의 혼합 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 있어서,
    상기 천궁 엑소좀 또는 작약 엑소좀은,
    (A)천궁 또는 작약을 50℃, 24시간 열풍건조 처리하는 단계; (B)열풍 건조 처리한 천궁 또는 작약에 셀룰라제(cellulase), 헤미셀룰라제(hemicellulase) 및 펙티나제(pectinase)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 효소를 가하고 40~50℃, pH 4.5~5.0 조건에서 1~3시간 반응시키는 효소처리 단계; (C)효소 처리한 천궁 또는 작약을 착즙하는 단계; (D)상기 착즙액을 1,000xg~10,000xg에서 원심분리하여 상층액을 수득하는 단계; (E)엑소좀이 존재하는 상기 상층액을 동결건조하는 단계; (F)상기 동결건조물에 PEG(Polyethylene glycol)/Dextran을 사용하여 수성 2상계를 형성하는 단계; 및 (G)상기 수성 2상계 중 엑소좀이 농축된 하층액을 수득하는 단계를 포함하는 방법에 의하여 정제된 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서, 천궁 엑소좀과 작약 엑소좀의 혼합 엑소좀은 조성물 전체중량에 대하여 0.0001~30.0%(w/w) 함유되는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  5. 삭제
  6. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 미백용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 세포재생용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 주름개선용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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