TWI601540B - Human Skin Epidermal Cell Proliferator, Compositions Containing Its Skin, and Cosmetic Ingredients - Google Patents
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Description
本申請案係基於已先於日本提申之特願2010-158104號(申請日：2010年3月15日)，而主張其優先權利益，並參照其揭露內容整體，而加以引用於此。
本發明係有關於一種以燕窩之酵素分解物為有效成分之人類皮膚表皮細胞增殖促進劑。且，本發明並有關於一種包含上述有效成分之燕窩之酵素分解物之皮膚外用組成物及化妝用料。
肌膚乾燥、皺紋、肌膚鬆弛、彈性不佳等肌膚問題，尤其受到女性重視與關心。該等肌膚問題通常被認為係由環境因素、老化等熟齡化因素，甚至壓力等心理因素等所導致。尤其，近年紫外線增加及空調之泛用等所伴隨之生活環境之乾燥化等所導致對肌膚造成不良影響之環境因素可謂正逐漸增加。
皮膚組織係由表皮、真皮、皮下組織所構成。表皮係形成皮膚最外層之構成要素，已知基本上更包含角質層、顆粒層、棘狀層、基底層。表皮中，於最下層之基底層可分裂新生新的角質細胞(表皮細胞)，細胞則逐漸朝上方改變功能與形態而日益上昇，成為角質層之角質細胞後，最後乃自皮膚表面剝落。人類之健康皮膚自基底層內表皮細胞之分裂至上昇成為角質細胞再由皮膚表面剝落，據稱需時28天程度。上述自表皮細胞之分裂至細胞表面之細胞剝剝離之一連串流程稱為代謝，上述代謝在表皮反覆進行，而就皮膚進行新陳代謝以維持健康之皮膚。
然而，已知熟齡化將導致上述代謝之周期延緩，並咸認代謝周期之延緩將導致皮膚表面殘留老廢角質等，而造成肌膚暗沈及肌膚乾燥之狀態等。
因此，促進皮膚表皮細胞之增殖，而活化皮膚之新陳代謝，並維持代謝周期，使皮膚表面常保健康，即可提昇肌膚滋潤度、調理肌膚紋理，可謂將促成生活品質(QOL)之提昇。
表皮(上皮)細胞成長因子(Epidermal growth factor(EGF))係已知存在包含人類在內之動物體內之上皮細胞再生因子，發現自老鼠之頜下腺之萃取物而為蛋白質之一種(mEGF(老鼠EGF))。EGF就各種動物均各自不同，老鼠EGF並不直接在人體展現細胞增殖促進效果。亦已發現人類EGF，並已知EGF可對皮膚表面之細胞作用而促進細胞之增殖。另，舉例言之，特開2009-234980號公報中，已揭露人類隨著年齡增長，EGF之分泌量亦逐漸減少(Life Sciences vol. 31,pp679-683,1982)，此乃肌膚老化現象之因素之一之內容。因此，咸認對肌膚補充EGF，即可促進人類表皮之細胞新生(增殖)，而維持良好肌膚狀態。
燕窩係金絲燕以自己的唾液構成絲狀而築成之巢，已知其成分包含多量之醣蛋白質，而幾乎不含脂質。燕窩迄今使用於中菜作為食材，亦為中藥之原料等。近年，亦已開發以燕窩為原料之健康食品等，至於外用劑及化妝用料等外用用途之應用例則尚少為人知。
特開2003-095961號公報中已揭露使用燕窩之酵素分解物之口服用之美肌促進劑。然而，其中僅揭露口服用途，而未就外用用途之利用可能性作任何揭露及暗示。又，其效果係肌膚保水度之提昇，而實現潤澤之肌理細緻之肌膚，並未就促進表皮之細胞增殖以維持代謝周期，而維持、提昇肌理細緻等肌膚狀態等用途作任何揭露。
WO99/022709中，已揭露包含燕窩之含水溶劑萃取物，特別是熱水萃取物之化妝用料。該化妝用料可使用於皮膚保養用途，係使用於外用用途者。然而，其中使用之萃取物係就燕窩加以熱水萃取去除固形物後而成者，與就燕窩整體予以酵素處理而直接使用之燕窩酵素分解物截然不同。且，關於其效果，亦與基於表皮之細胞增殖之促進之本發明效果不同。
特開2009-234980號公報即有關於包含EGF關聯物質與神經胺酸之美容組成物，其中，已揭露利用燕窩作為神經胺酸之補充來源之一。然而，其中，神經胺酸係用於活化EGF關聯物質者，EGF關聯物質乃必要之成分，而燕窩並非必要成分，僅與蛋及牛乳同為神經胺酸之供給來源而已。
本發明人此次發現了燕窩之酵素分解物具有類似人類EGF之優良人類表皮細胞增殖促進效果。與人類無密切關聯之金絲燕所製造之燕窩之酵素分解物竟展現類似人類EGF之細胞增殖促進效果，乃出乎預料之驚人發現。且，酵素分解物所展現之效果較燕窩之水萃取物更明顯，此亦為驚人之結果。本發明即以該等發現為依據。
故而，本發明之目的在提供可有效率地生產且高安全性較之優良人類皮膚表皮細胞增殖促進劑，以及含有該劑之外用劑及化妝用料。
本發明之人類皮膚表皮細胞增殖促進劑係以燕窩之酵素分解物作為有效成分。
依據本發明之一適當態樣，前述酵素分解物係蛋白酶所致之分解物。
依據本發明之一較佳態樣，前述酵素分解物之分子量為70~200,000。
依據本發明之一更佳態樣，前述酵素分解物之平均分子量為300~50,000。
依據本發明之另一態樣，可提供含有本發明之人類皮膚表皮細胞增殖促進劑之皮膚外用組成物。該組成物宜使用於皮膚保養，更宜使用於調理肌膚紋理，並改善肌膚或皮膚狀態。
依據本發明之另一較佳態樣，本發明之皮膚外用組成物係化妝用料。依據本發明之另一更佳態樣，本發明之皮膚外用組成物係化妝水、乳液、護膚霜、保濕液、護脣膏、美容液面膜或洗面乳。
依據本發明之另一態樣，可提供一種燕窩之酵素分解物的用途，其係用於製造人類皮膚表皮細胞增殖促進劑者。依據本發明之再另一態樣，可提供一種燕窩之酵素分解物之用途，其係用於製造皮膚保養用之皮膚外用組成物者。
依據本發明之又另一態樣，可提供一種人類皮膚表皮細胞之增殖促進方法，包含：將有效量之本發明有效成分之酵素分解物應用於人類皮膚的步驟。。依據本發明之又再一態樣，可提供一種皮膚保養方法，包含：將有效量之本發明有效成分應用於人類皮膚的步驟之。同樣地，可提供一種調理肌膚紋理及提昇或改善肌膚狀態之方法，包含：將有效量之本發明有效成分應用於人類皮膚的步驟之。
依據本發明，使用燕窩之酵素分解物作為有效成分，即可較以往更顯著促進人類皮膚表皮細胞增殖。且，基於上述人類皮膚表皮細胞增殖促進功能，將酵素分解物使用於皮膚外用用途或化妝用料用途，即可維持皮膚之代謝周期或恢復延緩之周期，而調理肌膚紋理及維持或改善肌膚或皮膚狀態。如上所述，依據本發明，可實現消費者之QOL之提昇。又，所使用之酵素分解物係使用亦周知為食材之燕窩，故安全性較高，消費者接受度亦較高。進而，酵素分解物可直接就燕窩進行酵素處理而取得，故可有效率地加以製造，並降低製造成本。
第1圖係顯示燕窩樣本中之涎酸量之測定結果之圖表。
第2圖係係顯示燕窩樣本中之蛋白質量之測定結果之圖表。
第3圖係顯示GPC-HPLC之燕窩酵素分解物1之測定結果之圖表。
第4圖係顯示GPC-HPLC之燕窩酵素分解物2之測定結果之圖表。
第5圖係顯示第(3)實施例之結果之圖表。
第6圖係顯示第(4)實施例之結果之圖表。
本發明之人類皮膚表皮細胞增殖促進劑一如前述，係以燕窩之酵素分解物作為有效成分。
酵素分解物之原料燕窩係金絲燕將自己的唾液構成絲狀而築成之巢，其成分包含多量之醣蛋白質，幾乎不含脂質。在此，金絲燕係指雨燕科(Apodidae)之金絲燕屬(Collocalia)下之燕類，可例舉諸如小灰腰金絲燕(Apodidae Collocalia francica)、苔巢金絲燕(Apodidae Collocalia salanga)、爪哇金絲燕(Apodidae Collocalia fuciphaga)、印度食用巢金絲燕(Apodidae Collocalia inexpectata)、褐腰金絲燕(Apodidae Collocalia vestita)、白腹金絲燕(Apodidae Collocalia esculenta)、大金絲燕(Apodidae Collocalia maximus)等。
本發明中，燕窩可使用市售品。一般市售之燕窩從僅去除羽毛及糞便等污垢而經清洗者，至收集燕窩之碎屑並反覆進行漂白與清洗而成形者，涵括眾多種類，但本發明所使用之燕窩則宜使用未在前置處理時經過度清洗及漂白等之燕窩。
燕窩之酵素分解物係指就燕窩進行酵素反應加以分解所得者，可使用蛋白酶或含有蛋白酶之複合酵素等分解燕窩或其處理物而製得。在此，分解處理所使用之酵素宜為蛋白酶，使用胰酶則更佳。
燕窩之酵素分解物通常可先經加熱殺菌處理，然後於水中進行酵素處理。殺菌處理之條件可適當參考慣用之加熱殺菌條件而設定，酵素處理之條件亦可對應所使用之酵素種類及燕窩狀態而適當加以設定。
舉更具體之例，則可依以下程序調製燕窩之酵素分解物。
舉例言之，對已磨碎之燕窩加入其質量之10~50倍之水而使其膨脹後，在60~130℃下進行加熱殺菌處理5秒至30分鐘。然後，直接添加適量之酵素，而在酵素之最佳pH、最佳溫度下進行酵素反應0.5~48小時。酵素反應結束後，藉加熱處理等使酵素不活性化，並過濾反應液而去除不溶物，即可製得燕窩之酵素分解物。又，上述酵素分解物亦可視需要而乾燥成粉狀。另，上述各程序中，亦可進行適當pH調整、脫色、脫臭等操作。
另一例則在就燕窩之處理物進行酵素分解時，對粒徑2mm以下、而以150μm以下更佳之已磨碎之燕窩加入其質量之10~100倍之水，並在1~60℃下予以靜置或攪拌0.5~48小時而使其膨脹後，在60~130℃下進行加熱殺菌處理5秒~30分鐘，並視需要而予以過濾製得溶液，再施以與前述相同之酵素處理，而可製得燕窩之酵素分解物。
酵素分解物之調製法係酵素反應之時間愈長，蛋白質之分解程度愈高，而可製得包含更低分子之蛋白質之酵素分解物。本發明中，酵素反應時間為0.5~48小時，而以0.5~36小時為佳，3~36小時更佳，約24小時程度則最佳，並宜使用業經較充分之酵素反應之酵素分解物。
如此製得之燕窩之酵素分解物之分子量宜為70~200,000，70~180,000則較佳。分子量為70~150,000則更佳，70~120,000則最佳。
又，燕窩之酵素分解物之平均分子量(重量平均分子量)宜為300~100,000，300~70,000則較佳。平均分子量為300~50,000則更佳。
本發明之人類皮膚表皮細胞增殖促進劑雖可單獨直接使用，但亦可內含於化妝用料、醫藥品、準藥物等各種皮膚外用組成物中作為添加劑，而製得具有人類皮膚表皮細胞之增殖促進效果之組成物。所製得之組成物可有效使用於皮膚保養，更宜用於調理肌膚紋理，並改善或維持肌膚或皮膚狀態。
本發明之有效成分之燕窩之酵素分解物具有使EGF-R表現皮膚構成細胞實際增殖之效果，該效果並較燕窩之酵素分解物之未添加組及燕窩之熱水萃取物組更為顯著(後述之第1實施例之測試結果)。且，本發明之有效成分之燕窩之酵素分解物已展現實際磷酸化EGF受體(EGF-R)之效果(後述之第2實施例之測試結果)。EGF-R之磷酸化係指燕窩之酵素分解物實際上保有作為EGF-R之配體之作用，即，代表實際上保有類EGF之作用。
因此，本發明中，人類皮膚表皮細胞增殖促進活性係指可使人類皮膚表皮細胞實際增殖。燕窩之酵素分解物中，被認為含有可作用一如EGF受體之配體之成分，結果則推論可促進EGF活性，而促進表皮細胞之增殖。另，上述純屬理論而非用於限定本發明者。
因此，依據本發明，使用燕窩之酵素分解物，即可期待類EGF之效果，結果則可促進表皮之細胞增殖，而維持表皮之代謝周期或恢復延緩之周期，而改善人類皮膚之新陳代謝。因此，在調理肌膚紋理，改善及提昇肌膚或皮膚狀態方面之效果明顯。且，亦可謂具備預防皮膚狀態之惡化之效果。
另，本說明書中，所謂肌膚或皮膚之狀態之「改善或維持」之用語，包含其狀態之提昇、調節、狀態惡化之延緩或減輕等意義。
故而，一如前述，依據本發明之其它態樣，可提供構成含有本發明之人類皮膚表皮細胞增殖促進劑之皮膚外用組成物。皮膚外用組成物則宜提供作為醫藥品、準藥物或化妝用料，而更宜提供作為化妝用料。
本發明之皮膚外用組成物(尤其化妝用料)中，有效成分之燕窩酵素分解物之含量(乾物換算)並無特別之限制，依組成物形態而不同，但一般以固形物計算而為0.001~20重量百分比，而以0.005~5重量百分比之範圍為佳，可對應組成物之形態而適當加以變更。
或，本發明之皮膚外用組成物中燕窩酵素分解物之含量(乾物換算)宜為可使每平方公分之皮膚每日可使用達0.001mg以上，而以0.001mg~1mg為佳之量。
在本發明之皮膚外用組成物包含有效成分，且無損人類皮膚表皮細胞增殖促進效果之限度內，本發明之促進劑可進而包含其它任意成分。上述之任意成分可為諸如皮膚外用劑及化妝用料所慣用之各種成分，可例舉諸如保濕劑、低級醇、多價醇、醣類、界面活性劑、緩衝劑、乳化劑、安定劑、增黏劑、抗氧化劑、防腐抗菌劑、螫合劑、pH調整劑、香料、色素、紫外線吸收劑、紫外線散射劑、維他命類、胺基酸類、抗炎劑、水、胜肽、糖醇類、酵素類、植物萃取類、抗氧化物質類、滑石粉、黏土、花粉、珍珠粉等。
在此，保濕劑可例舉諸如聚乙二醇、聚丙二醇、丙三醇、丙二醇、山梨糖醇、玻尿酸及硫酸軟骨素等酸性黏多醣類、胺基酸、膠原蛋白、膠原蛋白胜肽、彈力蛋白等。
低級醇可例舉諸如乙醇、丙醇、異丙醇等。
多價醇可例舉諸如丙三醇、異戊四醇、雙異戊四醇、乙二醇、丙二醇、聚丙二醇、1,3-丁二醇等。
醣類則可例舉諸如葡萄糖、半乳糖、麥芽糖、乳糖、木糖、D-葡萄醣醛酸、蔗糖、葡萄糖胺、半乳糖胺、D-山梨醣醇、山梨醇酐、纖維素、澱粉等醣類、寡糖類、多醣類及其等之誘導體等。
本發明之皮膚外用組成物可採用公知之方法適當調配包含燕窩酵素分解物之人類皮膚表皮細胞增殖促進劑及上述之任意成分，而構成化妝水、乳液、護膚霜(諸如除紋霜、滋養霜、塑身霜)、保濕液、敷面劑(諸如美容液面膜)、化妝水、洗面乳、身體乳、身體霜等各種化妝用料之慣用產品形態。本發明之皮膚外用組成物亦可進而提供作為粉底類、護脣膏、脣膏、眼影、腮紅等彩妝化妝品及防曬用產品、防臭化妝品等藥用化妝品、洗髮精及潤絲精、造型品等髮妝品、皮膚清潔劑及入浴劑之浴用化妝品等之使用用途。
依據本發明之另一態樣，一如前述，可提供對人類皮膚應用本發明之有效成分之酵素分解物之有效量之人類皮膚表皮細胞之增殖促進方法。另，在此所謂「有效量」係指因使用而可於體內之預定領域內發揮人類皮膚表皮細胞增殖促進活性之充足量。
進而，依據本發明之又另一態樣，一如前述，可提供對人類皮膚應用本發明之有效成分之有效量之皮膚保養方法。同樣地，亦可提供對人類皮膚應用本發明之有效成分之有效量之調理肌膚紋理之肌膚狀態提昇或改善方法。另，在此所謂「有效量」係指可獲致預期效果之充足量。
另，本說明書中，使用「約」及「程度」之用語之值，包含在達成設定其值之目的之前提下，本業之技術人員所可容許之值之變動之意義。舉例言之，意指可容許預定值或範圍之20%以內之變動，而以10%以內為佳，5%以內則更佳。
參照以下之例具體說明本發明，但本發明並不受限於以下之例。
藉碾磨機磨碎市售之未漂白之燕窩，而製得100篩目大小(粒徑150μm以下)之燕窩粉末，再對該燕窩粉末加入約50倍量(質量)之水而在5℃下使其膨脹20小時後，在121℃下進行加熱殺菌處理15分鐘。
在製得之處理液冷卻後，調整pH，並對燕窩粉末添加2質量百分比之量之含蛋白酶酵素(商品名「Pancreatin F」，天野製藥株式會社出品)，而在45℃下進行反應3小時。
將上述酵素反應液調整成pH7.0後，在90℃下加熱5分鐘而使酵素不活性化，再加以過濾並回收濾液(水溶性部分)。濃縮上述濾液後，予以凍結乾燥而製得「燕窩酵素分解物1」
除酵素反應之時間改為24小時以外，製程均與前述(1-1)之酵素分解物1相同，而製得「燕窩酵素分解物2」。
藉碾磨機磨碎市售之未漂白之燕窩(乾燥物)，並將其磨碎物加入1000ml之蒸餾水中，再藉加熱迴流進行2小時之萃取處理。加熱迴流後，再予靜置，然後分離取得上澄液加以過濾，而回收濾液。殘渣則進而與前述相同，予以加入1000ml之蒸餾水中，藉加熱迴流而進行再萃取處理後，過濾固形物殘渣而加以去除，並回收濾液。所得之濾液(萃取液)則一同在減壓環境下加以濃縮，所得之濃縮物則予以凍結乾燥，而製得黃白色之「燕窩熱水萃取物」(比較例)。
製得之各燕窩樣本(燕窩酵素分解物1、燕窩酵素分解物2及燕窩熱水萃取物)中之涎酸量與蛋白質量已測定如下。
涎酸之量係在各試料之酸性水解後藉高速液體層析法而測定游離N-乙醯神經胺酸所得。
蛋白質之量則使用基於Brad ford法之Bio Rad公司之Protein Assay Kit而加以測定。
結果則如第1及第2圖所示。
其次，為測定燕窩酵素分解物1及燕窩酵素分解物2所含蛋白質之分子量及其分布，而在以下條件下，進行了GPC之分析。
‧管柱：Shodex Asahipak GS320HQ(Ψ7.6×300mm)
‧管柱溫度：35℃
‧移動相：50mM CH3COONH3 pH6.7
‧流速：0.4ml/min
‧試料注入量：10μl
‧偵測器：紫外分光偵測器(以UV220nm測定)
‧BSA MW66,000
‧甘胺醯甘胺酸(Gly-gly)MW132.1
‧三胜肽(Gly-gly-gly)MW189.17
‧L-天冬胺酸(L-Asparaginic acid)MW133.1
‧DL-天冬胺酸(DL-Asparaginic acid)MW150.1
‧N-乙醯神經胺酸(N-Acetylneuraminic acid)MW309.3
測定結果則如第3及第4圖所示。
進而，已就燕窩酵素分解物所含蛋白質之分子量，使用西方墨點法而加以評價。具體而言，係先依循前述之測定法而確認燕窩酵素分解物中蛋白質之量。就來自燕窩酵素分解物之蛋白質(100μg)使用SDS-PAGE而藉10~15%之聚丙醯胺加以分離。將已分散於膠體中之蛋白質轉印至lmmunoblot PVDF膜(聚偏二氟乙烯(Polyvinylidene difluoride)，取自Bio-Lad Lab公司)。再於包含3%之脫脂乳與0.1%之Tween-20之PBS中對PVDF膜進行阻隔1小時，再進行視覺上之判定。
另，評價蛋白質之分子量時，亦已參考公知文獻(Guo,C. T.,Suzuki Y.,et al.,Antiviral Res. 70,pp.140-146(2006))所揭露之資料。
由上述結果可知，燕窩酵素分解物中所含之蛋白質分子量存在約70~120,000程度(另，視評價條件之不同，上限值可達200,000程度)之範圍內。
進而，由所得結果可知，燕窩酵素分解物1之蛋白質之平均分子量約為55,000。又，可知燕窩酵素分解物2之蛋白質之平均分子量約為33,000。
已使用EGF-R表現皮膚構成細胞檢討酵素處理燕窩之類EGF作用，即，細胞增殖促進活性。
細胞係使用自ATCC購入之來自人類表皮(皮膚)之EGF-R表現細胞A431細胞。
燕窩酵素分解物則使用由上述(1)製得之燕窩酵素分解物1(酵素處理3小時)、燕窩酵素分解物2(酵素處理24小時)、燕窩熱水萃取物。
藉已添加3%FCS之DME培養基對已調成5×104cells/ml之A431細胞按以下之各種濃度添加燕窩酵素分解物或燕窩熱水萃取物，並在96孔平底盤中按5×103cells/1ml/well之條件進行培養。
‧燕窩熱水萃取物(heart)：1%，0.1%，0.01%
‧燕窩熱水萃取物1(Enz1)：1%，0.1%，0.01%
‧燕窩熱水萃取物2(Enz2)：1%，0.1%，0.01%
又，亦準備了未添加燕窩酵素分解物及r-EGF之未添加組進行培養以作對照之用。
細胞之增殖則長期採用Cell Counting Kit-8(同仁化學研究所公司出品)(3H胸腺嘧啶之嵌入測試之替代法)加以檢討，並調查類EGF作用之有無。
結果，以ABS(吸光度)代表吸收度在460nm附近為極大之水溶性甲臢之色素量。
結果即如第5圖所示。
由結果可知，與未添加控制組(A431/3%FCS)相較，已明確分為細胞增殖抑制組與增殖組。
燕窩酵素分解物1及燕窩酵素分解物2之添加組(尤其0.1%及0.01%之濃度)均已確認明顯之增殖促進效果。
而，燕窩熱水萃取物之1%添加組即便與未添加控制組比較，亦已極端抑制細胞增殖。燕窩熱水萃取物之0.1%添加組及0.01添加組中，細胞增殖均低於未添加控制組。
因此，已確認燕窩酵素分解物可促進細胞增殖，而燕窩熱水萃取物則反而抑制或妨礙細胞增殖之傾向。
已以EGF-R表現皮膚構成細胞之EGF受體磷酸化為指標而檢討燕窩酵素分解物之類EGF作用。
細胞係使用自ATCC購入之來自人類表皮(皮膚)之EGF-R表現細胞A431細胞。
燕窩酵素分解物則使用由上述(1)製得之燕窩酵素分解物1(酵素處理3小時)、燕窩酵素分解物2(酵素處理24小時)。
已使用人類重組型EGF(r-EGF)(取自Protein Express)作為正控制。
EGF-R之磷酸化則使用Active EGF receptor EIA套件(Takara公司)進行測定。
藉已添加3%FCS之DME培養基分別對已調成5×104cells/ml之A431細胞按以下之各種濃度添加燕窩酵素分解物與作為正控制之r-EGF，並於24孔平底盤中依5×104cells/1ml/well之條件進行培養。
‧燕窩酵素分解物1(Enz1)：0.1%，0.01%
‧燕窩酵素分解物2(Enz2)：0.1%，0.01%
‧r-EGF：0.15ng/ml
又，亦準備了未添加燕窩酵素分解物及r-EGF之未添加組進行培養以作對照之用。
培養10小時至50小時(資料為10~34小時)之期間內，長期地回收細胞，並使用測定套件所附之受體萃取用緩衝液調整了檢體。去除培養上澄液後，依50μl/well加入受體萃取用緩衝液，並使用細胞刮杓(Cell scraper)刮取細胞，而將2well份之細胞萃取液積存於1.5ml用之微量離心管中。在4℃、10000rpm之條件下離心處理5分鐘而使細胞不溶物沈澱，並在測定前將萃取上澄液凍結保存在－80℃。
溶解已凍結保存之萃取上澄液，並使用檢體稀釋液而分別加以稀釋至10倍，再藉EGF-R Active EGF receptor EIA套件之測定法進行測定。
結果則由磷酸化EGF受體標準液之標準曲線算出，並以EGF受體中之磷酸酪胺酸數(fmol/L)代表之。
結果即如第6圖所示。
培養34小時之檢討中，與未添加控制組(Cont)比較，均發現EGF-R之磷酸化作用亢進。燕窩酵素分解物2之0.1%及0.01%添加濃度組(各為Enz20.1%、Enz20.01%)之EGF-R之磷酸化數均為高於作為正控制之r-EGF之0.15ng/ml添加組(r-EGF 0.15ng)之值。燕窩酵素分解物1之0.1%添加組(Enz10.1%)則在極早期時(10小時)即發現EGF-R之磷酸化作用亢進。
由結果可知，燕窩酵素分解物1及燕窩酵素分解物2均可在0.1%及0.01%之添加濃度下促進EGF-R之磷酸化，而暗示了對表皮細胞(A431細胞)之增殖確有影響。
第1圖係顯示燕窩樣本中之涎酸量之測定結果之圖表。
第2圖係係顯示燕窩樣本中之蛋白質量之測定結果之圖表。
第3圖係顯示GPC-HPLC之燕窩酵素分解物1之測定結果之圖表。
第4圖係顯示GPC-HPLC之燕窩酵素分解物2之測定結果之圖表。
第5圖係顯示第(3)實施例之結果之圖表。
第6圖係顯示第(4)實施例之結果之圖表。
Claims (5)
- 一種燕窩之藉由胰酶分解而得的酵素分解物之用途，係用於製造人類皮膚表皮細胞增殖促進外用劑，其中，酵素分解物之平均分子量為50,000~55,000，且前述外用劑係用於人類皮膚表皮細胞上EGF受體之磷酸化的亢進。
- 如申請專利範圍第1項之用途，其中前述外用劑中酵素分解物之含量以乾燥換算為0.1~20重量%。
- 如申請專利範圍第1或2項之用途，其中前述外用劑係使用於皮膚保養。
- 如申請專利範圍第1或2項之用途，其中前述外用劑係化妝用料。
- 如申請專利範圍第1或2項之用途，其中前述外用劑係化妝水、乳液、護膚霜、保濕液、護脣膏、美容液面膜或洗面乳。
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