KR102365655B1 - 콩 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 콩 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물, 항산화 또는 항노화용 조성물 및 피부 보습용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 조성물은 프로바이오틱스와 프리바이오틱스가 혼합된 형태의 신(syn)바이오틱스로, 우수한 콜라겐 합성 촉진, 주름 개선 및 항노화 효과를 나타내며, 나아가 천연물 유래로 세포 독성을 가지지 않아 기능성 화장료 및 식품 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.
Description
본 발명은 콩 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물, 항산화 또는 항노화용 조성물 및 피부 보습용 조성물에 관한 것이다.
콩(Glycine max (L.) Merrill)은 주성분으로 단백질 40%, 지방 18%, 탄수화물 12~13%, 수분 8~9% 정도이며 주로 식품의 원료로 이용되고 있으며, 성분과 품질에 따라 이용 범위가 매우 넓다. 콩은 장, 심장, 신장, 간 및 위의 기능을 조절하기 위한 영양 보조 식품으로서 사용된다.
한편, 발효(fermenation)란, 학문적인 원래의 뜻은 미생물이 탄수화물을 에너지원으로 할 때 그 탄소결합을 끊어서 알코올, 유기산, 탄산가스 등이 생성되는 현상을 말한다. 발효 화장품은 발효 과정에서 생성된 물질을 착안해 개발된 것이다. 즉 우리가 일상생활에서 먹는 발효 식품에 들어있는 효소가 세포를 활성화시키는 기능을 화장품에 도입한 것이다. 화장품에서의 발효는 미생물을 발효시키는 과정에서 발효균을 제거하는 동시에 효소 외에 유효성분들을 함께 추출함으로써 기존 효소 하나만의 갖는 효능을 배가시키고 함유 성분들을 피부에 빠르게 흡수되도록 한다.
이에 본 발명자들은 콩 발효 추출물을 제조하고, 이의 피부 주름 예방 또는 개선, 항산화 또는 항노화, 피부 보습 효과를 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은, 콩 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용, 항산화 또는 항노화용, 피부 보습용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 콩 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 콩 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항노화용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 콩 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 콩 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용, 항산화 또는 항노화용, 피부 보습용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 조성물은 프로바이오틱스와 프리바이오틱스가 혼합된 형태의 신(syn)바이오틱스로, 우수한 콜라겐 합성 촉진, 주름 개선 및 항노화 효과를 나타내며, 나아가 천연물 유래로 세포 독성을 가지지 않아 기능성 화장료 및 식품 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.
도 1은 콩 발효 추출물의 이소플라본 함량을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 CCD-986sk 세포에서 콩 발효 추출물의 세포증식 및 독성을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 HaCaT 세포에서 콩 발효 추출물의 세포증식 및 독성을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 콩 발효 추출물의 엘라스타제 억제 활성을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 CCD-986sk 세포에서 UVB 조사시간에 따른 타입 Ⅰ프로콜라겐 합성량 변화를 나타낸 도이다.
도 6은 UVB를 조사한 CCD-986sk 세포에서 콩 발효 추출물의 타입 Ⅰ프로콜라겐 생성에 대한 효과를 나타낸 도이다.
도 7은 효소실험을 통해 콩 발효 추출물의 콜라게나제 저해 활성을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 8은 UVB를 조사한 CCD-986sk 세포에서 콩 발효 추출물의 MMP-1 활성 억제 시험의 결과를 나타낸 도이다.
도 9는 UVB를 조사한 섬유아세포에서 콩 발효 추출물이 MMP-1 mRNA 발현에 미치는 영향을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 10은 UVB를 조사한 섬유아세포에서 콩 발효 추출물의 MMP-9 mRNA 발현에 미치는 영향을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 11은 콩 발효 추출물의 HAS 발현 촉진 활성을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 12는 콩 발효 추출물의 항산화 활성을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 13은 콩 발효 추출물의 피부 내 흡수율을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 14는 콩 발효 추출물의 눈가 주름 개선 효과를 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 CCD-986sk 세포에서 콩 발효 추출물의 세포증식 및 독성을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 HaCaT 세포에서 콩 발효 추출물의 세포증식 및 독성을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 콩 발효 추출물의 엘라스타제 억제 활성을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 CCD-986sk 세포에서 UVB 조사시간에 따른 타입 Ⅰ프로콜라겐 합성량 변화를 나타낸 도이다.
도 6은 UVB를 조사한 CCD-986sk 세포에서 콩 발효 추출물의 타입 Ⅰ프로콜라겐 생성에 대한 효과를 나타낸 도이다.
도 7은 효소실험을 통해 콩 발효 추출물의 콜라게나제 저해 활성을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 8은 UVB를 조사한 CCD-986sk 세포에서 콩 발효 추출물의 MMP-1 활성 억제 시험의 결과를 나타낸 도이다.
도 9는 UVB를 조사한 섬유아세포에서 콩 발효 추출물이 MMP-1 mRNA 발현에 미치는 영향을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 10은 UVB를 조사한 섬유아세포에서 콩 발효 추출물의 MMP-9 mRNA 발현에 미치는 영향을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 11은 콩 발효 추출물의 HAS 발현 촉진 활성을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 12는 콩 발효 추출물의 항산화 활성을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 13은 콩 발효 추출물의 피부 내 흡수율을 평가한 결과를 나타낸 도이다.
도 14는 콩 발효 추출물의 눈가 주름 개선 효과를 평가한 결과를 나타낸 도이다.
이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.
본 발명은 콩 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다.
상기 주름 예방 또는 개선용 조성물은 화장료 조성물 및 식품 조성물을 포함한다.
본 발명에 있어서, "피부 주름(skin wrinkle)"은 피부 상에 형성된 주름(wrinkle formation on skin)을 말한다.
한편, 주름은 피부의 노화로 생기며, "피부 노화(skin aging)"는 내재적 및 외부요인에 의해 발생하는 피부의 노화를 말하고, 바람직하게는 피부주름 형성을 동반하는 피부 광노화(photoaging)일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 피부주름 형성을 동반하는 자외선 자극에 의한 피부 광노화를 포함한다.
본 발명에 있어서, “콩”은 대두, 검정콩, 흑태, 서리태, 노란콩, 강낭콩, 동부, 완두콩, 작두콩, 잠두, 쥐눈이콩 등 다양한 품종을 사용할 수 있고, 바람직하게는 서리태를 사용할 수 있으나, 그 종류를 제한하지 않고 어느 것이든 사용할 수 있다. 상기 콩은 통상적으로 입수할 수 있는 방법에 의해 얻은 것일 수 있고, 예를 들어 시판되는 것을 사용할 수 있다.
본 발명에 있어서, “발효”는 미생물이 탄수화물을 에너지원으로 할 때 탄수화물의 탄소결합을 끊어서 알코올, 유기산, 탄산가스 등이 생성되는 현상을 의미한다.
본 발명에 있어서, “프로바이오틱스(probiotics)”는 장에 도달해 젖산을 생성하고 유익균이 증가할 수 있도록 산성으로 변화시켜 주는 살아있는 균을 의미한다. 프로바이오틱스는 장을 건강하게 만들어 소화기 기능의 개선하고, 면역력 저하를 막는 데 효능이 있는 것으로 알려져 있다.
상기 프로바이오틱스의 예로는, 엔테로코커스 페시움(Enterococcus faecium), 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus), 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 플랜타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 부크네리(Lactobacillus buchneri) 및 바실러스 코아귤란스(Bacillus coagulans)로부터 선택된 하나일 수 있고, 바람직하게는 락토바실러스 부크네리 균주일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 있어서, "추출물"은 콩 발효물의 추출처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
본 발명에 있어서, 상기 추출은 고압효소분해법, 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 추출 방법을 사용할 수 있으며, 고압효소분해법인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 추출 용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합용매로부터 선택된 1종 이상의 용매를 이용할 수 있으며, 상기 용매는 예를 들면, 물과 알코올의 혼합물, 즉 알코올 수용액일 수 있다. 알코올 수용액의 알코올 농도는 1 내지 100%(w/w), 10 내지 100%(w/w), 20 내지 90%(w/w), 30 내지 80%(w/w), 40 내지 70%(w/w), 40 내지 60%(w/w), 45 내지 55%(w/w), 또는 50%(w/w)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 알코올 수용액은 메탄올, 에탄올, 또는 부탄올 수용액일 수 있고, 본 발명의 일 실시예에서, 상기 추출물은 50% 에탄올 추출물일 수 있다.
상기 추출물은 예를 들어, 동결건조 또는 감압건조시켜 건조물 형태로 제조할 수도 있다.
본 발명의 조성물에서 유효성분인 콩 발효 추출물은 하기와 같은 방법으로 수득될 수 있다.
먼저, 콩(서리태)은 발효 전 90 내지 140℃에서 5분 내지 25분, 바람직하게는 95 내지 125℃에서 5분 내지 15분, 보다 바람직하게는 100℃에서 10분 동안 멸균하는 과정을 거치는 것을 특징으로 할 수 있다. 멸균된 콩에 프로바이오틱스를 접종한 후 교반추출기에 넣어 콩 발효 추출물을 제조하는데, 이때 상기 발효는 25 내지 40℃, 바람직하게는 30 내지 40℃, 보다 바람직하게는 33 내지 38℃, 가장 바람직하게는 37℃ 조건으로 수행한 것일 수 있다. 또한, 10 내지 100시간, 바람직하게는 20 내지 80시간 조건으로 수행한 것일 수 있다. 다만, 상기 발효 온도 및 발효 시간은 콩의 지표 성분을 증가 또는 감소시키기 위하여 당업자가 적절히 선택할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서는 서리태를 프로바이오틱스와 함께 발효시키고, 상기 발효물에 추출 용매를 가하여 콩 발효 추출물을 수득하였다.
본 발명에 따른 콩 발효 추출물은 천연물을 원료로 하여 생체 내 독성을 가지지 않으면서도, 엘라스타제 및 콜라게나제인 MMP-1, MMP-9의 발현 및 생성을 억제하고, 실제 임상 모델에서 눈가 주름을 개선하는 우수한 효과를 가지고 있는바, 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물 및 식품 조성물 등 다양한 분야에서 활용될 수 있다.
또한, 본 발명은 콩 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항노화용 조성물을 제공한다.
상기 항산화 또는 항노화용 조성물은 화장료 조성물 및 식품 조성물을 포함한다.
본 발명에 있어서, "항산화"는 산화를 억제하는 작용을 의미한다. 인체는 산화촉진물질(prooxidant)과 산화억제물질(antioxidant)이 균형을 이루고 있으나 여러 가지 요인들에 의하여 이런 균형상태가 불균형을 이루게 되고 산화 촉진 쪽으로 기울게 되면, 산화적 스트레스(oxidative stress)가 유발되어 잠재적인 세포손상 및 병리적 질환을 일으키게 된다. 이러한 산화적 스트레스의 직접적 원인이 되는 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)은 불안정하고 반응성이 높아 여러 생체물질과 쉽게 반응하고, 체내 고분자들을 공격하여 세포와 조직에 비가역적인 손상을 일으키거나 돌연변이, 세포독성 및 발암 등을 초래하게 된다. NO, HNO2, ONOO-와 같은 활성 질소종(reactive nitrogen species, RNS)은 염증 반응 시 대식세포 호중구 및 다른 면역 세포들의 면역 반응으로 인해 다량 생성되며, 이때 ROS도 같이 생성된다. 상기와 같은 활성산소는 체내에서 세포를 산화시켜 파괴시키며, 그에 따라 각종 질환에 노출되게 된다.
본 발명에 있어서, “항노화”는 피부 보호 및 피부 상태 개선, 피부 미백, 피부 노화 및 주름의 예방 또는 개선, 모공 수축, 축소, 피부 보호 및 피부의 염증 반응의 완화, 면역질환 개선능, 또는 피부 장벽 기능 개선, 피부자극 완화, 피부 세포 증식 및 재생능, 항산화능, 콜라겐 합성 증진능 등을 모두 포함하는 개념이다.
본 발명의 일 실시예에서, 본 발명에 따른 콩 발효 추출물은 UVB 조사에 따라 감소되었던 CAT 및 SOD의 발현을 유의성 있게 회복시키며, 모든 농도에서 양성대조군인 레티놀 및 아데노신보다 현저히 높은 항산화 활성을 나타냄을 확인하였다.
또한, 본 발명은 콩 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용 조성물을 제공한다.
상기 피부 보습용 조성물은 화장료 조성물 및 식품 조성물을 포함한다.
본 발명의 일 실시예에서, 본 발명에 따른 콩 발효 추출물은 UVB 조사에 따라 감소되었던 보습인자인 히알루론산 합성 효소(HAS1)의 발현을 유의성 있게 회복시킴을 확인하였다.
본 발명에 따른 상기 콩 발효 추출물을 화장료로 사용하는 경우, 상기 추출물 이외에 통상적인 화장료 베이스 성분들을 포함하여, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 안료 및 향료와 같은 통상적인 함유제, 그리고 담체를 포함할 수 있다. 또한, 화장료 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 특별히 한정하는 것은 아니지만, 예를 들어, 화장수, 에센스, 로션, 페이스트, 계면활성제 함유 클렌징, 크림, 팩, 젤, 연고, 파우더, 패취 또는 분무제(스프레이)의 제형을 가질 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 및 산화아연 등으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상이 이용될 수 있고, 제형이 화장수, 에센스인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되며, 예를 들어, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜, 및 소르비탄의 지방산 에스테르 등으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상이 이용될 수 있다.
또한, 상기 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레인 경우에는 담체 성분으로서 락토오스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 및 폴리아미드 파우더 등으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다. 또한, 상기 화장료 조성물의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 및 에톡실화글리세롤지방산 에스테르 등으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이 이용될 수 있다.
이때, 화장료 중의 상기 콩 발효 추출물은 전체 중량의 0.01 내지 50%(w/v), 바람직하게는 0.01 내지 30%(w/v)로 첨가될 수 있으나, 주름 예방 또는 개선 효과를 나타내는 이상 다양하게 변경되어 실시될 수 있고, 이는 당업자라면 자명하게 이해할 수 있을 것이다.
또한, 본 발명의 콩 발효 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 콩 발효 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 콩 발효 추출물은 원료에 대하여 15중량% 이하, 바람직하게는 10 중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스, 수크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ml 당 일반적으로 약 0.01 내지 10 g, 바람직하게는 약 0.01 내지 0.1 g 이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예
1. 콩 발효 추출물의 제조
1-1. 콩 발효 추출물의 제조
콩(서리태)을 원료로 하여, 프로바이오틱스인 락토바실러스 부크네리(Lactobacillus buchneri) 균주를 이용하여 콩 발효 추출물을 제조하였다. 상기 락토바실러스 부크네리 균주는 시판 중인 균주를 구입하여 이용하였다.
구체적으로, 100℃에서 10분간 발효 전 콩의 멸균 과정을 거친 후, 락토바실러스 부크네리 균주를 멸균된 클린벤치에서 접종하였다. 이후, 교반추출기에 넣고 37℃에서 시간별(24, 48, 72시간)로 발효물을 제조하였다. 발효가 끝난 후에, 50% 에탄올을 넣은 후 24시간 동안 교반하여 추출을 진행하였다. 추출물을 필터한 후, 감압농축기를 이용하여 농축하고, 농축된 추출물을 -80℃에서 동결한 후에 건조하여 최종적으로 콩 발효 추출물(50% 에탄올 추출물)을 수득하였다.
1-2. 지표 성분 함량 평가
상기 실시예 1-1에서 제조한 콩 발효 추출물의 발효 시간별 이소플라본(isoflavone)의 함량을 평가하였다. 이소플라본은 콜라겐 생합성 촉진, 피부 주름 개선, 탄력 증가, 히알루론산 등의 진피 기질 증가로 인한 뛰어난 보습 효과로 알려져 있는 성분이다. 먼저, 콩 발효 추출물 분말 약 100mg에 50% 메탄올 수용액 5 ml을 넣고, 10분간 초음파로 추출한 후, 5,000 rpm에서 20분간 원심분리 하였다. 상등액을 덜어내고 다시 50% 메탄올 수용액 5 ml을 넣어 같은 방법으로 재추출하였다. 2번에 걸쳐 얻어진 상등액을 합하여 10 mL를 정용한 후 HPLC로 제니스테인(genistein) 및 다이드제인(daidzein)의 농도를 측정하였다. 그 결과를 도 1 및 하기 표 1에 나타내었다.
상기 표 1 및 도 1에 나타낸 바와 같이, 이소플라본 농도는 대조군과 비교하여 발효에 의해 증가하였으며, 특히 48시간 발효 추출물이 가장 높은 이소플라본 함량을 가짐을 확인하였다(Daidzein 0.14mg/ml, Genistein 0.12 mg/ml).
실시예
2. 세포 독성 평가
실시예 1-1에서 제조한 콩 발효 추출물의 세포 독성을 평가하였다. 진피 섬유아세포인 CCD-986sk, 표피 각질형성세포인 HaCaT을 DMEM 배양 배지를 포함하는 24-웰 플레이트에 분주하여 37℃에서 5% CO2가 유지되도록 24시간 동안 배양하면서 세포를 플레이트에 부착하고 배지를 제거하여 세포를 준비하였다. 발효 추출물을 각각 0 ㎍/㎖, 6.25 ㎍/㎖, 12.5 ㎍/㎖, 25 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 200 ㎍/㎖ 및 400 ㎍/㎖의 농도로 배양 배지에 첨가한 후, 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, 30 ㎕의 MTT 시약(5 ㎎/㎖ 농도로 PBS에 용해)을 처리한 다음, 37℃에서 4시간 동안 추가로 배양하고, 형성된 포마르잔 결정(formazan crystal)을 DMSO에 녹여 96-웰 플레이트에 200㎕씩 넣고 540㎚에서 ELISA plate reader로 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 2 및 3에 나타내었다.
도 2 및 3에 나타낸 바와 같이, 콩 발효 추출물은 CCD-986sk(도 2) 및 HaCaT(도 3) 세포 모두에서 400㎍/㎖까지 세포 독성을 보이지 않아, 피부에 안정적으로 사용할 수 있음을 확인하였다.
실시예
3. 콩 발효 추출물의
엘라스타제
억제 활성 평가
엘라스타제는 피부탄력성 섬유를 분해하는 효소로서 피부탄력 및 피부주름 형성억제에 중요한 기능을 하는 엘라스틴과 같은 콜라겐을 분해한다. 이러한 엘라스타제 활성 저해를 통하여 피부의 탄력 유지 및 피부주름형성을 억제할 수 있어 현재 이와 관련한 많은 연구가 진행 중에 있다.
본 발명에 따른 콩 발효 추출물의 엘라스타제 활성을 측정하기 위하여 0.2 M의 Tris-Hcl 버퍼(pH 8.0) 70 μL에 3.3 nM Succ-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide(STANA) 10 uL 및 콩 발효 추출물 10 μL를 혼합하였다. 상기 혼합물에 1 μg/ml로 희석된 돼지 이자(porcine pancreatic) 엘라스타제 10 μL를 첨가한 후 10분 동안 반응시켰다. 유리된 p-니트로아닐라이드(p-nitroanilide)의 생성량을 확인하기 위해, 분광광도계를 이용하여 410nm에서의 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 콩 발효 추출물은 엘라스타제 억제 활성이 우수한 것을 확인하였다.
실시예
4.
프로콜라겐
합성 촉진 활성 평가
타입 Ⅰ콜라겐은 진피층의 세포간질의 구성성분을 이루는 피부구조 단백질의 주요 구성 물질이며 콜라겐은 자연적 또는 외부 자극에 의한 구조 변성, 생합성량 감소, 콜라게나제(collagenase)의 발현 정도와 그 활성 역시 피부 노화를 가속화 시키는 주요 요인으로 알려져있다. 이에, 섬유아세포를 배양한 상층액 및 프로콜라겐 타입 ⅠC-펩타이드 EIA 키트(Procollagen Type 1 C-peptide(PIP) EIA kit)를 사용하여 본 발명에 따른 콩 발효 추출물의 콜라겐 합성 촉진 활성을 평가하였다. 먼저, 상기 키트를 사용하여 CCD-986sk 세포에서 UVB(20 mJ/cm2) 조사 시간에 따른 타입 Ⅰ프로콜라겐 합성량 변화를 확인하고 그 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5에 나타낸 바와 같이, 진피 섬유아세포 CCD-986sk에서 UVB 조사 시간이 길어질수록 콜라겐의 전구체인 타입 Ⅰ프로콜라겐 생합성이 크게 억제됨을 확인하였다.
다음으로, 본 발명에 따른 콩 발효 추출물을 CCD-986sk 세포에 전처리하고 동일한 방법으로 타입 Ⅰ프로콜라겐 합성량 변화를 확인하였다. 구체적으로, CCD-986sk 세포를 10% 우태아 혈청이 포함된 IMDM 배지에서 배양한 후 6-웰 플레이트에 1 × 105 cells/웰로 분주하여 24시간 동안 배양하였다. FBS의 영향을 배제하기 위하여 무혈청(serum-free) 배지로 교체한 후 다시 24시간 배양하였고, 콩 발효 추출물을 각각 200, 400 μg/mL, 양성대조군인 레티놀 및 아데노신을 1, 5 μM씩 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. DPBS로 2번 세척한 후 웰 당 200㎕씩의 DPBS를 넣고 UVB(50 mJ/cm2)를 조사한 뒤, DPBS로 한 번 더 세척하고 무혈청 배지를 넣어 24시간 동안 배양하였다. 대조군은 콩 발효 추출물의 처리 없이 배양하였으며, 이후 각 웰의 상층액을 이용하여 프로콜라겐 타입 C-펩타이드 분석 키트를 사용하여 타입 Ⅰ프로콜라겐 합성량 변화를 확인하였다. 그 결과를 도 6에 나타내었다.
도 6에 나타낸 바와 같이, UVB 조사에 의한 타입 1 프로콜라겐의 감소가 콩 발효 추출물 처리에 의해 회복되는 것을 확인하였다. 반면, 양성대조군인 레티놀 및 아데노신의 경우 타입 Ⅰ프로콜라겐 회복에 유의성을 보이지 않았다.
실시예
5. 콩 발효 추출물의
콜라게나제
저해 활성 확인
5-1.
콜라게나제
저해 활성
콩 발효 추출물의 콜라게나제 저해 활성을 측정하기 위하여 효소 실험을 진행하였다. 콜라게나제 활성 측정은 Wunsch E, Heindrich HG의 방법에 따라 측정 하였다. 기질액은 0.1 M tris-HCl(pH 7.5)에 4 mM CaCl2를 첨가한 후 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg을 0.3 mg/ml의 농도가 되도록 용해시켜 제조하였다. 96-웰 플레이트에 상기 기질액 12.5 μl, 콩 발효 추출물(8, 40, 200 μg/ml) 5 μl, 0.2 mg/ml 콜라게나제 7.5 μl를 첨가하여 상온에서 20분 동안 방치한 후, 6% 시트르산 25 μl를 넣어 반응을 정지시켰다. 반응이 정지된 96-웰 플레이트에 에틸아세테이트 150 μl를 첨가하여 320nm에서 흡광도를 측정하였다. 콜라게나제 저해 활성은 다음의 계산식으로 계산하였으며, 그 결과는 도 7에 나타내었다.
[계산식]
도 7에 나타낸 바와 같이, 콩 발효 추출물은 농도 및 추출시간 의존적으로 콜라게나제 저해활성을 나타냄을 확인하였다.
5-2.
MMP
-1 활성 측정
본 발명에 따른 콩 발효 추출물의 콜라게나제 저해 활성을 측정하기 위하여 UVB(20, 50 mJ/cm2) 조사된 CCD-986sk 세포를 이용하여 세포 배양액을 취하고 human MMP-1 ELISA kit (R&D system)를 사용하여 MMP-1 생성량을 측정하였다. 콜라게나제-1인 MMP-1은 피부의 구조적 구성요소인 타입 1과 3 콜라겐의 분해에 중추적인 역할을 한다고 알려져있다. 구체적으로, CCD-986sk 세포를 각각 10% 우태아 혈청이 포함된 IMDM 배지에서 배양한 후, 6-웰 플레이트에 1 × 105cells/웰로 분주하여 24시간 동안 배양하였다. FBS의 영향을 배제하기 위하여 무혈청 배지로 교체한 뒤 24시간 동안 배양하고, 콩 발효 추출물을 각각 200, 400 μg/mL, 양성대조군인 레티놀 및 아데노신을 각각 1, 5 μM씩 처리하여 24시간 동안 배양하였다. DPBS로 2번 세척 후, 웰 당 200㎕씩의 DPBS를 넣은 후 UVB (20, 50 mJ/cm2)를 조사한 뒤, DPBS로 한 번 더 세척하고 무혈청 배지를 넣어 24시간 동안 배양하였다. 대조군은 콩 발효 추출물의 처리 없이 배양하였으며, 이후 각 웰의 상층액을 이용하여 human MMP-1 ELISA kit (R&D system)을 사용하여 실험을 진행한 뒤, 마이크로플레이트 리더 분광광도계로 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 8에 나타내었다.
도 8에 나타낸 바와 같이, UVB(20 mJ/cm2) 조사에 의해 CCD-986sk 세포에서 MMP-1의 생산이 급격히 증가하였으나(487.40 pg/ml), 본 발명에 따른 콩 발효 추출물 처리에 의해 유의성 있게 억제됨을 확인하였다. 이를 통해 콩 발효 추출물이 콜라게나제의 생산을 억제시키는 기전을 통해 주름 개선 활성을 나타냄을 확인하였다.
5-3.
MMPs의
mRNA
발현 분석
생체 내에서 생성된 활성산소는 MMPs(metalloproteinases)와 같은 콜라겐 분해 효소의 활성을 촉진시키고 콜라겐의 합성을 억제시킴으로써 피부의 주름의 생성을 촉진시킨다. 이에, UVB 조사 후 6시간 배양한 HaCaT 세포를 사용하여 MMP-1 및 MMP-9의 발현 정도를 mRNA 수준에서 측정하여 평가하였다. 구체적으로, HaCaT 세포를 10% 우태아 혈청이 포함된 DMEM 배지에서 배양 후, 6-웰 플레이트에 5 × 105 cells/웰로 분주하고 24시간 동안 배양하였다. FBS의 영향을 배제하기 위하여 무혈청 배지로 교체한 뒤 다시 24시간 동안 배양하고, 콩 발효 추출물을 각각 100, 200, 400 μg/mL, 양성대조군인 아데노신을 5 μM로 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. DPBS로 2번 세척 후, 웰 당 200㎕의 DPBS를 넣은 후 UVB (50 mJ/cm2)를 조사한 뒤, DPBS로 한 번 더 세척하고 무혈청 배지를 넣고 MMPs의 활성을 증가시키기 위해 TNF-α(10 ng/ml)를 처리한 후 6시간 동안 추가로 배양하였다. PBS로 3회 세척한 세포에 easy-BLUE Total RNA Extraction Kit (iNtRON Biotechonlogy, Korea)를 사용하여 RNA를 추출한 후, 총 RNA (1μg), d(T)16 프라이머, AMV-RT(avian myeloblastosis virus reverse transcriptase)를 사용하여 cDNA를 제조하였다. 상대적인 유전자 발현량은 SYBR green PCR master mix (Applied Biosystems, USA)를 사용하여 real-time PCR(Real-Time PCR System 7500, Applied Biosystems, CA, USA) 프로그램을 통해 측정하였다. 그 결과를 도 9 및 도 10에 나타내었다. 한편, 본 실시예에 및 실시예 7에서 사용한 프라이머의 염기서열을 하기 표 2에 나타내었다.
도 9 및 도 10에 나타낸 바와 같이, 콩 발효 추출물 처리군은 HaCaT 세포에서 UVB 조사에 의해 증가한 MMP-1 및 MMP-9의 mRNA 발현을 효과적으로 감소시키는 것을 확인하였다. 특히, 고농도(200~400 ㎍/㎖)에서는 양성대조군인 레티놀 및 아데노신과 유사하거나 더 높은 억제 활성을 나타냄을 확인하였다.
실시예
6. 콩 발효 추출물의 HAS 발현 촉진 활성 확인
천연보습인자(natural moisturizing factor, NMF)란 각질층에 존재하는 수분을 보수, 유지하는 작용을 하는 수용성 물질로, 아미노산, 펩타이드, 소듐PCA 등으로 구성되어 있으며, 피부의 수분 보유량을 조절하여 각질층의 수분이 증발되는 것을 방지하는 역할을 한다. 진피의 콜라겐, 엘라스틴, 히알루론산 등이 천연보습인자에 속하며 이들 보유량에 따라 피부건강이 달라진다. 히알루론산 합성 효소(Hyaluronan synthase, HAS)는 인간 각질형성세포에서 히알루론산으로 생합성하는데 중요한 역할을 하는 효소로 알려져 있으며 역시 자외선 조사에 의해 감소된다고 보고되어 있다. 이에, UVB 조사된 HaCaT 세포를 이용하여 HAS1의 mRNA 발현량 측정을 통해 콩 발효 추출물의 보습인자에 대한 영향을 확인하였다.
구체적으로, 상기 실시예 5-3과 동일한 방법으로 HaCaT 세포를 배양하였다. 그 후, 세포에 용출 버퍼(PRO-PREP, Intron Biotechnology, Korea)를 넣어 단백질을 추출한 후 원심분리 후 상층액을 수득하였다. 분리된 상층액의 단백질 농도는 Bio-Rad protein assay reagent (Bio-Rad, Hercules, CA, USA)를 이용하여 측정하였다. 또한, 단백질 20 μg을 10% SDS-PAGE 겔에 로딩하여 전기영동을 수행하고, 젤의 단백질을 PVDF 막(Millipore, Billerica, MA, USA)으로 이동시켰다. 5% 탈지분유로 상온에서 1시간 동안 블로킹(blocking)하고, 1차 항체를 가하여 4℃에서 하룻밤 동안 반응시켰다. 그 후, PVDF 막을 T/BST로 세척하고 HRP 결합된 2차 항체를 희석하여 상온에서 2시간 동안 교반한 후, enhanced chemiluminescence detection kit (Amersham Bioscience, Pittsburg, PA, USA)를 사용하여 현상된 단백질을 확인하였다. 그 결과를 도 11에 나타내었다.
도 11에 나타낸 바와 같이, UVB의 조사는 HAS1의 발현을 감소시켰으며, 본 발명에 따른 콩 발효 추출물은 감소되었던 HAS1의 발현을 유의성 있게 회복시킴을 확인하였다. 또한, 상기 효과는 농도 의존성 있게 증가하였고, 양성대조군인 레티놀 및 아데노신과 유사하거나 더 높은 활성을 나타냄을 확인하였다.
실시예
7. 콩 발효 추출물의 항산화 활성 평가
활성산소는 노화, 특히 피부노화의 원인으로 알려져 있으며 질병상태나 자외선과 같은 스트레스를 받을 시 과잉으로 생성되어 피부 세포 및 조직 손상을 유도한다. 계속된 산화적 스트레스는 지질 과산화, 단백질 산화, 세포기질 성분을 단백질 분해효소의 활성화, 탄력 섬유인 콜라겐과 엘라스틴의 사슬의 절단, DNA 손상과 같은 생체 구성 성분들의 손상을 야기시키고 결과적으로 탄력 감소, 주름 및 기미, 주근깨 등 피부 노화가 가속화된다. 따라서, 과잉생산된 활성산소를 억제하고 생성된 활성산소를 효율적으로 제거하는 것은 피부세포를 보호하고 결합조직의 손상을 억제하여 피부노화를 예방하는 데에 도움이 된다. 이에, q-RT PCR 방법을 사용하여 UVB 조사된 HaCaT 세포에서 대표적인 항산화효소인 CAT(catalase)와 SOD(superoxide dismutase)의 발현량을 측정하여 콩 발효 추출물의 항산화 활성을 평가하고자 하였다. q-RT PCR은 상기 실시예 5-3과 동일한 방법을 사용하여 수행하였고, 그 결과를 도 12에 나타내었다.
도 12에 나타낸 바와 같이, UVB의 조사는 CAT 및 SOD의 발현을 각각 감소시켰으나, 본 발명에 따른 콩 발효 추출물은 감소되었던 CAT 및 SOD의 발현을 유의성 있게 회복시킴을 확인하였다. 특히, 본 발명에 따른 콩 발효 추출물은 모든 농도에서 양성대조군인 레티놀 및 아데노신보다 현저히 높은 항산화 활성을 나타내었다. 상기 결과를 통해, 본 발명에 따른 콩 발효 추출물은 산화적 스트레스에 대한 피부에의 항산화 효과를 나타낼 수 있음을 확인하였다.
실시예
8. 피부 투과도 실험
본 발명에 따른 콩 발효 추출물의 피부 내 흡수율을 평가하기 위해, 콩 발효 추출물이 포함되지 않은 시판되는 주름 개선용 화장품(대조군), 본 발명에 따른 콩 발효 추출물을 함유하는 화장품 제제와 함께 인공피부 피부 투과도 실험을 수행하였다. 인공피부는 3D 피부모델인 Neoderm-ED(TEGO Science, Korea)를 구매하여 사용하였다. 상기 인공피부를 각질층이 위로 향하도록 하여 프란츠 확산 세포(Franz diffusion cell) 양쪽에 부착시킨 후 클램프로 고정하였다. 이후, 챔버 한쪽(donor chamber)에는 콩 발효 추출물을 함유하는 화장품 제제 5mL, 다른 한쪽(receptor chamber)에는 PBS 5mL를 넣고 확산셀 드라이브 콘솔(diffusion cell drive console)을 이용하여 37℃, 600 rpm으로 일정하게 교반하였다. 콩 발효 추출물을 함유하는 화장품 제제 0.2 ml를 피부 표면에 가한 후 매 시간(4, 8, 12, 16, 20 및 24시간)마다 receptor phase 0.5 ml를 채취하고, 최대 흡수 파장(280nm)에서의 흡광도를 이용하여 채취한 시료 속 콩 발효 추출물의 양을 정량하였다. 24시간 후, 각질층과 피부에 남아있는 콩 발효 추출물의 양을 측정하기 위해 인공피부를 PBS로 3회에 걸쳐 세척하였다. 세척 후 receptor phase와 닿지 않은 부분을 잘라내고 남은 부분에 대해 테이프 스트리핑(tape stripping)을 이용해 각질층에 남아있는 콩 발효 추출물의 양을 따로 측정하였다. 각질층에 남아있는 콩 발효 추출물의 양을 측정하기 위해 테이프를 이용하여 피부의 각질층 부분을 3회 벗겨내었으며 이렇게 얻어진 테이프에 10ml의 에탄올을 넣고 1시간 동안 초음파 세척기를 이용하여 콩 발효 추출물을 추출하였다. 그 후 회전 증발기를 이용하여 에탄올을 증발시키고 추출된 콩 발효 추출물을 0.5 ml의 receptor phase에 녹여내었다. 테이프 스트리핑을 거친 후 각질층이 제거된 피부는 수술용 가위를 이용해 세절하였고 세절한 피부의 처리는 테이프와 동일하게 진행하였다. 이렇게 얻어진 시료 속 콩(서리태) 발효 추출물의 양은 흡광도를 이용하여 측정하였다. 그 결과를 도 13에 나타내었다.
도 13에 나타낸 바와 같이, 대조군과 본 발명에 따른 콩 발효 추출물을 함유하는 화장품 제제는 모두 시간 의존적으로 피부 투과량이 증가하였다. 구체적으로, 24시간 후 누적 투과량(Transdermal)은 대조군의 경우 63.08 μg, 콩 발효 추출물을 함유하는 화장품 제제의 경우 57.8μg으로 나타남을 확인하였다. 상기 결과를 통해, 본 발명에 따른 콩 발효 추출물은 우수한 피부 흡수율을 나타냄을 확인하였다.
실시예
9. 피부 자극 확인 실험
본 발명에 따른 콩 발효 추출물의 피부 자극 정도를 평가하기 위해, 다음과 같은 실험을 수행하였다. 만 19~59세의 성인 여성 32명을 시험 대상자로 선정하였으며, 시험 대상자의 등 부위를 70% 에탄올로 닦고 건조한 뒤, 본 발명에 따른 콩 발효 추출물을 함유하는 화장품 제제(크림)를 25㎕씩 피부에 적하하고, 패치 제거 1시간, 24시간 후에 전문가에 의해 피부 자극 정도를 판정하였다. 평가 기준은 표 3과 같다(국제접촉피부염연구회의 판정기준에 따름).
피부 자극 지수는 다음과 같이 계산하였다.
실험 결과, 본 발명에 따른 콩 발효 추출물을 함유하는 화장품 제제의 피부 자극 지수는 0.00으로 비자극성임을 확인하였다.
실시예
10. 눈가 주름 개선 효능 확인 실험
본 발명에 따른 콩 발효 추출물의 눈가 주름 개선 효능을 평가하기 위해, 다음과 같은 실험을 수행하였다. 만 20~ 55세의 성인 여성 20명을 대상으로 하였으며, 본 발명에 따른 콩 발효 추출물을 함유하는 화장품 제제(크림)를 하루에 1회 적당량 덜어 안면(눈가) 부위에 발라주었다. 제품 사용 전후, 동일한 부위에 대해 기기 평가 Antera 3D를 수행하였다. 보다 구체적으로, Antera 3D(Miravex, Ireland)로 영상화한 후 기기에서 제공하는 분석프로그램(Antera 3D software, Miravex, Ireland)을 사용하여 기기적 분석값을 적용하였다. Antera 3D는 주름의 시각화 기능을 향상시키고 밀도 및 입상과 같은 관련 특성을 수량화할 수 있는 장비이며, 주름과 관련된 여러 매개변수를 측정할 수 있다. 측정된 이미지는 Antera 3D software를 이용하여 주름의 개선 정도를 분석하였으며, 눈가 주름에 대한 Antera 3D 분석 변수로는 Maximum Depth(선택된 범위 내에서 주름의 최대 깊이를 의미)를 선정하였으며, 분석 값이 작아질수록 주름이 개선된 것을 의미한다. 그 결과를 도 14에 나타내었다.
도 14에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 콩 발효 추출물을 함유하는 화장품 제제의 제품 사용 전후, 유의하게 눈가 주름이 개선된 것을 확인하였다.
상기 결과를 통해, 본 발명에 따른 콩 발효 추출물은 엘라스타제 및 콜라게나제인 MMP-1, MMP-9의 발현 및 생성을 억제하고, 보습인자인 히알루론산 생성효소의 발현을 증가시키며, 나아가 항산화 효소의 발현을 증가시킴을 확인하였다. 이는 본 발명에 따른 콩 발효 추출물이 콜라겐 합성 촉진, 주름 개선 및 항노화 효과가 있음을 의미하는 바, 본 발명에 따른 콩 발효 추출물은 다양한 기능성 화장료 및 식품 분야에서 다양하게 활용될 수 있다.
이하, 제제예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 제제예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 제제예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는다.
제제예
1.
화장료의
제조
1-1. 유연화장수(스킨로션)의 제조
콩 발효 추출물 0.5%
베타-1,3-글루칸 1.0%
부틸렌글리콜 2.0%
프로필렌글리콜 2.0%
카르복시비닐폴리머 0.1%
피이지-12 노닐페닐에테르 0.2%
폴리솔베이트 80 0.4%
에탄올 10.0%
트리에탄올아민 0.1%
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100%
1-2. 영양화장수(
밀크로션
)의 제조
콩 발효 추출물 0.5%
베타-1,3-글루칸 1.0 %
밀납 4.0 %
폴리솔베이트 60 1.5 %
솔비탄세스퀴올레이트 1.5 %
유동파라핀 0.5 %
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0 %
글리세린 3.0 %
부틸렌글리콜 3.0 %
프로필렌글리콜 3.0 %
카르복시비닐 폴리머 0.1 %
트리에탄올아민 0.2 %
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100 %
1-3. 영양크림의 제조
콩 발효 추출물 0.5%
베타-1,3-글루칸 5.0 %
밀날 10.0 %
폴리솔베이트 60 1.5 %
피이지 60 경화피마자유 2.0 %
솔비탄세스퀴올레이트 0.5 %
유동파라핀 10.0 %
스쿠알란 5.0 %
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0 %
글리세린 5.0 %
부틸렌글리콜 3.0 %
프로필렌글리콜 3.0 %
트리에탄올아민 0.2 %
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 to 100%
제제예
2. 식품 조성물의 제조
2-1. 건강기능식품의 제조
콩 발효 추출물 100 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 μg
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 μg
비타민 C 10 mg
비오틴 10 μg
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 μg
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예
2-2. 건강 음료의 제조
콩 발효 추출물 1000 mg
구연산 1000 mg
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900㎖가 되도록 혼합한다. 통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다. 상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
이상, 본 발명내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.
Claims (13)
- 30 내지 40℃에서 20 내지 80시간 동안 락토바실러스 부크네리(Lactobacillus buchneri)로 발효시킨 서리태 발효 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 예방 개선용 화장료 조성물.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 추출물은 전체 조성물에 0.01 내지 30%(w/v)의 농도로 포함되는 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 추출물은 엘라스타제 또는 콜라게나제 합성을 저해시키는 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 30 내지 40℃에서 20 내지 80시간 동안 락토바실러스 부크네리(Lactobacillus buchneri)로 발효시킨 서리태 발효 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항노화용 화장료 조성물.
- 30 내지 40℃에서 20 내지 80시간 동안 락토바실러스 부크네리(Lactobacillus buchneri)로 발효시킨 서리태 발효 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용 화장료 조성물.
- 30 내지 40℃에서 20 내지 80시간 동안 락토바실러스 부크네리(Lactobacillus buchneri)로 발효시킨 서리태 발효 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 예방 또는 개선용 식품 조성물.
- 30 내지 40℃에서 20 내지 80시간 동안 락토바실러스 부크네리(Lactobacillus buchneri)로 발효시킨 서리태 발효 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항노화용 식품 조성물.
- 30 내지 40℃에서 20 내지 80시간 동안 락토바실러스 부크네리(Lactobacillus buchneri)로 발효시킨 서리태 발효 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 보습용 식품 조성물.
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-
2019
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Also Published As
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