WO2011108059A1 - キサンチンオキシダーゼ阻害剤 - Google Patents

キサンチンオキシダーゼ阻害剤 Download PDF

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WO2011108059A1
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oxidase inhibitor
extract
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伊波 匡彦
喜朗 飯沼
綾乃 金城
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株式会社サウスプロダクト
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    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Definitions

  • the present invention relates to a xanthine oxidase inhibitor that is derived from a natural product and has high safety and excellent xanthine oxidase inhibitory activity.
  • nucleic acids are metabolized to purine, hypoxanthine, and xanthine to form uric acid, which is excreted in urine.
  • uric acid is excreted in urine.
  • the production and excretion of uric acid is balanced and the uric acid level in the blood is kept low, but if the production of uric acid becomes excessive or the excretion decreases, the uric acid level becomes abnormally high. cause.
  • accumulated uric acid becomes a sodium salt, which crystallizes and deposits on the inner surface of the joint, which becomes gout, resulting in gout nodules, joint dysfunction, joint deformation, seizure with severe pain, and the like.
  • the present invention is a novel xanthine oxidase inhibitor that effectively inhibits xanthine oxidase and can effectively prevent and treat hyperuricemia and gout by being taken daily and with high safety. Is to provide.
  • squeezer juice or extract has an excellent xanthine oxidase inhibitory action, and that the juice or extract contains xanthine oxidase inhibitory action.
  • polymethoxyflavones such as isosinensetin, sinensetin and hesperidin can be produced.
  • the present invention is a xanthine oxidase inhibitor comprising a squeezer juice or extract as an active ingredient.
  • this invention is the food / beverage products containing the said xanthine oxidase inhibitor.
  • the present invention is a xanthine oxidase inhibitor which is a prophylactic / therapeutic agent for hyperuricemia or a prophylactic / therapeutic agent for gout.
  • the xanthine oxidase inhibitor of the present invention is highly safe and can effectively reduce blood uric acid levels by daily intake, it has excellent preventive and therapeutic effects on hyperuricemia and gout Have
  • Example 2 it is a figure which shows the xanthine oxidase inhibitory activity of the fraction which fractionated the synthetic resin adsorption fraction of the sequwacer extract by column chromatography.
  • the xanthine oxidase inhibitor of the present invention uses Siquawa (Chirasu depressa Hayata) as a raw material, and contains the juice or extract of Siquawa as an active ingredient.
  • the squeezer juice may be directly squeezed from the fruit (primary juice) or re-squeezed from the juice residue (secondary juice). Is preferred because of its high xanthine oxidase inhibitory activity.
  • Manufacture of squeezed liquid can be performed in accordance with a conventional method, for example, well-known apparatuses, such as a screw press machine, a centrifugal squeezing machine, a belt type squeezing machine, can be used.
  • the extract of sequwacer is obtained by extracting the peel, sandbag, juice residue, etc. of sequwacer with an extraction solvent.
  • the extraction solvent is preferably an aqueous solvent, and examples thereof include water, alcohols such as ethanol and methanol; ketones such as acetone, esters such as ethyl acetate, and mixtures thereof. Of these, hydrous ethanol and ethanol are preferred in that they are used as food.
  • the extraction operation is usually carried out at a temperature of 4 to 80 ° C. and a time of about 1 to 24 using an aqueous solvent of about 1 to 10 times the volume of the sequwacer.
  • the extract solution from the above extraction solvent can be used as it is, but an adsorption fraction obtained by treating this extract solution with a synthetic adsorption resin can also be used.
  • Such an adsorbed fraction is preferable because of its high xanthine oxidase inhibitory activity.
  • the synthetic resin adsorption fraction can be obtained, for example, by applying the above extract to a column packed with a synthetic adsorption resin, washing the resin with water as necessary, and then eluting with an organic solvent or a hydrous organic solvent. Obtainable.
  • Examples of the synthetic adsorption resin include styrene divinylbenzene and methacrylic ester, and commercially available styrene divinylbenzene includes, for example, Diaion HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion HP.
  • Examples of methacrylic acid esters such as -21 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) include Diaion HP2MG (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation).
  • a styrene divinylbenzene-based synthetic adsorption resin is preferable and Diaion HP-20 is preferably used because it has a wide application range and is used for separation of foods and pharmaceuticals.
  • the organic solvent or water-containing organic solvent used for eluting the adsorbed fraction from the synthetic adsorption resin methanol, ethanol, acetone, a mixed solution of these with water, or the like is used.
  • ethanol, methanol, or the liquid mixture of these and water is preferable.
  • the adsorbed component may be eluted using 40 to 95% ethanol water.
  • the extract of the above-mentioned sequwacer include an extract obtained by extracting the juice residue with ethanol water having a concentration of 5 to 60%, and an adsorption fraction obtained by further treating this extract with a synthetic adsorption resin. .
  • the squeezer juice or extract described above may be used as it is, but may be concentrated, dried, or powdered using an evaporator, a freeze dryer or the like, if necessary. Further, if necessary, further purification may be performed by commonly used separation and purification means such as column chromatography, batch method, liquid-liquid distribution and the like.
  • a synthetic adsorption resin examples include styrene divinylbenzene and methacrylic acid ester.
  • commercially available styrene divinylbenzene includes, for example, Diaion HP-20 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion HP- 21 (Mitsubishi Chemical Corporation) and the like.
  • silica gel silica gel 60 (made by Merck) etc. can be illustrated as a commercial item.
  • ODS Wakosil-II5C 18 HG (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) etc. can be illustrated as a commercial item.
  • Examples of the mobile phase eluted from the carrier include methanol, ethanol, ethyl acetate, hexane, and acetonitrile.
  • the squeezer juice or extract is fractionated by means of separation and purification such as column chromatography, and various polymethoxyflavones are contained by proceeding with purification using the xanthine oxidase inhibitory activity as an index. A fraction is obtained.
  • a compound represented by the following formula (1) or (2) is preferable.
  • R 1 represents a hydrogen atom, a methoxy group or a hydroxyl group
  • R 2 to R 5 independently represent a hydrogen atom or a methoxy group
  • polymethoxyflavones of the above formula (1) examples include isosinensetin, sinensetin, [3'-Hydroxy-5, -56, 4'-Trimethoxyflavanone], [5, 6, 7, 8-Tetramethoxyflavone] and the like.
  • the compound of the above formula (2) is hesperidin. From the above fraction, each compound can be isolated by further purification. Since these compounds each have xanthine oxidase inhibitory activity, one or more of these compounds can be used as the active ingredient of the xanthine oxidase inhibitor of the present invention.
  • Isosinensetin, sinensetin, hesperidin, [3'-Hydroxy-5, 6, 4'-Trimethoxyflavanone] and [5, 6, 7, 8-Tetramethoxyflavone] were isolated and purified from the squeezer juice or extract. It may be a thing, and it may be extracted from plants other than Shikuwasa, or may be synthesized. Among these, isosinensetin, sinensetin and hesperidin are preferred because of their high xanthine oxidase inhibitory activity.
  • Isosinensetin, sinensetin, [3'-Hydroxy-5, 6, 4'-Trimethoxyflavanone] and [5, 6, 7, 8-Tetramethoxyflavone] are compounds represented by the following formulas 3-6.
  • the xanthine oxidase inhibitor of the present invention includes the above-described squewacer juice, extract, or isosinensetin, sinensetin, hesperidin, [3′-Hydroxy-5, 6, 4'-Trimethoxyflavanone], [5, 6, 7 , 8-Tetramethoxyflavone], etc., in accordance with a known pharmaceutical manufacturing method, a pharmacologically acceptable carrier, excipient, binder, disintegrant, lubricant, etc. Can be obtained.
  • carriers and excipients used in the formulation include lactose, glucose, dextrin, starch, and crystalline cellulose.
  • binder examples include starch, gelatin, gum arabic powder, and hydroxypropyl cellulose.
  • disintegrant examples include starch, agar, and cellulose.
  • lubricant examples include magnesium stearate, talc, Calcium stearate, glyceryl monostearate and the like are used.
  • the form of the xanthine oxidase inhibitor of the present invention can be used as a solid form such as tablets, powders, capsules, granules and pills, and liquid forms such as suspensions, emulsions and syrups.
  • a sequwacer extract When using a sequwacer extract as an active ingredient, it is preferably blended in an amount of 2 to 80%, more preferably 20 to 40%, in terms of dry matter based on the whole preparation.
  • polymethoxyflavones such as isosinensetin, sinensetin, and hesperidin are used as active ingredients, one of them may be blended alone, or two or more may be blended together. It is preferable to add 0.1 to 50% with respect to the whole, and more preferably 1 to 10%.
  • the effective dose of the xanthine oxidase inhibitor of the present invention may be appropriately set depending on the age, weight, symptoms, etc. of the patient. For example, when isosinensetin is used as an active ingredient, it may be about 1300 to 2000 mg per day for an adult. .
  • the xanthine oxidase inhibitor of the present invention thus obtained can effectively inhibit xanthine oxidase involved in the conversion of hypoxanthine to xanthine and xanthine to uric acid in the process of nucleic acid metabolism, and can suppress the production of uric acid.
  • citrate preparations are used clinically as therapeutic agents for hyperuricemia and gout. Uric acid dissolved in blood depends on the pH of urine, and the solubility is low in the acidic range and high in the neutral range. Citrate preparations are metabolized by the citrate cycle to produce bicarbonate ions, which act as bases in the body and alkalinize urine to promote uric acid excretion. Since Siquaser contains a large amount of citric acid, it also has the action of lowering the pH of urine and promoting the excretion of uric acid. Is expected to have preventive and therapeutic effects.
  • the above xanthine oxidase inhibitor can be used as a food or drink useful for preventing or treating hyperuricemia and gout by adding various nutritional components as they are or by adding them to known food or drink.
  • the food and drink include fruit juice drinks, soft drinks, concentrated drinks, nutritional drinks, alcoholic drinks, gums, candies and the like.
  • Example 1 Manufacture of sequwacer juice: Shikuwasa fruit was squeezed with a belt-type press to obtain primary fruit juice. Further, the squeezed juice was re-squeezed with a screw press (SRE-150S, Shinwa Engineering Co., Ltd.) to obtain a secondary squeezed juice. The citric acid content of this secondary juice was measured and found to be 1.66% (w / v). The citric acid content was determined by measuring the acidity by acid titration and converting to citric acid (citric acid conversion coefficient 0.0064).
  • Test example 1 Measurement of xanthine oxidase inhibitory activity: The Xanthine Oxidase Assay Kit (Funakoshi) was modified with respect to the primary juice and secondary juice of Sequwacer obtained in Example 1, and the xanthine oxidase inhibitory activity was measured. That is, 50 ⁇ l of a sample and 50 ⁇ l of Xanthine Oxidase (0.1 mU / ml 1 mU / ml. Oxidase Assay Kit 96tes) prepared with XO Sample Buffer were mixed.
  • Example 2 Manufacture of sequwacer extract (1): 560 L of 50% ethanol was added to 277 kg of squeezer squeezed residue, and stationary extraction was performed overnight. The extract was filtered through a strainer and clarified by ultracentrifugation. The extract was applied to a DIAION HP20 column (15 L) to obtain a non-adsorbed permeate and a 95% ethanol eluate (70 L). The 95% ethanol eluate was concentrated to 15 L with an evaporator to obtain an adsorbed fraction.
  • Example 3 Manufacture of sequwacer extract (2): 8 g of the adsorption fraction obtained in Example 2 was dissolved in a mixed solvent of water and ethanol, and passed through DIAION HP20 column chromatography (5.9 ⁇ 25 cm). Next, 20%, 40%, 60%, 80%, 95% ethanol and acetone are passed through stepwise, and 1000 mL of the column-passed solution is fractionated into 6 fractions. A serial number was assigned from the top of the flow-through liquid (Fr. 1 to 6). Each fraction was measured for xanthine oxidase inhibitory activity in the same manner as in Test Example 1. The results are shown in FIG. Fr., which has the strongest inhibitory activity.
  • Fr. 4-7-2-3 (6 mg) was obtained. This fraction was identified as isocyanintin by NMR and MS analysis. Similarly, Fr. 5, Fr. 1 and Fr. The fractions were purified from 4 to separate sinensetin, hesperidin and [3′-Hydroxy-5, 6, 4′-Trimethoxyflavanone].
  • the IC 50 of isosinentin, sinencetin and hesperidin is shown in Table 1 below.
  • Treatment example 1 Preparation of secondary drink containing Sequwacer juice: A beverage having the following formulation was prepared. (Prescription) (per 100ml) (1) Sikhwasa secondary juice of Example 1 5.0 g (2) Fructose 4.0g (3) L-ascorbic acid 0.05 g (4) Fragrance 0.1g (5) Purified water Total 100g (100g with purified water)
  • the xanthine oxidase inhibitor of the present invention is highly safe and can be taken daily to control blood uric acid levels, it is useful as a medicine or food for preventing or treating hyperuricemia or gout Is something.

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Abstract

 安全性が高く日常的に継続して摂取することにより、キサンチンオキシダーゼを有効に阻害し、高尿酸血症および痛風を効果的に予防・治療することが可能な新規キサンチンオキシダーゼ阻害剤を提供することを目的とする。該キサンチンオキシダーゼ阻害剤シークワサーの搾汁液または抽出物を有効成分とするキサンチンオキシダーゼ阻害剤である。

Description

キサンチンオキシダーゼ阻害剤
 本発明は、天然物由来で安全性が高く、優れたキサンチンオキシダーゼ阻害活性を有するキサンチンオキシダーゼ阻害剤に関する。
 近年、食生活が豊かになり、高カロリー、高タンパク、高脂肪の食品の摂取量が増加するに伴い、高尿酸血症や痛風などのプリン体の代謝異常による疾患が増加している。生体内では、核酸が代謝されてプリン体、ヒポキサンチン、キサンチンを経て尿酸となり、尿中に排泄される。通常、尿酸の産生と排泄は均衡し、血中の尿酸値は低く保たれているが、尿酸の産生が過剰となったり、排泄が低下すると、尿酸値が異常に高くなる高尿酸血症を引き起こす。さらに蓄積された尿酸がナトリウム塩となり、結晶化して関節の内面に沈着すると痛風となり、痛風結節、関節機能障害、関節の変形、激痛を伴う発作などが生じる。
 キサンチンオキシダーゼは、上記核酸の代謝において、ヒポキサンチンからキサンチンへの変換およびキサンチンから尿酸への変換に関与しているため、キサンチンオキシダーゼを阻害することにより、尿酸の産生量を減少させることができる。このようなキサンチンオキシダーゼ阻害作用を有する薬物としてアロプリノールが用いられている。一方、高尿酸血症や痛風の予防の観点からは、日常的に摂取して尿酸値をコントロールできることが望ましいため、より安全性の高い植物由来の成分についても検討されており、例えば、オオバナサルスベリやセイヨウナツユキソウ由来の成分がキサンチンオキシダーゼ阻害活性を有することが報告されている(特許文献1および2)。
特開2000-291088号公報 特開2002-145875号公報
 本発明は、安全性が高く日常的に継続して摂取することによって、キサンチンオキシダーゼを有効に阻害し、高尿酸血症および痛風を効果的に予防・治療することが可能な新規キサンチンオキシダーゼ阻害剤を提供することにある。
 本発明者らは、鋭意研究を行った結果、シークワサーの搾汁液または抽出物が、優れたキサンチンオキシダーゼ阻害作用を有すること、さらに当該搾汁液または抽出物のキサンチンオキシダーゼ阻害作用は、これに含有されるイソシネンセチン、シネンセチンおよびヘスペリジンなどのポリメトキシフラボン類が奏することを見出し、本発明を完成するに至った。
 すなわち本発明は、シークワサーの搾汁液または抽出物を有効成分とするキサンチンオキシダーゼ阻害剤である。
 また本発明は、上記キサンチンオキシダーゼ阻害剤を含有する飲食品である。
 さらに本発明は、高尿酸血症の予防・治療剤または痛風の予防・治療剤であるキサンチンオキシダーゼ阻害剤である。
 本発明のキサンチンオキシダーゼ阻害剤は、安全性が高く、日常的に摂取することにより血中尿酸値を有効に低下させることができるため、高尿酸血症や痛風に対して優れた予防・治療効果を有する。
実施例2において、シークワサー抽出液の合成樹脂吸着画分をカラムクロマトグラフィーで分画した画分のキサンチンオキシダーゼ阻害活性を示す図である。
 本発明のキサンチンオキシダーゼ阻害剤は、シークワサー(ヒラミレモン:Citrus depressa Hayata)を原料として用いるものであり、シークワサーの搾汁液または抽出物を有効成分とする。シークワサーの搾汁液は、果実から直接搾汁したものであっても(一次搾汁液)、搾汁残渣から再搾汁したもの(二次搾汁液)であってもよいが、二次搾汁液の方がキサンチンオキシダーゼ阻害活性が高いために好ましい。搾汁液の製造は、常法に従って行うことができ、例えば、スクリュープレス機、遠心圧搾機、ベルト式圧搾機等の公知の装置を用いることができる。
 一方、シークワサーの抽出物は、シークワサーの果皮、砂嚢、搾汁残渣等を抽出溶媒によって抽出したものである。抽出溶媒としては、水性溶媒が好ましく、水、エタノール、メタノール等のアルコール;アセトン等のケトン類、酢酸エチル等のエステル類、およびこれらの混液等が例示できる。これらのうち、食品として使用されるという点で含水エタノール、エタノールが好ましい。抽出操作は、通常、シークワサーに対して1~10倍容程度の水性溶媒を用い、温度4~80℃、時間1~24程度で行えばよい。
 本発明のシークワサー抽出物として、上記抽出溶媒による抽出液をそのまま用いることもできるが、さらにこの抽出液を合成吸着樹脂で処理して得られる吸着画分を用いることもできる。このような吸着画分は、キサンチンオキシダーゼ阻害活性が高いため好ましい。合成樹脂吸着画分は、例えば、合成吸着樹脂を充填したカラムに上記抽出液を適用した後、必要に応じて水等で該樹脂を洗浄し、次いで有機溶媒または含水有機溶媒で溶出することにより得ることができる。
 上記合成吸着樹脂としては、スチレンジビニルベンゼン系、メタクリル酸エステル系等が例示でき、市販品として、スチレンジビニルベンゼン系では、例えば、ダイヤイオンHP-20(三菱化学(株)製)、ダイヤイオンHP-21(三菱化学(株)製)等、メタクリル酸エステル系では、ダイヤイオンHP2MG(三菱化学(株)製)等を挙げることができる。これらの中でも、適用範囲が広く、食品、医薬品の分離に用いられるという点で、スチレンジビニルベンゼン系の合成吸着樹脂が好ましく、ダイヤイオンHP-20が好適に用いられる。
 上記合成吸着樹脂から吸着画分を溶出するために用いられる有機溶媒または含水有機溶媒としては、メタノール、エタノール、アセトンおよび、これらと水との混合液等が用いられる。これらの中ではエタノール、メタノールまたは、これらと水との混合液が好ましい。例えば、合成吸着樹脂としてダイヤイオンHP-20 (三菱化学(株)製)を使用する場合、40~95%のエタノール水を用いて吸着成分を溶出すればよい。
 上記シークワサーの抽出物の好ましい例としては、搾汁残渣に濃度5~60%のエタノール水により抽出した抽出物や、この抽出物をさらに合成吸着樹脂で処理して得られる吸着画分が挙げられる。
 上記したシークワサーの搾汁液または抽出物は、そのまま使用してもよいが、必要に応じてエバポレータや凍結乾燥機等を使用して濃縮または乾燥・粉末化してもよい。また、必要により、カラムクロマトグラフィー、バッチ法、液液分配等の一般的に用いられる分離精製手段により更に精製してもよい。
 カラムクロマトグラフィーは、合成吸着樹脂、シリカゲル、ODS等を担体として、これらを単独または組み合わせて用いることができる。合成吸着樹脂としては、スチレンジビニルベンゼン系、メタクリル酸エステル系等が例示でき、市販品として、スチレンジビニルベンゼン系では、例えば、ダイヤイオンHP-20(三菱化学(株)製)、ダイヤイオンHP-21(三菱化学(株)製)等が挙げられる。シリカゲルとしては、市販品として、シリカゲル60(メルク製)等を例示できる。ODSとしては、市販品として、Wakosil-II5C18 HG(和光純薬工業(株))等を例示できる。
 上記担体から溶出する移動相としては、メタノール、エタノール、酢酸エチル、ヘキサン、アセトニトリル等が挙げられる。
 このようにカラムクロマトグラフィー等の分離精製手段により、上記シークワサーの搾汁液または抽出物を分画し、そのキサンチンオキシダーゼ阻害活性を指標にして精製を進めることによって、種々のポリメトキシフラボン類を含有する画分が得られる。ポリメトキシフラボン類のうち、下記式(1)または(2)で表される化合物が好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
(式中、R1は水素原子、メトキシ基または水酸基を示し、R2~R5は独立して水素原子又はメトキシ基を示す)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
 上記式(1)のポリメトキシフラボン類としては、例えば、イソシネンセチン、シネンセチン、[3’-Hydroxy-5, 6, 4’-Trimethoxyflavanone]、[5, 6, 7, 8-Tetramethoxyflavone]などが例示できる。また、上記式(2)の化合物はヘスペリジンである。上記画分から、さらに精製を行いそれぞれの化合物を単離することができる。これらの化合物は、それぞれキサンチンオキシダーゼ阻害活性を有するため、これらの1種または2種以上を本発明のキサンチンオキシダーゼ阻害剤の有効成分とすることができる。イソシネンセチン、シネンセチン、ヘスペリジン、[3’-Hydroxy-5, 6, 4’-Trimethoxyflavanone]および、[5, 6, 7, 8-Tetramethoxyflavone]は、上記シークワサーの搾汁液または抽出物から単離・精製したものであってもよく、また、シークワサー以外の植物から抽出したものであっても、さらには合成したものであってもよい。これらの中でもキサンチンオキシダーゼ阻害活性が高いことから、イソシネンセチン、シネンセチン、ヘスペリジンが好適である。
 イソシネンセチン、シネンセチン、[3’-Hydroxy-5, 6, 4’-Trimethoxyflavanone]、[5, 6, 7, 8-Tetramethoxyflavone]は、下記式3~6で示される化合物である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
 本発明のキサンチンオキシダーゼ阻害剤は、上記シークワサーの搾汁液、抽出物またはこれに含まれるイソシネンセチン、シネンセチン、ヘスペリジン、[3’-Hydroxy-5, 6, 4’-Trimethoxyflavanone]、[5, 6, 7, 8-Tetramethoxyflavone]などのポリメトキシフラボン類を、公知の製剤学的製法に準じて、薬理学的に許容され得る担体、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤などを加え、製剤化することにより得られる。製剤化において用いられる担体や賦形剤としては、たとえば乳糖、ブドウ糖、デキストリン、デンプン、結晶セルロースなどが用いられる。結合剤としては、例えば、デンプン、ゼラチン、アラビアゴム末、ヒドロキシプロピルセルロースなど、崩壊剤としては、例えば、デンプン、寒天、セルロース類などが、滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸カルシウム、モノステアリン酸グリセリンなどが用いられる。
 本発明のキサンチンオキシダーゼ阻害剤の形態としては、錠剤、散剤、カプセル剤、顆粒剤、丸剤などの固形剤や懸濁剤、乳剤、シロップ剤などの液剤の形態として利用できる。
 有効成分としてシークワサー抽出物を用いる場合、製剤全体に対して、乾燥物換算で2~80%配合することが好ましく、20~40%が更に好ましい。また、上記イソシネンセチン、シネンセチン、ヘスペリジンなどのポリメトキシフラボン類を有効成分とする場合は、これらのうち1種を単独で配合しても良いが、2種以上を組み合わせて配合しても良く、製剤全体に対して、0.1~50%配合することが好ましく、1~10%が更に好ましい。
 本発明のキサンチンオキシダーゼ阻害剤の有効投与量は、患者の年齢、体重、症状等により適宜設定すればよいが、例えば、イソシネンセチンを有効成分とする場合、大人1日当たり1300~2000mg程度とすればよい。
 かくして得られた本発明のキサンチンオキシダーゼ阻害剤は、核酸の代謝過程におけるヒポキサンチンからキサンチンおよびキサンチンから尿酸への変換に関与するキサンチンオキシダーゼを有効に阻害し、尿酸の産生を抑制することができる。一方、クエン酸塩製剤が高尿酸血症および痛風の治療剤として臨床で用いられている。血中に溶解する尿酸は尿のpHに依存し、酸性域では溶解度が低く、中性域では高くなる。クエン酸塩製剤は、クエン酸回路によって代謝されて重炭酸イオンを生成し、これが体内で塩基として働き、尿をアルカリ化することにより、尿酸の排泄を促進する。シークワサーには、クエン酸が多く含有されるため、尿のpHを低下させ尿酸の排泄を促進する作用をも有し、上記キサンチンオキシダーゼ阻害作用と相俟って相乗的な高尿酸血症および痛風の予防・治療効果が期待される。
 また、上記キサンチンオキシダーゼ阻害剤をそのまま、あるいは種々の栄養成分を加えたり、公知の飲食品に添加することによって、高尿酸血症および痛風の予防・治療に有用な飲食品とすることができる。飲食品の好ましい例としては、果汁飲料、清涼飲料、濃縮飲料、栄養飲料、アルコール飲料、ガム、キャンディー等が例示される。
 次に実施例を挙げて、本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に何ら制約されるものではない。
実 施 例 1
  シークワサー搾汁液の製造:
 シークワサーの果実をベルト式圧搾機にて搾汁し、一次果汁を得た。さらに、その搾汁滓をスクリュープレス機(SRE-150S、信和エンジニアリング(株))にて再搾汁し、二次搾汁液を得た。この二次搾汁液について、クエン酸含量の測定を行ったところ、1.66%(w/v)であった。クエン酸含量は、酸滴定により酸度を測定し、クエン酸に換算して求めた(クエン酸換算係数0.0064)。
試 験 例 1
  キサンチンオキシダーゼ阻害活性の測定:
 実施例1で得られたシークワサーの一次果汁及び二次搾汁液について、Xanthine Oxidase Assay Kit (フナコシ)を改変し、キサンチンオキシダーゼ阻害活性を測定した。すなわち、試料50μlとXO Sample Bufferにより調製したXanthine Oxidase(0.1mU/ml1mU/ml.Oxidase Assay Kit 96tes)50μlを混合した。それに、XO Assay Buffer、Detector及びHorseradish Peroxidaseにより調製した反応試液を50μl加え、37℃で45分間反応させ、蛍光分光光度計にて、励起540nm、蛍光590nmで測定した。対照には、試料溶液の代わりにXO Sample Bufferを用い、また、それぞれのブランクとして、酵素溶液の代わりにXO Sample bufferを加えて同様の操作を行った。上記のように測定し、下記式により阻害率を求めたところ、5,000μg/ml果汁あたり、一次果汁は41.4%、二次搾汁液は65.8%であった。
(キサンチンオキシダーゼ阻害率)
阻害率(%)=[(A-B)-(C-D)]/(A-B)×100
 但し、A:対照溶液の590nmにおける蛍光度、B:対照溶液ブランクの590nmにおける蛍光度、C:試料溶液の590nmにおける蛍光度、D:試料溶液ブランクの590nmにおける蛍光度である。
実 施 例 2
  シークワサー抽出物の製造(1):
 シークワサー搾汁残渣277kgに50%エタノール560Lを加え、一晩静置抽出を行った。ストレイナーによりろ過後、超遠心分離により清澄化したものを抽出液とした。抽出液は、DIAION HP20カラム(15L)に供し、非吸着の透過液と95%エタノール溶出液(70L)を得た。この95%エタノール溶出液をエバポールにて15Lに濃縮し吸着画分を得た。
実 施 例 3
  シークワサー抽出物の製造(2):
 実施例2で得られた吸着画分8gを水とエタノールの混合溶媒に溶解し、DIAION HP20カラムクロマトグラフィー(5.9×25cm)に通液させた。次に、段階的に20%、40%、60%、80%、95%エタノール、アセトンを通液し、カラム通過液を1000mLずつ分取して6画分に分画し、それぞれの画分に通過液の先頭から通し番号を付けた(Fr.1~6)。それぞれの画分について、試験例1と同様にしてキサンチンオキシダーゼ阻害活性を測定した。結果を図1に示す。最も阻害活性の強いFr.4(932mg)をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(4.8×17cm;溶媒系ヘキサン/酢酸エチル及び酢酸エチル/メタノール)により8画分に分画し(Fr.4-1~4-8)、阻害活性の強いFr.4-7(383mg)を得た。Fr.4-7を再シリカゲルカラムクロマトグラフィー(2.6×15cm;溶媒系酢酸エチル/メタノール)により7画分に分画し(Fr.4-7-1~4-7-7)、阻害活性の強いFr.4-7-2(66mg)を得た。さらにFr.4-7-2をWakosil-II 5C18HG(10×250mm)を用いてHPLCにより分画した結果(Fr.4-7-2-1~4-7-2-4)、阻害活性を有するFr.4-7-2-3(6mg)を得た。この画分は、NMRおよびMSの解析によりイソシネンチンと同定した。同様に、Fr.5、Fr.1およびFr.4から分画精製して、シネンセチン、ヘスペリジンおよび[3’-Hydroxy-5, 6, 4’-Trimethoxyflavanone]を分離した。イソシネンチン、シネンセチン、ヘスペリジンのIC50を下記表1に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
処 方 例 1
 シークワサー二次搾汁液含有飲料の調製:
下記処方の飲料を調製した。
(処方)          (100mlあたり)
  (1)実施例1のシークワサー二次搾汁液  5.0g
  (2)果糖                4.0g
  (3)L-アスコルビン酸         0.05g
  (4)香料                0.1g
  (5)精製水
     合計            100g(精製水で100gとする)
 本発明のキサンチンオキシダーゼ阻害剤は、安全性が高く、日常的に摂取して血中尿酸値をコントロールすることができるため、高尿酸血症や痛風を予防・治療するための医薬や食品として有用なものである。

Claims (9)

  1.  シークワサーの搾汁液または抽出物を有効成分とするキサンチンオキシダーゼ阻害剤。
  2.  シークワサーの抽出物が、シークワサー搾汁残渣の水性溶媒抽出物である請求項1記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤。
  3.  シークワーサーの抽出物が、シークワサー搾汁残渣の水性溶媒抽出物を合成吸着剤で処理して得られる吸着画分である請求項1記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤。
  4.  合成吸着樹脂がダイヤイオン(登録商標)HP20である請求項3記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤。
  5.  下記式(1)または(2)
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
    (式中、R1は水素原子、メトキシ基または水酸基を示し、R2~R5は独立して水素原子又はメトキシ基を示す)
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
    で表されるポリメトキシフラボン類を1種または2種以上含むものである請求項1ないし4のいずれかの項記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤。
  6.  ポリメトキシフラボン類が、イソシネンセチン、シネンセチンまたはヘスペリジンである請求項5記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤。
  7.  請求項1ないし6のいずれかの項に記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤を含有する飲食品。
  8.  高尿酸血症の予防・治療剤である請求項1ないし6のいずれかの項記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤。
  9.  痛風の予防・治療剤である請求項1ないし6のいずれかの項記載のキサンチンオキシダーゼ阻害剤。
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