WO2010006521A1 - 2-甲基-5H-吡唑并[1,5-a][3,1]苯并噁嗪-5-亚胺化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

2-甲基-5H-吡唑并[1,5-a][3,1]苯并噁嗪-5-亚胺化合物及其制备方法和用途 Download PDF

Info

Publication number
WO2010006521A1
WO2010006521A1 PCT/CN2009/070905 CN2009070905W WO2010006521A1 WO 2010006521 A1 WO2010006521 A1 WO 2010006521A1 CN 2009070905 W CN2009070905 W CN 2009070905W WO 2010006521 A1 WO2010006521 A1 WO 2010006521A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
compound
compared
preparation
dpph
Prior art date
Application number
PCT/CN2009/070905
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
苏国强
高义才
孙桂荣
吴立明
任宇
Original Assignee
青岛黄海制药有限责任公司
南京中瑞药业有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 青岛黄海制药有限责任公司, 南京中瑞药业有限公司 filed Critical 青岛黄海制药有限责任公司
Priority to JP2011517738A priority Critical patent/JP5345213B2/ja
Priority to US13/054,674 priority patent/US7973036B2/en
Publication of WO2010006521A1 publication Critical patent/WO2010006521A1/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/14—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D231/18—One oxygen or sulfur atom
    • C07D231/20—One oxygen atom attached in position 3 or 5
    • C07D231/22—One oxygen atom attached in position 3 or 5 with aryl radicals attached to ring nitrogen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/415—1,2-Diazoles
    • A61K31/4152—1,2-Diazoles having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. antipyrine, phenylbutazone, sulfinpyrazone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5383—1,4-Oxazines, e.g. morpholine ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the invention belongs to the field of medicinal chemistry, and particularly relates to a 2-mercapto-5-imino-benzo[d][1,3]oxazine [5-b]pyrazole compound, a preparation method thereof and use thereof. Background technique
  • Thrombosis is the pathological basis of cardiovascular and cerebrovascular diseases with moderate disability and high mortality. It is a pathological process involving blood vessels, blood and blood flow. Thrombosis and coagulation system, endothelial cell function and cell adhesion dysfunction. And so on. Antithrombotic drugs include anticoagulants, antiplatelet agents, and drugs that target endothelial cells.
  • platelet GP li b / Ilia receptor antagonists have the monoclonal antibody abciximab, synthetic peptide receptor antagonists such as Eptifibatide; non-peptide receptor antagonists such as the cycloheptapeptide tirofiban and the non-peptide mimetic 1 anifiban.
  • the arachidonic acid metabolism system can lead to an increase in the production of free radicals, and the peroxidation of unsaturated fatty acids in the membrane phospholipids can cause damage to the cell membrane, which will aggravate the dysfunction of brain cells.
  • Cerebrospinal protection is an important part of stroke treatment.
  • the brain protection agent edaravone is recommended based on evidence-based medicine, which has injected new vitality into the treatment of stroke.
  • Clinical studies have shown that edaravone is effective in improving the prognosis of patients with acute cerebral infarction (within 72 hours), especially within 24 hours of onset. (Edaravone)
  • the object of the present invention is to provide a pharmaceutically acceptable compound 2-mercapto-5-imino-benzo[d][1,3]oxazine[5-b]pyrazole or a pharmaceutically acceptable compound thereof Salt.
  • Another object of the present invention is to provide a process for the preparation of the above compounds.
  • a further object of the present invention is to provide a use of the above compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the object of the invention can be achieved by the following measures:
  • the pharmaceutically acceptable salt thereof refers to a salt in the general sense which is formed by reacting the above compound with a generally pharmaceutically acceptable acid or base without any side effects and capable of increasing the physicochemical properties (such as water solubility, etc.) of the compound.
  • Acid or alkali is often selected from hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, succinic acid, maleic acid, fumaric acid, acetic acid, citric acid, tartaric acid, benzoic acid, benzenesulfonic acid, naphthalenesulfonic acid, hydrogen.
  • a preparation method of the compound of the formula II is: the compound M is reacted with acetoacetate under basic conditions to prepare a compound N, and the compound N is obtained by ring-closing under the action of hydrogen chloride gas.
  • the reaction equation is as follows:
  • the reaction solvent may be selected from an alcohol such as ethanol or decyl alcohol; the base in the alkaline condition is generally selected from sodium alkoxide such as sodium decoxide or sodium ethoxide; and the reaction temperature is 40 to 80 °C.
  • the solvent for the second step is dichlorosilane or tetrahydrofuran, and the reaction temperature is 20 to 40 °C.
  • the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be used in the pharmaceutical field, for example, in the treatment or prevention of cardiovascular and cerebrovascular diseases.
  • TR 2-mercapto-5-imino-benzo[d][1,3]oxazine[5-b]pyrazole
  • Figure 1 is a DPPH standard curve.
  • Figure 2 is a graph showing the relationship between anti-DPPH free radical ability and reaction time.
  • Figure 3 A histogram of the effects of TR on the symptoms of neurological deficits.
  • Figure 5 Histogram of the effect of TR on cerebral infarct size.
  • Figure 6 Bar graph of the effect of TR on the symptoms of neurological deficits.
  • X+SD *P ⁇ 0.05, compared with sham surgery; #P ⁇ 0.05, compared with the model group.
  • Figure 7 Bar graph of the effect of TR on brain water content.
  • Figure 8 Bar graph of the effect of TR on brain tissue SOD (U/mgprot) activity.
  • Figure 9 Histogram of the effect of TR on brain tissue MDA (nmol/mgprot) content.
  • Diphenyl picryl radical (DPPH) spectrophotometry is a simple method for screening antioxidants Law. The principle is to use the characteristic absorption peak of DPPH solution at 517nm. When there is a radical scavenger, the absorption of the radical scavenger is gradually disappeared due to the single electron pairing with DPPH, and the degree of fading is quantified with the number of electrons it accepts. Relationship, the antioxidant activity of the sample can be evaluated by scavenging the amount of DPPH, and thus can be quantitatively analyzed by spectrometry.
  • the DPPH was accurately weighed, placed in a 100 ml volumetric flask, and made up to 100 ml with 95% ethanol, and its absorbance (A) was measured at 517 nm.
  • the DPPH was accurately weighed, placed in a 100 ml volumetric flask, and made up to 100 ml with 95% ethanol to prepare a DPPH solution.
  • Preparation of reagent solution Accurately weigh the reagent, place it in a 100ml volumetric flask, dissolve it with 20ml of 95% ethanol, adjust pH to about 7.5, and then make up to 100ml with 95% ethanol.
  • Compound 1 is: 2-indolyl-benzo[d][1,3]oxazine[5-b]pyrazol-5-one
  • Compound 2 is: 2-indolyl-5- Imino-benzo[d][1,3]oxazine[5-b]pyrazole (ie TR)
  • compound 3 is: 1-(2-carboxyphenyl)-3-indolylpyrazole-5 -ketone.
  • the middle cerebral artery (MCAO) model of SD rats was prepared by internal carotid artery suture method, which caused cerebral ischemia-reperfusion injury.
  • the drug was administered once every 0.5 hours after ischemia-reperfusion, and once every 2 hours thereafter, for a total of 3 times.
  • the symptoms of neurological deficit were observed 48 hours after cerebral ischemia, and the animals were sacrificed to obtain brain infarct size and brain damage.
  • 2-mercapto-5- Imino-benzo[d][1,3]oxazine [5-b]pyrazole (TR for short) is an object, with nimodipine as a reference.
  • the cerebral infarct size of each group is shown in Table 5 and Figure 4.
  • the cerebral infarct size of each group is shown in Table 5 and Figure 4.
  • Table 5 Effect of TR on cerebral infarct size
  • the scores of the severity of neurological deficit symptoms are shown in Table 1 and Figure 1.
  • the symptoms of neurological deficits were significantly alleviated.
  • the results indicate that TR can improve the symptoms of neurological deficits in cerebral ischemia-reperfusion animals.
  • Model group 11 1 1 9 3. 0 ⁇ 0. 00* Sham group 9 0 0 9 0. 0 ⁇ 0. 00 Nimodipine group 10 3 0 7 0. 4 1. 3 ⁇ 0. 86*"
  • the brain water content of each group is shown in Table 8 and Figure 7.
  • the brain water content of each group is shown in Table 8 and Figure 7.
  • Model group 11 1 1 9 3. 4 ⁇ 0. 90* Sham group 9 0 0 9 -0. 1 ⁇ 0. 18 Nimodipine group 10 3 0 7 0. 4 1. 6 ⁇ 0. 59* s
  • TR can significantly improve the symptoms of neurological deficits in cerebral ischemia-reperfusion animals in a dose-dependent manner, reduce the area of cerebral infarction, reduce the degree of brain injury, reduce brain edema, and inhibit Lipid peroxidation of damaged brain tissue, the effective dose is 3mg/kg.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Description

-甲基 -5H-吡唑并 [1，5-a][3，1]苯并噁嗪 -5-亚胺化合物及其制备方法和用途 技术领域
本发明属于药物化学领域， 具体涉及一种 2-曱基 -5-亚胺基 -苯并 [d] [1,3] 噁嗪 [5-b]吡唑化合物及其制备方法和用途。 背景技术
血栓形成是脑卒中等致残和致死率高的心脑血管疾病的病理学基础， 是 涉及血管、 血液、 血流诸因素的病变过程， 血栓形成与凝血系统、 内皮细胞 功能和细胞黏附功能异常等有关。 抗血栓药物包括抗凝血药、 抗血小板药和 以内皮细胞为作用靶点的药物。目前临床上常用的抗血小板药物有阿司匹林、 噻氯匹啶和氯吡格雷； 血小板 GP li b / Ilia受体拮抗剂有单克隆抗体阿昔单 抗 (abciximab), 合成肽类受体拮抗剂如埃替巴肽 (eptifibatide); 非肽类受体拮 抗剂如环七肽替罗非班 (tirofiban)和非肽拟似物拉米非班 (1 anifiban)。
脑卒中发生后， 闭塞血管在短期内再通有可能恢复脑功能， 但是超过一 定时间的持续缺血就会造成不可逆的脑细胞损伤。 在不可逆损伤的缺血中心 部位的周围则是可生存的半暗带， 在一定时间后即便恢复血供仍有一部分会 发生迟发性神经细胞死亡， 会导致兴奋性氨基酸释放、 神经细胞 内流、 自 由基产生等各种相关性因子， 特别是自由基的产生被认为是造成脑功能障碍 的主要因素之一。 缺血状态时花生四烯酸代谢系统亢进可以导致自由基的产 生增加， 构成细胞膜磷脂中不饱和脂肪酸过氧化会引起细胞膜的损伤， 都会 加重脑细胞的功能障碍。
脑神经保护是脑卒中治疗的重要环节， 日本最新的脑卒中治疗指南中首 次根据循证医学的证据推荐使用脑保护剂依达拉奉， 为脑卒中的治疗注入了 新的生机。脑梗塞急性期的治疗，建议使用具有脑保护作用的药物依达拉奉。 临床研究表明依达拉奉对脑梗塞急性期（发生 72 小时以内） 患者的预后改 善有效， 尤其是在发病 24 小时以内疗效更为显著。
Figure imgf000004_0001
(依达拉奉）
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有药用价值的化合物 2-曱基 -5-亚胺基-苯 并 [d] [1,3]噁嗪 [5-b]吡唑或其药学上可接受的盐。
本发明的另一目的在于提供上述化合物的制备方法。
本发明进一步的目的在于提供上述化合物或其药学上可接受的盐的用 途。
本发明的目的可以通过以下措施达到：
一种具有式（ Π )结构的化合物 2-曱基 -5-亚胺基 -苯并 [d] [1,3]噁嗪 [5-b]
Figure imgf000004_0002
( Π )。
其中所述的药学上可接受的盐是指上述化合物与一般药学上常用的酸或 碱反应生成的无其他副作用并能够增加化合物物化性能（如水溶性等） 的一 般意义上的盐， 其中所述的酸或碱常选用盐酸、 氢溴酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸、 琥珀酸、 马来酸、 富马酸、 醋酸、 枸橼酸、 酒石酸、 苯曱酸、 苯磺酸、 萘磺 酸、 氢氧化钠、 碳酸钠、 碳酸氢钠或氢氧化钾等。
式 II化合物的一种制备方法为：将化合物 M在碱性条件下与乙酰乙酸酯 反应制备出化合物 N， 而化合物 N在氯化氢气体的作用下关环即得。 其反应 方程式如下：
Figure imgf000005_0001
在第一步反应中， 反应溶剂可选用醇如乙醇或曱醇等； 碱性条件中的碱 一般选用醇钠， 如曱醇钠、 乙醇钠等； 反应温度为 40 ~ 80°C。 第二步反应的 溶剂为二氯曱烷或四氢呋喃， 反应温度为 20 ~ 40°C。 本发明的化合物或其药学上可接受的盐可应用于制药领域， 如治疗或预 防心脑血管疾病药物方面。 动物药效实验表明， 本发明的化合物 2-曱基 -5- 亚胺基 -苯并 [d] [1,3]噁嗪 [5-b]吡唑（以下简称 TR )能呈剂量依赖性地显著地 改善脑缺血再灌注动物的神经缺陷症状，缩小脑梗死面积， 降低脑损伤程度， 减轻脑水肿， 抑制受损脑组织的脂质过氧化， 起效剂量为 3mg/kg。 附图说明
图 1是 DPPH标准曲线图。
图 2是抗 DPPH自由基能力与反应时间的关系图。
图 3. TR对神经缺陷症状的影响柱状图。
图中， X+SD, *P<0.05, 与假手术比较； #P<0.05 , 与模型组比较。
图 4. TR对脑梗死面积的影响。
图中， X土 SD， *P<0.05, 与假手术比较； #P<0.05, 与模型组比较； &P<0.05, 与低剂量组 比较。
图 5. TR对脑梗死面积的影响柱状图。
图中， X士 SD, *P<0.05 , 与假手术比较； #P<0.05 , 与模型组比较； &P<0.05 , 与低 剂量组比较。
图 6. TR对神经缺陷症状的影响柱状图。 图中， X+SD, *P<0.05, 与假手术比较； #P<0.05 , 与模型组比较。
图 7. TR对脑含水量的影响柱状图。
图中， X+SD, *P<0.05, 与假手术比较； #P<0.05 , 与模型组比较。
图 8. TR对脑组织 SOD(U/mgprot)活性的影响柱状图。
图中， X+SD, *P<0.05, 与假手术比较； #P<0.05 , 与模型组比较。
图 9. TR对脑组织 MDA(nmol/mgprot)含量的影响柱状图。
图中， X+SD, *P<0.05, 与假手术比较； #P<0.05 , 与模型组比较。
具体实施方式
实施例 1 制备 2-曱基 -5-亚胺基 -苯并 [d] [1,3]噁嗪 [5-b]吡唑（化合物 II )
2-肼基苯曱腈盐酸盐的制备
Figure imgf000006_0001
在 2000ml 的三口瓶中加入浓盐酸 600ml， 碎冰 500ml， 2 -氨基苯腈 59g(0.5mol) , 搅拌至完全溶解。 冰盐浴至 -7〜一 3°C， 滴加亚硝酸钠溶液 34.5g(0.5mol)溶于水 150ml， 滴加完毕， 搅拌 10min， 得橙黄色澄清溶液， 溶 液待用。 在 5000ml的三口瓶中加入氯化亚锡 350g， 浓盐酸 1000ml， 搅拌至完全 溶解， 冰盐浴冷却 -5°C， 滴加上述重氮盐溶液， 产生白色沉淀， 滴加完毕， 继续搅拌 2小时， 过滤， 滤饼用大量 NaCl饱和溶液洗涤， 再用冷 15 %盐酸 洗涤， 干燥得 2 -肼基苯曱腈盐酸盐 36g。
1- ( 2-氰基苯基） -3-曱基吡唑 -5-酮的制备
Figure imgf000007_0001
在 250ml反应瓶中， 加入盐酸 2-肼基苯曱腈 8.5g(0.05mol)， 乙酰乙酸 曱酯 6g (0.05mol)， 曱醇 100ml, 搅拌下加入 50%曱醇钠 5.5g ( 0.051mol ) 溶于曱醇 50ml的溶液， 搅拌 lOmin后， 加热回流反应 6h， 趁热过滤， 固体 用曱醇 20ml洗涤， 回收曱醇剩体积约 50ml， 搅拌下倒入冰水 200ml中， 析 出固体， 过滤水洗涤， 得到浅黄色固体 7g。
2-曱基 -5-亚胺基 -苯并 [d] [1,3]噁嗪 [5-b]吡唑 (化合物 II )的制备
Figure imgf000007_0002
1- ( 2-腈基苯基 ) -3-曱基吡唑 -5-酮 20g ( O.lmol )， 无水四氢呋喃 200ml, 搅拌下通入干燥氯化氢气体至饱和， 室温搅拌过夜反应， 真空浓缩至干， 加 入无水四氢呋喃 100ml， 无水乙酸钠 10g， 室温搅拌 lh， 过滤， 真空浓缩四 氢呋喃， 乙酸乙酯重结晶,得到类白色结晶 13g。
M/Z[M+1]+, 200； [M+Na] +, 222.
1HNMR: δ 13.2693ppm(NH) ;8.0219ppm(lH, d) ; 7.611ppm(lH, d) ; 7.459ppm(lH, s)； 7.0941ppm(lH, s)； 5.9555ppm(lH, s)； 2.467ppm (3H， s) .
13CNMR: δ 154.5172ppm; 154.2973ppm; 142.589ppm; 140.0084ppm; 136.0494ppm; 124.4878ppm;123.4394ppm; 113.0434ppm; 109.6637ppm; 102.6622ppm; 19.7732ppm. 抗 DPPH自由基试验
二苯代苦味酰自由基 (DPPH)分光光度法是一种筛选抗氧化剂的简便方 法。 其原理是利用 DPPH溶液在 517nm处的特征吸收峰， 当有自由基清除剂存 在时， 由于自由基清除剂与 DPPH单电子配对而使其吸收逐渐消失， 其褪色程 度与其接受的电子数成定量关系，样品的抗氧化活性可以通过清除 DPPH的量 来评价， 因而可用分光法进行定量分析。
DPPH标准曲线
精密称取 DPPH ，置于 100ml容量瓶中， 并用 95 %乙醇定容至 100ml， 在 517nm测定其吸收值 (A)。
表 1.不同浓度 DPPH溶液吸收值
Figure imgf000008_0001
DPPH标准曲线如图 1所示。
其线性方程为: y = 0.219x - 0.0285; r= 0.9994。
DPPH溶液的制备
精密称取 DPPH,置于 100ml容量瓶中， 并用 95 %乙醇定容至 100ml， 即配 成 DPPH溶液。
试药溶液制备： 精密称取试药，置于 100ml容量瓶中， 用 95 %乙醇 20ml溶 解后， 调 pH7.5左右， 再用 95 %乙醇定容至 100ml。
试药 -DPPH溶液的吸收值测定
取 DPPH溶液 5.0ml,试药溶液 2.0ml， 放置于 10ml容量瓶中， 充分震摇并在 室温约 25°C反应一定时间， 在 517nm处测吸收值 (A)。
试药清除 DPPH自由基能力 E ( mgDPPH/mg )计算式：
DPPH浓度 （mg/100ml ) X 5/7—（吸收值 A+0. 0285) /0. 219 (mg/100ml)
E (mgDPPH/mg ) =
试药浓度 C (rag/lOOral ) X 2 / 7 试药清除 DPPH自由基能力 V ( mmolDPPH/mmol )计算式:
E (mgDPPH/mg)
V (mmolDPPH/mmol) =
394.32/试药分子量
表 2.30min清除 DPPH自由基测试结果
Figure imgf000009_0001
- 1 - 表 3.不同反应时间反应液吸收值测定值 ( DPPH: 5.080mg/l 00ml )
Figure imgf000010_0001
表 2和 3中,化合物 1为： 2-曱基 -苯并 [d] [1,3]噁嗪 [5-b]吡唑 -5-酮， 化合物 2 为： 2-曱基 -5-亚胺基 -苯并 [d] [1,3]噁嗪 [5-b]吡唑（即 TR )， 化合物 3为: 1-(2- 羧基苯基) -3-曱基吡唑 -5-酮。
抗 DPPH自由基能力 V ( mmolDPPH/mmol )与反应时间 （ min ) 关系如图 2所示。 抗 DPPH自由基试验结果表明， 30min内试药清除 DPPH能力， 化合物 3 最大， 1个分子化合物 3能够清除 1.942个分子 DPPH自由基； 比依达拉奉清除 DPPH自由基能力稍强， 1个依达拉奉清除 1.657个分子 DPPH自由基。 化合物 1 和化合物 2清除 DPPH自由基能力与反应时间相关， 随作反应时间延长， 化合 物 1和化合物 2逐渐水解成化合物 3， 因而清除 DPPH自由基能力渐渐增强， 化 合物 1在 30min时清除 DPPH自由基能力是化合物 3的八分之一； 在反应 150min 时化合物 1清除 DPPH自由基能力与化合物 3相当。 动物药效实验
采用颈内动脉线栓法制备 SD大鼠大脑中动脉阻塞（ Middle cerebral artery, MCAO )模型， 造成脑缺血再灌注损伤。 于缺血再灌注后 0.5小时给药 1次， 以后每 2小时给药一次， 共给药 3次。 脑缺血后 48小时观察神经缺陷症状， 活杀动物取脑， 测定脑梗死面积和脑损伤程度。 以本发明化合物 2-曱基 -5- 亚胺基 -苯并 [d] [1,3]噁嗪 [5-b]吡唑（简称 TR ) 为对像， 以尼莫地平做参照。
TR对神经缺陷症状的影响
神经缺陷症状严重程度的评分见表 4和图 3， 模型组与假手术组比较均 有显著性差异（F5,41=28.05， P<0.001 )， 表明脑缺血再灌注导致严重的神经 缺陷症状； TR高 ( F5 ,41=28.05 , P<0.001 )、 中 （ F5,41=28.05， P<0。 001 )、 低剂量组（F5,41=28.05， P=0.001 )和尼莫地平组（ F5,41=28.05， P<0.001 ) 与模型组比较， 神经缺陷症状均明显减轻。
表 4. TR对神经缺陷症状的影响
组别 总动物数 手术失败 死 亡 n 剂量 神经缺陷评分
(只） (只） (只） (只） (mg/kg)
模型组 12 3 2 7 2. 9 士 0. 53* 假手术组 7 0 0 7 0. 0 士 0. 00 尼莫地平组 12 0 2 10 0. 4 1. 2 士 0. 4ΓΒ
TR6. Omg/kg组 11 2 1 8 6. 0 1. 0 士 0. 46*s
TR3. Omg/kg组 11 3 0 8 3. 0 1. 1 ± 0. 44*"
TR1. 5mg/kg组 12 2 3 7 1. 5 1. 6 ± 0. 75*
X + SD, *P<0. 05, 与假手术比较； BP<0. 05, 与模型组比较。
TR对脑梗死面积的影响
各组脑梗死面积见表 5 和图 4， 模型组与假手术组比较有显著性差异 ( F5,41=23.34， P<0.001 )， 表明脑缺血再灌注导致明显的脑梗死； TR 高 ( F5,41=23.34， P<0.001 )、中（ F5,41=23.34， P<0.001 )、低剂量组（ F5,41=23.34， P=0.044 )和尼莫地平组（F5,41=23.34， P<0.001 ) 与模型组比较均能显著减 小脑梗死面积； TR高剂量组与 TR低剂量组比较有显著性差异（ F5,41=23.34， P=0.009 )。 表 5. TR对脑梗死面积的影响
组 别 总动物数 手术失败 死 亡 n 剂量 脑梗死面积
(只） (只） (只） (只） (mg/kg) (%) 模型组 12 3 2 7 43.7 士 11.29* 假手术组 7 0 0 7 0.0 士 0.00 尼莫地平组 12 0 2 10 0.4 6.7 ± 7.72ffi
TR6. Omg/kg组 11 2 1 8 6.0 6.7 ± 6.30ffi
TR3. Omg/kg组 11 3 0 8 3.0 17.4士 10.05*"
TR1.5mg/k组 12 2 3 7 1.5 26.5 + 13.24*
X士 SD, *P<0.05, 与假手术比较； ，〈0.05， 与模型组比较； &P<0.05, 与低剂量组比较。
TR对脑损伤的影响
各组脑损伤见表 6 和图 5， 模型组与假手术组比较有显著性差异 (F5,41=20.52， P<0.001 )， 表明脑缺血再灌注导致明显的脑损伤； TR 的高 (F5,41=20.52， P<0.001 )、 中剂量组（ F5,41=20.52， P=0.001 )和尼莫地平组 (F5,41=20.52， P<0.001 )与模型组比较均能显著减低脑损伤程度； TR的高 剂量组与 TR低剂量组比较有显著性差异（F5,41=20.52， P=0.004 )。 表 6. TR对脑损伤的影响
组 别 总动物数 手术失败 死 亡 n 剂量 脑梗死面积
(只） (只） (只） (只） (mg/kg) (%) 模型组 12 3 2 7 51.1±10.70* 假手术组 7 0 0 7 1.8±1.57 尼莫地平组 12 0 2 10 0.4 12.8±12.09**
TR6. Omg/kg组 11 2 1 8 6.0 8.1±5.68**
TR3. Omg/kg组 11 3 0 8 3.0 22.7 ±12.10*Β
TR1.5kg/kg组 12 2 3 7 1.5 33.6 ±16.08*
X士 SD, *P<0.05, 与假手术比较； ，〈0.05， 与模型组比较； &P<0.05, 与低剂量组比较。 TR对神经缺陷症状的影响
神经缺陷症状严重程度的评分见表 1和图 1， 模型组与假手术组比较均 有显著性差异（F5,41=28.05， P<0.001 )， 表明脑缺血再灌注导致严重的神经 缺陷症状； TR高 ( F5 ,41=28.05 , P<0.001 )、 中 （ F5,41=28.05， P<0。 001 )、 低剂量组（F5,41=28.05， P=0.001 )和尼莫地平组（ F5,41=28.05， P<0.001 ) 与模型组比较， 神经缺陷症状均明显减轻。 结果表明， TR 能改善脑缺血再 灌注动物的神经缺陷症状。
表 7. TR对神经缺陷症状的影响
组别 总动物数 手术失败 死 亡 n 剂量 神经缺陷评分
(只） (只） (只） (只） (mg/kg) 模型组 11 1 1 9 3. 0 ± 0. 00* 假手术组 9 0 0 9 0. 0 士 0. 00 尼莫地平组 10 3 0 7 0. 4 1. 3 ± 0. 86*"
TR6. Omg/kg组 11 1 1 9 6. 0 1. 0 ± 0. 58*"
TR3. Omg/kg组 11 2 2 7 3. 0 1. 8 ± 0. 70*"
TR1. 5mg/kg组 10 3 0 7 1. 5 1. 9 ± 0. 84*"
X + SD, *P<0. 05, 与假手术比较； BP<0. 05, 与模型组比较。
TR对脑含水量的影响
各组脑含水量见表 8 和图 7， 模型组与假手术组比较有显著性差异 ( F5,42=20.06， P<0.001 )， 表明脑缺血再灌注导致严重的脑水肿； TR 高 ( F5,42=20.06， P<0.001 )、 中剂量组（ F5 ,42=20.06， P=0.039 )和尼莫地平组 ( F5,42=20.06， P=0.003 )与模型组比较能显著减少脑含水量， 而低剂量组与 模型组比较差异不显著（F5,42=20.06， P=0.086 )。
表 8. TR对脑含水量的影响
组别 总动物数 手术失败 死 亡 n 剂量 脑含水量变化值
(只） (只） (只） （只） (mg/kg) (%) 模型组 11 1 1 9 3. 4 ± 0. 90* 假手术组 9 0 0 9 -0. 1 ± 0. 18 尼莫地平组 10 3 0 7 0. 4 1. 6 士 0. 59*s
TR6. Omg/kg组 11 1 1 9 6. 0 1. 2 ± 0. 55*"
TR3. 0mg/kg组 11 2 2 7 3. 0 2. 0 ± 1. ΟΓ"
TR1. 5mg/kg组 10 3 0 7 1. 5 2. 1 ± 1. 08* X + SD, *P<0. 05, 与假手术比较； BP<0. 05, 与模型组比较。
TR对受损脑组织 SOD活性和 MDA水平的影响
各组脑组织 SOD活性和 MDA水平见表 9和图 8、 9， 模型组与假手术 组比较有显著性差异， MDA含量显著升高 （F5,42=26.96， P<0.001 )， SOD 活性显著降低（F5,42=17.13， P<0.001 )， 表明脑缺血再灌注导致受损脑组织 脂质过氧化； TR高剂量组与模型组比较 MDA含量显著降低（F5,42=26.96， P<0.001 )， TR中（ F5,42=26.96， P=0.141 )、低剂量组（ F5,42=26.96， P=0.211 ) 及尼莫地平组（F5,42=26.96， P=0.961 )与模型组比较差异不显著； TR高剂 量组与模型组比较 SOD 活性显著升高 （F5,42=17.13， P=0.007 )， TR 中
( F5,42=17.13， P=0.157 )、 低剂量组（ F5 ,42=17.13， P=0.826 )及尼莫地平组
( F5,42=17.13， P=0.435 )与模型组比较差异不显著。
表 9. TR对脑组织 SOD(U/mgprot)活性和 MDA(nmol/mgprot)含量的影响 组别 总动物数 手术失败 死亡 n 剂量 S0D MDA
(只） (只） (只） (只） (mg/kg) ' (U/mg蛋白） (nmol/mg蛋白) 模型组 11 1 1 9 92. 5 士 18. 3* 8. 1 ± 0. 91* 假手术组 9 0 0 9 172. 9 ± 26. 4 2. 9 ± 1. 10 尼莫地平组 10 3 0 7 0. 4 114. 8 + 16.4* 7. 6 ± 1. 28*
TR6. 0mg/kg组 11 1 1 9 6. 0 132. 7士 21. 0*" 5. 0 ± 1. 10*#
TR3. 0mg/kg组 11 2 2 7 3. 0 121. 6 + 16. 8* 6. 5 ± 0. 81*
TR1. 5mg/kg组 10 3 0 7 1. 5 107. 1 + 15. 5* 6. 6 ± 1. 30*
X + SD, *P<0. 05, 与假手术比较； BP<0. 05, 与模型组比较。
SD大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型的结果表明， TR能呈剂量依赖性地 显著地改善脑缺血再灌注动物的神经缺陷症状， 缩小脑梗死面积， 降低脑损 伤程度， 减轻脑水肿， 抑制受损脑组织的脂质过氧化， 起效剂量为 3mg/kg。

Claims

权利要求书 种具有式（ Π ) 结构的化合物 2-曱基 -5-亚胺基 -苯并 [d] [1,3]噁嗪 [5-b]
Figure imgf000015_0001
H3 ( Π )。
2、 权利要求 1所述的式 Π化合物的制备方法， 其特征在于先将化合物 M在 碱性条件下与乙酰乙酸酯反应制备化合物 N， 然后化合物 N在氯化氢气体的 作用下关环， 其反应方程式如下：
Figure imgf000015_0002
3、 根据权利要求 2所述的制备方法， 其特征在于在第一步反应中， 反应溶剂 为乙醇或曱醇； 碱为曱醇钠或乙醇钠； 反应温度为 40 ~ 80°C。
4、 根据权利要求 2所述的制备方法， 其特征在于在第二步反应中， 反应溶剂 为二氯曱烷或四氢呋喃， 反应温度为 20 ~ 40°C。
5、权利要求 1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防心脑血 管疾病药物中的应用。
PCT/CN2009/070905 2008-07-18 2009-03-20 2-甲基-5H-吡唑并[1,5-a][3,1]苯并噁嗪-5-亚胺化合物及其制备方法和用途 WO2010006521A1 (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2011517738A JP5345213B2 (ja) 2008-07-18 2009-03-20 ２−メチル−５Ｈ−ベンゾ［ｄ］ピラゾロ［５，１−ｂ］［１，３］オキサジン−５−イミン化合物及びその調製方法並びに使用
US13/054,674 US7973036B2 (en) 2008-07-18 2009-03-20 2-methyl-5-imino-benzo[D][1 ,3]oxazin[5-B]pyrazole compound, preparation and use thereof

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNA2008100223146A CN101318968A (zh) 2008-07-18 2008-07-18 一种苯并噁嗪并吡唑类及开环化合物
CN200810022314.6 2008-07-18

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2010006521A1 true WO2010006521A1 (zh) 2010-01-21

Family

ID=40179265

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2008/071769 WO2010006485A1 (zh) 2008-07-18 2008-07-25 一种苯并噁嗪并吡唑类及开环化合物
PCT/CN2009/070905 WO2010006521A1 (zh) 2008-07-18 2009-03-20 2-甲基-5H-吡唑并[1,5-a][3,1]苯并噁嗪-5-亚胺化合物及其制备方法和用途

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2008/071769 WO2010006485A1 (zh) 2008-07-18 2008-07-25 一种苯并噁嗪并吡唑类及开环化合物

Country Status (4)

Country Link
US (1) US7973036B2 (zh)
JP (1) JP5345213B2 (zh)
CN (2) CN101318968A (zh)
WO (2) WO2010006485A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7973036B2 (en) 2008-07-18 2011-07-05 Qingdao Huanghai Pharmaceutical Co., Ltd 2-methyl-5-imino-benzo[D][1 ,3]oxazin[5-B]pyrazole compound, preparation and use thereof
US8522624B2 (en) 2011-03-02 2013-09-03 Cameron International Corporation System and method for pressure balancing a flow meter

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101830831B (zh) * 2010-05-25 2013-06-12 青岛黄海制药有限责任公司 一种制备邻肼基苯甲腈的方法
CN101966146B (zh) * 2010-09-15 2012-07-18 青岛黄海制药有限责任公司 一种药物组合物溶液及其制备方法和用途
CN108912142B (zh) * 2018-08-08 2021-06-18 延边大学 吡咯并苯并恶嗪酮类化合物及其注射剂和在抗血栓中的用途
CN111116608B (zh) * 2020-01-10 2022-02-11 南京医科大学 一类具有自由基清除作用的n-苄基苯胺衍生物及其药物用途
WO2024050800A1 (zh) * 2022-09-09 2024-03-14 南京中瑞药业有限公司 一种蛋白磷酸酶激动剂和应用
CN117055658B (zh) * 2023-10-11 2024-01-02 江苏徕德生物医药有限公司 用于泰瑞拉奉结晶生产过程的自适应温度控制系统及方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101318968A (zh) * 2008-07-18 2008-12-10 青岛黄海制药有限责任公司 一种苯并噁嗪并吡唑类及开环化合物

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004091441A (ja) * 2002-09-04 2004-03-25 Mitsubishi Pharma Corp ピラゾロン誘導体を含有する経口投与製剤
JP2004300153A (ja) * 2003-03-20 2004-10-28 Kiyoshi Kurokawa 蛋白修飾物生成抑制剤
TW200710091A (en) * 2005-04-11 2007-03-16 Tibotec Pharm Ltd (1,10B-dihydro-2-(aminoalkyl-phenyl)-5H-pyrazolo [1,5-c][1,3]benzoxazin-5-yl)phenyl methanone derivatives as HIV viral replication inhibitors
JPWO2006129524A1 (ja) * 2005-06-03 2008-12-25 株式会社レナサイエンス カルボニル化合物除去材

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101318968A (zh) * 2008-07-18 2008-12-10 青岛黄海制药有限责任公司 一种苯并噁嗪并吡唑类及开环化合物

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KANETY, HANNAH ET AL.: "Bimanes. 10. Photochemical rearrangement of 1,5-diazabicyclo[3.3.0]octa-3,7-diene-2,6-diones (9,10-dioxa-anti-bimanes)", JOURNAL OF ORGANIC CHEMISTRY, vol. 47, no. 2, 1982, pages 207 - 13 *
VEIBEL, STIG ET AL.: "Pyrazole studies. II. Anhydrides of 1-(2-carboxyphenyl)-3-phenyl-5-pyrazolone and 1-(2-carboxyphenyl)-3-methyl-4-ethyl-5-pyrazolone", ACTA CHEMICA SCANDINAVICA, no. 2, 1948, pages 921 - 6 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7973036B2 (en) 2008-07-18 2011-07-05 Qingdao Huanghai Pharmaceutical Co., Ltd 2-methyl-5-imino-benzo[D][1 ,3]oxazin[5-B]pyrazole compound, preparation and use thereof
US8522624B2 (en) 2011-03-02 2013-09-03 Cameron International Corporation System and method for pressure balancing a flow meter
US8522623B2 (en) 2011-03-02 2013-09-03 Cameron International Corporation Ultrasonic flowmeter having pressure balancing system for high pressure operation

Also Published As

Publication number Publication date
CN101508696B (zh) 2011-04-06
US20110118247A1 (en) 2011-05-19
US7973036B2 (en) 2011-07-05
JP2011528323A (ja) 2011-11-17
CN101318968A (zh) 2008-12-10
JP5345213B2 (ja) 2013-11-20
WO2010006485A1 (zh) 2010-01-21
CN101508696A (zh) 2009-08-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2010006521A1 (zh) 2-甲基-5H-吡唑并[1,5-a][3,1]苯并噁嗪-5-亚胺化合物及其制备方法和用途
US20120077760A1 (en) Novel salts of sitagliptin
BR112020009975A2 (pt) formas sólidas de um inibidor de calicreína de plasma e sais dos mesmos
TW201429473A (zh) 腫瘤溶解症候群之治療劑及預防劑
WO2013029431A1 (zh) 苯并二氮杂卓衍生物的托西酸盐及其多晶型、它们的制备方法和用途
CN102603723B (zh) 阿齐沙坦有机胺盐及其制备方法和用途
WO2015043453A1 (zh) 伏立康磷酸酯钠水合物及其多晶型
TW201043226A (en) Salts of 3-pentylphenylacetic acid and pharmaceutical uses thereof
CA2634871A1 (en) Treatment of renal disorders, diabetic nephopathy and dyslipidemias
CN114081881B (zh) 一种有机酸锂氨基酸盐、晶型、组合物及应用
WO2019218864A1 (zh) 一种2-(α羟基戊基)苯甲酸的有机胺酯衍生物药物
CN104013619A (zh) 复方氨基酸注射液18aa-v的药物组合物和用途
JP6738350B2 (ja) 尿酸輸送体阻害剤のナトリウム塩およびその結晶形
CN104418818B (zh) 帕瑞昔布钠无水化合物
CN102030709B (zh) 用作加压素受体拮抗剂的苯并氮杂卓类化合物
JP4578576B2 (ja) ガチフロキサシン含有水性液剤
KR101798605B1 (ko) 철 결핍 증상 및 철 결핍성 빈혈의 치료 및 예방을 위한 Fe(III) 착화합물
WO2012139422A1 (zh) 新型抗血小板化合物的加成盐
CN104147003A (zh) 复方氨基酸注射液17aa-i的药物组合物和用途
WO2009123098A1 (ja) ガチフロキサシン含有水性液剤、その製造方法、および、該水性液剤の低温保存および凍結融解時の沈殿生成を抑制する方法
CN103462888B (zh) 一种取代的β-环糊精包合的长春西汀注射液及其制备方法
CN102532107A (zh) 4-取代苯胺基-7-取代烷氧高哌嗪基-喹唑啉衍生物及其制备方法和用途
AU2010277947A1 (en) R-7-(3-aminomethyl-4-methoxyimino-3-methyl-pyrrolidin-1-yl)-1-cyclopropyl- 6-fluoro-4-oxo-1,4-dihydro-[1,8]naphthyridine-3-carboxylic acid and L-aspartic acid salt, process for the preparation thereof and pharmaceutical composition comprising the same for antimicrobial
CN105481725B (zh) L-精氨酸苯乙酸盐的晶型及其制备方法
WO2023123468A1 (zh) 心脑血管药物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 09797368

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2011517738

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 13054674

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 09797368

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1