JP5345213B2 - 2−メチル−5H−ベンゾ[d]ピラゾロ[5,1−b][1,3]オキサジン−5−イミン化合物及びその調製方法並びに使用 - Google Patents
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Description
2−メチル−5H−ベンゾ[d]ピラゾロ[5,1−b][1,3]オキサジン−5−イミン(化合物II)の調製
1HNMR: δ13.2693ppm(NH);8.0219ppm(1H,d);7.611ppm(1H,d);7.459ppm(1H,s);7.0941ppm(1H,s);5.9555ppm(1H,s);2.467(3H,s).
13CNMR: δ154.5172ppm;154.2973ppm;142.589ppm;140.0084ppm;136.0494ppm;124.4878ppm;123.4394ppm;113.0434ppm;109.6637ppm;102.6622ppm;19.7732ppm.
ジフェニルピクリルヒドラジルラジカル(DPPH)分光光度法は抗酸化剤をスクリーニングする簡単な方法である。その原理は517nmにおけるDPPH溶液の特性吸収ピークを利用し、ラジカル除去剤が存在した場合に、ラジカル除去剤とDPPHとが単電子対形成することによって吸収を徐々に消去させる。その退色の程度はそれが受け取った電子数と定量関係を持っており、サンプルの抗酸化活性は除去されたDPPHの量によって評価されることができるため、分光法によって定量分析を行うことができる。
DPPHを精密に量り、100mlのフラスコに入れ、且つ95%のエタノールで100mlまで定容し、517nmにおける吸収値(A)を測定する。
DPPHを精密に量り、100mlのフラスコに入れ、且つ95%のエタノールで100mlまで定容し、DPPH溶液を調製し得る。
DPPH溶液5.0ml、試薬溶液2.0mlを量り取って、10mlフラスコに入れ、十分に振り室温約25℃において所定時間で反応させ、517nmの吸収値(A)を測定する。
E(mgDPPH/mg)=[DPPH濃度(mg/100ml)×5/7−(吸収値A+0.0285)/0.219(mg/100ml)]/[試薬濃度C(mg/100ml)×2/7]
試薬のDPPHラジカル除去能力V(mmolDPPH/mmol)の計算式:
V(mmolDPPH/mmol)=[E(mgDPPH/mg)]/[394.32/試薬分子量]
内頸動脈栓線法でSDラット中大脳動脈閉塞(Middle cerebral artery、MCAO)モデルを作り、脳虚血再潅流損傷を引き起こさせる。虚血再潅流した後0.5h後に一回投与し、その後2h毎に一回投与して総計3回投与する。脳虚血後48hに神経欠陥症状を観察し、動物を屠殺して脳を取って、脳梗塞面積及び脳損傷程度を測定する。本発明の化合物2−メチル−5H−ベンゾ[d]ピラゾロ[5,1−b][1,3]オキサジン−5−イミン(TRと略称する)を対象にし、ニモジピンを対照とする。
神経欠陥症状の重症度の評価点数が表4及び図3に示され、モデル群は偽手術群と比べると有意差(F5,41=28.05,P<0.001)があり、脳虚血再潅流は重症な神経欠陥症状を引き起こすことが示されている。また、TR高投与群(F5,41=28.05,P<0.001)、中投与群(F5,41=28.05,P<0.001)、低投与群(F5,41=28.05,P=0.001)及びニモジピン群(F5,41=28.05,P<0.001)は、モデル群との比較結果、神経欠陥症状が共に顕著に軽減された。
各群の脳梗塞面積が表5及び図4に示され、モデル群は偽手術群と比べると有意差(F5,41=23.34,P<0.001)があり、脳虚血再潅流は顕著な脳梗塞を引き起こすことが示された。また、TR高投与群(F5,41=23.34,P<0.001)、中投与群(F5,41=23.34,P<0.001)、低投与群(F5,41=23.34,P=0.044)及びニモジピン群(F5,41=23.34,P<0.001)では、モデル群との比較結果、脳梗塞面積が共に顕著に減少し、TR高投与群とTR低投与群とを比較すると、有意差が認められる(F5,41=23.34,P=0.009)。
各群の脳損傷が表6及び図5に示され、モデル群は偽手術群と比べると有意差(F5,41=20.52,P<0.001)があり、脳虚血再潅流は顕著な脳損傷を引き起こすことが示された。また、TR高投与群(F5,41=20.52,P<0.001)、中投与群(F5,41=20.52,P<0.001)及びニモジピン群(F5,41=20.52,P<0.001)では、モデル群との比較結果、脳損傷の程度が共に顕著に減少した。TR高投与群とTR低投与群では、有意差が認められた(F5,41=20.52,P=0.004)。
各群の脳含水量が表8及び図7に示され、モデル群は偽手術群と比べると有意差(F5,42=20.06,P<0.001)があり、脳虚血再潅流は重症な脳水腫を引き起こすことが示されている。また、TR高投与群(F5,42=20.06,P<0.001)、中投与群(F5,42=20.06,P=0.039)及びニモジピン群(F5,42=20.06,P=0.03)では、モデル群と比較すると、脳含水量が顕著に減少されたが、低投与群(F5,42=20.06,P=0.039)とモデル群とでは、有意差は認められなかった(F5,42=20.06,P=0.086)。
各群の脳組織SOD活性及びMDAレベルが表9及び図8、9に示され、モデル群は偽手術群と比べると有意差があり、MDA含量が顕著に上昇し(F5,42=26.96,P<0.001)、SOD活性が顕著に減少し((F5,42=17.13,P<0.001)、脳虚血再潅流は損傷した脳組織脂質の過酸化を引き起こすことが示された。また、TR高投与群ではモデル群と比較すると、MDA含量が顕著に減少し(F5,42=26.96,P<0.001)、TR中投与群(F5,42=26.96,P=0.141)、低投与群(F5,42=26.96,P=0.211)及びニモジピン群(F5,42=26.96,P=0.961)では、モデル群との比較結果、有意差が認められなかった。TR高投与群はモデル群と比較すると、SOD活性が顕著に増加した(F5,42=17.13,P=0.007)。TR中投与群(F5,42=17.13,P=0.157)、低投与群(F5,42=17.13,P=0.826)及びニモジピン群(F5,42=17.13,P=0.435)とモデル群では、有意差が認められなかった。
Claims (5)
- 前記ステップ1の反応において、反応溶媒はエタノールまたはメタノールであり、アルカリはナトリウムメトキシドまたはナトリウムエトキシドであり、反応温度は40〜80℃であることを特徴とする、請求項2に記載の調製方法。
- 前記ステップ2の反応において、反応溶媒はジクロロメタンまたはテトラヒドロフランであり、反応温度は20〜40℃であることを特徴とする、請求項2に記載の調製方法。
- 脳梗塞、脳水腫又は脳卒中の治療または予防用薬物の調製における請求項1に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩の使用。
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