JP6367187B2

JP6367187B2 - Ｎ−［（ｒ）−１−［（ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニルエチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の多形体

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Publication number: JP6367187B2
Application number: JP2015519357A
Authority: JP
Inventors: ノーザン，ジュリアン・スコット; マイキーチク，ジョン
Original assignee: カルビスタ・ファーマシューティカルズ・リミテッド
Priority date: 2012-07-06
Filing date: 2013-07-05
Publication date: 2018-08-01
Anticipated expiration: 2033-07-05
Also published as: EP2870137B8; US20150191421A1; ES2679370T3; EP2870137A1; CA2878319A1; CA2878319C; HUE039775T2; JP2015528798A; PL2870137T3; EP2870137B1; GB201212081D0; WO2014006414A1; TR201809681T4; US9512065B2

Description

本発明は、血漿カリクレイン阻害薬の新規多形体、それらを含む医薬組成物及び治療におけるそれらの使用に関する。

血漿カリクレインの阻害薬は、多くの治療用途、特に、糖尿病性網膜症及び糖尿病性黄斑浮腫に関連した網膜血管透過性の処置における治療用途を有している。糖尿病の別の合併症、例えば、脳出血、腎症（ｎｅｐｒｏｐａｔｈｙ）、心筋症及び神経障害など（これらは、全て、血漿カリクレインに関連している）も、血漿カリクレイン阻害薬の標的であると考えられ得る。

血漿カリクレインは、キニノーゲンからキニンを遊離させることができるトリプシン様セリンプロテアーゼである（以下のものを参照されたい：「Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａｅｔａｌ．， “Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−ＫｉｎｉｎＣａｓｃａｄｅ”，ＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ｐ４８３−４９３」、「Ｊ．Ｗ．Ｂｒｙａｎｔｅｔａｌ．， “Ｈｕｍａｎｐｌａｓｍａｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−ｋｉｎｉｎｓｙｓｔｅｍ：ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｐａｒａｍｅｔｅｒｓ” Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒａｎｄｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌａｇｅｎｔｓｉｎｍｅｄｉｃｉｎａｌｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，７，ｐ２３４−２５０，２００９」、「Ｋ．Ｄ．Ｂｈｏｏｌａｅｔａｌ．，ＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｖ．，１９９２，４４，１」、及び、「Ｄ．Ｊ．Ｃａｍｐｂｅｌｌ， “Ｔｏｗａｒｄｓｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｔｈｅｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−ｋｉｎｉｎｓｙｓｔｅｍ：ｉｎｓｉｇｈｔｓｆｒｏｍｔｈｅｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆｋｉｎｉｎｐｅｐｔｉｄｅｓ”，ＢｒａｚｉｌｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃａｌａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ２０００，３３，６６５−６７７」）。これは、内因性血液凝固カスケードの必須メンバーであるが、このカスケードにおけるその役割は、ブラジキニンの放出又は酵素的切断を伴わない。血漿プレカリクレインは、単一の遺伝子によってコード化されており、そして、肝臓で合成される。これは、肝細胞によって不活性な血漿プレカリクレインとして分泌され、その血漿プレカリクレインは、血漿中を、高分子量キニノーゲンに結合したヘテロ二量体複合体として循環し、活性化されて活性な血漿カリクレインがもたらされる。キニンは、Ｇタンパク質共役受容体を介して作用する強力な炎症メディエーターであり、そして、キニンの拮抗薬（例えば、ブラジキニン拮抗薬）が、これまでに、多くの種類の疾患を処置するための潜在的な治療用薬剤として研究されてきた（Ｆ．ＭａｒｃｅａｕａｎｄＤ．Ｒｅｇｏｌｉ，ＮａｔｕｒｅＲｅｖ．，ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ，２００４，３，８４５−８５２）。

キニンは、膵炎の病因において極めて重要な役割を果たしており、また、該疾患における浮腫性形態から壊死性形態への進行においても重要であり得る。膵炎の動物モデルにおいて、ブラジキニン拮抗薬による前処置は、浮腫の形成及び続発症（例えば、低血圧症、血液量減少（ｈｙｐｏｖａｌｅｍｉａ）、血液濃縮及び膵臓組織内における活性化消化酵素の蓄積）を予防することが示された（「Ｔ．ＧｒｉｅｓｂａｃｈｅｒａｎｄＦ．ＬｅｍｂｅｃｋＦ．Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９２１０７，３５６−３６０」、「Ｔ．Ｇｒｉｅｓｂａｃｈｅｒｅｔａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９３，１０８，４０５−４１１」）。しかしながら、ブラジキニン拮抗薬のさらなる開発は、それらが特異性に欠けていること及びそれらの効力によって、制限された。さらに、ブラジキニン拮抗薬が膵臓内においてｈＫ１のレベルを上昇させることが示された（Ｔ．Ｇｒｉｅｓｂａｃｈｅｒｅｔａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２００３，１３９，２９９−３０８）。このことは、ｈＫ１阻害薬による処置がブラジキニン拮抗薬と比較して著しく有効であり得るということを示している。かくして、ｈＫ１を阻害することによるキニン形成の予防は、上記疾患を処置するための実行可能なキニン拮抗薬の代替を代表している。

血漿カリクレインは、多くの種類の炎症性疾患の一因であると考えられている。血漿カリクレインの主な阻害物質は、セルピンＣ１エステラーゼ阻害物質である。Ｃ１エステラーゼ阻害物質における遺伝的欠損を示す患者は、顔面、手、喉、胃腸管及び生殖器の断続的な腫脹をもたらす遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）を患う。急性エピソードに際して形成される水疱は高レベルの血漿カリクレインを含んでおり、この血漿カリクレインが高分子量のキニノーゲンを切断してブラジキニンを遊離させ、それによって、血管透過性の増大がもたらされる。巨大タンパク質血漿カリクレイン阻害薬による処置は、血管透過性の増大を引き起こすブラジキニンの放出を防止することにより、ＨＡＥを有効に処置することが示されている（Ａ．Ｌｅｈｍａｎｎ “Ｅｃａｌｌａｎｔｉｄｅ（ＤＸ−８８），ａｐｌａｓｍａｋａｌｌｉｋｒｅｉｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｈｅｒｅｄｉｔａｒｙａｎｇｉｏｅｄｅｍａａｎｄｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｏｆｂｌｏｏｄｌｏｓｓｉｎｏｎ−ｐｕｍｐｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃｓｕｒｇｅｒｙ” ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．８，ｐ１１８７−９９）。

血漿カリクレイン−キニン系は、進行した糖尿病性黄斑浮腫を患っている患者に異常に大量に存在している。最近、血漿カリクレインが糖尿病ラットにおける網膜血管機能不全の一因となっているということが公表された（Ａ．Ｃｌｅｒｍｏｎｔｅｔａｌ． “Ｐｌａｓｍａｋａｌｌｉｋｒｅｉｎｍｅｄｉａｔｅｓｒｅｔｉｎａｌｖａｓｃｕｌａｒｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｉｎｄｕｃｅｓｒｅｔｉｎａｌｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇｉｎｄｉａｂｅｔｉｃｒａｔｓ” Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２０１１，６０，ｐ１５９０−９８）。さらに、血漿カリクレイン阻害薬ＡＳＰ−４４０を投与することにより、糖尿病ラットにおいて、網膜血管透過性と網膜の血流異常の両方が改善された。従って、血漿カリクレイン阻害薬は、糖尿病性網膜症及び糖尿病性黄斑浮腫と関連している網膜血管透過性を低減させるための処置としての有用性を有するはずである。

合成小分子血漿カリクレイン阻害薬が、これまでに、例えば、Ｇａｒｒｅｔｔｅｔａｌ．（“Ｐｅｐｔｉｄｅａｌｄｅｈｙｄｅ…．” Ｊ．ＰｅｐｔｉｄｅＲｅｓ．５２，ｐ６２−７１（１９９８））、Ｔ．Ｇｒｉｅｓｂａｃｈｅｒｅｔａｌ．（“Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｔｉｓｓｕｅｋａｌｌｉｋｒｅｉｎｂｕｔｎｏｔｐｌａｓｍａｋａｌｌｉｋｒｅｉｎｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｓｙｍｐｔｏｍｓｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｋｉｎｉｎｓｉｎａｃｕｔｅｐａｎｃｒｅａｔｉｔｕｓｉｎｒａｔｓ” ＢｒｉｔｉｓｈＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ１３７，ｐ６９２−７００（２００２））、Ｅｖａｎｓ（“Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｄｉｐｅｐｔｉｄｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ” ＷＯ０３／０７６４５８）、Ｓｚｅｌｋｅｅｔａｌ．（“Ｋｉｎｉｎｏｇｅｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ” ＷＯ９２／０４３７１）、Ｄ．Ｍ．Ｅｖａｎｓｅｔａｌ．（Ｉｍｍｕｎｏｌｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３２，ｐ１１５−１１６（１９９６））、Ｓｚｅｌｋｅｅｔａｌ．（“Ｋｉｎｉｎｏｇｅｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ” ＷＯ９５／０７９２１）、Ａｎｔｏｎｓｓｏｎｅｔａｌ．（“Ｎｅｗｐｅｐｔｉｄｅｓｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ” ＷＯ９４／２９３３５）、Ｊ．Ｓｔｕｒｚｂｅｃｈｅｒｅｔａｌ．（ＢｒａｚｉｌｉａｎＪ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ２７，ｐ１９２９−３４（１９９４））、Ｋｅｔｔｎｅｒｅｔａｌ．（ＵＳ５，１８７，１５７）、Ｎ．Ｔｅｎｏｅｔａｌ．（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４１，ｐ１０７９−１０９０（１９９３））、Ｗ．Ｂ．Ｙｏｕｎｇｅｔａｌ．（“Ｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆｐｌａｓｍａｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ” Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｓ．１６，ｐ２０３４−２０３６（２００６））、Ｏｋａｄａｅｔａｌ．（“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｐｏｔｅｎｔａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｖｅｐｌａｓｍｉｎａｎｄｐｌａｓｍａｋａｌｌｉｋｒｅｉｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓａｎｄｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ” Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４８，ｐ１９６４−７２（２０００））、Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚｅｒｅｔａｌ．（“Ｔｒｙｐｓｉｎ−ｌｉｋｅｓｅｒｉｎｅｐｒｏｔｅａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓａｎｄｔｈｅｉｒｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｕｓｅ” ＷＯ０８／０４９５９５）、Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．（“Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆｈｉｇｈｌｙｐｏｔｅｎｔｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅｋａｌｌｉｋｒｅｉｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ” ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２，ｐ５４５−５５３（２００６））、Ｓｉｎｈａｅｔａｌ．（“Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆｐｌａｓｍａｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ” ＷＯ０８／０１６８８３）、及び、Ｂｒａｎｄｌｅｔａｌ．（“Ｎ−（（６−ａｍｉｎｏ−ｐｙｒｉｄｉｎ−３−ｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ）−ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ−ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅｓａｓｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆｐｌａｓｍａｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ” ＷＯ２０１２／０１７０２０）によって記載されている。

今日まで、小分子合成血漿カリクレイン阻害薬は、医療的使用に対して承認されていない。既知技術分野で記載されている分子は、関連する酵素（例えば、ＫＬＫ１、トロンビン及び他のセリンプロテアーゼ）と比べて選択性が不充分である、及び、経口での有効性が不充分である、などの制限を欠点として有している。巨大タンパク質血漿カリクレイン阻害薬は、エカランチドに関して報告されている用に、アナフィラキシー反応のリスクを呈する。かくして、血漿カリクレインを選択的に阻害し且つアナフィラキシーを誘発せず且つ経口的に利用可能な化合物が依然として求められている。さらに、既知技術分野における分子の大部分は、極性が高いイオン性のグアニジン官能性又はアミジン官能性を特長としている。そのような官能性が、消化管透過性を制限し得ること、従って、経口的な有効性を制限し得ることは、よく知られている。

医薬製剤の製造においては、商業的に実施可能な調製方法を達成するために、当該活性化合物が都合良く取扱い可能で且つ処理可能な形態にあることが重要である。従って、当該活性化合物の化学的安定性及び物理的安定性は、重要な要素である。当該活性化合物及びそれを含む製剤は、相当な期間にわたって、その活性化合物の物理化学的特性（例えば、化学的組成、密度、吸湿性及び溶解性など）における有意な変化を示すことなく、効果的に貯蔵可能でなければならない。

医薬成分の特定の固体形態を製造することは、その固体特性の多くの面に影響を及ぼすことが可能であり、そして、溶解性、溶解速度、化学的安定性、機械的特性、技術的実現可能性、加工性、薬物動態学及び生物学的利用能において有利性を提供し得るということは、知られている。これらの一部は、「“ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ＳｅｌｅｃｔｉｏｎａｎｄＵｓｅ”，Ｐ．ＨｅｉｎｒｉｃｈＳｔａｈｌ，ＣａｍｉｌｌｅＧ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｓ．）（ＶｅｒｌａｇＨｅｌｖｅｔｉｃａＣｈｉｍｉｃａＡｃｔａ，Ｚｕｒｉｃｈ）」に記載されている。固体形態の製造方法は、「“ＰｒａｃｔｉｃａｌＰｒｏｃｅｓｓＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ”，ＮｅａｌＧ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ）」及び「“Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：ＩｎｔｈｅＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙ”，ＲｏｌｆＨｉｌｆｉｋｅｒ（Ｅｄ）（ＷｉｌｅｙＶＣＨ）」にも記載されている。医薬結晶の多形性については、「Ｂｙｒｎ（Ｂｙｒｎ，Ｓ．Ｒ．，Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，Ｒ．Ｒ．，Ｓｔｏｗｅｌｌ，Ｊ．Ｇ．， “Ｓｏｌｉｄ−ＳｔａｔｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆＤｒｕｇｓ”，ＳＳＣＩＩｎｃ．，ＷｅｓｔＬａｆａｙｅｔｔｅ，Ｉｎｄｉａｎａ，１９９９）」、「Ｂｒｉｔｔａｉｎ，Ｈ．Ｇ．， “ＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｉｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｏｌｉｄｓ”，ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｂａｓｅｌ，１９９９」又は「Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，Ｊ．， “ＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｒｙｓｔａｌｓ”，ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ，２００２）に記載されている。

国際公開第２００３／０７６４５８号国際公開第９２／０４３７１号国際公開第９５／０７９２１号国際公開第９４／２９３３５号米国特許第５，１８７，１５７号明細書国際公開第２００８／０４９５９５号国際公開第２００８／０１６８８３号国際公開第２０１２／０１７０２０号

ＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ｐ４８３−４９３Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒａｎｄｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌａｇｅｎｔｓｉｎｍｅｄｉｃｉｎａｌｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，７，ｐ２３４−２５０，２００９ＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｖ．，１９９２，４４，１ＢｒａｚｉｌｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃａｌａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ２０００，３３，６６５−６７７ＮａｔｕｒｅＲｅｖ．，ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ，２００４，３，８４５−８５２Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９２１０７，３５６−３６０Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９３，１０８，４０５−４１１Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２００３，１３９，２９９−３０８ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．８，ｐ１１８７−９９Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２０１１，６０，ｐ１５９０−９８Ｊ．ＰｅｐｔｉｄｅＲｅｓ．５２，ｐ６２−７１（１９９８）ＢｒｉｔｉｓｈＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ１３７，ｐ６９２−７００（２００２）Ｉｍｍｕｎｏｌｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３２，ｐ１１５−１１６（１９９６）ＢｒａｚｉｌｉａｎＪ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓ２７，ｐ１９２９−３４（１９９４）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４１，ｐ１０７９−１０９０（１９９３）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｓ．１６，ｐ２０３４−２０３６（２００６）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４８，ｐ１９６４−７２（２０００）ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２，ｐ５４５−５５３（２００６）ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ；Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ＳｅｌｅｃｔｉｏｎａｎｄＵｓｅ，Ｐ．ＨｅｉｎｒｉｃｈＳｔａｈｌ，ＣａｍｉｌｌｅＧ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｓ．）（ＶｅｒｌａｇＨｅｌｖｅｔｉｃａＣｈｉｍｉｃａＡｃｔａ，Ｚｕｒｉｃｈ）ＰｒａｃｔｉｃａｌＰｒｏｃｅｓｓＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＮｅａｌＧ．Ａｎｄｅｒｓｏｎ（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ）Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：ＩｎｔｈｅＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙ，ＲｏｌｆＨｉｌｆｉｋｅｒ（Ｅｄ）（ＷｉｌｅｙＶＣＨ）Ｂｙｒｎ（Ｂｙｒｎ，Ｓ．Ｒ．，Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，Ｒ．Ｒ．，Ｓｔｏｗｅｌｌ，Ｊ．Ｇ．，Ｓｏｌｉｄ−ＳｔａｔｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆＤｒｕｇｓ，ＳＳＣＩＩｎｃ．，ＷｅｓｔＬａｆａｙｅｔｔｅ，Ｉｎｄｉａｎａ，１９９９）Ｂｒｉｔｔａｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｉｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｏｌｉｄｓ，ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｂａｓｅｌ，１９９９Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，Ｊ．，ＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｒｙｓｔａｌｓ，ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ，２００２）

本出願人は血漿カリクレインの阻害薬である一連の新規ベンジルアミン誘導体を開発した。それらは、ＷＯ２０１３／００５０４５（ＰＣＴ／ＧＢ２０１２／０５１５８８）の中に開示されている。これらの化合物は、血漿カリクレインに対して良好な選択性を示し、そして、視力障害、糖尿病性網膜症、黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、糖尿病、膵臓炎（ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｕｓ）、脳出血、腎症、心筋症、神経障害、炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｏｔｏｒｙｂｏｗｅｌｄｉｓｅａｓｅ）、関節炎、炎症、敗血症性ショック、低血圧、癌、成人呼吸窮迫症候群、播種性血管内凝固症候群、心肺バイパス手術及び手術後の出血（ｂｌｅｅｄｉｎｇｆｒｏｍｐｏｓｔ−ｏｐｅｒａｔｉｖｅｓｕｒｇｅｒｙ）の処置において潜在的に有用である。そのような１種類のベンジルアミン誘導体は、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミドである。Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミドを調製する最初の試みでは、非晶質固体が生成された。しかしながら、本出願人は、該化合物の塩酸塩の安定な新規結晶質形態（これは、本明細書中においては、「形態１」及び「形態２」と称される）を開発した。該新規固体形態は、それらを開発に適したものとする有利な物理化学的特性を有している。

例えば、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の「形態１」の重量蒸気吸着（ＧｒａｖｉｍｅｔｒｉｃＶａｐｏｕｒＳｏｒｐｔｉｏｎ）（ＧＶＳ）データ（図４）は、水和が可逆的である（即ち、有意な履歴現象が存在しない）ことを示している。さらに、これらのデータは、標準状態（相対湿度２０％〜８０％）のもとでは含水量が比較的漸次的にしか増加しないことを示している。これは、サンプルの湿潤に起因する可能性があり、有意な吸湿性を有さないことと調和する。

製薬的な開発のために該結晶質形態が適していることのさらなる証拠は、以下の安定性データによって与えられる。Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の形態１をポリプロピレン製容器の中の二重ポリエチレン製バッグの中に詰め、４０℃、相対湿度７５％で６ヶ月間貯蔵した。
・ＸＲＰＤディフラクトグラムに変化はなかった。
・含水量（ＫａｒｌＦｉｓｃｈｅｒ試験方法を使用）は、最初、調製（これは、乾燥操作を含んでいた）後、直ぐに上昇したが、安定化して、１ヶ月後には約２．５％−２．８％（ｗ／ｗ）の範囲になり、そして、その後は、この範囲内にとどまった。これらのデータは、ＧＶＳデータと一致しており、有意な吸湿性を有さないことをさらに実証している。
・有意な化学的分解はなかった。純度（ＨＰＬＣ）は、９９．８面積％のままであった。

かくして、本発明の１態様によれば、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質多形体が提供される。本出願においては、これらの多形体は、「形態１」及び「形態２」と称され得る。

化学名「Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド」は、図Ａにおいて表されている構造を意味する。

図Ａ

本発明は、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態の溶媒和物（例えば、水和物）を包含する。

Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の２種類の結晶質多形体は、今日までに単離され、特徴付けされた。それらは、本明細書中においては、「形態１」及び「形態２」と称されている。

Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の形態１のＸ線粉末回折パターンを示す図である。Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の形態１のＩＲスペクトルを示す図である。Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の形態１のＤＳＣサーモグラフを示す図である。Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の形態１の重量蒸気吸着等温線（吸着、脱着及び吸着）を示す図である。Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の形態２のＸ線粉末回折パターンを示す図である。Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の形態２のＤＳＣサーモグラフを示す図である。ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラットにおけるＣＡ−Ｉ刺激ＲＰＶに対するＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩（「被験化合物」と称されている）とＣＨ−３４５７（陽性対照；血漿カリクレイン阻害薬）の阻害効果を示す図である。４．２μｇ／ｍＬ（２１０ｎｇ／眼）のＩＶＴ投与後におけるＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩（「被験化合物」と称されている）の眼組織内濃度を示す図である。

該結晶質形態の好ましい態様は、形態１である。本発明の好ましい態様においては、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態は、水和物、特に、一水和物又は半水和物である。

本明細書中においては、Ｘ線粉末回折のピーク（これは、角度２θで表されている）は、Ｃｕ−Ｋα線を用いて測定する。

本発明は、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態（形態１）を提供し、これは少なくとも以下の、約：
（１）５．１、１０．３、１０．７、１８．１、及び、１８．６；又は、
（２）５．１、１０．３、１０．７、１４．９、１７．９、１８．１、及び、１８．６；又は、
（３）５．１、７．８、１０．３、１０．７、１４．９、１６．６、１７．９、１８．１、及び、１８．６；
において、特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ−Ｋα線、角度２θで表される）を示す。

これに関連して、用語「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、角度２θの測定において±０．２（角度２θで表される）の不確定さが存在していることを意味している。

本発明は、さらにまた、約５．１、７．８、１０．３、１０．７、１３．０、１４．９、１６．６、１７．９、１８．１及び１８．６において、特徴的なピーク（角度２θで表される）を含むＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態（形態１）も提供する。

本発明は、さらにまた、少なくとも以下の、約：
（１）１７．３２、８．６１、８．２３、４．８９、及び、４．７６；又は、
（２）１７．３２、８．６１、８．２３、５．９６、４．９７、４．８９、及び、４．７６；又は、
（３）１７．３２、１１．２８、８．６１、８．２３、５．９６、５．３４、４．９７、４．８９、及び、４．７６；
の特徴的なｄ−間隔値（Å）を示すＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態（形態１）も提供する。

これに関連して、用語「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、ｄ−間隔値（Å）の測定において±０．２（Åで表される）の不確定さが存在していることを意味している。

図１は、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の形態１のＸ線粉末回折パターンを示している。本発明は、さらにまた、図１において示されているＸ線粉末回折パターンと実質的に同一のＸ線粉末回折パターンを有するＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態（形態１）も提供する。

図２は、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の形態１のＩＲスペクトルを示している。本発明は、さらにまた、約３２７４、３０２７、２９７６、２９２８、１６５１、１６３６、１５３６、１５１２、１２４３及び７０３においてｃｍ^−１で表される特徴的なピークを有する、ＩＲスペクトルによって特徴付けられる、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態（形態１）も提供する。

これに関連して、用語「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、該ｃｍ^−１値が、例えば最大で±１ｃｍ^−１まで、変動し得ることを意味している。本発明は、さらにまた、図２において示されているＩＲスペクトルと実質的に同一のＩＲスペクトルを有するＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態（形態１）も提供する。

本発明は、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態（形態２）も提供し、これは少なくとも以下の、約：
（１）３．３、５．７、１８．６、２４．４、２５．５；又は、
（２）３．３、５．７、６．７、１８．６、２４．４、２５．５；又は、
（３）３．３、５．７、６．７、８．３、１１．０、１８．６、２４．４、２５．５；
において、特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ−Ｋα線、角度２θで表される）を示す。

本発明は、さらにまた、約３．３、４．７、５．７、６．０、６．７、８．３、１１．０、１８．６、２４．４、２５．５において、特徴的なピーク（角度２θで表される）を含むＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態（形態２）も提供する。

本発明は、さらにまた、少なくとも以下の、約：
（１）２６．７２、１５．５２、４．７７、３．６５、３．４９；又は、
（２）２６．７２、１５．５２、１３．２６、４．７７、３．６５、３．４９；又は、
（３）２６．７２、１５．５２、１３．２６、１０．６６、８．０４、４．７７、３．６５、３．４９；
の特徴的なｄ−間隔値（Å）を示すＸ線粉末回折パターンを有する、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態（形態２）も提供する。

図５は、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の形態２のＸ線粉末回折パターンを示している。本発明は、さらにまた、図５において示されているＸ線粉末回折パターンと実質的に同一のＸ線粉末回折パターンを有するＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態（形態２）も提供する。

本発明の結晶質形態は、非溶媒和形態と溶媒和形態の両方で存在することができる。用語「溶媒和物」は、本明細書中においては、本発明の化合物と特定量の１種類以上の製薬上許容される溶媒（例えば、エタノール）を含む分子複合体を記述するために使用される。用語「水和物」は、該溶媒が水である場合に使用される。

本発明は、さらにまた、本発明の形態１を調製する方法も包含し、ここで、該調製方法は、該結晶質形態を溶媒又は溶媒混合物の中のＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の溶液から結晶化させることを含む。本発明の１態様においては、該溶媒混合物は、アセトニトリルと水である。別の態様においては、該溶媒混合物は、アセトニトリルとジメチルスルホキシドである。別の態様においては、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩を溶媒又は溶媒の混合物（例えば、アセトニトリルと水、又は、アセトニトリルとジメチルスルホキシド）に添加し、及び、その組み合わされた混合物（化合物プラス溶媒（１種類又は複数種類））を約７０〜８５℃の温度まで加熱した後、室温まで冷却する。あるいは、この態様において、該組み合わされた混合物を７５〜８０℃の温度まで加熱した後、室温まで冷却する。あるいは、この態様において、該組み合わされた混合物を約７５℃、７６℃、７７℃、７８℃、７９℃又は８０℃の温度まで加熱した後、室温まで冷却する。あるいは、この態様において、該組み合わされた混合物を約７７℃の温度まで加熱した後、室温まで冷却する。

代替的に、該結晶質形態は、固体非晶質形態を温度サイクリング（例えば、２４５℃以下での示差走査熱量測定による当該サンプルの加熱／冷却サイクリング））に付すことによって、得ることができる。

本発明の調製方法は、本発明の結晶質形態の結晶種を添加することも含み得る。

１態様において、本発明は、本発明による調製方法で製造された場合の本発明の結晶質形態を提供する。

先に記載したように、本発明の結晶質形態は、多くの治療用途、特に、血漿カリクレインが介在している疾患又は症状の処置における治療用途を有している。

従って、本発明は、治療において使用するための、本明細書中で定義されているＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態を提供する。好ましい実施形態では、該結晶質形態は、形態１である。

本発明は、さらにまた、血漿カリクレインが介在する疾患又は症状を処置するための医薬の製造における、本明細書中で定義されているＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態の使用も提供する。好ましい実施形態では、該結晶質形態は、形態１である。

本発明は、さらにまた、血漿カリクレインが介在する疾患又は症状を処置する方法において使用するための本明細書中で定義されているＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態も提供する。好ましい実施形態では、該結晶質形態は、形態１である。

本発明は、さらにまた、血漿カリクレインが介在する疾患又は症状を処置する方法も提供し、ここで、該方法は、そのような処置を必要とする哺乳動物に治療有効量の本明細書中で定義されているＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質形態を投与することを含む。好ましい実施形態では、該結晶質形態は、形態１である。

１態様において、血漿カリクレインが介在する該疾患又は症状は、視力障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、糖尿病、膵臓炎（ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｕｓ）、脳出血、腎症、心筋症、神経障害、炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｏｔｏｒｙｂｏｗｅｌｄｉｓｅａｓｅ）、関節炎、炎症、敗血症性ショック、低血圧、癌、成人呼吸窮迫症候群、播種性血管内凝固症候群、心肺バイパス手術及び手術後の出血（ｂｌｅｅｄｉｎｇｆｒｏｍｐｏｓｔ−ｏｐｅｒａｔｉｖｅｓｕｒｇｅｒｙ）から選択される。

１態様においては、血漿カリクレインが介在する疾患又は症状は、糖尿病性網膜症又は糖尿病性黄斑浮腫に関連した網膜血管透過性である。

本発明に関連して、本明細書中において「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」について言及されている場合、それは、特に異なって示されていない限り、治療的処置、対症療法及び予防的処置に対する言及を包含する。用語「治療（ｔｈｅｒａｐｙ）」、「治療的な（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）」及び「治療的に（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ）」は、同様に解釈されるべきである。

本発明の結晶質形態は、単独で投与し得るか、又は、１種類以上の別の薬物と組合せて投与し得る。一般に、それは、１種類以上の製薬上許容される賦形剤と合わせられた製剤として投与される。用語「賦形剤（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）」は、本明細書中においては、機能的特性（即ち、薬物放出速度制御）及び／又は非機能的特性（即ち、加工助剤又は希釈剤）を当該製剤に付与し得る、本発明の化合物（１種類又は複数種類）以外の成分について記述するために使用される。賦形剤の選択は、特定の投与方法、溶解性及び安定性に対する賦形剤の効果並びに投与形態の種類などの要因に大きく依存する。

別の態様において、本発明の化合物は、網膜のレーザー治療と組み合わせて投与することができる。糖尿病性黄斑浮腫を治療するための、レーザー療法とＶＥＧＦ阻害薬の硝子体内注射との組合せは知られている（ＥｌｍａｎＭ，ＡｉｅｌｌｏＬ，ＢｅｃｋＲ，ｅｔａｌ． “Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｔｒｉａｌｅｖａｌｕａｔｉｎｇｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂｐｌｕｓｐｒｏｍｐｔｏｒｄｅｆｅｒｒｅｄｌａｓｅｒｏｒｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅｐｌｕｓｐｒｏｍｐｔｌａｓｅｒｆｏｒｄｉａｂｅｔｉｃｍａｃｕｌａｒｅｄｅｍａ” ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．２７Ａｐｒｉｌ２０１０）。

本発明の結晶質形態を送達するのに適した医薬組成物及びそれらの調製方法については、当業者は容易に理解することができる。そのような組成物及びそれらの調製方法は、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ（ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，１９９５）」の中に見いだすことができる。

ヒト患者に投与する場合、本発明の結晶質形態の総１日用量は、典型的には、０．０１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲、又は、０．１ｍｇ〜２５０ｍｇの範囲、又は、１ｍｇ〜５０ｍｇの範囲であるが、もちろん、投与方法に依存する。硝子体内注射によって投与する場合、さらに低い、眼１つ当たり０．０００１ｍｇ（０．１μｇ）〜０．２ｍｇ（２００μｇ）の用量、又は、眼１つ当たり０．０００５ｍｇ（０．５μｇ）〜０．０５ｍｇ（５０μｇ）の用量が想定される。

該総１日用量は、単回投与又は分割投与で投与することができ、そして、医師の裁量によって、本明細書中に記載されている典型的な範囲の外も可能である。これらの用量は、約６０ｋｇ〜７０ｋｇの体重を有する平均的なヒト被検者に基づいている。医師は、体重がこの範囲の外にある被検者（例えば、幼児及び高齢者）に対する用量を容易に決定することができる。

従って、本発明は、上記で定義されているＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の結晶質固体形態及び製薬上許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。好ましい実施形態では、該結晶質固体形態は、形態１である。

該医薬組成物は、例えば、点眼剤、クリーム剤、溶液剤、懸濁液剤、ヘプタフルオロアルカン（ＨＦＡ）エーロゾル剤及び乾燥粉末製剤などの形態で、局所的に（例えば、眼に、皮膚に、又は、肺及び／若しくは気道に）投与し得る；又は、例えば、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、散剤又は顆粒剤の形態で経口投与することによって、全身的に投与し得る；又は、溶液剤又は懸濁液剤の形態で非経口投与することによって投与し得る；又は、皮下投与によって投与し得る；又は、坐剤の形態で直腸内投与することによって投与し得る；又は、経皮的に投与し得る。

本発明の１実施形態では、該活性成分は、経口的に投与される。経口投与は、嚥下（これによって、該化合物は、胃腸管内に入る）、及び／又は、口腔投与、舌投与若しくは舌下投与（これによって、該化合物は、口から直接血流内に入る）を包含し得る。

経口投与に適した製剤としては、以下のものなどがある：固体プラグ製剤（ｓｏｌｉｄｐｌｕｇｓ）、固体微粒子製剤（ｓｏｌｉｄｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅｓ）、半固体製剤及び液体製剤（これは、多相系又は分散系を包含する）、例えば、錠剤；マルチ粒子若しくはナノ粒子、液体、エマルション又は粉末を含む軟カプセル剤又は硬カプセル剤；ロゼンジ剤（これは、液体が充填されているものを包含する）；咀嚼剤（ｃｈｅｗｓ）；ゲル剤；高速分散性投与形態；フィルム剤；オビュール剤（ｏｖｕｌｅｓ）；スプレー剤；及び、口腔内／粘膜付着性パッチ剤。

経口投与に適した製剤は、該結晶質形態を即時放出性様式又は徐放性様式で送達するように設計することもでき、その際、その放出プロフィールは、遅延型、パルス型、制御型、持続型若しくは遅延且つ持続型であることが可能であるか、又は、当該結晶質形態の治療効果を最適化するように改変することが可能である。化合物を徐放性様式で送達する方法は当技術分野では知られており、そして、そのような方法としては、当該化合物と一緒に製剤してその化合物の放出を制御することが可能な低速放出性ポリマーなどがある。

徐放性ポリマーの例としては、当該化合物を拡散によって又は拡散とポリマー浸食の組合せによって放出させるために使用され得る分解性ポリマー及び非分解性ポリマーなどがある。徐放性ポリマーの例としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、キサンタンガム、ポリメタクリレート、ポリエチレンオキシド及びポリエチレングリコールなどを挙げることができる。

液体（これは、多相系及び分散系を包含する）製剤としては、エマルション剤、懸濁液剤、溶液剤、シロップ剤及びエリキシル剤などがある。そのような製剤は、軟カプセル剤又は硬カプセル剤（例えば、ゼラチン製又はヒドロキシプロピルメチルセルロース製）の中の充填剤として提供されることができ、そして、典型的には、担体（例えば、水、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース又は適切な油）並びに１種類以上の乳化剤及び／又は懸濁化剤を含む。液体製剤は、さらにまた、例えばサシェ剤から、固体を再構成することによって調製することもできる。

本発明の結晶質形態は、速溶解性、速崩壊製投与形態の中で、例えば、「ＬｉａｎｇａｎｄＣｈｅｎ，ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎｉｏｎｉｎＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＰａｔｅｎｔｓ，２００１，１１（６），９８１−９８６」に記載されている速溶解性、速崩壊製投与形態の中で、使用することもできる。

錠剤の製剤については、「ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｖｏｌ．１，ｂｙＨ．ＬｉｅｂｅｒｍａｎａｎｄＬ．Ｌａｃｈｍａｎ（ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８０）」の中で論じられている。

本発明について、以下の非限定的な実施例によって例証する。該実施例の中では、以下の図が供されている。

一般的な実験に関する詳細
^１ＨＮＭＲスペクトルは、ＢｒｕｃｋｅｒＡｖａｎｃｅＩＩＩ（４００ＭＨｚ）分光計で、重水素溶媒に関して室温で記録した。

分子イオンはＬＣＭＳを用いて得たが、そのＬＣＭＳは、ＣｈｒｏｍｏｌｉｔｈＳｐｅｅｄｒｏｄＲＰ−１８ｅカラム（５０×４．６ｍｍ）を使用し、１１分間にわたる０．１％ＨＣＯ_２Ｈ／Ｈ_２Ｏの中への１０％から９０％までの０．１％ＨＣＯ_２Ｈ／ＭｅＣＮの直線勾配、流速１．５ｍＬ／分で実施した。データは、ＴｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎＳｕｒｖｅｙｏｒＬＣシステムに連結した、エレクトロスプレーイオン化によるＴｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎＳｕｒｖｅｙｏｒＭＳＱ質量分析計を用いて収集した。

化学名は、ＩＳＩＳｄｒａｗパッケージ（ＭＤＬＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍｓ製）の一部として提供されたＡｕｔｏｎｏｍソフトウェアを用いて作成した。

全ての溶媒及び市販試薬は、受け取ったままの状態で使用した。

赤外スペクトルは、標準的な吸光度の構成に設定されたシステムを使用して、臭化カリウムを用いて調製されたサンプルを用いて測定し、４０００ｃｍ^−１から４００ｃｍ^−１まで走査した。

Ｘ線粉末回折パターンは、Ｃｕ−Ｋα線（４５ｋＶ、４０ｍＡ）、θ−θゴニオメーター、集束鏡、発散スリット（１／２”）、入射ビームと発散ビームの両方におけるソーラースリット（４ｍｍ）及びＰＩＸｃｅｌ検出器を使用するＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ回折計で収集した。データ収集に使用したソフトウェアは、「Ｘ’ＰｅｒｔＤａｔａＣｏｌｌｅｃｔｏｒ，ｖｅｒｓｉｏｎ２．２ｆ」であり、データは、「Ｘ’ＰｅｒｔＤａｔａＶｉｅｗｅｒ，ｖｅｒｓｉｏｎ１．２ｄ」を用いて提供された。

ＸＲＰＤパターンは、ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌＸ’ＰｅｒｔＰＲＯを使用する周囲条件下でのトランスミッションフォイルサンプルステージ（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｆｏｉｌｓａｍｐｌｅｓｔａｇｅ）（ポリイミド−Ｋａｐｔｏｎ、厚さ１２．７μｍのフィルム）によって、周囲条件下で得た。データ収集範囲は、連続走査速度０．２０２００４°ｓ^−１で、２．９９４−３５°２θであった。

ＤＳＣデータは、４５の位置のサンプルホルダーを備えたＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＰｙｒｉｓ４０００ＤＳＣで収集した。その機器は、認定インジウムを用いて、エネルギーと温度の校正に関して校合した。所定量（０．５−３．０ｍｇ）のサンプルをアルミニウム製ピンホールパン（ｐｉｎｈｏｌｅｄａｌｕｍｉｎｉｕｍｐａｎ）の中に置き、そして、２０℃×分^−１で３０℃から３５０℃まで加熱するか、又は、指示されている実験として変更した。全サンプルに対して、６０ｍＬ×分^−１での乾燥窒素のパージを維持した。当該機器の制御、データ収集及び解析は、ＰｙｒｉｓＳｏｆｔｗａｒｅｖ９．０．１．０２０３を用いて実施した。

Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩（形態１）

方法
Ａ．｛（Ｓ）−１−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−メチル）−ベンジルカルバモイル］−２−フェニル−エチル｝−カルバミン酸ベンジルエステル
（Ｓ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−フェニル−プロピオン酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステル（４．２５ｇ、１０．７２ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（１００ｍＬ）に溶解させた。この溶液を０℃まで冷却した。１−（Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−４−（アミノメチル）ベンゼン（２．７９ｇ、１１．７９ｍｍｏｌ）を添加した後、トリエチルアミン（３．２５ｇ、３２．１６ｍｍｏｌ）を添加した。０℃〜室温で１８時間経過した後、反応混合物をクロロホルム（１００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ_３（１×３０ｍＬ）、水（１×３０ｍＬ）、ブライン（１×３０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で蒸発させて、黄色の油状物を得た。その残渣を石油エーテル（６０−８０℃）とＥｔＯＡｃを用いて摩砕して、白色の固体〔これは、｛（Ｓ）−１−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−メチル）−ベンジルカルバモイル］−２−フェニル−エチル｝−カルバミン酸ベンジルエステル（３．８８ｇ、７．４９ｍｍｏｌ、７０％）であると確認された〕を得た。
［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５１８．２８、５４０．３２（Ｍ＋Ｎａ）。

Ｂ．｛４−［（（Ｓ）−２−アミノ−３−フェニル−プロピオニルアミノ）−メチル］−ベンジル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
｛（Ｓ）−１−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−メチル）−ベンジルカルバモイル］−２−フェニル−エチル｝−カルバミン酸ベンジルエステル（３．６６ｇ、７．０８ｍｍｏｌ）をメタノール（２００ｍＬ）に溶解させた。この溶液を、１０％Ｐｄ／Ｃ（５００ｍｇ）上で、大気圧下及び室温で１時間水素化し、その後、触媒をセライトを通して濾去した。その残渣をメタノール（３０ｍＬ）で洗浄し、その濾液を合して減圧下で蒸発させて、白色の固体〔これは、｛４−［（（Ｓ）−２−アミノ−３−フェニル−プロピオニルアミノ）−メチル］−ベンジル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．６２７ｇ、６．８５ｍｍｏｌ、９７％）であると確認された〕を得た。
［Ｍ＋Ｈ］^＋＝３８４．３７。

Ｃ．（Ｒ）−２−アミノ−３−（４−エトキシ−フェニル）−プロピオン酸
（Ｒ）−２−ブトキシカルボニルアミノ−３−（４−エトキシ−フェニル）−プロピオン酸（４．０ｇ、１２．９３ｍｍｏｌ）をジオキサン（１５０ｍＬ）の中の４ＭＨＣｌに溶解させた。室温で１時間経過した後、溶媒を減圧下で除去して、白色の固体〔これは、（Ｒ）−２−アミノ−３−（４−エトキシ−フェニル）−プロピオン酸塩酸塩（３．１８ｇ、１２．９ｍｍｏｌ、１００％）であると確認された〕を得た。
［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２１０．１８。

Ｄ．（Ｒ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−（４−エトキシ−フェニル）−プロピオン酸
水酸化ナトリウム（１．１４ｇ、２８．３８ｍｍｏｌ）を水（１００ｍＬ）に溶解させた溶液に、（Ｒ）−２−アミノ−３−（４−エトキシ−フェニル）−プロピオン酸塩酸塩（３．１７ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）を溶解させた。ジオキサン（１００ｍＬ）の中のクロロギ酸ベンジル（２．６４ｇ、１５．４８ｍｍｏｌ）を添加した。その反応混合物を室温で１８時間撹拌し、その後、ジオキサンを減圧下で除去した。その水性残渣をジエチルエーテル（１×１００ｍＬ）で洗浄し、１ＭＨＣｌで酸性化してｐＨ２とし、クロロホルム（２×２００ｍＬ）で抽出した。その抽出物を合して、水（１×５０ｍＬ）、ブライン（１×５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で蒸発させて、白色の固体〔これは、（Ｒ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−（４−エトキシ−フェニル）−プロピオン酸（４．０ｇ、１１．６５ｍｍｏｌ、９０％）であると確認された〕を得た。
［Ｍ＋Ｈ］^＋＝３４４．２０。

Ｅ．［（Ｒ）−１−｛（Ｓ）−１−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−メチル）−ベンジルカルバモイル］−２−フェニル−エチルカルバモイル｝−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−カルバミン酸ベンジルエステル
｛４−［（（Ｓ）−２−アミノ−３−フェニル−プロピオニルアミノ）−メチル］−ベンジル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．６３ｇ、６．８６ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（１００ｍＬ）とＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解させた。この溶液を０℃まで冷却した。（Ｒ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−（４−エトキシ−フェニル）−プロピオン酸（２．５９ｇ、７．５４ｍｍｏｌ）を添加した後、ＨＯＢｔ（１．１１ｇ、８．２３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２．０８ｇ，２０．５７ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、水溶性カルボジイミド（１．４５ｇ、７．５４ｍｍｏｌ）を添加した。０℃〜室温で１８時間経過した後、反応混合物をクロロホルム（２００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ_３（１×５０ｍＬ）、水（１×５０ｍＬ）、ブライン（１×５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で蒸発させて、黄色の油状物を得た。その残渣を酢酸エチル及び石油エーテル（６０−８０℃）を用いて磨砕して、白色の固体〔これは、［（Ｒ）−１−｛（Ｓ）−１−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−メチル）−ベンジルカルバモイル］−２−フェニル−エチルカルバモイル｝−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−カルバミン酸ベンジルエステル（３．５５ｇ、５．０１ｍｍｏｌ、７３％）であると確認された〕を得た。
［Ｍ＋Ｈ］^＋＝７０９．３４。

Ｆ．［４−（｛（Ｓ）−２−［（Ｒ）−２−アミノ−３−（４−エトキシ−フェニル）−プロピオニルアミノ］−３−フェニル−プロピオニルアミノ｝−メチル）−ベンジル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
［（Ｒ）−１−｛（Ｓ）−１−［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−メチル）−ベンジルカルバモイル］−２−フェニル−エチルカルバモイル｝−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−カルバミン酸ベンジルエステル（３．５５ｇ、５．００ｍｍｏｌ）をメタノール（２００ｍＬ）に溶解させた。この溶液を１０％Ｐｄ／Ｃ（５００ｍｇ）上で、大気圧下及び室温で１時間水素化し、その後、触媒をセライトを通して濾去しした。残渣をメタノール（３０ｍＬ）で洗浄し、その濾液を合してを減圧下で蒸発させて、白色の固体〔これは、［４−（｛（Ｓ）−２−［（Ｒ）−２−アミノ−３−（４−エトキシ−フェニル）−プロピオニルアミノ］−３−フェニル−プロピオニルアミノ｝−メチル）−ベンジル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．８ｇ、４．８７ｍｍｏｌ、９７％）であると確認された〕を得た。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝５７５．３７

Ｇ．［４−（｛（Ｓ）−２−［（Ｒ）−２−ベンゾイルアミノ−３−（４−エトキシ−フェニル）−プロピオニルアミノ］−３−フェニル−プロピオニルアミノ｝−メチル）−ベンジル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
［４−（｛（Ｓ）−２−［（Ｒ）−２−アミノ−３−（４−エトキシ−フェニル）−プロピオニルアミノ］−３−フェニル−プロピオニルアミノ｝−メチル）−ベンジル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．４５ｇ、５．９９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５０ｍＬ）に溶解させた。塩化ベンゾイル（１．０１ｇ、７．１９ｍｍｏｌ）を添加した後、トリエチルアミン（１．８２ｇ、１７．９８ｍｍｏｌ）を添加した。その反応混合物を室温で５時間撹拌し、ＣＨＣｌ_３（１５０ｍＬ）で希釈し、その溶液を０．３ＭＫＨＳＯ_４（１×５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（１×５０ｍＬ）、水（１×５０ｍＬ）、ブライン（１×５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ_４）、減圧下で蒸発させた。その残渣を石油エーテル（６０−８０℃）及びＥｔＯＡｃを用いて磨砕して、白色の固体〔これは、［４−（｛（Ｓ）−２−［（Ｒ）−２−ベンゾイルアミノ−３−（４−エトキシ−フェニル）−プロピオニルアミノ］−３−フェニル−プロピオニルアミノ｝−メチル）−ベンジル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．０６ｇ、４．５１ｍｍｏｌ、７５％）であると確認された〕を得た。
［Ｍ＋Ｈ］^＋＝６７９．３４。

Ｈ．Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩（形態１）
［４−（｛（Ｓ）−２−［（Ｒ）−２−ベンゾイルアミノ−３−（４−エトキシ−フェニル）−プロピオニルアミノ］−３−フェニル−プロピオニルアミノ｝−メチル）−ベンジル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１０．０ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）を、室温で、塩化水素／酢酸エチル（３．７Ｍ、２５０ｍＬ）の中で撹拌した。２時間結果した後、その今後異物を濾過し、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で洗浄し、脱水して、固体（７．９ｇ）を得た。その固体の一部（０．１０６ｇ）をアセトニトリル（２．１ｍＬ）と水（０．３２ｍＬ）の混合物の中に懸濁させ、撹拌し、７７℃まで加熱した。溶解したことが観察されるまで、その混合物に追加の水のアリコート（０．０５ｍＬ）を連続して添加した。次いで、その撹拌下にある混合物を室温まで一晩冷却した。生じた固体を濾過することで単離し、減圧下で４０℃で乾燥させて、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩（形態１）（０．０６７ｇ、３．４１ｍｍｏｌ、８１％）を得た。
［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５７９．３４；
^１ＨＮＭＲ：（ＣＤ_３ＯＤ），１．４０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．９１−２．９９（３Ｈ，ｍ），３．１４−３．１９（１Ｈ，ｍ），４．０２（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），４．０８（２Ｈ，ｓ），４．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ），４．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ），４．６６−４．６９（２Ｈ，ｍ），６．８２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．１０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．１８−７．２０（２Ｈ，ｍ），７．２５−７．３８（７Ｈ，ｍ），７．４４−７．５９（３Ｈ，ｍ），７．７２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ）。

Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩（形態１）のＸＲＰＤディフラクトグラムは、図１に示されている。

赤外分光法
形態１のＩＲスペクトルは、約３２７４、３０２７、２９７６、２９２８、１６５１、１６３６、１５３６、１５１２、１２４３及び７０３ｃｍ^−１の波長に、ピークを含む。そのスペクトルは、図２に示されている。

示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
形態１に関するＤＳＣデータは、図３に示されている。

重量蒸気吸着
ＩＧＡｓｏｒｐＳｙｓｔｅｍｓＳｏｆｔｗａｒｅＶ６．５０．４８によって制御されているＨｉｄｅｎＩｓｏｃｈｅｍａ水分吸着分析計（モデルＩＧＡｓｏｒｐ）を用いて、吸着等温線を得た。サンプルは、計器制御によって一定の温度（２５℃）に維持した。湿度は、乾燥窒素流と湿潤窒素流を混合させることによって制御した（総流量２５０ｍＬ×分^−１）。その計器は、校正された３種類のＲｏｔｒｏｎｉｃ塩溶液（１０−５０−８８％）を測定することによって、相対湿気含有量に関して校合した。微量天秤（精度＋／−０．００５ｍｇ）によって、サンプルの重量変化を湿度の関数としてモニターした。確定された量のサンプルを、周囲条件下で、風袋重量が量られているメッシュステンレス鋼バスケットの中に置いた。全実験サイクルは、一定温度（２５℃）のもとで、１０％ＲＨインターバルで、０〜９０％範囲にわたる３回の走査（吸着、脱着及び吸着）で構成された（各湿度レベルに対して６０分）。

形態１に関するＧＶＳデータは、図４に示されている。

Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩（形態２）

方法
［４−（｛（Ｓ）−２−［（Ｒ）−２−ベンゾイルアミノ−３−（４−エトキシ−フェニル）−プロピオニルアミノ］−３−フェニル−プロピオニルアミノ｝−メチル）−ベンジル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５．０ｇ）を、窒素雰囲気下、酢酸エチル（１５ｍＬ）に懸濁させた。乾燥塩化水素を酢酸エチルに溶解させた溶液（３．７Ｍ、６０ｍＬ）をその懸濁液に装入し、その混合物を室温で撹拌した。合計で２時間撹拌した後、得られた懸濁液を濾過し、酢酸エチル（２×２５ｍＬ）で洗浄した。その固体を、減圧下、４０℃で６０時間乾燥させて、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩をオフホワイト色の固体（４．１４ｇ、収率９１％）として得た。アリコート（６ｍｇ）をアルミニウム製ピンホールパン（ｐｉｎｈｏｌｅｄａｌｕｍｉｎｉｕｍｐａｎ）の中に入れて密閉した。そのパンを、１分間当たり２０℃で３０℃から２５６℃までの熱サイクルを用いて加熱し、次いで、冷却して３０℃まで戻した（１分間当たり５０℃）。そのサイクルの間、サンプルへの６０ｍＬ／分の窒素流量を維持した。ＤＳＣパンから白色の固体（６ｍｇ）を単離して、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩（形態２）を得た。

Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩（形態２）のＸＲＰＤディフラクトグラムは、図５に示されている。

形態２に関するＤＳＣデータは、図６に示されている。

生物学的活性
本発明の結晶質形態の、血漿カリクレインを阻害する能力は、以下の生物学的アッセイを用いて測定することができる。

血漿カリクレインに対するＫｉの測定
インビトロにおける血漿カリクレイン阻害活性を、標準的な公表されている方法（例えば、以下のものを参照されたい：「Ｊｏｈａｎｓｅｎｅｔａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．１９８６，８，１８５」、「Ｓｈｏｒｉｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９２，４３，１２０９」、「Ｓｔｕｒｚｅｂｅｃｈｅｒｅｔａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ，１９９２，３７３，１０２５」）を用いて測定した。ヒト血漿カリクレイン（Ｐｒｏｔｏｇｅｎ）を、３７℃で、蛍光発生基質「Ｈ−ＤＰｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＦＣ」及び種々の濃度の被験化合物と一緒にインキュベートした。４１０ｎｍにおける吸光度（ｏｐｔｉｃａｌａｂｓｏｒｂａｎｃｅ）の変化を測定することにより残留酵素活性（初期反応速度）を決定し、被験化合物に関するＫｉ値を求めた。

このアッセイにおいて試験した場合、形態１は、０．０１０μＭのＫｉ（ヒトＰｋａｌ）を示した。

該結晶質形態は、以下の生物学的アッセイを用いて、関連する酵素ＫＬＫ１に対する阻害活性に関してスクリーニングすることもできる。

ＫＬＫ１に対するＩＣ _５０の測定
インビトロでにおけるＫＬＫ１阻害活性を、標準的な公表されている方法（例えば、以下のものを参照されたい：「Ｊｏｈａｎｓｅｎｅｔａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓ．Ｒｅａｃ．１９８６，８，１８５」、「Ｓｈｏｒｉｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９２，４３，１２０９」、「Ｓｔｕｒｚｅｂｅｃｈｅｒｅｔａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ，１９９２，３７３，１０２５）を用いて測定した。ヒトＫＬＫ１（Ｃａｌｌｂｉｏｃｈｅｍ）を、３７℃で、蛍光発生基質「Ｈ−ＤＶａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−ＡＦＣ」及び種々の濃度の被験化合物と一緒にインキュベートした。４１０ｎｍにおける吸光度（ｏｐｔｉｃａｌａｂｓｏｒｂａｎｃｅ）の変化を測定することにより残留酵素活性（初期反応速度）を決定し、被験化合物に関するＩＣ_５０値を求めた。

このアッセイにおいて試験した場合、形態１は、＞１０μＭのＩＣ_５０（ヒトＫＬＫ１）を示した。

該結晶質形態は、以下の生物学的アッセイを用いて、関連する酵素プラスミン、トロンビン、トリプシン、第Ｘａ因子及び第ＸＩＩａ因子に対する阻害活性に関してスクリーニングすることもできる。

酵素選択性の決定
ヒトセリンプロテアーゼ酵素プラスミン、トロンビン、トリプシン、第Ｘａ因子及び第ＸＩＩａ因子を、適切な蛍光発生基質を用いて、酵素活性に関してアッセイした。プロテアーゼ活性は、基質から放出される蛍光の蓄積を５分間にわたってモニタリングすることにより測定した。１分間当たりの蛍光増大の線形速度を、活性パーセント（％）として表した。各基質の切断に対するＫｍを、ミカエリス・メンテン式の標準的な変換によって求めた。化合物の阻害薬アッセイは、基質のＫｍ濃度で実施し、阻害されていない酵素活性（１００％）の５０％阻害（ＩＣ_５０）をもたらす阻害薬の濃度として、活性を計算した。

Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩をこれらのアッセイにおいて試験した場合、以下のデータが得られた。

カルボニックアンヒドラーゼＩによって誘発させた網膜血管透過性モデル
Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の活性は、ラットにおけるこのインビボモデルを用いて確立させた。ラットに対して、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ＣＨ−３４５７（血漿カリクレイン阻害薬陽性対照）（１０μＭ）又はＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩（「被験化合物」）（１μＭ）の硝子体内注射（５μＬ）を、時間０において実施した。３０分間経過した後、ＰＢＳ又はＣＡ−Ｉ（２００ｎｇ／眼）の２回目の硝子体内注射（５μＬ）を行なった。１５分間経過した後、１０％フルオレセインナトリウムを注入し、そして、最初のＩＶＴ注射の７５分後に、硝子体の蛍光光度分析によって、網膜血管透過性（ＲＶＰ）を測定した。Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩（「被験化合物」）に関するデータは、図７に示されている。この図において、下側の点線は、ＰＢＳ／ＰＢＳ後の基底ＲＶＰを示しており、上側の点線は、最大刺激を示している。１μＭのＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩単独の硝子体内注射では、ＰＢＳ単独と比べて、基底ＲＶＰに対して効果はなかった（３．２９±０．２１対３．６４±０．４８）。Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の硝子体内注射は、ＲＶＰ（ＣＡ−Ｉ注射によって刺激された）を５３±２１％低減させた。

薬物動態学
Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の薬物動態学的研究を実施して、有色（ダッチベルテッド）ウサギにおける単回ＩＶＴ投与後の眼及び全身の薬物動態について評価した。１種類の用量レベル当たり６匹のウサギに対して、４．２μｇ／ｍＬのＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の製剤（リン酸緩衝生理食塩水中）の５０μＬ（眼１つ当たり２１０ｎｇ）の単回の両側ＩＶＴ注射を行なった。各時間点（ＩＶＴ投与の４時間後、８時間後、２４時間後、４８時間後、９６時間後、及び、１６８時間後）において、１匹のウサギを安楽死させ、硝子体、網膜／脈絡膜及び房水の中のＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の眼組織濃度を測定した。逐次、血液試料を生存ウサギにおいて採取した。

眼組織濃度データは、図８に示されている。この図において、各眼組織濃度に対する実線は、各ウサギの左眼と右眼の平均値である。Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩（「被験化合物」）の眼組織濃度における減少は、７日間にわたって最小であった。ＩＶＴ投与後のＮ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の血漿濃度は、すべての時間点において、１ｎｇ／ｍＬ未満であった。

Claims

Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩の形態１の結晶質多形体であって、少なくとも、５．１±０．２、１０．３±０．２、１０．７±０．２、１８．１±０．２及び１８．６±０．２において、特徴的なＸ線粉末回折ピーク（Ｃｕ−Ｋα線、角度２θで表される）を示す、形態１の結晶質多形体。
図１：

に示されるＸ線粉末回折パターンと実質的に同一のＸ線粉末回折パターンを有する、請求項１に記載の形態１の結晶質多形体。
３２７４±１、３０２７±１、２９７６±１、２９２８±１、１６５１±１、１６３６±１、１５３６±１、１５１２±１、１２４３±１及び７０３±１において、ｃｍ^−１で表されるピークを有するＩＲスペクトルを特徴とする、請求項１又は２に記載の形態１の結晶質多形体。
図２：

に示されるＩＲスペクトルと実質的に同一のＩＲスペクトルを有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の形態１の結晶質多形体。
水和物である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の結晶質多形体。
前記水和物が一水和物である、請求項５に記載の結晶質多形体。
医薬組成物であって、製薬上許容されるアジュバント、希釈剤又は担体と一緒に、請求項１〜６のいずれか１項に記載の結晶質多形体又はその溶媒和物を含む、前記医薬組成物。
治療において使用するための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の結晶質多形体又はその溶媒和物。
血漿カリクレインが介在する疾患又は状態の処置において使用するための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の結晶質多形体又はその溶媒和物。
血漿カリクレインが介在する前記疾患又は症状が、視力障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、糖尿病、膵臓炎、脳出血、腎症、心筋症、神経障害、炎症性腸疾患、関節炎、炎症、敗血症性ショック、低血圧、癌、成人呼吸窮迫症候群、播種性血管内凝固症候群、心肺バイパス手術及び手術後の出血から選択される、請求項９に記載の結晶質多形体。
血漿カリクレインが介在する前記疾患又は症状が、糖尿病性網膜症又は糖尿病性黄斑浮腫である、請求項９に記載の結晶質多形体。
血漿カリクレインが介在する前記疾患又は症状が、糖尿病性網膜症及び糖尿病性黄斑浮腫に関連した網膜血管透過性であり、並びに、結晶質多形体が、患者の眼部位に注射するのに適した形態で、特に、硝子体内注射に適した形態で投与される、請求項９に記載の結晶質多形体。
請求項１〜４のいずれか１項に記載の形態１の結晶質多形体の製造方法であって、Ｎ−［（Ｒ）−１−［（Ｓ）−１−（４−アミノメチル−ベンジルカルバモイル）−２−フェニル−エチルカルバモイル］−２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ベンズアミド塩酸塩と溶媒若しくは溶媒混合物との混合物から形態１の結晶質多形体を結晶化させることを含む、方法であって、溶媒混合物が、アセトニトリルと水又はアセトニトリルとジメチルスルホキシドであり、及び前記混合物が、７５〜８０℃の温度に加熱された後に室温まで冷却される、方法。