WO2013029431A1

WO2013029431A1 - 苯并二氮杂卓衍生物的托西酸盐及其多晶型、它们的制备方法和用途

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Publication number: WO2013029431A1
Application number: PCT/CN2012/078487
Authority: WO
Inventors: 孙飘扬; 武乖利; 高晓晖; 张全良; 陈永江
Original assignee: 江苏恒瑞医药股份有限公司
Priority date: 2011-08-31
Filing date: 2012-07-11
Publication date: 2013-03-07
Also published as: TWI607009B; TW201309704A; CN103221414A; CN102964349A; CN103221414B

Abstract

本发明涉及苯并二氮杂卓衍生物的托西酸盐及其多晶型、它们的制备方法和用途，特别是3-[(4s)-8-溴-1-甲基-6-(2-吡啶基)-4H-咪唑[1,2-a][1,4]苯并二氮杂卓-4-基]丙酸甲酯（I）的托西酸盐多晶型及其制备方法和用途。本发明所得到的式（I）化合物托西酸盐的结晶，溶剂残留低，稳定性良好，可更好地用于临床治疗。

Description

苯并二氮杂草衍生物的托西酸盐及其多晶型、它们的制备方法和用途技术领域

本发明涉及 3-[(4s)-8-溴 -1-甲基 -6-(2-吡啶基 )-4H-咪唑 [l，2-a][l，4]苯并二氮杂萆

-4-基]丙酸甲酯的托西酸盐多晶型及其制备方法和用途。背景技术

式（I)化合物的化学名为 3-[(4s)-8-溴 -1-甲基 -6-(2-吡啶基 )-4H-咪唑 [l，2-a][l，4] 苯并二氮杂萆 -4-基]丙酸甲酯，

由于含有羧酸酯及苯并二氮萆的结构，专利 EP1, 183,243中报道该类化合物是短效中枢神经系统（CNS， Central Nervous System)抑制剂，具有包括镇静催眠、抗焦虑、肌肉松弛和抗惊厥作用。它们可用于以下临床治疗方案中的静脉给药：如手术期间中的手术前镇静、抗焦虑和遗忘用途；在短期诊断、手术或内窥镜程序期间的清醒性镇静；在施用其它麻醉剂和止痛剂之前和 /或同时，作为用于全身麻醉的诱导和维持的组分； ICU镇静等，据专利申请 CN101, 501,019中报道，该化合物的游离碱不是很稳定，只适于低温 5 °C保存，在 40°C/75%相对湿度（开放）的条件下，储存的样品潮解，颜色变成黄色到橙色，并且相对于初始含量显示含量显著的降低。因此人们合成式（I) 化合物的盐，希望能增加其化学稳定性，以便用于药物的制备。

已有专利申请 CN101, 501,019和 US20, 100,075,955分别报道了式（I) 化合物的苯磺酸盐、乙磺酸盐，但是所成盐的化学及光学纯度不是很理想，且重结晶过程并未能显著的提高其化学及光学纯度，由于化合物的化学及光学纯度的好坏，直接影响到化合物能否作为药物使用及药物的稳定性情况，因此开发较高化学及光学纯度的式（I) 化合物的盐就显得十分有必要。令人惊喜的是，经过研究，我们发现式（I) 化合物的托西酸盐，虽然与苯磺酸盐及乙磺酸盐一样，其结晶存在着多晶型，但是其毒性明显低于苯磺酸盐，同时式（I) 化合物的托西酸盐还有更多令人满意的优点，比如其水中重结晶的式（I) 化合物的托西酸盐的 I晶型，具有很好的化学及光学纯度、热稳定性和水溶性，研究结果表明 I型结晶的稳定性显著好于成盐所得的其它晶型。发明内容

本发明提供了式（I)化合物的托西酸盐（即式（I)化合物的对甲苯磺酸盐）。优选地，式（I)化合物与托西酸的化学配比为 1 : 1。优选地，所述的托西酸盐为结晶盐。

本发明的目的是提供一种稳定的式（I)化合物托西酸盐及其多晶型以及制备这些晶型的方法。

本发明的式（I) 化合物的托西酸盐是容易获得的，只需将式（I) 化合物和托西酸分别溶于溶剂中，使二者进行反应，即可得到式（I)化合物的托西酸盐。当二者在乙酸乙酯 /醇类体系中反应时，如将式（I) 化合物溶于乙酸乙酯，将托西酸溶于甲醇，之后使二者反应，无需重结晶操作，析晶即可容易地直接得到了 IV型结晶，而且产物的化学纯度和光学纯度都很高。前述醇类可不限于甲醇，还可使用其它醇，如乙醇、丙醇、异丙醇。

我们考察了式（I) 化合物的托西酸盐在不同结晶条件下得到的一系列结晶产物，对所得结晶产物进行了 X-射线粉末衍射及 DSC检测，发现式（I) 化合物的托西酸盐在常规的结晶条件下，存在多晶型，在成盐体系（乙酸乙酯 /醇类）或者在此条件下重结晶，均得到的是一种晶型，我们称之为 IV 晶型，本申请中的 IV 型结晶的 DSC图谱显示在 196 °0和 205 V附近有特征吸收峰， X-射线粉末衍射图谱如图 7所示，使用 Cu-Ka辐射，以 2Θ角度和晶面间距（d值）表示的 X-射线粉末衍射图谱，其中在约 6.29 ( 14.05 )， 6.97 ( 12.67), 11.66 ( 7.59)， 12.03 ( 7.35 ) , 17.75 (4.99)， 18.90 (4.69)， 19.71 (4.50)， 21.39 (4.15 )， 24.22 ( 3.67) 和 24.97 ( 3.56) 有特征峰。

该 IV晶型的化合物，在水或者含水的有机溶剂中重结晶，可以得到一种稳定性良好的晶型，我们称其为 I型结晶。本申请中 I型结晶的 DSC图谱显示在峰值约 76°C附近处有钝峰存在，该钝峰从 32°C便开始逐渐脱水，是不稳定的吸附水，经干燥处理后该钝峰即可消失； I 型结晶的 DSC在约 152°C、 195 °C和 204 °C有特征吸收峰， X-射线粉末衍射图谱如图 1所示，使用 Cu-Ka辐射，以 2Θ角度和晶面间距（d值）表示的 X-射线粉末衍射图谱，其中在约 6.05 ( 14.61 ), 7.18 ( 12.30)， 8.02 ( 11.02), 12.25 (7.22), 14.00 (6.32), 14.50 (6.10)， 15.71 (5.64), 16.68 (5.31 ), 17.62 (5.03 )， 18.60 (4.77), 19.69 (4.50)， 21.25 (4.18)， 24.23 (3.67), 25.22 (3.53 ) 和 27.22 (3.27) 有特征峰。

同时也发现 IV晶型的化合物，在甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮等单一有机溶剂中重结晶，均可生成 II晶型，研究发现在上述体系中重结晶，虽然可以很好的提高化学纯度，但是并不提高其光学纯度，本申请中 Π型结晶的 DSC图谱显示在约 196°C和 205°C有特征吸收峰， X-射线粉末衍射图谱如图 3所示，使用 Cu-Ka辐射，以 2Θ角度和晶面间距（d值）表示的 X-射线粉末衍射图谱，其中在约 6.93 (12.75)， 10.46 (8.45)， 12.19 (7.25), 13.89 (6.37), 14.33 (6.18)， 15.21 (5.82)， 15.68 (5.65)， 17.47 (5.07)， 18.36 (4.83)， 19.06 (4.65)， 20.95 (4.24)， 21.94 (4.05)， 23.41 (3.80)、 24.51 (3.63) 禾卩 24.96 (3.57) 有特征峰。

IV晶型的化合物在乙腈中重结晶，则得到 III晶型。本申请中的 III型结晶的 DSC图谱显示在约 195°C和 206°C附近有特征吸收峰， X-射线粉末衍射图谱如图 5 所示，使用 Cu-Ka辐射，以 2Θ角度和晶面间距（d值）表示的 X-射线粉末衍射图谱，其中在 5.76 (15.34), 7.13 (12.39), 11.55 (7.66)， 12.65 (6.99)， 14.52 (6.10)， 17.69 (5.01)， 18.32 (4.84)， 18.98 (4.67)， 19.64 (4.52)， 20.63 (4.30), 22.78 (3.90) 和 28.93 (3.08) 有特征峰。

本发明制备 I、 II、 III、 IV型结晶的方法中，可作为原料使用的式（I)化合物托西酸盐的晶型种类没有特别限定，可以使用任意晶型的结晶或无定型固体，本发明的式（I) 化合物托西酸盐 I、 II、 III、 IV型结晶的制备方法为：

使用某些低级有机溶剂（优选含碳原子数小、同时能够挥发的醇类，酮类、酯类等极性有机溶剂）、水或它们的混合溶液作为结晶的溶剂；优选含碳原子数小于 6的上述溶剂；使用水或者含水的有机溶剂，可稳定的得到 I晶型，其中所述的有机溶剂是指能与水混溶的有机溶剂，可见只要体系中含有水的存在，均能得到 I 晶型；用甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮等有机溶剂做为结晶溶剂，可稳定的得到 Π 晶型；用乙腈做结晶溶剂，可稳定的得到 III晶型；在乙酸乙酯、醇类体系中成盐或者结晶，均可稳定的得到 IV晶型。

具体的，本发明提供的制备式（I)化合物托西酸盐结晶的方法包括以下步骤:

1) 将任意晶型或无定型的式（I) 化合物的托西酸盐，或将式（I) 化合物与托西酸加热溶解于析晶溶剂中，冷却、析晶，其中所述的析晶溶剂为低级有机溶剂、水或者两者的混合溶剂，所述的低级有机溶剂为碳原子数小于 6 的醇类、酮类、脂类溶剂，优选为甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、乙腈、乙酸乙酯或者它们的混合溶剂；

2) 过滤结晶并洗涤、干燥。

进一步地，制备 I晶型，所述的析晶溶剂为水或有机溶剂的水溶液；优选为水。制备 Π晶型，所述的析晶溶剂为醇类及酮类，优选为甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮中的一种或几种。

制备 III晶型，所述的析晶溶剂为乙腈。

制备 IV晶型，所述的析晶溶剂为乙酸乙酯与醇类混合溶剂，其中所述的醇没有特别限制，可以是甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇，优选甲醇。对于乙酸乙酯与醇类二者混合的比例也没有特别限制，发明人采用了各种比例的混合溶剂进行试验，都能够很好地得到 IV晶型。重结晶的方法没有特别限定，可以用通常的重结晶操作方法进行。例如，可以用原料式（I) 化合物托西酸盐在有机溶剂、水、或者两者的混合溶剂中，加热溶解后慢慢冷却静置析晶，也可采取搅拌析晶，结晶完成后，经过滤干燥，即可得到所需要的结晶。需特别说明的是，式（I) 化合物托西酸盐的 I型结晶，在水中重结晶时，其化学纯度和手性纯度都有显著的提高，所成晶型的稳定性好，将 π、 m及 IV晶型的式（I)化合物托西酸盐在水中搅拌，可以转换为稳定的 I型结晶。 I晶型的影响因素实验结果表明，该晶型稳定性好，溶剂残留低，可以很好的用作药物活性成分使用。

研究发现，式（I) 化合物托西酸盐的 I晶型，其水分可以经过干燥去除，或者控制在 1%以下，在水分控制较低情况下， DSC的检测便不再显示脱水钝吸收峰的存在，但是其 X-RAY的特征吸收一致，结果表明晶型未变。

通过差示扫描热分析（DSC)、 X—射线粉末衍射图谱测定，对得到的式（I) 化合物托西酸盐结晶体进行了晶型研究，同时对所得结晶的溶剂残留进行了检测，并测试了托西酸盐在水和生理盐水中的溶解度，分别约为 10mg/ml和 llmg/ml，与苯磺酸盐相似。

按照本发明的方法制备的式（I) 化合物的托西酸盐结晶不含有或仅含有较低含量的残留溶剂，符合国家药典规定的有关医药产品残留溶剂的限量要求，因而本发明的 I、 II、 III、 IV型结晶可以较好地作为医药活性成分使用。附图说明

图 1 式（I)化合物的托西酸盐 I型结晶（20110607)的 X-射线粉末衍射图谱。图 2 式（I) 化合物的托西酸盐 I型结晶（20110607) 的 DSC谱图。

图 3 式（I) 化合物的托西酸盐 II型结晶（20110519) 的 X-射线粉末衍射图谱。

图 4 式（I) 化合物的托西酸盐 II型结晶（20110519) 的 DSC谱图。

图 5 式（I) 化合物的托西酸盐 III型结晶（20110523-1 ) 的 X-射线粉末衍射图谱。

图 6 式（I) 化合物的托西酸盐 III型结晶（20110523-1 ) 的 DSC谱图。

图 7 式（I) 化合物的托西酸盐 IV型结晶（20110530) 的 X-射线粉末衍射图谱。

图 8 式（I) 化合物的托西酸盐 IV型结晶（20110530) 的 DSC谱图。具体实施方式

以下将结合实施例更详细地解释本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的实质和范围。实验所用的测试仪器

1、 DSC谱

仪器型号： Mettler Toledo DSC 1 Stare⁶ System

吹扫气：氮气

升温速率： 10.0 °C/min

温度范围： 40-250°C

2、 X-射线衍射谱

仪器型号： D/Max-Bruker D8 Focus X-射线粉末衍射仪

射线：单色 Cu-Κα射线（λ=1.5406 Α)

扫描方式： Θ/2Θ, 扫描范围： 2— 40^ο

电压： 40KV 电流： 40mA 实施例 1 : 盐的合成：

取式（I) 化合物碱（依专利118200，700，934，75 制备） lg溶于 6ml乙酸乙酯中，然后将 0.39g托西酸（等摩尔比）溶于 1ml甲醇中，并滴加到式（I) 化合物碱的乙酸乙酯溶液中，搅拌析晶，抽滤，减压干燥得式（I) 化合物的托西酸盐，白色固体 0.94g，收率为 75.0%。 HPLC: 99.18%, 光学纯度： 99.87%。实施例 2

将实施例 1中得到式（I)化合物的托西酸盐 1.0g，加入 50ml的圆底烧瓶中，加入 20ml水中，加热回流 10min，使固体完全溶解，停止加热，趁热过滤，冷却析晶，所得产物在 45°C减压干燥过夜，得到白色固体 0.64g，收率 64%。该结晶样品的 X-射线衍射谱图见图 1。该结晶在约 6.05 ( 14.61 )， 7.18 ( 12.30), 8.02 ( 11.02), 12.25 ( 7.22), 14.00 ( 6.32), 14.50 ( 6.10 )， 15.71 ( 5.64)， 16.68 ( 5.31 )， 17.62 (5.03 )， 18.60 (4.77), 19.69 (4.50)， 21.25 (4.18)， 24.23 (3.67), 25.22 (3.53 ) 和 27.22 (3.27)有特征峰， DSC谱图见图 2，在约 152.02 °C 195.05 °C和 204.49 °C 有特征吸收峰，定义该晶型为 I 晶型。实施例 3

将实施例 1中得到式（I)化合物的托西酸盐 1.0g，加入 10ml的圆底烧瓶中，加入 50%的异丙醇水溶液 5.0ml中，加热回流使固体完全溶解，停止加热，冷却析晶，所得产物在 45°C减压干燥过夜，得到白色固体 0.72g，收率 72%。该结晶样品的 X-射线衍射和 DSC谱图经研究比对，确定产物为 I晶型。实施例 4

将实施例 1中得到式（I)化合物的托西酸盐 1.0g，加入 50ml的圆底烧瓶中，加入 30ml异丙醇中，加热回流 lOmin, 使固体完全溶解，停止加热，静置析晶，过滤，所得到的结晶在 45°C减压干燥过夜，得到白色固体 0.67g，收率 67%。该结晶样品的 X-射线衍射谱图见图 3。该结晶在约 6.93 (12.75)， 10.46 (8.45)， 12.19 (7.25), 13.89 (6.37), 14.33 (6.18)， 15.21 (5.82)， 15.68 (5.65)， 17.47 (5.07)， 18.36 (4.83)， 19.06 (4.65)， 20.95 (4.24)， 21.94 (4.05)， 23.41 (3.80)、 24.51 (3.63)禾 B 24.96 (3.57)有特征峰。 DSC谱图见图 4，在 195.71°C和 205.44°C有特征吸收峰，定义该晶型为 Π晶型。实施例 5

将实施例 1中得到式（I)化合物的托西酸盐 0.5g，加至 50ml的圆底烧瓶中，加入 15ml的丙酮，加热回流 lOmin, 使固体完全溶解，停止加热，搅拌析晶，过滤，所得到的结晶在 45°C减压干燥过夜，得到白色固体 0.81g，收率 81%。该结晶样品的 X-射线衍射和 DSC谱图经研究比对，确定产物为 II晶型。实施例 6

将实施例 1中得到式（I)化合物的托西酸盐 1.0g，加入 25ml的圆底烧瓶中，加入 5.0ml乙腈中，加热回流 lOmin, 使固体完全溶解，停止加热，静置析晶，过滤，所得到的结晶在 45°C减压干燥过夜，得到白色固体 0.63g，收率 63%。该结晶样品的 X-射线衍射谱图见图 5。该结晶在约 5.76(15.34)， 7.13(12.39)， 11.55(7.66)， 12.65 (6.99)， 14.52 (6.10)， 17.69 (5.01)， 18.32 (4.84)， 18.98 (4.67)， 19.64 (4.52)， 20.63 (4.30), 22.78 (3.90) 和 28.93 (3.08) 有特征峰。 DSC谱图见图 6，在 195.51°C和 205.96°C有特征吸收峰，定义该晶型为 III晶型。实施例 7

测试实施例 1所得到式（I) 化合物的托西酸盐样品的 X-射线衍射谱及 DSC 谱， X-射线衍射谱图见图 7。该白色固体在约 6.29 (14.05)， 6.97 (12.67), 11.66 (7.59)， 12.03 (7.35), 17.75 (4.99)， 18.90 (4.69)， 19.71 (4.50)， 21.39 (4.15)， 24.22 (3.67) 和 24.97 (3.56) 有特征峰。 DSC谱图见图 8，在 195.98°C和 205.49

°〇有特征吸收峰，定义该晶型为 IV晶型。实施例 8

将实施例 1中得到式（I)化合物的托西酸盐 1.0g，加入 25ml的圆底烧瓶中，加入 5.0ml乙酸乙酯与甲醇的混合溶液（体积比 =3:1)，加热回流使固体完全溶解，停止加热，静置析晶，过滤，所得到的结晶在 45°C减压干燥过夜，得到白色固体 0.35g, 收率 35%。该结晶样品的 X-射线衍射和 DSC谱图经研究比对，确定产物为 IV晶型。将实施例 1中得到式（I)化合物的托西酸盐 1.0g，加入 25ml的圆底烧瓶中，加入 20ml乙酸乙酯与甲醇的混合溶液（体积比 =6: 1 )，加热回流使固体完全溶解，停止加热，静置析晶，过滤，所得到的结晶在 45 °C减压干燥过夜，得到白色固体 0.21克，收率 21%。该结晶样品的 X-射线衍射和 DSC谱图经研究比对，确定产物为 IV晶型。实施例 10

取式（I) 化合物碱 lg (依专利118200，700，934，75 制备）溶于 6ml乙酸乙酯中，然后将 0.39g托西酸（等摩尔比）溶于 1ml乙醇中，并滴加到式（I) 化合物碱的乙酸乙酯溶液中，搅拌析晶，抽滤，减压干燥得白色固体 0.9g，收率为 72.0%。该结晶样品的 X-射线衍射和 DSC谱图经研究比对，确定产物为 IV晶型。实施例 11

将以上所得的 I型和 IV晶型样品（该样品未经提纯，合成粗品）分别敞口平摊放置，考察在低温、加热 (40°C、 60°C)、光照（4500Lux)，高湿 (RH75%、 RH90%) 条件下样品的稳定性。考察取样时间为 5天和 10天， HPLC检测纯度见表 1。

稳定性考察结果表明，式（I)化合物托西酸盐 I型和 IV型结晶样品在敞口放置的条件下，经低温、加热 (40°C、 60°C)、光照（4500Lux)，高湿 (RH75%、 RH90%) 等条件下的稳定性比较发现，光照对两者的影响很大，样品需避光保存，在低温、高温、高湿的条件下， I型结晶的稳定性显著好于 IV晶型的样品。

表 1、式（I) 化合物的托西酸盐 I和 IV晶型样品的稳定性比较批号条件图谱号纯度 4.9min 6.9min 14.4mi

20110506 起始 11061604 99.18 0.05 0.37 0.14

手性纯度： 99.87%

影响因素 5d

4°C 11062219 99.17 0.04 0.42 0.14

40 °C 11062220 99.15 0.04 0.43 0.14

IV晶型 60 °C 11062221 98.99 0.03 0.48 0.18

RH75% 11062222 99.00 0.03 0.56 0.15

RH90% 11062223 98.89 0.03 0.67 0.14

影响因素 10d

4°C 11062715 99.11 0.03 0.44 0.14

40 °C 11062716 99.08 0.03 0.48 0.14

IV晶型 60 °C 11062717 98.96 0.03 0.55 0.14

RH75% 11062718 98.84 0.03 0.66 0.15

RH90% 11062719 98.71 0.02 0.81 0.14

20110607-4 起始 11061605 99.32 0.01 0.52 0.07

手性纯度： 99.84% 影响因素 5d

4°C 11062709 99.32 0.01 0.41 0.08

40 °C 11062710 99.41 0.01 0.41 0.08

60 °C 11062711 99.33 0.01 0.49 0.09

I晶型

RH75% 11062714 99.38 0.01 0.44 0.08

RH90% 11062213 99.38 0.02 0.43 0.08

光照 11062214 98.33 0.76 0.46 0.08

影响因素 lOd

4°C 11062709 99.32 0.01 0.41 0.08

40 °C 11062710 99.41 0.01 0.41 0.08

I晶型 60 °C 11062711 99.33 0.01 0.49 0.09

RH75% 11062714 99.38 0.01 0.44 0.08

RH90% 11062713 99.40 0.01 0.43 0.08

光照 11062712 97.12 1.62 0.56 0.08 实施例 12: 式（I) 化合物的托西酸盐（下称 HR7056) 与式（I) 化合物的苯磺酸盐（下称 CNS 7056) 对小鼠自发活动影响的比较实验：

单次尾静脉注射 HR7056、 CNS 7056 (2.5、 5和 7.5 mg/kg， i.v.，）以及正常对照组小鼠自发活动详细数据见表 2。

表 2、 HR7056和 CNS7056对 ICR小鼠自发活动的影响组别 n lOmin路程 (m) 20min路程 Cm) 30min路程 (m) 正常对照组 10 66.84±10.85 117.89±15.13 160.61±25.11

HR7056 7.5mg/kg 组 10 44.50±19.28 ** 88.86±29.55 * 124.72±33.60 *

HR7056 5.0mg/kg 组 10 50.57±17.43 * 93.15±26.19 * 125.34±31.48 *

HR7056 2.5mg/kg 组 10 57.41±19.20 103.76±20.24 140.24±22.38

CNS7056 7.5mg/kg 组 10 39.32±20.17 ** 83.15±32.59 113.48±34.82

CNS7056 5.0mg/kg 组 10 49.10±16.96 * 99.31±20.60 * 137.95±22.77 *

CNS7056 2.5mg/kg 组 10 64.69±21.84 114.33±33.69 153.91±46.70 数据表示为 Mean±S.D.*P<0.05 ， **P<0.01，与正常对照组比较。实施例 13 : HR7056和 CNS7056对 ICR小鼠翻正反射消失的影响实验：

单次尾静脉注射 HR7056、 CNS 7056 ( 15、 30和 60 mg/kg， i.v.，）以及正常对照组小鼠翻正反射的影响实验详细数据见表 3。

表 3、 HR7056和 CNS7056对 ICR小鼠翻正反射消失的影响组别 n 潜伏期 (min) 持续期（min) 正常对照组 15 0.00±0.00 0.00±0.00

HR7056 60mg/kg 组 15 0.16±0.05 10.75±4.84

HR7056 30mg/kg 组 15 0.26±0.23 2.36±2.82

HR7056 15mg/kg 组 14 0.00±0.00 0.00±0.00

CNS 7056 60mg/kg 组 15 0.19±0.12 8.94±5.27

CNS 7056 30mg/kg 组 15 0.32±0.37 1.89±1.94

CNS 7056 15mg/kg 组 15 0.00±0.00 0.00±0.00 数据表示为 Mean±S.D.*P<0.05 ， **P<0.01，与正常对照组比较。实施例 14

HR7056 I晶型样品长期（25 °C )、加速（40°C， RH75%) 条件下样品的稳定性考察，结果见表 4。

表 4、 HR7056 I晶型样品长期加速样品的稳定性考察

上表数据显示，与 CN101501019A中实施例 4表 10中的稳定性数据相比，本发明具有明显优势。实施例 15 : 大鼠急性毒性试验研究

目的：本试验对 HR7056进行 SD大鼠单次静脉注射给药急性毒性试验，观察该药物可能引起毒性反应的性质、程度、量效和时效关系、可逆性及对神经系统的影响情况，并与同类药物 CNS7056进行比较，为 HR7056毒性评价提供参考信息。

方法：本试验设 9个组，分别为 CNS7056低、中、次高、高剂量组（剂量分别为 37.5、 75、 150、 300 mg/kg), HR7056低、中、次高、高剂量组（剂量分别为 37.5、 75、 150、 300 mg/kg), 以及溶剂对照组（含有 0.375%甘氨酸和 0.0125% 依地酸钙钠的 0.9%氯化钠注射液， pH值 3.5±0.1 )。每组 10只大鼠，雌雄各半。各组均按 30mL/kg的体积单次静脉注射给予相应浓度的供试品及对照品。以给药当天为试验第 1天。

注射给药后记录各组大鼠翻正反射消失和恢复的时间及行为活动恢复正常的时间，并连续 14天每天观察大鼠一般状况；试验第 1天给药前、给药结束后约 3 分钟、第 2、 7、 14天，观察记录各组大鼠行为状态、精神状态、肌肉紧张度和疼痛反射；试验第 1 (给药前）、 4、 8、 12、 15天测定体重；试验第 2、 5、 9、 12天测定摄食量；试验第 15天，对各组存活大鼠麻醉后采血进行血液学、血生化检查，并施以安乐死后进行大体解剖观察，对大体观察异常的脏器或组织进行组织病理学检查。

实验结果

死亡动物：

CNS 7056 300mg/kg组有 3只大鼠（3/10比例， 2雌 1雄）给药后明显呼吸急促，随后转变为呼吸微弱并死亡。 HR7056各组未见大鼠死亡。

一般状况：

HR7056 37.5 mg/kg组部分大鼠给药后活动减退、行走步态不稳直至翻正反射消失，四肢和腹壁肌肉松弛，但疼痛反射正常。该组其余大鼠可见活动减退，俯臣卜，但翻正反射未消失，肌肉紧张度及疼痛反射均正常。 HR7056 75、 150、 300 mg/kg 组大鼠给药后即可见翻正反射消失，四肢和腹壁肌肉松弛，苏醒后有短时的活动减退、行走步态不稳，个别大鼠可见呼吸急促， 300 mg/kg大鼠尚可见疼痛反射减弱。多数大鼠可见舔、咀嚼等无意识动作。 HR7056各组大鼠翻正反射消失时间约 3〜13分钟，给药后出现的症状持续时间约 6〜21分钟，翻正反射消失时间及症状持续时间均具有剂量相关性，随剂量增加而延长。 CNS7056各组与相同剂量 HR7056 组大鼠的一般状况及神经行为症状基本一致。

给药当天上述症状恢复后直至 14天观察结束，各组大鼠未再见异常症状及反应出现。

体重和摄食量：

给药后 14天观察期间， HR7056和 CNS7056各组雌、雄性大鼠体重正常增长，各时间点体重与对照组相比均未见差异，摄食量亦未见明显异常改变。

血液学和血生化：

给药后 14天观察结束时， HR7056及 CNS7056各组大鼠血液学指标白细胞计数（WBC)及分类、红细胞计数（RBC)、血红蛋白（HGB)、红细胞容积（HCT)、网织红细胞（RET)、血小板计数（PLT) 以及凝血时间（PT和 APTT) 等，均未见药物相关的异常改变。

给药后 14天观察结束时， HR7056及 CNS7056各组大鼠血生化指标碱性磷酸酶（ALP)、丙氨酸氨基转移酶（ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶（AST)、总蛋白 (TP), 白蛋白（ALB)、血糖（GLU)、总胆红素（TBIL)、直接胆红素（DBIL)、总胆固醇（CHOL)、甘油三酯（TG)、肌酸磷酸激酶（CK)、尿素（Urea)、肌酐 (Crea)、胰淀粉酶（AMY-P)、脂肪酶（LIP) 以及电解质（K+、 Na -、 C1-) 水平等，均未见药物相关的异常改变。

大体解剖观察：

给药后 14天观察结束时， HR7056和 CNS7056各组大鼠实施大体剖解，心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、胃肠道、生殖系统等脏器的颜色、形态、质地及大小等，均未见与药物相关的异常改变。

实验结论：

本试验条件下， SD大鼠单次静脉注射给予 37.5、75、150、300mg/kg的 HR7056。给药后各剂量可致大鼠出现剂量相关的活动减退、步态不稳、翻正反射消失、肌肉松弛等症状，与 HR7056的药理学作用相关。给药后 14天观察期内，未见大鼠死亡及其它毒性反应出现，体重、摄食量、血液学及血生化等各项指标均未见异常改变。

SD大鼠单次静脉注射 HR7056, 最大耐受剂量大于或等于 300 mg/kg; SD大鼠单次静脉注射 CNS7056, 最大耐受剂量为 150 mg/kg。

Claims

权利要求书：

1、式（I) 化合物的托 :

(I)

2、根据权利要求 1所述的式（I) 化合物的托西酸盐，其中式（I) 化合物与托西酸的化学配比为 1:1。

3、根据权利要求 2所述的式（I)化合物的托西酸盐，其中所述的盐为结晶盐。

4、根据权利要求 3所述的式（I)化合物的托西酸盐的 I型结晶，其特征在于使用 Cu-Ka辐射，得到以 2Θ角度和晶面间距表示的 X-射线粉末衍射图谱，所述结晶具有如图 1所示的 X-射线粉末衍射图谱，其中在约 6.05 (14.61), 7.18 (12.30)， 8.02 (11.02)， 12.25 (7.22), 14.00 (6.32), 14.50 (6.10)， 15.71 (5.64)， 16.68 (5.31)， 17.62 (5.03)， 18.60 (4.77), 19.69 (4.50)， 21.25 (4.18)， 24.23 (3.67), 25.22 (3.53) 禾 B 27.22 (3.27) 有特征峰。

5、根据权利要求 3所述的式（I) 化合物的托西酸盐的 II型结晶，其特征在于使用 Cu-Ka辐射，得到以 2Θ角度和晶面间距表示的 X-射线粉末衍射图谱，所述结晶具有如图 3所示的 X-射线粉末衍射图谱，其中在约 6.93(12.75)， 10.46(8.45)， 12.19 (7.25), 13.89 (6.37), 14.33 (6.18)， 15.21 (5.82)， 15.68 (5.65)， 17.47 (5.07)， 18.36 (4.83)， 19.06 (4.65)， 20.95 (4.24)， 21.94 (4.05)， 23.41 (3.80)、 24.51 (3.63) 和 24.96 (3.57) 有特征峰。

6、根据权利要求 3所述的式（I) 化合物的托西酸盐的 III型结晶，其特征在于使用 Cu-Ka辐射，得到以 2Θ角度和晶面间距表示的 X-射线粉末衍射图谱，所述结晶具有如图 5所示的 X-射线粉末衍射图谱，其中在约 5.76( 15.34)， 7.13 ( 12.39)， 11.55 (7.66)， 12.65 (6.99)， 14.52 (6.10)， 17.69 (5.01)， 18.32 (4.84)， 18.98 (4.67)， 19.64 (4.52)， 20.63 (4.30), 22.78 (3.90) 和 28.93 (3.08) 有特征峰。

7、根据权利要求 3所述的式（I) 化合物的托西酸盐的 IV型结晶，其特征在于使用 Cu-Ka辐射，得到以 2Θ角度和晶面间距表示的 X-射线粉末衍射图谱，所述结晶具有如图 7所示的 X-射线粉末衍射图谱，其中在约 6.29 ( 14.05 )， 6.97 ( 12.67), 11.66 ( 7.59 )， 12.03 ( 7.35 ), 17.75 (4.99)， 18.90 (4.69)， 19.71 (4.50)， 21.39 (4.15 )， 24.22 (3.67) 和 24.97 (3.56)，有特征峰。

8、一种制备根据权利要求 3所述结晶盐的方法，其包括下述步骤：

1 ) 将任意晶型或无定型的式（I) 化合物的托西酸盐，或将式（I) 化合物与托西酸加热溶解于析晶溶剂中，冷却、析晶，其中所述的析晶溶剂为低级有机溶剂、水或者两者的混合溶剂，所述的低级有机溶剂为碳原子数小于 6 的醇类、酮类、脂类溶剂，优选为甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、乙腈、乙酸乙酯或者它们的混合溶剂；

2) 过滤结晶并洗涤、干燥。

9、一种制备如权利要求 4所述的 I型结晶的方法，其包括权利要求 8所述的步骤，其中所述的析晶溶剂为水或有机溶剂的水溶液；优选为水。

10、一种制备根据权利要求 5所述的 II型结晶的方法，其包括权利要求 8所述的步骤，其中所述的析晶溶剂为醇类及酮类，优选为甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮中的一种或几种。

11、一种制备根据权利要求 6所述的 III型结晶的方法，其包括权利要求 8所述的步骤，其中所述的析晶溶剂为乙腈。

12、一种制备根据权利要求 7所述的 IV型结晶的方法，其包括权利要求 8所述的步骤，其中所述的析晶溶剂为乙酸乙酯和醇类的混合溶剂，其中所述的醇类优选为甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。

13、一种制备权利要求 1至 3任意一项所述的式（I) 化合物的托西酸盐的方法，其包括使式（I) 化合物与托西酸反应。

14、根据权利要求 13所述的方法，其中所述反应在溶剂中进行，所述溶剂为乙酸乙酯和醇类的混合溶剂，所述的醇类优选为甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。

15、一种药物组合物，其含有根据权利要求 1至 3任意一项所述的式（I) 化合物的托西酸盐、或根据权利要求 4至 7任意一项的式（I) 化合物的托西酸盐的结晶及药学上可接受的载体。

16、根据权利要求 1至 3任意一项所述的式（I) 化合物的托西酸盐、根据权利要求 4至 7任意一项所述的式（I) 化合物的托西酸盐的结晶、或根据权利要求 15所述的药物组合物在制备镇定、安眠、抗焦虑、肌肉松弛或抗惊厥药物中的用途。