WO2008096894A1

WO2008096894A1 - セルロース誘導体およびその製造方法

Info

Publication number: WO2008096894A1
Application number: PCT/JP2008/052382
Authority: WO
Inventors: Masaya Ito; Hiroaki Kaneko; Yukako Fukuhira; Nobuyuki Endo
Original assignee: Teijin Limited
Priority date: 2007-02-06
Filing date: 2008-02-06
Publication date: 2008-08-14
Also published as: JP5059787B2; EP2112170A1; JPWO2008096894A1; CN101605817B; US8455001B2; AU2008213323A1; US20100129452A1; KR20090109120A; AU2008213323B2; EP2112170A4; CA2676300A1; CN101605817A; CA2676300C

Abstract

　下記式で表される繰り返し単位からなるセルロース誘導体、該セルロース誘導体とリン脂質とを含んでなる組成物、それらの製造方法、ならびに該誘導体もしくは該組成物を含んでなる癒着防止材。　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は−Ｈ、−ＣＨ２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−ＣＯＯＸ、または−ＣＨ２ＣＯ−ホスファチジルエタノールアミンであり、Ｘはアルカリ金属またはアルカリ土類金属、−ＣＨ２−ＣＯＯＨと−ＣＨ２−ＣＯＯＸの置換度の合計が０．３～２．０であり、−ＣＨ２ＣＯ−ホスファチジルエタノールアミンの置換度が０．００１～０．０５である。

Description

セルロース誘導体およびその^ i方法技術分野

本発明は、特定構造のセルロース誘導体、特定構造のセルロース誘導体とリン脂質とを含んでなる組成物、およびそれらの Sjg方法、ならびに該誘導体もしくは言舰成物を含んでなる癒着防止材に関する。背景技術

生体の癒着は、損傷を受けた β表面が再生する際に他の ffi^と結合することにより発生する。そのため、手術後の癒着を防止するため生体適合性の材料であるセルロースなどの多糖類を使用した種々の癒着防止材が ϋ¾されている。

例えば、カルポキシメチルセルロースの水^ ¾を用いた癒着防止材カされている（Α m J S u r g. 、 1 6 9、 1 5 4— 1 5 9 ( 1 9 9 5) ) 。しかし、この癒着防止材は体内での滞留性が低く、癒着防止効果を十分に発揮させることができない。そのため、多糖類を種々の方法で修飾したり、 7K不溶化させたりする試みがなされてい^)。

例えば、ヒアルロン酸とカルボキシメチルセルロースとをカルポジイミドで修飾した癒着防止材が提案されている（国際公開 WO 9 2/ 0 0 0 1 0 5号パンフレツト、国際公開 WO 9 2Z 0 2 0 3 4 9号パンフレット）。また、セルロースの水素原子を特定の啬換基で置換したセルロース誘導体を主成分とする癒着防止材が提案されている（特開平 1一 3 0 1 6 2 4号公 ¾) 。さらに、ホスファチジルエタノールアミで修飾したヒアルロン酸化合物からなる癒着防止材カ是案されている（特開 2 0 0 6— 2 9 6 9 1 6号公 #) 。

また、米国特許第 5 0 6 4 8 1 7号明細書には、のカルボキシメチルセルロースとホスファチジルエタノ一ルァミンとを水溶媒で反応させてホスホリパーゼ A ₂阻害剤組成物を得る反応が記載されている。もっとも、鍵する比 5に示すとおり、この反応条件では目的とする化合物は生成していないこと力わかっている。

国際公開 WO 2 0 0 1 / 0 4 6 2 6 5号パンフレツ卜には水相溶性有機溶媒を含む水溶液中において、ポリァニオン性多糖類を活性剤と反応させることを含んでなる水不溶性の生物適^ ゲルが記載され、ポリア二オン性多糖類としてカルボキシメチルセルロースが挙げられている。

しカゝし、いずれの提案も癒着防止効果、取扱い性、安^ ftについてさらなる検討の余地がある。上記したように、リン脂質のセルロースへの導入は示唆されているものの、癒着防止効果があり、取扱いのしゃすいハイド口ゲルについては何ら検討されていない。

また、特開平 9— 2 9 6 0 0 5号公報には、疎水性基からなる修飾基を多糖類に導入すると、多糖類をゲル化させることなく粘度の増大および生体内安定性の向上を図ることができることが記載されている。しカゝし、本発明の癒着防止効果を得るのに有用なセルロース誘導体やそれを含んでなる繊物については、記載も示唆もされていない。発明の開示

本発明の目的は、医用材料として有用なセルロース誘もしくはそれを含んでなる組成物を提供することにある。特に、ハイド口ゲルにした場合、適度な弾性率および粘弾性を有し、癒着防止材として有用なセルロース誘もしくはそれを含んでなる組成物を提供すること、特に体内での滞留性に優れたゲル状の癒着防止材を提供することにある。さらに、本発明の目的は、該セルロース誘導体もしくはそれを含んでなる組成物の製造方法を提供することにある。本発明者らは、安全性に優れた材料でセルロースを修飾し、粘弾性を増大させ，生体内での滞留性を向上させ、 «な粘弾性を有し、癒着防止効果を向上させる糸诚について意研究した。その結果、本発明者らは、カルポシキメチルセルロースの水素原子を生体由質であるホスファチジルエタノールァミンで側鎖を置換すると、適度な粘弾性を有し、癒着防止材として有用で、なおかつ注射器を通して注入可能なハイド口ゲルを形成しうる新しレ feルロース誘 ¾#：が得られることを見出した。本発明者らはさらに、該セルロース誘導体に特定量のリン脂質を共存させることによつても適度な粘弾性を有し、癒着防止材として有用なセルロース誘物が得られることを見出した。すなわち、本発明は下記式で表される繰り返し単位からなるセルロース誘難である。

式中、 R R²、および R ³はそれぞれ独立に下記式（a) 、 (c) 、および (d) 力なる群より選ばれるものであり、

-H (a)

-CH₂-COOH (b)

一 CH₂— COOX (c)

(d)

式（c) 中、 Xはアルカリ金属またはアルカリ土類金属であり、

式（d) 中、 R⁴および R ⁵はそれぞれ独立に炭素数 9〜27のアルキル基またはアルケニル基であり、

(b) と（c) の置換度の合計が 0. 3〜2. 0であり、

(d) の置が 0· 001~0. 05である。

ここで、本明細書における置 «とは、（a) 、（b) 、（c) 、および（d) の当量の合計を 3とした場合の、それぞれの置換基の数をいう。また、本発明は上記したセルロース誘と、下記式で表されるリン脂質を含み、セル口 —ス誘の繰り返し単位のモル当量とリン脂質のモル当量との比が 1 : 0. 05〜： I ： 1 であるセルロース誘導体組成物である。

式中、 R⁶および R⁷はそれぞれ独立に炭素数 9 ~ 2 7のアルキル基またはアルケニル基であり、 R⁸は一 NH₃ +または一 N (CH₃) ₃+である。また、本発明は下記式で表される繰り返し単位からなり、量が 5 X 1 0 ³〜 5 X 1 0 6のカルボキシメチルセルロースと、

下記式で表されるホスファチジルエタノ一ルァミンとを、

カルポキシメチルセルロースのカルボキシル基 1 0 0当量に対し、ホスファチジルェタノ一ルァミン 0. 1〜； 1 0 0当量の割合にて、水および水と相溶する有機とからなり、水が 2 0〜7 0容量％含まれる混合謹に溶解し、縮合剤の被下で反応させる工程を含む、本発明のセルロース誘導体の製造方法である。

ここで、 R ¹. R²、および R ³はそれぞれ独立に、下記式（a) 、 (b) 、および（c ) 力、ら選ばれるものであり、 -H (a)

- CH₂ - COOH (b)

一 CH₂— COOX ( c )

式（c ) 中、 Xはアルカリ金属またはアルカリ土類金属であり、

式（b) と（c ) の置 »の合計が 0. 3〜2 :、 0であり、

R⁴および R ⁵はそれぞれ独立に、炭素数 9〜2 7のアルキル基またはアルケニル基である。また、本発明は上記した ®g方法により得られたセルロース誘と、下記式で表されるリン脂質とを、水および水と相^る有機を含む混合溶媒を用いて混合し、次いで溶媒を除く工程を含んでなる、上記したセルロース誘導体組成物の製造方法である。

式中、 R ⁶および R ⁷はそれぞれ独立に炭素数 9〜2 7のアルキル基またはアルケニル基であり、 R⁸は一 NH₃ ⁺または一 N (CH₃) ₃+である。さらに、本発明は上記したセルロース誘導体またはセルロース誘導体組成物を含有する癒着防止材である。さらに、本発明は水 1 0 0重量部に対し、上記したセルロース誘導体を 0. 1 ~ 1 . 5重量部含む、 ax可能なハイド口ゲルである。さらに、本発明は水 1 0 0重量部に対し、上記したセルロース誘導体組成物を 0. ：！〜 5. 0重量部含む、 &λ可能なハイド口ゲルである。本発明のセルロース誘導体は、適度な弾性率および粘弾性を有するハイドロゲルを形成し、無色透明で、低濃度でもゲルを形成するのに十分な粘弾性を有し、注射器などの細管を有する器具を用いて注入することが可能である。本発明の Sit方法によれば、力るセルロース誘 #:を効率的にすることができる。

本発明のセルロース誘導体組成物も、水に溶解させると適度な弾性率および粘弾性を有するハイドロゲルを形成し、医療用のインジェク夕ブルゲ ! ^癒着防止材として用いることができる。本発明のセルロース誘導体組成物は、生体由来物質のホスファチジルエタノールァミン類またホスファチジルコリン類を含有するので安全である。本発明のセルロース誘導体組成物は、ホスファチジルエタノールァミンで置換したセルロース誘 ¾#：に、遊離のホスファチジルエタノールアミン類またはホスファチジルコリン類を添力 H "ることで、適度な弾性率および粘弾性を有するハイドロゲルを形成することがきる。本発明の製造方法によれば、かかるセルロース誘導体組成物を効率的に製造することができる。

本発明の癒着防止材は、体内での滞留性に優れ、癒着防止効果に優れる。また、本発明のゲル状の癒着防止材は、十分な柔軟性と粘弾性を有し、取扱い性に優れ、複雑な^ Kの部位にも適用でき、内視鏡を用いた手術にも適用可能である。図面の簡単な説明体にわたるフィブロネクチンの被覆を示す概略図である。発明を実施するための最良の形態

くセルロース誘 .

本発明は、下記式で表される繰り返し単位からなるセルロース誘導体である。

式中、 R R²、および R ³はそれぞれ独立に下記式 (a) , (b) 、（c) 、および

(d) 力なる群より選ばれるものであり、

一 H (a)

一 CH₂ - COOH (b)

一 CH₂— COOX (c)

CH₂OCO

R⁴COOC一 H

O

CH₂0— P ~ OCH₂CH₂NH ~ CO— CHつ——

(d)

( (d) 中の不斉炭素に関するの立体異性については特に限定されない。 ) .

式（c) 中、 Xはアルカリ鍋またはアルカリ土類^ であり、

式（d) 中、 R ⁴および R⁵はそれぞれ独立に炭素数 9〜27のアルキル基またはアルケニル基であり、

(b) と（c) の置換度の合計が 0. 3~2. 0であり、

' (d) の置 ¾gが 0. 001〜0. 05である。

力、かる Xのアルカリ金属としては、ナトリウム、カリウム、リチウムなど力ましく、ァルカリ土類金属としては、マグネシウム、カルシウムなどが好ましい。

式（d) 中の R⁴および R⁵は、いずれも炭素数 9〜19のアルケニル基であること力好ましい。なかでも R ⁴ C O—および/または R ⁵ C O—力ォレオイル基であるもの力ましく、特に R⁴CO—および R⁵CO—力ォレオイル基であるもの力軒ましい。

(b) ど（c) の置離の合計は、 0. 3〜2. 0、好ましくは 0. 5〜： 1. 8、より好ましくは 0. 6〜： 1. 5である。（b) と（c) の割合は特に限定されないが、水に対する溶解性の点から、（c) 力 (b) よりも多く存¾ "るほう力好ましい。

(d) の置換度は、 0. 001〜0. 05、好ましくは 0. 005〜0. 03である。 (d) の置をこの範囲に制御することにより、適度な粘弾性を有し、注射器などの細管を有する器具を用いて注入可能なゲルを得ることができる。（d)の置 m¾は元素分析によるリンの定量分析によって求められる。リンの元素分析には、セルロース誘導体を適切な酸性の水溶液により加水分解後、するリンイオンをリンーモリブデン法などの発色による mrn^ I p cなどの発析が利用できる。

また、本発明のセルロース誘難の好ましい重量平均肝量は 5 X 1 0 ³〜5 X 1 0 ⁶であり、より好ましくは 5 X 1 0 ⁴~ 5 X 1 0 ⁶、さらに好ましくは 5 X 1 0⁴〜1 X 1 0 ⁶である。セルロース誘導体の重量平均;^量は、式（d) で表される基の導入により増大するから、原料となるカルボキシメチルセルロースの分子量を適切に選択することによって目的の分子量を有するセルロース誘導体を得ることができる。

<セルロース誘導体組成物 >

本発明は上記したセルロース誘導体と、下記式で表されるリン脂質を含み、セルロース誘導体の繰り返し単位のモル当量とリン脂質のモル当量との比が 1 : 0. 0 5〜1 ： 1であるセルロース誘導体組成物である。

式中、 R ⁶および R ⁷はそれぞれ独立に炭素数 9〜2 7のアルキル基またはアルケニル基であり、 R⁸は一 NH₃ +または一 N (CH₃) ₃+である。

力、かる本発明のセルロース誘導体組成物の構成成分たるセルロース誘導体についても、上記した本発明のセル□—ス誘導体について好ましいと述べたもの力 f適に用いられる。

すなわち、 Xのアルカリ金属としては、チトリウム、カリウム、リチウムなど力ましく、アルカリ土類金属としては、マグネシウム、カルシウムなど力軒ましい。式（d) 中の R⁴ および R⁵は、いずれも炭素数 9〜1 9のアルケニル基であること力好ましく、なかでも R ⁴ C O—および Zまたは R ⁵ C O—がォレオイル基であるものが好ましく、特に R ⁴ C O—および R ⁵ C 0—がォレオイル基であるもの力好ましい。

上記式で表されるリン脂質における R ⁶および R ⁷としても、いずれも炭素数 9〜： I 9のアルケニル基であること力好ましく、なかでも R⁶ CO—および Zまたは R ⁷ CO—力ォレオイル基であるもの力好ましく、特に R ⁶ C 0—および R ⁷ C O—力ォレオイル基であるも，の力ましい。

また、 R⁸としては一 NH₃+カましい。

また、本発明のセルロース誘稱繊物としては、 R⁴、 R⁵、 R⁶、および R ⁷がすべて同一であるもの力ましく、その中でも R⁴C〇一、 R⁵CO—、 R⁶CO—、および R⁷C O—がいずれもォレオイル基であるもの力子ましく、同時に R⁸が— NH₃ ⁺であるもの力最も好ましい。

<セルロース誘の ¾i方法 >

上記した本発明のセルロース誘は、下記式で表される繰り返し単位からなり、肝量力 5X 10³~5X 10⁶のカルボキシメチルセルロースと、

下記式で表されるホスファチジルエタノ一ルァミンとを、

カルボキシメチルセルロースのカルボキシル基（すなわち（b) + (c) の置換基の合計） 100当量に対し、ホスファチジルエタノールァミン 0. 1〜 100当量の割合にて、水および水と相^ fる有機とからなり、水が 20〜70容量％含まれる混合 «に溶解し、縮合剤の存在下で反応させる工程を含む方法により $¾ することができる。

ここで、 R'、 R²、および R ³はそれぞれ独立に、下記式（a) 、（b) 、および（c) 力選ばれるものであり、 -H (a)

-CH₂-COOH (b)

— CH₂— COOX (c)

式（c) 中、 Xはアルカリ鍋またはアルカリ土類鍋であり、

式（b) と（c) の置^ gの合計が 0: 3〜2. 0であり、

R ⁴および R ⁵はそれぞれ独立に、炭素数 9~27のアルキル基またはアルケニル基である。かかる原料としてのカルポキシメチルセルロースは、分子量が 5 X 10³〜5 X 10⁶であるものが好ましく、より好ましくは 5X 10⁴〜5X 10⁶、さらに好ましくは 5X 10⁴ 〜1X10⁶である。

かかる原料としてのカルボキシメチルセルロースは、例えばパルプを水酸化ナトリゥム溶液で溶解し、モノクロ口酢酸またはそのナトリウム塩でエーテル化し、精製することにより Migすることができる。

上記式（c) における Xのアルカリ金属としては、ナトリウム、カリウム、リチウムなど力好ましく、アルカリ土類としては、マグネシウム、カルシウムなどが好ましい。

(b) と（c) の置換度の合計は、 0. 3〜2. 0、好ましくは 0. 5〜1. 8、より好ましくは 0. 6〜： 1. 5である。（b) と（c) の割合は特に限定さょいが、水に対する溶解性の点から、（c) 力 (b) より ΐ)多く存& Tるほう力子ましい。

原料として好ましレカルボキシメチルセルロースの具体的な構造式は下記式で示す通りである。セルロース骨格におけるカルボキシメチル基の置換位置は、 C一 6位にあることカ^!子ましい。

本発明のセルロース誘導体の製造方法で用いられる上記式で表されるホスファチジルェ夕ノールァミンにおいて、 R ⁴および R ⁵はそれぞれ独立に、炭素数 9〜27のアルキル基またはアルケニル基である。 R⁴および R⁵としては、いずれも炭素数 9 ~ 2 7のアルケニル基であること力好ましく、なかでも R ⁴ C O—および/または R ⁵ CO-力ォレオイリレ基であるものが好ましく、特に R ⁴ C O—および R ⁵ C O—力 ¾ レオイル基であるもの力子ましい。

力、かる原料としてのホスファチジルエタノールアミンは、動物繊から抽出したもの、または合成して Migしたものどちらでも使用できる。ホスファチジルエタノールァミンとしては、例えばジラウロイルホスファチジルエタノールァミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールァミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールァミン、ジステアロイルホスファチジルエタノールァミン、ジァラキドイルホスファチジルエタノールァミン、ジベへノィルホスファチジルエタノールァミン、ジリグノセロイルホスファチジルエタノールアミン、ジセロトイルホスファチジルエタノールァミン、ジモン夕ノィルホスファチジルエタノールァミン、ラウロォレオイルホスファチジルエタノールァミン、ミリストォレオイルホスファチジルエタノールァミン、パルミトォレオイルホスファチジルエタノールァミン、ジォレオィルホスファチジルエタノールアミン、ジネルポノィルホスファチジルエタノ一ルァミン、ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミン、ジリノレノィルホスファチジルエタノ一ルァミン、ジヒラゴノイルホスファチジルエタノールァミン、ジァラキドノィルホスファチジルエタノールアミン、ジドコサへキサエノィルホスファチジルエタノールアミンを挙げることができる。その中でも、合成する際に使用する有機溶媒への溶解性の面からジォレオイルホスファチジルエタノ一ルァミン力子ましい。

ホスファチジルエタノ一ルァミンは生体由来の安全な物質であり、本発明のセルロース誘導体において、セルロース誘導体分子間の疎水性相互作用を高める結果、本発明のセル口一ス誘は、これらの疎水性相互作用によりハイド口ゲルを形成するものと考えられる。本発明のセルロース誘導体の原料たるカルボキシメチルセルロースとホスファチジルェ夕ノールアミンは、カルポキシメチルセルロースのカルボキシル基 1 0 0当量に対し、ホスファチジルエタノールアミンを 0. 1〜1 0 0当量、好ましくは 0. · 2〜5 0当量、より好ましくは 0. 3〜4 0当量の割合で反応させる。 0. 1当量よりも'少ないと生成されるセル口 —ス誘 ¾#:がハイド口ゲルを形成しない。また、 1 0 0当量より多いと生成されるセルロース誘導体の疎水性が¾くなり、不溶物が発生しやすくなつて好ましくない。カルポキシメチルセルロースとホスファチジルエタノールァミンとの縮合反応は、縮合に用いる触媒の反応性や反応条件によっては反応効率力悪くなることがあるため、ホスファチジルエタノールァミンは、目的とする置^ Sの計算値よりも i ¾に用いること力子ましい。

カルボキシメチルセルロースとホスファチジルエタノールアミンとは、水および水と相溶する有機溶媒 (A) とカゝらなり、水が 2 0〜7 0容量％である混合溶媒に溶解させる。水の含有量が 2 0容量％よりも少ないとカルボキシルメチルセルロース力溶解しにくくなり、また 7 0容量％よりも多いとホスファチジルエタノールアミンカ溶解しにくくなるため反応が進まない。水の含有量は、好ましくは 3 0〜6 0容量％である。

水と相溶する有機溶媒 (A) としては、具体的にはテトラヒドロフラン、 1 , 4—ジォキサン、 1 , 3—ジォキサン、 1， 3—ジォキソラン、モルフォリンなどの環状エーテル結合をる有機溶媒、ジメチルァセトアミド、ジメチルホルムアミド、 N—メチルー 2—ピロリドンなどのアミド結合を有する有機溶媒、ピリジン、ピぺリジン、ピラジンなどのアミン類、ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類を挙げることができる。これらの中でも環状エーテル類あるいはスルホキシド類力ましく、なかでもテトラヒドロフラン、ジォキサン、ジメチルスルホキシドがより好ましい。

反応に用いる縮合剤としては、カルボキシル活性化剤や縮合剤 m 力好ましい。カルポキシル活性化剤としては、 N—ヒドロキシスクシンイミド、 p—ニトロフエノール、 N— ヒドロキシベンゾトリアゾ一ル、 N—ヒドロキシピペリジン、 N—ヒドロキシスクシンアミド、 2, 4 , 5—トリクロ口フエノール、 N、 N—ジメチルァミノピリジンなどカげられる。縮合剤 m としては 1一ェチル—3— (ジメチルァミノプロピル）一カルポジイミドやその塩酸塩、ジイソプロピルカルポジイミド、ジシクロへキシルカルポジイミドゃ N— ヒドロキシー 5—ノルポルネンー 2， 3—ジカルポキシイミドなど力挙げられる。これらの中でも、カルボキシル活性化剤として N—ヒドロキシベンゾトリァゾール、縮合剤（狭義）として 1—エヂルー 3— （ジメルアミノプロピル）一カルポジイミド塩酸塩を用いるのが好ましい。

反応温度は、好ましくは 0〜 6 0でである。 .副生成物の産生を抑制するためには、反応を 0〜1 0でで行うことがより好ましい。反応環境は性下カ籽ましい。さらに好ましくは pH 6〜7である。くセルロース誘導体の精製方法〉本発明のセルロース誘難の方法においては、得られたセルロース誘を、実質的にカルボキシメチルセルロースを溶解しないが水と相溶する有機 » (B) を用いてセル口ース誘導体を精製する工程を加えてもよい。

ここで、実質的にカルボキシメチルセルロースを溶解しないとは、粉末状あるいは凍結乾燥状態で入手可能なカルポキシメチルセルロースナトリゥム塩あるいはカルボキシメチルセルロース（COOH型）に関して、水力^^ ίϊしない条件下でカルボキシメチルセルロースの有機溶媒に対する溶解性を調べたとき、ほとんど力溶解しない有機溶媒をいう。具体的には溶解度が 3 %以下のものである。例えば、メタノール、エタノ^"ル、 η—プロピルアルコ一ル、イソプロピルアルコール、 η—ブチルアルコール、 t一ブチルアルコールなどのアルコール類、エチレングリコール、 1， 2—プロピレングリコール、 1 , 3—プロピレングリコ —ル、グリセリンなどの雜アルコール類、アセトンなどのケトン類、フエノールなどの芳香族アルコール類を挙げることができる。これらの中でも沸点 1 0 0で未満のもの力好ましく、.より好ましくは沸点 7 3. 8で以下のものである。例えばメタノール、エタノール、ィソプロピルアルコール力寧げられるが、生体内で用することを考慮するとエタノールが好ましい。

これらの群からなる有機 β (Β) を用いて精製する場合、セルロース誘^:が水や有機溶媒 (Α) の混合液中に存 ffiTる状態で有機溶媒 (B) を加えてを形成し、セルロース誘難を取り出法を用いてもよい。また、上記により得られた沈殿、あるいは乾獄態にある粉末、あるいは凍結乾燥により得られたスポンジなどの成型体に、有機溶媒 (B) を添加し、洗浄する方法を用いてもよい。これらの精製方法により、反応に用いた縮合剤や力ルポキシル活性化剤などの触媒類、反応せずに系中に残った未反応のリン脂質などを取り除くことができる。有機 (B) 中に懸濁している目的物を得るには、遠心分離、ろ過などの方法が利用される。また、 .ソックスレー抽出も、有機赚 (B) による洗浄を行うために利用することができる。くセルロース誘 #：組成物の SiS方法〉

本発明のセルロース誘導体組成物は、上記した方法により得られたセルロース誘導体と、下記式で表されるリン脂質とを、水および水と相溶する有機薩を含む混合 βを用いて混合し、次いで赚を除く工程を含んでなる方法によりすること力できる。

式中、 R ⁶および R ⁷はそれぞれ独立に炭素数 9 ~ 2 7のアルキル基またはアルケニル基であり、 R⁸は一 NH₃ +または一 N (CH₃) ₃+である。

すなわち、この工程で用いられるリン脂質は、スファチジルエタノールアミン類またはホスファチジルコリン類である。式中、 R ⁶および R ⁷はそれぞれ独立に、炭素数 9〜2 7 のアルキル基またはアルケニル基である、 R⁶および R ⁷は、いずれも炭素数 9〜： 1 9のァルケニル基であること力ましく、なかでも R ⁶ C O—および/または R ⁷ C O—力ォレオィル基であるもの力軒ましく、特に R⁶ CO—および R⁷ CO—力ォレオイル基であるもの力好ましい。

かかるリン脂質は、動物繊から抽出したもの、または合成して Migしたものどちらでも使用できる。ホスファチジルエタノールァミンとしては、例えばジラウロイルホスファチジルエタノールァミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールァミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールァミン、ジステアロイルホスファチジルェタノ一ルァミン、ジァラキドイルホスファチジルエタノールァミン、ジベへノィルホスファチジルエタノールァミン、ジリグノセロイルホスファチジルエタノールァミン、ジセロトイルホスファチジルェタノ一ルァミン、ジモン夕ノィルホスファチジルエタノールァミン、ラウロォレオイルホスファチジルエタノールァミン、ミリストォレオイルホスファチジルエタノールァミスパルミトォレオイルホスファチジルェタノ一ルァミン、ジォレオイルホスファチジルェ夕ノールァミン、ジネルポノィルホスファチジルエタノールアミン、ジリノレオィルホスファチジルエタノ一ルァミン、ジリノレノィルホスファチジルエタノールァミン、ジヒラゴノイルホスファチジルエタノールァミン、ジァラキドノィルホスファチジルエタノールァミン、ジドコサへキサエノィルホスファチジルエタノ一ルァミンを挙げること力できる。

ホスファチジルコリンとしては、例えばジラウロイルホスファチジルコリン、ジミリストィルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジァラキドイルホスファチジルコリン、ジベへノィルホスファチジルコリン、ジリグノセロイルホスファチジルコリン、ジセロトィルホスファチジルコリン、ジモンタノィルホスファチジルコリン、ラウロォレオイルホスファチジルコリン、ミリストォレオィルホスファチジルコリン、パルミトォレオイルホスファチジルコリン、ジォレオイルホスファチジルコリン、ジネルボノィルホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン、ジリノレノィルホスファチジルコリン、ジヒラゴノイルホスファチジルコリン、ジァラキドノィルホスファチジルコリン、ジドコサへキサエノィルホスファチジルコリンを挙げることができる。

これらの中でも特に、ジォレオイルホスファチジルエタノールァミン、ジォレオイルホスファチジ^/コリンカましい。

かかるセルロース誘難とリン脂質との混合は、水および水と相溶する有機溶媒 (A) の混合溶媒中で混合する。このとき、水の含有量 2 0〜 7 0容量％である混合溶媒、好ましく «τ の含有量が 3 0〜 6 0容量％である混合赚カ佣いられる。

有機瞧 (Α) として、具体的には前述した有機難カ琍用できる。それらの中で好ましくは環状エーテル類あるいはスルホキシド類であり、なかでもテトラヒドロフラン、ジォキサン、ジメチルスルホ'キシドがより好ましい。

本発明のセルロース誘導体組成物においては、セルロース誘導体にリン脂質を混合することにより、得られる組成物の粘弾性、および水を加えて得られるそのハイド口ゲルの粘弾性を高めることができる。このとき、セル口一ス誘導体とリン脂質との混合比は、セルロース誘の繰り返し単位モル当量と、リン脂質のモル当量比が 1 : 0. 0 5 - 1 ： 1であるが、好ましくは、 1 ： Q . ；！〜 1 ： 0. 8、より好ましくは、 1 ： 0. 1 5〜1 ： 0. 6である。リン脂質のモル当 Stが 0. 0 5よりも低いと粘弾性の改善効果力られず、また 1を超えてもリン脂質が翻に? ¾するだけで、粘弾性の改善効果は «されにくい。

セルロース誘導体にリン脂質を混合する際の条件として、温度は 0〜3 0でがよく、好ましくは 1 0〜2 5tである。また、溶媒中のポリマ一およびリン脂質の含量は特に制限されないが、合計で 3重量％以下が好ましい。

セルロース誘導体にリン脂質を混合した後、有機溶媒 (A) を除去する工程を経て、目的とする誠物を得る。有機薩 (A) を取り除く方法としては特に制限はなぐ纖、凍結乾燥、水中での透析により有機溶媒を除く方法、噴霧乾燥、エレクトロスプレーデポジシヨン、風乾、溶解性の低い溶媒を添加して.目的物を沈殿させる方法など力利用できるが、これらの中では水中での透析により有機 «を除く方法力子ましく、得られた透析物を凍結乾燥により乾燥する方法が好ましい。透析膜には特に制限はないが、市販のヴィスキングチュ一ブ（再生セルロース膜）が好ましく利用できる。

<セルロース誘^:のハイドロゲル〉

本発明の癒着防止材は、本発明のセルロース誘導体を含有するハイド口ゲルであり、水 1 0 0重量部に対し、本発明のセルロース誘を 0. ：!〜 5. 0重量部、好ましくは 0. 2 〜2. 0重量部、さらに好ましくは 0. 3〜： 1 . 0重量部含むハイド口ゲルである。

これらの八イド口ゲルは、ゲルの入った容器を傾けても流れ落ちない程度の粘弾性を有するもの力 fましく、スパテルなどの金属へらで¹ ると容易に変形すること力何能で、患部に塗布することが容易な状態であり、また注射器など細管を有する器具で注入することが能である。

力、かるゲルの好ましい複素弾性率としては、水中におけるポリマ一濃度が 1重量％、温度 3 7での条件で、動的粘弾性測定装置を用い、角速度 1 0 r a d/ s e cで測定したときに 5 0〜9 0 O NZm²であるものが好ま-しく、 1 0 0〜7 0 0 N/m²であるものがさらに好ましい。この範囲力型のゲルとして最も取扱いやすいからである。

また本発明のハイド口ゲルは無色透明であり、製造の過程でごみなどの異物が混入した場合、これを検知することが可能であり、工業生産する上でのメリットをる。

またハイド口ゲル中に含まれる水！^の他の成分としては、触媒として用いた縮合剤類、縮合剤が所定の化学反応を経由することで生成するゥレアなどの副産物類、カルボキシル活性化剤、未反応のホスファチジルエタノ一ルァミン類、反応の各段階で混入する可能性のある異物、 p Hの調整に用いたイオン類などカ铐えられるが、これらの成分は、上記の有機溶媒（B) を用いた精製あるいは洗浄によって取り除力^!ており、いずれの化合物も、生体内. に入れたときに異物反応として認識されなレ度の低レ、レベルに抑えてあること力ましい。くセルロース誘導体組成物のハイド口ゲル >

本発明のセルロース誘導体組成物イド口ゲルを形成することができる。このとき、水 1 0 0重量部に対し、セルロース誘：糸誠物を 0. 1〜5. 0重量部、好ましくは 0. 2 〜2. 0重量部、さらに好ましくは 0. 3〜1 . 0重量部含むことにより、適度な粘弾性を有するハイド口ゲルを得ることができる。 ,

これらのハイド口ゲルは、ハイド口ゲルの入った容器を傾けても流れ落ちない程度の粘弾性を有するもの力 fましく、スパテルなどの Sへらで触ると容易に変形することが可能で、患部に塗布することが容易な状態である。また注射器など細管をるで注入することが可能である。

かかるゲルの好ましい複素弾性率としては、水中におけるポリマー濃度が 1重量％、温度 3 7での条件で、動的粘弾性測定装置を用い、角 ¾S 1 0 r a d/ s e cで測定したときに 5 0 ~ 9 0 O N/m²であるものが好ましく、 1 0 0〜7 0 0 N/m²であるものがさらに好ましい。この範囲力 ¾ΪΛ型のゲルとして最も取扱いやすいからである。

ハイド口ゲルに含まれる水、セルロース誘難、およびリン脂質の成分としては、触媒として用いた縮合剤類、縮合剤が所定の化学反応を経由することで生成するゥレアなどの副産物類、カルボキシル活性化剤、反応の各段階で混入する可能性のある異物、 ρΗの調整に用いたイオン類などカえられる。いずれの化合物も、生体内に入れたときに異物反応と ' して認識されない程度の低いレベルに抑えてある ζとが好ましい。く用途〉

本発明のセルロース誘導体、セルロース誘導体組成物、およびそれらのハイド口ゲルの用途としては、医用材料を含めた医療用途、ヘアケア製品や肌の保湿剤などの日用品用途、化粧品用途などへの使用が可能である。本ゲルは注射器を通して注入可能であることから、その中でも特に低侵襲医療用途に用いること力河能であり、再生医療のための細胞の担体、成長因子などの液性因子を保持 ·徐放する担体、医薬品として利用できる化合物を保持'徐放する担体、癒着防止材ゃシ一ラントなどの医用材料として、特に注入型の癒着防止材として好ましく利用できる。実施例

以下の実施例により本発明の詳細をより具体的に説明する。しカゝし、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。

( 1 ) 実施例に使用した材料は以下の通りである。 (i) CMCNa：カルボキシメチルセルロースナトリウム（日本 »ケミカル（株）製、置換度 0. 69) 、

(ii) テ卜ラヒドロフラン（和 «薬工業（株） S) 、

(iii) 0. 1M HC 1 (和 «薬工業（株） Μ) 、

(iv) 0. 1M NaOH (和«薬工業（株） M) 、

(v) EDC： 1—E t hy 1— 3— [3— (d i me t h y 1 am i n o) propy l] 一 c arbod i— imi de 'HC l ( (株）大阪合成有歡额製）、

(vi) HOB t · H₂0 : 1-Hyd roxybenzo t r i azo l e, mo n o h y d ra t e ( (株）合成有機化^ ff额 M) 、

(vii) L一 α—ジォレオイルホスファチジルエタノールァミン（COATSOME ME—

8181、日本油脂 (m ,

(viii) L— α—ジラウロイルホスファチジルェタノ一ルァミン（COATSOME ME 一 2020、曰棚旨（株）製）、

(ix) L一 α—ジォレオイルホスファチジルコリン（COATSOME MC— 8181、日棚脂（株）瓤、

(x) L一 α—ジラウロイルホスファチジルコリン（COATSOME MC— 2020、日本油脂（株） @ 、

(xi) L一 α—ジミリストイルホスファチジルコリン（COATSOME MC— 4040、日相脂（株） fi) 、

(xii) L— α—ジパルミトイルホスファチジルコリン（COATSOME MC— 6060、日棚旨（株） m、

(xiii) L一 α—ジステアリルホスファチジルコリン（COATSOME MC— 8080、日棚旨（株） M) 、

(xiv) フイブロネクチン（日本べクトン'ディッキンソン（株）

(xv) ニトロセルロース（Sch l'e i che r&Schue l 1社、

(xvi) マウス N I HZ 3 T 3雖芽細胞 (Ame r i c an Type Cu l tu re C d 1 1 e c t i onより分 ¾) 、、

(xvii) PBS (I n v i t r o g e nftfi) 、

(xviii) DMEM ( I n v i t r o g e n社、 (xix) Ant i b i o t i c s An t i my co t i c s (I nv i t roge n社 ®) 、

(xx) FBS (HYCLONE社、 '

(xxi) トリプシン— EDTA : 0. 25%トリプシン、 ImM EDTA · 4Na (I n v i t r o g e n社、

(xxii) メタノール (和 «薬工業（株） M) 。

(xxiii) 消毒用エタノール（和薬工業（株） M) 、

(xxiv) ペントバルビタールナトリウム（ネンブタール注射液、大日本 ί抜製薬 M) 、 (χχν) イソジン消 Si夜湖治製菓（株）製）、

(xxvi) 注射用蒸留水（大塚製薬（株）製）。

(2) セルロース誘導体中のリン脂質含量の測定

セルロース誘導体中のリン脂質の割合は、バナドモリブデン酸 M¾S法による全リン含量の分析により求めた。 ' (3) ハイド口ゲルの複素弾性率の測定

ハイド口ゲルの複素弾性率は、動的粘弾性測定装置である R heome t e r RFIII (TA I n s t r ume n t) を使用し、 37で、角 ¾¾10 r adZs e cで測定した。複素弾性率とは弾性体の応力とひずみの比を表す定数のことである。

[錯例 1 ]

くセルロース誘：〉

平均肝量 230万の CMCNa 20 Omgを水 40mlに溶解し、さらにテトラヒドロフラン 4 Omlを加えた。この^に L— α—ジォレオイルホスファチジルエタノールアミン 169. 7mg (0. 000228mo 1) (CMCN aのカルボキシル基 100当量 ίこ対し 40当 ® 、 EDC48mg (0. 00025 lmo 1) 、 HOB t ·Η₂038. 4 mg (0. 00025 lmo 1 ) を 10m 1のテトラヒドロフラン/水 = 1 / 1に溶解して反応系に添加した後、終夜辦を行った。勝後、テトラヒドロフランを除去し、水をある程度蒸発させたところで、エタノール中に加え、沈殿させた。ろ過により、エタノールを除き、再度、エタノールにて洗浄し、ろ物を真空乾燥することでセルロース誘難を得、そのリン脂質含量を測定した。反応前のカルボキシメチルセルロースナトリゥムの置換度は 0. 69であり、すべての力ルポキシメチル基はナトリウム化されていると仮定し、リン脂質含量を用いて計算により、式（d) の置換度を求めた。式（d) の置換度は 0. 007であつた。 - <セルロース誘^組成物〉

上記で得られたセルロース誘 ¾#：10 Omg (0. 45mmo 1) を 2 Omlのテトラヒドロフラン Z水 = 1 / 1に溶解し、セルロース誘導体中の繰り返し単位のモル当量と L一 a —ジォレオイルホスファチジルエタノールァミンのモル当量の比が、 1 : 0. 062になるように L— α—ジォレオイルホスファチジルエタノールァミン 20. 6mg (0. 028m mo 1) を添加し、 20時間攪捽した。 j«f¾、透析により精製を行い、さらに繊吉乾燥してセルロース誘導体組成物を得た。くセルロース誘ハイド口ゲル〉

凍結乾燥したセル口一ス誘導体 10 m gをィォン交換水 99 Omgに溶解し、 jt¾ 1重量％のハイド口ゲルを調製した。得られたハイド口ゲルは無 β¾明で、容器を傾けても流動することはなく、スパテルなどの金属へらを簡単に挿入することができ、 25 Gの注射針を通して容易に押し出せることが可能であった。また、得られたハイド口ゲルの複素弾性率を測定したところ、 188. 2NZm²であった。

<セルロース誘導体組成物ハイドロゲル >

吉乾燥したセルロース誘組成物 1 Omgをイオン交換水 99 Omgに溶解し、濃度 1重量％のハイドロゲルを調製した。得られたハイドロゲルの複素弾性率を測定したところ 188. 3N/m²であった。醜例 2]

セルロース誘導体中の繰り返し単位のモル当量と L一 α—ジォレオイルホスファチジルェタノ一ルァミンのモル当量の比力 1 : 0. 13になるように L— α—ジォレオイルホスファチジルエタノールァミン 4' 3. 8mg (0. 059mmo 1) を添力 PTるは実施例 1 と同様の操作を行い、セルロース誘„ 物を得た後、ハイド口ゲルを調製した。得られたハイド口ゲルの複素弾性率を測定した結果、 287. 3 N/m²であった。闘例 3]

セルロース誘導体中の繰り返し単位のモル当量と L— α—ジォレオイルホスファチジルェ夕ノールァミンのモル当量の比が、 1 : 0. 26になるように L— α—ジォレオイルホスファチジルエタノールァミン 89. 6mg (0. 12mmo 1) を添加する例 1と同様の操作を行い、セルロース誘組成物を得た後、ノ、イド口ゲルを調製した。得られたハイド口ゲルの複素弾性率を測定した結果、 291. 9NZm²であった。

[難例 4]

セルロース誘導体中の繰り返し単位のモル当量と L一 α—ジォレオイルホスファチジルェタノ一ルァミンのモル当量の比力 1 : 0. 40になるように L— α—ジォレオイルホスファチジルエタノールァミン 135. 6mg (0. 18mmo 1) を添加する^は実施例 1 と同様の操作を行い、セルロース誘繊物を得た後、ハイド口ゲルを調製した。得られたハイド口ゲルの複素弾性率を測定した結果、 308. 9N/m²であった。瞧例 5]

セルロース誘導体中の繰り返し単位のモル当量と L— α—ジォレオイルホスファチジルェタノ一ルァミンのモル当量の比力 1 : 0. 69になるように L— α—ジォレオイルホスファチジルエタノールァミン 23 lmg (0. 3 lmmo 1) を添力 [ΤΤる ¾^は実施例 1と同様の操作を行い、セルロース誘物を得た後、ハイド口ゲルを調製した。得られたハイド口ゲルの複素弾性率を測定した結果、 294. 2NZm²であった。

難例 6]

セルロース誘導体中の繰り返し単位のモル当量と L一 α—ジォレオイルホスファチジルコリンのモル当量の比力 1 : 0. 26になるように実施例 1で使用したセルロース誘 3 Omg (0. 14mmo 1 ) に L一 α—ジォレオイルホスファチジルコリン 28. 6mg (0. 036mmo 1 ) を添加する以外は実施例 1と同様の操作を行い、セルロース誘導体組成物を得た後、ハイド口ゲルを調製した。得られたハイド口ゲルの複素弾性率を測定した結果、 174. 9N/m^であった。施例 7] '

セルロース誘導体中の繰り返し単位のモル当量と L一 α—ジラウロイルホスファチジルコリンのモル当量の比が、 1 : 0. 27になるように L一 α—ジラウロイルホスファチジルコリン 22. 5mg (0. 036mmo 1) を添力 ΙΓする以外は実施例 6と同様の操作を行い、セルロース誘導体誠物を得た後、ハイド口ゲルを調製した。得られたハイド口ゲルの複素弾性率を測定した結果、 249. lN/m²であった。醜例 8] .

セルロース誘導体中の繰り返し単位のモル当量と L一 α—ジミリストイルホスゥァチジルコリンのモル当量の比が、 1 : 0. 27になるように L— α—ジミリストイルホスファチジルコリン 24. 6mg (0. 036mmo 1) を添力 PTる以外は実施例 6と同様の操作を行い、セルロース誘 ^物を得た後、ハイド口ゲルを調製した。得られたハイド口ゲルの複素弾性率を測定した結果、 398. 4N/m²であった。難例 9]

セルロース誘導体中の繰り返し単位のモル当量と L一 α—ジパルミトイルホスファチジルコリンのモル当量の比力 1 : 0. 27になるように L— α—ジパルミトイルホスファチジルコリン 26. 7mg (0. 036mmo 1) を添力 tlTる以外は例 6と同様の操作を行レ、セルロース誘繊物を得た後、ハイド口ゲルを調製した。得られたハイド口ゲルの複素弾性率を測定した結果、 244. 8NZm²であった。 - 醜例 10]

セルロース誘導体中の繰り返し単位のモル当量と L一 α—ジステアロイルホスファチジルコリンのモル当量の比が、 1 : 0. 27になるように L— α—ジステアロイルホスファチジルコリン 28. 8mg (0. 036mmo 1) を添力 Pfる以外は実施例 6と同様の操作を行レセルロース言t難糸滅物を得た後、ハイド口ゲルを調製した。得られたハイド口ゲルの複素弾性率を測定した結果、 261. 2NZm²であった。難例 11]

セルロース誘中の繰り返し単位のモル当量と L一 α—ジラウロイルホスファチジルェタノ一ルァミンのモル当量の比カ 1 : 0. 27になるように L一 α—ジラウロイルホスファチジルエタノールァミン 20. 9mg (0. 036mmo 1) を添力 P"Tるは実施例 6 と同様の操作を行い、セルロース誘糸滅物を得た後、ハイド口ゲルを調製した。得られたハイドロゲルの複素弾性率を測定した結果、 212. 7N/m²であった。随例 12]

<マウス N IH/3T 3雌芽細胞の調 M>

マウス N I HZ 3 T 3赚芽細胞を 10%?83ぉょび1 An t i b i o t i c s A n t imyco t i c sを含む DMEM中にて 5 %C〇₂存在下で培養した。インビトロにおけるハイド口ゲルへの細胞接着およ潤のでは、 0. 05 %トリプシン— E D T A でマウス N IH/ 3 T 3纖芽細胞を組 ¾養用のペトリ皿から分離し、 900 r pm、室温で 5分間遠心分離を行った。上清を除去し、 10%FBSおよび 1 %An t i b i o t i c s An t imy c o t i c sを含む DMEMに懸濁し、り. 4 X 10⁵個 Zm 1の細胞懸濁液を調製した。

<セルロース誘 ¾Μ成物ハイド口ゲルへの細胞接着および浸潤の IWffi〉 .

«後の癒着は、損傷を受けた面が再生する際に、他の組織と結合することにより発生するため、その防止方法の 1つとして損傷 m ^への細胞浸潤を抑制することが考えられる。そこで、 Snowらの方法に一部改変を加えた方法を用いて、セルロース誘導体組成物ハイド口ゲルへの細胞接着およ OS潤を fffffiした [SnowDH e腿 onV， Carrino DA Caplan AL Silver J. ： Εχίλ Neurol； 109(1): 111-30. 1990] 。すなわち、メタノール 6m 1に 5 cm²のニトロセルロースを溶解させ、この «0. 5mlで養用の直径 60mmのペトリ皿を被覆したのち、 2時間風乾した。実施例 1のセルロース誘導体組成物ハイド口ゲルをニトロセルロースで被覆したペトリ皿にドロップしたのち、 6時間風乾した。次に、 30/ gZ mlフイブロネクチン 3ml ^ペトリ皿を被覆したのち、 PBSでペトリ皿を洗浄した（図 1) 。最後に、 0. 4X10⁵個 Zmlのマウス NIHZ3T3i½芽細胞懸濁液 5mlをペトリ皿全体に播種した（2X10⁵個/ベトリ皿）。位相差顕微鏡を用いて、 7日間ハイド口ゲルド口ップへの細胞接着おょ搬潤を観察した。その結果、ド口ップしたセルロース誘導体物八イド口ゲルへの細胞接着および寖潤は認められなかった。

[雄例 13]

ιのセルロース誘導体組成物ハイド口ゲルの代わりに実施例 2のハイド口ゲルを用いること、例 12と同様の操作を行い、ハイド口ゲルへの細胞接着およ U寝潤を評価した。その結果は実施例 12と概ね同一であつた。

[実施例 14]

実施例 1のセルロース誘導体組成物ハイドロゲルの代わりに実施例 3のハイドロゲルを用いること J¾^、実施例 12と同様の操作を行い、ハイド口ゲルへの細胞接着およ «潤を評価した。その結果は実施例 12と概ね同一であった。議例 15]

例 1のセルロース誘導体組成物ハイドロゲルの代わりに実施例 5のハイドロゲルを用いること、錢例 12と同様の操作を行い、ハイド口ゲルへの細胞據およ潤を評価した。その結果は実施例 12と概ね同一であった。

[比較例 1 ] ' ―

実施例 1のセルロース誘導体組成物ハイド口ゲルの代わりに 30 g/m 1フイブロネクチンを用いること以外、実施例 12と同様の操作を行い、フイブロネクチンへの細胞接着およ t/S潤を評価した。細胞はフィブロネクチン全体に広がっていることが観察された。その結果、 7日目まで、比較例 1ではマウス N IH/3T3 «芽細胞が接着および浸潤していたのに比べ、実施例 12、 13、 14、および 15ではマウス NIHZ3T3雜雜芽細胞の本発明のハイドロゲルへの接着および浸潤はほとんど観察されず、細胞はハイドロゲルが被覆されていないフイブロネクチンの領域に選択的に接着していた。以上より、実施例 12、 13、 14、および 15でしたハイド口ゲルには細胞據ぉよ潤を抑制する効果があることカ雕認された。瞧例 16]

く赚内癒着試験〉

Sprague-Dawl ey (SD) 系ラット（日本チヤ一ルスリノ一） 10匹（7週齢、雄）を使用し、 Bucke腿 ier CC 3rdらの方法に従って腹腔内癒着モデルを作製した

[Buckenmaier CC 3rd, Pusateri AE. Harris RA, Hetz SP: Am Surg. 65 (3) :274-82, 1999] 。すなわち、ラットをベントバルビ夕一ルナトリウムの腹腔内投与 «下で者位に固定し、腹部を剃毛した後、消毒用エタノールで消毒した。さらにイソジン消毒液で手■域を消毒した後、腹部正中線に沿って 3〜4 cm切開して盲腸を露出させた。露出させた盲腸の一定の面積（l〜2cm²) について、滅菌ガーゼを用いて点状出血が生じるまで擦過した。盲腸を元に戻し、さらに相対する腹壁に欠損 (8mmx 1. 6mm) を作製した。その後、腹壁の欠損部位に実施例 1のセルロース誘導体八ィドロゲル（1ml) を塗布し、切開部の筋層は連纖合した後、皮膚は 4~ 5針縫合した。倉 ijf募部をイソジン消毒液で消毒した後、ケ一ジに戻した。モデル作製 4週間後に動物をペントバルビ夕一ルナトリゥム麻酔下で開腹し、腹腔内癒着の程度を肉眼的に観察し、以下に示す基準に従ってスコア化した。セルロース誘導体八ィドロゲルを塗布しないものをコントロールとした。

(スコア分

スコア 0：癒着が認められない状態

スコア 1 ：軽度の牽引で切れる程度の弱い癒着がある状態

スコア 2：軽度の牽引に耐えられる中程度の癒着がある状態

スコア 3：かなりしつかりとした癒着が多る状態

有意差については、 Wi 1 c oxonの方法で検定した。

その結果、コントロールでは 4週間後において腹壁と盲腸間に強固な癒着形成が認められた。一方、実施例 1のハイド口ゲルを塗布した群では、 4週間後において腹壁と盲腸間の癒着の程度はコントロールと比較して有意に低かった。具体的には、コントロールが 2. 3土 1. 2 (平均値士標準偏差）であるのに対し、雄例 1の八イド口ゲルを塗布した群では、 0. 8± 1. 2 (平均値士標準偏差）で、統計学的に有意な差が認められた（尸く 0. 0 1 4, W i 1 c o X o n sテス卜リ。

さらに、癒着が認められた場合、盲腸にゼムクリップを縫合糸にて縫い付け、それを Me t r i e Gauge s (EW— 93953— 05、 Co 1 e— P a rme r社 ¾) で引つ張り、盲腸カ壞壁からは力るの最大強度（グラム）を測定し、その値を癒着の搬として瞧した。癒着がない場合、 0グラムとして扱った。意差については、 We 1 c h' s t を用いた。こうして例 1のセルロース誘ハイド口ゲルが癒着の程度やに及ぼす効果を評価した。その結果、コントロールが 338. 7±278. 4グラム（平均値 ±標«差）であるのに対し、実施例 1のセルロース誘八イド口ゲルを塗布した群では、 108. 1 ± 188. 7グラム（平均値土標差）で、統計学的に有意な差が認められた (P<0. 044, S t ude n t ' s tテスト）

以上より、実施例 1のセルロース誘導体八イド口ゲルは、癒着を防止できることを確認した。

[実施例 1 7]

ラットを 8匹用い、実施例 1のセルロース誘導体八ィド口ゲルの代わりに実施例 1のセルロース誘組成物八イド口ゲルを用いること、実施例 16と同様の操作を行い、それが癒着の程度ゃに及ぼす効果を«した。その結果、癒着のスコア、強度はそれぞれ、 0. 1 ± 0. 4 , 18 ± 52グラム（平均値 ±標«差）であつた。

[実施例 18]

ラットを 9匹用い、実施例 1のセルロース誘導体組成物八ィド口ゲルの代わりに実施例 2 のハイド口ゲルを用いること以外、実施例 17と同様の操作を行い、ハイド口ゲルの癒着の程度、強度に対する効果を痛した。その結果、癒着のスコア、強度はそれぞれ、 0. 2土 0. 7、 50 ± 149グラム（平均値土標準偏差）であった。

[雄例 19] .

ラットを 8匹用い、 «例 1のセルロース誘導体糸誠物ハイドロゲルの代わりに実施例 3 のハイドロゲルを用いること以外、 m mi 7と同様の操作を行い、ハイドロゲルの癒着の程度、艇に対する効果を痛した。その結果、癒着のスコア、艇はそれぞれ、 0. 0士 0. 0、 0±0グラム（平均値 ±標«差）であり、完全に癒着が抑えられていた。

[実施例 20]

ラットを 9匹用い、例 1のセルロース誘導体 «物ハイド口ゲルの代わりに実施例 5 のハイド口ゲルを用いること、例 17と同様の操作を行い、ハイド口ゲルの癒着の程度、搬に対する効果を痛した。その結果、癒着のスコア、體はそれぞれ、 0. 6土 1. 1、 89 ± 180グラム（平均値士標準偏差）であった。 [比較例 2]

コントロールとして、ゾ、イド口ゲルを塗布せずに、実施例 17と同様の操作を行い、癒着の程度、強度を評価した。その結果、癒着のスコア、強度はそれぞれ： 2. 0±1. 3、 3 97 ± 313グラム（平均値土標準偏差）であった。

以上、 4週間後において、比細 2で強固な癒着が発生していたのと比較して、実施例 1 7、 18、 19、および 20では癒着の程度、 ¾gカ审意に抑制されていた。

以上より、実施例 2、 3、および 5で得られた本発明のセルロース誘物ハイドロゲルには、生体内において癒着を強力に抑制する効¾ ^あることカ認され、手術後の癒着を効果的に防止することができることが示された。

以下表 1に実施例 17-20および比較例 2の'結果をまとめる。表 1

群癒着スコア比較例 2との癒着強度（グラム）比較例 2との平均値 ±標«差有意差縦 ,平均値 ±標«差有意差縦

(Wilcoxon) (Welch) 比較例 2 2. 0±1. '3 ― 397±313 一実施例 17 0. 1±0. 4 P = 0. 007 18±52 P = 0. 011 実施例 18 0. 2±0. 7 P = 0. 006 50± 149 P = 0. 017 実施例 19 0. 0±0. 0 P = 0. 003 0±0 P = 0. 009 実施例 20 0. 6±1. 1 P = 0. 034 89± 180 P = 0. 033 [実施例 21]

実施例 1のセルロース誘ハイドロゲルの離および塗布量を変えて用いることは、実施例 16、 17と同様の操作を行い、ノ、イド口ゲルの癒着の程度、強度に対する効果を評価した。各群 9例のラットを用いた。結果を表 2に示す。表 2

塗布量を一定 (lml) にした場合、癒着の程度、強度は、 0. 5重量％以上で対照群と比較して有意に低かった。また、濃度を一定（1重量％) にした場合、 0. 25mlでも対照群と比較して癒着の程度、強度は有意に低かった。したがって、これらの塗布量、濃度であれば、生体内で所期の効果を発現することが認された。難例 22]

CMCNaに分子量 97万のものを用いた以外は実施例 1と同様に調製したセルロース誘導体（置離 0. 001、「CMC— PE」と表記）を塩化ナトリウム水溶液に溶解させてゲル化したものの粘度（E t a (P) 、 1 O r ad/s e cでの値）を測定した。結果を表 3に示す。ポリマーの濃度は 1重量％であり、「CMC— Na」は原料に用いた分子量 97 万のカルボキシメチルセルロースナトリウム塩を表し、 PBSはリン酸緩衝生理食塩水 (0. 9%NaC 1) を表す。表 3

このように、本発明のセルロース誘導体八イド口ゲルは、少量の塩化ナトリウムを共存させることで、驚くべきことにその粘度力急激に増大すること力わかった。この特性を利用することにより、例えば本発明のハイド口ゲルを注射する際には塩化ナトリウムを加えずに粘度の低い状態とすることで注射を容易にするが、投与した局所では生体 «に触れて塩化ナトリゥム濃度が上昇することにより粘度が増大し、例えば癒着防止剤などの所期の機能を発揮しやすくする、といった使用法力河能になる。 [比較例 3]

本発明者らは、本発明のセルロース誘^:八ィドロゲリ^セルロース誘 ##組成物ハイド口ゲルに限らず、他の多糖類をのアミノ基を有する基により修！ (TTることによる粘弾性の増大効果を検討した。例えば、ヒアルロン酸をロイシンメチルエステル、チロシンェチルエステル、フエ二ルァラニンメチルエステル、ビタミン Κ 5、カルバコール（塩化カルバミルコリン）、エヂルァミン、ニコチンアミドを用いて多糖類のカルボキシル基を修飾して作成したハイドロゲルでは粘弾性の向上はほとんど認めらよかったのに対し、ェチルゥレアで修飾したものには明らかな粘弾性の向上が認めら lこ。したがって、多糖類を «基で修飾することにより、そのハイド口ゲルの粘弾性の向上が認められる場合はあるが、具体的にどのような組み合わせのときに粘弾性の向上力認められるかについて予測することは困難であることがわかる。

[比較例 4]

さらに、多糖類を疎水基で修 PTることで得られる八ィド口ゲルの粘弾性と、それを用いたときの癒着防止効果との関連も検討した。平均分子量 2 3 0万の CMCN aを用い、ホスファチジルエタノールァミンの^りにォレイルァミンを CMC N aのカルボキシル基 1 0 0当量に対し 4 0当 Mfflいた以外は実施例 1に記載の方法で CMC—ォレイルァミン誘導体を調製した。この誘導体の複素弾性率は、 8 7. 4 N/m²であった。

本発明者らは、カルボキシメチルセルロースをアルキルァミン、具体的にはォレイルアミンで修 ΙΤΤることによつても、高粘弾性のセルロース誘の八ィドロゲルが得られることを見出している。し力、し、それを実施例 1 2に記載のハイド口ゲルへの細胞接着およ 0¾潤の評価を行ったところ、 CMC—アルキルアミンハイドロゲルの細胞接着および浸潤を抑制する効果は低ぐハイドロゲルの高い粘弾性が必ずしも良好な癒着防止効果に結びつ力ぬいことがわかった。 [比較例 5 ]

CMCN a (日本麵ケミカル（株）製、 F 1 5 MHC、置換度 0. 7 7 ) を用い、リン脂質には、ジラウルロイルホスファチジルエタノールァミン（COAT S OME ME— 2 0 2 0、日»脂（株）製）を用いた。その他の試薬は、実施例 1に記載のものと同じものを用いた。

1 gの CMCN aを 5 0 m lの水に溶解し、この溶液に、ジラウルロイルホスファチジルエタノールァミン 2 0 Omgを添加し、室温で 1時間攪拌した。この«に£ 0〇を5 0 0 mg添加し、一晩、室温で勝した。得られた繊を脱イオン水で透析し、 ί ^乾燥した。得られた凍結乾燥体を、ポリマー濃度が 1重量％となるよう水と混合し、粘弾性を測定した。その結果、反応前の CMCN aの複素弾性率が 0. 4 N/m²であったのに対し、得られた凍結乾燥品の複素弾性率が 0. 4 N/m²であり、反応の前後でポリマ一溶液の物性に変化は見られなかった。得られたセルロース誘導体と水との混合物は、容器を傾けると流れ落ちる流体のままであり、ゲルの性状は示さなかった。産業上の利用可纖

本発明のセルロース誘 ¾ ^組成物は、医療用ハイド口ゲル、とりわけインジェクタブルな癒着防止材として有用である。癒着防止材は、脊椎、関節、腱、欄などに対する手講に、損傷を受けた生体 «表面が癒着するのを防止するために用いることができる。さらに具体的には、脊椎手術の場合、例えば本発明の癒着防止材を硬膜と神経根周囲を隔離するために塗布することで癒着を防止することができる。癒着が起きた場合、瞧、可動領域の確保を目的として癒着剥離を行う必要がある。本発明の癒防止材を塗布することにより、癒着を防止することができ、再 «を回避し、医療経済性の向上、さらには患者の生活の質を高めることが可能となる。

また、婦人科では、開腹術又は腹腔鏡による子宮筋腫摘出麟などに用いることができる。精後の倉 I縢部位に本発明の癒着防止材を塗布することにより、癒着を防止することがでさる。

本発明の癒着防止材は体^での優れた滞留性を有し、癒着防止材として有用である。とくに癒着防止材がゲルの場合は、複雑な形状の部位にも適用でき、内視鏡を用いたに容易に適用可能である。

Claims

請求の範囲

1. 下記式で表される繰り返し単位からなるセルロース誘 ¾ 。

式中、 R'、 R.²、および R ³はそれぞれ独立に下記式（a).、 (b) 、 (c) 、および (d) 力なる群より選ばれるものであり、

-H (a)

一 CH₂— COOH (b)

-CH,-COOX (c)

CH,0― P一 OCH ₂CH₂NH ~ CO一 CH₂―

I

o—

(d)

式（c) 中、 Xはアルカリ麵またはアルカリ土類麵であり、

式（d) 中、 R⁴および R⁵はそれぞれ独立に炭素数 9〜27のアルキル基またはアルケニル基であり、

(b) と（c) の置換度の合計が 0. 3〜2. 0であり、

(d) の置換度が 0. 001-0. 05である。

2. 1重量％水について動的粘弾性測定装置で角 10 r ad/s e cにて求められる複素弾性率が 50-900 NZm²である請求項 1に記載のセルロース誘導体。

3. R⁴および R⁵が炭素数 9〜1 9のアルケニル基である請求項 1または 2に記載のセルロース誘

4. . R⁴ CO—および Zまたは R ⁵ CO—力ォレオイル基である請求項 3に記載のセル口 —ス誘 #ί^。

5. R ⁴ C Ο—および R ⁵ C Ο一がォレオイル基である請求項 3に記載のセルロース誘導体。 -

6. - 請求項 1に記載のセルロース誘難と、下記式で表されるリン脂質を含み、セル口一ス誘導体の繰り返し単位のモル当量とリン脂質のモル当量との比が 1 ： 0. 0 5〜1 ： 1であるセルロース誘導体組成物。

式中、 R ⁶および R ⁷はそれぞれ独立に炭素数 9 ~ 2 7のアルキル基またはアルケニル基であり、 R⁸は— NH₃+または一 N (CH₃) ₃+である。

7. 1重量％水赚について動的粘弾性測定装置で角 1 0 r a d/ s e cにて求められる複素弾性率が 5 0 ~ 9 0 0 NZm²である請求項 6に記載のセルロース誘導体組成物。

8. R⁸が— NH₃+である請求項 6に記載のセルロース誘^:繊物。

9. R⁸がー N (CH₃) ₃+である請求項 6に記載のセルロース誘導体組成物。

1 0. R⁴、 R ⁵、 R⁶ および R ⁷がすべて同一である請求項 6から 9のいずれかに記載

I

のセルロース誘導体組成物。

11. R ⁶および R⁷が炭素数 9〜： 19のアルケニル基である請求項 6から 9のいずれかに記載のセルロース誘導体組成物。

12. R⁶CO—および/または R⁷CO—がォレオイル基である請求項 11に記載のセルロース誘組成物。

13. R⁶ CO—および R⁷ CO—がォレオイル基である請求項 11に記載のセルロース誘 ¾^滅物。

14. R⁴および R⁵が炭素数 9~19のアルケニル基である請求項 6から 9のいずれかに記載のセルロース誘灘繊物。 '

15. R⁴CO—および/または R⁵CO—がォレオイル基である請求項 14に記載のセルロース誘^: 物。

16. R⁴CO—および R⁵CO—力ォレオイル基である請求項 14に記載のセルロース誘!^組成物。

17. R⁴CO—、 R⁵CO—、 R⁶CO—、および R ⁷ CO—がいずれもォレオイル基である請求項 8に記載のセルロース誘導体組成物。

18. 下記式で表される繰り返し単位からなり、量が 5X 10³〜5X 10⁶のカルポキシメチルセルロースと、 .

下記式で表されるホスファチジルエタノールァミンとを、

カルボキシメチルセルロースの力ルポキシル基 1 0 0当量に対し、ホスファチジルェ夕ノールァミン 0. 1〜： 1 0 0当量の割合にて、水および水と相溶する有機 «とからなり、水が 2 0〜 7 0容量％含まれる混合灘に溶解し、縮合剤の下で反応させる工程を含む、請求項 1力、ら 5のいずれかに記載のセルロース誘 ¾#：の S i方法。

ここで、 R )、 R²、および R ³はそれぞれ独立に下記式 (a) 、 (b) 、および（c ) から選ばれるものであり、

-H (a)

— CH₂ - COOH (b)

一 CH₂— COOX (c )

式（b) と（c ) の置換度の合計が 0. 3〜2. 0であり、

R ⁴および R ⁵はそれぞれ独立に、炭素数 9 ~ 2 7のアルキル基またはアルケニル基である。

1 9. 反応工程の後に、カルポキシメチルセルロールの.溶解度が 3 %未満で、水と相溶する沸点 1 0 0で未満の有機赚を用いて精製する工程をさらに含む、請求項 1 8に記載の製造方。

2 0. カルボキシメチルセルロールの溶解度が 3 %未満で、水と相溶する沸点 1 0 0で未満の有機溶媒がエタノールである請求項 1 9に記載の Mig方法。

2 1 . 反応工程に用いる水と相溶する有機溶媒が、テトラヒドロフラン、ジォキサン、およびジメチルスルホキシドからなる群より選ばれる少なくとも 1種である請求項 1 .8カゝら 2 0のいずれかに記載の方法。

2 2. 請求項 1 8から 2 1のいずれかに記載の i¾i方法により得られたセルロース誘と、下記式で表されるリン脂質とを、水および水と相溶する有機聽を含む混合灘を用いて混合し、次いでを除く工程を含んでなる、請求項 6から 9、 1 7のいずれかに記載のセルロース誘組成物の Mjg方法。

式中 R ⁶および R ⁷'はそれぞ'れ独立に炭素数 9〜 2 7のアルキル基またはアルケニル基であり R⁸は一 NH₃ +または.一 N (CH₃) ₃+である。

2 3. 溶媒を除く工程が、水による透析処理である請求項 2 2に記載の製造方法。

2 4. 請求項 1から 5のいずれかに記載のセルロース誘導体を含んでなる癒着防止材。

2 5. 請求項 6から 9、 1 7のいずれかに記載のセルロース誘導体組成物を含んでなる癒着防止材。

2 6. 水 1 0 0重量部に対し、請求項 1力、ら 5のいずに記載のセルロース誘導体を 0. 1〜 1 . 5重量部含む、注入可能なハイド口ゲル。

2 7. 7K 1 0 0重量部に対し、請求項 6力、ら 9、 1 7のいずれかに記載のセルロース誘導体物を 0. 1〜 5. 0重量部含む、注入可能なハイド口ゲル。