WO2004106335A1 - Derives harminiques, intermediaires utilises pour leur elaboration, procedes d'elaboration, et utilisation de ces derives - Google Patents

Description

去氢骆驼蓬碱衍生物类化合物、

其合成中间体、 其制备方法以及应用 发明领域

本发明属于药物化合物领域， 具体涉及生物碱类化合物； 更具体 地讲， 本发明涉及通式 （I ) 所示的去氢駱驼蓬碱衍生物类化合物； 其合成中间体、 其制备方法以及其用途。 现有技术描述

去氢狢驼蓬碱 ( Harmine )是 β -咔啉 ( β -carboline ) 类生物碱 家族的一员， 其化学名为 7-甲氧基 -1-甲基 -9H-吡咯 [3, 4-b]吲哚， 分 子式为 C₁₃H₁₂N₂0, 分子量 212.25， 熔点 261 °C , 化学结构式如下：

去氢骆驼蓬碱及其类似物广泛分布于自然界。 自首次分离到去氢 骆驼蓬碱类化合物以来， 人们开展了大量的去氢骆驼蓬碱类化合物的 合成研究， 据不完全统计， 到目前为止， 人们报道了约 300个以上的 去氢骆驼蓬碱类化合物， 新的去氢骆驼蓬碱类化合物仍在不断增加。

去氢骆驼蓬碱类化合物具有显著的抗肿瘤活性， 但也有明显的中 枢神经系统毒性。 其体外抗肿瘤活性试验结果表明， 骆驼蓬碱类化合 物对宫颈癌 Hela、 S-180 体外培养细胞、 肝癌 BEL-7402、 胃癌 MGC-803, 鼻咽癌 CNE2、 乳腺癌 MA782，5S、 白血病 K562等多种 体外培养的肿瘤细胞有明显的抑制作用； 体内抗肿瘤活性试验结果显 示骆驼蓬总碱、 骆驼蓬植物中提取的混合生物碱对小鼠 S-180、 网织 细胞肉瘤 L2、 小鼠肝癌都有显著的疗效， 与顺铂、 阿霉素联用有明 显协同作用； 然而， 骆驼蓬碱及其衍生物的毒性主要表现为神经系统 毒性。 急性毒性表现为神经系统先兴奋（颤抖、 竖尾、 惊厥） 、 后抑 制， 最后死亡， 未死亡的动物于给药次日即可恢复正常。 亚急性毒性 试验提示骆驼蓬总碱对造血系统、 免疫系统、 生殖系统并无明显毒性， 长期毒副作用也并不显著， 其毒性靶器官是肾脏。

目前的去氢駱驼蓬碱及其类似物虽然有明确的抗肿瘤活性， 但也 有明确的神经系统毒副作用， 还不存在一种既有高的抗肿瘤活性， 神 经系统毒性又低的化合物可用于临床上作为抗癌药物。 发明目的

本发明的目的在于克服上述现有技术的缺陷、 提供了一类具有增 强抗肿瘤活性并降低神经系统毒性或无神经系统毒性； 而且制备方法 筒单、 得率高的去氢骆驼蓬碱衍生物类化合物。

本发明的一个目的在于提供了一种通式（I ) 的去氢駱驼蓬碱衍生 物类化合物。

本发明的另一个目的在于提供了一种制备通式（I )化合物的方法。 本发明的另一个目的在于提供了一种制备 1， 7， 9-三取代 - β -咔 啉类生物碱化合物的方法。

本发明的另一个目的在于提供了一种制备 1 , 2, 3, 4-四氢 - β -咔 啉 -3 -羧酸、 及其酯类和盐类化合物的方法。

本发明的另一个目的在于提供了一种制备 9-取代 - Ρ -咔啉 -3-羧酸 及其酯类和盐类化合物的方法。

本发明的另一个目的在于提供了一种制备 9-取代的 1-曱基 - β -咔 啉 -3-羰基乙酯化合物的方法。

本发明的另一个目的在于提供了一种制备 9-取代的 1-甲基本-咔 啉 -3-羰基乙酯化合物的方法。

本发明的另一个目的在于提供了一种制备 2， 9-二苯甲基 - β -咔啉 -3-羰基乙酯碘盐化合物的方法。

本发明的另一个目的在于提供了一种制备 2， 9-二苯甲基 - β -咔啉 -3-羰基乙酯溴盐化合物的方法。

本发明的再一个目的在于提供了上述化合物的合成中间体式（9a- 16a ) 的化合物。

本发明的再一个目的在于提供了上述化合物的合成中间体式（9b- 16b ) 的化合物。

本发明的再一个目的在于提供了上述化合物的合成中间体式 ( 21a ) 的化合物。

本发明的再一个目的在于提供了上述化合物的合成中间体式

( 53a-55a ) 的化合物。

本发明的再一个目的在于提供了上述化合物的合成中间体式 ( 10b ) 的化合物。

本发明的另一目的在于提供了上述化合物在制备用于治疗肿瘤的 药物方面的用途。

本发明的另一目的在于提供了上述化合物在制备用于与光及射线 疗法联合治疗肿瘤的药物方面的用途。 发明筒述

本发明的去氢骆驼蓬碱衍生物类化合物具有下列通式（I )的结构:

其中，

是氢、 伯仲叔的直链或仲叔支链烷基、 。芳烷基或 1-5 的卤代、 硝基或胺基芳烷基、 杂环基、 链烯基；

R₂是氢、 羧基、 酯基、 羧酸盐、 酰胺基、 酰! ¾基或 ₆烷氧基羰 基、 芳香基氧基羰基、 杂环基氧基羰基；

R₃是氢、 羟基、 烷氧基、 羧基酯类、 羧酸盐类、 芳垸氧基、 杂环氧基；

R₄是氢、 烷基、 羟基烷基、 < ₆_₁₍₎芳烷基或 1-5的卤代芳烷 基、 芳羟基、 芳羧基、 芳酯基、 芳胺基、 芳硝基、 杂环基；

R₅是氢、 <^_₆伯仲叔的直链或支链烷基、 。芳烷基及其 1-5取 代芳烷基、 芳羟基、 芳羧基、 芳酯基、 芳胺基、 芳硝基、 杂环基； 并且 R₂、 R₃和 R₄不同时是氢； X—是卤素、 磺酸基、 硫酸基、 硝酸基 当 R₂和 R₄为氢时， 不为甲基且 R₃不为甲氧基；

当 为甲基时， R₂、 11₃和11₄不同时都为氢；

当 1^为甲基、 R₂为氢、 R₃为甲氧基时， R₄不为甲基、 乙基或丁 基；

当 1^和11₃为氢时， R₂不为甲氧基羰基且 R₄不为甲基。

上述通式 (I)化合物中 ， 优选 是氢或 ₄的烷基或 C₆_₈的芳 上述通式 (I)化合物中 ， 优选 是氢或 的烷基。

上述通式 (I)化合物中， 最优选 是氢。

上述通式 (I)化合物中 ， 优选 R₂是氢或 ₄的烷氧基羰基。

上述通式 (I)化合物中 , 优选 R₂是氢或 ₂的烷氧基羰基。

上述通式 (I)化合物中 , 优选 11₂是乙氧基羰基。

上述通式 (I)化合物中， 优选 R₃是氢、 羟基或 ₄的烷氧基。 上述通式 (I)化合物中， 优选 R₃是氢。

上述通式 (I)化合物中 ， 优选 R₄是氢、 的烷基、 的羟基 烷基或 c₆_₈的芳烷基或取代芳烷基。

上述通式（I)化合物中， 优选 R₄是氢、 的烷基、 ₂的羟基 烷基或 C₆_₈的芳烷基或取代芳烷基。

上述通式（I)化合物中， 优选 11₄是乙基或苄基。

上述通式（I)化合物中， 优选 R₄是苄基。

上述通式 （I)化合物中， 优选 为氢、 的烷基或 C₆.₈芳烷 基； R₂为氢、 羟基、 羧基、 酯基、 羧酸盐、 1¾素或 的烷氧基羰基; R₃为氢、 羟基或（^_₄的烷氧基； R₄为氢或 的烷基、 ₂的羟基烷 基、 C₆— ₈的芳烷基或取代芳烷基； R₅为氢、 _₆伯仲叔直链或支链烷 基和 。芳烷基及其取代芳烷基。

上述通式 （I)化合物中， 优选 为氢； R₂为 的垸氧基羰基； R₃为氢； R₄为 的烷基或 C₆.₈的芳香烷基或取代芳烷基。

上述通式（I)化合物中， 优选 为氢； R₂为乙氧基羰基； R₃为 氢； R₄为乙基或苄基。

上述通式（I)化合物中， 优选 为氢； 11₂为乙氧基藏基； R₃为 氢； 11₄为苄基。

上述通式 （I)化合物中， 最优选！^为甲基； 为乙氧基羰基； R₃为氢； R₄为五氟苄基； R₅为氢。

上述通式（I)化合物中， 最优选 为氢； R₂为氢； R₃为氢； R₄ 为苄基； ^为苄基； X为溴。

本发明的一种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 包括下列步 骤：

1 )将下式的去氢骆驼蓬碱 1溶于有机溶剂或混和有机溶剂中；

2)加入 60%NaH， 搅拌至无气泡产生；

3)加入 代烷烃；

4)将上述混合物在室温下搅拌反应 1-5小时；

5)进行常规后处理和纯化， 得到 1， 7， 9-三取代 P-咔咻类生物 碱化合物。

本发明的一种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 包括下列步 骤：

1 )将 L-色氨酸和 NaOH溶于水中；

2)加入甲醛，

3 )将上述混合物在搅拌下保持温度为 0°C ~回流温度反应 1 ~ 6 小时；

4)进行常规后处理， 得到 1， 2， 3, 4-四氢 咔啉 -3羧酸（9a) 化合物。

本发明的一种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 包括下列步 骤：

1 )将 β -咔啉 -3-羧酸酯溶于有机溶剂或混和有机溶剂中；

2)加入 60%NaH， 搅拌至无气泡产生；

3)加入离代烷烃或芳香烃；

4)将上述混合物室温或加热搅拌反应 2 ~5小时； 5) 进行常规后处理和纯化， 得到 9-取代 - β -咔啉 -3-羧酸酯化合 物。

本发明的一种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 包括下列步 骤：

1 )将 1-取代- β -咔啉 -3-羧酸酯溶于有机溶剂中；

2)加入 60%NaH， 搅拌 1~ 10分钟；

3)加入! ¾代烷烃或芳香烃；

4)将上述混合物室温反应或加热回流；

5)反应完毕后， 进行常规后处理和纯化， 得到 9-取代的 1-甲基- β -咔啉 -3-羰基乙酯化合物。

本发明的一种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 包括下列步 骤：

1 )将下式化合物 10b与水醋酸混和；

2 )加入二氧化硒；

3)将上迷混合物加热回流 12小时；

4)反应完毕后， 进行常规后处理和纯化， 得到 β-咔啉。

本发明的一种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 包括下列步

1 )将下式的化合物 10与有机溶剂和 60%NaH混和；

其中 Ri-H, 2 )将上述混合物室温搅拌反应 1 ~ 10分钟；

3)加入碘化苄；

4 )在 50-70°C搅拌反应 1 ~ 5小时；

5)进行常规后处理和纯化， 得到 2， 9-二苯甲基 -β-咔啉 -3-藏基 乙酯碘盐化合物。

本发明的一种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 包括下列步 骤：

1)将下式的化合物 10与有机溶剂和 60%NaH混和；

其中 R_{1 =} H， R₂ = C₂H₅；

2)加入溴化苄；

3 )将上述混合物在 50-70°C搅拌反应 1 10小时；

5) 进行常规后处理和纯化， 得到 2， 9-二苯甲基 咔啉 -3-羰基 乙酯溴盐化合物。

本发明的一种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 包括下列步 驟：

1)将下式的化合物 80与有机溶剂和 60% NaH混和；

2)加入溴化苄或碘化苄；

3 )将上述混合物在 50-70°C搅拌反应 1 ~ 10小时；

5) 进行常规后处理和纯化， 得到 1, 9-二苯甲基 咔啉溴盐或 碘盐化合物

, 即下式

( 9a-16a ) 的化合物:

da—16 a

其中：

！^是甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 正丁基、 未取代或! ¾代的苯基、 苯甲基、 苯丙基。

(9b-16b) 的化合物：

9b—16 b 其中：

1^和1₃同上述对式（9a-16a)化合物中 1^的定义。

本发明还制备了用于合成上述化合物的中间体化合物，

(21a) 的化合物：

21 同上述对式（9a-16a )化合物中 1^的定义,

明还制 ， 即下式 ( 53a-55a ) 的化合物：

533— 553 其中：

^是甲基、 乙基、 正丁基、 苯甲基、 苯丙基、 多 1¾代苯甲基或多 卤代苯丙基。 dob ) 的化合物：

其中：

1^和11₃同对式 （9a-16a )化合物 1^的定义。

本发明的化合物经过体外抗肿瘤活性试验以及体内抗肿瘤药效研 究， 显示出强的抗肿瘤活性及低神经系统毒性或无神经系统毒性， 并 且制备方法简便， 收率高， 可以用于制备低毒高效用于治疗肿瘤的药 物。

本发明的化合物通过选用 IJV 激发条件下， 可证实其光诱导的 DNA切割作用， 表明这类结构与抗肿瘤活性之间的构效关系， 还可 以用于制备与光及射线疗法联合治疗肿瘤的药物。 附图说明 图 1 是 P -咔啉生物碱衍生物对超螺旋 pGBK的 UV诱导切割图 i酱。

泳道 1: pGBK DNA; 泳道 2， DNA + UV照射； 泳道 3， DNA+化 合物 (lOOOuM)但没有 UV照射； 泳道 4-10， DNA +化合物 + TJV照射， 化合物浓度分别为 1000， 300, 100, 30， 10， 3 和 l(uM). 最上的奈带， 环形有切口的 DNA; 中间的条带， 线性 DNA; 最下的条带， 超螺旋 DNA.

图 2 是说明 β-咔啉生物碱衍生物对 CT-DNA的热稳定性的影响 的示意图。

图 3 是说明 β-咔淋生物碱衍生物对 CT-DNA的 UV光谱吸收影 响的示意图。

图 4 在无细胞体系中 β-咔啉生物碱衍生物对 DNA拓朴异构酶 I 的活性影响的示意图。

反应体系 （20ul) 含有 35mM Tris-HCl ( H 7.5), 50 mM C1, 5mM MgCl₂, ImM DTT, 2 mM 亚精胺， 0.1 mM EDTA, SOmg.l ¹ BSA 和 0.25ug超螺旋的 pGBK DNA和 1ϋ拓朴异构酶 I. 泳道 1， pGBK DNA; 泳道 2， DNA+拓朴异构酶 I； 泳道 3， DNA+拓朴异构酶 I +250uM camptothecin ； 泳道 4-9和泳道 10-15， 与泳道 2相同， 但是 分别加入了 2000uM， 600uM, 200 uM, 60 uM, 20 uM, 6 uM 的 β -咔啉 衍生物. Α代表化合物 80,81; B代表化合物 82，83； C代表化合物 37,36，· D代表化合物 42,48; E 代表化合物 49,66. 构型 I代表 环形的 DNA， 构型 II代表线性 DNA， Form III代表超螺旋 DNA.

图 5 是说明在无细胞体系中 β-咔啉生物碱衍生物对 DNA拓朴 异构酶 II 的活性的影响的示意图.

反应体系 (20ul)含有 50mM Tris-HCl (pH 8.0), 120 mM C1, lOmM MgCl₂, ImM DTT, 0.5mM ATP, SOmg.l ¹ BSA和 0.25ug 超螺 旋 pGBK DNA和 1U 拓朴异构酶 II. 泳道 1, pGBK DNA; 泳道 2, DNA+拓朴异构酶 Π;条带 3-8和条带 9-14， 同条带 2, 但是分别加入 2000uM, 600uM, 200 uM， 60 uM， 20 uM， 6 uM β -咔啉类生物碱衍生 物。 Α代表化合物 37， 36; B 代表化合物 49， 66; C 代表化合物 48, 86。 构型 I代表环形的 DNA， 构型 II 代表线性 DNA， 构型 III代 表超螺旋 DNA。 图 6 是说明 β -咔啉类生物碱衍生物诱导的 HepG2 细胞调亡 的 FCM 分析 (化合物 60的示意图。

图 7 是去氢骆驼蓬碱和 1,7,9-三取代的 β-咔啉生物碱衍生物的 TLC 图谱。

其中： 展开溶剂： （ΕΑ )

检测条件： UV 254 nm

斑点 1-8 分别代表化合物 1-8。

图 8 是 9-苯基丙基 -7-甲氧基 -1-甲基 -β-咔啉的 FAB-MS 图 i瞀。

图 9 是 9-苯基丙基 -7-甲氧基 -1-甲基 -β-咔啉的 IR 图谱。

图 10 是 9-苯基丙基 -7-甲氧基 -1-甲基 -β-咔啉的 UV 图谱。

图 11 是 9-苯基丙基 -7-甲氧基 -1-曱基 -β-咔啉的 iH- NMR图谱。 图 12 β -咔啉生物碱衍生物作用于人肝癌细胞系 HepG2后的形 态学观察照片。

图 13 β -咔啉类生物碱衍生物对 Lewis肺癌的抗肿瘤疗效图谱 图 14 咔啉类生物碱衍生物对肉瘤 S180的抗肿瘤疗效图谘 图 15 β -咔啉类生物碱结构修饰研究的合成路线 具体实施方式

实施例描述

I,⁷,⁹-三取代 β-咔啉类生物碱的合成

实验仪器及试剂

实验仪器

RE-52C旋转蒸发仪（河南予华仪器厂） ； SHZ-D ( III )循环真 空水泵（河南予华仪器厂） ； VV-8 型紫外点样分析仪（无锡科达仪 器厂） ； YRT-3熔点测定仪（天津大学精密仪器厂） ； ZAB-HS双聚 焦磁质语仪（英国 VG公司） ； Bruker Equinox 55型傅立叶变换红 外光谱仪， KBr压片； UV 2501PC型紫外光语仪（曰本岛津公司） ； Varian INOVA500超导核磁共振仪 (美国 Varian公司） ， TMS为内 标， CDC1₃为溶剂。 化学试剂 去氢骆驼蓬碱 ( Harmine 1 ) 由新疆华世丹药业股份有限公司提 供， 纯度 99%。 碘甲烷（分析纯， 浙江玉环生化试剂厂）； 碘乙烷（分 析纯， 浙江玉环生化试剂厂） ； 碘代正丁旄（化学纯， 中国医药集团 上海化学试剂公司） ； 2-捵乙醇 （美国 ACROS 有机试剂公司） ； 溴 化苄（化学纯， 上海化学试剂公司）； 1-溴 -3-苯基丙烷（美国 ACROS 有机试剂公司） ， 01 -溴-2，3,4，5，6-五氟曱苯（美国 ACROS有机试剂 公司） ； 其余试剂均为国产分析纯或化学纯。 合成路线

操作步骤

实施例 1 1，7，9-三取代 P-咔啉类生物碱合成的操作步骤

在 250ml圆底烧瓶中分别加入去氢骆驼蓬碱 1 ( 2.1g,10mmol ) ， 50ml DMF, 50ml THF, 室温搅拌至澄清， 然后加入 60 % NaH ( 0.6， 15mmol ) ， 搅拌至无气泡产生， 滴加鹵代烷（ 50mmol ) ， 室温搅拌 反应 5 h。 减压蒸除 THF， 剩余物倒入水水， 浓 HC1调节 pH至 3， 乙醚萃取。 水相用饱和碳酸氢钠溶液中和， 然后用乙酸乙酯萃取， 合 并萃取液， 水洗， 饱和盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 活性炭脱色， 过滤， 减压浓缩。 残留物用适量乙酸乙酯溶解， 硅胶柱层析， 乙酸乙酯作流 动相， 收集流动相， TLC跟踪检测。 洗脱液浓缩， 乙酸乙酯重结晶。 实施例 2 - 8 均按上述操作步骤操作。 实施例 2 7-甲氧基 -1,9-二甲基 -β-咔啉 (2) ： 得灰白色针状晶体

1.8g, 收率 80%， m.p.l21-123°C ₀ 实施例 3 7-甲氧基 -9-乙基小甲基 -β-咔啉 （3): 得灰白色针状晶体 体 2.0g， 收率 83% , m.p.99-10rc；。 实施例 4 7-甲氧基 -9-丁基 -1-甲基 -β-咔啉 （4): 得灰白色针状晶体

2.1g, 收率 78%， m.p.l04-105°C。 实施例 5 9-羟乙基 -7-甲氧基 -1-甲基 -β-咔啉 (⁵)： 得白色晶体 0.7g,

收率 54 %， m.p.204-206°C。 实施例 6 9-苯甲基 -7-甲氧基 -1-甲基 -β-咔啉 (6):

. 在 250ml圆底烧瓶中分别加入去氢骆驼蓬碱 1 ( 2.1g， lOmmol ) , 50ml DMF, 50ml THF, 室温搅拌 lOmin, 然后加入 60 % NaH ( 1.2g， 30mmol ) ， 搅拌至无气泡产生， 滴加溴化苄 （3ml ) ， 随后加热回流 8hr。 减压蒸除 THF， 剩余物倒入冰水， 浓 HCI调节 pH至 3， 乙瞇 萃取。 水相用饱和 &£« 0₃溶液中和（pH 8 ) ， 然后 EA萃取， 合并 萃取液， 水洗， 饱和盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩， 乙 酸乙酯重结晶， 得灰白色晶体 2.2g， 收率 67%， m.p.l31-133°C。 实施例 7 9-(2，，3，，4，,5,，6，-五氟）苯甲基 -7-甲氧基 -1-甲基 -β-咔啉

(7)：

在 100ml圆底烧瓶中分别加入去氢骆驼蓬碱 l ( 0.53g， 2.5mmol ) , 15ml DMF, 15ml THF, 室温搅拌至溶液澄清， 然后加入 60 % NaH ( 0.3g , 7.5mol ) , 搅拌至无气泡产生， 滴加 α -渙 -2，3,4，5,6-五氟甲 苯（0.5ml ) ， 室温搅拌反应 lhr。 然后按化合物 2的合成方法操作， 得灰白色针状晶体 0.64g， 收率 65%, ιη.ρ.173-174·Ό。 实施例 8 9-苯丙基 -7-甲氧基 -1-甲基 -β-咔啉 (⁸):

在 100ml圆底烧瓶中分別加入去氢骆驼蓬碱 1 ( 0.53g， 2.5mmol ) , 15ml DMF_?15ml THF, 室温搅拌至溶液澄清， 然后加入 60 %氢化钠 ( 0.3g, 7.5mmol ) ， 搅拌至无气泡产生， 滴加 1-溴苯丙烷（2ml ) ， 加热回流 12hr。 减压蒸除 THF, 剩余物倒入 30ml 冰水， EA萃取， 合并萃取液， 水洗， 饱和盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 减压浓缩 至干， 50ml无水乙醇溶解， 浓盐酸调节 pH至 4， 浓缩至干， 丙酮重 结晶， 得淡黄色固体。 将固体溶于水和 EA 的混合溶液， 碳酸氢钠饱 和溶液调节 pH至 8， 分出 EA层， 水相 EA萃取， 合并有机相， 水洗， 饱和食盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 活性碳脱色， 过滤， 浓缩， 乙醚重 结晶， 得灰白色针状晶体 0.42g， 收率 51% , m.p.117 - 118°C。 化合物的理化常数、 TLC和光谱学分析

7,9-取代的 β-咔啉衍生物的理化数据

Yield m.p

Comp Formula FW Appearance Solubility

( % ) ( °C )

溶于醇、 醚、

1 C₁₃H₁₂N₂0 212 ― 灰白色针形晶体 酯等有机溶 260-261

剂， 不溶于水

溶于醇、 醚、

2 C_l4H₁₄N₂0 226 80 灰白色针形晶体 酯等有机溶 121-123

剂， 不溶于水

溶于醇、 醚、

3 C_lsH₁₆N₂0 240 83 灰白色针形晶体 酯等有机溶 99-101

剂， 不溶于水

溶于醇、 醚、

4 C₁₇H₃₀N₃O 268 78 灰白色针形晶体 酯等有机溶 104-105

剂， 不溶于水

溶于醇、 醚、

5 C_1SH_1SN₂0₂ 256 62 白色晶体 酯等有机溶 204-206

剂， 不溶于水

溶于醇、 醚、

6 C₂₀H₁₈N₂O 302 54 灰白色针形晶体 酯等有机溶 131-133

剂， 不溶于水

溶于醇、 醚、

7 C₁₅H_uF₅N₂0 392 65 灰白色针形晶体 酯等有机溶 173-174

剂， 不溶于水

溶于醇、 醚、

8 330 51 灰白色针形晶体 酯等有机溶 117-118

剂， 不溶于水 表 7 1，7，9-取代的 β-咔啉衍生物的 FAB-MS, IR和 UV数据

FAB-MS IR UV

Comp. Formula

m/e ( M+1 ) ( KBr, cm ¹ ) (入 _max, nm )

1 C₁₃H₁₂N₂0 213 ND ND

3451,3380,2744,1628,1570,

345,332,302,

2 C₁₄H₁₄N₂0 227 1469,1348,1249,1152,1045,

264,244,213 810

3362,3128,1622,1564,1497,

344,332,302,

3 C₁₅H₁₆N₂0 241 1451,1346,1262,1217,1136,

264,243,213 1095,812

3428,2959,2927,2863,1884,

346,333,302,

4 C₁₇H₂₉N₂0 269 1621,1563,1497,1448,1356,

265,244,213 1242,1197,1137,812

3294,2696,1629,1569,1467, 327,304,248,

5 C_lsH₁₆N₂0₂ 257

1352,1155,1051,810 210

3421,2958,1620,1565,1498,

396,342,330,

6 C₂₀H_lgN₂O 303 1447,1404,1361,1256,1197,

301,244,209 1172,1044,825

2961,2836,1622,1502,1446,

337,325,300,

7 C₁₅H_uF₅N₂0 393 1256,1174,1122,1026,974

240,208 816

3052,2995,2931,2666,1881,

345,332,302,

8 C20H22N2O 330 1623,1563,1449,1408,1238,

265,244,210 1156,1043,801,744,702

Ll

T6S000/l700ZN3/X3d S££90I請 Z OAV 代表性的化合物的光语分析图镨

化合物 8的光谱学分析图谱见图 8至 图 11。

3取代和 1,3-二取代 β-咔啉类生物碱的合成 实验仪器及试剂

实验仪器

如上所述。 化学试剂

L-色氨酸（美国 ACROS 有机试剂公司） ； 甲醛溶液（分析纯， 广州化学试剂厂） ； 40%乙醛（分析纯， 中国医药集团上海化学试剂 公司） ； 丙醛（化学纯， 中国医药集团上海化学试剂公司） ； 正丁醛 (分析纯， 中国医药集团上海化学试剂公司） ； 苯甲醛（分析纯， 广 州化学试剂厂） ， 4-甲氧基苯甲醛（分析纯， 中国医药集团上海化学 试剂公司） ； 对羟基苯甲醛（分析纯， 上海双喜香料助剂厂） 。 其余 试剂均为国产分析纯或化学纯。 合成路线和操作步骤

合成路线 I

9 a R,=H

1 1 a R^CHg

1 2a R₁=CH₂CH₃

1 3a R₁=CH₂CH₂CH_;

1 4a

1 5a R^-^-OCH;

1 6 a R^-^-OH

实施例 9 1，2，3，4-四氢 -β-咔啉 -³-羧酸 (9a)的合成

在 250ml 的圆底烧瓶中加入 L-色氨酸 (10.2g， 50mmol), NaOH

：¾0 ( 201111)。搅拌至溶液澄清， 然后加入甲醛（37 % ; 50mmol ) , 混合物室温搅拌反应 3 h, 加热回流反应 3 h; 将混合物 倒入 200ml冰水中， 搅拌下用 5N HC1 调节 pH至 6, 即析出白色固 体， 水箱 4°C放置过夜， 过滤， 水洗， 少量甲醇洗涤， 干燥， 甲醇重 结晶， 得白色固体 9.2g， 收率 85%。 ιη.ρ.308-309Ό (文献： 309-310 °C ) 。 实施例 10 1,2，3，4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸酯合成的操作步驟

在 500ml 的圆底烧瓶中加入 1,2，³，4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸 9a (50mmol)、 甲醇或乙醇 （250ml )和二氯亚砜 ( 10ml ) , 加热回流 1- 2 h, 减压蒸除醇， 加入 100ml冷水， 饱和碳酸氢钠溶液调节 pH至 9, 乙酸乙酯萃取， 合并萃取液， 水洗， 饱和食盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 减压浓缩， 乙酸乙酯重结晶。 实施例 11 1，2，3，4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸甲酯 (9b): 得白色固体， 收率

57%。 实施例 12 1,2,3,4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯 (10b): 得白色针状晶体， 收率 63 %。 实施例 13 β-咔啉 -3-羧酸酯合成的操作步骤

在 100ml 的圆底烧瓶中加入化合物 9b-10b(⁵0nmiol)， 无水二甲 苯（200ml ) ， 硫（200mmol ) ， 混合物加热回流 12 h。 然后冷却至 室温， 4 °C冰箱放置过夜， 即析出淡黄色晶体， 过滤， 少量冷二甲苯 洗涤， 石油醚充分洗涤， -将固体溶于 2000ml相应的醇， 活性炭脱色， 用 200-300 目硅胶过滤， 滤液减压浓缩， 相应的醇重结晶。 实施例 9 - 10按上述操作步骤操作。 实施例 14 β-咔啉 -³-羧酸甲酯 (9): 得白色固体， 收率 66%。 m.p.308- 309。C。 实施例 15 β-咔啉 -3-羧酸乙酯 （10 ) ： 得白色固体， 收率 77%。 m.p.

230-231 "C (文献 ^w: 231-232 °C ) 。 实施例 16 1-甲基 -1,2,3，4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸（11a ) 的合成

在 250ml的圆底烧瓶中分别加入 L-色氨酸（5.10g, 25mmol ) 、 0.01M H₂SO₄30m 40%乙醛 9ml， 室温搅拌反应 8 h, 过滤， 水洗， 干燥， 得白色固体 4.0g， 收率 69%。 实施例 17 1-乙基 -1，2，3,4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸（12a ) 的合成

在 250ml的圆底烧瓶中分别加入 L-色氨酸（5.10g， 25mmol ) 、 水 300ml， 0.05M H₃S0₄ 30mK 丙醛 8ml， 室温搅拌反应 24h, 过滤， 水洗， 干燥， 得白色固体 4.5_g， 收率 74 %。 实施例 18 1-丙基 -1，2，3，4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸（13a ) 的合成

在 250ml的圆底烧瓶中分别加入 L-色氨酸（5.10g， 25mmol ) 、 水 300ml， 0.5M H₂S0₄ 50m 正丁酪 10 ml, 乙醇 100ml, 室温搅拌 反应 24h， 过滤， 水洗， 干燥， 得白色固体 3.75g， 收率 58%。 实施例 19 1-烷基 -1，2，3，4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯合成的操作步驟 将 1-烷基 -1,2,3,4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸 lla-13a ( 20mmol ) 、 无水 乙醇 250ml加入 500ml圆底烧瓶中， 小心加入重蒸二氯亚砜 6ml, 加 热回流 1 h， 然后减压蒸除乙醇， 得白色固体。 加水 100ml使白色固 体溶解， 无水碳酸氢钠饱和溶液中和， 乙酸乙酯萃取， 合并萃取液， 水洗， 饱和盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 活性炭脱色， 过滤， 减压浓缩， 乙酸乙酯重结晶。 实施例 20 - 22均按上述操作步骤操作。 实施例 20 1-甲基 -1，2，3，4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯 (lib): 白色固体， 收率 71 %。 实施例 21 1-乙基 -1，2，3，4-四氢 -β-咔啉 -³-羧酸乙酯 （12b ) ： 白色固 体， 收率 52 %。 实施例 22 1-丙基 -1，2，3，4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯 （13b ) ： 白色固 体， 收率 84%。 实施例 23 1-烷基 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯合成的操作步骤

在 500ml 圆底烧瓶中分别加入 1-烷基 -1，2,3,4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸 乙酯 llb-13b ( 20mmol ) 、 硫（ 60mmol ) 、 二甲苯 200ml， 加热回 流 10h， 然后冷却至室温， 4°C水箱放置过夜， 即析出淡黄色晶体， 过 滤， 少量冷二甲苯洗涤， 石油醚充分洗涤， 将固体溶于 2000ml无水 乙醇， 活性炭脱色， 用 200-300 目硅胶过滤， 滤液减压浓缩， 乙酸乙 酯重结晶。 实施例 24 - 26均按上述操作步骤操作。 实施例 ²4 1-甲基 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯 （11 ) ： 白色固体， 收率 48 %， m.p.217-218°C₀ 实施例 ²5 1-乙基 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯 （I² ) ： 白色固体， 收率 47

% ,m.p.209-210°C；。 实施例 ²6 1-丙基 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯 （I³ ) ： 白色固体， 收率 ⁵8%, m.p.l94-195°C。 实施例 27 1-芳香基 -1，2，3，4-四氢 -β-咔啉 -：3-羧酸合成的操作步骤 在 500ml的圆底烧瓶中分别加入 L-色氨酸（50mmol ) 、 相应得 芳香醛（ 55mmol )、 0.5M H₂S0₄( 50ml )、 H₂0( 150ml：)和乙醇 （ 100ml )， 加热回流 5 h, 然后加浓氨水（100ml ) ， 继续回流 1 h， 减压蒸除乙 醇，残余液冷却， 乙醚萃取，水相浓缩至 ⁵0ml， 5M HC1 中和（pH 5 )， 即析出白色固体， 过滤， 水洗， 干燥。 实施例 28 - 30 均按上述操作 步骤操作。 实施例 28 1-苯基 -1，2，3，4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸（14a ) ： 白色固体， 收 率 98%。 实施例 29 1-(4-甲氧基苯基) -1，2,3，4-四氢 -β-咔啉 -³-羧酸（ a ) ： 白 色固体， 收率 82%。 实施例 30 1-(4-羟基苯基) -1，2，3,4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸（l⁶a ) ： 淡黄 色固体， 收率 94%。 实施例 31 1-芳香基 -1，2，3，4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸酯合成的操作步骤

在 500ml的圆底烧瓶中分别加入 1-芳香基 -1，2，³,4-四氢 -β-咔啉 -³- 羧酸 14a-16a( 50mmol )、甲醇（250ml )，小心加入重蒸二氯亚砜 20ml， 加热回流 2 h, 然后减压蒸除甲醇， 过滤， 少量丙酮洗涤， 得灰白色 固体。 将上述固体溶于 300ml冷水， 饱和碳酸氢钠溶液调节 pH至 9， 乙酸乙酯萃取， 水洗， 饱和盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 乙酸乙酯重结 晶。 实施例 32一 34均按上述操作步驟操作。 实施例 32 1-苯基 -1，2，3，4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸甲酯 （14b ) ： 白色固 体， 收率 95%。 实施例 33 1-(4-甲氧基苯基) -1，2，³，4-四氢 -β-咔啉 -³-羧酸曱酯（ 1^ )

白色固体， 收率 90 %。 实施例 34 l-(4-羟基苯基) -1，2，3，4-四氢 -β-咔啉 -3-羧酸甲酯 （16b ) ： 白色固体， 收率 85%。 实施例 35 1-芳香基 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯合成的操作步骤

在 500ml 圆底烧瓶中分别加入 1-芳香基 -1，2，3，4-四氢 -β-咔啉 -3-羧 酸乙酯 14b-16b ( 20mmol ) 、 硫（ 60mmol ) 、 二甲苯 200ml， 加热 回流 18h， 然后冷却至室温， 4°C水箱放置过夜， 即析出淡黄色晶体， 过滤， 少量冷二甲苯洗涤， 石油醚充分洗涤， 将固体溶于 1000ml 乙 酸乙酯， 活性炭脱色， 用 200-300 目硅胶过滤， 滤液减压浓缩， 乙酸 乙酯重结晶。 实施例 36 - 38均按上述操作步驟操作。 实施例 36 1-苯基 咔啉 -3-羧酸甲酯 （14 ) ： 白色固体， 收率 69%，

m.p.257-258°C。 实施例 37 1-(4-甲氧基苯基) -β-咔啉 -3-羧酸甲酯 （15 ) ： 白色固体， 收率 63%, m.p.229-230°C。 实施例 38 1-(4-羟基苯基) -β-咔啉 -3-羧酸甲酯 （16 ) ： 白色固体， 收

率 56 %, m.p.267-269°C ₀ 合成路线 II

1 9

a) NaOH,EtOH;HCl b) SOCl₂,n-BuOH; c)CHCl₃,MeOH 实施例 39 p-咔啉 _³_羧酸（ Π ) 的合成

在 50ml 的圆底烧瓶中加入化合物 10(1.2g，5mmol)、 氢氧化钠 ( 0.8g, 20mmol )、 乙醇（20ml )， H₂0 (40ml), 混合物加热回流 2 h， 然后减压蒸除乙醇， 混合物用 5M HC1调节 pH至 5， 冰水冷却， 过 滤， 水洗， 乙醇重结晶， 得白色固体 0.96 g， 收率 90 % , m.p. 307-309 V (文献 ^11]： 310°C ) 。 实施例 40 β-咔啉 -³-羧酸丁酯 （18 ) 的合成

在 250ml 的圆底烧瓶中加入化合物 17(2.1g，10mmol)、 正丁醇 ( 100ml ) ， 二氯亚砜 (5ml)， 混合物加热回流 6 h, 然后减压蒸除过 量的正丁醇， 残留物溶于水， 加入乙酸乙酯， 搅拌下用饱和的碳酸氢 钠溶液调节 pH 至 8 , 分出有机层， 水相用乙酸乙酯萃取， 合并有机 相， 水洗， 饱和盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 活性碳脱色， 过滤， 减压 浓缩， 残留物乙酸乙酯溶解， 硅胶柱层析， 乙酸乙酯作流动相， TLC 跟踪检测， 收集液浓缩， 乙醚 /石油醚（2: 5 ) 重结晶， 得白色针状晶 体 1.8g， 收率 67 %。 m.p. 211-212 (文献 [1]: 210-211 "C ) 。 实施例 41 3-乙氨基 -β-咔啉 -3-甲酰胺（19 ) 的合成

在 250ml的干燥三口圆底烧瓶中，加入乙二胺 ( 24ml, 27mmol ) , 加热至 80 ~ 90 ,搅拌下滴加化合物 10 ( 2.4g， lOmmol )溶于 40ml 氯仿和 30ml甲醇的溶液，约 1 h加毕，回流反应 10 h,蒸去溶剂，残余物 中加入 50ml氯仿和 20ml水的混合液，冰箱放过夜，析出淡黄色固体，过 滤，干燥得得白色针状晶体 0.85_g，收率 30%。 m.p.233 ~ 236°C (文献 [1]: 234-237 , 25 % ) 。 合成路线 III

22 Ri=CH₃

21

23 Ι^0₂Η₅ 实施例 42 β-咔啉 -³-羰基肼 U0)的合成

β-咔啉 -3-羧酸乙酯（10) (2.4g, lOmmol)溶于乙醇中 （50ml) , 加入 85%的水合肼 （15ml) ， 加热回流 6h， 减压浓缩至 30ml， 冷却， 过滤， 乙醇洗涤， 空气中自然干燥， 得白色固体 2.0_g， 收率 ⁸0%。 分 析用样 可以用 90%的乙醇重结晶， 得白色发光晶体， m.p. 289-290 °C (文献 ^[1°^Q1: 289-291 °C)₀ 实施例 43 3- (叠氮羰基） -β-咔啉 ( 21a ) 的合成

在化合物 20 (2.0g, 2.9mmol ) 和水（50ml )形成的混悬液中， 滴加浓盐酸（1.0ml) 。 将淡黄色溶液冰浴冷却至 0°C， 然后滴加亚硝 酸（0.2g, 2.9mmol ) 的水溶液（10ml) 。 0°C反应 30min， 然后将反 应混合液用饱和的碳酸氢钠溶液碱化， 过滤收集固体物， 水洗， 真空 干燥， 得到 0.51g (收率 77%) 淡黄色固体， 该固体容易分解。 该产 物不需纯化， 可直接用于下一步反应。 实施例 44 ³-氨基 -β-咔啉 U1)的合成

将化合物 21a (0.6g, 2.5mmol )溶于 30ml水 /冰乙酸（1: 1)溶 液中， 加热回流， 在此过程中有二氧化碳气体产生， 同时原料逐渐消 失。 回流 30mm后， 将反应液冷却， 减压蒸除溶剂， 固体残余物用乙 醇重结晶， 过滤， 得到黄色片状结晶 0.35_g， 收率 77%， m.p.288-290 °C (文献 ^[1°^fl]: 289-291 °C)₀ 实施例 4⁵ 3- [(甲氧基羰基)氨基] -β-咔啉（ ²² ) 的合成

将化合物 21a (0.2g, 0.84mmol )溶于甲醇 （50ml) 中， 加热回 流 10h。 反应液冷却， 减压浓缩至 40ml, 重结晶， 过滤， 即得到白色 固体 0.12g， 收率 60%。 分析用产品可以用乙醇重结晶， m.p.180-182 °C, 然后在 230°C分解。 实施例 46 3- [(乙氧基羰基)氨基 ]- β-咔啉（ ²³ ) 的合成

将化合物 21a (0.2g, 0.84mmol) 溶于乙醇 （50ml) 中， 加热回 流 10hr。 反应液冷却， 减压浓缩至 40ml， 重结晶， 过滤， 即得到白 色固体 0.12g，收率 60%。分析用产品可以用乙醇重结晶， m.p.222-224 °C。 合成路线 IV

实施例 47 ³_羟甲基 -β-咔啉（²⁴) 的合成

化合物 10 (7.0g， 31mmol)溶于无水 THF (900ml) ， 然后加入 LiBH₄ ( 3.4g, 155mmol) ， 混合物室温搅拌 9 h, 反应混合物冷却， 然后加水（100ml) , 搅拌过夜， 減压蒸出溶剂， 加水（⁵00ml) ， 二 氯甲烷（1L) 萃取， 然后用乙酸乙酯取， 合并有机相， 减压浓缩， 硅 胶柱层析， 乙酸乙酯 /曱醇（3:1) 洗脱， 得白色固体 （5.0_g, 82% ) 。 m.p.228-230°C (文献【²¹: 225-228 "C ) 。 实施例 48 ³_乙酰基甲氧基 -β-咔啉（2⁵ ) 的合成

化合物 24 ( 1.98g, lOmmol ) 、 乙酸（50ml ) 混合后， 加热回流 2 h, 減压蒸出溶剂， 加水（100ml ) ， 乙酸乙酯萃取萃取， 合并有机 相， 水洗， 饱和食盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 减压浓缩， 乙醚重结晶， 得白色针状晶体 2.2g， 收率 92%。 m.p.l31-132°C 化合物的理化性质、 TLC和光谱学分析 表 9 3 和 I,³-取代的 -β-咔啉 - 3-羧酸酯衍生物的物理化学数据

3 和 1，³-取代的 -β-咔啉 -3-羧酸酯衍生物的

FAB-MS, IR和 UV数据

注： ND 代表未作。

3,9-二取代 β-咔啉类生物碱的合成

实验仪器及材料

实验仪器

如前所述 化学试剂

氢化钠 （德国 Merck-Sdmchardt公司） ； 碘甲烷（分析纯， 浙 江玉环生化试剂厂） ； 捵乙烷（分析纯， 浙江玉环生化试剂厂） ； 碘 代正丁烷（化学純， 中国医药集团上海化学试剂公司） ； 溴化苄 （化 学纯， 中国医药集团上海化学试剂公司） ； 1-溴 -3-苯基丙烷 （美国 ACROS有机试剂公司） ， " -溴-2，3，4，5，6-五氟甲苯 (美国 ACROS有 机试剂公司） ； 2-溴-乙酰苯酮 （美国 ACROS有机试剂公司） ； 2-溴- 4-苯基-乙酰苯酮 （美国 ACROS 有机试剂公司） ； 四氢铝锂 （美国 ACROS有机试剂公司） ； 其余试剂均为国产化学纯和分析纯。 合成路线及操作步骤

合成路线 I

26 R=CH₃

2 7 R=C₂H₅

28 =n-C₄H₉

29 R=CH₂-^

实施例 49 9-取代 -β-咔啉 -3-羧酸酯合成的操作步驟

在 250ml 圆底烧瓶中分别加入 β-咔啉 -3-羧酸酯 (lOmmol), 50ml DMF, 30ml THF, 室温搅拌至溶液澄清， 然后加入（50mmol ) NaH, 搅拌至无气泡产生， 滴加) ¾代烷烃或芳香烃 (60mmol), 室温或加热搅 拌反应 5h。 反应完毕， 减压蒸除 THF， 加入 200ml 2N盐酸水溶液， 甲苯萃取， 水相用饱和碳酸氢钠溶液中和， 然后乙酸乙酯萃取， 合并 萃取液， 水洗， 饱和盐水洗， 干燥， 过滤， 减压浓缩至干， 残留物硅 胶柱层析， 乙酸乙酯作流动相洗脱， TLC跟踪检测， 收集液浓缩， 乙 醚 /石油醚重结晶。 实施例 50 - 61均按上述操作步骤操作。 实施例 50 9-曱基 -β-咔啉 -3-羧酸甲酯 （26 ) ： 得白色针状晶体 1.8_g，

收率 75%。 m.p.215-216°C。 实施例 51 9-乙基 -β-咔啉 -3-羧酸甲酯 （27 ) ： 得白色针状晶体 2.0g,

收率 79% , m.p.l55-156°C。 实施例 52 9-丁基 -β-咔啉 -3-羧酸曱酯 （28 ) ： 得白色针状晶体 2.3_g，

收率 82%。 m.p.l81-183°C。 实施例 53 9-苯甲基 -β-咔啉 -3-羧酸甲酯 （29 ) ： 得白色晶体 2.3g，

收率 73%。 m.p.l87-188°C。 实施例 54 9-曱基 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯 （30 ) 得白色针状晶体 1.9g:

收率 75 %。 m.p.l39-140°C。 实施例 55 9-乙基 -β-咔啉 _³_羧酸乙酯 （31 ) 得白色针状晶体 1.8g:

收率 67 %。 m.p.ll7-118°C。 合成路线 II

3 3 R 37 ^R=GHr 实施例 56 9-丁基 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯 （32) ： 得白色针状晶体 2.3g， 收率 78%。 m.p.76-77°C。 实施例 57 9-苯甲基 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯 （33) ：

在 100ml 圆底烧瓶中 分别加入 P-咔啉 -3-羧酸 乙 酯 8(4.8g,20mmol), 80ml DMF, 100ml THF, 室温搅拌 15min， 然后加 入 60%氢化钠（2.4g， 60mmol)，搅拌至无气泡产生，加溴化苄（ 15ml), 加热回流约 12hr。然后按化合物 29的合成方法操作，得白色晶体 4.6g, 收率 70%。 m.p.l26-127°C。 实施例 58 9-甲基 -β-咔啉 -3-羧酸丁酯 （38) ： 得白色针状晶体 2.0_g，

收率 70%， m.p.235-238°C 实施例 59 9-乙基 -β-咔啉 -3-羧酸丁酯 （ 39 )： 得白色针状晶体 2.0g，

收率 65 %, m.p.86-88°C 实施例 60 9-丁基 -β-咔啉 -3-羧酸丁酯 （40) ： 得白色针状晶体 2.2g，

收率 74%。 m.p.94-95°C。 实施例 61 9-苯甲基 -β-咔啉 -³-羧酸丁酯 (41) ： 得白色晶体 1.2g， 收 率 67%。 m.p.l04-105°C。 合成路线 III

40 R=n-C₄H₉

41 R=GHj^ 实施例 62 9-取代 -β-咔啉 -3-羧酸合成的操作步驟

在 2⁵0ml圆底烧瓶中加入 9-取代 -β-咔啉 -³-羧酸酯 （20mmol) 、 水 200ml、 乙醇 100ml、 氢氧化钠 （ 4.0g， lOOmmol) ， 加热回流 2h， 冷却， 用 5N盐酸调 PH值至 6， 减压蒸除乙醇， 即析出淡黄色固体， 冷却， 过滤， 水洗， 干燥。 实施例 63- 66均按上述操作步骤操作。 实施例 63 9-甲基 -β-咔啉 -3-羧酸（：34) ： 得淡黄色固体， 收率 99%, in.p.267-269。C。 实施例 64 9-乙基 -β-咔啉 -3-羧酸（35) ： 得淡黄色固体， 收率 98%， m.p.201-202°C。 实施例 65 9-丁基 -β-咔啉 -3-羧酸（36) ：

在 100ml圆底烧瓶中加入化合物 32 (3.0g, lOmmol)、 水 100ml、 乙醇 50ml、 氢氧化钠 （2.0g, 50mmol ) ， 加热回流 2hr， 然后按化合 物 34的合成方法操作， 得淡黄色固体 2.7g， 收率 99%， m.p.182-184

°C。 实施例 66 9-苯甲基 -β-咔啉 -3-羧酸（37)得黄色固体， 收率 94%, m.p.261-262°C。 合成路线 IV

a) LiAlH4,THF; b)HAc 实施例 67 9-苯甲基 -3-羟甲基 -β-咔啉（42 ) 的合成

化合物 33 ( 3.3g, lOmmol ) 与无水 THF ( 100ml ) 混合， 然后滴 加到 LiAlH₄ ( 1.2g, 30mmol )和无水 THF ( 100ml ) 的混合液中， 加 毕， 回流反应 10 h。 TLC跟踪检测反应终点。 反应毕， 冷却至室温， 加入 10%的氢氧化钠 50ml， 搅拌 20min。 乙酸乙酯萃取， 水洗， 食 盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 减压浓缩， 硅胶柱层析， 乙酸乙酯洗脱， TLC跟踪检测，收集液浓缩，乙醚重结晶，得白色固体 1.5g，收率 52%。 m.p.l20-122°C。 实施例 68 9-苯甲基 -3-乙酰基氧甲基 -β-咔啉（43 ) 的合成

化合物 42 ( 1.44g, 5mmol ) 与乙酸（50ml ) 混合， 然后加热回 流 2 h, 反应完毕， 减压蒸去溶剂， 残留物中加水 100ml, 乙酸乙酯 萃取， 合并有机相， 水洗， 饱和盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 减压浓缩， 乙醚重结晶， 得白色固体 1.5g, 收率 94%。 m.p.l41-142°C 合成路线 V

实施例 69 9-苯曱基 -β-咔啉 -3-羧酸苯甲酯 （44 ) 的合成

化合物 17( 2.12g， lOmmol )与 DMF( 50ml )混合，室温搅拌 30miii， 然后加入 NaH ( 1.6g, 40mmol ) , 搅拌至溶液澄清。 随后加溴化苄 ( 5ml ) , 室温搅拌反应 1 h。 TLC 跟踪检测。 反应毕， 将反应混合 液倒入冷水（²00ml ) 中， 乙酸乙酯萃取， 水洗， 食盐水洗， 干燥， 减压浓缩至千， 无水乙醇溶解， 浓盐酸调节 pH 至 4， 浓缩至干， 丙 酮 /乙醚重结晶， 得浅黄色固体。 将浅黄色固体溶于水和乙酸乙酯的混 合溶液， 搅拌下用饱和的碳酸氢钠溶液调节 pH 至 8， 分出有机相， 水层乙酸乙酯萃取， 干燥， 活性炭脱色， 过滤， 浓缩， 乙醚重结晶， 得白色固体 2.3g， 收率 57%。 m.p.l69-170°C。 合成路线 VI

实施例 70 9-苯丙基 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯 （45) 的合成

化合物 10(1.2g， 5mmol)与 DMF(30ml)混合，室温搅拌 15min， 然后加入 NaH (0.6g, 15mmol) ， 搅拌至溶液澄清。 随后加 1-溴 -3- 苯基丙烷（2ml) ， 加热回流 4 h, TLC 跟踪检测。 反应完毕， 减压 蒸除 THF, 加入 200ml 2N盐酸水溶液， 乙醚萃取， 水相用饱和碳酸 氢钠溶液中和， 然后乙酸乙酯萃取， 合并萃取液， 水洗， 饱和盐水洗， 干燥， 过滤， 减压浓缩至干， 残留物硅胶柱层析， 乙酸乙酯作流动相 洗脱， TLC跟踪检测， 收集液浓缩， 乙酸乙酯重结晶， 得白色针状晶 体 l.Og, 收率 56%。 m.pl40-142°C。 实施例 71 9- (2，，3，,4，，5，，6，-五氟）苯甲基 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯 (46)

的合成

化合物 10(1.2g， 5mmol)与 DMF (30ml)混合， 室温搅拌 15min, 然后加入 NaH( 0.6g, 15mmol ),搅拌至溶液澄清。随后加 α -渙 -2，3，4,5，6- 五氟甲苯（1ml) ， 室温搅拌反应 1 li， TLC 跟踪检测。 然后按化合 物 45的合成方法操作， 得白色晶体 1.3g， 收率 62%。 m.pl53-154°C。 实施例 7^{2 9}-苯乙酮基 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯 （47) 的合成 化合物 10 ( 1.2g， 5mmol )与 DMF ( 30ml )混合，室温搅拌 15min， 然后加入 NaH ( 0.6g, 15mmol ) ， 搅拌至溶液澄清。 随后加入 2-溴- 乙酰苯酮 （2.0g) ， 加热回流 4 h, TLC跟踪检测。 然后按化合物 45 的合成方法操作， 得白色晶体 0.9g， 收率 50%。 m.p.246-248°C。 实施例 73 9-取代 -β-咔啉 -3-羧酸合成的操作步骤

⁹-取代 -β-咔啉 羧酸乙酯 （lOmmol) 、 氢氧化钠 （50mmol) 、 水（100ml)和乙醇 （50) 混合， 加热回流 2 h, 将反应混合物冷却至 室温， 5M盐酸调节 pH至 6， 冷却， 过滤， 水洗， 干燥， 得淡黄色固 体。 实施例 74- 76均按上迷实验操作步驟操作。 实施例 ⁷4 9-苯丙基 -β-咔啉 -3-羧酸 (48): 得淡黄色固体， 收率 97% , m.p.213-215°C。 实施例 75 9- (2，，3，，4，，5，,6，-五氟）苯甲基 -β-咔啉 -3-羧酸 (49) ： 得 白色固体， 收率 98%， m.p.>270°C。 实施例 76 9-苯乙酮基 -β-啼啉 -3-羧酸 (50)： 得淡黄色固体 1.6g, 收 率 97%， m.p. >270。C。

合成路线 νπ

55 R^CHgCgHg R₂=CH₂CH₃

实施例 77 9-乙基 -β-咔淋 -3-羰基肼 (51)的合成

化合物 31 ( 2.7g, lOmmol )溶于乙醇中 （50ml ) ， 加入 85%的 水合肼 （15ml ) , 加热回流 6hr, 减压浓缩至 30ml， 冷却， 过滤， 乙 醇洗涤， 空气中自然干燥， 得白色固体 2.0g, 收率 83%。 分析用样品 可以用 90%的乙醇重结晶， 得白色发光的片状晶体， m.p. 195-196 °C 实施例 78 9-乙基 -3- (叠氮羰基) -β-咔啉 (53a)的合成

在化合物 51 ( 2.54g, lOmmol )和水（200ml )形成的混悬液中， 滴加浓盐酸（20ml ) 。 将淡黄色溶液冰浴冷却至 0 C， 然后滴加亚硝 酸（2.1_g, 30mmol ) 的水溶液（30ml ) 。 0°C反应 30min， 然后将反 应混合液用饱和的碳酸氢钠溶液碱化， 过滤收集固体物， 水洗， 真空 千燥， 得到淡黄色固体 2.3g， 该固体容易分解。 该产物不需纯化， 可 直接用于下一步反应。 实施例 79 9-乙基 -3- [(甲氧基羰基)氨基] - β-咔啉（53 ) 的合成 将化合物 53a ( 0.6g, 5mmol )溶于甲醇（50ml) 中， 加热回流 10 h。 反应液冷却， 减压浓缩至 30ml， 无水乙醇重结晶， 过滤， 少量乙 醇洗涤， 即得到白色固体 0.4g， 收率 59%。 m.p.21³_214°C。 实施例 80 9-乙基 -3- [(乙氧基羰基)氨基] -β-咔啉（54) 的合成

将化合物 53a ( 1.32g, 5mmol ) 溶于乙醇 （100ml) 中， 加热回 流 10 h。 反应液冷却， 减压浓缩至 30ml， 重结晶， 过滤， 即得到白 色固体 0.8g， 收率 56%。 m.p.217-218°C。 实施例 81 9-苯甲基 -β-咔啉 -3-羰基肼 （⁵2) 的合成

化合物 33 (3.3g, lOmmol )溶于乙醇中 （100ml) ， 加入 85%的 水合肼（20ml) ， 加热回流 10 h， 减压浓缩至 50ml， 冷却， 过滤， 乙醇洗涤， 空气中自然干燥， 得白色固体 ².⁸g， 收率 ⁸⁷%， m.p. 209- 21Γ。。 实施例 82 9-苯甲基 -3- (叠氮羰基） -β-咔啉（55a) 的合成

在化合物 55 (3.16g, lOmmol)和水（500ml)形成的混悬液中， 滴加浓盐酸（20ml) 。 将淡黄色溶液冰浴冷却至 0°C， 然后滴加亚硝 酸（2.1g, 30mmol ) 的水溶液（50ml) 。 0°C反应 30min, 然后将反 应混合液用饱和的碳酸氢钠溶液碱化， 过滤收集固体物， 水洗， 真空 干燥， 得到 2.9g淡黄色固体， 该固体容易分解。 该产物不需纯化， 可 直接用于下一步反应。 实施例 83 9-苯甲基 -3- [(乙氧基叛基)氨基] -β-咔啉（⁵5) 的合成

将化合物 55a (2.9g, 8.86mmol )溶于乙醇 （150ml) 中， 加热回 流 10h。 反应液冷却， 减压浓缩， 乙酸乙酯重结晶， 得白色固体 1.8g， 收率 ⁵⁷%。 分析用产品可以用乙醇重结晶， m.p.²1⁸_²1⁹°C。 化合物的理化性质、 TLC和光谱学分析 表 12 ³，9-二取代的 β-咔啉 -3-羧酸酯衍生物的物理化学数据 产率 m.p.

Comp. 结构式 FW 外观 溶解度

(%) (。C) 溶于醇、醚、 酯、

26 C₁₄H₁₃N₂0₂ 240 75 白色针状晶体 215-216 氯仿等

溶于醇、 醚、 酯、

27 C_1SH₁₄N₂0₂ 254 79 白色针状晶体 155-156 氯仿等

溶于醇、 醚、 酯、

28 C₁₇H₁₈N₂。₂ 282 82 白色针状晶体 181-183 氯仿等

溶于醇、醚、 酯、

29 2οΗ₁₆Ν₂0₂ 316 73 白色晶体 187-188 氯仿等

溶于醇、 醚、 酉 、

30 C₁₅H₁₄N₂0₂ 254 75 白色针状晶体 139-140 氯仿等

溶于醇、 醚、 酯、

31 C_1SH₁₆N₃0₂ 268 67 白色针状晶体 117-118 氯仿等

溶于醇、 醚、 酯、

32 Ci H₂₂N₂0₂ 296 78 白色针状晶体 76-77 氯仿等

溶于醇、 醚、 酯、

33 2ΐΗ₁₈Ν₂0₂ 330 70 白色固体 126-127 氯仿等

34 Ci3H_{10 2}O₂ 226 99 淡黄色固体 溶于醇、 DMSO 267 - 269

35 C₁₄H₁₂N₂0₂ 240 98 淡黄色固体 溶于醇、 DMSO 201 - 202

36 C₁₆H₁₆N₂0₂ 268 99 淡黄色固体 溶于醇、 DMSO 182 - 184

37 C₁₉H₁₄N₂0₂ 302 94 淡黄色固体 溶于 DMSO 261 - 262 溶于醇、醚、 酯、

38 C H₁₈N₂0₂ 282 70 白色针状晶体 235 - 238 氯仿等

溶于醇、 醚、 酯、

39 CigH₂oN₂0₃ 296 65 白色针状晶体 86-88 氯仿等

溶于醇、 醚、 酯、

40 C₂₁H₂₄N₂0₂ 324 74 白色针状晶体 94 - 95 氯仿等 溶于醇、 醚、 酯、

C23H22N2O2 358 67 白色固体 105 - 106 氯仿等

溶于醇、 醚、 酯

C₁₉H₁₆N₂0 288 52 白色固体 120 - 122 氯仿等

溶于醇、 醚、 酯

330 94 白色针状晶体

氯仿等

溶于醇、 醚、 酯

392 57 白色固体 16 - 170 氯仿等

溶于醇、 醚、 酯

C23H22N20₂ 358 56 白色晶体 140 - 142 氯仿等

C₂₁F_sH₁₃N₂0 溶于醇、 醚、 酯

420 62 白色固体 153 - 154

2 氯仿等

溶于醇、 醚、 酯

358 50 白色固体 246-248 氯仿等

0ζιΗ₁₈Ν₂Ο₂ 330 97 淡黄色固体 溶于 DMSO 213-215

C₁₉F₅¾N₃0₂ 392 98 白色固体 溶于 DMSO 〉270

330 97 淡黄色固体 溶于 DMSO > 270

C₁₄H₁₄N₄0 254 83 白色发光晶体 溶于醇、 DMSO 195-196

C₁₉H_ltfN₄0 316 87 白色发光晶体 溶于醇、 DMSO 209-211

C₁₅H_lsN₃0₂ 269 59 白色固体 溶于醇、 酯 213-214

C₁₆H₁₇N₃0₂ 283 56 白色固体 溶于醇、 酯 217-218

C2iH₁₉N₃0₂ 345 57 白色固体 溶于醇、 酯 218-219

3，9-二取代的 -β-咔啉 -3-羧酸酯衍生物的

FAB-MS, IR和 W数据

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8.67(lH,s,H-4),8.55(lH,s,H-l),8.16-8.17(lH,d,J=8Hz,H-8),7.56-7.59(lH,m,H-5),

53 7.40-7.42(lH,d,J=8Hz,H-6),7.23-7.26(lH,m,H-7),4.37-4.41(2H,m,NCH₂CH₃),3.87

(3H,s,OCH₃)1.45-1.48(3H,m,NCH₂CH₃)

8.68(lH,s,H-4),8.59(lH,s,H-l),8.15-8.17(lH,d,J=8Hz,H-8),7.55-7.59(lH,m,H-5),

54 7.39-7.40(lH,d,J=8.5Hz,H-6),7.23-7.26(lH,m,H-7),4.32-4.38(4H,m,NCH₂CH₃,

OCH₂CH₃)，1.41-1.47(6H，m,NCH₂CH₃，OCH₂CH₃)

8.88(lH,s,H-4),8.78(lH,s,H-l),8.21-8.22(lH,d,J=7.5Hz,H-8),8.06-8.08(2H,d, J=8Hz,H-5,H- 6),7.67-7.70(lH,m,H-7),7.54-7.60(3H,m,Ar-H),7.35-7.38(lH,m,Ar-H),7.31-

55

7.32(lH,d,d=8Hz,Ar-H),5.79(2H,s,NC¾-Ar),4.51-4.55(2H,m,OCH₂CH₃),1.47-1.50(3H,m, OCH₂CH₃)

1,3,9-三取代 β-咔啉类生物碱的合成 实验仪器及试剂

实验仪器和实验试剂如上所述相同。

合成路线及操作步驟 合成路线

实施例 84 9-取代的 1-甲基 -β-咔啉 -3-'疑基乙酯合成的操作步骤

1-取代 咔淋 _³_羧酸乙酯（lOmmol ) 与 DMF ( 50ml ) 混合， 室 温搅拌至溶液澄清，然后加入 60%氢化钠（ 50mmol )，搅拌 5min， 然 后加入卤代烷烃或芳香烃 （50mmol ) ， 室温反应或加热回流， TLC 跟踪检测。 反应毕， 将反应混合物倒入冷水中， 乙酸乙酯萃取， 水洗， 饱和盐水洗， 干燥， 活性炭脱色， 减压浓缩至干， 50ml无水乙醇溶解， 用浓盐酸调 pH 至 3-4, 浓缩， 丙酮 /乙醚重结晶， 过滤得盐酸盐。 将 盐酸盐固体加入 100ml水和乙酸乙酯的混合溶液， 碳酸氢钠中和， 静 置， 分出乙酸乙酯层， 水相乙酸乙酯萃取， 无水硫酸钠干燥， 活性炭 脱色， 过滤， 浓缩 ， 残留物乙酸乙酯溶解， 硅胶柱层析， 乙酸乙酯 作流动相， TLC跟踪检测， 收集液浓缩， 乙醚重结晶。 实施例 85 - 96 均按上述实验操作步骤操作。 实施例 85 1，9-二甲基 -β-咔啉 -3-羰基乙酯 （56 ) ： 得白色晶体 2.2_g，

收率 82%。 m.p.l41-142°C。 实施例 86 9-乙基 -1-曱基 -β-咔啉 -3-羰基乙酯 （57 ) ： 白色晶体 2.3_g，

收率 81% , m.p.96-98。C。 实施例 87 9-苯甲基 -1-甲基 -β-咔啉 -3-漀基乙酯 （58 ) ：

化合物 10 ( 2.54g， lOmmol ) 与 DMF ( 50ml ) ， 室温搅拌至溶 液澄清， 然后加入 60%氢化钠 （1.2g ) ， 搅拌 5min， 然后加入溴化 苄 （6ml ) , TLC 跟踪检测， 室温反应 12h。 反应毕， 将反应混合物 倒入冷水中， EA 萃取， 水洗， 饱和盐水洗， 干燥， 活性炭脱色， 减 压浓缩至干， 50ml无水乙醇溶解， 通入干燥氯化氢气体至溶液 pH为 3-4, 浓缩， 丙酮 /乙醚重结晶， 过滤得盐酸盐， 加入 100ml 水溶解， 碳酸氢钠中和， 乙酸乙酯萃取， 无水硫酸钠干燥， 活性炭脱色， 过滤， 浓缩 ， 过硅胶层析柱， 乙酸乙酯洗脱， 乙醚重结晶， 。 将盐酸盐固 体白色晶体 2.5g， 收率 73%。 m.p.l55-156°C ₀ 实施例 88 9-苯丙基 -1-甲基 -β-咔啉 -3-羰基乙酯 （59 ) ：

化合物 10 ( 2.54g， lOmmol ) 与 DMF ( 50ml ) ， 室温搅拌至溶 液澄清， 然后加入 60%氢化钠 （1.2g) ， 搅拌 5min, 然后加入 1-溴- 3-苯基丙烷（10ml) , TLC跟踪检测， 室温反应约 15h。 然后按化合 物 58的合成方法操作得白色晶体 2.8g, 收率 75%, m.p.l01-102°C。 实施例 89 9-(2，，3，，4，，5，，6，-五氟）苯甲基 -1-曱基 -β-咔啉 -3-羰基乙酯

(60) ：

化合物 10 (1.3g， lOmmol)与 DMF (50ml) ， 室温搅拌至溶液 澄清， 然后加入 60%氢化钠 （1.2g) ， 搅拌 5miii， 然后加入 oc-溴- 2,3,4,5,6-五氟甲苯 (2ml) ， TLC 跟踪检测， 室温反应约 lhr。 然后 按化合物 58 的合成方法操作， 得白色块状晶体 1.5g， 收率 68%。 m.p.l45-146°C。 实施例 90 9-苯乙酮基 -1-甲基 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯 （61) ： 得白色絮 状固体 1.6g, 收率 43%。 m.p.219-220°C。 实施例 91 1-丙基 -9-甲基 -β-咔啉 -3-羰基乙酯（68):得白色晶体 2.2_g，

收率 74%。 m.p.l08-109°C。 实施例 92 1-丙基 -9-乙基 -β-咔啉 -3-羰基乙酯（69):得白色晶体 2.0_g，

收率 65%。 m.p.86- 87°C。 实施例 93 9-苯甲基小丙基 -β-咔啉 -3-羰基乙酯 （70) ： 得白色晶体

1.8g, 收率 64%。 m.p.158- 159°C。 实施例 94 9-苯丙基 -1-丙基 -β-咔啉 -3-羰基乙酯 （71 ) ： 得白色晶体

1.7g, 收率 57%。 m.p.92— 93°C。 实施例 95 1-苯基 -9-甲基 -β-咔啉 -3-羰基甲酯（76):得白色晶体 2.4_g，

收率 76%。 m.p.205-207。C。 实施例 96 1-苯基 -9-乙基 -β-咔啉 -3-羰基甲酯（77):得白色晶体 2.3_g，

收率 69%。 m.p.l69-170°C。 合成路线 II

实施例 97 1,9-取代的 β-咔啉 -3-羰酸合成的操作步骤

1，9-二取代的 β-咔啉 -3-羰基酯 （lOmmol ) 、 水（100ml ) 、 乙醇 ( 50ml )和氢氧化钠 （50mmol ) 混合， 加热回流 2 h, 5M HCl调节 pH至 6， 减压蒸除乙醇， 析出浅黄色固体， 冷却， 过滤， 水洗， 干燥。 实施例 98 - 102均按上述实验操作步骤操作。

实施例 98 1,9-二甲基 咔啉 -3-羧酸（62 ) ： 得浅黄色固体 0.58g，

收率 97%。 mp.262-264°C。 实施例 99 9-乙基 -1-甲基 -β-咔啉 -3-羧酸（63 )： 得浅黄色固体 0.62g，

收率 97%。 mp.243-245°C。 实施例 100 9-苯曱基 -1-甲基 咔啉 -3-羧酸 （64 ) ： 得浅黄色固体

0.78g, 收率 98%。 m.p.246-248O。 实施例 101 9-苯丙基 -1-甲基 -β-咔啉 -3-羧酸（65 ) ： 得浅黄色固体

0.84g, 收率 97%。 m.p.l86-188O。 实施例 102 9-(2，,3，，4，，5，，6，-五氟）苯甲基 -1-甲基 -β-咔啉 羧酸 (66) ： 得灰白色固体 1.0g， 收率 98%。 m.p.191-193

°C。 合成路线 III

76 R₃=GH₃ 78 R₃=GH₃

^{77 R}3^=C2^H5 79 R₃=C₂H

实施例 103 9-苯乙酮基 -1-甲基 -β-咔啉 -3-羧酸 （67) ： 得白色固体

0.84g, 收率 98%。 m.p. >270°C。 实施例 104 9-曱基 -1-丙基 -β-咔啉 -3-羧酸（72):得浅黄色固体 0.52_g, 收率 97%。 m.p.l81-183°C。 实施例 105 1-丙基 -9-乙基 -β-咔啉 -3-羧酸（73):得浅黄色固体 0.54_g，

收率 96%。 m.p.189- 191°C。 实施例 106 9-苯甲基 -1-丙基 -β-咔啉 -3-羧酸 （74) 得浅黄色固体

0.66g, ， 收率 96%。 m.p.l93-194°C。 实施例 107 9-苯丙基 -1-丙基 -β-咔啉 -³-羧酸 （7⁵) 得浅黄色固体

0.72g, 收率 97%。 m.p.l76-178C。 实施例 108 9-甲基小苯基 -β-咔啉 -3-羧酸（78):得浅黄色固体 0.74g，

收率 98%。 m.p.223-224° ( 。 实施例 109 9-乙基 -1-苯基 -β-咔啉 -3-羧酸（79):得浅黄色固体 0.77_g， 收率 97%。 m.p.l94-195°C ₀

化合物的理化性质、 TLC和光谱学分析

表 15 1，3，9-取代的 -β-咔啉 -3-羧酸酯衍生物的物理化学数据 产率 m.p

Comp. 结构式 FW 外观 溶解度

(%) CC) 溶于醇、 醚、 酯

56 C₁₆H₁₆NA 268 82 白色晶体 141-142 氯仿等

溶于醇、 醚、 酯

57 Ci7H₁₈N₂0₂ 282 81 白色晶体 96-98 氯仿等

溶于醇、 醚、 酯

58 344 73 白色晶体 155-156 氯仿等

溶于醇、 醚、 酯

59 C24H24N2O2 372 75 白色晶体 101-102 氯仿等

溶于醇、 醚、 酯

60 C₂₂F₅H₁₅NA 434 68 灰白色晶体 145-146 氯仿等

溶于醇、醚、酯、

61 C23H20 2O3 372 43 白色絮状固体 219-220 氯仿等

62 C₁₄H₁₂N₂0₃ 240 97 淡黄色固体 溶于醇、 DMSO 262-264

63 C₁₅H₁₄N₂0₂ 254 97 淡黄色固体 溶于醇、 DMSO 243-245

64 C N₂0₂ 316 98 淡黄色固体 溶于 DMSO 246-248

65 C₂₂H₂₀N₂O₂ 344 97 淡黄色固体 溶于 DMSO 186-188

66 406 97 灰白色固体 溶于 DMSO 191-193

67 C₂₁H_lfiN₂0₃ 344 98 白色固体 溶于 DMSO > 270 溶于醇、醚、酯、

68 C SH20N2O2 296 74 白色晶体 119-110 氯仿等

溶于醇、醚、酯、

69 Ci H_{23 2}0₂ 310 65 白色晶体 86-87 氯仿等 溶于醇、醚、酯、

C2 H2 20₃ 372 64 白色晶体 158-159 氯仿等

400 57 白色晶体 溶于醇、 醚、 酯 92-93

C N₂0₂ 268 97 淡黄色固体 溶于醇、 應 SO 181-183

C₁₇H₁₈N₃0₂ 282 96 淡黄色固体 溶于醇、 腹 SO 189 - 191

344 96 淡黄色固体 溶于 DMSO 193-194

372 97 淡黄色固体 溶于 DMSO 176-178 溶于醇、醚、酯、

2οΗ₁₆Ν₂0₂ 316 76 白色晶体 205-207 氯仿等

溶于醇、醚、酯、

C₂₁H_i8N₂0₂ 330 69 白色晶体 169-170 氯仿等

C₁₉H₁₄N₂0₂ 302 98 白色固体 溶于 DMSO 223-234

C2oH₁₆N₂0₂ 316 97 白色固体 溶于 DMSO 194-195

表 15 1，³，⁹-取代的 -β-咔啉 -3-羧酸酯衍生物的

FAB-MS, IR和 UV数据

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T6S000/l700ZN3/X3d S££90I請 Z OAV

化学试剂

L-色氨酸（美国 ACROS 有机试剂公司） ； 40%甲醛溶液（分析 纯， 广州化学试剂厂） ； 二氧化硒（美国 ACROS 有机试剂公司） ； 溴化苄 （化学純， 中国医药集团上海化学试剂公司） ； 碘曱烷（分析 纯， 浙江玉环生化试剂厂）； 碘乙烷（分析纯， 浙江玉环生化试剂厂）； 碘代正丁烷（化学纯， 中国医药集团上海化学试剂公司） ； 其余试剂 均为国产分析純或化学纯。 合成路线及操作步驟

81 R=CH₃

82 R=CH₂CH₃

83 R=n^_C₄H₉

84 R二 CH₂G₆H₅ a)HCHO,NaOH,HCl;b)HAc,Se0₂;c)EtOH,SOCl₂ d)DMF,THF,NaH,RI 实施例 lio β-咔啉的合成（ so )

化合物 10b ( 24.4g, O.lmol ) 、 水醋酸（ 500ml ) 混合， 然后加 入二氧化硒（20g， 0.2 mol ) ， 加热回流 12 h。 减压蒸除水醋酸， 残 留物加入 1M的氢氧化钠溶液 200ml， 乙酸乙酯萃取，合并有机相， 1M 氢氧化钠溶液洗， 水洗， 饱和盐水洗， 干燥， 活性炭脱色， 过滤， 减 压浓缩， 乙酸乙酯重结晶， 得白色固体 10.0g。 收率 60%。 m.p.197-198 °C (文献 ^[2QI: 198-200 °C ) 实施例 111 9-取代 β-咔啉合成的操作步骤

β-咔啉 80 ( 1.68g, lOmmol ) 、 DMF ( 50ml ) 混合， 然后加入卤 代烷烃或芳香烃 （50mmol ) , 室温搅拌反应 5 h， TLC跟踪检测。 反 应完毕， 反应混合物中倾入冰水中， 乙酸乙酯萃取， 合并有机相， 水 洗， 饱和盐水洗， 干燥， 活性炭脱色， 过滤， 减压浓缩， 残留物硅胶 柱层析， 用石油醚 /丙酮 （2: 1 )作流动相， TLC 跟踪检测， 收集液 浓缩， 乙醚重结晶。 实施例 112 9-甲基 -β-咔啉（ 81 )： 得白色针状固体 1.4g， 收率 77%， m.p.l08-109°C。 实施例 113 ⁹-乙基 -β-咔啉（⁸² ) ： 得黄色油状物 1.5g， 收率 76%。 实施例 114 9-丁基 -β-咔啉（ 8³ )： 得白色针状固体 1.6g， 收率 71%， m.p.78-79°C。 实施例 115 9-苯甲基 -β-咔啉（84 )： 得白色针状固体 1.8g。 收 69% , m.p.ll8-120°C。 化合物理化性质、 TLC和光谱学分析

9-取代的 β-咔啉衍生物的物理化学数据

FAB-MS,IR和 UV数据 9-取代的 β-咔啉衍生物

9-取代的 β-咔啉衍生物的 iH-NMR数据

2，9-二取代 β-咔啉类生物碱的合成

实验仪器和试剂

实验仪器

所需实验仪器如上所述。 化学试剂

如上所迷。

合成路线及操作步骤 实施例 116 2,9-二苯甲基 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯碘盐 （85) 的合成

化合物 10 (1.2g， 5mmol) 、 DMF (50ml)和 60%氢化钠（0.6g, 15mmoI )混合， 室温搅拌反应 5min, 然后加入碘化苄（5ml) , 50-60 °(搅拌反应 2 h， 反应混合物倒入 50ml冷水中， 乙酸乙酯萃取， 无水 硫酸钠干燥， 浓缩， 得金黄色固体， 无水乙醇重结晶两次， 得金黄色 固体 2.3g， 收率 84%。 m.p.>270O。 实施例 117 2,9-二苯甲基 -β-咔啉 -3-羧酸乙酯溴盐 （86) 的合成 化合物 10 (1.2g， 5mmol) 、 D F (50ml)和 60%氢化钠（0.6g， 15mmol ) 混合， 然后加入溴化苄 （4ml) ， 50-60°C搅拌反应 5 h, 反 应混合物倒入 50ml冷水中， 乙酸乙酯萃取， 无水硫酸钠干燥， 浓缩， 得金黄色固体， 无水乙醇重结晶，得金黄色固体 1.8g， 收率 72%。 m.p. >270°C。

实施例 118 2，9-二甲基 -β-咔啉溴盐 （87) 的合成

化合物 80 ( 0.84g, 5mmol )、 DMF ( 30ml)和 60%氢化钠（ 0.3g， 15mmol ) 混合， 然后加入溴甲烷（30mmol) ， 50-70°C搅拌反 0.5 h。 反应混合物倒入 100ml冷水中， 乙酸乙酯萃取， 无水疏酸钠干燥， 浓 缩，得淡黄色固体，无水乙醇重结晶，得固体 1.2g,收率 73%。 m.p.>270 。C。 实施例 119 2，9-二乙基 -β-咔啉溴盐 （88 ) 的合成

化合物 80 ( 0.84g， 5mmol )、 DMF ( 30ml )和 60%氢化钠（0.3g， 15mmol ) 混合， 然后加入溴乙綻 ( 30mmol ) ， 50-60。( ；拌反应2 11， 反应混合物倒入 100ml冷水中， 乙酸乙酯萃取， 无水硫酸钠干燥， 浓 缩， 得淡黄色固体， 无水乙醇重结晶， 得淡黄色固体 l.lg， 收率 63%。 m.p.>270。C。 实施例 120 2,9-二苯甲基 咔啉溴盐 （89 ) 的合成

化合物 80 ( 0.84g, 5mmol )、 DMF ( 30ml )和 60%氢化钠（ 0.3g， 15mmol )混合，室温搅拌反应 10min，然后加溴化苄（ 50mmol )， 50-60 °C搅拌反应 5 h， 反应混合物倒入 75ml冷水中， 乙酸乙酯萃取， 无水 硫酸钠干燥， 浓缩， 得黄色固体， 无水乙醇重结晶， 得黄色固体 1.8g， 收率 76%。 m.p.>270°C。 化合物的理化性质和光镨学分析 表 21 2,9-二取代的 -β-咔啉衍生物的物理化学数据 产率 m.p.

Comp. 结构式 FW 外观 溶解度

(%) CC)

85 548 84 金黄色固体 溶于醇、 DMSO和水 >270

86 C₂₈H₂₅N₂Br0₂ 501 72 金黄色固体 溶于醇 DMSO和水 >270

87 C₁₃H₁₃IN₂ 324 73 淡黄色固体 溶于甲醇、 DMSO和水 >270

88 C₁₅H₁₇IN₂ 352 63 淡黄色固体 溶于甲醇、 DMSO和水 >270

89 476 76 淡黄色固体 溶于曱醇、 DMSO和水 >270 ²,9-二取代的 -β-咔啉衍生物的 FAB-MS，IR和 UV数据

2，9-二取代的 β-咔啉衍生物的 ¹ H-NMR数据

Comp. ¾-NMR ( δ , DMSO-d_s )

?.88(lH,s,H-4),9.30(lH,s,H-l),8.55-8.57(lH,d,J=7.5Hz,H-8),7.87-7.92(2H,m,H-5,

86 H-6),7.55-7.59(lH,m,H-7),7.20-7.36(lOH,m,Ar-H),6.39(2H,s,⁺N-CH₂-

Ar),5.98(2H,s,NCH₂-Ar),4.44-4.48(2H,m,OCH₂CH₃),1.34-1.37(3H,m,OCH₂CH₃)

9.42(lH,s,H-4),8.66-8.67(lH,d,J=6.5Hz,H-l),8.51-8.52(lH,d,J=6.0Hz,H-8),8.43-

87 8.45(lH,d,J=8Hz,H-3),7.83-7.91(2H,m,H-5,H-6),7.50-7.53(lH,m,H-7),4.57(3H,m,

⁺NCH₃),4.13(3H,m,NCH₃)

9.61(lH,s, H-4),8.68-8.69(lH,d,J=6.5Hz,H-l),8.61-8.63(lH,d,J=6.5Hz,H-8),8.42- 8.44(lH,d,J=8Hz,H-3),7.84-7.89(2H,m,H-5,H-6),7.48-7.51(lH,m,H-7),4.83-

88

4.87(2H,m,⁺NCH₂CH₃),4.67-4.72(2H,m,NCH₂CH3),1.75-1.78(3H,m,⁺NCH₂CH₃),1.51-1.54 (3H,m,NC¾CH₃)

9.57(lH,s, H-4),8.71(2H,s,H-l,H-8),8.42-8.44(lH,d,J=8.5Hz,H-3),7.81-7.82(2H,m,

89 H-5, H-6),7.40-7.50(6H,m,H-7,Ar-H),7.19-7.28(5H,m,Ar-H),5.95(2H,s,N⁺CH₂Ar),

5.86(2H,s, NC¾Ar) 实施例 121急性毒性实验

材料与方法

1 实验材料

(1) 受试化合物： 化合物 11、 16、 33、 36、 37、 42、 48、 55、 84、 86。

(2) 实验动物： 昆明种小鼠 （中科院上海实验动物中心提供， 合格证 号： 沪动合证字第 107号） ， 体重 19-20_g， 雌雄各半。 每 10只 小鼠一组。

(3) 溶剂： 生理盐水、 0.5%CMC-Na溶液

2 实验方法

(1) 剂量设置

根据预试结果， 各样品设计五档剂量， 剂量间距 0.8倍。

(2) 药物配制

各样品称量后， 实验时加少量吐温 80 湿润助溶， 然后逐渐加入 0.5%CMC-Na溶液至所需浓度即可。 实验体积 0.5ml/20g 小鼠。

(3) 给药方式

单次腹腔给药。

(4) 急性毒性试验

取昆明种小鼠， 按性别随机分组， 各组按剂量设置分别腹腔给药， 观察小鼠给药后的即时反应。 死亡动物进行解剖观察， 存活动物继续 观察二周， 并记录二周内动物死亡情况。 二周后将存活动物进行解剖， 观察实盾性脏器的病变， 具有实质性病变的脏器作病理检查。 根据各 组动物的死亡数， 以 Bliss 方法计算药物的半致死剂量（LD_S。值） ； 对于毒性较小的化合物求出最大耐受剂量（MTD ) 。

表 27 化合物 36对小鼠腹腔途径给药急性毒性试验 性别 剂量 动物数 死亡分布（天） 死亡率 动物体重 MTD mg/kg 只 12345678910—21 % 始 /末 ( g ) mg/kg 雄 300 5 1000000000—0 20 20.0/25.5

240 5 0000000000--0 0 20.2/25.0

192 5 0000000000--0 0 20.1/26.2

153.6 5 0000000000--0 0 20.1/26.2

122.9 5 0000000000— -0 0 20.2/26.4

雄 300 5 2000000000—0 40 19.7/24.3

240 5 0000000000--0 0 19.5/24.5

192 5 0000000000—0 0 19.8/24.9

153.6 5 0000000000—0 0 19.7/24.8

122.9 5 0000000000—0 0 19.9/25.2

雌雄 300 10 3000000000--0 30 >300 各半 240 10 0000000000—0 0

192 10 0000000000—0 0

153.6 10 0000000000—0 0

122.9 10 0000000000---0 0

OT o— OOOOOOOOOl ox β'ζζτ o— ooooooooos 01 9'£Sl

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T6S000/l700ZN3/X3d S££90I請 Z OAV 表 31 化合物 55对小鼠腹腔途径给药急性毒性试验 性別 剂量 动物数 死亡分布（天） 死亡 动物体重 MTD mg/kg 只 12345678910—21 率 始 /末 ( g ) mg/kg

%

雄 300 5 2000000000—0 40 20.1/25.3

240 5 0000000000—0 0 20.2/25.7

192 5 0000000000—0 0 20.0/25.9

153.6 5 0000000000—0 0 20.0/26.2

122.9 5 0000000000—0 0 20.0/26.1

雌 300 5 3000000000—0 60 19.5/24.0

240 5 0000000000—0 0 19.8/24.5

192 5 0000000000—0 0 19.7/24.7

153.6 5 0000000000—0 0 19.7/24.6

122.9 5 0000000000—0 0 19.9/24.9

雌雄 300 10 5000000000—0 50 240 各半 240 10 0000000000—0 0

192 10 0000000000—0 0

153.6 10 0000000000—0 0

122.9 10 0000000000—0 0

O90oiAV s££/u塞ud I6i0 S

$^^令 ^ ¾5v aJ.

化合物 86对小鼠腹腔途径给药急性毒性试验 性別 剂量 动物数 死亡分布 (天） 死亡率 LD_S0(95%CL) mg/kg 12345678910—21 % mg/kg 雄 100 5 1350000000—0 90

80 5 0132000000—0 60

64 5 0031100000—0 50

51.2 5 0011100000—0 20

40.96 5 0000000000—0 0

100 5 2341000000--0 100

80 5 0322000000—0 70

64 5 0121000000—0 40

51.2 5 0111000000—0 30

40.96 5 0000000000—0 0

雄雄 100 10 3691000000—0 95 65.7 各半 80 10 0454000000—0 65 (58.25-74.11)

64 10 0152100000—0 45

51.2 10 0122000000--0 25

40.96 10 0000000000—0 0

3 实验结果

3.1 一般症状的观察

各样品给药后小鼠即时出现局部收腹、 拉伸、 松毛、 行动迟緩等 症状， 未见明显震颤、 扭曲、 跳跃等神经毒性症状。 动物死亡高峰除 化合物 86外均出现在当天， 化合物 86的死亡高峰出现在给药后 2-3 天。 死亡动物进行解剖， 大体观察未见明显的脏器异常。 未死亡动物 逐渐恢复正常。

3.2 神经毒性和 LD_S。/MTD实验结果

剂量-反应数值结果及 tD_5Q值或 MTD值见 Table 120-1 至 Table 120-10。

为了便于比较， 我们将前一阶段的急性毒性试验结果^[1531和本次试 验结果总结于表 34。 表 34 β-咔啉生物碱衍生物的神经毒性和

急性毒性（LD₅。/MTD )结果

化合物 R_t R₂ R₄ ¾ LD_S0 MTD ； f 经毒， ^

I^s c¾ H H CH₃0 H 59.00 - ++

2* CH₃ H H CH₃0 CH₃ 28.92 - ++

3^s CH₃ H H CH3O C₂Hs 24.25 - -H-

6* CH₃ H H CH₃0 c c₆¾ 147.82 -

11 CH₃ H H H 183.47 一 ―

16 C^-p-OH H C0₂CH₃ H H 一 240 -

17* H H COOH H H 135.22 - ―

26* H H C0₂C₂H_s H CH₃ 70.61 - +

27" H H C0₂C₂H₅ H C₂Hs 95.06 - 4-

33 H H C0₂C₂H₅ H CJ¾C_SH₅ 240.38 - ―

36 H H COOH H - >300 ―

37 H H COOH H C C₆H₅ 163.48 ― ―

42 H H CI¾OH H ^CI¾C₆H₅ 247.13 - ―

48 H H COOH H 219.19 - 一

55 H H H 一 240 ―

H₅

84 H H H H - 240

86 H C0₂C₂H₅ H C C₆H₅ 65.7 - 实施例 122体外抗肿瘤活性实验

1材料与方法

1.1 实验材料

(1) 主要试剂

RPMI1640培养基（美国 GIBCO公司） 、 MTT(Sigma公司）、 胎牛血清（美国 GIBCO公司或 Hyclone公司产品）、 HEPES ( Sigma 公司） 、 胰酶工作液（0.125%胰蛋白酶 Sigma公司， 0.01%EDTA, 溶于 D-Hanks液） 、 DMSO (美国 Sigma公司），细胞冻存液（90%FBS + 10%DMSO ) 、 D-Hanks平衡盐溶液（即为无钙、 镁离子的 Hanks 溶液： 8g NaCl、 0.4g KC1 、 0.06g Na₂HP0₄.2H₂0 、 0.06g KH₂P0₄.2H₂0、 0.35g NaHC0₃溶于 lOOOmL三蒸水中， 不加酚红） 、 PBS ( 8g NaC 0.2g KC 1.56g Na₂HP0₄.2H₂0, 0.2g KH₂P0₄.2H₂0 溶于 lOOOmL三蒸水中）

测试化合物： 本文第二部分所合成的 88 个化合物和去氢骆驼蓬 减 ( Harmine, 1 ) 。

细胞株: HepG2、 PLA-801 , Bel-7402. BGC-823, Hela、 Lovo NIH3T3。

(2)主要仪器

超净工作台、 C0₂细胞培养箱、 酶标仪 （ELX800, BIO-TEK INSTRUMENT, INC. ) 、 倒置显微镜、 液氮罐、 超纯水系统、 各种型 号的滤器、 正压过滤系统、 离心机、 恒温水浴锅等

其他试剂及仪器： 硫酸青霉素钠、 盐酸链霉素、 DMSO(Sigma公 司产品）、 碳酸氢钠、 酒精、 新洁尔灭、 各种型号细胞培养瓶、 培养皿， 96孔 /24孔 /6孔细胞培养板、 玻璃离心管、 玻璃吸管、 吸头、 玻璃套 管、 细胞计数板、 各种型号微量移液器、 细胞冻存管、 镊子等。

1.2 实验方法

(1) 培养液的配制

按产品说明书将 RPMI1640 培养基粉溶于适量的三蒸水中。 每 1000ml培养液中加入 ⁵.94g HEPES和 2.0g 碳酸氢钠， 此为基础培养 液。 完全培养液中加入终浓度 10%FBS、 ΙΟΟϋ/mI青霉素和 100 g/ml 链霉素。 用磁力搅拌器充分搅拌后， 调： PH至 6.8-7.0， 定容。 过滤除 菌， 分装， 密封贮存于 4°C备用。

(2) 细胞的培养和传代

细胞置于细胞培养器皿中， 加入 RPMIIMO完全培养液， 置于 37 °C、 含 5%C0₂的培养箱中培养。 细胞进入对数生长期后生长旺盛， 如培养液颜色变黄， 须及时更换。

在细胞生长进入平台期之前需要传代。 贴壁细胞传代时， 先吸去 旧培养液， 加入适量的胰酶工作液进行消化。 待细胞开始变圆、 脱落 时加入完全培养液终止消化， 用吸管轻轻吹打壁上的细胞使之脱落。 转入离心管内以 lOOOrpm离心 5分钟左右， 弃去上清。 加入培养液吹 散细胞， 以 1/10到 1/20 的细胞浓度接种回培养器皿中。 悬浮或半悬 浮生长的细胞传代时， 用吸管将细胞吹打均匀， 直接以 1/10 到 1/20 的浓度接种到新的培养液中。

(3)细胞的冻存和复苏

取对数生长期细胞（贴壁细胞先用胰蛋白酶消化、 离心收集， 悬 浮或半悬浮细胞直接通过离心收集） ， 加入事先配制并贮存于 4°C的 细胞冻存液将细胞吹散成单细胞悬液， 并调节浓度至 10⁶至 5 χ 10⁶个 细胞 /ml。 转入冻存管， 用布包裹， 依次放入 4°C、 -20°C、 -80°C及悬 于液氮上方， 让其緩慢降温， 次日放入液氮罐。

复苏时， 从液氮罐中取出冻存管， 迅速放入 37°C的水浴中， 并不 停摇动使细胞快速解冻。 在超净工作台中转入玻璃离心管， 加入少量 培养液冲洗细胞， lOOOrpm 离心。 弃上清， 重复冲洗一次。 转入培养 器皿中置（ 0₂培养箱中培养。

(4)肿瘤细胞株生长状况的形态学观察

将细胞培养在 96 孔细胞培养板中， 培养至对数生长期， 加入预 设浓度的待测样品， 同时加入等量的溶解药物所用的溶媒作为对照。 在不同的时间点将药物处理细胞和对照细胞置于光学显微镜下观察， 记录细胞形态变化情况， 拍照。

(5) MTT法测定 IC₅₍₎值

将细胞以约 10⁵个 /ml的密度接种于 96孔板， 每孔接种 100μ1， 置 co₂培养箱中培养至对数生长期。 然后按预设的浓度梯度加入待测 样品， 每一梯度至少 3 个重复。 对照组加入等体积的溶解样品用的溶 剂。 继续培养 48小时后， 每孔加入 20 μ 1的 MTT ( 5mg/ml ) , 然后 置于 ³⁷°C温育 4小时。 小心除去上清后， 每孔加入 ΙΟΟ μ Ι的 DMSO, 振荡约 lOmin溶解沉淀， 随后用酶标仪检测 OD值， 波长 490nm。 用 下式求出每一样品浓度下的细胞存活率：

存活率％ =样品组平均 OD值 /对照组平均 OD值 X 100%

以细胞存活率对药物浓度对数作图， 按作图法求出每个样品的 IC_5fl 值。

3 实脸结果

3.1肿瘤细胞株生长状况的形态学观察

肿瘤细胞生长的状况的形态学观察见图 12。

从图上可以看出 β-咔啉类生物碱对人肝癌细胞 HepG2作用后， 引起了细胞形态的显著变化。

3.2 MTT法测定的 IC₅。值

1,7,9-三取代 β-咔啉类生物碱的 IC_5e 值

1,7，9-三取代 β-咔啉类生物碱对 7个细胞株的 IC₅。值结果总结于 表 35。 表 35 1，7，9-三取代 P-咔啉类生物碱对 7个细胞株

的 IC_5e值结果（μιηοΐ/ml )

2. 3取代和 1，3-二取代 β-咔啉类生物碱的 I o值

3-取代和 1，3-二取代（3-咔啉类生物碱对 7个细胞株的 IC₅。值结果 见表 36。 表 36 3-取代和 1,3-二取代 β-咔啉类生物碱对 7个细胞株

的 IC₅Q值（μιηοΐ/ml )

3. 3,9-二取代 β-咔啉类生物碱的 IC₅₀值

3,9-二取代 β-咔啉类生物碱对 7个细胞株的 IC_5Q值结果总结于表

37 。 表 37 3,9-二取代 β-咔啉类生物碱对 7个细胞株

的 IC₅₍₎值（μιηοΐ/ml )

化合物 R₉ PLA-801 HepG2 Bel7402 BGC823 Hela Lovo NBH3T3

26 cooc CH₃ 0.12 0.12 0.19 0.18 0.18 0.18 0.09

27 cooc¾ c₂ 0.29 0.16 0.53 0.25 0.21 0.11 0.13

28 COOCH3 0.14 0.46 0.43 0.31 0.29 0.17 0.08

29 COOCH3 CH2 C₆Hj 0.48 1.77 0.06 0.95 0.12 0.31 0.36

30 COOC₂H₅ CH₃ 0.12 0.15 0.14 0.15 0.18 0.10 0.10

31 COOC₂H₅ C₂ 0.17 0.11 0.26 0.14 0.14 0.07 0.10

32 COOC₂H₅ n-CA 0.07 0.48 0.78 0.76 0.49 0.17 0.06

33 COOC₂H₅ 0.17 0.08 0.34 0.15 0.01 0.12 0.05

34 COOH CH₃ 0.27 0.15 0.33 0.13 0.09 0.09 0.13

35 COOH C₂ 0.21 0.18 0.23 0.16 0.18 0.06 0.14

36 COOH n-C₄B, 0.09 0.17 0.09 0.12 0.06 0.01 0.02

37 COOH 0.10 0.10 0.11 0.05 0.09 0.04 0.05

38 COOC₄H₉ CH₃ > 3.0 1.61 > 3.0 >3.0 > 3.0 2.52 > 3.0

39 COOC₄H_s C₂ 0.11 0.07 0.07 0.08 0.07 0.08 0.08

40 COOC₄H_s n-C₄Hs 2.12 1.08 1.08 0.07 0.95 0.04 0.05

41 COOC₄H₉ C C₆]¾ 0.99 >3.0 >3.0 > 3.0 > 3.0 1.08 > 3.0

42 CI¾OH C C_SI¾ 0.16 0.09 0.11 0.11 0.12 0.10 0.09

43 C¾OOCCH₃ 0.25 0.30 0.13 > 3.0 0.50 >3.0 >3.0

44 COOCHjCsEls >3.0 > 3.0 > 3.0 > 3.0 > 3.0 > 3.0 > 3.0

45 COOC₂H₅ > 3.0 > 3.0 0.387 > 3.0 > 3.0 >3.0 >3.0

46 COOC₂H₅ C C₆F₅ 0.05 0.12 0.01 0.05 0.98 0.04 0.06

47 COOC₂H₅ CH₂COC¾ > 3.0 > 3.0 1.02 > 3.0 >3.0 >3.0 >3.0 8 COOH 0.26 0.03 0.05 0.03 0.10 0.01 0.03 9 COOH C C₆F_S 0.09 0.03 0.06 0.04 0.04 0.01 0.02 0 COOH c¾cocy¾ 0.14 0.09 0.14 0.06 0.07 0.07 0.05 1 CO HNBj C₂Hs 0.51 0.26 0.37 0.11 0.24 0.19 0.51 2 CONHN¾ 0.52 0.14 0.06 0.27 0.25 0.25 0.22 3 HCOOCH3 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 4 HCOOC₂H₅ >3.0 >3.0 1.68 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0 5 HCOOC₂H₅ 0.52 >3.0 2.44 >3.0 >3.0 2.13 1.79

1,3，9-三取代 β-咔啉类生物碱的 I 。值

1，3,9-三取代 β-咔啉类生物碱对，个细胞株的 I 。值结果

38。 表 38 1，3，9-三取代 β-咔啉类生物碱对 7个细胞株

的 IC₅Q值结果（μιηοΐ/ml)

69 0.71 0.11 0.33 0.23 0.09 0.10 0.10

70 0.16 0.79 1.01 1.01 0.81 1.17 1.57

71 0.26 0.12 0.91 1.32 0.06 0.06 0.19

72 1.40 1.17 >3.0 0.54 0.96 0.21 0.57

73 0.71 0.54 0.57 0.39 0.42 0.26 0.39

74 0.27 0.17 0.18 0.27 0.16 0.14 0.16

75 0.23 0.13 0.20 0.24 0.14 0.08 0.11

76 >3.0 >3.0 0.62 >3.0 >3.0 >3.0 >3.0

77 >3.0 >3.0 0.38 >3.0 2.66 0.070 0.140

78 0.65 0.16 0.28 0.21 0.17 0.11 0.15

79 0.11 0.16 0.14 0.25 0.14 0.10 0.12

9-取代 β-咔啉类生物碱衍生物的 IC₅₀值

9-取代 β-咔啉类生物碱衍生物对 7个细胞株的 IC_5Q值结果总结于 39。 表 39 9-取代 β-咔啉类生物碱衍生物对 7个细胞株的

IC₅₀值结果（μπιοΐ/ml )

2，9-二取代 P-咔啉生物碱衍生物的 IC_S0值

2，9-二取代 β-咔啉类生物碱对 7个细胞株的 IC₅。值结果总结于表 。 ²，⁹-二取代 β-咔啉类生物碱对 7个细胞株的

IC₅。值结果（μιηοΐ/ml )

实施例 123体内抗肿瘤活性实验

1材料与方法

1.1实验材料

(1) 受试化合物

化合物 10、 11、 14、 15、 16、 31、 33、 37、 36、 42、 48、 55、 84、 86 (化学结构见 Table 12-3)。 阳性对照品为注射用环碑酰胺（上海化 联制药集团产品） 。

(2) 实验动物

C₅₇BL/6 小鼠及昆明种小鼠 （中科院上海实验动物中心提供， 合 格证号： 沪动合证字笫 107号） ， 体重均为 18-20_g， 雌雄皆可， 每批 实验使用同一性别。 抗肿瘤实验 C₅₇BL/6小鼠及昆明种小鼠 8-10只小 鼠一组， 阴性对照各为两组。

(3) 瘤源 小鼠 Lewis 肺癌、 S180 肉瘤， 由上海医药工业研究院药理 室传代维持。

(4) 溶剂 生理盐水、 0.5%CMC-Na溶液。

1.2实验方法

(1) 剂量设置

受试药物设高、 低两个剂量组， 分别以该药物腹腔单次给药 LD₅₀ 或 MTD值的 1/5、 1/10为基准。

(2) 药物配制 称取各受试样品， 实验时加少量 Tween-80 湿润助溶， 逐渐加入 0.5%CMC-Na溶液至所需浓度即可。 实验体积为 0.5ml/20g 小鼠。

(3) 给药方案

腹腔给药， 每天 1次， 连续给药 10天， 共给药 10次。

阴性对照给以等体积的相应溶剂， 给药方案均为腹腔途径， 每天

1次， 连续 10天。 阳性对照 CTX按 30mg/kg的剂量， 每天一次， 连 续 7天。

(4) 抗肿瘤药效试验步骤

采用体内抗肿瘤腋皮下接种模型： 无菌条件下取生长旺盛的瘤 源， 以匀浆法制备成约 l x lOVml 的细胞悬液， 于相应宿主腋皮下接 种 0.2ml/鼠， 次曰按实验设计方案给药， 三周左右处死各组动物， 剖 取肿瘤称重， 按下式计算抑瘤率：

抑瘤率％ =〖 (阴性对照组平均瘤重 -给药组平均瘤重） I

阴性对照组平均瘤重] 100%

在给药后， 同时观察小鼠的即时反应， 重点观察是否出现跳跃、 震颤、 扭曲等神经毒性症状。

表 41 β-咔啉类生物碱衍生物对小鼠 Lewis肺癌的 抗肿瘤疗效实验结果

注 1: ***表示与阴性对照相比 Ρ<0·01。 β-咔啉类生物碱衍生物对小鼠肉瘤 S180的 抗肿瘤疗效实验结果

注 1: 表示与阴性对照相比 Ρ<0·01。 2 实臉结果

2.1 一般症状观察

所有测试的 14 个化合物给药后， 均不出现震颤、 跳跃、 扭曲等 神经毒性症状。 表明所有的化合物均没有神经毒性。

2.2 抗肿瘤疗效的实验结果

对 Lewis肺癌的疗效试验结果见表 41，疗效实象图见图 13;对 S180 肉瘤的结果见表 42， 疗效实象图见图 14。

为了便于比较， 我们将体内抗肿瘤疗效实验结果总结于表 43。 从表 4³ 中的结果可以看出：

( 1 )所有测试的 22个化合物中， 共有 7个化合物（化合物 4、 6、 10、 11、 33、 36、 86 )对 Lewis肺癌和 S180 肉瘤的抑瘤率均超过 40%; 有两个化合物 （3和 37 )仅对 Lewis肺癌表现出高于 40%的抑瘤率；

( 2 )化合物 6和 36对 Lewis 肺癌的抗肿瘤作用最强， 抑瘤率 达 46.9%;

( 3 ) 所有测试的 22个化合物中， 除了化合物 14、 15、 27和 55 对 Lewis肺癌的抗肿瘤活性比去氢骆驼蓬碱（化合物 1 )略差或相当 外， 其余化合物的抗肿瘤活性均高于去氢骆驼蓬碱。

( 4 ) Lewis肺癌比 S180 肉瘤对 β-咔啉类生物碱的抗肿瘤作用更 为敏感。

表 43 β-咔啉生物碱衍生物体内抗肿瘤疗效实验结果

抑瘤率（ % )

Comp. Ri R₃ R₇ Lewis 肉瘤

R₉

肺癌 S180

1* CH₃ H H CH₃0 H 34.1 15.3

2* CH₃ H H CH3O CH₃ 38.1 32.1

3* CH₃ H H CH₃0 C₂H₅ 42.0 37.6

4* CH₃ H H CH3O n-C₄H₉ 44.0 40.9

6* CH₃ H H CH3O CH₂C₆H_S 46.9 45.2

10 H H C0₂C₂H_s H H 41.98 40.46

11 c¾ H C0₂C₂H_s H H 44.22 44.21

14 C₆H_S H C0₂CH₃ H H 32.06 34.16

15 C₆H₅-p-OCH₃ H C0₂CH₃ H H 35.50 32.10

16 C₆H₅-p-OH H C0₂CH₃ H H 37.86 32.96

17* H H COOH H H 33.4 32.2

26* H H C0₂CH₃ H CH₃ 35.0 31.1

27* H H C0₂CH₃ H C₂H_S 30.5 29.0

31 H H C0₂C₂H₅ H QH₅ 37.02 36.21

33 H H C0₂C₂H_s H CH₂C₆H_S 43.3 42.11

36 H H COOH H n-C₄H₉ 46.91 43.07

37 H H COOH H CH₂C₆H_S 43.22 34.39

42 H H C¾OH H CHjQHs 34.47 28.09

48 H H COOH H (C¾)₃C₆H_S 39.59 32.22

55 H H NHC0₂C₂H₅ H CH₂C₆H_S 30.93 29.12

84 H H H H C¾C(;H_S 37.29 37.19

86 H CH₂QH₅ C0₂C₂H₅ H CH₂C_eH_s 41.56 41.11 实施例 124光诱导的 DNA切割活性实验

材料与方法

1 实验材料

( 1 )主要仪器 DYY-2C型电泳仪（北京六一仪器厂）、 DYCP-³1D型电泳槽（北 京六一仪器厂） 、 凝胶成像系统

( 2 )主要试剂

质粒 pGBK ( 8.0Kb， 由本实验室保存） ， 琼脂糖， Tris-HCl 緩 冲液 （ pH 7.5 ) ， E.Z.N.A. Plasmid Minipreps Kit I (美国 OMEGABIO-TEK公司）。

测试化合物： 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 11、 13、 17、 34、 35、 36、 37、 56、 57、 58、 68、 69、 70、 80、 81、 82、 83、 84， 其对应的 化学结构见表 1 。

2 实验方法

(1) 负超螺旋 pGBK的提取

pGBK转化到大肠杆菌 E.coli， LB培养基 37°C培养 12hr， 然后 用 E.Z.N.A. Plasmid Minipreps Kit I提取， 琼脂糖凝胶电泳检测， -

20 °C保存备用。

(2) 超螺旋 pGBK DNA 的 UV诱导切割实验

反应体系组成： 5ul 200mM Tris-HCl 緩冲液（ pH 7.5 ) ， 0.30ug pGBK DNA， 不同浓度的待测样品， 纯水补足至 20ul， 充分混匀后， 室温培育 5min， 然后将混合液放置在 365nm ( 8W ) 紫外灯下距灯管 5cm处照射 2h，，然后用 0.7 %琼脂糖凝胶电泳（电压 100V,电泳 lhr )， EB染色， 凝胶成像系统

观察拍照分析。 通过该条件下生成的环形的有切口的 DNA 与超 螺旋 DNA的比率， 比较不同 β-咔啉生物碱衍生物在各种测试浓度下， 经紫外光照射后对超螺旋 DNA分子的切割能力。 实验结果参加图 1所示。

由实验结果， 我们可以初步得出如下的构效关系：

(1) β-咔啉类生物碱衍生物光诱导的 DNA切割活性的大小依赖于 β-咔啉环上取代基的存在、 取代基的位置以及取代基的性质。

(2) β-咔啉环上推电子取代基团有助于增强化合物的 DNA光切割 活性， 相反， 吸电子基团取代有降低化合物的 DNA光切割活性。 实施例 125 对 DNA分子嵌入作用的研究

材料与方法

1 实验材料

UV 2501PC 型紫外光奄仪 (日本岛津公司） ， SP-752 型紫外分 光光度计（带恒温水浴附件和分析软件，上海光谱仪器厂）、 DC-05060 低温恒温水浴槽 （上海衡平仪器仪表厂） 、 CT-DNA ( Sigma公司） 、 PE緩冲液（lmM Na₂HP0₄， O.lmM EDTA, H 7.6 ) 。

测试化合物： 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 33、 36、 39、 42、 49、 66、 80、 81、 82、 83、 84等 19个 β-咔啉类生物碱衍生物。 其化学结 构表 2。 阳性对照药物： 阿霉素盐酸盐、 喜树碱（美国 Sigma公司） 。

2 实验方法

( 1 ) DNA融点 （Tm ) 测定

在 PE ( pH7.6 )緩冲液中加入 15ug/ml的 CT-DNA,然后加入 1cm 的比色 中， 放入带恒温水浴装置的比色亚架， 循环水浴加热， 按 1 °C/2min 的升温速率自动程序升温， 用 SP-7⁵² 型紫外分光光度计于 260nm处自动描记 CT-DNA的 Tm曲线， 然后根据曲线求出 CT-DNA 的 Tm值。

按照上述条件操作， 每次加入 20uM 的测试化合物， 然后比较加 入测试化合物前后的 Tm曲线的变化。 根据公式：

Δ Tm = (加入化合物后测得的 Tm值- CT-DNA的 Tm值） 求出每个化合物的 Δ Τιη值， 重复实验三次， 最后取平均值。

( 2 ) 紫外吸收光婚法

在 PE ( pH 7.6 )緩冲液中加入 40ug/ml CT-DNA, 于 VV 2501PC 型紫外光齋仪的 200-400nm波长范围内测出其扫描曲线； 在 PE緩冲 液中加入 20uM的待测化合物， 在紫外光谱仪的 200-400nm波长范围 内测出其扫描曲线； 然后在在 PE緩冲液中加入 ⁴0ug/ml CT-DNA和 20uM的测试化合物， 于 37°C温育 2hr， 然后在在紫外光谱仪的 ²00- 400nm 波长范围内测出其扫描曲线。 将 CT-DNA 的扫描曲线和测试 药物的扫描曲线加和， 得到 DNA 与测试药物没有作用的曲线， 求出 曲线上 260nm处的 OD值； 随后求出将测试药物与 CT-DNA混合物 所测得的扫描曲线上 260mn处的 OD值， 将两者进行比较， 考察测试 药物对 DNA分子紫外吸收光谱的影响。 实验结果

( 1 ) β-咔啉类生物碱对 CT-DNA 的 Tm的影响

P-咔啉类生物碱对 CT-DNA的 Tm值的影响见表 44， 用图形表示 见图 2。 在本实验条件下， CT-DNA的 Tm值为 61 °C。 从图上我们可 以看出， β-咔啉类生物碱衍生物对 CT-DNA的 Tm值有升高作用， 其 中化合物 6对 CT-DNA的 Tm值的影响最大， 它使 CT-DNA的 Tm 值增加了 10.3°C同阳性对照药物阿霉素 （ A Tm = 10.8°C ) 的嵌入作用 相当；而化合物 84对 CT-DNA的 Tm值的影响较小， A Tm值仅为 1.5 °C。 特别值得一提的是： 在实验过程中我们还观察到阳性对照药物喜 树碱以及 β-咔啉类生物碱化合物 ³3、 36、 42对 CT-DNA的 Tm值有 降低的作用， Δ Τιη值分别为： 喜树碱（ - 2.5Ό ) 、 33 ( - 1.2°C ) 、 36 (— 1.5°C ) 、 42 ( - 0.3°C ) 。

β-咔啉衍生物对 CT-DNA的热稳定性的结合影响

( 2 ) β-咔啉类生物碱对 DNA紫外吸收光语的影响

β-咔啉类生物碱对 CT-DNA紫外吸收光谱的影响见图 3。 从图上 可以看出：

(1) 化合物 1、 3、 4、 6、 82、 83和阳性对照药物阿霉素均使 DNA 的紫外吸收值下降， 其中阿霉素作用最为明显， 其次为化合物 3; (2) 相反地， 化合物 36、 37, 42, 49、 ⁶6和阳性对照药物喜树碱 使 DNA的紫外吸收值增加， 其中化合物 36作用后的 DNA的紫外吸 收值增加最明显。

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Claims

下述通式（I)化合物

其中，

是氢、 （仲或叔） <^_₆直链或仲或叔支链烷基、 。芳烷基或 1-5的 |¾代芳烷基、 杂环基、 链烯基；

R₂是氢、 羧基、 酯基、 羧酸盐、 酰胺基、 酰！ ¾基或 ₆烷氧基 羰基、 芳香基氧基羰基、 杂环基氧基羰基；

R₃是氢、 羟基、 _₆烷氧基、 羧基酯类、 羧酸盐类、 芳烷氧基、 杂环氧基；

R₄是氢、 <^_₆烷基、 <^_₆羟基烷基、 。芳烷基或 1-5 的卤代 芳烷基、 芳羟基、 芳羧基、 芳酯基、 芳胺基、 芳硝基、 杂环基；

R₅是氢、 ₆伯仲叔的直链或支链烷基、 。芳烷基及其 1-5 取代芳烷基基、 杂环基、 链烯基；

并且 Ri、 R₂、 R₃和 R₄不同时是氢；

并且 R₂、 R₃和 R₄不同时是氢；

当 和11₄为氢时， 不为曱基且 R₃不为甲氧基；

当 1^为甲基时， R₂、 和11₄不同时都为氢；

当 1^为甲基、 R₂为氢、 R₃为甲氧基时， R₄不为甲基、 乙基或丁 基；

当 1^和11₃为氢时， R₂不为甲氧基羰基且 R₄不为甲基。

2、 权利要求 1所述的化合物， 其特征在于 是氢或 C ₄的烷基 或 C₆.₈的芳浣基。

3、 权利要求 2所述的化合物， 其特征在于 是氢或 的烷基。

4、 权利要求 3所述的化合物， 其特征在于 是氢。

5、 权利要求 1所述的化合物， 其特征在于 R₂是氢或 的烷氧 基欺基。

6、 权利要求 5所述的化合物， 其特征在于 R₂是氢或（ ₂的烷氧 基欺基。

7、 权利要求 6所述的化合物， 其特征在于 11₂是乙氧基羰基。

8、 权利要求 1 所述的化合物， 其特征在于 R₃是氢、 羟基或 ₄ 的綻氧基。

9、 权利要求 8所述的化合物， 其特征在于 R₃是氢。

10、 权利要求 1所述的化合物， 其特征在于 R₄是氢、 <^_₄的烷基、 CL₄的羟基烷基或 C₆_₈的芳烷基或取代芳烷基。

11、 权利要求 10所述的化合物， 其特征在于 R₄是氢、 的烷 基、 ₂的羟基烷基或 C₆—₈的芳烷基或取代芳烷基。

12、 权利要求 11所述的化合物， 其特征在于 R₄是乙基或苄基。

13、 权利要求 12所述的化合物， 其特征在于 R₄是苄基。

14、 权利要求 1所述的化合物， 其特征在于 为氢、 的烷基 或 C₆.₈芳烷基； R₂为氢或 ₄的烷氧基羰基； R₃为氢、 羟基或 ₄的 烷氧基； R₄为氢或 ₂的烷基、 ₂的羟基烷基、 C₆_₈的芳烷基或取 代芳烷基。

15、 权利要求 14所述的化合物， 其中 为氢； R₂为 的烷氧 基羰基； R₃为氢； 11₄为 的烷基或 C₆_₈的芳烷基或取代芳烷基。

16、 权利要求 15所述的化合物， 其中 为氢； R₂为乙氧基羰基；

R₃为氢； R₄为乙基或苄基。

17、 权利要求 16所述的化合物， 其中 为氢； R₂为乙氧基羰基；

R₃为氢； R₄为苄基。

18、 权利要求 1 所述的化合物， 其中 1^为甲基； R₂为乙氧基叛 基； R₃为氢； R₄为五氟苄基； R₅为氢。

19、 权利要求 1所述化合物， 最优选 为氢； R₂为氢； R₃为氢； R₄为苄基； 11₅为苄基； X为溴。

20、 一种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 该方法包括下列 步骤：

1 )将下式的去氢骆驼蓬碱 1溶于有机溶剂或混和有机溶剂中；

2)加入 60%NaH， 搅拌至无气泡产生；

3)加入卤代烷烃；

4)样上述混合物在室温下搅拌反应 1-5小时；

5)进行常规后处理和纯化， 得到 1， 7, 9-三取代 咔啉类生物 碱化合物。

21. —种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 该方法包括下列 步驟：

1)将 L-色氨酸和 NaOH溶于水中；

2)加入甲醛，

3)将上述混合物在搅拌下加热回流反应 3小时；

4)进行常规后处理， 得到 1， 2, 3, 4-四氢 -β-咔啉 -³羧酸（9a) 化合物。

22. 一种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 该方法包括下列

' 1 )将 P -咔啉 -3-羧酸酯溶于有机溶剂或混和有机溶剂中；

2)加入 NaH, 搅拌至无气泡产生；

3)加入卤代烷烃或芳香烃；

4)将上述混合物室温或加热搅拌反应 2-5小时；

5)进行常规后处理和纯化， 得到 9-取代 - P -咔啉 -；3-羧酸酯化合 物。

23. —种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 该方法包括下列 步骤：

1 )将 1-取代- β -咔啉 -3-羧酸酯溶于有机溶剂中；

2 )加入 60 % NaH, 搅拌 5分钟；

3)加入! ¾代烷烃或芳香烃； 替换页（细则第 26条） 4)将上述混合物室温反应或加热回流；

5)反应完毕后， 进行常规后处理和纯化， 得到 9-取代的 1-甲基- β -咔啉 -3-羰基乙酯化合物。

24. 一种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 该方法包括下列 步骤：

1 )将下式化合物 10b与冰醋酸混和；

10b

2 )加入二氧化励；

3)将上述混合物加热回流 12小时；

4)进行常规后处理和纯化， 得到 咔啉化合物。

25. 一种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 该方法包括下列 步骤：

1 )将下式的化合物 10与有机溶剂和 60%NaH混和；

其中 R₂ = C₂H_S;

2)将上述混合物室温搅拌反应 5分钟；

3)加入蛾化苄；

4)在 50-70 °C搅拌反应 2小时；

5) 进行常规后处理和純化， 得到 2, 9-二苯甲基 咔啉 -3-羰基 乙酯捵盐化合物。

26. 一种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 该方法包括下列 步骤： 替换页（细则第 26条） 1 )将下式的化合物 10与有机溶剂和 60%NaH混和;

其中 R_{1 =} H， ¾ = C₂H₅；

2)加入溴化苄；

3 )将上述混合物在 50-70'C搅拌反应 5小时；

5)进行常规后处理和纯化， 得到 2， 9-二苯甲基 咔啉 _³_羰基 乙酯溴盐化合物。

27. 一种制备权利要求 1 所述的化合物的方法， 该方法包括下列 步骤：

1 )将下式的化合物 80与有机溶剂和 60%NaH混和；

80

2)加入溴化苄或碘化苄；

3)将上述混合物在 50-70°C搅拌反应 ⁵小时；

4) 进行常规后处理和纯化， 得到 2， 9-二苯甲基 咔啉溴盐或 破盐化合物。

28. 下式（9a-16a) 的化合物：

9a— 16 a

替换页（细则第 ²6条） 其中：

1^是曱基、 乙基、 丙基、 异丙基、 正丁基、 未取代或! ¾代的苯基, 苯甲基、 苯雨基。

29. 下式（9b-16b ) 的化合物：

其中：

1^和11₃同权利要求 26中！^的定义,

30. 下式（21a ) 的化合物：

21 a

Ri同权利要求 26中 的定义。

31. 下式（53a-55a ) 的化合物:

R₉是甲基、 乙基、 正丁基、 苯甲基、 苯丙基、 多 ! ¾代苯甲基或多

替换页（细则第 ²⁶条） 卤代苯丙基。

32. 下式（10b) 的化合物:

10b

其中：

1^和11₃同杈利要求 26中 1^的定义。

33、 权利要求 1~18 中任何一项的化合物在制备用于治疗肿瘤的 药物方面的用途。

34. 权利要求 1~18 中任何一项的化合物在制备用于与光及射线 疗法联合治疗肿瘤的药物方面的用途。

替换页（细则第 26条）