CN100503607C - 去氢骆驼蓬碱衍生物类化合物及其应用 - Google Patents

去氢骆驼蓬碱衍生物类化合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于药物化合物领域，涉及通式(I)的化合物；本发明通过对去氢骆驼蓬碱的β-咔啉母核的1，3，7，9位点进行结构修饰，生成具有增强抗肿瘤活性并降低神经系统毒性的新的去氢骆驼蓬碱衍生物类化合物；本发明的化合物制备方法简便，得率高；可用于制备治疗各种肿瘤疾病的药物。

Description

去氢骆驼蓬碱衍生物类化合物及其应用
技术领域
本发明属于药物化合物领域，更具体地说，是涉及通式(I)所示的去氢骆驼蓬碱衍生物类化合物，本发明还涉及该类化合物的应用。
背景技术
去氢骆驼蓬碱(Harmine)是β-咔啉(β-carboline)类生物碱家族的一员，其化学名为7-甲氧基-1-甲基-9H-吡咯[3，4-b]吲哚，分子式为C13H12N2O，分子量212.25，熔点261℃，化学结构式如(II)：
Figure C03136406D00031
去氢骆驼蓬碱及其类似物广泛分布于自然界。自首次分离到去氢骆驼蓬碱类化合物以来，人们已经从海洋生物、植物以及哺乳动物的体液和组织中分离到了多种去氢骆驼蓬碱类化合物；另外，自1928年Tatsui[G.Tatsui.，J.Pharm.Soc.，Japan 49(1929)，453]首次报道了去氢骆驼蓬碱类化合物1，2，3，4-四氢-β-咔啉的化学合成、1930年Spath等[Spath，Lederer.Ber.63B：120(1930)]首次报道了去氢骆驼蓬碱的合成以来，人们开展了大量的去氢骆驼蓬碱类化合物的合成研究，据不完全统计，到目前为止，人们报道了约300个以上的去氢骆驼蓬碱类化合物，新的去氢骆驼蓬碱类化合物仍在不断增加。
目前已经报道从生物体内分离到的具有代表性的β-咔啉类化合物主要有去氢骆驼蓬碱(Harmine)、骆驼蓬碱(Hamaline)、哈尔明(Harmane)、THBC、哈明醇(Harmalol)、诺哈明(Norharmane)等，它们的结构式如(III)所示。
Figure C03136406D00041
氢骆驼蓬碱类化合物具有显著的抗肿瘤活性，但也有明显的中枢神经系统毒性。其体外抗肿瘤活性试验结果表明，骆驼蓬碱类化合物对宫颈癌Hela、S-180体外培养细胞、肝癌BEL-7402、胃癌MGC-803、鼻咽癌CNE2、乳腺癌MA782’5S、白血病K562等多种体外培养的肿瘤细胞有明显的抑制作用；体内抗肿瘤活性试验结果显示骆驼蓬总碱、骆驼蓬植物中提取的混合生物碱对小鼠S-180、网织细胞肉瘤L2、小鼠肝癌都有显著的疗效，与顺铂、阿霉素联用有明显协同作用；然而，骆驼蓬碱及其衍生物的毒性主要表现为神经系统毒性。急性毒性表现为神经系统先兴奋(颤抖、竖尾、惊厥)、后抑制，最后死亡，未死亡的动物于给药次日即可恢复正常。亚急性毒性试验提示骆驼蓬总碱对造血系统、免疫系统、生殖系统并无明显毒性，长期毒副作用也并不显著，其毒性靶器官是肾脏。
目前的去氢骆驼蓬碱及其类似物虽然有明确的抗肿瘤活性，但也有明确的神经系统毒副作用，还不存在一种既有高的抗肿瘤活性，神经系统毒性又低的化合物可用于临床上作为抗癌药物。
发明内容
本发明的目的在于提供一类具有增强抗肿瘤活性并降低神经系统毒性而且制备方法简单、得率高的去氢骆驼蓬碱衍生物类化合物；
本发明的另一目的在于提供上述化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明的去氢骆驼蓬碱衍生物类化合物具有以下通式(I)结构：
Figure C03136406D00051
其中，
R1是氢、C1-6的烷基或C6-10的芳烷基或取代芳烷基；
R2是氢或C1-6的烷氧基羰基；
R3是氢、羟基或C1-6的烷氧基；
R4是氢、C1-6的烷基、C1-6的羟基烷基或C6-10的芳烷基或取代芳烷基；
且R1、R2、R3、R4不同时是氢；
当R2、R4为氢时，R1不为甲基且、R3不为甲氧基；
当R1为甲基时，R2、R3、R4不同时都为氢；
当R1为甲基、R2为氢、R3为甲氧基时，R4不为甲基、乙基或丁基；
当R1、R3为氢时，R2不为甲氧基羰基且R4不为甲基。
上述通式(I)化合物，优选R1是氢、C1-4的烷基或C6-8的芳烷基；进一步优选为R1是氢或C1-2的烷基；最优选R1是氢。
上述通式(I)化合物，优选R2是氢或C1-4的烷氧基羰基；进一步优选R2是氢或C1-2的烷氧基羰基；最优选R2是乙氧基羰基。
上述通式(I)化合物，优选R3是氢、羟基或C1-4的烷氧基；最优选R3是氢。
上述通式(I)化合物，优选R4是氢、C1-4的烷基、C1-4的羟基烷基或C6-8的芳烷基或取代芳烷基；进一步优选R4是氢、C1-2的烷基、C1-2的羟基烷基或C6-8的芳烷基或取代芳烷基；比较优选R4是乙基或卞基；最优选R4是卞基。
上述通式(I)化合物，当优选R1为氢、C1-4的烷基或C6-8芳烷基时；R2优选为氢或C1-4的烷氧基羰基；R3优选为氢、羟基或C1-4的烷氧基；R4优选为氢或C1-2的烷基、C1-2的羟基烷基、C6-8的芳烷基或取代芳烷基。
上述通式(I)化合物，当R1进一步选为氢时；R2进一步选为C1-2的烷氧基羰基；R3进一步选为氢；R4进一步选为C1-2的烷基或C6-8的芳香烷基。
上述通式(I)化合物，当R1取最优选为氢时；R2最优选为乙氧基羰基；R3最优选为氢；R4比较优选为乙基或卞基，最优选为卞基。
上述所列的通式(I)化合物的制备方法，可以直接从去氢骆驼蓬碱出发，对其7、9两个位点分别进行结构修饰或组合进行结构修饰，合成目的化合物，如图一所示；或者是从色氨酸及其衍生物出发，在合成过程中或在合成出去氢骆驼蓬碱的类似物后，对其1、3、9等位点分别进行结构修饰或组合进行结构修饰，合成目的化合物，如图二所示。
本发明的通式化合物，经过体外抗肿瘤活性试验以及体内抗肿瘤药理药效的研究，显示出强的抗肿瘤活性及低神经系统毒性，并且制备方法简便，收率高。本发明的化合物可应用于制备治疗肿瘤药物。
附图说明
图1是对去氢骆驼蓬碱7、9位结构修饰的合成路线；
图2是从色氨酸出发合成去氢骆驼蓬碱类似物的路线。
具体实施方式
实施例一1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的制备方法
在100ml的圆底烧瓶中加入L-色氨酸(10.2g，0.05mol)，NaOH(2.0g，0.05mol)，和H2O(20ml)。搅拌至溶液澄清，然后加入甲醛(37％；5.5ml，0.06mol)，混合物室温搅拌反应4h，加热回流反应3h；将混合物倒入20ml冰水中，搅拌下用5NHCl调节pH至5左右，即析出白色固体，冰箱4℃放置过夜，过滤，水洗，少量甲醇洗，干燥，得白色固体9.2g，收率85％。mp.304-305℃。MS：m/e(M+1)217；IR(KBr，cm-1)：3100，1628.
实施例二1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯(H-03-01)的制备方法
在500ml的圆底烧瓶中加入1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(9.2g，12mol)，甲醇250ml，混合物用冰水冷却，搅拌下通入干燥的氯化氢气体直至溶液透明，室温搅拌20min，加热回流2h，减压蒸除甲醇，固体过滤，丙酮洗涤，得灰白色固体。将上述固体溶于100ml冷水，饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9，乙酸乙酯萃取(3×300ml)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，乙酸乙酯重结晶得白色固体5.6g，收率57％。mp.191-193℃；MS：m/e(M+1)231；IR(KBr，cm-1)：3100，1628.
实施例三β-咔啉-3-羧酸甲酯(H-03-03)的制备方法
在100ml的圆底烧瓶中加入1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯(2.3g，10mmol)、冰乙酸(40ml)，混合物冷却至5℃左右，搅拌下加入Pb(OAc)4(8.9g，20mmol)，5℃反应30min，室温搅拌反应3hr，然后将混合物倒入100ml冰水中，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8，乙酸乙酯萃取(3×300ml)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得淡黄色固体，丙酮重结晶，得白色固体1.8g，收率80％。mp.258-260℃。MS：m/e(M+1)227；IR(KBr，cm-1)：3100，1628
实施例四9-甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯(H-03-05)的制备方法
在100ml圆底烧瓶中分别加入实施例三的β-咔啉-3-羧酸甲酯(2.26g，10mmol)，20ml二甲基甲酰胺，50ml四氢呋喃，室温搅拌至溶液澄清，然后加入0.72g(30mmol)NaH，搅拌至无气泡产生，滴加3.5ml CH3I，室温搅拌1h。减压蒸除四氢呋喃，剩余物倒入100ml冰水，乙酸乙酯萃取(150ml×3)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗(100ml×2)，饱和盐水洗(50ml)，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩至干，10ml无水乙醇溶解，加1ml浓HCl，减压浓缩至干，丙酮重结晶，得灰白色固体2.2g，收率79％。
mp.212-214℃。
MS：m/e(M+1)241
IR(KBr，cm-1)：1730，1631
1H-NMR(CDCl3)δ：8.94(s，1H，Ar-H)，8.88(s，1H，Ar-H)，8.20-8.21(d，1H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.657.68(t，1H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.50-7.52(d，1H，J＝8Hz，Ar-H)，7.36-7.39(t，1H，J＝8Hz，Ar-H)，4.06(s，3H，CH3O)，4.00(s，3H，CH3-N)
实施例五9-乙基-β-咔啉-3-羧酸甲酯(H-03-06)的制备方法
在100ml圆底烧瓶中分别加入实施例三的β-咔啉-3-羧酸甲酯(2.26g，10mmol)，20ml二甲基甲酰胺，30ml四氢呋喃，室温搅拌至溶液澄清，然后加入0.72g(30mmol)NaH，搅拌至无气泡产生，滴加4ml CH3CH2I，室温搅拌反应3h，减压蒸除四氢呋喃，剩余物倒入150ml冰水，乙酸乙酯萃取(150ml×3)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗(100ml×2)，饱和盐水洗(100ml)，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩至干，50ml无水乙醇溶解，加5ml浓HCl，减压浓缩至干，丙酮重结晶，得灰白色固体2.2g，收率69％。
mp.205-207℃。
MS：m/e(M+1)255
IR(KBr，cm-1)：1724，1632
1H-NMR(CDCl3)δ：8.90-9.00(m，2H，Ar-H)，8.21-8.23(d，1H，J＝8Hz，Ar-H)，7.65-7.68(t，1H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.52-7.54(d，1H，J＝8Hz，Ar-H)，7.36-7.39(t，1H，J＝7Hz，Ar-H)，4.51(s，2H，-CH2-)，4.07(s，3H，CH3O-)，1.52(s，3H，CH3-)
实施例六9-丁基-β-咔啉-3-羧酸甲酯的制备方法
在100ml圆底烧瓶中分别加入实施例三的β-咔啉-3-羧酸甲酯(2.26g，10mmol)，20ml二甲基甲酰胺，50ml四氢呋喃，室温搅拌至溶液澄清，然后加入0.72g(30mmol)NaH，搅拌至无气泡产生，滴加5ml n-C4H9I(1-碘代正丁烷)，然后搅拌加热回流5h。反应完毕，减压蒸除四氢呋喃，剩余物倒入150ml冰水，乙酸乙酯萃取(150ml×3)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗(100ml×2)，饱和盐水洗(100ml)，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩至干，10ml无水乙醇溶解，加5ml浓HCl，减压浓缩至干，丙酮重结晶，得灰白色固体2.4g，收率75％。
mp.194-195℃。
MS：m/e(M+1)283
IR(KBr，cm-1)：1727，1629
实施例七9-苯甲基-β-咔啉-3-羧酸甲酯的制备方法
在100ml圆底烧瓶中分别加入实施例三的β-咔啉-3-羧酸甲酯(2.26g，10mmol)，20ml二甲基甲酰胺，50ml四氢呋喃，室温搅拌至溶液澄清，然后加入0.72g(30mmol)NaH，搅拌至无气泡产生，滴加15ml C6H5CH2I(1-碘代甲基苯)，然后搅拌加热回流8h。反应完毕，减压蒸除四氢呋喃，加入200ml 2N盐酸水溶液，甲苯萃取(100ml×2)。水相用饱和NaHCO3溶液中和(pH8)，然后乙酸乙酯萃取(300ml×3)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗(200ml×2)，饱和盐水洗(200ml×2)，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩至干，100ml无水乙醇溶解，加5ml浓HCl，减压浓缩至干，丙酮重结晶，得灰白色固体2.6g，收率74％。
mp.196-198℃。
MS：m/e(M+1)317
IR(KBr，cm-1)：1725，1626
实施例八β-咔啉-3-羧酸的(H-03-04)制备方法
在50ml的圆底烧瓶中加入实施例三的β-咔啉-3-羧酸甲酯(1.13g，5mmol)、氢氧化钠(0.8g，20mmol)、乙醇(10ml)，H2O(20ml)，混合物加热回流1h，然后减压蒸除乙醇，混合物用5N HCl调节pH至5，过滤，水洗，甲醇洗，无水乙醇重结晶，得白色固体0.96g，收率90％。
mp307-309℃。
MS：m/e(M+1)213
IR(KBr，cm-1)：3100，1625
实施例九1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸乙酯的制备方法
在500ml的圆底烧瓶中加入实施例一的1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(10.5g)，乙醇300ml，混合物用冰水冷却，搅拌下通入干燥的氯化氢气体直至溶液透明，室温搅拌20min，加热回流2h，减压蒸除乙醇，得白色固体。将上述固体溶于300ml冷水，加乙酸乙酯300ml，饱和碳酸氢钠溶液调节水相pH至9，分出乙酸乙酯层，水相乙酸乙酯萃取(300ml×2)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至约150ml，冷至室温后，放入冰箱重结晶，过滤，少量乙醚洗，得白色固体7.5g，收率63％。
mp.149-150℃。
MS：m/e(M+1)245
IR(KBr，cm-1)：1719，1626
实施例十β-咔啉-3-羧酸乙酯(H-03-08)的制备方法
在250ml的圆底烧瓶中加入1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸乙酯(4.8g，20mmol)、冰乙酸(80ml)，混合物冷却至5℃左右，搅拌下加入Pb(OAc)4(17.8g，40mmol)，5℃反应1h，室温搅拌反应3h，然后将混合物倒入100ml冰水中，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8，乙酸乙酯萃取(3×500ml)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至约150ml，冷却至室温后，放入冰箱重结晶，过滤，得白色固体4.1g，收率85％。
mp.228-230℃。
MS：m/e(M+1)241
IR(KBr，cm-1)：1719，1620
实施例十一9-甲基-β-咔啉-3-羧酸乙酯的制备方法
在100ml圆底烧瓶中分别加入实施例十的β-咔啉-3-羧酸乙酯(2.4g，10mmol)，20ml二甲基甲酰胺，50ml四氢呋喃，室温搅拌至溶液澄清，然后加入0.72g(30mmol)NaH，搅拌至无气泡产生，滴加3.5ml CH3I，室温搅拌1h。减压蒸除四氢呋喃，剩余物倒入100ml冰水，乙酸乙酯萃取(150ml×3)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗(100ml×2)，饱和盐水洗(50ml)，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩至干，10ml无水乙醇溶解，加1ml浓HCl，减压浓缩至干，丙酮重结晶，得白色固体2.2g，收率76％。
mp.228-230℃。
MS：m/e(M+1)255
IR(KBr，cm-1)：1723，1622
1H-NMR(CDCl3)δ  ：8.94(s，1H，ArH)，8.86(s，1H，Ar-H)，8.19-8.20(d，1H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.63-7.66(t，，1H，J＝7Hz，Ar-H)，7.49-7.51(d，1H，J＝10.5Hz，Ar-H)，7.35-7.37(t，1H，J＝7Hz，Ar-H)，4.52-4.56(m，2H，-CH2-)，3.98(s，3H，CH3-N)，1.48-1.51(t，3H，J＝7Hz)
实施例十二9-乙基-β-咔啉-3-羧酸乙酯(H-03-09)的制备方法
在100ml圆底烧瓶中分别加入实施例十的β-咔啉-3-羧酸乙酯(2.4g，10mmol)，20ml二甲基甲酰胺，50ml四氢呋喃，室温搅拌至溶液澄清，然后加入0.72g(30mmol)NaH，搅拌至无气泡产生，滴加5ml CH3CH2I，室温搅拌3hr。TLC检查，减压蒸除四氢呋喃，剩余物倒入100ml冰水，乙酸乙酯萃取(150ml×3)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗(100ml×2)，饱和盐水洗(50ml)，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩至干，10ml无水乙醇溶解，加5ml浓HCl，减压浓缩至干，丙酮重结晶，得白色固体2.0g，收率65％。
mp.186-187℃。
MS：m/e(M+1)269
IR(cm-1)：1724，1632
1H-NMR(CDCl3)δ：8.93(s，1H，Ar-H))，8.86(s，1H，Ar-H)，8.18-8.20(d，1H，J＝8Hz，Ar-H)，7.62-7.64(t，1H，J＝7.5Hz，Ar-H)，7.48-7.50(d，1H，J＝8Hz，Ar-H)，7.33-7.36(t，1H，J＝7.5Hz，Ar-H)，4.42-4.56(m，4H，-CH2-)，1.46-1.52(m，6H，CH3-)
实施例十三9-丁基-β-咔啉-3-羧酸乙酯的制备方法
在100ml圆底烧瓶中分别加入实施例十的β-咔啉-3-羧酸乙酯(2.4g，10mmol)，20ml二甲基甲酰胺，50ml四氢呋喃，室温搅拌至溶液澄清，然后加入0.72g(30mmol)NaH，搅拌至无气泡产生，滴加6ml CH3CH2I，加热回流4h。TLC检查，减压蒸除四氢呋喃，剩余物倒入150ml冰水，乙酸乙酯萃取(150ml×3)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗(100ml×2)，饱和盐水洗(100ml)，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩至干，30ml无水乙醇溶解，加5ml浓HCl，减压浓缩至干，丙酮重结晶，得白色固体2.6g，收率78％。
mp.228-230℃。
MS：m/e(M+1)297
IR(KBr，cm-1)：1725，1629
实施例十四9-苯甲基-β-咔啉-3-羧酸乙酯(H-03-07)的制备方法
在100ml圆底烧瓶中分别加入实施例十的β-咔啉-3-羧酸乙酯(1.2g，5mmol)，10ml二甲基甲酰胺，30ml四氢呋喃，室温搅拌至溶液澄清，然后加入0.36g(30mmol)NaH，搅拌至无气泡产生，加8ml C6H5CH2I，加热回流8h。TLC检查，减压蒸除四氢呋喃，剩余物中加入2N盐酸150ml，甲苯萃取，甲苯层用50ml 2N盐酸洗涤，合并水相，甲苯萃取，水相用碳酸氢钠调pH至9，乙酸乙酯萃取(150ml×3)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗(100ml×2)，饱和盐水洗(100ml)，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩至干，丙酮重结晶，得白色固体1.2g，收率66％。
mp.186-188℃。
MS：m/e(M+1)331
IR(KBr，cm-1)：1723.1621
1H-NMR(CDCl3)δ：8.91(s，2H，Ar-H)，8.23-825(d，1H，J＝8Hz，Ar-H)，7.59-7.62(m，1H，Ar-H)，7.49-7.50(d，1H，J＝8Hz，Ar-H)，7.36-7.39(m，1H，Ar-H)，7.25-7.27(m，3H，Ar-H)，7.14-7.16(m，2H，Ar-H)，5.62(S，2H，Ar-H)，4.51-4.55(m，2H，-CH2-)，1.47-1.50(t，3H，J＝7Hz)
实施例十五7-甲氧基-1，9-二甲基-吡咯[3，4-b]吲哚盐酸盐(H-09-05)的制备方法
在250ml圆底烧瓶中分别加入2.1g(10mmol)骆驼蓬碱，30ml二甲基甲酰胺，50ml四氢呋喃，室温搅拌至溶液澄清，然后加入0.72g(30mmol)NaH，搅拌至无气泡产生，滴加3.5ml CH3I(碘甲烷)，室温搅拌反应2h。减压蒸除四氢呋喃，剩余物倒入100ml冰水，乙酸乙酯萃取(150ml×3)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗(300ml×2)，饱和盐水洗(300ml×2)，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩至干，乙醚重结晶，得白色针状晶体1.8g，收率80％。取白色固体1.0g，用30ml无水乙醇溶解，加5ml浓HCl，减压浓缩至干，丙酮重结晶，得灰白色固体，为产品的盐酸盐。
mp.121-123℃。
MS：m/e(M+1)226
IR(KBr，cm-1)：1628
实施例十六7-甲氧基-1-甲基-9-乙基-吡咯[3，4-b]吲哚盐酸盐(H-09-01)的制备方法
在250ml圆底烧瓶中分别加入2.1g(10mmol)去氢骆驼蓬碱，30ml二甲基甲酰胺，50ml四氢呋喃，室温搅拌至溶液澄清，然后加入0.72g(30mol)NaH，搅拌至无气泡产生，滴加4ml CH3CH2I(碘乙烷)，室温搅拌反应4h。减压蒸除四氢呋喃，剩余物倒入100ml冰水，乙酸乙酯萃取(150ml×3)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗(300ml×2)，饱和盐水洗(300ml×2)，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩至干，乙醚重结晶，得白色针状固体2.0g，收率83％。取固体1.0g，30ml无水乙醇溶解，加5ml浓HCl，减压浓缩至干，丙酮重结晶，得灰白色针状晶体，为产品盐酸盐。
mp.97-101℃。
MS：m/e(M+1)241
IR(KBr，cm-1)：1622
1H-NMR(CDCl3)δ 6.86-8.27(5H，m，Ar-H)，4.53-4.57(2H，m，J＝7.5Hz，-CH2-)，
3.95(3H，s，CH3O-)，3.05(3H，s，CH3-)，1.43-1.46(3H，t，J＝2.5Hz，CH3[CH2]-)
实施例十七7-甲氧基-1-甲基-9-丁基-吡咯[3，4-b]吲哚盐酸盐(H-09-02)的制备方法
在250ml圆底烧瓶中分别加入2.1g(10mmol)去氢骆驼蓬碱，30ml二甲基甲酰胺，50ml四氢呋喃，室温搅拌至溶液澄清，然后加入0.72g(30mol)NaH，搅拌至无气泡产生，滴加5ml n-C4H9I(1-碘代正丁烷)，加热搅拌反应5hr。减压蒸除四氢呋喃，剩余物倒入100ml冰水，乙酸乙酯萃取(150ml×3)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗(300ml×2)，饱和盐水洗(300ml×2)，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，乙酸乙酯重结晶，过滤，得白色固体2.1g，收率78％。取固体1.0g，30ml无水乙醇溶解，加5ml浓HCl，减压浓缩至干，丙酮重结晶，得灰白色针状晶体，为产品盐酸盐。
mp.104-105℃。
MS：m/e(M+1)269
IR(KBr，cm-1)：1621
1H-NMR(CDCl3)δ：0.97-1.00(t，3H，J＝7.5Hz，CH3-[CH2]-)，1.41-1.48(m，2H，-CH2-)，1.78-1.84(m，2H，-CH2-)，3.01(s，3H，CH3-Ar)，3.94(s，3H，CH3O-)，4.43-4.46(t，2H，J＝8Hz，-CH2-)，6.85-6.88(m，2H，Ar-H)，7.71-7.72(d，1H，J＝5Hz，Ar-H)，7.95-7.97(d，1H，J＝9Hz，Ar-H)，8.26-8.28(d，1H，J＝5.5Hz，Ar-H)
实施例十八7-甲氧基-1-甲基-9-羟乙基-吡咯[3，4-b]吲哚盐酸盐(H-09-04)的制备方法
在250ml圆底烧瓶中分别加入1.05g(5mmol)去氢骆驼蓬碱，15ml二甲基甲酰胺，25ml四氢呋喃，室温搅拌至溶液澄清，然后加入0.72g(30mol)NaH，搅拌至无气泡产生，滴加3ml HOCH2CH2I(2-碘乙醇)，加热回流10h。减压蒸除四氢呋喃，剩余物倒入100ml冰水，乙酸乙酯萃取(100ml×3)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗(100ml×2)，饱和盐水洗(100ml×2)，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩至干，乙醇重结晶，得白色固体0.8g，收率62％。取固体0.5g，15ml无水乙醇溶解，加3ml浓HCl，减压浓缩至干，丙酮重结晶，得灰色晶体，为产品盐酸盐。
mp.204-206℃。
MS：m/e(M+1)257
IR(KBr，cm-1)：3294，1629
1H-NMR(CDCl3)δ：8.15-8.16(d，1H，J＝4Hz，Ar-H)，7.93-7.94(d，1H，J＝3.5Hz，Ar-H)，7.63-7.64(d，1H，J＝5Hz，Ar-H)，6.88-6.95(m，2H，Ar-H)，4.66-4.71(t，2H,J＝5.5Hz，-CH2-)，4.06-4.08(t，2H，J＝4.5Hz，-CH2-)，3.94(s，3H，CH3O-)，2.99(s，3H，CH3-Ar)
实施例十九7-甲氧基-1-甲基-9-苯甲基-吡咯[3，4-b]吲哚盐酸盐(H-09-03)的制备方法
在250ml圆底烧瓶中，分别加入去氢骆驼蓬碱(2.1g，10mmol)，二甲基甲酰胺(50ml)，四氢呋喃(50ml)，室温搅拌至溶液澄清，然后加入0.72g(30mol)NaH，搅拌至无气泡产生，滴加8ml C6H5CH2I(碘代甲基苯)，加热回流18h。减压蒸除四氢呋喃，剩余物倒入100ml冰水，浓HCl调节pH3，乙醚萃取(100ml×2)。水相用饱和NaHCO3溶液中和(pH8)，然后乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯萃取液，水洗(200ml×2)，饱和盐水洗(200ml×2)，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩至干，乙酸乙酯重结晶，得白色固体2.6g，收率86％。取白色固体1.0g，用30ml无水乙醇溶解，加5ml浓HCl，减压浓缩至干，丙酮重结晶，得灰白色固体，为产品的盐酸盐。
mp.131-133℃。
MS：m/e(M+1)303
IR(KBr，cm-1)：1620
1H-NMR(CDCl3)δ 6.76-8.30(m，10H，Ar-H)，5.75(s，2H，-CH2-)，3.85(s，3H，CH3O-)，2.88(s，3H，CH3)
实施例二十1-甲基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的合成：
在250ml的圆底烧瓶中分别加入色氨酸(5.10g，25mmol)、0.005N H2SO430ml、40％乙醛9ml，室温搅拌反应24h，然后加浓氨水10ml，加热回流1h，冷却，5N盐酸调pH至6，冰箱4℃放置4h，过滤，水洗，干燥，得白色固体4.0g，收率69％。mp.255-257℃。MS：m/e(M+1)231；IR(KBr，cm-1)：3150，1628.
实施例二十一1-甲基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸乙酯(H-03-02)的合成：
将1-甲基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(4.0g，17mmol)、无水乙醇150ml加入250ml圆底烧瓶中，小心加入重蒸二氯亚砜4ml，加热回流3h，然后减压蒸除乙醇，得白色固体。加水100ml使白色固体溶解，无水碳酸氢钠饱和溶液调pH至9，乙酸乙酯萃取(200ml×3)，合并萃取液，水洗，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，乙酸乙酯重结晶，得白色固体3.2g，收率71％。mp.223-225℃。MS：m/e(M+1)259；IR(KBr，cm-1)：1718，1627.
实施例二十二1-甲基-β-咔啉-3-羧酸乙酯的合成：
在100ml圆底烧瓶中分别加入1-乙基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸乙酯(3.2g，12mmol)、硫(1.0g，31mmol)、二甲苯50ml，加热回流24hr，冷却至室温，加入2N的稀盐酸100ml，充分搅拌，分出水层，有机层用30ml2N的稀盐酸洗，合并水相，甲苯萃取(100ml×2)，水相用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9，乙酸乙酯萃取(200ml×3)，合并萃取液，水洗，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，乙酸乙酯重结晶，得白色固体1.5g，收率48％。mp.214-216℃。MS：m/e(M+1)254；IR(KBr，cm-1)：1722，1623.
实施例二十三1-丙基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的合成：
在250ml的圆底烧瓶中分别加入色氨酸(5.10g，25mmol)、0.005N H2SO430ml、正丁醛ml，室温搅拌反应24hr，过滤，水洗，干燥，得白色固体3.75g，收率58％。mp.248-251℃。MS：m/e(M+1)259；IR(KBr，cm-1)：3100，1615.
实施例二十四1-丙基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸乙酯的合成：
将1-丙基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(3.75g，14mmol)、无水乙醇150ml加入250ml圆底烧瓶中，小心加入重蒸二氯亚砜4ml，加热回流3hr，然后减压蒸除乙醇，得白色固体。加水100ml使白色固体溶解，无水碳酸氢钠饱和溶液调pH至9，乙酸乙酯萃取(200ml×3)，合并萃取液，水洗，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，乙酸乙酯重结晶，得白色固体3.5g，收率84％。mp.231-233℃。MS：m/e(M+1)287；IR(KBr，cm-1)：1726，1630.
实施例二十五1-丙基-β-咔啉-3-羧酸乙酯的合成：
在100ml圆底烧瓶中分别加入1-丙基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸乙酯(3.5g，12mmol)、硫(0.8g，30mmol)、二甲苯80ml，加热回流24hr，冷却至室温，加入2N的稀盐酸200ml，充分搅拌，分出水层，有机层用50ml 2N的稀盐酸洗，合并水相，甲苯萃取(100ml×2)，水相用饱和碳酸氢钠溶液调pH至9，乙酸乙酯萃取(200ml×3)，合并萃取液，水洗，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，乙酸乙酯重结晶，得白色固体2.0g，收率58％。mp.193-194℃。MS：m/e(M+1)283；IR(KBr，cm-1)：1719，1625.
实施例二十六1-苯基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的制备：
在250ml的圆底烧瓶中分别加入L-色氨酸(5.1g，25mmol)、苯甲醛(3.5ml)、1N H2SO4(30ml)、H2O(70ml)和乙醇(30ml)，加热回流5hr，然后加浓氨水(40ml)，继续回流30min，减压蒸除乙醇，剩余液冷却，乙醚萃取(100ml×2)，水相浓缩至50ml，5N HCl中和(pH5)，析出白色固体，过滤，水洗，干燥得白色固体7.2g，收率98％。mp.304-305℃。MS：m/e(M+1)217；IR(KBr，cm-1)：3100，1628.
实施例二十七1-苯基-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯的合成：
在500ml的圆底烧瓶中分别加入1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(7.2g，25mmol)、甲醇(200ml)，混合物用冰水冷却，搅拌下通入干燥的氯化氢气体直至溶液透明，室温搅拌20min，加热回流2hr，减压蒸除甲醇，固体过滤，丙酮洗涤，得灰白色固体。将上述固体溶于100ml冷水，饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9，即析出灰白色固体，过滤，水洗，干燥，乙酸乙酯重结晶得白色固体7.2g，收率95％。mp.263-265℃。MS：m/e(M+1)307；IR(KBr，cm-1)：1726，1617.
实施例二十八1-苯基-β-咔啉-3-羧酸甲酯(H-01-01)的合成：
在100ml的圆底烧瓶中加入β-咔啉-3-羧酸甲酯(3.07g，10mmol)、冰乙酸(40ml)，混合物冷却至5℃左右，搅拌下加入Pb(OAc)4(8.9g，20mmol)，5℃反应30min，室温搅拌反应12hr，然后将混合物倒入100ml冰水中，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8，乙酸乙酯萃取(3×300ml)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗，加入浓盐酸调节pH至3，减压蒸除乙酸乙酯，剩余物水(100ml)溶解，饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9，即析出白色固体，冷却，过滤，水洗，干燥，得灰白色固体2.1g，收率69％。mp.257-258℃。MS：m/e(M+1)303；IR(KBr，cm-1)：1722，1623
1H-NMR(CDCl3)δ 8.91(s，1H，Ar-H)，8.86(s，1H，Ar-H)，8.20-821(d，1H，J＝8Hz，Ar-H)，7.90-7.91(m，2H，Ar-H)，7.58-7.60(m，2H，Ar-H)，7.54-7.57(m，2H，Ar-H)，7.41-7.44(m，1H，Ar-H)，7.35-7.37(m，1H，Ar-H)，4.04(s，3H，CH3O-)
实施例二十九1-(4-甲氧基苯基)-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的制备：
在250ml的圆底烧瓶中分别加入L-色氨酸(5.1g，25mmol)、4-甲氧基苯甲醛(4.6ml)、1N H2SO4(30ml)、H2O(70ml)和乙醇(30ml)，加热回流12hr，然后加浓氨水(40ml)，继续回流30min，减压蒸除乙醇，剩余液冷却，乙醚萃取(100ml×2)，水相浓缩至50ml，5N HCl中和(pH5)，析出白色固体，过滤，水洗，干燥得白色固体6.6g，收率82％。mp.258-261℃。MS：m/e(M+1)323；IR(KBr，cm-1)：3100，1628.
实施例三十1-(4-甲氧基苯基)-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯的合成：
在500ml的圆底烧瓶中分别加入1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯(6.46g，20mmol)、甲醇(200ml)，混合物用冰水冷却，搅拌下通入干燥的氯化氢气体直至溶液透明，室温搅拌20min，加热回流2hr，减压蒸除甲醇，固体过滤，丙酮洗涤，得灰白色固体。将上述固体溶于100ml冷水，饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9，即析出灰白色固体，过滤，水洗，干燥，乙酸乙酯重结晶得白色固体6.2g，收率90％。mp.237-238℃。MS：m/e(M+1)337；IR(KBr，cm-1)：1720，1615.
实施例三十一1-(4-甲氧基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯(H-01-03)的合成：
在100ml的圆底烧瓶中加入β-咔啉-3-羧酸甲酯(3.36g，10mmol)、冰乙酸(40ml)，混合物冷却至5℃左右，搅拌下加入Pb(OAc)4(8.9g，20mmol)，5℃反应30min，室温搅拌反应12hr，然后将混合物倒入100ml冰水中，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8，乙酸乙酯萃取(3×300ml)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗，加入浓盐酸调节pH至3，减压蒸除乙酸乙酯，剩余物水(100ml)溶解，饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9，即析出白色固体，冷却，过滤，水洗，干燥，得灰白色固体2.1g，收率63％。mp.229-230℃。MS：m/e(M+1)333；IR(KBr，cm-1)：1714，1611.
实施例三十二1-(4-硝基苯基)-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的制备：
在250ml的圆底烧瓶中分别加入L-色氨酸(5.1g，25mmol)、4-硝基苯甲醛(3.5ml)、1N H2SO4(30ml)、H2O(70ml)和乙醇(30ml)，加热回流12hr，然后加浓氨水(40ml)，继续回流30min，减压蒸除乙醇，剩余液冷却，乙醚萃取(100ml×2)，水相浓缩至50ml，5N HCl中和(pH5)，析出黄色固体，过滤，水洗，干燥得黄色固体7.5g，收率89％。mp.262-264℃。MS：m/e(M+1)338；
实施例三十三1-(4-硝基苯基)-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯的合成：
在500ml的圆底烧瓶中分别加入1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯(7.5g，20mmol)、甲醇(200ml)，混合物用冰水冷却，搅拌下通入干燥的氯化氢气体直至溶液透明，室温搅拌20min，加热回流2hr，减压蒸除甲醇，固体过滤，丙酮洗涤，得灰白色固体。将上述固体溶于100ml冷水，饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9，即析出黄色固体，过滤，水洗，干燥，乙酸乙酯重结晶得黄色固体4.2g，收率54％。mp.243-245℃。MS：m/e(M+1)352；
实施例三十四1-(4-硝基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯(H-01-04)的合成：
在100ml的圆底烧瓶中加入β-咔啉-3-羧酸甲酯(3.51g，10mmol)、冰乙酸(40ml)，混合物冷却至5℃左右，搅拌下加入Pb(OAc)4(8.9g，20mmol)，5℃反应30min，室温搅拌反应12hr，然后将混合物倒入100ml冰水中，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8，乙酸乙酯萃取(3×300ml)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗，加入浓盐酸调节pH至3，减压蒸除乙酸乙酯，剩余物水(100ml)溶解，饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9，即析出白色固体，冷却，过滤，水洗，干燥，得灰白色固体1.3g，收率37％。mp.235-237℃。MS：m/e(M+1)348；
实施例三十五1-(4-羟基苯基)-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸的制备：
在250ml的圆底烧瓶中分别加入L-色氨酸(5.1g，25mmol)、4-羟基苯甲醛(3.5ml)、1N H2SO4(30ml)、H2O(70ml)和乙醇(30ml)，加热回流12hr，然后加浓氨水(40ml)，继续回流30min，减压蒸除乙醇，剩余液冷却，乙醚萃取(100ml×2)，水相浓缩至50ml，5N HCl中和(pH5)，析出黄色固体，过滤，水洗，干燥得黄色固体7.2g，收率94％。mp.281-283℃。MS：m/e(M+1)309；
实施例三十六1-(4-羟基苯基)-1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯的合成：
在500ml的圆底烧瓶中分别加入1，2，3，4-四氢-β-咔啉-3-羧酸甲酯(7.2g，24mmol)、甲醇(200ml)，混合物用冰水冷却，搅拌下通入干燥的氯化氢气体直至溶液透明，室温搅拌20min，加热回流2hr，减压蒸除甲醇，固体过滤，丙酮洗涤，得灰白色固体。将上述固体溶于100ml冷水，饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9，即析出灰白色固体，过滤，水洗，干燥，乙酸乙酯重结晶得白色固体6.4g，收率85％。mp.258-260℃。MS：m/e(M+1)323；
实施例三十七1-(4-羟基苯基)-β-咔啉-3-羧酸甲酯(H-01-02)的合成：
在100ml的圆底烧瓶中加入2(3.22g，10mmol)、冰乙酸(40ml)，混合物冷却至5℃左右，搅拌下加入Pb(OAc)4(8.9g，20mmol)，5℃反应30min，室温搅拌反应12hr，然后将混合物倒入100ml冰水中，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8，乙酸乙酯萃取(3×300ml)，合并乙酸乙酯萃取液，水洗，加入浓盐酸调节pH至3，减压蒸除乙酸乙酯，剩余物水(100ml)溶解，饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9，即析出白色固体，冷却，过滤，水洗，干燥，得灰白色固体1.8g，收率56％。mp.267-269℃。MS：m/e(M+1)319。
实施例三十八体外抗肿瘤活性实验(MTT法)
将细胞以约105个/ml的密度接种于96孔板上，每孔100μl，培养至对数生长期。按预设的浓度梯度加入待测样品，每一梯度设3个重复。对照组加入等体积的溶解样品用的溶媒。继续培养48小时后，每孔加入5mg/ml的MTT20μl，继续置于37℃温育4小时。小心除去上清后，每孔加入100μl的DMSO(二甲基亚砜)，振荡约10min溶解沉淀。立即在酶标仪上检测O.D.(吸光度)值，波长570nm。以下式求出每一样品浓度下的细胞存活率：存活率％＝样品组平均O.D.值/对照组平均O.D.值 x 100％
以细胞存活率对药物浓度作图，按作图法求出IC50(半数抑制浓度)值，结果如下表1，试验所用的样品为如下代号的样品：
H1(去氢骆驼蓬碱)、H-01-01、H-01-02、H-01-03、H-01-04、H-03-01、H-03-02、H-03-03、H-03-04、H-03-05、H-03-06、H-03-07、H-03-08、H-03-09、H-09-01、H-09-02、H-09-03、H-09-04、H-09-05。细胞株编号分别为：1：PLA-801(非小细胞肺癌)2：95-D(高转移肺癌)3：HepG2(肝细胞癌)4：Bel-7402(肝细胞癌)5：BGC-823(胃癌)6：SGC-7901(胃癌)7：Hela(宫颈癌)8：Lovo(结肠癌)9：NIH3T3(小鼠成纤维细胞)10：Chang’s liver(人正常肝细胞)
表1 体外抗肿瘤活性(IC50值，μg/ml)
Figure C03136406D00201
实施例三十九急性毒性实验
(1)实验材料
受试化合物：H-03-04、H-03-05、H-03-06、H-03-07、H-09-01、H-09-02、H-09-03、H-09-05。
实验动物：昆明种小鼠(中科院上海实验动物中心提供，合格证号：沪动合证字第107号)，体重19-20克，雌雄各半。每20只小鼠一组。
溶剂：生理盐水、0.5％CMC-Na溶液
(2)实验方法
1)剂量设置
根据预试，各样品设计五档剂量，如表2。
表2剂量设置
Figure C03136406D00211
2)药物配制
H1、H-03-05、H-03-06、H-09-01、H-09-02为水溶性，用生理盐水溶解即可。H-03-04、H-03-07、H-09-03、H-09-05水难溶，实验时加少量吐温80湿润助溶，逐渐加入0.5％CMC-Na溶液至所需浓度即可。
3)给药方式
单次静脉或腹腔给药。静脉注射速度为1ml/min。
H1、H-03-05、H-03-06、H-09-01、H-09-02静脉给药，H-03-04、H-03-07、H-09-03、H-09-05腹腔给药。
4)急性毒性试验
取昆明种小鼠，按性别随机分组，各组按剂量设置分别给药，观察小鼠给药后的即时反应。死亡动物进行解剖观察，存活动物继续观察二周，并记录二周内动物死亡情况。二周后将存活动物进行解剖，观察实质性脏器的病变，具有实质性病变的脏器作病理检查。根据各组动物的死亡数，以Bliss方法计算药物的LD50值。
5)结果见表3：
表3 LD50值
实施例四十药效学实验
1实验材料
受试化合物：H1、H-03-04、H-03-05、H-03-06、H-03-07、H-09-01、H-09-02、H-09-03、H-09-05。阳性对照品为注射用环磷酰胺(CTX)(上海化联制药集团产品)。
实验动物：C57BL/6小鼠及昆明种小鼠(中科院上海实验动物中心提供，合格证号：沪动合证字第107号)，体重均为18-20克，雌雄皆可，每批实验使用同一性别。抗肿瘤实验C57BL/6小鼠及昆明种小鼠8-10只小鼠一组，阴性对照各为两组。
瘤源：小鼠Lewis肺癌、S180肉瘤，由上海医药工业研究院药理室传代维持；小鼠肝癌HepA，由中山大学肿瘤研究所提供。
溶剂：生理盐水、0.5％CMC-Na溶液
2实验方法
1)剂量设置
受试药物设高、中、低三个剂量组，分别取该药物静脉或腹腔单次给药LD50的1/5、1/10和1/20。H-03-06和H-03-07由于样品量不足，只设两个剂量组，H-03-07由于毒性较低，采用100mg/kg和50mg/kg两个剂量。各受试药物及阳性对照所用的剂量如表4。
表4给药剂量
Figure C03136406D00231
2)药物配制
H1、H-03-05、H-03-06、H-09-01、H-09-02为水溶性，用生理盐水溶解即可。H-03-04、H-03-07、H-09-03、H-09-05水难溶，实验时加少量吐温80湿润助溶，逐渐加入0.5％CMC-Na溶液至所需浓度即可。
3)给药方案
H1、H-03-05、H-03-06、H-09-01、H-09-02静脉给药，H-03-04、H-03-07、H-09-03、H-09-05腹腔给药。每天一次，连续给药7天，共给药7次。
阴性对照以等体积的相应溶剂，均为静脉给药，每天1次，连续7天。阳性对照CTX按30mg/kg的剂量，静脉给药，每天一次，连续7天。
4)抗肿瘤药效试验
采用体内抗肿瘤腋皮下接种模型：无菌条件下取生长旺盛的瘤源，以匀浆法制备成约1 X 107/ml的细胞悬液，于相应宿主腋皮下接种0.2ml/鼠，次日按实验设计方案给药，三周左右处死各组动物，剖取肿瘤称重，按下式计算抑瘤率：抑瘤率％＝[(阴性对照组平均瘤重一给药组平均瘤重)/阴性对照组平均瘤重] X 100％，结果见表5。
表5抑瘤率结果
Figure C03136406D00251
实施例四十一体内神经毒性观察(剂量同急性毒性试验)
H1给药后各组动物即时出现不同程度的震颤、跳跃、抽搐、强直、仰卧；高剂量组动物即时出现抽搐后死亡，低剂量各组动物震颤持续15-20min后逐渐缓和，次日均恢复正常。反应一般在半小时左右逐渐消失。死亡高峰出现在给药后1个小时内。死亡动物进行解剖，大体观察未见明显的脏器异常。
H-03-04给药后约2分钟各组动物均出现不同程度的少动、松毛、绻缩、行走不稳、闭眼、昏沉，但未见动物有节律性震颤现象。高剂量组动物死亡出现在10分钟后，死亡高峰出现在给药后1个小时内。死亡动物进行解剖，大体观察未见明显的脏器异常。
H-03-05给药后小鼠即时出现跳跃、伏卧不动、呼吸加快、震颤。高剂量组动物死亡出现在10分钟后，死亡高峰出现在给药后1个小时内。死亡动物进行解剖，大体观察未见明显的脏器异常。
H-03-06静脉给药后即时各组动物均出现不同程度的跳跃、蹦窜，继而伏卧不动，出现腹式呼吸主，个别动物小便失禁，动物死亡出现在3min后。低剂量组各动物10-15min后逐渐缓和，次日均恢复正常。反应一般在半小时左右逐渐消失，死亡高峰出现在给药后1小时之内。死亡动物进行解剖，大体观察未见明显的脏器异常。
H-03-07给药后，除注射局部出现收缩、扭歪、拉伸等刺激性反应外，未出现震颤等神经毒症状。
H-09-01和H-09-02给药后约2分钟各组动物均出现不同程度的尖叫、震颤、跳跃、抽搐、强直、仰卧；高剂量组动物即时出现抽搐后死亡，低剂量各组动物逐渐缓和，次日均恢复正常。反应一般在半小时左右逐渐消失。死亡高峰出现在给药后1个小时内。死亡动物进行解剖，大体观察未见明显的脏器异常。
H-09-03给药后约2分钟各组动物均出现不同程度的尖叫、跳跃；高剂量组动物抽搐、强直、仰卧直至死亡，低剂量各组动物节律性震颤，数小时后恢复正常。死亡高峰出现在给药后1个小时内。死亡动物进行解剖，大体观察未见明显的脏器异常。
H-09-05给药后小鼠即时出现嘴咬、舔腹部进针部位，并出现尖叫、跳跃、收腹、抽搐、翻滚、震颤、强直；高剂量组动物死亡出现在2分钟之后，低剂量各组动物出现不同程度的松毛、绻缩、震颤，持续约30分钟，次日恢复正常。死亡高峰出现在给药后1个小时内。死亡动物进行解剖，大体观察未见明显的脏器异常。
H-03-04及H-03-07毒性低，且在急性毒性试验时未出现震颤等神经毒现象，宜结合疗效作进一步的观察和分析；H-09-03的LD50值较大，毒性也较低，但仍然有明显的神经毒性；H-03-05和H-03-06毒性较H-03-04为高，但在低剂量时神经毒性不甚严重。H-09-01、H-09-02、H-09-05对昆明种小鼠仍然有明显的神经毒性，与去氢骆驼蓬碱相似。

Claims (3)

1、下列化合物：
9-正丁基-β-咔啉-3-羧酸甲酯；
9-苄基-β-咔啉-3-羧酸甲酯；
9-正丁基-β-咔啉-3-羧酸乙酯；
1-丙基-β-咔啉-3-羧酸乙酯；
1-(4-硝基)-苯基-β-咔啉-3-羧酸甲酯。
2、权利要求1所述化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
3、化合物9-苄基-β-咔啉-3-羧酸乙酯在制备治疗肿瘤药物中的应用。
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